專利名稱：：化妝品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明是關(guān)于防止皮膚老化及防止皮脂氧化的化妝品，這種化妝品的特征是含有PleurotusSajorcaju菌絲體培養(yǎng)液的精制液(下文中簡(jiǎn)稱為培養(yǎng)精制液)。眾所周知，皮膚與其他的內(nèi)臟器官不同，它容易受外界因素例如陽(yáng)光、溫度、濕度等物理因素或洗滌劑等化學(xué)因素的影響，其中尤以陽(yáng)光中所含的紫外線對(duì)皮膚的影響最甚，往往導(dǎo)致產(chǎn)生皺紋、色素沉積、干燥肌等皮膚老化現(xiàn)象。以往，為了預(yù)防上述現(xiàn)象發(fā)生，人們使用摻有紫外線吸收劑、保濕劑、細(xì)胞活化劑、防氧化劑等的化妝品，可是效果并不理想，此外還具有光敏性等對(duì)皮膚不良的副作用，因此在使用上存在一些問(wèn)題。鑒于上述情況，本發(fā)明人對(duì)于不會(huì)由于紫外線而引起皮膚老化的化妝品進(jìn)了研究，經(jīng)反復(fù)研究的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)PleurotusSajorcaju的培養(yǎng)精制液具有良好的抑制紫外線損傷、抑制黑色素生成以及抗氧化等作用，而且對(duì)皮膚具有高度的安全性，進(jìn)一步研究的結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，摻入這種培養(yǎng)精制液的化妝品在用于皮膚時(shí)，具有防止因紫外線而引起的皺紋、色素沉積等皮膚老化現(xiàn)象的效果，在用于頭皮時(shí)，具有防止皮脂氧化、消除頭皮屑和搔癢的效果，從而完成了本發(fā)明。也就是說(shuō)，本發(fā)明是一種具有高度安全性的用于皮膚或頭皮的化妝品，其特征是，在外用劑基料中摻入PleurotusSajorcaju菌絲體的培養(yǎng)精制液。本發(fā)明的有效成分是由PleurotusSajorcaju的培養(yǎng)液中提取的，它是對(duì)PleurotusSajorcaju的菌絲體進(jìn)行液體培養(yǎng)，然后除去菌絲體，最后精制而得到的水溶性液體，它是采用常規(guī)的實(shí)施方法精制而得到的。所謂PleurotusSajorcaju是一種名叫PlerotusSajorcaju的印度產(chǎn)的擔(dān)子菌類，在此之前還沒(méi)有人將它用作化妝品的配料，尤其是完全不知道它具有抑制紫外線損傷的作用、抑制黑色素生成的作用及抗氧化作用。本發(fā)明的培養(yǎng)精制液，由于具有良好的抑制紫外線損傷的作用和抑制黑色素生成的作用，因此在將含有這種培養(yǎng)精制液的化妝品施用于皮膚上時(shí)，對(duì)于由有害的紫外線所引起的，表示皮膚老化現(xiàn)象的皺紋和色素沉積癥非常有效，此外，在施用于頭皮時(shí)還具有抗氧化作用，因此可有效地防止產(chǎn)生頭皮屑和搔癢癥。本發(fā)明的化妝品的劑型沒(méi)有特別的限制，只要能施用到皮膚或頭皮上，任何劑型都是可以的，例如，可以按常規(guī)的調(diào)制方法把起有效成分作用的PleurotusSajorcaju培養(yǎng)精制液作為基劑、助劑、添加劑用于制造化妝水、乳脂、乳液、生發(fā)水等化妝品。本發(fā)明中使用的培養(yǎng)精制液的配入量為化妝品總量的0.01～50%(重量)，最好是0.1～30%(重量)。下面敘述作為本發(fā)明的有效成分的PleurotusSajorcaju培養(yǎng)精制液的制造例。制造例1將30克葡萄糖、2克酶母提取物、2克胨、1克磷酸二氫鉀、0.5克硫酸鎂、0.1克氯化鈉、0.1克氯化鈣及1000毫升蒸餾水置于發(fā)酵罐中加溫溶解，在高壓釜中于12.1℃下滅菌15分鐘，冷卻到室溫。在其上面接種PleuroutusSajorcaju的菌絲，然后在30℃下通氣振蕩培養(yǎng)一星期。