專利名稱:具有抗hiv活性的取代1,2,3－三唑并嘧啶新化合物，制備方法及用途的制作方法
本發(fā)明涉及取代嘌呤和其類似物取代1，2，3-三唑類新化合物。該類新化合物對HIV-1 mRNA的TAR RNA區(qū)域具有結(jié)合作用，能夠抑制HIV-1 Tat與TARRNA的結(jié)合，從而干擾病毒的復(fù)制，產(chǎn)生抗病毒活性。抑制HIV-1體外復(fù)制實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在不顯示毒性的劑量下，該類化合物顯示了很好的抗病毒活性，這與體外轉(zhuǎn)錄的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合。
HIV TAR RNA是存在于HIV-1病毒新生mRNA 5’末端的基因組結(jié)構(gòu)，其在HIV-1病毒復(fù)制中的作用是與HIV-1 Tat蛋白結(jié)合，從而激活病毒的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)病毒轉(zhuǎn)錄物延長，提高完整mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，使病毒得以有效復(fù)制。目前抗HIV-1藥物的主要針對病毒復(fù)制和轉(zhuǎn)錄兩個(gè)階段的關(guān)鍵酶蛋白酶和逆轉(zhuǎn)錄酶，但這兩種酶由于病毒本身的變異和遺傳異質(zhì)性而極易產(chǎn)生耐藥性，在一定程度上限制了此類藥物的使用和療效。因此，研究者再次回到HIV-1病毒的基礎(chǔ)研究中，發(fā)現(xiàn)了Tat蛋白與TAR RNA的結(jié)合在HIV-1生命周期中的重要作用。因此HIV-1 Tat TAR RNA相互作用成為近年來HIV研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。目前，國外有一些研究機(jī)構(gòu)在從事以Tat TAR RNA相互作用為靶抗HIV藥物的研究；本課題組是國內(nèi)最早開展對該靶點(diǎn)進(jìn)行藥物設(shè)計(jì)合成及抗病毒活性評價(jià)的課題組，已經(jīng)申請相關(guān)專利，并發(fā)表多篇研究論文。因此，如果能以TAR RNA為作用靶點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)一種新的抗HIV-1的藥物，就可以達(dá)到醫(yī)治愛滋病患者的目的。
本發(fā)明中所涉及的化合物的分子結(jié)構(gòu)為全新結(jié)構(gòu)，經(jīng)生物活性評價(jià)證明是能有效抗HIV-1的物質(zhì)，因此可用于愛滋病的治療。
本發(fā)明更確切的涉及(I)和(II)化合物。
其中R1所代表的基團(tuán)選自
S(CH2)nR3，其中R3代表其中R3代表氨基(C1～C6)烷基、取代氨基(C1～C6)烷基，單取代胍基(C1～C6)烷基，雙取代胍基(C1～C6)烷基，各基團(tuán)的烷基部分可以是直鏈或支鏈的，n是1～4的整數(shù)，S(CH2)nCOR3，S(CH2)nCONHR3，(CH2)nR3，(CH2)nNHR3，(CH2)nOR3，(CH2)nSR3，(CH2)nCOR3和(CH2)nCONHR3其中的R3是如上定義的，R2所代表的基團(tuán)選自氫、直鏈或支鏈(C1～C6)烷基、芳基、雜環(huán)、胺基直鏈或支鏈(C1～C6)烷基、羥基直鏈或支鏈(C1～C6)烷基，芳基直鏈或支鏈(C1～C6)烷基，雜環(huán)直鏈或支鏈(C1～C6)烷基，R4所代表的基團(tuán)選自(CH2)nR5，其中R5代表的基團(tuán)選自氨基直鏈或支鏈(C1～C6)烷基、取代氨基直鏈或支鏈(C1～C6)烷基，單胍基直鏈或支鏈(C1～C6)烷基，二胍基直鏈或支鏈(C1～C6)烷基，n是1～4的整數(shù)，(CH2)nNHR5，(CH2)nOR5，(CH2)nSR5，(CH2)nCOR5和(CH2)nCONHR5其中的R5是如上定義的，Ra和Rb可以相同或不同，彼此獨(dú)立的所代表的基團(tuán)選自氫，直鏈或支鏈(C1～C6)烷基、氨基、直鏈或支鏈烷基(C1～C6)氨基、芳基、雜環(huán)、芳胺基、雜環(huán)胺基......。
