專利名稱：賴氨酰氧化酶的抑制劑的制作方法
膠原是皮膚，腱，骨骼，軟骨，和結(jié)締組織中的主要蛋白質(zhì)。膠原分子以由α-鏈組成的三股螺旋狀結(jié)構(gòu)為特征，每個(gè)膠原分子長(zhǎng)度約300nm，直徑1.5nm。具有某些在終產(chǎn)物中不存在的，稱為延伸肽鏈的殘基的前體前α-鏈?zhǔn)窃诶w維母細(xì)胞內(nèi)由RNA介導(dǎo)的肽鏈合成的初產(chǎn)物。這些前α-鏈先在細(xì)胞內(nèi)裝配成三股的前膠原分子，該組成中的賴氨酸和脯氨酸殘基再被羥化和糖苷化。分泌時(shí)，前膠原分子的延伸肽鏈被裂解而形成膠原。分泌后，膠原裝配于微原纖維中，最終成原纖維。膠原的強(qiáng)度依賴于原纖維內(nèi)部或兩個(gè)原纖維之間各賴氨酸殘基間的交聯(lián)。交聯(lián)過(guò)程的第一步是在細(xì)胞外賴氨酰氧化酶作用下，賴氨酸和羥化賴氨酸的脫氨基作用產(chǎn)生醛基基團(tuán)。這些高反應(yīng)性基團(tuán)再形成交聯(lián)鍵。交聯(lián)鍵的數(shù)量和類(lèi)型根據(jù)各種組織類(lèi)型所需要的強(qiáng)度而有很大差異。如果交聯(lián)被抑制，組織變脆，從而很易被撕裂。某些嚴(yán)重的病癥就與交聯(lián)膠原的缺乏有關(guān)，如Ehlers-Danlos綜合癥和Marfan氏綜合癥。雖然膠原交聯(lián)很重要，但某些情況下又希望防止或減少交聯(lián)，如在纖維化病癥中發(fā)生的那樣，以膠原代謝缺陷為特征的一些疾病，例如肺纖維變性，增生性玻離體視網(wǎng)膜病，外科疤痕，全身性硬化癥，硬皮病，及瘢痕瘤等。
已知某些膠原交聯(lián)抑制劑，如青霉胺和β-氨基丙腈(BAPN)。已知BAPN由于能抑制賴氨酰氧化酶而特異性地防止交聯(lián)。青霉胺和BAPN已在動(dòng)物和人體內(nèi)廣泛地研究了它們對(duì)與膠原異常沉積有關(guān)病癥的作用。本申請(qǐng)人發(fā)現(xiàn)某些鹵素化的烯丙胺是賴氨酰氧化酶的抑制劑并用于治療與膠原異常沉積有關(guān)的疾病。
本發(fā)明的總結(jié)結(jié)構(gòu)式1的化合物
其中X和Y已知可相同，為氟，氯，溴基，也可不同當(dāng)X個(gè)為氫，Y為氟，氯或溴;而當(dāng)Y為氫時(shí)，X為氟，氯或溴。
R1為氫或一個(gè)C1-C4的烷基。
A是一個(gè)選自下式的二價(jià)基團(tuán)
其中R2是氫、甲基或乙基，而m和n分別為0-16的整數(shù)，且m+n不能大于17;
A或是選自下式的二價(jià)基團(tuán)-(CH2)p-D-(CH2)q-其中D是氧或硫，p是0-16的整數(shù)，而q是1-16的整數(shù)，且p+q不能大于17;
A或是選自下式的二價(jià)基團(tuán)-(CH2)r-CH＝CH-(CH2)s-其中s是1-16的整數(shù)，而r是0-16的整數(shù)，且r+s不能大于16;
R是甲基，苯基或用C1-C5的烷基，C1-C5的烷氧基，羥基，氯、溴、氟、碘，三氟甲基，硝基，C1-C5的烷基羰基。苯甲酰或苯基中的一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代的苯基。
R或是1-或2-萘基，1-、2-或3-茚基;1-2-或9-芴基;1-，2-或3-哌啶基;2-或3-吡咯基;2-或3-噻嗯基;2-或3-呋喃基;2-或3-吲哚基;2-或3-硫茚基;2-或3-苯并呋喃基;
或上述化合物藥物學(xué)可接受的鹽。
作為A表示的二價(jià)基團(tuán)的例子是-CH2-，-(CH2)2-，-(CH2)3-，-(CH2)4-，-(CH2)5-，-CH2S-(CH2)2-，-CH2O(CH2)2-，和-CH＝CH-CH2-。這里的C1-C5的烷基是指直鏈和有支鏈的烷基。例如甲基、乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，叔丁基和正戌基。“C1-C5的烷氧基”也是指直鏈和有支鏈的烷氧基，如甲氧基，乙氧基，正丙氧基，異丙氧基，正丁氧基和正戌氧基?！癈1-C5的烷羰基”是指直鏈和有支鏈的烷羰基，如乙酰，丙酰和正丁酰。
本領(lǐng)域的專業(yè)人員會(huì)意識(shí)到式Ⅰ化合物含1-2個(gè)雙鍵，因此可能存在幾何異構(gòu)現(xiàn)象，就是說(shuō)如果存在在烯丙胺雙鍵和在A基團(tuán)中的烯鍵時(shí)。在命名本發(fā)明的化合物時(shí)，以常規(guī)方式字頭用“E”和“Z”表示雙鍵的立體化學(xué)狀態(tài)。如果沒(méi)有字頭則為某種純異構(gòu)體或其混合物。這些化合物中如果X(或Y)是氟、氯或碘，則Y(或X)是氫。申請(qǐng)人選鹵原子對(duì)-R或-A-R基是順式的化合物。
本發(fā)明的化合物可以游離鹼及酸加成鹽的形式應(yīng)用。酸加成鹽在應(yīng)用中是更方便的形式，量是根據(jù)游離鹼計(jì)算的。“藥物學(xué)上可接受的酸加成鹽”是指式1鹼性化合物的任何無(wú)毒的有機(jī)或無(wú)機(jī)酸鹽。成鹽的無(wú)機(jī)酸包括鹽酸，氫溴酸，硫酸和磷酸及諸如磷酸氫鈉和硫酸氫鉀等酸式金屬鹽。成鹽的有機(jī)酸包括單、雙和三羧酸，如乙酸，乙醇酸，乳酸，丙酮酸，丙二酸，丁二酸，戌二酸，反丁烯二酸，酒石酸，檸檬酸，抗壞血酸，順丁烯二酸，羥基順丁烯二酸，苯甲酸，羥基苯甲酸，苯乙酸，肉桂酸，水相酸和2-苯氧苯甲酸。其他適合成鹽的酸還有磺酸，如甲基磺酸和2-羥乙基磺酸。鹽可以水合形式或脫水形式存在?？捎脴?biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備該酸式鹽，如將游離鹼加入含合適酸的水溶液或水-醇溶液或其他溶劑的溶液，再蒸餾分離產(chǎn)品;或?qū)⒃撚坞x鹼先溶在有機(jī)溶液中再與酸反應(yīng)，然后直接提取該鹽或濃縮反應(yīng)鹽后再分離。一般說(shuō)來(lái)，本發(fā)明化合物的酸式加成鹽是能溶于水及各種親水有機(jī)溶劑的晶體材料，與其游離鹼比較，鹽熔點(diǎn)更高，溶解度更大。
作為式1化合物的例子有2-異丁基-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-異丙基-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(9-十八烯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(3-甲基-3-丁烯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(4-甲氧基-2-丁烯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-仲-丁基-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-丁基-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-己基-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-庚基-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-硫代乙氧基甲基-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-苯基-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2-甲氧基苯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(3-甲氧基苯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(4-甲氧基苯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2，3-二甲氧基苯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2，4-二甲氧基苯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2，5-二甲氧基苯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2，6-二甲氧基苯)-3-氟(氯，溴)-烯丙胺;
2-(3，4-二甲氧基苯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(3，5-二甲氧基苯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2-羥基苯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(3-羥基苯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(4-羥基苯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2，3-二羥基苯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2，4-二羥基苯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2，5-二羥基苯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2，6-二羥基苯)-3-氟(氯)，或溴)-烯丙胺;
2-(3，4-二羥基苯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(3，5-二羥基苯)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-苯基-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(2-甲氧基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(3-甲氧基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(4-甲氧基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(2，3-二甲氧基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(2，4-二甲氧基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(2，5-二甲氧基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(2，6-二甲氧基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(3，4-二甲氧基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(3，5-二甲氧基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(2-羥基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(3-羥基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(4-羥基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(2，3-二羥基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(2，4-二羥基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(2，5-二羥基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(2，6-二羥基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(3，4-二羥基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(3，5-二羥基苯)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-芐基-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-苯乙基-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2-甲氧基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(3-甲氧基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(4-甲氧基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2，3-二甲氧基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2，4-二甲氧基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2，5-二甲氧基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2，6-二甲氧基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(3，4-二甲氧基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(3，5-二甲氧基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2-羥基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(3-羥基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(4-羥基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2，3-二羥基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2，4-二羥基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2，5-二羥基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(2，6-二羥基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(3，4-二羥基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-(3，5-二羥基芐基)-3-氟(氯，或溴)-烯丙胺;
2-芐基-3，3-二氟(二氯，二溴)-烯丙胺;
2-(2-甲氧基芐基)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(3-甲氧基芐基)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(4-甲氧基芐基)-3，3-二氟(二氯，或二溴)-烯丙胺;
2-(2，3-二甲氧基芐基)-3，3-二氟(二氯或二溴)-烯丙胺;
2-(2，4-二甲氧基芐基)-3，3-二氟(二氯或二溴)-烯丙胺;
2-(2，5-二甲氧基芐基)-3，3-二氟(二氯或二溴)-烯丙胺;
2-(2，6-二甲氧基芐基)-3，3-二氟(二氯或二溴)-烯丙胺;
2-(3，5-二甲氧基芐基)-3，3-二氟(二氯或二溴)-烯丙胺;
2-(2-羥基芐基)-3，3-二氟(二氯或二溴)-烯丙胺;
2-(3-羥基芐基)-3，3-二氟(二氯或二溴)-烯丙胺;
2-(4-羥基芐基)-3，3-二氟(二氯或二溴)-烯丙胺;
2-(2，3-二羥基芐基)-3，3-二氟(二氯或二溴)-烯丙胺;
2-(2，4-二羥基芐基)-3，3-二氟(二氯或二溴)-烯丙胺;
2-(2，5-二羥基芐基)-3，3-二氟(二氯或二溴)-烯丙胺;
2-(2，6-二羥基芐基)-3，3-二氟(二氯或二溴)-烯丙胺;
2-(3，4-二羥基芐基)-3，3-二氟(二氯或二溴)-烯丙胺;
2-(3，5-二羥基芐基)-3，3-二氟(二氯或二溴)-烯丙胺;
2-苯氧基甲基-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
2-(4-甲氧基苯氧基甲基)-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
2-(2，4-二甲氧基苯氧基甲基)-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
2-(2，6-二甲氧基苯氧基甲基)-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
2-(3，4-亞甲基二氧苯氧基甲基)-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
2-(3-羥基苯氧基甲基)-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
2-(4-羥基苯氧基甲基)-3-氟(氯-，或溴-)-烯丙胺;
2-(2，3-二羥基苯氧基甲基)-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
2-(2，4-二羥基苯氧基甲基)-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
2-(2-甲基苯氧基甲基)-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
2-(2-氯代苯氧基甲基)-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
2-(4-氯代苯氧基甲基)-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
2-(4-三氟甲基苯氧基甲基)-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
2-硫代苯氧基甲基-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
2-(4-甲氧基硫代苯氧基甲基)-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
2-(2，4-二甲氧基硫代苯氧基甲基)-3-氟(氟或溴)-烯丙胺;
2-(2，4-二氯硫代苯氧基甲基)-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
2-(4-羥基硫代苯氧基甲基)-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
2-(1-萘氧基甲基)-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
2-(2-萘氧基甲基)-3-氟(氯或溴)-烯丙胺;
式1化合物中優(yōu)選的為X和Y均是氯或溴的化合物。
本發(fā)明的許多化合物是已知的，例如這些化合物的制備見(jiàn)于美國(guó)專利編號(hào)4，454，158，1984.6.12.批準(zhǔn)，英國(guó)專利申請(qǐng)編號(hào)2，162，518，1986.2.5公布，和美國(guó)專利編號(hào)4，650，907，1987，3.17.批準(zhǔn)。上述公布中未特別介紹的那些化合物的制備，可使用類(lèi)似技術(shù)很容易地進(jìn)行。
本發(fā)明的這些化合物用于治療象在各種纖維化病癥中發(fā)生的膠原代謝缺陷有關(guān)的多種疾病，如肺纖維變性，增生性玻璃體視網(wǎng)膜病，外科疤痕，全身性硬化癥，硬皮病，及疤痕瘤等的能力通過(guò)它們抑制賴氨酰氧化酶的能力而被證實(shí)。本發(fā)明各種化合物的賴氨酰氧化酶抑制活性在例證1中列表比較。
對(duì)病人給藥中活性成分的劑量可能根據(jù)使用的特定劑量單位，治療療程，患者年齡和性別，以及所治疾病的性質(zhì)和范圍而變動(dòng)。所投入的活性成分的總量一般為每天5-500mg。1個(gè)單位劑量可以含25-500mg活性成分，每天能攝入1次或數(shù)次。結(jié)構(gòu)式1的活性化合物常與以常規(guī)劑量單位形式的藥物用載體混合后經(jīng)口，非腸道途徑，或局部給藥。在皮膚異常膠原沉積的情況下，局部給藥到病變部位更為可取，而在內(nèi)部器官的異常膠原沉積病例，在可行而又實(shí)用的局部投藥更好。在不可能局部用藥的部位，全身給藥將持續(xù)較短時(shí)期，例如僅維持很少幾天，而病人則最好密切監(jiān)視付作用的出現(xiàn)。
結(jié)構(gòu)式1的一種化合物與已知可用于治療以異常膠原沉積為特征疾病，但其作用又并非抑制賴氨酰氧化酶的化合物-青霉胺聯(lián)合用藥預(yù)期有益處。當(dāng)與青霉胺聯(lián)合用藥時(shí)，預(yù)期結(jié)構(gòu)式1的化合物有效劑量將低于單獨(dú)投藥的有效劑量，并將依賴于所用青霉胺的數(shù)量和次數(shù)。安排治療量最好以比無(wú)聯(lián)合用藥更低的結(jié)構(gòu)式1化合物和青霉胺的劑量應(yīng)用，而且此后隨時(shí)變動(dòng)以獲理想療效。結(jié)構(gòu)式1化合物劑量與青霉胺之比可變動(dòng)于1∶1至1∶500之間。應(yīng)該了解，結(jié)構(gòu)式1化合物實(shí)際上能夠在給予青霉胺的同時(shí)，之前，或其后投藥。
為口服給藥，本化合物可制成固體或液體制劑，如膠囊，丸劑，片劑，錠劑，糖錠，溶化劑，粉劑，溶液，混懸液，或乳劑。固體劑形可以是一種膠囊，它可由普通硬或軟殼凝膠，如含表面活性劑，潤(rùn)滑劑，以及無(wú)活性的填充劑象乳糖，蔗糖，磷酸鈣，玉米粉的明膠構(gòu)成。本發(fā)明的化合物以另一種劑型可制成片劑，當(dāng)使用傳統(tǒng)的片劑佐劑如乳糖，蔗糖，或玉米淀粉與粘合劑如阿拉伯樹(shù)膠，玉米淀粉，或明膠相配合，崩解劑的使用意在幫助破碎和服藥后的片劑溶解，可用土豆淀粉，藻沅酸，玉米淀粉，或瓜耳膠，潤(rùn)滑劑意在提高片劑核心的流動(dòng)性和防止片劑材料粘著于印模和突模沖頭表面，可使用滑石粉，硬脂酸，或鎂、鈣、鋅的硬脂酸鹽，染料，增色劑，和調(diào)味劑有助于加強(qiáng)片劑的美觀性，而使其更易被病人所接受。為口服液體劑型所使用的適宜賦形劑包括稀釋劑，如水和醇類(lèi)，象乙醇，苯甲醇，或聚乙烯醇，可加或不加藥劑學(xué)上可接受的表面活性劑，懸浮劑，或乳化劑。
本發(fā)明的化合物還可經(jīng)非腸道途徑給藥，即皮下，血管內(nèi)，肌肉內(nèi)，或腹膜間給藥，供注射的化合物制劑常以一種藥物載體為生理上可耐受的稀釋劑，如蒸餾水，或幾種液體的混合液如水，鹽水，液態(tài)葡萄糖或相關(guān)的糖溶液，一種醇類(lèi)如乙醇，異丙醇十六烷醇，乙二醇類(lèi)如丙烯二醇，聚乙二醇，甘油縮酮類(lèi)如2，2-二甲基-1，3-二氧戊環(huán)-4-甲醇，醚類(lèi)如聚乙二醇400，一種油類(lèi)，脂肪酸，脂肪酸酯或甘油酯，或乙?；闹舅岣视王ズ虿缓饧拥乃幱帽砻婊钚詣┤绶试砘蚯鍍魟?，懸浮劑如果膠，碳粒，甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素，或羧甲基纖維素，或乳化劑和其他藥用佐劑。用于本發(fā)明的非腸道劑型的油類(lèi)例子包括食油，動(dòng)物油，植物油，或人工合成類(lèi)，例如花生油，豆油，芝麻油，棉子油，玉米油，橄欖油，石油，和礦物油。適宜的脂肪酸包括油酸，硬脂酸，和異硬脂酸。適宜的脂肪酸酯是乙基油酸和異丙基肉豆蔻酸酯。適宜的脂肪酸鹽包括脂肪堿金屬鹽，胺鹽，三乙醇胺鹽，清凈劑包括陽(yáng)離子去垢劑，如二甲基二烷基鹵化胺，烷基吡啶鹵化物，烷基氨基乙酸，陰離子去垢劑，例如烷基、芳基或鏈烯基硫酸酯，烷基、鏈烯、醚和單甘油硫酸酯，和硫酸琥珀酸酯;非離子化去垢劑，如脂肪胺氧化物，脂肪酸鏈烷醇酰胺，聚氧乙烯聚丙烯多聚物;和兩性清凈劑，如烷基-β-氨基丙酸酯，和2-烷基咪唑啉及其混合物，本發(fā)明的非腸道用藥合成物一般含有0.5-25%的有效組分(W/V)。防腐劑和緩沖液也可有利地被使用。為了減小或排除注射部位的刺激性痛疼，該合成物可含一種非離子化表面活性劑，它含12-17%的親水-親脂性平衡液(HLB)。在每一劑型中表面活性劑的含量為重量的5-15%。表面活性劑可以是含上述HLB的單一成分，也可是含上述HLB的兩至更多種成分的混合物。在非腸道用藥劑型中使用的表面活性劑屬聚乙烯山梨醇脂肪酸酯類(lèi)，如山梨醇單油酸酯，以及具有一個(gè)巰水基團(tuán)的乙烯氧化物的高分子量加成物，它是由丙烯乙二醇與丙烯氧化物縮合而成。
本發(fā)明的化合物當(dāng)用于治療皮膚的異常膠原沉積時(shí)，最好經(jīng)局部用藥。上述液體劑型的任一種，包括凝膠和軟膏，可制成皮膚洗劑和乳劑形式，也可含于潤(rùn)滑劑，香料，收斂劑，修面洗劑，科隆香水，化妝底劑，和類(lèi)似制劑中。一般來(lái)說(shuō)，本發(fā)明的一種局部藥劑制品每100毫升中將含結(jié)構(gòu)式1的一種化合物0.01g至5g不等。
例證1賴氨酰氧化酶抑制作用的研究賴氨酰氧化酶制品按M.A.Williams和H.M.Kagan所述方法(Anal.Biochem.149，430-437(1985))和H.M.Kagan和K.A.Sullivan法(MethodsinEnzyml.82，637-650(1982))稍變動(dòng)后從中主動(dòng)脈中獲得。自主動(dòng)脈可得新鮮的酶制品并貯存于4℃下至實(shí)驗(yàn)使用時(shí)。將主動(dòng)脈仔細(xì)研磨，加入含0.15M氧化鈉的緩沖液(每克組織加2.5ml含16mM磷酸鉀和1mM苯甲基硫酰氟化物的緩沖液)之中均質(zhì)化90秒，然后將該混合液離心(11，000g，20分鐘)。離心后的物質(zhì)再用含0.15M氧化鈉的緩沖液，單獨(dú)緩沖液，及含1M尿素的緩沖液反復(fù)勻漿化。以1M尿素緩沖液勻化后的混合液在離心前攪動(dòng)1小時(shí)。所獲團(tuán)塊在含4M尿素的緩沖液中勻質(zhì)，攪動(dòng)18小時(shí)，并離心。含賴氨酸氧化酶活性的上清液被收集。組織在含4M尿素的緩沖液中勻質(zhì)，攪動(dòng)過(guò)夜，離心2次以上。含賴氨酰氧化酶活性的上清液再收集。
試驗(yàn)采用P.C.Trackman等人的方法(Anal.Biochem.113，336-342，(1981))。每一每一試驗(yàn)由2個(gè)試管組成，其中之一在開(kāi)始時(shí)含有0.2mMBAPN，另一個(gè)外加BAPN以淬滅該反應(yīng)。賴氨酰氧化酶制品(0.150ml)，尿素(0.300ml，4M)，緩沖液(0.930ml，200mM硼酸鹽，PH8.2)，同型香草酸(0.020ml的50mM溶液)，和辣根過(guò)氧化物酶(5mg/ml蛋白的SigmaⅡ型0.010ml)于55℃下在一個(gè)試驗(yàn)管內(nèi)共溫育2分鐘。尸胺(150mM的0.100ml)和試驗(yàn)組分，若有的話，加入，并繼續(xù)在55℃下溫育10分鐘。含這種混合液的試管在加入BAPN后于冰水浴中冷卻。分別在0分鐘和10分鐘時(shí)接受BAPN的相應(yīng)試管之間(熒光激發(fā)波長(zhǎng)315nm，發(fā)射波長(zhǎng)425nm)的差異是酶活性的測(cè)定值。為判定賴氨酰氧化酶所轉(zhuǎn)化的尸胺量所需的標(biāo)準(zhǔn)曲線制備如下。含BAPN的試驗(yàn)混合液如上述配制，已知?jiǎng)┝康倪^(guò)氧化氫與尸胺同時(shí)加入，測(cè)定反應(yīng)10分鐘后的熒光變化。
使用這種方法，賴氨酰氧化酶抑制活性以IC50(抑制濃度)來(lái)表示，即酶活性被抑制50%所需試驗(yàn)組分的濃度，它可為本發(fā)明的各種化合物所測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1表1含鹵素的烯丙胺化合物對(duì)賴氨酰氧化酶的抑制活性試驗(yàn)化合物 IC50(M)(E)-2-(4-氟苯乙基)-3-氟-烯丙胺 1×10-10(E)-2-(3，4-二甲氧基苯丙基)-3-氟-烯丙胺 1×10-10(E)-2-(硫代苯氧基甲基)-3-氟-烯丙胺 1×10-10
(E)-2-苯基-3-氟-烯丙胺 1×10-9(Z)-2-(3，4-二氯苯氧基甲基)-3-氟-烯丙胺 1×10-9(Z)-2-(2-噻嗯基)-3-氟-烯丙胺 1×10-9(E)-2-異丁基-3-氟-烯丙胺 1×10-8(E)-2-十一烷基-3-氟-烯丙胺 1×10-7(E)-2-(3，4-二甲氧基苯基)-3-氟-烯丙胺 1×10-7(E)-N-乙基-2-(3，4-二甲氧基苯基)-3-氟-烯丙胺 1×10-6(E)-2-苯乙基-3-氯-烯丙胺 1×10-8(E)-2-異丁基-3-氯-烯丙胺 1×10-7(E)-2-苯基-3-氯-烯丙胺 1×10-權(quán)利要求
1.治療膠原異常沉積引起的疾病的方法，給所需患者施用有效量的下式化合物
其中X和Y可相同，為氟、氯或溴；也可不同，當(dāng)X為氫時(shí)，Y為氟、氯或溴；或Y為氫時(shí)，X為氟、氯或溴。R1是氫或一個(gè)C1-C4的烷基；A是一個(gè)選自下式的二價(jià)基團(tuán)
其中R2是氫、甲基或乙基，而m和n分別為0～16的整數(shù)，且m+n不能大于17；A或是選自下式的二價(jià)基團(tuán)-(CH2)p-D-(CH2)q-其中D是氧或硫，P是0～16的整數(shù)，而q是1～16的整數(shù)，且p+q不能大于17；A或是選自下式的二價(jià)基團(tuán)-(CH2)r-CH=CH-(CH2)s-其中s是1～16的整數(shù)，而r是0～16的整數(shù)，且r+s不能大于16；R是甲基，苯基或用C1-C5的烷基，C1-C5的烷氧基，羥基，氯，溴，氟，碘，三氟甲基，硝基，C1-C5的烷基羰基，苯甲?；虮交械囊粋€(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代的苯基；R或是1-或2-萘基；1-、2-或3-茚基；1-，2-或9-芴基；1-，2-或3-哌啶基；2-或3-吡咯基；2-或3-噻嗯基；2-或3-呋喃基；2-或3-吲哚基；2-或3-硫茚基；2-或3-苯并呋喃基；或上述化合物藥物學(xué)可接受的鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中X和Y均為氯或溴，或其中X是氯或溴而Y是氫，或Y是氯或溴而X是氫。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中R是苯基或由C1-C5烷基，C1-C5烷氧基，羥基，氯，溴，氟，碘，三氟甲基，硝基基，C1-C5的烷基羰基，苯甲酰或苯基中的一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代的苯基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中R是甲基而A(如果存在)是選自下式的二價(jià)基團(tuán)
其中R2是氫，甲基或乙基，而m和n分別為0～16的整數(shù)，且m+n不能大于17;A或是選自下式的二價(jià)基團(tuán)-(CH2)p-D-(CH2)q-其中D是氧或硫，p是0～16的整數(shù)，q是1～16的整數(shù)，且p+q不能大于17。
5.權(quán)利要求1或2的方法，其中R是甲基而A(如果存在)是選自下式的二價(jià)基團(tuán)
其中R2是氫，甲基或乙基，m是0～16的整數(shù)，n是0;A或是選自下式的二價(jià)基團(tuán)-(CH2)p-D-(CH2)q-其中D是氧或硫，p是0～16的整數(shù)，q是1。
6.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中R是苯基，甲氧基苯基，二甲基苯基，羥基苯基，二羥基苯基，氯苯基或二氯苯基。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中A不存在或A是亞甲基或是-SCH2-或-OCH2-。
8.抑制所需患者的賴氨酰氧化酶的方法，給病人以有效量的下式化合物
其中X和Y可相同，是氟，氯，溴，或X是氫而Y是氟，氯或溴，或Y是氫而X是氟，氯或溴;R1是氫或C1-C4的烷基;A是選自下式的二價(jià)基團(tuán)
其中R2是氫，甲基或乙基，m和n分別為0～16的整數(shù)，且m+n不能大于17;A或是選自下式的二價(jià)基團(tuán)-(CH2)p-D-(CH2)q-其中D是氧或硫，p是0～16的整數(shù)，q是1～16的整數(shù)，且p+q不能大于17;A或是選自下式的二價(jià)基團(tuán)-(CH2)r-CH＝CH-(CH2)s-其中s是1～16的整數(shù)，r是0～16的整數(shù)，且r+s不能大于16。R是甲基，苯基或用C1-C5的烷基，C1-C5的烷氧基，羥基，氯，溴，氟，碘，三氟甲基，硝基，C1-C5的烷羰基，苯甲?；虮交幸粋€(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代的苯基;R或是1-或2-萘基;1-，2-，或3-茚基;1-，2-或9-芴基;1-，2-，或3-哌啶基;2-或3-吡咯基;2-或3-噻嗯基;2-或3-呋喃基;2-或3-吲哚基;2-或3-硫茚基;或2-或3-苯并呋喃基;或上述化合物藥物學(xué)上可接受的鹽。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中X和Y是氯，溴，或當(dāng)X是氯、溴時(shí)Y是氫，或Y是氯、溴時(shí)X是氫。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9的方法，其中R是苯基或用C1-C5的烷基，C1-C5的烷氧基，羥基，氯，溴，氟，碘，三氟甲基，硝基，C1-C5的烷羰基，苯甲?；虮交幸粋€(gè)或兩個(gè)取代的苯基。
11.根據(jù)權(quán)利要求8或9的方法，其中R是甲基而A(如果存在)是選自下式的二價(jià)基團(tuán)
其中R2是氫，甲基或乙基，而m和n分別為0～16的整數(shù)，且m+n不能大于17。A或是選自下式的二價(jià)基團(tuán)-(CH2)p-D-(CH2)q-其中D是氧或硫，p是0～16的整數(shù)，q是1～16的整數(shù)，且p+q不能大于17。
12.根據(jù)權(quán)利要求8或9的方法，其中R是甲基，而A(如果存在)是選自下式的二價(jià)基團(tuán)
其中R2是氫，甲基或乙基，m是0-16的整數(shù)，n是0;A或是選自下式的二價(jià)基團(tuán)-(CH2)p-D-(CH2)q-其中D是氧或硫，p是0～16的整數(shù)，q是1。
13.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中R是苯基，甲氧基苯基，二甲氧基苯基，羥基苯基，二羥基苯基，氯苯基或二氯苯基。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中A不存在或A是亞甲基或一個(gè)-SCH2-或-OCH2-。
15.治療與膠原異常沉積有關(guān)疾病的方法，包括對(duì)患者施用抑制賴氨酰氧化酶的有效量的青霉素胺和下式的化合物
其中X和Y可相同，為氟、氯或溴，或X是氫時(shí)Y為氟、氯、溴，或Y為氫時(shí)X是氟、氯、溴。R1是氫或C1-C4的烷基;A是選自下式的二價(jià)基團(tuán)
其中R2是氫，甲基或乙基，m和n分別為0～16，且m+n不能大于17;A或是選自下式的二價(jià)基團(tuán)-(CH2)p-D-(CH2)q-其中D是氧或硫，p是0～16的整數(shù)，q是1～16的整數(shù)，且p+q不能大于17;A或是選自下式的二價(jià)基團(tuán)-(CH2)r-CH＝CH-(CH2)s-其中s是1～16的整數(shù)，而r是0～16的整數(shù)，且r+s不能超過(guò)16;R是甲基，苯基或由C1-C5的烷基，C1-C5的烷氧基，羥基，氯，溴，氟，碘，三氟甲基，硝基，C1-C5的烷羰基，苯甲?；虮交幸粋€(gè)或兩個(gè)基團(tuán)取代的苯基;R或是1-，或2-萘基;1-，2-，或3-茚基;1-，2-，或9-芴基;1-，2-，或3-哌啶基;2-或3-吡咯基;2-或3-噻嗯基;2-或3-呋喃基;2-或3-吲哚基;2-或3-硫茚基;或2-或3-苯并呋喃基;或上述化合物藥學(xué)上可接受的鹽。
16.如下式的化合物
其其中X和Y可相同，為氯或溴，或X為氫，Y是氯或溴，或Y為氫，X是氯或溴;R1是氫或C1-C4的烷基;A是選自下式的二價(jià)基團(tuán)
其中R2是氫，甲基或乙基，m和n分別為0～16的整數(shù)，且m+n不能大于17;A或是選自下式的二價(jià)基團(tuán)-(CH2)p-D-(CH2)q-其中D是氧或硫，p是0～16的整數(shù)，q是1～16的整數(shù)，且p+q不能大于17;A或是選自下式的二價(jià)基團(tuán)-(CH2)r-CH＝CH-(CH2)s-其中s是1～16的整數(shù)，r是0～16的整數(shù)，且r+s不能大于16;R是甲基;或其藥物學(xué)可接受的鹽。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的化合物，其中A是選自下式的一個(gè)二價(jià)基團(tuán)
其中R2是氫，甲基或乙基，m+n分別為0～16的整數(shù)，且m+n不能大于17;A或是選自下式的一個(gè)二價(jià)基團(tuán)-(CH2)p-D-(CH2)q-其中D是氧或硫，p是0～16的整數(shù)，q是1～16的整數(shù)，且p+q不能大于17。
18.根據(jù)權(quán)利要求16的化合物，其中A不存在或A是一個(gè)亞甲基或一個(gè)-SCH2-或-OCH2-基團(tuán)。
19.根據(jù)權(quán)利要求16的化合物，它是2-異丁基-3-氯-烯丙胺。
20.權(quán)利要求19化合物中的(E)異構(gòu)體。
21.制備下式化合物的方法
包括將下式化合物以已知方法將琥珀酰亞胺基，順丁烯二酰亞胺基或苯二甲酰亞氨基原位轉(zhuǎn)化為伯氨基，
其中X，Y，R和A如權(quán)利要求16定義，W是〕，，或
。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的方法，所制備化合物中R1是氫，甲基或乙基，而R、X、Y和A如上定義。
23.根據(jù)權(quán)利要求21的方法，其中W是
，制備步驟包括將其與肼反應(yīng)或用強(qiáng)無(wú)機(jī)酸水解。
24.制備權(quán)利要求21所述化合物的方法，包括將下式的一種醇的羥基原位以已知方法轉(zhuǎn)化為伯胺基，
其中X，Y和R同權(quán)利要求21定義，如果X或Y中的一個(gè)為氟，氯或溴，另一個(gè)不能是氫。
25.根據(jù)權(quán)利要求24的方法，其中所述醇以已知方法先轉(zhuǎn)化為下式化合物
其中X，Y和R如權(quán)利要求21定義，如果X或Y中的一個(gè)、氯或溴，則另一個(gè)不能是氫，B是琥珀酰亞胺基，苯二甲酰 或順丁烯二酰亞胺基，六亞甲基四胺基團(tuán)或C1-C4的烷基氨基;再將該化合物以已知方式將琥珀亞胺基，苯二甲酰亞氨基丁烯二酰亞胺基，六亞甲基四胺基團(tuán)或C1-C4的烷基氨基 為伯胺基。
26.根據(jù)權(quán)利要求25的方法，其中(1)B是琥珀酰亞胺基，苯二甲酰亞氨基或丁烯二酰亞胺基，將其轉(zhuǎn)化為氨基是包括與反應(yīng)或用強(qiáng)酸水解。(2)B是六亞甲基四胺基團(tuán)，通過(guò)與強(qiáng)酸熱使其轉(zhuǎn)化為氨基;或(3)B是C1-C4的烷基甲氨基，胺無(wú)機(jī)酸水解使其轉(zhuǎn)化為氨基。
27.根據(jù)權(quán)利要求23，24，2或26的方法，其中X是氟，Y是氫，R是3，4-二甲氧基苯，R1是氫，制備的產(chǎn)物是(E)-2-(3′，4′-二甲氧基苯基)-3-氟烯丙胺。
28.制備下式化合物的方法
其中X，Y，R和A如權(quán)利要求21的定義，只是R不能為單一，二-或三-羥基苯基;當(dāng)X或Y為氟、氧或溴時(shí)，另一個(gè)不能為氫;R3是氫，該方法包括用已知方法還原下式化合物
其中X.Y.R和A如權(quán)利要求21定義，Rd是氫或C1-C4的烷基。
29.根據(jù)權(quán)利要求28，其中的還原反應(yīng)用的是二異丁基鋁的氫化物。
全文摘要
本發(fā)明是關(guān)于賴氨酰氧化酶抑制劑及其用于治療由膠原異常沉積引起的疾病。
文檔編號(hào)A61K31/445GK1035497SQ8910115
公開(kāi)日1989年9月13日 申請(qǐng)日期1989年2月25日 優(yōu)先權(quán)日1988年2月25日
發(fā)明者米切爾·G·帕爾弗里曼, 伊恩·A·麥克唐納, 菲利普·貝 申請(qǐng)人:默里爾多藥物公司