培養(yǎng)結(jié)束后，以2500rpm轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心分離以除去菌絲，再用氟鎂石等助濾劑過(guò)濾，得到500克清澈的PleurotusSajorcaju培養(yǎng)精制液。制造例2將30克葡萄糖、2克酵母提取物、100克豆?jié){、2克胨、1克磷酸二氫鉀、0.5克硫酸鎂、0.1克氯化鈉、0.1克氯化鈣、以及800毫升蒸餾水在發(fā)酵罐中加溫溶解，在高壓釜中于121℃下滅菌15分鐘，冷卻至室溫。在其上面接種PleurotusSajorcaju的菌絲，然后在30℃通氣振蕩培養(yǎng)1周。培養(yǎng)結(jié)束后，以2000rpm轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心分離以除去菌絲，再用氟鎂石等助濾劑過(guò)濾，得到500克清澈的PleurotusSajorcaju培養(yǎng)精制液。制造例3在1000克上述制造例2中制備的PleurotusSajorcaju培養(yǎng)精制液中添加50毫克蛋白酶(Actinase，科研制藥株式會(huì)社制)，在室溫下攪拌18小時(shí)。使用分子量1000的超濾膜除去分子量在1000以上的物質(zhì)，經(jīng)減壓蒸餾后，得到200克PleurotusSajorcaju培養(yǎng)精制液。下面說(shuō)明本發(fā)明中使用的培養(yǎng)精制液及摻入該培養(yǎng)精制液的制劑的試驗(yàn)結(jié)果(效果數(shù)據(jù))。實(shí)施例以下，通過(guò)實(shí)施例詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明。試驗(yàn)例(1)對(duì)紫外線損傷的抑制作用a)試驗(yàn)方法在4毫升含10%(體積)牛胎兒血清的Eagle′sMEM培養(yǎng)基中加入培養(yǎng)的小鼠成纖維細(xì)胞(3T3-LISwissAlbino)1×105個(gè)細(xì)胞/0.1毫升，在37℃和5%CO2氣氛條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)開(kāi)始后的第三天對(duì)其照射30mJ、60mJ劑量的紫外線(uVB)，紫外線照射后立即分別用一份新的介質(zhì)來(lái)置換舊的介質(zhì)，所說(shuō)的新介質(zhì)分別含有4毫升的1/5、3/20、1/10、1/20的PleurotusSajorcaju培養(yǎng)精制液(制造例3中制備的)。紫外線照射2天后，用結(jié)晶胰蛋白酶和EDTA的混合液剝離細(xì)胞，計(jì)算出活細(xì)胞的數(shù)目。另一方面，加入未經(jīng)紫外線照射的各種不同濃度的PleurotusSajorcaju培養(yǎng)精制液，按同樣的方法培養(yǎng)，然后計(jì)算活細(xì)胞的數(shù)目并據(jù)此求出在同一濃度的試料中的細(xì)胞存活率。對(duì)照組的存活率(%)＝(經(jīng)紫外線照射后的活細(xì)胞數(shù))/(未照射紫外線時(shí)的活細(xì)胞數(shù))×100另外，以未添加PleurotusSajorcaju培養(yǎng)精制液的情況下的存活率作為對(duì)照組來(lái)評(píng)價(jià)其抑制紫外線損傷的效果。試樣細(xì)胞存活率(%)＝(經(jīng)紫外線照射后的活細(xì)胞數(shù))/(未照射紫外線時(shí)的活細(xì)胞數(shù))×100b)試驗(yàn)結(jié)果如表1所示，在紫外線30mJ、60mJ照射的情況下，與對(duì)照組相比，證實(shí)了添加1/5、3/20、1/10、1/20PleurotusSajorcaju培養(yǎng)精制液確有抑制紫外線損傷的效果。表1</tables>(2)B16細(xì)胞的抑制黑色素生成的作用a)試驗(yàn)方法在10毫升含10%(體積)牛胎兒血清的Eagle′sMEM培養(yǎng)基中分別加入上述制造例中制備的PleurotusSajorcaju培養(yǎng)提取液，其加入量為10毫升的1/2、1/4、1/8，以加入上述培養(yǎng)提取液的一組作為試驗(yàn)組A、B、C，以未加入試樣的一組作為對(duì)照組。