專利名稱：抑制同種異體移植和協(xié)調(diào)性異種移植排斥反應(yīng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及適用于治療同種異體移植慢性排斥反應(yīng)和協(xié)調(diào)異種移植排斥反應(yīng)的藥用制劑。因此，本發(fā)明涉及促進移植物在宿主上的存活或防止移植物在宿主中喪失。
同種異體移植是同種異體間的組織移植。異種移植為兩不同種間組織的移植，它可按生物標(biāo)準(zhǔn)分為兩種亞型(Calne，Transplant.Proc.Ⅱ550-556(1970)。此兩亞型為協(xié)調(diào)異種移植和不協(xié)調(diào)異種移植。該兩亞型之間的區(qū)別在于兩不協(xié)調(diào)種間帶血管的器官移植物的移植被超急性排斥，即在血管接通后的幾分鐘或幾小時之內(nèi)移植物被排斥。在兩協(xié)調(diào)種之間，不發(fā)生異種移植超急性排斥反應(yīng)。然而，移植物將在幾天之內(nèi)，而不是在幾小時或幾分鐘之內(nèi)被排斥，并且排斥反應(yīng)常常是以加速的方式進行。
雖然還缺乏有效的證據(jù)，但一般認為，在兩不協(xié)調(diào)種之間發(fā)生的超急性排斥反應(yīng)是由于抗體對供者自然發(fā)生作用的結(jié)果。另一方面，對于協(xié)調(diào)移植而言，由于沒有能引起供者破壞的抗體存在，所以移植物至少能在短時期內(nèi)存治。文獻中有許多例子證明這種區(qū)別。最好的例子大概算Hammer所列舉的那些例子(in“Xenograft 25”(Mark A.Hardy，Ed)Elsevier，Amsterdam(1989))。Hammer總是用狗作受者，并指出腎移植存活時間如下狗-狗 11.4天澳洲野狗-狗 11.5天狼-狗 19.4天狐貍-狗 6.5天獅子-狗 10-24小時老虎-狗 10-24小時貓-狗 10-24小時豬-狗 10-30分鐘從上述數(shù)字可以看出，最后四個相互作用是不協(xié)調(diào)異種移植，前四個異種移植是協(xié)調(diào)的。Hammer把不協(xié)調(diào)異種移植和協(xié)調(diào)異種移植間的這些差異歸為交叉種間血凝抗體是否分別存在。
從學(xué)術(shù)上講，對協(xié)調(diào)和不協(xié)調(diào)種間的關(guān)系進行定義是必要的，但存在一些困難。實際上對本發(fā)明的目的而言，如果異種移植沒有發(fā)生超急性排斥反應(yīng)，就認為這兩個不同的種屬于協(xié)調(diào)作用方式。然而，對于本發(fā)明的目的而言，即使異種移植發(fā)生超急性排斥反應(yīng)，如果它們從未進行過如基因操作等過程以防止超急性排斥反應(yīng)，它們?nèi)员徽J為是有協(xié)調(diào)作用的種。例如，國際專利申請PCT/GB90/O1575在具體實施方案中涉及了有潛力的異種移植供體動物，它們經(jīng)過轉(zhuǎn)基因的修飾以表達受體動物的補體抑制調(diào)節(jié)子(如衰變加速因子(DAF)或膜輔因子蛋白(MCP))。當(dāng)供體動物器官移植到一般認為不協(xié)調(diào)關(guān)系的種上時，它對供體動物器官不發(fā)生超急性排斥反應(yīng)。因此，對于本發(fā)明的目的而言，認為這種轉(zhuǎn)基因的供體動物與欲作為其移植對象的種有協(xié)調(diào)關(guān)系。
具有如上定義的協(xié)調(diào)關(guān)系的種的例子有家兔-野兔、倉鼠-大鼠和非人類靈長類-人(如狒狒-人、黑猩猩-人及獼猴-人)。
促進移植物存活的研究已在異種移植(不協(xié)調(diào)和協(xié)調(diào))及同種異體移植領(lǐng)域均受到了注意。Adachi等人首先提出了促進不協(xié)調(diào)異種移植存活的建議(Transplant.Proc.XIX(1)1149-1152(1987))，并對大鼠不協(xié)調(diào)心臟病患者異種移植的存活情況進行了研究。在已研究的可能作為存活促進劑的物質(zhì)當(dāng)中有環(huán)孢菌素A、阿司匹林和眼鏡蛇毒毒素因子。此外對環(huán)孢菌素A和眼鏡蛇毒毒素因子的聯(lián)合使用也作了研究，Adachi等人報道“在我們的研究中，用環(huán)孢菌素A和眼鏡蛇毒毒素因子處理的實驗組和僅用眼鏡蛇毒毒素因子處理的實驗組之間的平均存活時間沒有統(tǒng)計學(xué)意義上的差別”。平均存活時間為40-50小時。Kemp等人(Transplant.Proc.XIX(6)4471-4474(1987))在研究將野兔的腎異種移植入貓時也研究了各種可能的不協(xié)調(diào)異種移植存活的促進劑。入選的存活促進劑有巰甲丙脯酸、enalapril、心痛定、前列環(huán)素、SodiumChromoglycate，硫唑嘌呤/皮質(zhì)類固醇的組合物、環(huán)孢菌素A及眼鏡蛇毒毒素因子。除眼鏡蛇毒毒素因子外，上述選擇的任何促進劑均不能防止發(fā)生超急性排斥反應(yīng)，該文的作者認為，眼鏡蛇毒毒素因子“對延長移植物的存活(達7天)具有驚人的效果”。
Hardy等人(Transplantation 33(3)237-242(1982))對協(xié)調(diào)異種移植排斥反應(yīng)作了研究，檢測了用鈀-109-血卟啉聯(lián)合抗淋巴細胞球蛋白進行選擇性淋巴樣組織放射治療效果，這種治療主要針對T細胞介導(dǎo)的排斥反應(yīng)。與未經(jīng)處理的對照組的存活時間(平均2.9天)相比，平均存活時間在12.5天的水平。Homan等人(Transplantation 31(3)164-166(1981))研究了環(huán)孢菌素A在提高協(xié)調(diào)異種移植存活中的效果。與未經(jīng)處理的對照組的2天存活時間比，最好的移植存活時間平均達21天。Monden等人(Transplantation 43(5)745-746(1987))研究了倉鼠-大鼠的肝臟的異種移植，并發(fā)現(xiàn)與未處理的對照組比，環(huán)孢菌素A對移植物的存活沒有顯著的促進效果。Valdevere等人(Trans-plant.Proc.XIX(1)1158-1159(1987))也研究了倉鼠-大鼠的肝臟異種移植，發(fā)現(xiàn)當(dāng)進行脾切除術(shù)并使用環(huán)孢菌素A時，與對照組相比，移植物存活時間有了明顯的改善，從平均存活3.6天延長到了17.6天。同Hardy等人進行的實驗(參考上文)一樣，Knechtle等人(Transplant.Proc.XIX(1)1137-1139(1987))研究了總的淋巴樣組織放射治療(TLI)對促進協(xié)調(diào)異種移植存活的影響，但這次他們是結(jié)合環(huán)孢菌素A的治療進行的。據(jù)他們報道，在倉鼠-大鼠心臟異種移植中，高劑量的環(huán)孢菌素A顯著地延長移植物的存活時間，但是在偶爾的情況下受體上的長期移植物才有功能。TLI同環(huán)孢菌素A聯(lián)合使用時移植物的存活進一步得到了顯著的改善。
抗同種異體移植排斥反應(yīng)的慣常治療方法是僅僅使用環(huán)孢菌素A，或?qū)h(huán)孢菌素A與類固醇或與硫唑嘌呤或與此兩者一道聯(lián)合使用。從某種觀點來看，上述三種聯(lián)合治療的方法并不代表對僅用環(huán)孢菌素A的治療方法作了改進。這些治療方法對防止和逆轉(zhuǎn)急性移植排斥反應(yīng)是有效的，并可能阻止慢性移植排斥反應(yīng)的發(fā)生，但似乎對于逆轉(zhuǎn)已發(fā)生的慢性排斥反應(yīng)只有極小作用或者完全沒有效果。
本發(fā)明在于尋找更好地促進協(xié)調(diào)異種移植和/或同種異體移植存活的方法或?qū)で笾委熕f的移植排斥反應(yīng)的方法。本發(fā)明是基于下述事實而實現(xiàn)的通過將環(huán)孢菌素A同眼鏡蛇毒毒素因子聯(lián)合使用來進行治療，或通過將具有類似作用方式的化合物聯(lián)合使用來進行治療，可使協(xié)調(diào)異種移植及同種異體移植的存活得到明顯地提高。
根據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提供了一種包括補體抑制劑和有類似環(huán)孢菌素A活性的免疫抑制劑的藥用制劑。
因此，本發(fā)明的藥用制劑至少包括兩種成分。第一種成分是補體抑制劑。所說補體抑制劑可以防止補體激活或除去或消耗一種或多種補體成分。優(yōu)選的補體抑制劑既可抑制補體激活的經(jīng)典途徑，也可抑制其旁路激活途徑。因此，那些不論是通過抑制或除去或消耗等作用來阻斷C3途徑的補體抑制劑都是優(yōu)先選用的。所以，可以認為抗C3的抗體(例如單克隆抗體)可用作本發(fā)明的補體抑制劑。其他適宜的補體抑制劑有可溶性衰變激活因子(DAF)和可溶性膜輔助因子蛋白(MCP)。最優(yōu)先選用的補體抑制劑之一是眼鏡蛇毒毒素因子。
蛇毒毒素是最復(fù)雜的動物分泌物，其中含有大量具有不同藥理和生化活性的物質(zhì)。主要影響補體的物質(zhì)存在于毒液中這一事實已經(jīng)知道幾乎有一個世紀(jì)了。有關(guān)眼鏡蛇毒毒素(Naja naja kaouthia)對血清補體的作用已進行了比較詳細的研究?；罨蜃邮欠肿恿繛?44KDa的糖蛋白，在鎂離子存在下與血清B因子結(jié)合。隨后，通過血清D因子的蛋白水解作用，B因子則裂解成兩種成分，生成Bb和Ba。復(fù)合物CoF-Bb(CoF代表眼鏡蛇毒因子)是一種裂解C3和C5的高活性轉(zhuǎn)化酶。然而，CoF-Bb不同于正常的C3和C5的轉(zhuǎn)化酶，它對正常的補體調(diào)節(jié)系統(tǒng)有阻礙作用。因此，它的作用將持續(xù)到所有的C3被轉(zhuǎn)化，這就有效地消耗了補體活性成分。C5裂解釋放出的C5a具有類過敏性作用;并非所有Naja眼鏡蛇毒毒素因子都具有這種C5轉(zhuǎn)化酶活性，但并不認為這對于本發(fā)明的目的是重要的。對補體的抑制并不局限于眼鏡蛇類的毒素。Eggertsen等人(Toxicon1887-96(1980))已對Elapidae、Viperidae和Crotalidae族蛇的毒素進行了研究。研究的26種毒素中有22種能抑制正常人補體的活性。對眼鏡蛇毒毒素結(jié)構(gòu)分析表明它同眼鏡蛇C3或其部分降解產(chǎn)物是相同的。
由于眼鏡蛇毒毒素因子和其他蛇毒毒素因子具有明顯的毒性問題，所以本發(fā)明不使用它們的天然形式。在對其毒性問題尚無其他解決措施的情況下，一般有必要對粗毒素的活化因子至少進行部分純化。對眼鏡蛇或其他蛇毒毒素因子來說沒有必要純化為均質(zhì)性物質(zhì)以用于本發(fā)明，但如果沒有其他任何要求規(guī)定使用實質(zhì)上純化的因子，這顯然只是一個規(guī)章性問題。對于眼鏡蛇毒毒素來說，從藥品商如Sigma(Sigma Chemicals Limited，Poole，Dorset)那兒可以獲得半純化制品，他們也提供自身純化的粗眼鏡蛇毒毒素。在實施例中有由粗眼鏡蛇毒毒素制備眼鏡蛇毒毒素因子的工藝方法。
還會了解到，除了使用天然眼鏡蛇毒毒素因子和其他蛇毒毒素因子外，這類因子的類似物(包括活性片段)也可以用于本發(fā)明，所說類似物是可以用如重組DNA技術(shù)獲得的合成因子。能使之適用于本發(fā)明的CoF的特征是它能與阻止正常的裂解機理的Bb因子形成穩(wěn)定的復(fù)合物，因此具有這種特征的其他分子也可優(yōu)選用于本發(fā)明。
本發(fā)明的藥物制劑的第二種成分是具有類似環(huán)孢菌素A活性的免疫抑制劑。這類化合物是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，它包括除環(huán)孢菌素A外的其他環(huán)孢菌素，如環(huán)孢菌素C和G。Eicosanoids也具有類似環(huán)孢菌素A的活性，其中包括PGI2(前列環(huán)素)，PGE2、PGD2、雷帕霉素和FK506(Fujisawa)，化合物FK506是優(yōu)先選用于本發(fā)明的化合物之一，但最優(yōu)選的化合物是環(huán)孢菌素A本身。環(huán)孢菌素A從市場上可以買到，(廠商為Sandoz，商標(biāo)為SANDIMUN)。
本發(fā)明特別優(yōu)選的實施方案是包括上面討論的最優(yōu)選的兩種化合物(眼鏡蛇毒毒素因子和環(huán)孢菌素A)的藥物制劑。
其他成分也可存在于本發(fā)明的藥物制劑中。一般可以使用賦形劑，但這并不包括其他活性成分。其中也可存在每一類活性成分中的一種以上的成分。
所說活性成分不必一定以單劑的形式共同給藥。因此本發(fā)明的第二方面是提供一種包括補體抑制劑和有類似環(huán)孢菌素A活性的免疫抑制劑的產(chǎn)品以作為一種復(fù)合制劑同時，單獨或依次用于促進同種異體移植或協(xié)調(diào)異種移植存活或治療排斥反應(yīng)。
本發(fā)明的第三個方面是提供一種包括補體抑制劑的藥物制劑和具有類似環(huán)孢菌素A活性的免疫抑制劑藥物制劑的藥盒。
實施本發(fā)明時，環(huán)孢菌素A和有類似環(huán)孢菌素A活性的其他免疫抑制劑一般經(jīng)非腸道給藥。這種情況下，包含免疫抑制劑的制品是無菌的。然而，環(huán)孢菌素A本身和其他免疫抑制劑可采用口服給藥方式，此時無菌不是必需的。環(huán)孢菌素A本身難溶于水，為使其溶解優(yōu)選將它溶解在油中(如植物油)，實施時也可使用橄欖油，只有當(dāng)免疫抑制劑不溶于水時，將其溶解在油中才是必需的，一般而言，所說免疫抑制劑可溶解于生理學(xué)上可接受的任何載體中。在某些場合，溶解甚至于也不是必要的。當(dāng)然所制備的免疫抑制劑的濃度取決于免疫抑制劑本身的性質(zhì)和欲采用的劑量，其劑量一般將遵從臨床醫(yī)生或內(nèi)科大夫的指導(dǎo)。然而，一般說來制備具有下述濃度的環(huán)孢菌素制劑是適宜的1-100mg/ml、例如1-10mg/ml，非腸道給藥一般為5mg/ml左右，或經(jīng)口服給藥為25-100mg/ml，如50-100mg/ml，一般為100mg/ml左右。
眼鏡蛇毒毒素因子一類補體抑制劑一般采用非腸道給藥，為此目的它一般是無菌的。眼鏡蛇毒毒素本身可用磷酸鹽緩沖液(無疊氮化物)或任何其他適宜的溶劑或載體予以配制?？蓪⒋伺渲茷榭诜苿Ｋ幬镏苿┲醒a體抑制劑的濃度同樣取決于最終所用劑量，此劑量將遵臨床醫(yī)生或內(nèi)科大夫所囑。一般而言，眼鏡蛇毒毒素可在PBS中配制成濃度從0.05mg/ml到溶解度極限濃度的制品，所說溶解度極限值取決于該毒素因子的純度。實際上濃度達5mg/ml的組合物是適用的，例如0.1-2mg/ml的組合物，如0.5mg/ml左右的組合物。
由于環(huán)孢菌素A基本上是不溶于水介質(zhì)中的，而眼鏡蛇毒毒素因子是溶于水介質(zhì)中的，所以實際上這兩種優(yōu)選的活性成分一般將分開配制并分開給藥。然而，因可將此兩種活性成分配制為適宜的乳劑，活性成分的不同結(jié)合物可溶解于共同的溶劑中，或至少可懸浮于一共同載體中，因此上述問題并不是一個主要問題。
參照上文所述進行腸外途徑注射。由于肌肉注射的滯留效果，所以優(yōu)選注射部位是肌肉。然而，在某些場合，靜脈注射也是可以的，而皮下注射也會有如果不是全部也是部分肌肉注射的優(yōu)點。如情況需要，也可采用腹膜內(nèi)注射。
本發(fā)明的第四方面是提供一種將補體抑制劑和有類似環(huán)孢菌素A活性的免疫抑制劑用于制備促進同種異體移植或協(xié)調(diào)異種移植存活或消除排斥反應(yīng)的制劑。因此將會看到本發(fā)明提供了一種促進在宿主上的同種異體移植或協(xié)調(diào)異種移植存活或消除排斥反應(yīng)的方法，該方法包括對移植受體或欲移植的受體使用補體抑制劑或有類似環(huán)孢菌素A活性的免疫抑制劑。
在許多場合下述方案也是優(yōu)選的，即在進行移植手術(shù)前，預(yù)先使用適用于本發(fā)明的某些或全部活性成分。應(yīng)予以指出的是，當(dāng)涉及同種異體移植時，本發(fā)明的主要優(yōu)點是適用于本發(fā)明的活性成分的聯(lián)合使用將用于防止慢性排斥反應(yīng)發(fā)生或在慢性排斥反應(yīng)發(fā)生后對其予以控制(即消除排斥反應(yīng));同種移植后一般將進行此法多年。
遭受慢性移植排斥反應(yīng)或有慢性移植排斥反應(yīng)發(fā)生危險的同種移植受體可以接受環(huán)孢菌素A或有類似環(huán)孢菌素A活性的其他免疫抑制劑的免疫抑制作用。對于本發(fā)明的目的而言，為了治療或預(yù)防這類患者中的慢性移植排斥反應(yīng)，僅僅增加補體抑制劑治療是必要的。本發(fā)明的第五個方面提供了一種在用有類似環(huán)孢菌素A活性的免疫抑制劑治療移植受體時將補體抑制劑用于制備促進同種異體移植或協(xié)調(diào)異種移植存活或消除這種移植排斥反應(yīng)的制劑的方法。因此本發(fā)明提供了一種使用方法，該方法為促進宿主上的同種異體移植或協(xié)調(diào)異種移植存活和/或消除移植在宿主上的排斥反應(yīng)，所說方法包括對移植受體或欲移植的受體使用有類似環(huán)孢菌素A活性的免疫抑制劑和補體抑制劑。
老虎到予以治療的種及予以移植的器官，可在任何適宜有效但無毒的水平上使用有類似環(huán)孢菌素A活性的免疫抑制劑。人對環(huán)孢菌素耐受性的上限是由受體腎毒性和年齡決定的。雖然其他種可能有更高的耐受性，但在許多場合下，對于治療人的安全上限為每天每公斤體重20mg的給藥量(20mg/Kg/day)。環(huán)孢菌素A在低劑量時是有效的，所以可以使用的最低量僅僅是產(chǎn)生有效應(yīng)答的最低量。業(yè)已發(fā)現(xiàn)有時每天每公斤體重1或2mg的用量是有效的。作為一般性指導(dǎo)，其給藥量為5-10mg/Kg/day。如果經(jīng)非腸道給藥，環(huán)孢菌素A可采用隔天給藥，這時將劑量予以加倍。然而，對于優(yōu)選的口服給藥途徑來說，每天的劑量則取決于所選的給藥方案，更確切地說，對于優(yōu)選的給藥方案而言，每天可以兩次或多次給用環(huán)孢菌素A以達到每天5-10mg/Kg總的給藥量。在有效但無毒的劑量下給用有類似環(huán)孢菌素A活性的其他免疫抑制劑，該劑量由臨床醫(yī)生或內(nèi)科大夫決定。
作為指導(dǎo)原則，眼鏡蛇毒毒素因子等補體抑制劑將按有效抑制補體活性的量給藥，這將由補體溶血(CH50)試驗來決定，但按2mg/Kg的劑量給藥未出現(xiàn)毒性。眼鏡蛇毒毒素因子的最小劑量有種的依賴性并易于由CH50試驗來確定。對于眼鏡蛇毒毒素因子來說，業(yè)已發(fā)現(xiàn)按每天0.01-0.1mg(或0.2mg)/Kg的劑量給藥是有效的。其他補體抑制劑有效但無毒的劑量對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員也很容易確定。例如，用CH50試驗來確定。
肌肉給藥后，眼鏡蛇毒毒素大約需要6小時其最初活性才產(chǎn)生效力，一旦觀察到了最初活性，它可持續(xù)1天以上，例如兩天。所以對于眼鏡蛇毒毒素而言，不必要每天給藥。事實上，對于眼鏡蛇毒毒素因子來說優(yōu)選的是采用隔天給藥，在這種情況下，上述給出的每天的優(yōu)選劑量將加倍。實際中，業(yè)已發(fā)現(xiàn)特別適宜的優(yōu)選劑量方案是每隔一天按0.4mg/Kg進行肌肉給藥。
環(huán)孢菌素A或其他免疫抑制劑給藥一般是連續(xù)的。眼鏡蛇毒毒素因子或其他補體抑制劑給藥一般是不連續(xù)的，但可以延長;即使在實踐中這可能不是關(guān)鍵的，對于短期治療來說，可能都需要對協(xié)調(diào)異種移植排斥反應(yīng)進行治療或消除。
本發(fā)明第二至第五個方面的優(yōu)選特點和第一方面予以必要修改后的特點相同。
本發(fā)明將參照下面的制備例和實施例予以說明。實施例涉及有附圖，其中

圖1為倉鼠心臟異種移植于大鼠中的存活圖，反映移植后的時間與存活百分率的關(guān)系。
圖2是對應(yīng)于圖1的，為倉鼠心臟異種移植于經(jīng)環(huán)磷酰胺治療的大鼠中的存活圖。
制備該制備例給出了由粗眼鏡蛇毒毒素制備眼鏡蛇毒毒素因子的方法。
將1克Naja Naja Kaouthia毒素(Sigma，Product No.V-9125，Lots Nos.116F-0398 and 58F-0565)溶解于pH為7.5的60ml脫氣磷酸鈉緩沖溶液(0.01M)中，并將其泵入DEAE纖維素柱(90cm×26mm內(nèi)徑)(DE52，Whatman)，再用同樣的緩沖溶液進行平衡。用上述緩沖液以每小時43ml的速度對所說柱進行洗脫直至流出物的A280吸光度回復(fù)至零。以每小時40ml的速度將初始緩沖液和極限緩沖液(0.01M磷酸鈉，pH7.5，含0.5M氯化鈉)按3升∶3升的線性梯度濃度泵入。收集7ml餾分。對此餾分進行抗補體試驗，把陽性餾分收集起來，用CX-10超過濾器進行濃縮。
把收集的眼鏡蛇毒毒素因子全部泵入90cm×26mm內(nèi)徑的Sephadex G200柱(精細品)(Pharmacia GB Limited，London)。用PBS(無疊氮化合物)將其平衡，并用PBS以每小時36ml的速度進行洗脫，收集6ml餾分并作抗補體活性試驗。收集眼鏡蛇毒毒素因子部分(即活性部分)，尤其是收集在峰值的下降支時的毒素因子，用CX-10超濾器濃縮，將其分成數(shù)等份試樣，在-20℃凍存?zhèn)溆谩?br> 上文涉及到的眼鏡毒毒素因子的抗補體活性可用下述方法測定。于37℃把20ul試樣與20ul新鮮人血清溫育20分鐘。在試驗板的小井中加入由下述試劑制得的試樣5ul5.0ml 2%的瓊脂水液;
4.5ml含有20mM EDTA的雙強度PBS;
0.5ml 10%的經(jīng)洗滌的豚鼠紅細胞;和0.5ml正常人的新鮮血清。
把所說的試樣板在+4℃下培育過夜。培育后被溶解的透明區(qū)表示抗補體活性陽性。
實施例1(比較例)在本實施例中所用的大鼠是從Banting和Kindom得到的DA鼠，倉鼠是Syrian倉鼠，也來自Banting和Kindom。按Heron的方法(Acta.Pathol.Microbiol.Scand.79 366-372(1971))，把倉鼠心臟移植到大鼠的頸部，用Heron的套管技術(shù)連接倉鼠的主動脈與大鼠的頸動脈。用類似的方法把倉鼠的肺動脈與大鼠的頸靜脈連接起來。結(jié)扎倉鼠其他的全部心臟血管。在去除血管夾的幾分鐘時間內(nèi)，移植的心臟開始跳動，然后閉合移植心臟處的頸部皮膚，采用外觸診的方法每天對移植的心臟進行監(jiān)測。
圖1中示出了心臟移植存活的數(shù)據(jù)并用線1表示，從中可以看到移植物的平均存活率為3天。
實施例2(比較例)重復(fù)實施例1的步驟，但每隔1天施用20mg/Kg的環(huán)孢菌素A。環(huán)孢菌素A可按20mg/ml的橄欖油制劑給藥，并在移植時采取肌肉注射所給出的第一次劑量。其后每隔1天進行肌肉注射。移植物存活數(shù)據(jù)同樣示于圖1中，用線2表示本實施例的實驗結(jié)果。其平均移植存活率為3天。
實施例3(比較例)重復(fù)實施例1的步驟，但每隔天按0.4mg/ml施用眼鏡蛇毒毒素。所用的眼鏡蛇毒毒素是以無疊氮化合物的PBS配制的溶液(0.5mg/ml)。首先在進行移植時進行肌肉注射，其后每隔1天進行肌肉注射。圖1中示出了移植排斥反應(yīng)的數(shù)據(jù)，線3給出的本實施例實驗結(jié)果表明移植物的平均存活率為6天。
實施例4重復(fù)實施例1的步驟，但對受者既使用環(huán)孢菌素A也使用眼鏡蛇毒毒素因子。每隔1天環(huán)孢菌素A的給藥量為20mg/Kg。這樣，環(huán)孢菌素A的給藥條件和實施例2相同。按實施例3所述的相同給藥條件施用眼鏡蛇毒毒素因子。兩者均在移植時行首次給藥。移植物存活數(shù)據(jù)同樣示于圖1中。在此實施例中未觀察到移植排斥反應(yīng)的現(xiàn)象，這可從圖1的線4所示看出。這種情況下移植物平均存活率超過50天。
實施例5重復(fù)實施例4的步驟，但對眼鏡蛇毒毒素因子是在移植后的第28天以后采用間斷給藥。移植物平均存活超過100天。在第103天和105天時損失了兩個實驗動物，移植物的組織學(xué)檢查表明心臟組織結(jié)構(gòu)正常。剩下的一只帶有跳動的倉鼠心臟的大鼠至今已存活了5個多月。
實施例6(比較例)按實施例1的方案，給20只大鼠移植了倉鼠的心臟。如實施例2所述的那樣，將它們用環(huán)孢菌素A治療。此外，在移植前一天和移植后兩天給它們腹腔內(nèi)使用ENDOXAN環(huán)磷酰胺(20mg/Kg)(ENDOXAN是環(huán)磷酰胺的商標(biāo)名，是抗體產(chǎn)生的抑制劑)。圖2中線5示出了倉鼠心臟被排斥的情況。所觀察到的遲發(fā)排斥反應(yīng)看似由于不適當(dāng)?shù)拿庖咭种品桨杆碌倪t發(fā)性異種移植排斥反應(yīng)類型。觀察到的遲發(fā)性排斥反應(yīng)是由于缺乏環(huán)磷酰胺治療的結(jié)果。
實施例7按實施例6的方法對5只大鼠進行處理，但從第7天開始，按實施例4的方法對其使用眼鏡蛇毒毒素因子。投用眼鏡蛇毒毒素因子進行的治療持續(xù)14天。正如圖2中的線6所示，全部實驗動物均消除了排斥反應(yīng)。
權(quán)利要求
1.一種包括補體抑制劑和有類似環(huán)孢菌素A活性的免疫抑制劑的藥用制劑。
2.權(quán)利要求1的藥用制劑，其中所說的補體抑制劑既抑制補體激活的經(jīng)典途徑，也抑制旁路激活途徑。
3.權(quán)利要求1或2的藥用制劑，其中所說的補體抑制劑包括MCP、DAF或C3抗體。
4.權(quán)利要求1的藥用制劑，其中所說的補體抑制劑包括與Bb因子形成穩(wěn)定復(fù)合物的分子，其中所說復(fù)合物能阻止正常的破壞機理。
5.權(quán)利要求1或2的藥用制劑，其中所說的補體抑制劑包括眼鏡蛇毒毒素因子。
6.權(quán)利要求1-5中的任一藥用制劑，其中所說的有類似環(huán)孢菌素A活性的免疫抑制劑是環(huán)孢菌素或Eicosanoid。
7.權(quán)利要求6的藥用制劑，其中所說的免疫抑制劑是環(huán)孢菌素A。
8.權(quán)利要求6的藥用制劑，其中所說的免疫抑制劑是FK506。
9.一種包括補體抑制劑和有類似環(huán)孢菌素A活性的免疫抑制劑的藥品，所說的藥品用作同時，分別或依次用于促進同種異體移植或協(xié)調(diào)性異種移植存活或消除排斥反應(yīng)的制劑。
10.一種包括補體抑制劑藥用制劑和有類似環(huán)孢菌素A活性免疫抑制劑藥用制劑的藥盒。
11.一種將補體抑制劑和有類似環(huán)孢菌素A活性的免疫抑制劑用于制備促進同種異體移植或協(xié)調(diào)性異種移植存活或消除排斥反應(yīng)的制劑的應(yīng)用。
12.一種促進宿主上同種異體移植或協(xié)調(diào)性異種移植存活或消除移植排斥反應(yīng)的方法，所說方法包括將補體抑制劑和有類似環(huán)孢菌素A活性的免疫抑制劑用于移植受體或欲移植受體。
13.一種將補體抑制劑用于制備能促進經(jīng)用有類似環(huán)孢菌素A活性的免疫抑制劑治療的移植受體的同種異體移植或協(xié)調(diào)性異種移植的存活或消除排斥反應(yīng)的試劑的應(yīng)用。
14.一種促進宿主上同種異體移植或協(xié)調(diào)異種移植存活或消除排斥反應(yīng)的方法，所說方法包括將補體抑制劑用于正在接受有類似環(huán)孢菌素A活性的免疫抑制劑治療的移植受體或欲移植的受體。
全文摘要
環(huán)孢菌素A或其它具有類似環(huán)孢菌素A活性的化合物和眼鏡蛇毒毒素或其它補體抑制劑彼此聯(lián)合用于促進同種異體移植或協(xié)調(diào)性異種移植存活或消除移植排斥反應(yīng)。
文檔編號A61K39/395GK1056240SQ91102859
公開日1991年11月20日 申請日期1991年4月9日 優(yōu)先權(quán)日1990年4月9日
發(fā)明者大衛(wèi)·詹姆斯·格雷姆·懷特, 約翰遜·拜爾·馮·登·博加德 申請人:艾姆特蘭有限公司