專利名稱：藥物組合物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于哺乳動物的通過粘膜給藥的含有生物活性物質(zhì)的藥物組合物的制備方法。
當(dāng)需要獲得快速強(qiáng)烈的系統(tǒng)作用(如在3-5分鐘內(nèi))時(shí)，以及當(dāng)活性物質(zhì)不吸收或在胃腸道失活或在首次肝代謝中失活時(shí)，注射服用生物活性物質(zhì)(靜脈內(nèi)，肌內(nèi)和皮下)通常被認(rèn)為是最便利的給藥方式。但是，注射給藥產(chǎn)生一系列缺點(diǎn)，它需要使用無菌注射器并可能產(chǎn)生疼痛和刺激，并有感染的危險(xiǎn)性，在重復(fù)注射的情況下更是如此。此外，對未經(jīng)訓(xùn)練的人不能實(shí)施注射給藥。
目前，鼻內(nèi)給藥日益受到關(guān)注，試圖避免由于直接進(jìn)入與腸胃外給藥有關(guān)的機(jī)體而帶來的不便。此外，若需要快速的初始效果，上述給藥途徑也可作為腸胃外注射的一種選擇手段，并可由未經(jīng)訓(xùn)練的人實(shí)施。
為了替代注射給藥方式，鼻內(nèi)給藥應(yīng)提供類似的劑量對血漿濃度的關(guān)系，并且不應(yīng)對患者產(chǎn)生任何巨痛或刺激，也不應(yīng)對鼻粘膜產(chǎn)生不可挽回的損害或刺激。但是，在治療威脅生命的急性病征時(shí)，允許對粘膜有相對高的局部刺激。
在鼻內(nèi)給藥中，生物活性物質(zhì)必須以這種方式施敷在鼻粘膜上，即活性物質(zhì)能滲透過粘膜或通過粘膜吸收。為了能滲透粘液，載體必須與粘液生物相容，并因此應(yīng)有一定的親水性。但是，載體也應(yīng)具有親脂性，以溶解生理活性量的生物活性物質(zhì)。
鼻粘膜下的廣闊的毛細(xì)血管網(wǎng)胳尤其適宜提供對藥物的快速有效的系統(tǒng)吸收作用。此外，鼻上皮膜實(shí)際上由單層的上皮細(xì)胞(peseudostratified epithelium)組成，因此比其他的具有鱗狀上皮層的粘膜表面，如口、陰道等更適宜給藥。但是，也可以通過使用本發(fā)明給藥系統(tǒng)，經(jīng)上述表面服用生物活性物質(zhì)。
若生物活性物質(zhì)不能以水溶形式存在，則鼻內(nèi)吸收的效率很低(proctor，1985)。這就對生物活性物質(zhì)的使用施加了嚴(yán)重的限制，即生物活性物質(zhì)應(yīng)是水溶性的并在水溶液中穩(wěn)定。
大量的生物活性物質(zhì)，包括藥物(如苯并二氮
類)、維生素和菌苗，的水溶解度有限，在鼻內(nèi)給藥應(yīng)用的相對小的體積內(nèi)溶解臨床有效量的活性物質(zhì)常常是不可能的。
對于液態(tài)組合物而言，在小于約300μl的體積內(nèi)溶解有效量的生物活性物質(zhì)是重要的。較大的體積量對患者來說是不能接受的，并明顯從鼻孔前流出或向后流入咽部。結(jié)果是，部分活性物質(zhì)從吸收部位流失，而且在實(shí)際應(yīng)用中，不可能再現(xiàn)使用正確的劑量。對成人而言，體積宜為約1μl-約1000μl，以約50μl-150μl為佳。
鼻腔內(nèi)的粘膜上皮被許多毛發(fā)狀纖毛覆蓋，這是哺乳動物抗灰塵、變應(yīng)體和微生物吸入的重要的防御機(jī)體。由于除去外來顆粒的和過量粘液進(jìn)咽部的粘液清率，施敷在鼻腔內(nèi)的未吸收物質(zhì)的正常半時(shí)間(half-time)一般為15分鐘。因此，最好快速發(fā)生吸收作用，宜于在1-20分鐘內(nèi)。
已經(jīng)研制出各種載體體系，用于生物活性物質(zhì)在鼻內(nèi)輸送。至今文獻(xiàn)中教導(dǎo)，通過向配方中加入特定的載體體系或加入某種吸收促進(jìn)劑，使從鼻粘膜中吸收生物活性物質(zhì)。
Lau和Slattery(1989)研究了在治療癲癇持續(xù)狀態(tài)時(shí)鼻內(nèi)給藥后地西泮和勞拉西泮的吸收特性。為了溶解這些藥物，從幾種所研究的溶劑包括聚乙二醇400中，選擇一種非離子型表面活性劑聚乙氧基化蓖麻油作最低刺激劑。在兩個(gè)被測的成年人中，60小時(shí)后地西泮的吸收分別是84%和72%。但是，直到鼻內(nèi)藥1.4小時(shí)后才出現(xiàn)峰濃度，并且只是靜脈內(nèi)給藥的27%，這表明在試驗(yàn)物質(zhì)進(jìn)入咽部并吞咽下去后，已可能發(fā)生了大部分的吸收作用。用勞拉西泮所得結(jié)果類似，只是出現(xiàn)的峰濃度的時(shí)間更長(2.3小時(shí))。作者由此得出結(jié)論，在緊急治療癲癇發(fā)作時(shí)，鼻內(nèi)給藥途徑的作用有限。
Wilton等(1988)給45名兒童服用咪達(dá)唑侖，試圖達(dá)到前驅(qū)麻醉顛靜作用。服用量非常不切實(shí)際，超過了有效給藥的最大值，引起咳嗽和打噴嚏，損失部分劑量。該論文沒有敘述所用的水溶液載體系統(tǒng)。
國際專利申請WO 86/04233公開了一種藥物組合物，其中的藥物(如地西泮)溶解于推進(jìn)劑與助溶劑如甘油磷脂的混合物中。該組合物需要一種加壓系統(tǒng)和至少一種鹵化烴氣霧劑推進(jìn)劑。
Morimoto等(1987)研究了在小鼠鼻內(nèi)應(yīng)用的硝苯啶凝膠制劑，含有凝膠劑Carbopol(聚丙烯酸)和基、炔丙基、苯基炔丙基、苯基、芐基、α-甲基-4-氟芐基、2，3，4，5，6-五氟芐基、4-氟芐基、4-氟苯基、2，4-二氟芐基、3-噻吩基甲基、5-甲基噻吩-2-基甲基、5-氯噻吩-2-基甲基和2-苯并[b]噻吩基甲基。</claim><claim>31.按照權(quán)利要求27的方法，其中所述烷化劑具有式R99-Q，其中Q為離去基團(tuán)，而R99選自1，1，1-三氟乙基、苯基、芐基、α-甲基-4-氟芐基、4-氟芐基、4-氟苯基和2，4-二氟芐基。</claim><claim>32.按照權(quán)利要求27的方法，其中所述烷化劑具有式R99-Q，其中Q為離去基團(tuán)，而R99選自1，1，1-三氟乙基、芐基和4-氟苯基。</claim><claim>33.區(qū)域選擇性地制備4，5-取代的噠酮或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或前體藥物的方法，包括以下步驟a)使具有下式的化合物
其中R為烷基或芳基，而X為離去基團(tuán)，與親核試劑反應(yīng)，以取代X基團(tuán)；b)將-OR98轉(zhuǎn)化為離去基團(tuán)；和c)使所述化合物與第二種親核試劑反應(yīng)，以提供4，5-取代的噠酮。</claim><claim>34.按照權(quán)利要求33的方法，其中所述芐基用Lewis酸去除。</claim><claim>35.區(qū)域選擇性地制備4，5-取代的噠酮或其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或其前體藥物的方法，包括使具有下式的化合物
WO 87/05210公開了舌下噴霧藥物制劑，選擇包括PEG，并需要乙醇，脂肪酸的甘油二酯和/或甘油三酯以及藥用推進(jìn)氣。
本發(fā)明的主要目的是提供一種通過哺乳動物粘膜施用生物活性物質(zhì)的藥物組合物，該組合物產(chǎn)生藥物活性物質(zhì)的高血漿濃度的速度幾乎與靜脈內(nèi)給藥一樣快，而對粘膜不產(chǎn)生不可接受的損害。本發(fā)明組合物完全可達(dá)到上述目的。
本發(fā)明的藥物組合物的特征是包括如下式Ⅰ所示的一種或多種n-糖原糠醛(n-glgcofurols)
(式中n為1-8的一個(gè)整數(shù))和如式Ⅱ所示的n-甘醇
式中p是1-14的一個(gè)整數(shù)。
當(dāng)不存在糖原糠醛并且生物活性物質(zhì)是苯并二氮
時(shí)，則在本發(fā)明中，n-甘醇中p為1-8。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選p為1-8的n-甘醇，并且更優(yōu)選在制劑中含有四甘醇。
本發(fā)明的藥物組合物最好包括n-糖原糠醛，其中n是1或2。
本發(fā)明的藥物組合物最好包括一種或多種n-糖原糠醛，并且必要時(shí)包括一種或多種n-甘醇。
本發(fā)明藥物組合物中的生物活性物質(zhì)可以選自腎上腺激素，皮質(zhì)類膽固醇和衍生物，例如ACTH和其同類物，teracosactrin，alsatide，可的松，醋酸可的松，氫化可的松，氫化可的松醇，醋酸氫化可的松，半琥珀酸氫化可的松，潑尼龍，三丁酸潑尼龍，9-α-氟潑尼龍，曲安縮松，磷酸地塞米松，氟尼縮松，budesonide，toxicorol pivalate等;氨基酸;減食欲劑如芐非他明HCl，對氯苯丁胺HCl等;抗生素如四環(huán)素HCl，缺桿菌素，先鋒霉素，氨基，鏈霉素，慶大霉素，北里霉素，青霉素和其衍生物，紅霉素等;抗變應(yīng)劑;抗體如抗感染疾病的單克隆或多克隆抗體;抗膽鹼能劑如阿托品堿等;抗抑制劑如阿密替林HCl，丙咪嗪HCl等;止吐劑例如安定劑如甲磺哌丙嗪，抗組胺藥如吐來抗或具有由調(diào)節(jié)腸移動效果的止吐劑如domperidon;鎮(zhèn)癲癇劑和鎮(zhèn)痙劑如氯硝西泮，地西泮，硝基安定，勞拉西泮等;抗組胺劑和組胺劑如苯海拉明HCl，撲爾敏馬來酸鹽，克立馬丁，組胺，prophenpyridamine maleate，chlorprophenpyritamind maleate，咳樂鈉，氯苯甲嗪等;抗高血壓劑如氯壓定HCl等;抗感染劑(酶)如胰凝乳蛋白酶，菠蘿蛋白酶，絲拉肽酶等，消炎劑(非膽固醇)如撲熱息痛，阿司匹林，氨基比林，保泰松，甲滅酸，布洛勞，雙氯滅痛，消炎痛，秋水仙堿，丙磺舒等;消炎(膽固醇類)如氫化可的松，潑尼松，氟替阿嗪，predonisolone，去炎松，丙酮縮去炎松，地塞米松，倍他米松，倍氯米松，雙丙酸倍氯米松等;抗腫瘤劑如天生霉素C等;抗菌劑如洗必太HCl，己基間苯二酚，地奎氯銨，利凡諾等;抗腫瘤劑;鎮(zhèn)咳劑如色甘酸鈉，磷酸可待因，異丙去甲腎上腺素HCl等;抗病毒和抗癌劑如干擾素(如用于治療普通感冒的α-2-干擾素)，對胍基苯甲酸甲酯，enviroxime等;β-腎上腺素能阻滯劑如鹽酸心得安等;血因子如第七因子，第八因子等;骨代謝控制劑如維生素D3，活性維生素D3等;支氣管擴(kuò)張藥如鹽酸克侖特羅，鎮(zhèn)咳祛痰藥等;強(qiáng)心藥如洋地黃，地高辛等;心血管調(diào)節(jié)激素、藥和其衍生物如舒管激肽，尿鈉排泄肽，尿鈉排泄肽和衍生物，肼苯噠嗪，血管緊張素Ⅱ，拮抗藥，硝酸甘油，硝苯吡啶，消心痛，萘心安，氯非銨甲苯磺酸鹽等;化療劑如磺胺噻唑，呋喃西林等;CNS-刺激劑如利多卡因，古柯堿等;皮質(zhì)類膽固醇如lacicortone，氫化可的松，膚輕松，丙酮縮去炎舒松等;診斷藥物如酚磺酞，染料T-1824，活性染料，鐵氰化鉀，分泌素，五胺促胃酸菌素，變藍(lán)素菌等;多巴胺能劑如溴麥角環(huán)肽甲磺酸鹽等;酶如溶菌酶氯化物，菌聚糖酶等;胃腸道激素及衍生物如分泌素，物質(zhì)P等，下丘腦激素及衍生物如LHPH及同類物(如納法來林，布塞來林，佐利代斯等)，腦啡肽(DADLE，美克法胺，亮氨酸腦啡肽)，TRH(促甲狀腺素釋放激素)等;Hypothensives;局部麻碎劑如苯佐卡因等;治療偏頭痛藥如二氫麥角胺，麥角新堿，麥角胺，pizotizin等;麻碎劑，拮抗藥和止痛劑如叔丁啡，納洛酮等;胰腺激素和衍生物和胰島素(以六聚體/二聚體/單體形式);高血糖素等;類副交感神經(jīng)功能劑如尼古丁，乙酰甲膽堿等;抗副交感劑如東茛蓉堿，阿托品，溴化異丙基阿托品等;parcinson病藥物如阿樸嗎啡等;垂體腺激素和衍生物如生長激素(如人)，加壓素和同類物(DPAVP，賴氨酸加壓素)，催產(chǎn)素和同類物等;前列腺素如PGA和衍生物，PGE1和衍生物，PGE2和衍生物，PGF1和衍生物，地諾前列素，氨丁三醇等;蛋白酶抑制劑如抑肽酶檸檬酸鹽或α1-抗胰蛋白酶等;鎮(zhèn)靜劑如阿普唑侖，溴西泮，溴替唑侖，卡馬西泮，氯氮
，氯巴詹，氯西泮酸，氯硝西泮，氯噻西泮，氯噁唑侖，地洛西泮，地西泮，艾司他唑侖，勞拉西泮酸乙酯，氯硝西泮，氟硝西泮，氟西泮，氟他唑侖，哈拉西泮，鹵沙唑侖，凱他唑侖，勞拉唑侖，勞拉西泮，勞美他西泮，美達(dá)西泮，咪達(dá)唑侖，硝甲西泮，硝基安定，諾地阿西泮，去甲羥安定，噁唑侖，匹那西泮，普拉西泮，替馬西泮，四氫西泮，托非索泮，三唑侖等;性激素如炔雌醇，左炔諾孕酮，F(xiàn)SH，LH，LTH，雌二醇-17-β，黃體酮，norethindronetestosteron，等;擬交感劑如麻黃堿，腎上腺素，苯福林，塞洛唑啉，曲馬唑啉，多巴胺，多巴酚丁胺等;甲狀腺激素和衍生物如降鈣素及其合成改性物等;鎮(zhèn)定藥如阿普拉西泮，溴西泮，溴替唑侖，卡馬西泮，甲氨二氮
，氯巴詹，氯西泮酸，氯硝西泮，氯噻西泮，氯惡唑侖，地勞拉西泮，地西泮，艾司他西泮，洛氟拉西泮酸乙酯，氟塞西泮，氟硝安定，氟西泮，氟他唑侖，哈拉西泮，鹵沙唑侖，卡他唑侖，勞拉唑侖，勞拉西泮，洛美他西泮，美達(dá)西泮，咪噠唑侖，尼美達(dá)西泮，硝基安定，諾地阿西泮，去甲羥安定，惡唑侖，匹那西泮，普拉西泮，替馬西泮，四氫西泮，tofisopam，三唑侖等;菌苗如AIDS菌苗，感染病毒，副流感病毒，麻疹病毒，灰質(zhì)病毒，鼻病毒型13，呼吸合胞體病毒，等;血管收縮劑如phenylephrine HCl，四氫維洛林HCl，苯甲唑啉硝酸鹽，oxymetazoline HCL，萘胺唑啉HCL等;血管擴(kuò)張劑如硝酸甘油，罌粟果HCL，物質(zhì)P;VIP(血管腸肽)等;維生素如維生素B12，葉酸或煙酰胺;
本發(fā)明組合物包括以下優(yōu)選的生物活性物質(zhì)腎上腺激素，皮質(zhì)膽固醇及其衍生物，氨基酸，減食欲劑，抗菌素，抗變應(yīng)性劑，抗膽堿能劑，抗抑制劑，解毒劑，抗癲癇劑，抗組胺劑及組胺劑，抗增壓劑，消炎劑(酶類，非膽固醇類以膽固醇類)，抗新塑料劑，防腐劑，抗腫瘤劑，鎮(zhèn)咳祛痰劑，抗病毒及抗癌劑，β-類腎上腺素能阻滯劑，血因子，骨代謝控制劑，支氣管擴(kuò)張藥，強(qiáng)心藥，心肌調(diào)節(jié)激素藥和衍生物，化療劑，CNS-刺激劑，皮質(zhì)膽固醇，診斷藥，多巴胺能劑，酶，溶解纖維蛋白劑，GABA拮抗藥，胃腸道激素和衍生物，谷氨酸拮抗藥，大豆拮抗藥，下丘腦激素和衍生物，Hypothensive，局部麻碎劑，偏頭痛治療物質(zhì)，麻碎劑，拮抗劑和止痛劑，胰腺激素和衍生物，類副交感神經(jīng)功能劑，抗副交感神經(jīng)劑，垂體腺激素和衍生物，前列腺，鎮(zhèn)靜劑，性激素，解痙劑，擬交感劑，甲狀腺激素和衍生物，鎮(zhèn)靜藥，菌苗，血管收縮劑，血管擴(kuò)張劑和維生素。
用于本發(fā)明的生物活性物質(zhì)選自可在胃腸道消化的生物活性多肽。
用于本發(fā)明的生物活性物質(zhì)最好選自凝固因子如因子Ⅶ，因子Ⅷ，因子1×和衍生物及同類物;骨代謝控制劑如維生素D3，活性維生素D3，降血鈣素及其衍生物和同類物;選自下丘腦的激素如LHRH或同類物，例如納法來啉，布塞來林，佐利代斯，腦啡肽如DADLE，美克法胺或亮氨酸腦啡肽和TRH以及衍生物和同類物;激素，選自胰腺如胰島素如高血糖素以及衍生物和同類物;激素選自垂體腺，如生長激素，后葉加壓素或催產(chǎn)素及其衍生物和同類物，例如DDAVP，或賴氨酸加壓素;性激素如乙炔雌二醇，levonorgestrol，F(xiàn)SH，LH，LTH雌二醇-17β，孕酮，炔諾酮或睪酮及其衍生物和同類物;鎮(zhèn)定劑如阿普唑侖，溴西泮，溴替唑侖，卡馬西泮，氯氮
，氯巴詹，氯西泮酸，氯硝西泮，氯噻西泮，氯惡唑侖，地洛西泮，地西泮，艾司他唑侖，勞拉西泮酸乙酯，氟地西泮，氟硝西泮，氟西泮，氟他唑侖，哈拉西泮，鹵沙唑侖，凱他唑侖，勞拉唑侖，勞拉西泮，洛美他西泮，米達(dá)西泮，米達(dá)唑侖，尼米達(dá)西泮，硝基西泮，諾地西泮，去甲羥安定，惡唑侖，匹那西泮，普拉西泮，替馬西泮，四氫西泮，托非索泮或三唑侖及其鹽衍生物和同類物。
本發(fā)明優(yōu)選的生物活性物質(zhì)選自凝固因子如因子Ⅶ，因子Ⅷ，因子1×及其衍生物和同類物;骨代謝控制劑如降血鈣素及其衍生物和同類物;激素，選自下丘腦激素，如LHRH及同類物，例如納法來啉，布塞來林，佐利代斯，腦啡呔如DADLE，美克法胺或亮氨酸腦啡呔;激素;選自胰腺如胰島素或高血糖素及其衍生物和同類物;激素，選自垂體腺如生長激素，后葉加壓素或催產(chǎn)素及其衍生物和同類物;激素，如DDAVP或賴氨酸加壓素;性激素如FSH，LH，或LTH及其衍生物或同類物。
本發(fā)明尤其重要的活性物質(zhì)是在胃腸道內(nèi)可消化的生物活性多肽如胰島素，高血糖素，生長激素或類胰島素生長因子及其衍生物或同類物。
本發(fā)明尤其優(yōu)選的活性物質(zhì)是胰腺多肽激素如胰島素和高血糖素或其衍生物或同類物。
本發(fā)明另一類優(yōu)選的活性物質(zhì)是選自鎮(zhèn)癇劑，鎮(zhèn)痙劑和鎮(zhèn)定劑如選自苯并二氮雜如氯硝西泮，地西泮，氟硝西泮，三唑侖，勞拉西泮，硝基西泮或其混合物。
若活性物質(zhì)為苯并二氮
類，則其占組合物總量的0.0001%-50%，最好占0.001%-20%。
本發(fā)明的藥物組合物還可以包括硝酸和/或硝酸鹽，濃度在0.001-5%。上述組分可作為活性物質(zhì)如氯硝西泮的穩(wěn)定劑。
本發(fā)明的藥物組合物還可以包括一種或多種選自以下的化合物表面活性劑，吸收促進(jìn)劑，吸水聚合物，微球體，油，乳化劑，脂質(zhì)體，抑制酶降解物質(zhì)，醇，有機(jī)溶劑，水，疏水劑，PH-控制劑，保存劑和滲透壓控制劑，環(huán)糊精和推進(jìn)劑，或上述制劑的混合物。
吸水聚合物最好是平均分子量在200-7500范圍的聚乙二醇或者是丙二醇，或其混合物。
本發(fā)明的組合物最好包括多于50%(重量)的平均分子量在200-1000范圍的聚乙二醇和/或丙二醇或其混合物。
本發(fā)明還涉及用生物活性物質(zhì)治療哺乳動物的方法，其中將生物活性物質(zhì)與選自如式Ⅰ所示的一種或多種n-糖原糖醛以及式Ⅱ所式n-甘醇施敷到哺乳動物的粘膜上
式中n為1-8;
式中p為1-14.
本發(fā)明還涉及藥物組合物用于粘膜的用途，該藥物組合物包括一種生物活性物質(zhì)，一種或多種如式Ⅰ所示的n-糖原糠醛以及如式Ⅱ所示的n-甘醇。
式中n為1-8;
式中p為1-14本發(fā)明的藥物制劑給藥粘膜可以是待給生物活性物質(zhì)的哺乳動物的任何粘膜，如在鼻、陰道、眼、口、生殖道、肺、胃腸道或直腸粘膜，最好是鼻，口或陰道粘膜。
本發(fā)明的藥物組合物可以以下形式給藥舌下錠劑，以溶液，懸浮液或粉劑必要時(shí)與各種吸收促進(jìn)劑聯(lián)合形式的頰或鼻噴霧劑，最好是以生物粘性的略微粘性溶液或者必要時(shí)以栓劑或Vagitory的形式。
本發(fā)明優(yōu)選的用藥部位是鼻粘膜。
本發(fā)明還涉及制備藥物組合物的方法，該藥物組合物用來將生物活性物質(zhì)施敷到哺乳動物的粘膜上，包括一種或多種選自如式Ⅰ所示的n-糖原糠醛和如式Ⅱ所示的n-甘醇
式中n為1-8;
式中p為1-14，其中將生物活性物質(zhì)溶解在已制備的載體中，所述的載體包括部分或全部其他藥物制劑組分。該方法在利用超聲和/或在高溫下進(jìn)行。最好在30℃-100℃的一個(gè)溫度下進(jìn)行溶解，要考慮到活性物質(zhì)對溫度的敏感性。對非常敏感的活性物質(zhì)如人類生長激素，只能進(jìn)行輕微攪拌或搖蕩。
本發(fā)明還提供了一種鼻內(nèi)應(yīng)用的緩釋系統(tǒng)，包括與粘液相容的基本不含水載體，該載體能夠在小體積內(nèi)溶解所需量的生物活性物質(zhì)。
本發(fā)明還涉及選自如式Ⅰ所示的n-糖原糠醛和如式Ⅱ所示的n-甘醇在制備藥物組合物中的應(yīng)用，所述藥物組合物，用來將生物活性物質(zhì)通過粘膜施敷到哺乳動物上。
式中n為1-8;
式中p為1-14上述的本發(fā)明用途尤其適于用來制備以以下途徑系統(tǒng)給藥的藥物組合物通過鼻、口或陰道粘膜，特別是鼻粘膜。
根據(jù)本發(fā)明，一方面式In-糖原糠醛被認(rèn)為是藥用載體，尤其是藥用鼻用載體;另一方面式In-糖原糠醛認(rèn)為是一種促進(jìn)劑，促進(jìn)生物活性物質(zhì)通過哺乳動物粘膜尤其是鼻粘膜吸收。
而且，本發(fā)明可使各種藥劑投藥變得方便起來，如骨代射控制劑，如維生素D3或降鈣素及其衍生物和類似物;下丘腦分泌的激素，如LHRH，如納法來林，布塞來林或佐利代斯及其衍生物和類似物;調(diào)節(jié)生長或致有絲分裂生長因子的激素，如生長激素，IGF-1，IGF-2，F(xiàn)GF，PDGF，TGF，EGF及其衍生物或類似物;蛋白酶抑制劑，如抑肽酶檸檬酸鹽或α1-抗胰蛋白酶及其衍生物和類似物以及cytochines，如IL-1和IL-2，旨在使其血量不足時(shí)達(dá)到正常化。
特別優(yōu)選用于本發(fā)明載體組合物的包括糖原糠醛75(GF)，指上述式Ⅰ中n主要為1和2的聚合物的市售溶劑(Chemical Abstract Registration No?！?9004 76-6〕)糖原糠醛75為一種無色液體，可與水，醇，如甲醇，乙醇，正丙醇，甘油和各種油以各種比例混合，沸點(diǎn)約155℃。據(jù)報(bào)道GF用于不經(jīng)稀釋而腸胃外投藥的組合物時(shí)會引起刺激作用，這正如Spiegel和Noseworthy(1963)所述，而用水稀釋時(shí)已報(bào)道為無毒和無刺激性作用(spiegelberg等，1965)。
本發(fā)明所用n-甘醇可為例如單甘醇(1EG)，二甘醇(2EG)，三甘醇(3EG)，四甘醇(4EG)，五甘醇(5EG)，六甘醇(6EG)，七甘醇(7EG)，八甘醇(8EG)，九甘醇(9EG)，十甘醇(10EG)，十一甘醇(11EG)，十二甘醇(12EG)，十三甘醇(13EG)和十四甘醇(14EG)。各種n-甘醇可單獨(dú)使用或兩種或多種混用，如聚乙二醇200(PEG 200)或聚乙二醇400(PEG 400)等市售品。
1EG至14EG為無色液體，可與水和醇以各種比例混合。PEG200為平均分子量約200的市售甘醇混合物。組成列于表1表1PEG200的組成一甘醇 0.1%二甘醇 3.4%三甘醇 21.2%四甘醇 31.2%五甘醇 24.4%六甘醇 14.0%七甘醇 5.4%八甘醇 0.3%100%市nEG′S和糖原糠醛質(zhì)量各異。特別優(yōu)選用高純度產(chǎn)品。如4EG，由Fluka Chemie AG提供(Buchs Switzerland，art.no86660，1990)，縮寫為4EGf。
本發(fā)明的傳送體系可得以優(yōu)化，如就生物結(jié)合性，可噴性或粘性而言。例如，GF僅以5%濃度應(yīng)用時(shí)可降低粘性，對例如4EGf的可噴性帶來驚人的積極效果。而且，加5%GF可將固化溫度從約-10℃降至≤-20℃。在配方需室外患者攜帶備用或運(yùn)輸時(shí)，這一點(diǎn)就顯得尤為重要。
本發(fā)明藥物組合物可用來治療動物，如家離或玩物，優(yōu)選用來治療人類。
應(yīng)用上述載體體系的特殊優(yōu)點(diǎn)在于，高度親脂物質(zhì)，如苯并二氮雜以及水溶性物質(zhì)，如肽和蛋白，如胰激素可僅以人類臨床應(yīng)用劑置溶于如25-300ml載體中。另一方面，臨床應(yīng)用地西泮和氯硝西泮又必須分別溶于約500ml和＞10ml中。
本發(fā)明載體體系可與各種共溶劑并用，如植物油，如Miglyol 840(Dynamit Nobel Chemie，Troisdorf，W-Germany)或必要時(shí)氫化或乙氧化的蓖麻油，這可驚人地提高設(shè)計(jì)受控釋放配方，如可避免峰值血漿濃度的地西泮配方的可能性。
本發(fā)明的組合物可包括一種或各種其它藥物賦形劑，如表面活性劑和吸收促進(jìn)劑，其親水親脂平衡值約6-26以及離子和非離子表面活性劑，包括聚氧化烯醇醚，膽汁鹽及其衍生物，梭鏈孢酸及其衍生物，油酸，卵磷脂，溶血卵磷脂或Tween20-85;吸水聚合物，如聚乙二醇200-7500，聚乙烯基吡咯烷酮，丙二醇，聚丙烯酸，明膠，纖維素及其衍生物;抑制酶降解物質(zhì)，如檸檬酸鹽或抑肽酶，醇，如乙醇，甘油或苯甲醇;有機(jī)溶劑，如乙酸乙酯或苯甲醇;疏水劑，如植物油，如豆油，花生油，椰子油，玉米油，橄欖油，葵花籽油，蓖麻油，Miglyol
810/812/840或其混合物;pH調(diào)節(jié)劑，如硝酸，磷酸或乙酸，檸檬酸鹽;防腐劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑，如甘油，氯化鈉，對氧苯甲酸甲酯或苯甲酸;粉劑組合物，如α-，β-和Γ-環(huán)糊精，纖維素及其衍生物;中心體，微脂粒和乳液組合物，如淀粉，清蛋白，明膠或卵磷脂或溶血卵磷脂;微膠囊配方;推進(jìn)劑，如丁烷;水。在本發(fā)明組合物中，醇和水的應(yīng)用不是強(qiáng)制性的。
現(xiàn)參考附圖詳述本發(fā)明。


圖1為本發(fā)明制劑靜脈內(nèi)和鼻內(nèi)投藥后氯硝西泮平均血漿濃度示意圖。
圖2為糖原糠醛在本發(fā)明制劑中的含量與平均反應(yīng)時(shí)間示意圖。
圖3為胰島素按本發(fā)明投藥后血糖量示意圖。
圖4為高血糖素按本發(fā)明投藥后血糖量示意圖。
圖5為包括各種甘醇成分的制劑投藥后血漿中氯硝西泮濃度示意圖。
圖6為包括糖原糠醛和各種共溶劑的制劑投藥后地西泮的平均血漿濃度示意圖。
圖7為糖原糠醛在本發(fā)明制劑中各種含量作用示意圖。
圖8為按本發(fā)明靜脈內(nèi)和鼻內(nèi)內(nèi)投藥后氟硝西泮的血漿濃度比較示意圖。
圖9為按本發(fā)明靜脈內(nèi)和鼻內(nèi)投藥后氯硝西泮的血漿濃度示意圖。
圖10為氯硝西泮在各種載體中的穩(wěn)定性。
圖11為按本發(fā)明靜脈內(nèi)內(nèi)鼻內(nèi)投藥后雌激素的血漿濃度比較示意圖。
圖12為按本發(fā)明靜脈內(nèi)和鼻內(nèi)雌激素投藥后雌酮的血漿濃度比較示意圖。
下述非限制性實(shí)例詳述本發(fā)明，但決不能理解為對本發(fā)明后續(xù)權(quán)利要求所述范圍的限制。
實(shí)例1本發(fā)明載體毒性和可接收性研究載體毒性評價(jià)時(shí)，應(yīng)當(dāng)考慮局部以及系統(tǒng)效果。GF和PET400在注射配方中用作賦形劑其中每劑量投藥量大于300ml，這超過了本發(fā)明制劑鼻內(nèi)投藥量。
鼻內(nèi)投藥后nEG和GF的局部毒性結(jié)果文獻(xiàn)中并沒記載。因此，進(jìn)行了兔鼻粘膜上30-100ml的局部毒性評價(jià)試驗(yàn)。在這些試驗(yàn)中，苯并二氮雜
還溶于本發(fā)明各種溶劑體系中，兔子鼻粘膜用藥30μl組合物，長達(dá)14天。進(jìn)行5次試驗(yàn)評價(jià)組合物用藥效果，包括按表2所示進(jìn)行的對比試驗(yàn)。
表2本發(fā)明苯并二氮雜
組合物局部毒性評價(jià)試驗(yàn)
縮寫地西泮3%;勞拉西泮 5;F＝氟硝西泮PEG＝聚乙二醇200;GF＝糖原糠醛75;
PEG+GF＝70%PEG+30%GF。
組合物投藥后檢查鼻腔組織，發(fā)現(xiàn)僅有輕微發(fā)炎變化。增加劑量時(shí)，沒有發(fā)現(xiàn)與劑量有關(guān)的反應(yīng)并且沒有發(fā)現(xiàn)100%PEG-200和70%PEG-200+30%GF之間有區(qū)別，因此可以得出結(jié)論認(rèn)為，本發(fā)明載體僅引起輕微可逆轉(zhuǎn)毒性效果。
9個(gè)健康自愿受試者鼻內(nèi)投藥后研究含四甘醇(4EGf)和必要時(shí)的5%糖原糠醛(GF)的兩種受試載體的耐受性并在雙盲三種方式交錯(cuò)設(shè)計(jì)后與市售載體產(chǎn)品Locilan CAstra-Syntex Scandinavia AB，Sodertaje，Sweden)比較。作為對比，則應(yīng)用鹽水(0.9%氯化鈉)。
鹽水和市售載體產(chǎn)品耐藥力非常好。含四甘醇的兩種載體則投藥后立即引起灼燒感覺或中等程度的針刺感覺。癥狀持續(xù)時(shí)間短，投藥后10分鐘即消失或僅有輕微癥狀。投藥后30分鐘鼻鏡觀察不到任何臨床癥狀。
受詢問時(shí)，所有受試者均述說必要時(shí)包括5%GF的含4EGf載體適宜于間或服用的基本生物活性物質(zhì)投藥并且在這些載體之中鼻內(nèi)投藥優(yōu)于靜脈內(nèi)投藥。
試驗(yàn)細(xì)節(jié)和結(jié)果如下。
人體對本發(fā)明載體的可接收性研究受試者試驗(yàn)時(shí)登記9位健康的自愿受試者。所有受試者均健康，無任何心，肝或腎疾病。
所有受試者均無任何肺或呼吸道疾病或在過去2星期內(nèi)沒患過感冒。所有受試者的體征(血壓和脈搏)均在正常范圍內(nèi)。研究前兩星期內(nèi)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)生物化學(xué)和血液學(xué)試驗(yàn)。除兩個(gè)以外的所有其它受試者臨床化學(xué)數(shù)據(jù)均在正常范圍內(nèi)。受試者4和5的氨基丙酸轉(zhuǎn)氨酶(SPGT)在上述正常值上限以下，但據(jù)認(rèn)為這在臨床上并不重要。
研究程序用3種試驗(yàn)載體和對比載體(鹽水)作雙盲試驗(yàn)而進(jìn)行研究，共分三個(gè)相同的周期，各周期間間隔24小時(shí)。
每周期中，試驗(yàn)載體投入左鼻孔之前5分鐘將對比載體投入右鼻孔。請受試者在問卷中記下試驗(yàn)載體投放后0-1分鐘期間以及10和30分鐘觀察到的任何疼痛或刺激。若注意到任何癥狀，受試者要記下周期并描述癥狀特征。
載體投放前和試驗(yàn)載體投放后30分鐘，兩鼻孔內(nèi)粘膜均用鼻鏡檢測儀檢查。
載體試驗(yàn)4種載體，一種為鹽水，用作負(fù)對比載體，其它三種載體為本發(fā)明兩種載體(載體A和B)和“正對比載體”，為耐受性非常好的市售載體產(chǎn)品Locilan
(Nielsen等，1989)。
裝置投藥時(shí)應(yīng)用pfeiffer泵裝置(Model 6917.5902/3790/0129)，啟動時(shí)傳送50送入μ1。
劑量Pfeiffer泵噴射裝置放入左(或右)鼻孔后投放載體，兩次啟動泵，總劑量100μl。
臨床檢查鼻內(nèi)組織臨床檢測未發(fā)現(xiàn)投放載體具有任何明顯的臨床效果。載體投放后30分鐘3位受試者注意到輕微的局部刺激，一位受試者的投放載體為鹽水，另兩位受試者的投放載體為試驗(yàn)載體B。
受試者報(bào)告的耐受性(表3-5)試驗(yàn)載體投放后0-1分鐘，10分鐘和30分鐘鼻內(nèi)刺激(癥狀)程度分別列于表3，4和5。
受試者得出結(jié)論認(rèn)為，必要時(shí)包括糖原糠醛的四甘醇載體耐受性比Locilan
中鹽水載體差。但是，含4EGf的載體引發(fā)的癥狀持續(xù)時(shí)間很短，若生物活性物質(zhì)對于病人的健康很關(guān)鍵，就可以認(rèn)為是可接受的。
表3受試者在問卷中報(bào)告的投藥后0-1分鐘耐受性出現(xiàn)癥狀及其程度的受試者數(shù)。
刺激程度 對照 載體(右鼻孔) A B C無 25 1 0 6輕微 2 5 3 3中等 0 3 6 0不可接受 0 0 0 0A＝4EGf載體B＝5%GF在4EGf中
C＝Locilan 載體對比＝(右鼻孔)鹽水表4受試者在問卷中報(bào)告的投藥后10分鐘耐藥力出現(xiàn)癥狀及其程度的受試者數(shù)。
刺激程度 對照 載體(右鼻孔) A B C無 27 5 5 7輕微/合格 0 4 4 2中等 0 0 0 0不合格 0 0 0 0A＝4EGf載體B＝5%GF在4EGf中C＝Locilan 載體對比＝(右鼻孔)鹽水。
表5受試者在問卷中報(bào)告的投藥后30分鐘耐受性出現(xiàn)癥狀及其程序的受試者數(shù)。
刺激程度 對照 載體(右鼻孔) A B C無 27 8 7 8輕微 0 1 2 1中等 0 0 0 0
不可接受 0 0 0 0A＝4EGf載體B＝5%GF在4EGf中C＝Locilan載體對比＝(右鼻孔)鹽水載體A4EGf載體Ⅰ純四甘醇p·a 25ml濃硝酸p·a 1滴Ⅱ純四甘醇p·a 25ml溶液Ⅰ(大約30滴) ad pH3.8采用粘性液pH電極(Radiometer GK 2711)將混合物Ⅰ用來調(diào)節(jié)Ⅱ的pH。將2-10ml(載體A)調(diào)入pfeiffer多級給藥器(Pfeiffer Zerstauber，6917.5902/3790.0129)中。
載體B5%GF在4EGf載體中Ⅰ純四甘醇 p·a 25ml濃硝酸 p·a 1滴Ⅱ純四甘醇 p·a 25ml溶液Ⅰ(大約30滴) ad pH 3.8Ⅲ溶液Ⅱ 23.75ml
純糖原糠醛75 1.25ml采用粘性液體電極(Radiometer GK 2711)將混合物Ⅰ用來調(diào)節(jié)Ⅱ的pH。然后制得混合物Ⅲ(載體B)。將2-10ml該載體調(diào)入Pfeiffer多級給藥器(pfeiffer zerstauber，6917.5902/3790。0129)中。
載體CLocilan
載體丙二醇，ph.Eur.Ⅲ 2g聚乙二醇400，ph.Nord。63Ⅱ 20gTween200，ph，Eur.Ⅲ 2.5g二氯甲苯，DLS 86 70mgEDTA二鈉， 10mgph.Eur.2nd Ed1983丁基化羥基甲苯， 10mgph.Nord.63Ⅱ，Add.
檸檬酸， 5mgph.Eur.Ⅲ，Suppl 77檸檬酸鈉2H2O，ph.Eur.Ⅲ 7.65mg山梨糖醇 DAK 63 2.86g凈化水， ad 100gph.Eur.2nd Ed.1983實(shí)例2
超聲法將10mg氯硝西泮溶于2ml載體B(實(shí)例1)中，得到5mg/ml的氯硝西泮濃度。50μl該制劑投入雄性新西蘭白兔的每一鼻腔中，投藥過程中和投藥后1分鐘仰臥。采用Eppendorph吸移管投藥。0，2，5，10，15，30和60分鐘有從耳邊靜脈中取血樣并經(jīng)HPLC測定氯硝西泮濃度。
圖1表明扳藥后血漿中平均氯硝西泮濃度。該圖還表明耳邊靜脈注射同劑量(0.5mg)Rivotril氯硝西泮后的血漿濃度，注射歷時(shí)1/2分鐘。圖中還表明，鼻中投藥后血漿濃度大致相同或約2分鐘時(shí)甚至高于靜脈注射。
實(shí)例3藥劑反應(yīng)，經(jīng)GF提高向新西蘭白兔每一只鼻孔投放50μl的2.5mg氯硝西泮/ml載體，同時(shí)使其呈坐態(tài)，然后試驗(yàn)投藥反應(yīng)。載體由0，10，20，30，70和100%糖原糠醛75(Roche，lot No.706127)加入四甘醇(Merck，Art.808619)中構(gòu)成。氯硝西泮超聲法溶解。
圖2示出了平均反應(yīng)時(shí)間(兔子躺臥，后腿伸向一邊)。各部分頂端的數(shù)字表明4位受試者中的反應(yīng)者量。10分鐘內(nèi)未反應(yīng)者記為平均值10分鐘。對于鼻內(nèi)投放氯硝西泮約10%GF在4EGm中具有最佳反應(yīng)，而約30%GF具有最小反應(yīng)。30%GF在4EGf中觀察到同一模式。
實(shí)例4
將0.33mg無鋅(單體)人胰島素在50μl含5%糖原糠醛75的12.5mM磷酸鹽緩沖(ph 7.4)溶液投入5只取坐勢，重達(dá)約3Kg的新西蘭白兔的一個(gè)鼻孔內(nèi)。0，15，30，60和120分鐘從耳邊靜脈抽血樣并測定血糖量。
圖3示出了該配方和0.9%氯化鈉對比品的平均血糖量，以最初值的%表示。將100μl無胰島素的同一配方投入健康受試者的鼻腔中。
就局部刺激而言，該配方與0.9%氯化鈉不能區(qū)別開。
實(shí)例5將4mg人高血糖素的100μl含5%GF的磷酸鹽緩沖液(pH4)溶液投入5只取坐勢，重約3kg的低血糖新西蘭白兔的兩只鼻孔中(每只50μl)。該配方制法是將高血糖素溶于7mM磷酸鹽緩沖液(pH2.5)中，用0.1N氫氧化鈉將pH調(diào)為4.0并最后加5%糖原糖醛75。試驗(yàn)前1小時(shí)皮下注射83μg胰島素使兔成為低血糖的。從耳邊靜脈中連續(xù)抽血樣進(jìn)行血糖分析。
圖4示出了鼻內(nèi)投放高血糖素后平均血糖量，為最初值的%。
實(shí)例6峰值對比，藥物動力學(xué)10mg氯硝西泮溶于2ml以下載體中(1)4EGf，(2)PEG-200和(3)4EGm(Merck-Schuchardt)，其中采用超聲法。用Eppendorph吸移管將50μl該制劑投入取坐勢新西蘭白兔的每一鼻腔中。以下時(shí)間間隔點(diǎn)從耳邊靜脈取血樣0，2，5，10，15，30和60分鐘，并用HPLC測定氯硝西泮濃度。
圖5示出了鼻內(nèi)投藥后平均血漿氯硝西泮濃度。約2分鐘時(shí)，4EGf的血漿濃度高于PEG-200和4EGm配方。
實(shí)例7峰值控制，藥物動力學(xué)制取3mg地西泮的100μl載體制劑并將其投入兔子中，方式類似于實(shí)例6所述。應(yīng)用以下載體(1)糖原糠醛75(GF);(2)Myglyol 840+GF(7+3)和(3)植物油+GF(7+3)。0，5，10，15，30和60分鐘時(shí)從耳邊靜脈取血樣并用HPLC測定地西泮濃度。
圖6示出了鼻內(nèi)投藥后平均血漿安全濃度。初始峰值血漿濃度可根據(jù)GF/油載體而加以控制。5分鐘時(shí)GF配方的血漿濃度為3mgStesolid地西泮(Dumex A/S，Denmark)靜脈注射的約55%。
實(shí)例8峰值控制，GF作為增效劑的作用制取0.5mg氯硝西泮的100μl載體制成劑并將其按實(shí)例6所述的類似方式給兔子投藥。采用以下載體(1)四甘醇(Merck)(4EGm)，(2)2%糖原糖醛75(GF)在4EGm中，(3)5%GF在4EGm中，(4)10%GF在4EGM中(5)30%GF在4EGm中和(6)GF。0，5，10，15，30和60分鐘時(shí)從耳邊靜脈取血樣并用HPLC測定氯硝西泮濃度。
圖7示出了鼻內(nèi)投藥后平均血漿氯硝西泮濃度。最初峰值血漿濃度可根據(jù)配方中GF/4EGm比而得以控制。
實(shí)例9用0.5mg氟硝西泮和100μl載體制成制劑并按類似于實(shí)例6所述的方式給兔子投藥，其中采用以下載體聚乙二醇200(Merck Art.807483)。0，5，10，15，30和60分鐘時(shí)從耳邊靜脈取血樣并用HPLC測定氟硝西泮濃度。
圖8示出了0.5mg氟硝西泮鼻內(nèi)和靜脈(Rohypnol，Roche)投藥后平均血漿氟硝西泮濃度。
實(shí)例104mg咪噠唑侖和100μl載體制成制劑并按類似于實(shí)例6所述的方式給兔子投藥，其中采用以下載體聚乙二醇200(Merck，Art.807483)。0，5，10，15，30和60分鐘時(shí)從耳邊靜脈取血樣并用HPLC測定咪噠唑侖濃度。
圖9示出了4mg咪噠唑侖鼻內(nèi)和靜脈(Dormicum，Roche)投藥后的平均血漿咪噠唑侖濃度。
實(shí)例11穩(wěn)定性研究為了優(yōu)化氯硝西泮在本發(fā)明載體中的穩(wěn)定性，已進(jìn)行了加速研究。25和60℃下1月內(nèi)對氯硝西泮進(jìn)行了研究，60℃下可回收約90%或更多，就認(rèn)為是非常令人滿意的。
制得以下配方，其中含5mg/ml的氯硝西泮，只是(1)含20mg/ml，(1)和(2)在4EGf中，(3)為(2)用磷酸調(diào)至PH3.5，(4)為(2)用檸檬酸調(diào)至PH3.5，(5)為(2)加9%乙醇，(6)為(2)用硝酸(低于0.01%)調(diào)至PH3.5，(7)為(2)加1%水，(8)丙二醇(PG)，(9)為(8)用0.04%乙酸調(diào)至PH3.8，(10)為(2)加0.4%乙酸，(11)4EGf+5%GF加0.4%乙酸(PH約6)，(12)為(11)加硝酸至PH2，(13)為(11)加3%苯甲醇，(14)為(10)加16%乙醇和3%苯甲醇，(15)為4EGf+5%GF用硝酸(低于0.01%)調(diào)至PH3.5，(16)為(15)加0.04%硝酸鈉，(17)為(15)加5%乙醇，(18)為4EGf+5%GF用檸檬酸(0.1%)調(diào)至PH4.2，(19)為(15)加2%苯甲醇和(20)為4EGf+5%GF加0.04%硝酸鈉。
2和4星期后，從容器中取100μl樣品并用HPLC定量分析。樣品濃度(和回收率)以峰值高度為基礎(chǔ)計(jì)算，相對外部氯硝西泮標(biāo)準(zhǔn)而言。
如表7所示，只有硝酸，硝酸鹽，乙醇和苯甲醇提高了穩(wěn)定性。4EGf，GF和PG中水含量為約0.05%。令人驚奇的是，在例如4EGf中加1%水并不能提高穩(wěn)定性。而且，對安瓿(N中)和10ml Pfeiffer泵(Model 6917.5902/3790.0129)中貯存的配方而言，25℃下的穩(wěn)定性是相同的。
圖10為氯硝西泮在各種載體中的穩(wěn)定性示意圖。
表725℃和60℃氯硝西在各種載體中的穩(wěn)定性2和4星期后的回收率%2 星期 4星期配方號 Amp.(-air)噴霧瓶Amp.(-air)噴霧瓶25℃ 60℃ 25℃25℃ 60℃ 25℃1.4EGf 20mg/ml 9891100 8273872.4EGf 5mg/ml9882 96 8361843.4EGf pH 3.59879100 846285(磷酸鹽)4.4EGf pH3.5 9543 95 811882(草酸)5.4EGf 10090 99 857190(乙酸)9%6.4EGf pH 3.89888 97 958795(硝酸)7.4EGf 9483 94 89 71 94水1%8.PG 9669 99 96 56 929.PG pH3.8 10099103 93 95 97(乙酸)10.4EGf+40% 10284102 99 67 102(乙酸)濃度配方 No.1＝約 20mg C/ml配方 No.2-10＝約 5mg C/ml
表7(續(xù))2 星期 4星期配方號 Amp.(-air)噴霧瓶Amp.(-air)噴霧瓶25℃ 60℃ 25℃25℃ 60℃ 25℃11.4EGf+5%GF 101801009863 99乙酸0.4%12.=No.11 pH 2 98 86無數(shù)據(jù) 97 81 無數(shù)據(jù)(硝酸)13.＝No.11+10385 10299 76 96芐基-OH 3%14.=No.10+ 10392無數(shù)據(jù) 100 80 無數(shù)據(jù)乙醇 16%芐基-OH 3%15.4EGf+5%GF9994 96 96 96 98pH 3.8(硝酸)16.=No.15 +10295 100 9693 98硝酸鹽 0.04%17.=No.15 + 9698 99 98 8798乙酸 5％18.4EGf+5%GF9585 94 93 6798pH 4.2(檸檬酸)19.=No.15 +10196 97 98 93 99芐基－OH 2%20.4EGf+5%GF+ 93 75 99 99 78 95硝酸鹽 0.04%濃度配方 No.11－20＝約5mg/Cml
實(shí)例12急性毒性研究該研究旨在觀察單一劑量載體投入每一鼻腔后兔子鼻腔內(nèi)的急性變化。試驗(yàn)載體為糖原糠醛75，四甘醇(Fluka)和丙二醇(DLS級，Mecobenzon，Denmerk)。
16只兔子任意分成4×4組。3組接受試驗(yàn)載體之一單一鼻內(nèi)投藥，每一鼻腔50μl。每只兔子只接收一種試驗(yàn)化合物。1組用來對比，接收等體積等滲氯化鈉鹽水。投藥后10分鐘兔子即流血而死去。剖開右鼻腔并肉眼評價(jià)。左鼻腔解剖后固定在福爾馬啉中并在緩沖液中進(jìn)行組織評價(jià)。
1-16中每只兔子肉眼和顯微觀察結(jié)果列于表8，而表9則總結(jié)了4種載體的結(jié)果。令人驚奇的是，肉眼或顯微觀察均沒發(fā)現(xiàn)等滲鹽水和3種試驗(yàn)載體間存在差別。
表8鼻內(nèi)投放載體后10分鐘兔子鼻腔觀察結(jié)果N.A＝無異常 L＝位置肉眼觀察 顯微鏡觀察(右鼻腔) (左鼻腔)1.N.A. L1充血L2灶性淋巴樣凝集L3N.A.
L4N.A.
2.輕微充血 L1充血
L2灶性出血，充血L3灶性淋巴樣凝集L4N.A.
3.N.A. L1充血L2充血L3充血L4灶性粘膜下層出血4.粘液層 L1充血鼻腔比正常情況更白 L2充血L3充血和L4粘液濃縮5.前部2mm出血灶 L1充血L2充血，灶性出血和脫皮，水腫，慢性發(fā)炎小灶和灶性淋巴樣斑L3淋巴樣凝集L4慢性發(fā)炎區(qū)6.前部6×3mm出血區(qū) L1充血和膠皮灶，少量出血L2充血和粘膜下層出血區(qū)L3N.A.
L4輕微充血7.N.A. L1充血L2水腫，充血，灶性出血
L3充血，灶性淋巴樣凝集L4擴(kuò)散性急性和慢性發(fā)炎，多和單核細(xì)胞，淋巴管內(nèi)積血8.N.A. L1充血L2充血伴有粘膜下層出血，水腫L3充血伴有粘膜下層出血，水腫L4充血伴有粘膜下層出血，水腫，粘液濃縮，粘膜下層淋巴樣凝集9.N.A. L1充血和水腫L2充血和水腫L3充血和外側(cè)壁單和多核細(xì)胞浸潤并伴有淋巴樣凝集L4充血和外側(cè)壁單和多核細(xì)胞浸潤并伴有淋巴樣凝集10.N.A. L1充血L2充血并伴有間或灶性淋巴樣凝集L3水腫和充血L4灶性慢性單核細(xì)胞浸潤，淋巴管膨脹
11.N.A. L1水腫和充血L2水腫，充血，灶性出血和粘膜下層淋巴樣凝集L3小靜脈膨脹L4N.A.
12.N.A. L1充血，小靜脈膨脹，灶性出血L2充血，水腫，灶性出血L3充血，粘膜下層淋巴樣凝集L4充血，粘膜下層淋巴樣凝集13.N.A. L1充血L2充血，水腫，粘膜下層淋巴樣凝集L3充血，水腫，粘膜下層淋巴樣凝集L4充血，水腫，粘膜下層淋巴樣凝集14.3mm出血灶向前延伸 L1N.A.
L2充血，水腫，粘膜下層淋巴樣凝集L3充血，水腫，粘膜下層淋巴樣凝集L4充血，水腫，粘膜下層淋巴樣凝集15.前區(qū)小塊擦破，有針點(diǎn) L1充血，水腫，灶性出血L2充血，灶性出血，水腫粘膜下層淋巴樣凝集L3充血，水腫，基片切口附近單核細(xì)胞浸潤L4充血16.4×3mm出血區(qū)向前 L1充血，水腫延伸 L2充血，水腫，灶性出血和脫皮L3充血，水腫，粘膜下層淋巴樣凝集，特別是基片附近L4水腫，粘膜下層淋巴樣凝集表9鼻內(nèi)投放4EGf，GF，PG和0.9%NaCl后10分鐘兔子鼻腔結(jié)果總結(jié)(按載體排列)N.A.＝無異常載體 動物號 肉眼觀察結(jié)果 顯微觀察結(jié)果(右側(cè)) (左側(cè))0.9%NaCl 3 N.A. 灶性出血6 前區(qū)6×3mm出血灶 灶性出血12 N.A. 灶性出血13 N.A. N.A.
糖原糠醛 2 N.A. 灶性出血(GF) 8 N.A. 灶性出血9 N.A. N.A.
16 前區(qū)4×3mm出血灶 灶性出血丙二醇 4 N.A. N.A.
(PG) 5 前區(qū)2mm出血灶 灶性出血11 N.A. 灶性出血14 前區(qū)2mm出血灶 N.A.
四甘醇 1 N.A. N.A.
(4EGf) 7 N.A. 灶性出血10 N.A. N.A.
15 前區(qū)針點(diǎn)擦破 灶性出血令人驚奇的是已發(fā)現(xiàn)，鼻內(nèi)吸收本發(fā)明載體中的例如苯并二氮雜卓，如氯硝西泮和地西泮極其類似于靜脈注射(i.v.)。從圖1可以看出，不足2-3分鐘即達(dá)到峰值氯硝西泮血漿濃度(tmax)并且2.5分鐘后血漿濃度(Cpl(2.5分鐘))為約100%i.v.投藥所得濃度。出人意料的是，根據(jù)本發(fā)明，載體質(zhì)量的選擇對吸收速度要產(chǎn)生影響。例如，4EGf(Fluka-Chemie AG產(chǎn)品級)2.5分鐘時(shí)的氯硝西泮血漿濃度要比4EGm(MERCK-Schuchardt產(chǎn)品級)或PEG200(MERCK-Schuchardt產(chǎn)品級)40%，并且tmax分別達(dá)到大約≤2.5，10和15分鐘(圖5)。
用兔子進(jìn)行藥效反應(yīng)研究。用100μl載體鼻內(nèi)投放0.25mg氯硝西泮后測定反應(yīng)時(shí)間。圖2示出了平均時(shí)間，試驗(yàn)細(xì)節(jié)在實(shí)例3中作了說明。如圖2所示，用本發(fā)明載體鼻內(nèi)投放氯硝西泮后的藥效反應(yīng)可在投藥后不足2分鐘內(nèi)達(dá)到。
本發(fā)明組合物穩(wěn)定。例如本發(fā)明組合物60℃和25℃分別放置1月后測定苯并二氮雜
(見實(shí)例11)即可說明這一點(diǎn)。PG加乙酸后(調(diào)至PH3.8-4)即可得穩(wěn)定液(回收率約≥90%)。而等量乙酸卻不能使4EGf溶穩(wěn)定，調(diào)至PH約4所需乙酸量太大。令人驚奇的是，用硝酸調(diào)節(jié)PH可得到氯硝西泮與如4EGf及必要時(shí)的5%GF的穩(wěn)定液(回收率約≥90%)。
令人驚奇的是還發(fā)現(xiàn)，將本發(fā)明載體與胰島素或高血糖素并用，兔子鼻內(nèi)投藥后15-30分鐘可達(dá)到顯著的生物反應(yīng)(見圖3和4以及實(shí)例4和5)。
實(shí)例13生物利用率先將50μg單劑量E2給兔子(n＝3)鼻內(nèi)(i.n.)投藥后研究雌激素(E2)和雌酮的生物利用率進(jìn)行研究。i.n.試驗(yàn)兩種分別含30%和100%糖原糠醛(GF)的配方，與同劑量i.v.注射相比較。
物料17-β-雌二醇(雌激素＝E2)來自Novo Nordisk(Copenhagen，Denmark)，丙二醇(PG)來自Mecobenzon(Copenhagen，Denmark)，而糖原糖醛75(GF)來自Hoffman La-Roche(Basel，Switzerland)。所有其它試劑均為分析級試劑。
藥物制劑剛好在投藥前制取靜脈注射和鼻內(nèi)投藥配方。靜脈投藥配方1制法是將2-729mgE2溶于25.0mlPG中，然后加25.0ml等滲鹽水。鼻內(nèi)投藥配方2制法是將4.938mgE2溶于10.0mlGF中。同為鼻內(nèi)投藥的配方3制法是將4.996mgE2溶于3.00mlGF后加等滲鹽至總體積10.0ml。
劑量和研究方案靜脈注射兔子(n＝3)30秒鐘內(nèi)耳靜脈i.v.輸入1.0ml配方1(相當(dāng)于50μgE2)。鼻內(nèi)投藥兔子(n＝3)用Eppendorph吸移管i.n.投入配方2或3。每只兔子每只鼻孔接收50μl，相當(dāng)于50μgE2。鼻內(nèi)投藥持續(xù)約5秒鐘。鼻內(nèi)投藥期間和之后約1分鐘，兔子保持仰臥。
投藥后0，5，10，20，30和60分鐘收集血樣。分出血漿并存于÷20℃下，等待分析。
采用Emmet et al.在1972年描述的放射免疫測定法測定非共軛E2和E1的血漿濃度。用乙醚萃取后用Sephadex LH20柱將E1和E2分開。溶劑蒸發(fā)后進(jìn)行放射免疫測定試驗(yàn)。E1和E2的檢測極限為40pmol/l。試驗(yàn)期間E1變量分別為7.0%和9.6%，E2變量為分別為7.4%和10.5%。
各血漿濃度的劑量/重量校準(zhǔn)是相對于i.v.劑量/重量(22.3μg/kg)平均值計(jì)算的。對于i.v.配方1，E2血漿濃度一時(shí)間曲線下的面積(AUC)，從0分鐘至無窮，30秒鐘內(nèi)輸注1格即對應(yīng)這些數(shù)據(jù)。所有其它AUC都是借助不規(guī)則四邊形規(guī)則計(jì)算的。
E2和E1投放后，E2和E1的血漿濃度分別列于表10和11以及圖11和12。圖11和12分別示出了平均±S.D.雌激素(E2)和雌酮(E1)血漿濃度，其中給兔子(n＝3)投藥約50μg雌激素，采取i.v.注射(配方1)或鼻內(nèi)投藥(分別用糖原糖醛(GF)100%和30%配制成配方2i.n.和3i.n.)。
-X-配方1i.v. -●-配方2i.n.
…○…配方3i.n.。
從圖11和12以及表12可以看出，鼻內(nèi)投藥非常類似于i.v.投藥。生物利用率見表12。E2生物利用率分別為87和80%，而對于E2+E1，配方2i.n.和3i.n.分別為104和95%。E2和C5分鐘為109和95%，對于E2+E1為118%和105%。Tmax少于5分鐘。

評論已發(fā)現(xiàn)E2在GF中的溶解度為約230mg/ml。因此，50μg臨床劑量可溶于0.25μl中。采用GF可用極少量μl體積投放臨床劑量。由于溶解度隨水量呈指數(shù)下降，所以GF作為載體的劑量體積應(yīng)為例如5μl，以避免E2不必要地在鼻粘液中沉淀。
為了降低或消除局部刺激作用，要求采用小劑量體積。另一方面，可采用非刺激性共溶劑，如植物油。以這種方式也可達(dá)到要求劑量體積或傳送速度。為了減少血漿峰值濃度，又要求在粘液中沉淀有限量的E2。
無水GF配方可用于急性熱沖洗以及慢性用藥。
權(quán)利要求
1.用于向哺乳動物粘膜施敷生物活性物質(zhì)的藥物組合物，包括由式Ⅰ所示的一種或多種n-糖原糠醛和式Ⅱ所示的n-甘醇
式中n為1-8；式中p為1-14。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其特征在于所述的n-甘醇包括p為1-8的n-甘醇。
3.權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其中所述的n-糖原糠醛n為1或2。
4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，所述的生物活性物質(zhì)選自可在胃腸道消化的生物活性肽。
5.權(quán)利要求4的藥物組合物，其特征在于，所述的生物活性物質(zhì)選自凝固因子如因子Ⅶ，因子Ⅷ，因子Ⅸ和其衍生物和同類物;骨代謝控制劑如降鈣素及其衍生物和同類物;激素，選自下血腦如LHRH或同類物，例如納法來林，布塞來林或佐利代斯，腦啡肽如DADLE，美克法胺或亮氨酸酸腦啡呔;激素，選自胰腺如胰島素或高血糖素及其衍生物和同類物;激素，選自垂體腺如生長激素，后葉加壓素或催產(chǎn)素及其衍生物和同類物，例如DDAVP或賴氨酸加壓素;性激素如FSH，LH或LTH及其衍生物或同類物。
6.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中的生物活性物質(zhì)的含量為0.001%-20%，并選自鎮(zhèn)癇劑，鎮(zhèn)痙劑和鎮(zhèn)靜劑，選自苯并二氮
類如氯硝西泮，地西泮，氟硝西泮，三唑侖，勞拉西泮，硝西泮或上述鎮(zhèn)靜劑混合物。
7.權(quán)利要求4-6中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中還包括濃度為0.0001-5%的硝酸和/或硝酸鹽。
8.權(quán)利要求4或5的藥物組合物，包括胰腺激素如胰島素及其衍生物和同類物，高血糖素及其衍生物和同類物。
9.用生物活性物質(zhì)治療哺乳動物的方法，其特征在于，將生物活性物質(zhì)及其式Ⅰ所示的一種或多種n-糖原糠醛和式Ⅱ所示的n-甘醇施敷到待治療的哺乳動物粘膜上
式中n為1-8;式中p為1-14。
10.一種藥物組合物施敷到粘膜上的用途，所述組合物包括選自式Ⅰ所示的一種或多種n-糖原糠醛和式Ⅱ所示的n-甘醇<p>
(式中，R1、R2表示甲基或羥基;n表示4000～9000的整數(shù));</p><p>(2).在25℃時(shí)粘度為10～100000厘沲的二甲基硅氧烷油;</p><p>(3).從丙二醇、1-3丁二醇及甘油中選擇出來的1種或2種以上的多價(jià)醇;</p><p>(4).從聚環(huán)氧乙烷油醚、聚環(huán)氧乙烷鯨蠟醚，乙二醇硬脂酸酯、二乙二醇硬脂酸酯、聚乙二醇硬脂酸酯、聚乙二醇二硬脂酸酯及甘油硬脂酸酯中選擇出來的1種或2種以上非離子表面活性劑;</p><p>且(1)的量為(2)量的1/20～1/3，(4)的總量是(1)的7倍量以下，而且是(3)量的1/2～2。</p><p>本發(fā)明之毛發(fā)化妝品具有優(yōu)良的毛發(fā)梳通性并使毛發(fā)有光滑的感觸，以及保護(hù)毛發(fā)不因熱風(fēng)和刷梳受到損傷。</p><p>用于本發(fā)明毛發(fā)處理劑的式[Ⅰ]所示二甲基硅氧烷橡膠的代表例，可列舉東芝シリコ-ンTSE-200、TSE-200A等，可單獨(dú)使用或2種以上并用，相對于毛發(fā)處理劑總量，其配合量為0.01～10重量%，最好是0.5～2.0重量%。配合量少于此范圍時(shí)，毛發(fā)的梳通性和光滑感不夠。另一方面，如果超越此范圍，則二甲基硅氧烷橡膠自身的粘性強(qiáng)，乳化困難。</p><p>(2)的二甲基硅氧烷油，在25℃時(shí)粘度為10-100000厘沲，也就是不揮發(fā)性的二甲基硅氧烷油，是公知的;粘度低于10厘沲時(shí)容易揮發(fā)，效果的持續(xù)性差;相反，如果比100000厘沲高，則粘度過強(qiáng)，使用感差。這種二甲基硅氧烷可單獨(dú)使用也可2種以上并用，其配合量是在(1)硅氧烷橡膠重量的3-20倍量的范圍內(nèi)。3倍量以下時(shí)，粘性增強(qiáng)，使用感惡化。20倍量以上時(shí)，則妨礙(1)的硅氧烷橡膠性能，梳的用途
式中n為1-8;式中p為1-14。
全文摘要
一種將生物活性物質(zhì)施敷到哺乳動物粘膜上的藥物組合物，該組合物可產(chǎn)生幾乎與靜脈內(nèi)注射一樣快的藥物活性物質(zhì)的高血漿濃度，含有式I所示的一種或多種n-糖原糠醛和式II所示的n-甘醇，其中式(I)中n為1-8；式(II)中的p為1-14。
文檔編號A61K9/00GK1056812SQ9110302
公開日1991年12月11日 申請日期1991年5月9日 優(yōu)先權(quán)日1990年5月10日
發(fā)明者埃里克·貝徹加德, 思維伯江·吉拉森, 羅夫·庫爾盟·加克耶 申請人:諾沃挪第克公司