在上述制備好的試驗(yàn)組和對(duì)照組中，每個(gè)組分別接種1.0×105個(gè)培養(yǎng)精制液B16細(xì)胞，然后在37℃下并于5%CO2氣氛中培養(yǎng)5天。在這一期間換一次培養(yǎng)基。培養(yǎng)基剝離細(xì)胞并進(jìn)行離心分離(約700G)，然后用肉眼觀察并比較試驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞的離心小球的黑色度。b)試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果如下表(判定基準(zhǔn))+表示白色度+++白色;++白色-灰色;+灰色;-黑色(3)抗氧化作用a)試驗(yàn)方法試驗(yàn)樣品1)蒸餾水(對(duì)照物)2)維生素E(40μm)3)PleurotusSajorcaju的精制培養(yǎng)液(制造例1中制備的)0.80%4)PleurotusSajorcaju的精制培養(yǎng)液(制造例2中制備的)0.8%5)PleurotusSajorcaju的精制培養(yǎng)液(制造例3中制備的)0.8%將5.0毫升上述試驗(yàn)樣品加到1.0毫升500mM亞油酸乙醇溶液(pH7.0)的10.0毫升1M磷酸緩沖液和9.0毫升乙醇中，以調(diào)制成試驗(yàn)樣品溶液。將各試樣溶液在37℃的暗處放置9日，然后用硫氰酸鐵法測(cè)定過(guò)氧化值隨時(shí)間的變化情況，也就是說(shuō)，在0.1毫升試驗(yàn)樣品溶液中加入4.7毫升75%的乙醇、0.1毫升30%的硫氰化鐵銨(硫氰酸銨)、0.1毫升2×10-2M氯化亞鐵的3.5%鹽酸鹽溶液，在剛好3分鐘后測(cè)定在500nm波長(zhǎng)處的吸光度。b)試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果如圖1中所示。(4)使用試驗(yàn)(A)改善皺紋的效果a)試驗(yàn)方法在20名婦女(35～55歲)的臉上每日早晚二次連續(xù)涂抹下述實(shí)施例的香精(處方例7)，3個(gè)月后檢查小皺紋的改善程度。涂抹分左半邊臉和右半邊臉進(jìn)行，在一側(cè)臉上涂抹本發(fā)明的香精，在另一側(cè)臉上涂抹不含PleurotusSajorcaju培養(yǎng)精制液的香精(對(duì)照物)，然后進(jìn)行評(píng)定。b)試驗(yàn)結(jié)果評(píng)定相對(duì)于使用香精之前的小皺紋改善程度，結(jié)果證實(shí)本發(fā)明的香精具有明顯的對(duì)小皺紋改善的效果。試驗(yàn)結(jié)果示于表3中。表3</tables>(B)改善色素沉積的效果a)試驗(yàn)方法試驗(yàn)樣品調(diào)制下述實(shí)施例的處方例2-4以及用蒸餾水代替其中的培養(yǎng)精制液而得到同一處方的作為對(duì)照物的乳液，用來(lái)作為試驗(yàn)樣品。1)處方例2(摻入制造例1的培養(yǎng)精制液的乳液)2)處方例3(摻入制造例2的培養(yǎng)精制液的乳液)3)處方例4(摻入制造例3的培養(yǎng)精制液的乳液)4)對(duì)照物(摻入蒸餾水來(lái)取代培養(yǎng)精制液而得到的乳液)在50名被試驗(yàn)人員的上臂內(nèi)側(cè)設(shè)定4個(gè)1.5×1.5cm的區(qū)域，作為A、B、C和D區(qū)。然后，從10厘米距離的地方用2支FL20S·BLB燈和2支FL20S·E-30燈照射上述各區(qū)域5分鐘。照射之后，立即在A區(qū)上涂抹處方例2，在B區(qū)上涂抹處方例3，在C區(qū)上涂抹處方例4，在D區(qū)上涂抹對(duì)照物，按每日3次連續(xù)涂7天，7天后檢查色素沉積的改善程度。b)試驗(yàn)結(jié)果將A、B和C區(qū)的情況與D區(qū)進(jìn)行比較，評(píng)價(jià)色素沉積的改善程度。其結(jié)果示于表4中。表4</tables>如上所述，本發(fā)明的化妝品顯示出良好的改善色素沉積的效果。(C)防止頭皮屑及搔癢癥的效果a)試驗(yàn)方法經(jīng)事先調(diào)查，選擇10名有頭皮屑、搔癢癥等煩惱的男子(年令25～35歲)，使用下述處方例的滋補(bǔ)藥(處方例8)和不含PleurotusSajorcaju培養(yǎng)精制液的滋補(bǔ)藥(作為對(duì)照物)進(jìn)行試驗(yàn)。每周3次用洗發(fā)液洗頭，用毛巾擦干后在頭皮上一邊按摩一邊涂抹上4毫升作為對(duì)照物的試驗(yàn)樣品。三星期后由熟練的評(píng)判人員分4個(gè)等級(jí)對(duì)頭皮屑和搔癢的程度進(jìn)行評(píng)定及問(wèn)診調(diào)查。然后按照與上述對(duì)照試驗(yàn)同樣的方式，每周3次連續(xù)3周使用滋補(bǔ)藥(處方例8)，評(píng)定頭皮屑和搔癢的程度。評(píng)定的結(jié)果以10名被試驗(yàn)人員的平均值表示。頭皮屑程度的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)0幾乎看不到1看到少量2看到一些3看到相當(dāng)數(shù)量搔癢程度的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)0幾乎沒(méi)有感覺(jué)1稍有感覺(jué)2感覺(jué)到3感覺(jué)明顯b)試驗(yàn)結(jié)果評(píng)定滋補(bǔ)藥(處方例8)和滋補(bǔ)藥(對(duì)照物)使用者的頭皮屑和搔癢程度的結(jié)果表明，本發(fā)明的PleurotusSajorcaju培養(yǎng)精制液具有明顯的防止頭皮屑和搔癢癥的效果。試驗(yàn)結(jié)果示于表5中。表5外用劑的調(diào)制本發(fā)明的化妝品可以按各種已知的劑型使用，例如乳膏、乳液、化妝水、發(fā)膏、生發(fā)藥水等。最好是將作為有效成分的培養(yǎng)精制液摻合到水相中。某些種類的化妝品是由水相和油相組合而成的，在這種情況下最好預(yù)先將作為有效成分的培養(yǎng)精制液摻合到水相中。外用劑的調(diào)制例調(diào)制例1乳膏將甘油、山梨糖醇等保濕劑與蒸餾水混合，然后摻入培養(yǎng)精制液，從而制成水相。另一方面，將蜂蠟、石蠟、微晶蠟、精制地蠟、高級(jí)脂肪酸、硬化油等固體油組分以及三十碳烷、液體石蠟、各種酯油等液體油組分與防腐劑、表面活性劑等油性組分摻混起來(lái)，從而制成油相。然后，緩緩地加熱水相，當(dāng)加熱到約80℃時(shí)，一點(diǎn)一點(diǎn)地添加已加熱到大體與其相同溫度的油相，使之乳化，從而制成乳膏。調(diào)制例2乳液將甘油等保濕劑、酸或堿等pH調(diào)節(jié)劑以及培養(yǎng)精制液與蒸餾水混合，然后加入乙醇，從而制成水相。另一方面，將蜂蠟、石蠟等固體油組分以及三十碳烷、液體石蠟、各種酯油等液體油組分與防腐劑、表面活性劑等油性成分加熱混合，從而制成油相。接著，將油相加到水相中進(jìn)行預(yù)乳化，再向其中加入羧甲基纖維素等保護(hù)膠體，在高速攪拌機(jī)中使之均勻地乳化，從而制成乳液。調(diào)制例3化妝水將培養(yǎng)精制液與甘油、丙二醇等保濕劑、皮膚營(yíng)養(yǎng)劑一起摻合到蒸餾水中。另外使防腐劑、香料等溶解于乙醇中。將這樣所得到的兩種物質(zhì)在室溫下混合溶解，從而制成化妝水。調(diào)制例4乳狀發(fā)膏(CreamPack)將培養(yǎng)精制液與甘油等保濕劑、聚乙烯醇、蜂膠(beegum)等成膜劑一起加到蒸餾水中，使之膨脹，必要時(shí)可加入高嶺土、滑石、氧化鋅等的粉末，此外，再向其中加入溶解有香料、防腐劑等的乙醇，將其混煉直至成為糊狀，從而制成膏狀物。調(diào)制例5生發(fā)藥水將甘油等保濕劑、螯合劑以及培養(yǎng)精制液加到蒸餾水中制成水相，將水相一點(diǎn)一點(diǎn)地加到乙醇中，使之混合均勻，然后將其過(guò)濾，從而制成生發(fā)藥水。〔處方例〕下面說(shuō)明化妝品的具體的處方例，不過(guò)，本發(fā)明不限于這些處方例。處方例1(乳膏)(重量%)聚氧乙烯油基醚(P.O.E.O)1.60甘油單硬脂酸酯3.00白蠟2.80十六烷醇3.00硬脂酸1.75液體石蠟7.10Parsol17890.50三十碳烷4.50甘油2.50Carbopol9400.08ClewatN0.01制造例3中制備的培養(yǎng)精制液0.10蒸餾水73.06此外，添加少量的香料和防腐劑處方例2(乳液)(重量%)三十碳烷5.00凡士林2.00蜂蠟0.50脫水山梨糖醇倍半油酸酯1.20丙二醇5.00乙醇5.00羧基乙烯基聚合物(1%水溶液)20.00氫氧化鉀0.10制造例1中制備的培養(yǎng)精制液10.00蒸餾水51.20此外，添加少量的香料、防腐劑和抗氧化劑處方例3(乳液)使用“制造例2中制造的培養(yǎng)精制液”來(lái)取代處方例2中所述“制造例1中制備的培養(yǎng)精制液”，即得到處方例3。處方例4(乳液)使用“制造例3中制備的培養(yǎng)精制液”來(lái)代替處方例2中所述“制造例1中制備的培養(yǎng)精制液”，即得到處方例4。處方例5(化妝水)(重量%)檸檬酸0.40碳酸鈣0.20乙醇5.00丙二醇9.00制造例1中制備的培養(yǎng)精制液30.00蒸餾水55.40另加少量的香料和防腐劑處方例6(發(fā)膏)(重量%)蜂膠(beegum)5.00三十碳烷2.00丙二醇5.00氯化鋅10.00乙醇5.00制造例2中制備的培養(yǎng)精制液2.00蒸餾水71.00另加少量的香料和防腐劑處方例7(香精)(重量%)羧基乙烯基聚合物(1%水溶液)10.00甘油20.00乙醇1.00透明質(zhì)酸鈉(0.1%水溶液)10.00制造例2中的培養(yǎng)精制液10.00蒸餾水49.00另加少量香料和防腐劑處方例8(生發(fā)藥水)(重量%)乙醇(95%)75.00甘油5.00制造例2中制備的培養(yǎng)精制液5.00蒸餾水15.00另加少量香料和防腐劑本發(fā)明提供了以上述PleurotusSajorcaju的培養(yǎng)精制液為有效成分的化妝品。這種化妝品如果涂抹在皮膚上，完全沒(méi)有副作用，并可有效地預(yù)防由于紫外線而引起的皺紋、色素沉積等皮膚老化現(xiàn)象。如果用于頭皮上，則可有效地防止生成頭皮屑和搔癢癥。圖1中所示為抗氧化作用試驗(yàn)的試驗(yàn)結(jié)果?！?○制造例1中的培養(yǎng)精制液△-△制造例2中的培養(yǎng)精制液□-□制造例2中的培養(yǎng)精制液●-●維生素E10μm×-×對(duì)照物(蒸餾水)權(quán)利要求1.一種化妝品，含有從PleurotusSajorcaju菌絲體的培養(yǎng)液中提取得到的精制液。2.權(quán)利要求1所述的化妝品，其中含有0.1-30%(重量)所述的精制液和70-99.9%(重量)的皮膚可以接受的載體、稀釋劑或溶劑。3.一種制備化妝用的液體的方法，包括在培養(yǎng)基中由于24-35℃溫度范圍內(nèi)有氧培養(yǎng)PleurotusSajorcaju的菌絲體，然后將液體部分與其余的發(fā)酵肉湯分離。4.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述的液體隨后用蛋白酶進(jìn)行處理，并進(jìn)行超過(guò)濾，除去分子量大于1000的物質(zhì)。全文摘要一種化妝品材料，含有從PleurotusSajorcaju的菌絲體培養(yǎng)液中提取的精制液。PleurotusSajircaju的培養(yǎng)精制液具有良好的抑制紫外線損傷、抑制黑色素生成以及抗氧化的作用，因此，摻有這種精制液的化妝品，在施用到皮膚上時(shí)可以有效地預(yù)防因紫外線而引起的皺紋、色素沉積等皮膚老化現(xiàn)象，在施用于頭皮上時(shí)，可有效地抑制頭皮屑和搔癢癥。文檔編號(hào)A61K8/00GK1064805SQ9210142公開(kāi)日1992年9月30日申請(qǐng)日期1992年2月8日優(yōu)先權(quán)日1991年2月8日發(fā)明者三谷纮明,下田浩子,吉井隆,田代圭介申請(qǐng)人:蜜絲佛陀株式會(huì)社,三省制藥株式會(huì)社