所有化合物及其在藥學(xué)上可接受的酸或堿所形成的加成鹽，毫無疑問--“芳基”可被理解為苯基、萘基、四氫萘基、二氫萘基、茚基或2，3-二氫茚基，各自任選的被一個(gè)或多個(gè)相同或不同的基團(tuán)取代，取代基選自鹵素、羥基、氰基、硝基，直鏈或支鏈(C1～C6)烷基、直鏈或支鏈(C1～C6)烷氧基、氨基、直鏈或支鏈氨基(C1～C6)烷基，--其中各烷氧基部分可以是直鏈或支鏈的--，直鏈或支鏈(C1～C6)?；⒅辨溁蛑ф?C1～C6)烷氧基羰基，直鏈或支鏈(C1～C6)烷基氨基羰基和氧代。
--“雜環(huán)”被理解為飽和或不飽和的單-或-二環(huán)基團(tuán)，具有芳族和非芳族特征，具有5至12個(gè)環(huán)原子，含有一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)相同或不同的雜原子，雜原子選自氧、氮、硫，雜環(huán)被理解為可以任選的被一個(gè)或多個(gè)相同或不同的取代基取代，取代基選自鹵素、羥基、直鏈或支鏈(C1～C6)烷基、直鏈或支鏈(C1～C6)烷氧基、硝基、氧代和氨基(任意被一個(gè)或兩個(gè)直鏈或支鏈(C1～C6)烷基取代)。
在雜環(huán)中，可以象征性而不加任何限制的提到吡啶基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、4-H-吡喃-4-酮、吡嗪基、嘧啶基、異噁唑基、四唑基、吡咯基、吡唑基、喹啉基、異喹啉基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、1，2，3-噻二唑基......。
在藥學(xué)上可接受的酸中，可以不加限制的提到鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富馬酸、酒石酸、馬來酸、檸檬酸、抗壞血酸、草酸、甲磺酸、樟腦酸等。
在藥學(xué)所接受的堿中，可以不加任何限制的提到氫氧化鈉、氫氧化鉀、三乙胺、叔丁胺等。
按照一種有利的變例，優(yōu)選的本發(fā)明化合物是，其中，R1是S(CH2)nCOR3，n＝1，其中R3是如式(I)定義的。R4是(CH2)nCOR5，n＝1，其中R5是如式(II)定義的。按照一種有利的變例，優(yōu)選的取代基R1是CONR3aR3b其中當(dāng)R3a代表氫原子時(shí)，R3b代表氨基(C1～C6)烷基，胍基(C1～C6)烷基。優(yōu)選取代基R4是(CH2)nCONR5aR5b其中當(dāng)R5a代表氫原子時(shí)，R5b代表氨基(C1～C6)烷基，胍基(C1～C6)烷基。
按照本發(fā)明，優(yōu)選的取代基R2是氫原子和胺基直鏈(C1～C6)烷基。尤其有利的是R2代表氫原子和N，N-二甲基胺基丙基、N，N-二乙基胺基乙基。
按照本發(fā)明，優(yōu)選的化合物是N-(2-氨基乙基)-2-(2-二乙基胺基-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基)乙酰胺N-(3-氨基丙基)-2-(2-二乙基胺基-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基)乙酰胺N-(2-氨基乙基)-2-[2-二乙基胺基-9-(2-二乙基胺基乙基)-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基]乙酰胺N-(3-氨基丙基)-2-[2-二乙基胺基-9-(2-二乙基胺基乙基)-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基]乙酰胺N-(2-氨基乙基)-2-[2-二乙基胺基-9-(3-二甲基胺基丙基)-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基]乙酰胺N-(3-氨基丙基)-2-[2-二乙基胺基-9-(3-二甲基胺基丙基)-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基]乙酰胺
