專利名稱:一種應(yīng)用蔗糖區(qū)帶超速離心制備高純度手足口病疫苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種病毒性疫苗的制備方法。
技術(shù)背景
手足口病(Hand foot mouth di sea se，HFMD)是由腸道病毒感染引起的急性傳 染病。多發(fā)生于5歲以下兒童，尤其是3歲以下的嬰幼兒，年長(zhǎng)兒及成人亦偶有發(fā)病?？梢?起手、足、口腔、臀部、膝關(guān)節(jié)部位的皰疹。部分病例可出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷、肺水腫、肺出 血、循環(huán)衰竭及心臟損害。個(gè)別重癥患兒病情發(fā)展快，導(dǎo)致死亡。
而常規(guī)的層析純化所制得的疫苗的純度較低。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明采用的硫酸魚(yú)精蛋白結(jié)合超速離心的方法，制得了較 高純度的疫苗。
本發(fā)明所采用的技術(shù)方法是將滅活的手足口病毒濃縮液經(jīng)過(guò)蔗糖區(qū)帶離心、純 化、制備成手足口病毒疫苗。
在蔗糖區(qū)帶離心純化之前的滅活的手足口病毒濃縮液(包括EV71病毒濃縮液、科 薩其病毒濃縮液)中，加入終濃度為0.5g/ml 5g/ml硫酸魚(yú)精蛋白充分混合，并置2°C 8°C處理0. 5h 5h后，經(jīng)8000g IOOOOg離心5min lOmin，取上清液為待離心手足口病
毒液，用于離心純化。
蔗糖區(qū)帶離心可為速率區(qū)帶離心，分離手足口病毒顆粒的速率區(qū)帶段(包括一種 固定濃度蔗糖區(qū)帶段、越接近邊孔濃度越高的多種濃度的蔗糖區(qū)帶段)為30% 60% (百 分比為質(zhì)量質(zhì)量百分比)濃度的蔗糖，離心條件為應(yīng)用區(qū)帶轉(zhuǎn)頭，靠近中心孔為待離心手 足口病毒液，靠近邊孔為上述速率區(qū)帶段，25000rpm 35000rpm離心，至手足口病毒顆粒 離心至上述的速率區(qū)帶段并且和雜蛋白分開(kāi)，收集手足口病毒峰為離心純化收集液。
蔗糖區(qū)帶離心也可為密度梯度區(qū)帶離心，離心條件為應(yīng)用區(qū)帶轉(zhuǎn)頭，由靠近中心 孔至靠近邊孔依次為待離心手足口病毒液、30% 60% (百分比為質(zhì)量質(zhì)量百分比)蔗糖、 63% 67% (百分比為質(zhì)量質(zhì)量百分比)蔗糖，25000rpm 35000rpm離心至手足口病毒 顆粒至等密度點(diǎn)，收集手足口病毒峰為離心純化收集液。
離心純化收集液，通過(guò)超濾脫糖后配制成手足口病疫苗。
權(quán)利要求
1.一種將手足口病毒濃縮液經(jīng)過(guò)蔗糖區(qū)帶離心純化制備手足口病疫苗的方法。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法，其特征在于在蔗糖區(qū)帶離心純化之前的手足口病毒濃 縮液(包括EV71病毒濃縮液、科薩其病毒濃縮液)中，加入終濃度為0. 5g/ml 5g/ml硫 酸魚(yú)精蛋白充分混合，并置2°C 8°C處理0. 5h 5h后，經(jīng)8000g IOOOOg離心5min lOmin，取上清液為待離心手足口病毒液，用于離心純化。
3.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法，其特征在于蔗糖區(qū)帶離心為速率區(qū)帶離心，分離手足 口病毒顆粒的速率區(qū)帶段(包括一種固定濃度蔗糖區(qū)帶段、越接近邊孔濃度越高的多種濃 度的蔗糖區(qū)帶段)為30% 60% (百分比為質(zhì)量質(zhì)量百分比)濃度的蔗糖，離心條件為應(yīng) 用區(qū)帶轉(zhuǎn)頭，靠近中心孔為待離心手足口病毒液，靠近邊孔為上述速率區(qū)帶段，25000rpm 35000rpm離心池 20h，至手足口病毒顆粒離心至上述的速率區(qū)帶段并且和雜蛋白分開(kāi)， 收集手足口病毒峰為離心純化收集液。
4.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法，其特征在于蔗糖區(qū)帶離心為密度梯度區(qū)帶離心，離 心條件為應(yīng)用區(qū)帶轉(zhuǎn)頭，由靠近中心孔至靠近邊孔依次為待離心手足口病毒液、30% 60% (百分比為質(zhì)量質(zhì)量百分比)蔗糖、63% 67% (百分比為質(zhì)量質(zhì)量百分比)蔗糖， 25000rpm 35000rpm離心池 20h，至手足口病毒顆粒至等密度點(diǎn)，收集手足口病毒峰為 離心純化收集液。
5.根據(jù)權(quán)利要求
1所述的方法，其特征在于離心純化收集液，通過(guò)超濾脫糖后的高純 度手足口病毒抗原用于制備手足口病滅活疫苗。
專利摘要
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種新型病毒性滅活疫苗。用途該疫苗用于預(yù)防手足口病。主要技術(shù)在EV71或科薩其病毒濃縮液中，加入終濃度為0.5～5g/ml硫酸魚(yú)精蛋白置2～8℃處理0.5～5h后，經(jīng)8000～10000g離心5～10min，取上清液經(jīng)蔗糖速率區(qū)帶離心，或蔗糖密度梯度區(qū)帶離心后，收集手足口病毒峰，通過(guò)超濾脫糖后最終配制成手足口疫苗。
文檔編號(hào)A61K39/125GKCN102068691SQ201010603405
公開(kāi)日2011年5月25日 申請(qǐng)日期2010年12月24日
發(fā)明者楊國(guó)松 申請(qǐng)人:福爾生物制藥股份有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan