專利名稱：應(yīng)用某些溶菌酶和糖苷內(nèi)切酶的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及應(yīng)用反芻類胃溶菌酶和某些糖苷內(nèi)切酶的抗微生物組合物和方法。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及某些抗微生物組合物和用這些抗微生物組合物處理以破壞或去除微生物的方法，這些組合物含有反芻類胃溶菌酶和β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶或糖肽內(nèi)切酶。
溶菌酶是一種粘肽糖水解酶，它水解N-乙酰胞壁酸和N-乙酰葡糖胺之間的1，4-β連鍵，因而對(duì)某些微生物的細(xì)胞壁有破壞作用。市售的溶菌酶已應(yīng)用于許多場(chǎng)合，例如潔牙劑、口香糖及接觸鏡片清洗劑等。
反芻類胃溶菌酶是有前腸的哺乳動(dòng)物的胃粘膜所特有的一種溶菌酶。它顯然還沒有廣泛的商業(yè)用途。β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶已普通用作碳水化合物和糖蛋白結(jié)構(gòu)研究的分析工具。我們發(fā)現(xiàn)，反芻類胃溶菌酶加上β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶和/或糖肽內(nèi)切酶的抗微生物效果，比單獨(dú)用其中任何一種酶的抗微生物效果都要強(qiáng)。
作為抗微生物劑的混合液中采用溶菌酶已在牙用清洗液中受到注意(1982年10月19日授予Rabussay的美國(guó)專利4，355，022)。Rabussay公開了一種去除牙斑和牙結(jié)石的方法，包括涂用一種含有溶菌酶(0.1ml/mg)的溶液，同時(shí)還可視需要而涂用脂酶、磷脂酶、糖酶和/或蛋白酶。Rabussay還公開了一種含有該混合物的牙科治療劑。糖酶是一大類酶，糖苷內(nèi)切酶就屬于這類酶。
1986年5月1日授予Neeser的澳大利亞專利8548514公開了一種含有糖肽(Ⅰ)和/或寡糖的抗菌組合物。其制備方法是，用一種蛋白水解酶消化植物來(lái)源的糖蛋白(A)，然后視需要用β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶H處理糖肽產(chǎn)物而將其轉(zhuǎn)化成寡糖。接著可用一種α-甘露糖苷外切酶消化產(chǎn)物，優(yōu)先切割甘露糖殘基間的α1-2連鍵。分離出的糖肽(Ⅰ)據(jù)稱對(duì)具有Ⅰ型菌毛的病原菌(如大腸桿菌、克雷伯氏肺炎桿菌、鼠傷寒沙門氏菌或弗氏志賀氏菌)具有抗菌效果。
1987年2月26日公開的日本專利62044180公開了一種β-N-乙乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶(Ⅰ)，該酶能與糖蛋白中與天冬酰胺鍵接的糖的N，N′-二乙酰殼二糖結(jié)構(gòu)反應(yīng)，從而水解N-乙酰葡糖胺的β-4位鍵而從糖蛋白中分離出寡糖。該酶具有底物特異性，使得酶(Ⅰ)與高甘露糖型或鍵接天冬酰胺的混合型糖鏈反應(yīng)，從而得到復(fù)雜的產(chǎn)物。該酶得自刀豆(Canavalia gladiata DC)，可用于研究糖蛋白中糖鏈部分的生物活性。但是通過糖苷內(nèi)切酶的作用來(lái)增強(qiáng)反芻類胃溶菌酶的作用尚未述及。
與本專利申請(qǐng)同一天提交的三個(gè)共同未決的美國(guó)專利申請(qǐng)，描述了包括Ⅱ型糖苷內(nèi)切酶的方法和配方，這一組酶中包括本發(fā)明的糖苷內(nèi)切酶。第一個(gè)共同未決的專利申請(qǐng)題為“應(yīng)用Ⅱ型糖苷內(nèi)切酶的方法和配方”，其發(fā)明人為R.S.Carpenter、A.M.Wolff、P.J.Lad和I.J.Goldstein，該申請(qǐng)描述了用于除去含糖苷物質(zhì)的Ⅱ型糖苷內(nèi)切酶。第二個(gè)共同未決的專利申請(qǐng)題為“應(yīng)用Ⅱ型糖苷內(nèi)切酶的方法”，其發(fā)明人為R.S.Carpenter、A.M.Wolff和P.J.Lad，該申請(qǐng)描述了用于除去微生物的Ⅱ型糖苷內(nèi)切酶。第三個(gè)共同未決的專利申請(qǐng)題為“應(yīng)用Ⅱ型糖苷內(nèi)切酶和抗微生物劑的抗微生物方法和配方”，其發(fā)明人為R.S.Carpenter、A.M.Wolff和P.J.Lad，該申請(qǐng)描述了Ⅱ型糖苷內(nèi)切酶與抗微生物劑的混合物。本專利申請(qǐng)描述了將反芻類胃溶菌酶與β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶和/或糖肽內(nèi)切酶混合而獲得的典型優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明提供某些抗微生物組合物，這些組合物中包含β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶和/或糖肽內(nèi)切酶及反芻類胃溶菌酶。優(yōu)選內(nèi)切酶H.D或F和肽∶N-糖苷酶(PNG)F或A。特別優(yōu)選的溶菌酶是通過基因工程在一種酵母(Piohia pastoris)中表達(dá)的牛溶菌酶。這些組合物最好含有去污表面活性劑。本發(fā)明還包括通過用β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶和/或糖肽內(nèi)切酶及反芻類胃溶菌酶處理破壞和/或去除微生物的方法。
本發(fā)明涉及反芻類胃溶菌酶與某些糖苷內(nèi)切酶的混合物，這種混合物具有驚人的抗微生物效果。本發(fā)明還包括應(yīng)用該混合物的抗微生物組合物和方法。
A.糖苷內(nèi)切酶糖苷內(nèi)切酶屬糖水解酶類，切割底物中的內(nèi)糖苷鍵。這里所用的糖苷內(nèi)切酶來(lái)自目前已知的三組主要的糖苷內(nèi)切酶中的兩組。此處優(yōu)選第一組，即β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶，它特異于天冬酰胺(Asn)連接的寡糖鏈核心部分中的二-N-乙酰殼二糖部分(見Thotakura，NR等人，“糖蛋白的酶促去糖基化”，Methods in Enzymology，138∶350-359)。已知的β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶包括來(lái)自肺炎雙球菌的內(nèi)切酶D、來(lái)自灰色鏈霉菌的內(nèi)切酶H、來(lái)自腦膜膿毒性黃桿菌的內(nèi)切酶F。內(nèi)切酶H還已經(jīng)在大腸桿菌(Robbins，PW等人，J.Biol.Chem.259∶7517，1984)和芽孢桿菌中克隆。
這里所用的第二組酶是稱為N-糖苷酶或糖肽酶或肽N-糖苷酶的糖肽內(nèi)切酶。這些酶水解N-乙酰氨基葡糖基天冬酰胺連鍵。PNG酶為糖肽內(nèi)切酶。另一類糖肽內(nèi)切酶，即肽O-糖苷酶(來(lái)自肺炎雙球菌的N-乙酰-α-D-氨基半乳糖苷內(nèi)切酶)，切割N-乙酰氨基半乳糖基絲氨酸/蘇氨酸連鍵，它的底物特異性很窄，在這里并不重要。
這里所用的最有用的PNG酶是來(lái)自苦杏仁酶的PNG酶A和來(lái)自腦膜膿毒性黃桿菌的PNG酶F。這兩種酶最近才被分離出來(lái)并作了定性鑒定(見Methods in Enzymology，同上，138∶351)。
第三組主要的糖苷內(nèi)切酶是來(lái)自肺炎雙球菌的β-N-半乳糖苷內(nèi)切酶，它水解多聚(N-乙酰半乳糖胺)型寡糖輔基中的糖苷鍵(Methods in Enzymology，同上)。這些酶在這里并不重要，糖苷外切酶也不重要，后者切割外糖苷鍵而非內(nèi)糖苷鍵。
β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶和/或糖肽內(nèi)切酶是本發(fā)明組合物的第一個(gè)組分。這里優(yōu)先選用內(nèi)切酶H、內(nèi)切酶D、內(nèi)切酶F、PNG酶A和F。選用內(nèi)切酶H、F和PNG酶F更優(yōu)，內(nèi)切酶H最優(yōu)。
以下剛剛提到的各種糖苷內(nèi)切酶的純品可以從市場(chǎng)上買到，但它們?cè)谶^去多半是用于學(xué)術(shù)研究中。β-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶曾用來(lái)確定糖蛋白中碳水化合物鏈的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)(Hughes，RC，The Glyooproteins，第24頁(yè)，1983)。迄今為止實(shí)際上一般都不能大量供應(yīng)，因而尚未用于消費(fèi)品中。
內(nèi)切酶H、內(nèi)切酶F、內(nèi)切酶D和PNG酶F可以從Beohringer Mannheim Biochemicals(Indianapolis，IN)得到。內(nèi)切酶H的最適pH為5.0，它水解糖蛋白和糖肽，其糖基特異性很高，即要求四糖Manα1→3Manα1→6Manβ1→4GloNAo(非還原端的α-甘露糖殘基可在C-2位由其它糖取代)，這種糖基特異性比內(nèi)切酶D要高。它水解組成為N-乙酰葡糖胺、N-乙酰氨基葡糖醇和GlcNAc并以Asn為配基的糖鏈，但不能作用于Fuoα1→6GloNAc和Fuoα1→6GloNAc→Asn的糖鏈”(Biochemica Information，1987，Boehringer Mannheim，“內(nèi)切酶H”一節(jié))。還可以買到由變鉛青鏈霉菌克隆的褶皺鏈霉菌內(nèi)切酶H，其最適pH為5.0至7.5，其底物特異性與上述內(nèi)切酶H相同。
內(nèi)切酶D的最適pH為6.5，“它水解糖蛋白和糖肽，其糖基特異性很高，即要求三糖Manα1→3Manβ1→4GloNAo(非還原端的α-甘露糖殘基不可被其它糖取代);其糖苷配基特異性很寬，即水解與N-乙酰葡糖胺、Fuoα1→6GlcNAc、GlcNAc→Asn以及Fuoα1→6GlcNAc→Asn連接的糖鏈”(Biochemica Information，1987，Boehringer Mannheim，“內(nèi)切酶D”一節(jié))。
內(nèi)切酶F的最適pH為5.0，“它切割殼二糖內(nèi)的N-聚糖而在天冬酰胺上留下一個(gè)N-乙酰葡糖胺分子。它特異地切割‘高甘露糖’型的N-聚糖。它還以低得多的速度切割某些‘雜交的’和復(fù)合的雙分枝N-聚糖，但不切割復(fù)合的三分枝和四分枝N-聚糖”(Biochemica Information，1987，Boehringer Mannheim，“內(nèi)切酶F”一節(jié))。
也有與PNG酶F混合的內(nèi)切酶F。對(duì)這一混合物來(lái)說(shuō)，“酶活性是由pH控制的”。在pH4.0時(shí)，只有內(nèi)切酶F活性“發(fā)揮作用，從卵清蛋白中釋放出八肽-GlcNAc和寡糖-GlcNAc。pH9.3時(shí)，主要由PNG酶F切割糖基胺鍵，釋放出八肽和寡糖-GlcNAc-GlcNAc。這個(gè)寡糖接著被內(nèi)切酶F水解成寡糖-GlcNAc加GlcNAc”(Biochemica Information，1987，Boehringer Mannheim，“內(nèi)切酶F”一節(jié))。
PNG酶F的最適pH為5.0-7.0，它水解“多種類型的N-聚糖的天冬酰胺與碳水化合物部分之間的連鍵，前提是肽鍵中同時(shí)存在有氨基和羧基”(見Biochemica Information，1987，Boehringer Mannheim，“PNG酶F”一節(jié))。
據(jù)Thotakura等人報(bào)導(dǎo)(Methods in Enzymology，138∶354-355)，內(nèi)切酶H、內(nèi)切酶F和PNG酶A的最適pH為4-5，而PNG酶F的最適pH約為8.5。他們述及檸檬酸能完全抑制PNG酶F的活性;非離子型去污劑能穩(wěn)定這些糖苷內(nèi)切酶;PNG酶A和F具有相似的底物特異性，但PNG酶F的活性明顯較強(qiáng)。
內(nèi)切酶H和內(nèi)切酶F都切割高甘露糖型結(jié)構(gòu)。內(nèi)切酶F還能以較低的速度切割雙分枝復(fù)合結(jié)構(gòu)，但不切割帶有分枝β-1，4-N-乙酰葡糖胺的寡糖鏈(Methods in Enzymology，138∶355)。
內(nèi)切酶H和F的底物為
切割位點(diǎn)用箭頭示出。GlcNAc為N-乙酰葡糖醛酸。
據(jù)報(bào)導(dǎo)，內(nèi)切酶H切割連接脂類的寡糖(Chalifour，R.J.等，Arohives of Biochemistry and Biophysics，229∶386-394，1983)和寡糖及糖蛋白中的二-N-乙酰殼二糖連鍵(Tarenton，A.L.等，J.Biol.Chem.249∶811-817，1974)。
PNG酶F的底物為
切割位點(diǎn)用箭頭示出。PNG酶F和A能切割高甘露糖結(jié)構(gòu)或復(fù)雜的多分支寡糖鏈，包括三分枝和四分枝結(jié)構(gòu)，除非這些結(jié)構(gòu)位于氨基或羧基末端(Methods in Enzymology，138∶355)。PNG酶F要求至少一個(gè)二-N-乙酰殼二糖核(Laemmli，U.K.，Nature227∶680，1970)。
發(fā)生去糖基化作用所需的糖苷內(nèi)切酶濃度及保溫時(shí)間取決于底物的類型。
最近證明，本發(fā)明的糖苷內(nèi)切酶能除去含糖苷物質(zhì)并破壞和/或除去各種表面上的微生物，特別是真菌，并給其它抗微生物劑帶來(lái)意外的好處。
糖苷內(nèi)切酶是當(dāng)前的一個(gè)研究課題，因此可以預(yù)計(jì)，將會(huì)發(fā)現(xiàn)并克隆出與上述酶具有相同或相似活性的新糖苷內(nèi)切酶。與這里所述的反芻類胃溶菌酶一起起作用的糖苷內(nèi)切酶打算包括在本發(fā)明內(nèi)。
B.反芻類胃溶菌酶本發(fā)明組合物中的第二個(gè)組分是來(lái)自反芻類的胃溶菌酶，包括牛溶菌酶。反芻類動(dòng)物是一種有瘤胃(前腸)的反芻食團(tuán)的哺乳動(dòng)物。前腸起無(wú)氧發(fā)酵室的作用，其中有一些消化纖維素的微生物(Vaughan，T.A.，Mammalogy，第二版，WB Saunders Co.，Philadelphia，1978)。這些微生物中有許多進(jìn)入胃而在胃中被消化。有一種以高水平存在于反芻類胃粘膜中的特殊類型的酶是溶菌酶C，它能幫助消化這些微生物(Dobson，DE等，“反芻類的胃溶菌酶”，J.Biol.Chem.，259∶11607-11625，1984，該文獻(xiàn)列入本文)。溶菌酶C對(duì)胃蛋白酶的失活作用具有不尋常的耐受性，而且據(jù)說(shuō)與其它非反芻類溶菌酶相比它能在更低的PH下起作用(J.Biol.Chem.，259∶11607，11617)。有證據(jù)表明，這些反芻類胃溶菌酶C與通常的哺乳動(dòng)物溶菌酶C明顯不同，這可能是在特化的反芻類胃環(huán)境中演化的結(jié)果(J.Biol.Chem.，259∶11608)。
在這里優(yōu)先使用反芻類胃溶菌酶C。選用從母牛胃粘膜中分離出的三種密切相關(guān)的溶菌酶C(1、2和3)更優(yōu)(J.Biol.Chem.，259∶11619-11625，包括補(bǔ)充材料，該文獻(xiàn)并入本文)。這些溶菌酶C與已知氨基酸組成的溶菌酶C有相似之處，即有8個(gè)半胱氨酸殘基，色氨酸比例高，但這些溶菌酶C的精氨酸含量低，這與其它已知溶菌酶C不同(J.Biol.Chem.，259∶11625及補(bǔ)充材料)。這三種密切相關(guān)的母牛胃溶菌酶C中，有一種稱為C2的酶已測(cè)定了其129個(gè)氨基酸的氨基酸順序。它的39-60位氨基酸殘基與其它已知的溶菌酶C不同，其中包括缺失一個(gè)氨基酸(J.Biol.Chem.，259∶11617)。在這三種母牛胃溶菌酶中，以母牛胃溶菌酶C2最優(yōu)。母牛或一般牛溶菌酶C2的分子量為14，398(J.Biol.Chem.，259∶11626及補(bǔ)充材料)。
牛胃溶菌酶C2比雞卵清溶菌酶對(duì)蛋白酶的耐受性更高，并具有更接近酸性的狹窄PH范圍(J.Biol.Chem.，25911607)。牛(母牛胃)溶菌酶目前雖然尚未廣泛商業(yè)化使用，但已被建議作為酸性pH下的抗菌劑或作為動(dòng)物飼料添加劑(Digan，ME等，“通過由酵母Piohia pastoris分泌而連續(xù)生產(chǎn)一種新的溶菌酶”，Biotechnology，7∶160-164，1989，該文獻(xiàn)列入本文)。
最近，牛溶菌酶C2已借基因工程在酵母Pichia pastoris中表達(dá)。加利福尼亞州LaJolla的一家公司(Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates，Inc.)通過遺傳工程制備這種酶，作法是克隆牛溶菌酶C2的cDNA，并通過用其固有的信號(hào)順序在Pichia pastoris中進(jìn)行分泌而表達(dá)其蛋白產(chǎn)物(Biotechhology，7∶160)。據(jù)說(shuō)重組產(chǎn)物的生物活性得到了保留，并預(yù)計(jì)會(huì)生產(chǎn)出成本低的大批量產(chǎn)物(Biotechnology，7∶160，163)。
重組牛溶菌酶，特別是來(lái)自酵母Pichia pastoris的重組牛溶菌酶，在這里最優(yōu)先被選用。由Pichia pastoris基因工程生產(chǎn)的牛溶菌酶C2應(yīng)用特別廣泛，因?yàn)樗鼘?duì)表面活性劑穩(wěn)定。本發(fā)明還考慮到可能被發(fā)現(xiàn)和/或克隆的其它反芻類胃溶菌酶，只要它們?cè)谂cβ-N-乙酰氨基糖苷內(nèi)切酶或糖肽內(nèi)切酶混合時(shí)能帶來(lái)好處。
據(jù)說(shuō)革蘭氏陽(yáng)性菌比革蘭氏陰性菌對(duì)溶菌酶的作用更敏感。金黃色葡萄球菌雖然是一種革蘭氏陽(yáng)性菌，但它對(duì)溶菌酶較不敏感，這可能是因?yàn)樗募?xì)胞壁糖肽中有不同的糖類(Davis等，《微生物學(xué)和免疫學(xué)原理》，Harper & Row，New York，118-119頁(yè)，1968)。在本發(fā)明中，β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶和/或糖肽內(nèi)切酶(優(yōu)選內(nèi)切酶H)與反芻類胃溶菌酶(優(yōu)選來(lái)自Pichia pastoris的重組牛溶菌酶的混合物確能嚴(yán)重破壞金黃色葡萄球菌(見實(shí)施例)。此外，上述混合物意外地顯著減少大腸桿菌(一種普通的革蘭氏陰性菌)菌落，而這些酶單獨(dú)存在時(shí)沒有這種作用。甚至對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌表皮葡萄球菌，單獨(dú)的溶菌酶或內(nèi)切酶H有不利影響，這兩種酶的混合物比任何一種酶單獨(dú)用的不利影響都更強(qiáng)。除細(xì)菌外，本發(fā)明的組合物還對(duì)真菌和酵母有效，但相信這與糖苷內(nèi)切酶尤其是內(nèi)切酶H的作用有關(guān)，而不僅僅是由于糖苷內(nèi)切酶與溶菌酶的混合物的作用。
C.組合物本發(fā)明包括含有反芻類胃溶菌酶、β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶和/或糖肽內(nèi)切酶的抗微生物組合物。優(yōu)先選用反芻類胃溶菌酶C和下列酶中的一種或多種內(nèi)切酶H、內(nèi)切酶F、內(nèi)切酶D、PNG酶A、PNG酶F。以牛溶菌酶C2和內(nèi)切酶H或PNG酶F更優(yōu)。來(lái)自Pichia pastoris的重組牛溶菌酶和內(nèi)切酶H最優(yōu)。
反芻類胃溶菌酶與β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶或糖肽內(nèi)切酶的重量比約以1∶4至4∶1為好，約以2∶1至1∶2更好。對(duì)內(nèi)切酶H和來(lái)自Pichia pastoris的牛溶菌酶來(lái)說(shuō)，最優(yōu)的比例是1∶1。
這里優(yōu)選的組合物含有約1-1000ppm(優(yōu)選約50-400ppm)的反芻類胃溶菌酶和約1-1200ppm(優(yōu)選約50-400ppm)的β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶或糖肽內(nèi)切酶。這里最優(yōu)選的組合物含有約80-150ppm內(nèi)切酶H和約80-150ppm重組牛溶菌酶。
這里的抗微生物組合物的形式優(yōu)選漱口劑、托牙清洗劑、潔牙劑、洗衣去污劑、防腐劑、液體皂、接觸鏡片清洗劑或皮膚清洗劑。這些將在下面更詳細(xì)地?cái)⑹?。這些組合物的形式更優(yōu)選的是托牙清洗劑、潔牙劑、漱口劑、防腐劑、液體皂或洗衣去污劑，最優(yōu)選的是洗衣去污劑，特別是重垢型液體洗衣去污劑。
這里的抗微生物組合物最好含有約0.1-60%(重量)的去污表面活性劑。去污表面活性劑可為陰離子型、非離子型、陽(yáng)離子型、兩性型和/或兩性離子型表面活性劑，優(yōu)選非離子型和/或陰離子型表面活性劑。最優(yōu)選的是非離子型表面活性劑。
本發(fā)明的組合物可以配制成洗衣去污劑，如美國(guó)專利4，507，219、4，318，818、4，605，509和4，412，934所公開的洗衣去污劑;硬表面清洗劑，如美國(guó)專利4，414，128、3，679，608、3，985，668和4，005，027所公開的硬表面清洗劑;條皂，如美國(guó)專利3，993，772和3，070，574所公開的條皂;洗發(fā)劑，例如美國(guó)專利4，345，080、4，704，272和4，741，855所公開的洗發(fā)劑;抗痤瘡產(chǎn)品，如美國(guó)專利4，318，907和4，608，370所公開的產(chǎn)品;口服組合物，如美國(guó)專利4，684，518所公開的口服組合物。這些專利在此列為參考。
如果抗微生物組合物是一種優(yōu)選的漱口劑、托牙清洗劑或潔牙劑，它最好含有內(nèi)切酶H或PNG酶F和牛溶菌酶C2各1-150ppm。這同樣適用于抗微生物組合物為接觸鏡片清洗劑的情形。
如果抗微生物組合物是一種液態(tài)或顆粒狀洗衣去污劑，它最好含有內(nèi)切酶H和重組牛溶菌酶C2各約2-250ppm，以及1-90%(重量)的去污表面活性劑，該表面活性劑選自陰離子型、非離子型、陽(yáng)離子型、兩性型和兩性離子型表面活性劑。優(yōu)選的洗衣去污劑組合物中優(yōu)選含有約5-50%(重量)的上述去污表面活性劑，最優(yōu)選的是含有10-40%(重量)。
可用于這里的去污劑組合物的表面活性劑，包括熟知的陰離子型、非離子型、陽(yáng)離子型、兩性型和兩性離子型合成表面活性劑。其中典型的有烷基苯磺酸鹽、烷基硫酸鹽和烷基醚硫酸鹽、石蠟磺酸鹽、烯烴磺酸鹽、烷氧基化的(尤其是乙氧基化的)醇類和烷基酚類、氧化胺、脂肪酸和脂肪酸酯的α-磺酸鹽、烷基內(nèi)銨鹽等，這些都是去污劑領(lǐng)域內(nèi)熟知的。這些去污表面活性劑一般含有C9-C18范圍的烷基。陰離子型去污表面活性劑可以以其鈉鹽、鉀鹽或三乙醇銨鹽的形式使用;非離子型則一般含有約5-17個(gè)氧化乙烯基團(tuán)。含有約0-4個(gè)氧化乙烯單位的C11-C16烷基苯磺酸鹽、C12-C13石蠟磺酸鹽和C10-C16烷基硫酸鹽，在本類型的組合物中是特別優(yōu)選的。
適用于這里的組合物的表面活性劑的詳細(xì)目錄可在1976年2月3日授予Baskerville的美國(guó)專利3，936，537中查找，該專利在此列為參考。這些表面活性劑的商業(yè)來(lái)源可在McCutcheon的《乳化劑和去污劑》一書中查找(North American Edition，1984，McCutcheon Division，MC Publishing Company)，這本書也在此列為參考。
可用于去污劑組合物的助洗劑包括任何常規(guī)的無(wú)機(jī)和有機(jī)水溶性鹽類助洗劑，以及各種水溶性的所謂“接種”助洗劑。本發(fā)明的洗衣去污劑組合物的助洗劑含量，按重量計(jì)優(yōu)選為約1-75%，更優(yōu)選的是約5-40%，最優(yōu)選的是約10-20%。
適用的水溶性無(wú)機(jī)堿性鹽類助洗劑的非限制性實(shí)例包括堿金屬碳酸鹽、硼酸鹽、磷酸鹽、多磷酸鹽、三聚磷酸鹽、碳酸氫鹽、硅酸鹽、硫酸鹽。這類鹽的具體實(shí)例包括鈉和鉀的四硼酸鹽、碳酸氫鹽、碳酸鹽、三聚磷酸鹽、焦磷酸鹽、六偏磷酸鹽。
適用的有機(jī)堿性鹽類助洗劑的實(shí)例有(1)水溶性氨基多乙酸鹽，例如鈉和鉀的乙二胺四乙酸鹽、次氮基三乙酸鹽、N-(2-羥乙基)次氮基二乙酸鹽;(2)肌醇六磷酸的水溶性鹽，如肌醇六磷酸的鈉鹽和鉀鹽;(3)水溶性多膦酸鹽，包括乙烷-1-羥基-1，1-二膦酸的鈉鹽、鉀鹽和鋰鹽以及亞甲基二磷酸的鈉鹽、鉀鹽和鋰鹽，等等。
接種助洗劑包括象用碳酸鈣或硫酸鋇接種的碳酸鈉或硅酸鈉這樣一些物質(zhì)。粒度小于約5微米的水合鈉沸石A特別理想。
適用助洗劑的詳細(xì)目錄可在美國(guó)專利3，936，537中查找，該專利在此列為參考。優(yōu)選的助洗劑為脂肪酸、多碳酸鹽、多磷酸鹽以及它們的混合物。
酌情使用的去污劑組合物組分包括酶類(如蛋白酶和淀粉酶)、過氧化物漂白劑和漂白劑激活劑、鹵素漂白劑(如二氯異氰脲酸的鈉鹽和鉀鹽)、污垢釋出劑(如甲基纖維素)、污垢懸浮劑(如羧甲基纖維素鈉)、織物增亮劑、酶穩(wěn)定劑、色斑、增泡劑或抑泡劑、防腐蝕劑、染料、填料、殺菌劑、pH調(diào)節(jié)劑、非助洗劑堿性源等。
抗微生物組合物還可以是一種防腐劑，例如洗發(fā)劑或化妝品(如面霜)或食品或飲料中的防腐劑。它最好以牛溶菌酶C2和內(nèi)切酶H(優(yōu)選)或PNG酶F各約50-400ppm的量用于化妝品或洗發(fā)劑。
本發(fā)明的組合物可以是洗發(fā)劑的形式。這些洗發(fā)劑一般含有約5-60%(重量)的合成表面活性劑，其余為水。適用的表面活性劑包括月桂基硫酸銨、勞瑞基(laureth)硫酸銨、月桂基硫酸三乙胺鹽、月桂基硫酸三乙醇胺鹽、勞瑞基硫酸三乙醇胺鹽、月桂基硫酸單乙醇胺鹽、勞瑞基硫酸單乙醇胺鹽、月桂基硫酸二乙醇胺鹽、勞瑞基硫酸二乙醇胺鹽、甘油單月桂酸酯硫酸鈉、月桂基硫酸鈉、勞瑞基硫酸鈉、月桂基硫酸鉀、勞瑞基硫酸鉀、月桂基肌氨酸、可可基(cocoyl)肌氨酸、可可基硫酸銨、月桂酰硫酸銨、可可基硫酸鈉、月桂酰硫酸鈉、可可基硫酸鉀、月桂酰硫酸鉀、月桂酰硫酸三乙胺鹽、月桂酰硫酸三乙醇胺鹽、可可基硫酸單乙醇胺鹽、月桂酰硫酸單乙醇胺鹽、十三烷基苯磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉。
這些洗發(fā)劑可以含有各種酌情添加的組分。這些常規(guī)的組分是本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員熟知的，例如防腐劑，如芐醇、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯和咪唑烷基脲;陽(yáng)離子型表面活性劑，如十六烷基三甲基氯化銨、月桂基三甲基氯化銨、三(十六烷基)甲基氯化銨、十八烷基二甲基芐基氯化銨、二(部分氫化脂)二甲基氯化銨;增稠劑和粘度調(diào)節(jié)劑，如長(zhǎng)鏈脂肪酸的二乙醇酰胺(如PRG 3 月桂酰胺)、環(huán)氧乙烷與環(huán)氧丙烷的嵌段共聚物、氯化鈉、硫酸鈉、聚乙烯醇、乙醇及水溶性聚合物(如咕噸膠、羥乙基纖維素、古爾膠和淀粉);pH調(diào)節(jié)劑，如檸檬酸、琥珀酸、磷酸、氫氧化鈉、碳酸鈉;香料;染料;和/或螯合劑，如乙二胺四乙酸二鈉。這些試劑各自的用量按組合物重量計(jì)一般約為0.01-10%，優(yōu)選約0.5-5.0%。
如果抗微生物組合物是一種液體洗手皂，則它含有內(nèi)切酶H或PNG酶F和牛溶菌酶C2各約50-400ppm，以及約10-40%(重量)的去污表面活性劑(如前面對(duì)去污劑組合物所述)。
抗微生物組合物可以是一種皮膚清洗劑，其中最好含有內(nèi)切酶H和來(lái)自Pichia pastoris的重組牛溶菌酶各約80-150ppm。
不應(yīng)使用與這些酶不相容的其它成分。這些組合物的PH優(yōu)選為5-8，更優(yōu)選為5.5-7，最優(yōu)選的是6.5-7.5。這些酶應(yīng)當(dāng)以不致失活的方式加到組合物中。
D.方法破壞或除去微生物的方法與抗微生物組合物一起包括在本發(fā)明中。這些方法包括用反芻類胃溶菌酶和β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶和/或糖肽內(nèi)切酶處理，最好是施用含有這些酶的組合物。優(yōu)選反芻類胃溶菌酶C和選自內(nèi)切酶H、內(nèi)切酶F、內(nèi)切酶D、PNG酶A和PNG酶F的糖苷內(nèi)切酶。處理組合物最好含有牛溶菌酶C2及內(nèi)切酶H和/或PNG酶F。最優(yōu)選的是來(lái)自Pichia pastoris的重組牛溶菌酶和內(nèi)切酶H。優(yōu)選的處理方法包括施用一種組合物，該組合物中含有內(nèi)切酶H和/或PNG酶F以及來(lái)自Pichia pastoris的重組牛溶菌酶。
這些酶應(yīng)以足以產(chǎn)生抗微生物效果的濃度使用。該處理中糖苷內(nèi)切酶或溶菌酶的量通常少于該酶單獨(dú)使用時(shí)產(chǎn)生同樣抗微生物效果所需的量。雖然不想受理論的束縛，但據(jù)信這兩種類型的酶之間有某種協(xié)同作用，即，這里的糖苷內(nèi)切酶和溶菌酶，特別是內(nèi)切酶H和重組牛溶菌酶C2的效果，比這二者效果的加和要強(qiáng)。
本方法優(yōu)選用于破壞或除去細(xì)菌，最優(yōu)選革蘭氏陽(yáng)性菌。該方法最好采用一組合物，其中含有約1-1200ppm(優(yōu)選約50-400ppm)β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶或糖肽內(nèi)切酶(最優(yōu)選的是內(nèi)切酶H)、以及約1-1000ppm(優(yōu)選約50-400ppm)反芻類胃溶菌酶C(最優(yōu)選的是來(lái)自Pichia pastoris的重組牛溶菌酶)。預(yù)計(jì)本方法也對(duì)真菌和酵母有效，但這可能是由于內(nèi)切酶H的作用而不是與溶菌酶的混合物的作用。
反芻類胃溶菌酶與β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶/糖肽內(nèi)切酶的比例約為1∶4至4∶1，優(yōu)選約1∶2至2∶1，最優(yōu)選的是約1∶1。
本方法(和組合物)最優(yōu)選的是用于破壞金黃色葡萄球菌和/或大腸桿菌，并且最好是用一種組合物，其中含有內(nèi)切酶H和重組牛溶菌酶各約50-400ppm，最優(yōu)選的是約100-150ppm。
該方法最好是用含有反芻類胃溶菌酶和β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶和/或糖肽內(nèi)切酶的組合物洗滌或沖洗含微生物的表面。根據(jù)表面的類型和所采用的處理方法，可以接著用水沖洗或用手象用布一樣擦拭。帶微生物的表面可以是例如牙齒或托牙、口腔、織物、皮膚或接觸鏡片。組合物優(yōu)選為漱口劑、托牙清洗劑、潔牙劑、洗衣去污劑、防腐劑、接觸鏡片清洗劑、液體皂或皮膚清洗劑(見上)，更優(yōu)選的是托牙清洗劑、漱口劑、防腐劑、液體皂或洗衣去污劑，最優(yōu)選的是洗衣去污劑、特別是液體重垢洗衣去污劑。該組合物的去污表面活性劑含量?jī)?yōu)選為約1-90%(重量)，更優(yōu)選的是約5-50%，最優(yōu)選的是10-40%。該表面活性劑選自陰離子型、非離子型、陽(yáng)離子型、兩性型和兩性離子型表面活性劑，優(yōu)選陰離子型和/或非離子型表面活性劑。該方法應(yīng)以不使酶失活的方式進(jìn)行。
這里的組合物還可以定期用于除去或防止微生物生長(zhǎng)，例如每天使用這里的漱口劑組合物?？赡茌^為理想的是，使這里的抗微生物組合物在施用后在所處理的部位停留一定的時(shí)間，例如用這里的漱口劑組合物沖洗30秒。
下列實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的組合物和方法。這些實(shí)施例不應(yīng)誤認(rèn)為是對(duì)本發(fā)明范圍的限制。所有份數(shù)、百分比和比例均按重量計(jì)，除非另外指出。
實(shí)施例1牛溶菌酶和內(nèi)切酶H對(duì)大腸桿菌的效果從已培養(yǎng)4小時(shí)的大腸桿菌液體培養(yǎng)物中取幾個(gè)樣品，用下列試劑處理2小時(shí)1)0.2M檸檬酸鈉緩沖液(pH7.0);
2)0.2M檸檬酸鈉緩沖液(pH7.0)加牛溶菌酶和內(nèi)切酶H(pH7.0)各200ppm;
3)＃1加200ppm牛溶菌酶(pH7.0);
4)＃1加200ppm內(nèi)切酶H(pH5.5)。
牛溶菌酶為來(lái)自Pichia pastoris的重組牛溶菌酶。據(jù)信這種牛溶菌酶單獨(dú)存在或與內(nèi)切酶H混合時(shí)起作用的最適PH為7.0。內(nèi)切酶H為來(lái)自大腸桿菌的重組內(nèi)切酶H。據(jù)信內(nèi)切酶H單獨(dú)存在而起作用時(shí)的最適PH為5.5。
取連續(xù)稀釋的處理樣品鋪平板，于37℃下保溫過夜，然后計(jì)數(shù)菌落。
這些處理的最終菌落計(jì)數(shù)如下
1)單獨(dú)緩沖液 1.5×106個(gè)菌落2)牛溶菌酶/內(nèi)切酶H 5.2×104個(gè)菌落3)單獨(dú)牛溶菌酶 1.8×106個(gè)菌落4)單獨(dú)內(nèi)切酶H 1.2×106個(gè)菌落將＃2中的牛溶菌酶和內(nèi)切酶H各變?yōu)?00ppm重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)。
1)0.2M檸檬酸鈉緩沖液(pH7.0);
2)0.2M檸檬酸鈉緩沖液(pH7.0)加牛溶菌酶和內(nèi)切酶H(pH7.0)各100ppm;
3)＃1加200ppm牛溶菌酶(pH7.0);
4)＃1加200ppm內(nèi)切酶H(pH5.5)。
這些處理的最終菌落計(jì)數(shù)如下1)單獨(dú)緩沖液 0.3×106個(gè)菌落2)牛溶菌酶/內(nèi)切酶H 3.8×103個(gè)菌落3)單獨(dú)牛溶菌酶 6.6×105個(gè)菌落4)單獨(dú)內(nèi)切酶H 8.7×105個(gè)菌落總之，牛溶菌酶和內(nèi)切酶H對(duì)大腸桿菌的效果比單獨(dú)的牛溶菌酶或單獨(dú)的內(nèi)切酶H都顯著增強(qiáng)。該混合物比單獨(dú)的任一種酶或緩沖液使細(xì)菌減少二至三個(gè)數(shù)量級(jí)。該混合物在不同的保溫時(shí)間(如30分至7小時(shí))都顯示效果。
實(shí)施例2牛溶菌酶和內(nèi)切酶H對(duì)表皮葡萄球菌的效果從已培養(yǎng)4小時(shí)的表皮葡萄球菌液體培養(yǎng)物中取幾個(gè)樣品，用下列試劑處理6小時(shí)
1)0.2M檸檬酸鈉緩沖液(pH7.0);
2)0.2M檸檬酸鈉緩沖液(pH7.0)加牛溶菌酶和內(nèi)切酶H(pH7.0)各100ppm;
3)＃1加100ppm牛溶菌酶(pH7.0);
4)＃1加100ppm內(nèi)切酶H(pH5.5)。
牛溶菌酶為來(lái)自Pichia pastoris的重組牛溶菌酶。據(jù)信這種牛溶菌酶單獨(dú)存在或與內(nèi)切酶H混合時(shí)起作用的最適pH為7.0。內(nèi)切酶H為來(lái)自大腸桿菌的重組內(nèi)切酶H。據(jù)信內(nèi)切酶H單獨(dú)存在而起作用時(shí)的最適pH為5.5。
取連續(xù)稀釋的處理樣品鋪平板，于37℃下保溫過夜，然后計(jì)數(shù)菌落。
這些處理的最終菌落計(jì)數(shù)如下1)單獨(dú)緩沖液 1.1×105個(gè)菌落2)牛溶菌酶/內(nèi)切酶H 5.8×103個(gè)菌落3)單獨(dú)牛溶菌酶 1.0×104個(gè)菌落4)單獨(dú)內(nèi)切酶H 3.9×104個(gè)菌落總之，牛溶菌酶和內(nèi)切酶H(各100ppm)對(duì)表皮葡萄球菌的效果比單獨(dú)的牛溶菌酶(100ppm)或單獨(dú)的內(nèi)切酶H(100ppm)都顯著增強(qiáng)。該混合物還在不同的保溫時(shí)間(如30分至7小時(shí))都顯示效果。
實(shí)施例3內(nèi)切酶H/牛溶菌酶對(duì)金黃色葡萄球菌形態(tài)的影響將已培養(yǎng)4小時(shí)的金黃色葡萄球菌(ATCC＃6341)液體培養(yǎng)物分開，用下列活性物質(zhì)在37℃下處理2小時(shí)1)0.2M檸檬酸鈉緩沖液(pH7.0);
2)＃1加200ppm牛溶菌酶和200ppm內(nèi)切酶H(pH7.0);
3)＃1加400ppm牛溶菌酶(pH7.0);
4)＃1加400ppm內(nèi)切酶H(pH7.0)。
處理后，把這些樣品放在涂有聚乙烯醇縮甲醛樹脂的銅網(wǎng)上，用透射電子顯微鏡檢查。顯微照片表明，緩沖液對(duì)照和任一種單獨(dú)的酶都沒有破壞金黃色葡萄球菌。但當(dāng)這兩種酶混合后，經(jīng)過處理的微生物嚴(yán)重凝聚和/或被破壞。
實(shí)施例4牛溶菌酶/內(nèi)切酶H相對(duì)其它溶菌酶/內(nèi)切酶H的效果將大腸桿菌(083K.H.81)的對(duì)數(shù)期培養(yǎng)物分開，用不同的溶菌酶/內(nèi)切酶H混合物于37℃下處理2和4小時(shí)。
處理結(jié)束后，從每個(gè)樣品各取若干等份試樣連續(xù)稀釋到磷酸緩沖鹽水中，并鋪在胰酶解酪蛋白大豆瓊脂上。將培養(yǎng)皿在37℃下保溫過夜，并計(jì)算菌落數(shù)。
結(jié)果處理 時(shí)間 菌落計(jì)數(shù)a)0.2M檸檬酸鈉緩沖液(pH7.0) 2小時(shí) 1.8×106b)0.2M檸檬酸鈉緩沖液+200ppm 2小時(shí) 1.9×106牛溶菌酶(pH7.0)c)0.2M檸檬酸鈉緩沖液+200ppm 2小時(shí) 2.3×103
牛溶菌酶+200ppm內(nèi)切酶H(pH7.0)d)0.2M檸檬酸鈉緩沖液+200ppm 2小時(shí) 2.6×106變?nèi)芫?200ppm內(nèi)切酶H(pH7.0)e)0.2M檸檬酸鈉緩沖液+200ppm 2小時(shí) 1.0×106雞卵清溶菌酶+200ppm內(nèi)切酶H(pH7.0)f)0.2M檸檬酸鈉緩沖液(pH7.0) 4小時(shí) 1.5×106g)0.2M檸檬酸鈉緩沖液+200ppm 4小時(shí) 1.8×106牛溶菌酶(pH7.0)h)0.2M檸檬酸鈉緩沖液+200ppm 4小時(shí) 5.2×106牛溶菌酶+200ppm內(nèi)切酶H(pH7.0)i)0.2M檸檬酸鈉緩沖液+200ppm 4小時(shí) 2.5×106變?nèi)芫?200內(nèi)切酶H(pH7.0)j)0.2M檸檬鈉緩沖液+200ppm 4小時(shí) 1.0×106雞卵清溶菌酶+200ppm內(nèi)切酶H(pH7.0)這些結(jié)果表明，牛溶菌酶和內(nèi)切酶H的混合物使細(xì)菌明顯減少。這種減少遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于任何一種所試驗(yàn)的其它溶菌酶/內(nèi)切酶H混合物。
將對(duì)照濃度加倍，例如單獨(dú)用400ppm的各種溶菌酶，重復(fù)該實(shí)驗(yàn)，這時(shí)牛溶菌酶和內(nèi)切酶H的混合物仍使細(xì)菌減少。
實(shí)施例5含有內(nèi)切酶H和牛溶菌酶的洗衣去污劑本發(fā)明的液體重垢洗衣去污劑組合物如下
組分 活性物重量%C13直鏈烷基苯磺酸 8.0聚乙氧基化(2.25)C14-15烷基磺酸 12.01，2-丙二醇 3.5二亞乙基三胺五乙酸鈉 0.3單乙醇胺 2.0聚乙氧基化(6.5)C12-13醇 5.0乙醇 8.5氫氧化鈉 3.85氫氧化鉀 1.8C12-14脂肪酸 10.0檸檬酸 4.0甲酸鈣 0.12C12烷基三甲基氯化銨 0.5四亞乙基五胺乙氧化物(15-18) 2.0水 37.12染料 0.08香料 0.25蛋白酶＊ 0.125內(nèi)切酶H 125ppm牛溶菌酶＊＊ 125ppm＊mg活性酶/g(34mg活性酶/g貯液)＊＊4.0單位/微克±25%將以上列出的各成分加到帶有單一攪拌器的混合罐中。在加入酶、染料和香料之前調(diào)節(jié)混合物的pH，使10%(重量)水溶液在20℃下的pH為～8.5。
該組合物在生產(chǎn)出之后立即進(jìn)行測(cè)試時(shí)，能除去和防止衣物污垢中所帶的微生物，特別是細(xì)菌。這種去除和防止作用比不含內(nèi)切酶H/牛溶菌酶的液體重垢去污劑要好。
實(shí)施例6含防腐劑的洗發(fā)劑組分 含量烷基硫酸銨(29%水溶液) 55.25%美國(guó)專利4，345，080實(shí)施例1的萬(wàn)畝定鋅晶體 2.0椰子單乙醇酰胺 3.0乙二醇二硬脂酸酯 5.0檸檬酸鈉 0.5檸檬酸 0.2顏料溶液 0.1香料 0.5內(nèi)切酶H 100ppm牛溶菌酶＊＊ 100ppm二羥甲基二甲基乙內(nèi)酰脲 0.05%水 加至100%＊＊4.0單位/微克±25%這種去頭屑洗發(fā)劑組合物保持無(wú)細(xì)菌或真菌污染的程度和時(shí)間比不含內(nèi)切酶H/牛溶菌酶的配方更高、更長(zhǎng)。
實(shí)施例7液體皂本發(fā)明的一種液體皂組合物如下組分 活性物重量%月桂基硫酸銨 6.0烷基肌氨酸鈉 5.7可可酰胺基丙基內(nèi)銨鹽 6.3椰子脂肪酸 1.0乙二胺四乙酸 0.2硫酸銨 0.4香料 0.25染料 5ppm水 80.15內(nèi)切酶H 50ppm牛溶菌酶＊＊ 50ppm＊＊4.0單位/微克±25%將以上列出的各成分以上列順序加入帶有單一攪拌器的混合罐中。在加入酶、染料和香料前，調(diào)整混合物的pH使10%(重量)水溶液在20℃下的pH為約6.5。
這種組合物產(chǎn)生去除普通皮膚菌叢的抗微生物作用。
實(shí)施例8片狀托牙清洗劑在60-65℃下，分別將以下物質(zhì)在熱空氣床中流化30分鐘制成顆粒碳酸氫鈉、過硼酸鈉單水合物、酒石酸、三聚磷酸鈉、氨基磺酸、聚乙二醇(20M)和乙二胺四乙酸。然后把這些顆粒與其它成分轉(zhuǎn)鼓混合，制出“第一層”混合物和“第二層”混合物，其中“第一層”混合物的組成如下重量%碳酸氫鈉 30.00酒石酸 23.00單過硫酸鉀 16.00氨基磺酸 11.00焦磷酸二鈉 8.20碳酸鈉 3.90聚乙二醇(20M) 2.60硫酸鈉 2.00薄荷粉 1.50二氧化硅 1.30十二烷基苯磺酸鈉 0.50“第二層”混合物的組成如下重量%過硼酸鈉單水合物 30.00單過硫酸鉀 28.00碳酸氫鈉 13.34三聚磷酸鈉 10.00碳酸氫鈉/顏料 4.00氨羧配合劑B 3.00碳酸鈉 3.00
聚乙二醇(20M) 2.50二氧化硅 2.00薄荷粉 1.50Wasag酯 1.40硬化甘油三酯 0.50十二烷基苯磺酸鈉 0.40琥珀酸鹽去污劑 0.30染料 0.06內(nèi)切酶H 100ppm牛溶菌酶＊＊ 100ppm＊＊4.0單位/微克±25%在39沖HORN旋轉(zhuǎn)壓片機(jī)中壓制成片劑。壓制過程分兩步進(jìn)行。先將“第二層”藍(lán)色混合物用填充法壓至很低的壓力(每片10千牛)。然后將“第一層”白色混合物灌入并壓至每片70千牛。這樣制得一個(gè)4克的片劑，其中含有2.7克藍(lán)色混合物和1.3克白色混合物。
片劑由消費(fèi)者溶于水中，把托牙放入含有該托牙清洗劑的水中進(jìn)行清洗，然后沖洗。
對(duì)上述優(yōu)選實(shí)施方案所作的對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯而易見的修改，將屬本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種抗微生物組合物，其特征在于，它包含反芻類胃溶菌酶和β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶或糖肽內(nèi)切酶。
2.權(quán)利要求1的抗微生物組合物，其中所述反芻類胃溶菌酶是一種或多種反芻類胃溶菌酶C。
3.權(quán)利要求2的抗微生物組合物，其中所述β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶為內(nèi)切酶F、內(nèi)切酶D或內(nèi)切酶H，所述糖肽內(nèi)切酶為PNG酶F或PNG酶A。
4.權(quán)利要求3的抗微生物組合物，其中反芻類胃溶菌酶C與β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶或糖肽內(nèi)切酶的比例約為1∶4至4∶1。
5.權(quán)利要求3的抗微生物組合物，它包含約1-1000ppm所述反芻類胃溶菌酶C和約1-1200ppm β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶或糖肽內(nèi)切酶。
6.權(quán)利要求5的抗微生物組合物，它包含牛溶菌酶C2和內(nèi)切酶H或PNG酶F。
7.權(quán)利要求6的抗微生物組合物，它包含約50-400ppm所述牛溶菌酶和50-400ppm所述內(nèi)切酶H或PNG酶F。
8.權(quán)利要求7的抗微生物組合物，它包含重組牛溶菌酶C2和內(nèi)切酶H。
9.權(quán)利要求8的抗微生物組合物，其中所述重組牛溶菌酶與內(nèi)切酶H的比例約為2∶1至1∶2。
10.權(quán)利要求9的抗微生物組合物，它包含內(nèi)切酶H和所述來(lái)自Pichia pastoris的重組牛溶菌酶各約80-150ppm。
11.權(quán)利要求5的抗微生物組合物，其中所述組合物選自漱口劑、托牙清洗劑、潔牙劑、洗衣去污劑、防腐劑、接觸鏡片清洗劑、液體皂、皮膚清洗劑。
12.權(quán)利要求5的抗微生物組合物，它還包含約1-90%(重量)去污表面活性劑，該表面活性劑選自陰離子型、非離子型、陽(yáng)離子型、兩性型和兩性離子型表面活性劑。
13.權(quán)利要求6的抗微生物組合物，其中所述組合物為漱口劑、托牙清洗劑或潔牙劑，其中包含約1-150ppm內(nèi)切酶H或PNG酶F和約1-150ppm牛溶菌酶C2。
14.權(quán)利要求8的抗微生物組合物，其中所述組合物為液體或顆粒狀洗衣去污劑，其中包含內(nèi)切酶H和重組牛溶菌酶C2各約2-250ppm，以及約5-50%(重量)去污表面活性劑，該表面活性劑選自陰離子型、非離子型、陽(yáng)離子型、兩性型和兩性離子型表面活性劑。
15.權(quán)利要求7的抗微生物組合物，其中所述組合物為洗發(fā)劑或化妝品用的防腐劑。
16.權(quán)利要求7的抗微生物組合物，其中所述組合物為液體洗手皂，其中還包含約10-40%(重量)去污表面活性劑，該表面活性劑選自陰離子型、非離子型、陽(yáng)離子型、兩性型和兩性離子型表面活性劑。
17.權(quán)利要求10的抗微生物組合物，其中所述組合物為皮膚清洗劑。
18.一種破壞或去除微生物的方法，其特征在于，用反芻類胃溶菌酶和β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶或糖肽內(nèi)切酶處理。
19.權(quán)利要求18的方法，其中所述處理包括施用一種組合物，該組合物包含反芻類胃溶菌酶C和一種選自內(nèi)切酶H、內(nèi)切酶F、內(nèi)切酶D、PNG酶A和PNG酶F的糖苷內(nèi)切酶。
20.權(quán)利要求19的方法，其中所述反芻類胃溶菌酶C與糖苷內(nèi)切酶在所述組合物中的比例約為1∶4至4∶1。
21.權(quán)利要求20的方法，其中所述組合物包含牛溶菌酶C2和內(nèi)切酶H或PNG酶F。
22.權(quán)利要求21的方法，其中所述組合物包含內(nèi)切酶H或PNG酶F以及來(lái)自Pichia pastoris的重組牛溶菌酶。
23.權(quán)利要求22的方法，它用于破壞或去除細(xì)菌，其中所述組合物包含約1-1200ppm內(nèi)切酶H和約1-1000ppm所述重組牛溶菌酶。
24.權(quán)利要求23的方法，它用于破壞或去除金黃色葡萄球菌或大腸桿菌，其中所述組合物包含約50-400ppm所述重組牛溶菌酶和內(nèi)切酶H。
25.權(quán)利要求23的方法，其中所述重組牛溶菌酶與內(nèi)切酶H在所述組合物中的比例為約1∶2至2∶1。
26.權(quán)利要求25的方法，其中所述組合物包含內(nèi)切酶H和所述重組牛溶菌酶各約100-150ppm。
全文摘要
提出了一種含有β-N-乙酰氨基葡糖苷內(nèi)切酶和/或糖肽內(nèi)切酶及反芻類胃溶菌酶的抗微生物組合物。還提出了一種通過用這些酶處理來(lái)破壞或去除微生物的方法。
文檔編號(hào)A61K8/00GK1051299SQ9010869
公開日1991年5月15日 申請(qǐng)日期1990年10月27日 優(yōu)先權(quán)日1989年10月27日
發(fā)明者理查德·謝潑德·卡彭特, 安·瑪格麗特·沃爾夫 申請(qǐng)人:普羅格特-甘布爾公司