N-(2-氨基乙基)-2-(5-二乙基胺基-7-甲基-[1，2，3]三唑[4，5-d]并嘧啶-3-)乙酰胺N-(3-氨基丙基)-2-(5-二乙基胺基-7-甲基-[1，2，3]三唑[4，5-d]并嘧啶-3-)乙酰胺2-(2-二乙基胺基-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基)-N-(2-胍基乙基)-乙酰胺2-(2-二乙基胺基-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基)-N-(3-胍基丙基)-乙酰胺2-[2-二乙基胺基-9-(2-二乙基胺基乙基)-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基]-N-(2-胍基乙基)-乙酰胺2-[2-二乙基胺基-9-(2-二乙基胺基乙基)-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基]-N-(3-胍基丙基)-乙酰胺2-[2-二乙基胺基-9-(3-二乙基胺基丙基)-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基]-N-(2-胍基乙基)-乙酰胺2-[2-二乙基胺基-9-(3-二乙基胺基丙基)-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基]-N-(3-胍基丙基)-乙酰胺2-(5-二乙基胺基-7-甲基-[1，2，3]三唑[4，5-d]并嘧啶-3-)-N-(2-胍基乙基)乙酰胺2-(5-二乙基胺基-7-甲基-[1，2，3]三唑[4，5-d]并嘧啶-3-)-N-(3-胍基丙基)乙酰胺優(yōu)選化合物以及它們與藥學(xué)上可接受的酸或堿所形成的加成鹽構(gòu)成本發(fā)明完整內(nèi)容的一部分。
本發(fā)明還涉及式(I)化合物和式(II)化合物的制備方法，其特征在于使用(III)化合物作為原料 其中，Ra、Rb是如上定義的。
按照有機(jī)合成常規(guī)的取代條件，與氨(胺)反應(yīng)得到式(IV)化合物 其中Ra、Rb、R2是如上定義的。
按照有機(jī)合成中硝基還原的反應(yīng)條件，將式(IV)中的硝基結(jié)構(gòu)還原為氨基(胺基)，得到式(V)化合物
其中Ra、Rb、R2是如上定義的。
按照有機(jī)合成中的環(huán)合反應(yīng)條件，使該式(V)化合物與二硫化碳反應(yīng)得到式(VI)化合物；與酸和亞硝酸鈉作用得到式(VII)化合物 其中Ra、Rb、R2是如上定義的。
按照有機(jī)合成中烷基化的反應(yīng)條件，使式(VI)化合物和(VII)化合物分別與氯乙酸乙酯在堿催化下反應(yīng)，分別得到式(VII)化合物和式(IX)化合物 其中Ra、Rb、R2是如上定義的。
按照常規(guī)的酰胺化條件，用式(X)化合物處理式(VII)化合物，用式(XI)化合物處理式(IX)化合物R3aNHR3b(X) R5aNHR5b(XI)其中R3a、R3b、R5a、R5b是如上定義的。
得到式(Ia)化合物，即式(I)化合物的一個(gè)特定例子和式(IIa)化合物，即式(II)化合物的一個(gè)特定例子 其中Ra、Rb、R2、R3a、R3b、R5a、R5b是如上定義的。
將式(Ia)化合物和式(IIa)化合物分別置于式(XII)化合物作用下
得到(Ib)化合物，即式(I)化合物的一個(gè)特定例子和式(II)化合物，即式(IIb)化合物的一個(gè)特定例子 其中Ra、Rb、R2、R3a、R5a是如上定義的。
化合物(Ia)和(IIa)、(Ib)和(IIb)構(gòu)成本化合物的整體。如果必要的話，這些化合物按照常規(guī)純化工藝進(jìn)行純化，如果需要的話，可以任選的用藥學(xué)上可以接受的酸或堿轉(zhuǎn)化為加成鹽。
式(III)、(X)、(XI)、(XII)化合物是商業(yè)上可以得到的化合物，或者是按照有機(jī)合成的已知方法得到的化合物。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，包含至少一種式(I)和式(II)化合物或與藥學(xué)上可接受的酸或堿所形成的加成鹽作為活性成分，單獨(dú)或結(jié)合一種或幾種藥學(xué)上可接受的、惰性的、無毒的賦形劑或載體。
在按照本發(fā)明的藥物組合中，可以特別提到適用于口服、胃腸外(靜脈內(nèi)、肌肉或皮下)，經(jīng)皮或透皮、經(jīng)鼻、直腸、經(jīng)眼或呼吸給藥的那些，尤其是片劑或糖衣丸、舌下片、扁囊劑、膠囊劑、酊劑、栓劑、霜劑、軟膏劑、皮膚凝膠、可注射或可飲用制劑、氣霧劑、滴眼劑或滴鼻劑等。
本發(fā)明化合物具有抗HIV-1活性。含有至少一種式(I)或式(II)化合物的藥物組合因此可以用于愛滋病的治療。
作為藥物，由于劑量因患者年齡與體重、給藥途徑、疾病性質(zhì)與嚴(yán)重性和所接受的任何其它治療而異。
下列實(shí)施例闡述而絕非限制本發(fā)明所用原料和試劑是已知的產(chǎn)品，或者是按照已知操作制備的產(chǎn)品。
實(shí)施例和合成步驟中所述化合物的結(jié)構(gòu)是按照常規(guī)的光譜技術(shù)(紅外、NMR、EI質(zhì)譜、FAB+--質(zhì)譜......。
實(shí)施例1N-(2-氨基乙基)-2-(2-二乙基胺基-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基)乙酰胺步驟AN2，N2-二乙基-6-甲基-5-硝基-嘧啶-2，4-二胺將2-N，N-二乙基胺基-4-氯-6-甲基-5-硝基-嘧啶1.0g以20ml無水乙醇溶解，加入26％的5ml濃氨水，常溫?cái)嚢?2h，蒸除乙醇及過量氨水，水洗后干燥得預(yù)期產(chǎn)物。
步驟BN2，N2-二乙基-6-甲基-嘧啶-2，4，5-三胺將步驟A中得到的產(chǎn)物2.21g以30ml無水甲醇溶解，10％Pd/C 0.11g催化下常溫常壓加氫還原，反應(yīng)24h后，濾除催化劑，蒸除溶劑，得預(yù)期產(chǎn)物。
步驟C2-N2，N2-二乙胺基-6-甲基嘌呤-8-硫酮將步驟B中的產(chǎn)物1.9g溶于20ml無水乙醇中，加入KOH 0.56g，攪拌下常溫滴加二硫化碳0.5ml，滴加完畢后常溫反應(yīng)1h，加熱回流5h。蒸除乙醇，殘余物以15ml水溶解，以15％的HCl調(diào)節(jié)pH＝3，生成大量白色固體，無水乙醇重結(jié)晶獲得預(yù)期產(chǎn)物。
步驟D(2-二乙基胺基-6-甲基-9H-嘌呤-8-)巰基乙酸乙酯將步驟C中的產(chǎn)物1.5g溶于含有氯乙酸乙酯1.16g，無水碳酸鉀1.3g，碘化鉀0.05g的50ml的四氫呋喃中，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)12h，濾除無機(jī)鹽，濾液濃縮后柱層析得預(yù)期產(chǎn)物。
步驟EN-(2-氨基乙基)-2-(2-二乙基胺基-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基)乙酰胺將步驟D中的產(chǎn)物5a 0.45g溶于10ml含有0.42g 1，2-乙二胺的無水甲醇中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下回流8h。減壓蒸除溶劑和部分1，2-乙二胺，柱層析得預(yù)期產(chǎn)物。
淡黃色粘稠物FAB+MS3371H NMR3.49，3.44，3.23，2.67，2.43，1.10實(shí)施例2N-(3-氨基丙基)-2-(2-二乙基胺基-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基)乙酰胺操作步驟同實(shí)施例1，在步驟E中使用1，3-丙二胺作為反應(yīng)物。
淡黃色粘稠物FAB+MS3511H NMR3.49，3.21，3.15，3.00，2.50，2.41，2.20，1.50，1.20，0.98實(shí)施例3N-(2-氨基乙基)-2-[2-二乙基胺基-9-(2-二乙基胺基乙基)-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基]乙酰胺操作步驟同實(shí)施例1，在步驟A中使用N，N-二乙基乙二胺作為反應(yīng)物。
黃色油狀物FAB+MS437.2(M+1)1H NMR8.59，4.06，3.83，3.62～3.69，3.29～3.35，2.75～2.82，2.63，2.56～2.63，1.10～1.27，實(shí)施例4N-(3-氨基丙基)-2-[2-二乙基胺基-9-(2-二乙基胺基乙基)-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基]乙酰胺操作步驟同實(shí)施例3，在步驟E中使用1，3-丙二胺作為反應(yīng)物。
黃色油狀物FAB+MS450.7(M+1)1H NMR8.57，4.03～4.08，3.82，3.66，3.30～3.37，2.60～2.79，2.55，2.52～2.58，1.56～1.65，1.00～1.20實(shí)施例5N-(2-氨基乙基)-2-[2-二乙基胺基-9-(3-二甲基胺基丙基)-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基]乙酰胺操作步驟同實(shí)施例1，在步驟A中使用N，N-二甲基-1，3-丙二胺作為反應(yīng)物。
黃色油狀物FAB+MS422.01H NMR8.54，4.04～4.09，3.84，3.66，3.29～3.35，2.78～2.82，2.57，2.32，2.24，1.93～1.98，1.20實(shí)施例6N-(3-氨基丙基)-2-[2-二乙基胺基-9-(3-二甲基胺基丙基)-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基]乙酰胺操作步驟同實(shí)施例5，在步驟E中使用1，3-丙二胺作為反應(yīng)物。
黃色油狀物FAB+MS436.81H NMR4.03～4.08，3.83，.3.66，3.30～3.34，2.68～2.71，2.55，2.30～2.35，2.24，1.92～1.97，1.56～1.63，1.19實(shí)施例7N-(2-氨基乙基)-2-(5-二乙基胺基-7-甲基-[1，2，3]三唑[4，5-d]并嘧啶-3-)乙酰胺步驟F5-二乙胺基-7-甲基-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶將1.1g N2，N2-二乙基-6-甲基-嘧啶-2，4，5-三胺溶于3ml 36％的乙酸中，在-5℃滴加2ml含0.45g亞硝酸鈉的水溶液，后在35℃水浴下反應(yīng)4h。將反應(yīng)混合物傾入100ml冷水中，將析出的固體過濾干燥，即得預(yù)期產(chǎn)物。
黃色晶體熔點(diǎn)169～171℃，EI-MS2061H NMR3.81，2.84，1.63，1.39步驟G(5-二乙基胺基-7-甲基-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-)-乙酸乙酯將步驟F中得到的產(chǎn)物0.8g溶于30ml含有0.6g氯乙酸乙酯、0.6g無水碳酸鉀和0.05g碘化鉀的丙酮中，回流反應(yīng)8h，濾除無機(jī)鹽后旋干溶劑，柱層析獲得預(yù)期產(chǎn)物。
黃色晶體熔點(diǎn)90～92℃EI-MS2921H NMR5.21，4.24，3.72，2.80，1.33，1.21步驟HN-(2-氨基乙基)-2-(5-二乙基胺基-7-甲基-[1，2，3]三唑[4，5-d]并嘧啶-3-)乙酰胺將步驟G中的產(chǎn)物0.5g溶于15ml含有0.52g乙二胺的無水乙醇中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加熱回流8h，j減壓蒸除溶劑和部分乙二胺，柱層析得預(yù)期產(chǎn)物。
白色固體熔點(diǎn)163～166℃EI-MS3061H NMR5.14，3.73，3.34，2.80，2.78，1.65，1.24實(shí)施例8N-(3-氨基丙基)-2-(5-二乙基胺基-7-甲基-[1，2，3]三唑[4，5-d]并嘧啶-3-)乙酰胺操作步驟同實(shí)施例7，在步驟G中使用1，3-丙二胺作為反應(yīng)物。
白色固體熔點(diǎn)155～157℃EI-MS3201H NMR5.11，3.73，3.39，2.78，2.71
實(shí)施例92-(2-二乙基胺基-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基)-N-(2-胍基乙基)-乙酰胺步驟I將0.15g三氧化硫脲一水合物在1h內(nèi)于35℃下分批加入15ml溶有0.4g實(shí)施例1得到的化合物的無水乙醇中，在35～45℃保溫反應(yīng)2h，蒸出除溶劑，柱層析純化。
淺黃色粘稠固體FAB+MS379.81H NMR4.10，3.90，3.32，3.20，2.62，1.02實(shí)施例102-(2-二乙基胺基-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基)-N-(3-胍基丙基)-乙酰胺操作同實(shí)施例9，在步驟I中使用實(shí)施例2得到的化合物作為反應(yīng)物。
淺黃色粘稠固體FAB+MS393.41H NMR3.48，3.08，3.20，2.63，2.43，1.50，1.20，1.01實(shí)施例112-[2-二乙基胺基-9-(2-二乙基胺基乙基)-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基]-N-(2-胍基乙基)-乙酰胺操作同實(shí)施例9，在步驟I中使用實(shí)施例3得到的化合物作為反應(yīng)物。
淺黃色粘稠固體FAB+MS479.1(M+1)1H NMR4.63，4.28，3.81，3.43，3.21～3.24，3.11～3.23，2.99～3.06，2.34，1.13，0.97，實(shí)施例122-[2-二乙基胺基-9-(2-二乙基胺基乙基)-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基]-N-(3-胍基丙基)-乙酰胺操作同實(shí)施例9，在步驟I中使用實(shí)施例4得到的化合物作為反應(yīng)物。
淺黃色粘稠固體FAB+MS493.4(M+1)1H NMR4.59，3.76，3.28～3.33，3.12～3.17，3.00～3.10，2.41，1.40～1.70，1.13，1.00實(shí)施例132-[2-二乙基胺基-9-(3-二乙基胺基丙基)-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基]-N-(2-胍基乙基)-乙酰胺操作同實(shí)施例9，在步驟I中使用實(shí)施例5得到的化合物作為反應(yīng)物。
淺黃色粘稠固體
FAB+MS464.91H NMR4.26～4.31，3.61，3.46，3.18～3.29，3.01～3.07，2.68，2.40，2.16～2.21，0.99實(shí)施例142-[2-二乙基胺基-9-(3-二乙基胺基丙基)-6-甲基-9H-嘌呤-8-巰基]-N-(3-胍基丙基)-乙酰胺操作同實(shí)施例9，在步驟I中使用實(shí)施例6得到的化合物作為反應(yīng)物。
淺黃色粘稠固體FAB+MS477.81H NMR4.30，3.61，3.48，3.37，3.04～3.17，2.68，2.41，2.19，1.62，0.99實(shí)施例152-(5-二乙基胺基-7-甲基-[1，2，3]三唑[4，5-d]并嘧啶-3-)-N-(2-胍基乙基)乙酰胺操作同實(shí)施例9，在步驟I中使用實(shí)施例7得到的化合物作為反應(yīng)物。
淺黃色粘稠固體FAB+MS349.5(M+1)1H NMR5.10，3.48～3.56，3.55，3.10，2.53，1.08實(shí)施例162-(5-二乙基胺基-7-甲基-[1，2，3]三唑[4，5-d]并嘧啶-3-)-N-(3-胍基丙基)乙酰胺操作同實(shí)施例9，在步驟I中使用實(shí)施例8得到的化合物作為反應(yīng)物。
淺黃色粘稠固體FAB+MS362.71H NMR5.10，3.50，3.17，2.99，2.56，1.64，1.01實(shí)施例18轉(zhuǎn)錄水平拮抗HIV-1 Tat TAR RNA的結(jié)合我們成功構(gòu)建了兩個(gè)質(zhì)粒，一個(gè)是Tat基因表達(dá)質(zhì)粒(plasmid I)，另一個(gè)是以HIV-1 LTR片段為啟動子，含有氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)報(bào)告基因的質(zhì)粒(plasmid II)。轉(zhuǎn)染大腸桿菌后，經(jīng)酶切鑒定得到陽性克隆。利用磷酸鈣介導(dǎo)這兩種質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293 T細(xì)胞，24小時(shí)后加入3種樣品，濃度為30μmol/L。收集48小時(shí)培養(yǎng)上清液，用CAT ELISA試劑盒在405/490nm波長下檢測上清液中的CAT活性?？疾鞓悠穼at-TAR相互作用的影響。
以未加樣品plasmid I、II共轉(zhuǎn)染體系的CAT活性為100％，用相對活性表示加樣共轉(zhuǎn)染體系的CAT活性。
實(shí)施例19抑制HIV-1復(fù)制體外實(shí)驗(yàn)。
采用MT4細(xì)胞與HIV IIIB株進(jìn)行試驗(yàn)，使用的病毒量分別為100TCID50和1000TCID50(tissue cultured dose).MT4細(xì)胞和HIV IIIB株與不同劑量下的藥物培養(yǎng)5天后，在顯微鏡下觀察CPE(細(xì)胞病變---空泡、腫脹、融合等)。
設(shè)立五組實(shí)驗(yàn)對照藥物+MT4細(xì)胞空白對照MT4細(xì)胞+HIV IIIB陰性對照水+MT4細(xì)胞+HIV IIIB陽性對照AZT+MT4細(xì)胞+HIV IIIB實(shí)驗(yàn)組藥物+MT4細(xì)胞+HIV IIIB。
權(quán)利要求
1.式(II)化合物 其中R4所代表的基團(tuán)選自(CH2)nCONHR5，其中R5代表的基團(tuán)選自氨基直鏈或支鏈(C1～C6)烷基、取代氨基直鏈或支鏈(C1～C6)烷基，單胍基直鏈或支鏈(C1～C6)烷基，二胍基直鏈或支鏈(C1～C6)烷基，n＝1～4，(CH2)nR5，(CH2)nNHR5，(CH2)nOR5，(CH2)nSR5，(CH2)nCOR5，其中的R5是如上定義的，Ra、Rb彼此獨(dú)立代表的基團(tuán)選自氫原子、直鏈或支鏈(C1～C6)烷基、氨基、直鏈或支鏈烷基(C1～C6)氨基、芳基、雜環(huán)、芳胺基、雜環(huán)胺基，所有化合物及其在藥學(xué)上可接受的酸或堿所形成的加成鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求
1的式(II)化合物，它是R4為(CH2)nCONHR5，其中n＝1，R5為2-氨基乙基、3-氨基丙基、2-胍基乙基或3-胍基丙基，Ra為N，N-二乙基胺基，Rb為甲基的化合物任意其中之一，及其與藥學(xué)上可接受的酸或堿所形成的加成鹽。
3.式(II)化合物的制備方法，其特征在于使用(III)化合物作為原料 其中，Ra、Rb是如上定義的，按照有機(jī)合成常規(guī)的取代條件，與氨(胺)反應(yīng)得到式(IV)化合物 其中Ra、Rb、R2是如上定義的，按照有機(jī)合成中硝基還原的反應(yīng)條件，將式(IV)中的硝基結(jié)構(gòu)還原為氨基胺基)，得到式(V)化合物 其中Ra、Rb、R2是如上定義的，按照有機(jī)合成中的環(huán)合反應(yīng)條件，使該式(V)化合物與酸和亞硝酸鈉作用得到式(VII)化合物 其中Ra、Rb是如上定義的，按照有機(jī)合成中烷基化的反應(yīng)條件，使(VII)化合物與氯乙酸乙酯在堿催化下反應(yīng)，得到式(IX)化合物 其中Ra、Rb是如上定義的，按照常規(guī)的酰胺化條件，用式(XI)化合物處理式(IX)化合物R5aNHR5b(XI)其中R5a是氫，R5b是氨基(C1-C6)烷基。得到式(IIa)化合物，即式(II)化合物的一個(gè)特定例子 其中Ra、Rb、R5a、R5b是如上定義的。將式(IIa)化合物置于式(XII)化合物作用下 得到式(IIb)化合物，即式(II)化合物的一個(gè)特定例子 其中Ra、Rb、是如上定義的，R5a是胍基烷基。
4.藥物組合物，包含至少一種根據(jù)權(quán)利要求
任意一項(xiàng)的式(II)化合物作為活性成分或與藥學(xué)上可接受的酸或堿所形成的加成鹽作為活性成分，單獨(dú)或結(jié)合一種或幾種藥學(xué)上可接受的、惰性的、無毒的賦形劑或載體。
5.根據(jù)權(quán)利要求
1至2任意一項(xiàng)的式(II)化合物作為抗愛滋病用途。
專利摘要
式(II)化合物及其與藥學(xué)上可接受的酸或堿所形成的加成鹽及藥物其中R
文檔編號A61P31/18GK1995042SQ200610170282
公開日2007年7月11日 申請日期2005年3月18日
發(fā)明者楊銘, 袁德凱, 龐瑞芳, 張春雷 申請人:北京大學(xué)導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan