專利名稱：非腸胃使用的穩(wěn)定組合物和它們的用途的制作方法
大分子如LL-F28249α-λ化合物、LL-F28249α-λ化合物的23-氧代和23-亞氨基衍生物。milbemycin化合物和阿弗米丁化合物，對溫血動物在腸胃外施用時，對預防和治療由于蠕蟲、線蟲、螨和內、外寄生節(jié)肢動物引起的感染是有用的。腸胃外施用的組合物在對動物施用前須進行消毒，γ輻射是消滅微生物污染物的有效消毒方法。但是在輻射時，某些大分子如LL-F28249α-λ化合物、LL-F28249α-λ化合物的23-氧代和23-亞氨基衍生物、milbemycin化合物和阿弗米丁化合物會降解并失去大部分生物活性。γ輻射所引起的破壞和降解性的后果妨礙了γ輻射作為對某些含大分子的組合物的消毒方法的應用。
本發(fā)明的目的是提供穩(wěn)定的組合物，它能被輻射，在對溫血動物非腸胃施用時，可防止和治療由蠕蟲、線蟲、螨蟲和內、外寄生節(jié)肢動物引起的感染和侵擾。
本發(fā)明的另一目的是提供一種在一段長時間里，把LL-F28249α-λ化合物及它的23-氧代和23-亞氨基衍生物、milbenycin化合物和阿弗米丁化合物引入至溫血動物的血液中并在延長的時間內，保持一定藥物濃度的方法。
本發(fā)明涉及能被輻射消毒而在腸胃外施用的穩(wěn)定微球狀組合物。此組合物含重量約20%-95%的脂肪或蠟或它們的混合物，約1%-50%的LL-F28249α-λ化合物，LL-F28249α-λ化合的23-氧代或23-亞氨基衍生物、milbemycin化合物或阿弗米丁化合物，約1%-30%的油、半軟脂或脂肪酸衍生物或它們的混合物，還有約0.05%-10%的抗氧化劑。
人們出人意料地發(fā)現本發(fā)明的微球組合物可被γ射線消毒而不減低生物活性。
本發(fā)明的穩(wěn)定微球組合物可通過分散在適于藥物學和藥理學的載體中并在腸胃外使用，且也可使分散于上述載體中的微球組合物釋放緩慢。本發(fā)明也包括一種在一段延長的時間里把LL-F28249α-λ化合物及它的23-氧代或23-亞氨基衍生物、milbemycin化合物或阿弗米丁化合物引入溫血動物血液中并保持在血液中藥物的濃度水平的方法。
本發(fā)明較好的穩(wěn)定微球組合物含重量為約50%-90%的脂肪或蠟或它們的混合物;約5%-25%的LL-F28249α-λ化合物，它的23-氧代或23-亞氨基衍生物、milbemycin化合物或阿弗米丁化合物;約1%-20%的油、半軟脂、脂肪酸衍生物或它們的混和物和約1%-5%的抗氧化劑。
在NRRL存儲，存儲登記號為No.15773的菌屬中，花青灰鏈霉菌(streptomyces cyaneogriseus)的亞種noncyanogenus的發(fā)酵液中分離得到的系列化合物。定名為LL-F28249α-λ。
LL-F28249α-λ化合物以下面的結構式來代表
LL-F28249α-λ
本發(fā)明的穩(wěn)定微球組合物LL-F28249α-λ化合物的23-氧代和23-亞氨基衍生物在美國專利No.4，916，154中已有所揭示，在此作為參考結合加以應用。
本發(fā)明微球組合物較好的為LL-F28249α-λ化合物和它的23-亞氨基衍生物，結構式如下F28249α
和23-(O-甲基肟)-F28249α
適于本發(fā)明所用的蠟和脂類其溶點應高于40℃。此蠟可以根據第十一版Hawley的《濃縮化學詞典》(The Condensed chemical Dictionary)所定義的來描述，它是一低熔點有機混和物或高分子量化合物，室溫下為固體，除不含甘油脂外，成份通常與脂類和油類相同。有些是烴;還有些是脂肪酸的酯和醇。這些化合物包括飽和或不飽和長鏈C10-C24的脂肪酸、醇、酯、鹽、醚或它們的混和物。它們在類脂類中分級。蠟是熱塑性的，但由于它不是高聚物，所以不認為屬塑料范疇。通常的特征是拒水性。質地光滑，無毒、無有害顏色和氣味。它可燃并具有良好絕緣性能，能溶于大多數有機溶劑并不溶于水。主要類型如下Ⅰ.天然的1.動物(蜂蠟、羊毛脂、紫膠蠟、中國蟲蠟)2.植物(巴西棕櫚，小燭樹蠟，月桂子、甘蔗)3.礦物(a)化石或地蠟(地蠟(ozocerite)、純地蠟、耦煤蠟)(b)石油蠟(石蠟、微晶蠟)(礦渣臘或鱗狀臘)Ⅱ.合成的1.乙烯多聚物和多羥基醚-酯化合物(“聚乙二醇”)2.氯化萘(“鹵蠟”)3.通過費-托(Fischer-Tropsch)合成的烴類本發(fā)明的脂可如第十一版Hawley的《濃縮化學字典》(The Condensed chemical dictionary)中描述的，用一高級脂肪酸如硬酯酸和棕櫚酸的甘油酯。這種酯和它們的混和物在室溫下為固體，且顯示晶體結構，豬脂和牛脂就是例子。術語“脂肪”(fat)通常特指三甘油脂，脂類(Lipid)是把所有的脂都包括在內。
脂肪最好是由長鏈C10-C14脂肪酸的單-、雙-，或三甘油酯組成，單、雙或三甘油酯最好由硬酯酸酯類、棕櫚酸類、月桂酸酯類、亞油酸酯類、亞麻酸酯類、油酸酯類和其余或它們的混和物組成，溶點高于50℃就更好了。甘油三硬酯酸酯是最適用的脂肪。另外脂肪酸的親油鹽如硬脂酸鎂等也可適用。
本發(fā)明的油、半軟脂或脂肪酸衍生物是可溶于熔融硬脂中的物質，當溶于溶融的硬酯或蠟被霧化后，它們可促進硬脂晶體在室溫或接近室溫下從較不穩(wěn)定狀態(tài)向較穩(wěn)定狀態(tài)的物理轉化。較佳地這種油或半軟脂可含有混和物或帶有短到中級脂肪酸的鏈長，即C2-C18的相對純態(tài)的單-，雙-或三甘油酯。半軟脂指的是熔點在或接近室溫的甘油酯，脂肪酸衍生物包含短的和中級的鏈長脂肪酸、醇、酯、醚、鹽或它們的混和物。由于甘油酯油和半軟脂是身體的生理成份，且有生物相容性，可生物降解，所以它們尤其適用。
本發(fā)明所用的抗氧化劑可用Hawley的第十一版《濃縮化學詞典》(The Condensed Chemical Dictionary)中提出的來描述，它作為一種有機化合物被分別加入到橡膠、自然脂肪和油、食物產品、汽油和潤滑油中以阻止相應的氧化、變質、酸敗和膠質形成。橡膠抗氧化劑通常是一種芳香胺如二-β-萘基對苯二胺和苯基-β-萘胺。許多抗氧化劑是取代酚化合物(丁基化的羥基苯甲醚)，二-叔丁基-對甲酚和榕酸丙酯)。食物抗氧化劑在低濃度是有效的，它不僅阻酸敗，而且通過把主要的脂肪酸和維他命的破壞降至最低程度而保持其營養(yǎng)價值。
出人意料的是本發(fā)明的抗氧化劑可使所述的微球成份用γ射線消毒，并在不明顯損失生物活性下保持半衰期。在不存在抗氧化劑時，大分子例如LL-F28249α-λ化合物、LL-F28249α-λ化合物的23-氧代和23-亞氨基衍生物、milbemycin化合物和阿弗米丁化合物在被輻射時要降解并失去大部分生物活性。適于本發(fā)明微球組合物的抗氧化劑包括丁基化的羥基甲苯，丁基化的羥基苯甲醚，叔-丁基羥基喹啉，榕酸丙酯，α維生素E，6-乙氧基-1，2-二氫-2，2，4-三甲基喹啉等，較好的抗氧化劑是丁基化的羥基甲苯。
本發(fā)明的穩(wěn)定微球在一藥物學和藥理學適用的溶液中分散，得到腸胃外使用的緩釋組合物。載體可以是水緩沖系統或油系統。油系統可從動物或植物源或合成得到，較佳的載體包括中性單-，雙-或三甘油液體或它們的混合物。中性油中不含剩余酸。本發(fā)明適用的載體還包括水系統如緩沖的食鹽水，有機溶劑如1，2-亞乙基二醇和醇;以及和水不混溶液體如油，取決于所適用活性組份的溶解性。
賦形劑如表面活性劑、鹽類、緩沖劑或它們的混和物也被包括在本發(fā)明的范圍中。本發(fā)明適用的所述賦形劑用量為約0.1%-20%(重量)。
通過給動物注射在-適當載體中的本發(fā)明組合物可使LL-F28249α-λ化合物及它的23-氧化和23-亞氨基衍生物、milbemycin化合物和阿弗米丁化合物在血液中達到一定濃度并能保持一段延長的時間。保持血液中活性化合物的濃度水平與預防或治療溫血動物的蠕蟲、線蟲、螨和內、外寄生節(jié)肢動物感染是能聯系起來的。此保持的水平是活性成份緩慢釋放的一個標志。本發(fā)明把組合物引入至動物血流。并保持LL-F28249α-λ化合物及它的23-氧化和23-亞氨基衍生物，milbemycin化合物和阿弗米丁化合物在動物血流中的濃度。
本發(fā)明組合物通過腸胃外施用于溫血動物，如狗、貓、牛、綿羊、馬、豬、山羊、家禽等時，對防止和治療蠕蟲、線蟲、螨蟲和內、外寄生節(jié)肢動物引起的感染及困擾有很高效率。
蠕蟲病是一種動物普遍疾病，在整個世界中造成了很大經濟損失。最常見的蠕蟲是線蟲組。線蟲可在腸道、心臟、肺、血管和動物其它身體組織中發(fā)現，是被感染動物的貧血、失重和營養(yǎng)不良的主要原因。它對被寄生器官的組織和壁都造成嚴重危害，如不加治療，可導致被感染動物的死亡。
線蟲最常見為反芻類的感染劑，包括常見于皺胃中的血矛線蟲屬和胃線蟲屬;常見于腸道中的雨百合屬、毛圓線蟲屬和細頸線蟲屬和見于肺中的網尾線蟲屬。非反芻動物的重要線蟲包括腸中的弓蛔蟲屬和鉤口線蟲屬;狗心中的惡絲蟲屬;豬腸中的蛔蟲屬;家禽腸中的雞蛔蟲屬和異刺線蟲屬以及馬類的大、小圓蟲類。因此，本發(fā)明治療動物以阻止它們被上述線蟲感染或減少、控制這些動物中的感染劑的繁殖有著重要的令人希望的優(yōu)點。
本發(fā)明除可控制蠕蟲的線蟲外，還可控制節(jié)肢動物內寄生感染比如牛皮蠅和外寄生感染比如動物癢螨疹癬。
本發(fā)明的微球可這樣來制備把活性組份，抗氧化劑和其它賦形劑與熔融的脂類、蠟或它們的混和物混合，再加入油、半軟脂、脂肪酸衍生物或它們的混合物，然后通過各種技術，例如乳化或霧化上述得到的混和物或把成份的混和物和溶解的脂、蠟或它們的混和物進行機械處理并冷卻。例如用一離心盤進行而得到微球體?；蛘?，活性成份的混和物、抗氧化劑、賦形劑和脂類、蠟和它們的混和物和油可被冷卻至固態(tài)，然后進行比如粉碎、研磨等的過程。微球體特別是脂肪微球體，可達1000微米的直徑，對腸胃外施用最好重量平均尺寸范圍為約25微米到300微米。
為把本發(fā)明說明得更清楚，下列實施例主要是更具體地描寫其細節(jié)。除權利要求書所規(guī)定的以外，本發(fā)明不在此作限定。
實施例1非腸胃使用的23-(O-甲基肟)-F28249α微球體的制備。
將三硬脂酸酯(72.8g)和三甘油酯油(8.7g)放在一燒杯中并在一熱板上加熱到85°-90°，再將23(O-甲基肟)-F28249α(12.0g)和丁基化羥基甲苯(1.1g)在不停地攪拌下加入，直到23-(0-甲基肟)-F28249α和丁基化羥基甲苯溶解。然后，溶液被倒入實驗室噴射成球機的進料杯中。進料杯、輸料管、供氣管和一兩液體噴霧嘴用熱空氣使在85°-90°保持恒溫。用1磅/平方吋的壓力將液體送至噴嘴，霧化空氣壓力是10磅/平方吋(psi)。霧化的混和物用旋風分離器從球艙的出口收集。微球體然后被篩除大于180微米的顆粒，那些大于180微米的微球體被收集再循環(huán)。
從上述過程得到的微球體有下列的成份%(W/W)23-(O-甲基肟)-F28249α 12.0三硬脂酸甘油酯 78.2三甘油酯油 8.7丁基化羥基甲苯(BHT) 1.1實施例2微球體對輻射的穩(wěn)定性將下面列出的微球體組合物放入20ml的血清小管瓶中，其中兩個用干燥氮氣沖洗去氧氣，管瓶然后用合成橡膠隔膜和卷曲鋁帽封住。接著，微球體在環(huán)境溫度下用鈷60(γ射線輻射)以下表Ⅰ中指明的輻射劑量被輻射。微球體被提取至乙腈/水(1∶1)中，用高效液相色譜法分析23-(O-甲基肟)-F28249α，實驗結果如下表1所示。
微球組合物A1B2成份 (%W/W) (%W/W)23-(O-甲基肟)-F28249α 12.0 12.0甘油三硬脂酸酯 79.2 78.2中鏈的三甘油酯油 8.8 8.7丁基化羥基甲苯 0 1.11.除不使用乙基化羥基甲苯之外，按實施例1的過程制備。
2.實施例1中制備的微球組合物表 Ⅰ
從輻射后的微球組合物回收23-(O-甲基肟)-F28249α的百分率成份A B輻射量(mrad) 空氣 氮氣 空氣 氮氣0 94.5 94.5 96.5 96.50.55 68.5 92.5 95.0 96.52.1 27.5 90.5 96.0 95.0此實驗表明，在空氣或氮氣中用γ射線輻射時，微球體中存在的活性成份(沒有BHT時)有降解，當BHT在配方中時，活性組份是穩(wěn)定的。
實施例3本發(fā)明組合物對狗的持續(xù)釋放狗被分成每三條或四條的組，整個試驗中，所有狗都喂同樣飼料配份。狗被稱重并且注射入一組合物，此組合物含有標準鹽溶液(2ml)，其中溶入2.5%的甲基纖維素，以及將實施例1的組合物微球體混和在內，所用劑量為達到每公斤體重所要求的有效成份量。狗血液中的23-(O-甲基肟)-F28249α濃度定期用HPLC技術測得。本實驗結果如下表Ⅱ所示，它表明了本發(fā)明組合物對引入和保持血液中23-(O-甲基肟)-F28249α濃度的有效性。
表 Ⅱ對狗試驗時23-(O-甲基肟)-F28249α在血漿中的平均濃度(用HPLC測，單位ppb)時間 劑量(mg/kg)(天) 511.721 111 393 197 808 340 10015 133 5021 80 2928 68 2135 51 1442 33 1049 20 71. 3條狗2. 4條狗
權利要求
1.一種微球體組合物，其特征在于含以重量計為約20%-95%的脂肪或蠟或它們的混和物，約1%-50%的從LL-F282492α-λ、LL-F282492α-λ的23-氧代或23-亞氨基衍生物、milbe-mycin和阿弗米丁中選出的一化合物，約1%-30%的油、半軟脂、脂肪酸衍生物或它們的混合物，約0.05-10%的一種抗氧化劑，以及0%-20%的表面活性劑、鹽、緩沖劑或它們的混合物。
2.如權利要求1所述的微球體組合物，其特征在于所述的化合物是從23-(O-甲基肟)-F28249α和LL-F282492α中選出的，所述的脂肪是三硬甘油脂，所述的油是中性三甘油酯油，所述的抗氧化劑是丁基化羥基甲苯，所述微球體組合物的重量平均直徑是在約25～300微米范圍。
3.如權利要求1所述的非腸胃道使用和緩釋的微球體組合物，其特征在于，在一藥物學和藥理學適用的載體中分散所述的微球體。
4.一種預防和治療溫血動物不受蠕蟲、線蟲、螨和內、外寄生節(jié)肢動物感染的方法，其特征在于，對動物非腸胃道使用微球體組合物，此組合物含重量為約20-95%的脂肪或蠟或它們的混合物，約1%-50%從LL-F282492α-λ，LL-F282492α-λ的23-氧代和23-亞氨基衍生物，milbemycin和阿弗米丁中選出的化合物，約1%-30%的油、半軟脂、脂肪酸衍生物或它們的混和物，約0.05%-10%的抗氧化劑和0%-20%的表面活性劑，鹽、緩沖劑或它們的混和物;所述的微球體在藥物學和藥理學適用的液體載體中分散。
5.一種引入并保持溫血動物血液中從LL-F282492α-λ、LL-F282492α-λ的23-氧化或23-亞氨基衍生物、milbemycin和阿弗米丁中選出的一種化合物的血液濃度的方法，其特征在于，對動物非腸胃使用微球體組合物，此組合物含重量為約20%-95%的脂肪或蠟或它們的混合物，約1%～50%的化合物，約1%-30%的油、半軟脂、脂肪酸衍生物或它們的混和物;約0.05%-10%的一種抗氧化劑和0%-20%的表面活性劑、鹽、緩沖劑或它們的混和物;所述的微球體在藥物學和藥理學適用的液體載體中分散。
6.如權利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述化合物是LL-F282492α或23-(O-甲基肟)-F28249α，所述脂肪是甘油三硬脂酸酯，所述油是中性甘油酯油，所述抗氧化劑是丁基化羥基甲基，微球體載體是甲基纖維素和鹽的混和物;所述的微球體組合物的重量平均粒徑約在25-300微米范圍。
7.如權利要求4或5的方法，其特征在于，所述的恒溫動物是選自狗、貓、牛、綿羊、馬、豬、家禽和山羊。
8.一種對恒溫動物非腸胃施用的微球體組合物的制備方法，其特征在于(a)把從LL-F282492α-λ、LL-F282492α-λ的23-氧化或23-亞氨基衍生物、milbemycin和阿弗米丁中選出的一種化合物;抗氧化劑;隨機選用的表面活性劑鹽、緩沖劑或它們的混和物;與溶融的脂肪、蠟或它們的混和物混和;(b)加入油、半軟脂、脂肪酸衍生物或它們的混和物以形成一熔融的混和物;(c)通過乳化、霧化、或離心盤加工熔融的混和物形成微球體;或冷卻熔融的混和物并磨碎或研磨冷卻好的混和物以形成微球體。
9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，(a)步驟和(b)步驟可同時進行。
10.如權利要求8所述的方法，其特征在于，所述的微球體組合物是權利要求1所述的組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定的微球體組合物，它含有脂肪或蠟或它們的混合物；從LL-F282492α-λ化合物、LL-F282492α-λ化合物的23-氧代和23-亞氨基衍生物、milbemycin和阿弗米丁中選出的一種活性成分；一種油、半軟脂、脂肪酸衍生物或它們的混合物；和一種抗氧化劑。本發(fā)明也涉及通過對恒溫動物非腸胃道施用本發(fā)明的化合物，預防和治療在恒溫動物中由蠕蟲、線蟲、螨和內、外寄生節(jié)肢動物引起的感染的方法。
文檔編號A61P33/00GK1068735SQ9210539
公開日1993年2月10日 申請日期1992年6月30日 優(yōu)先權日1991年7月23日
發(fā)明者蘇珊·曼奇尼·卡迪, 威廉·戴維·斯蒂伯, 菲利普·韋恩·海斯, 瑪麗·埃勒斯·德舍爾, 庫爾特·A·施溫哈默 申請人:美國氰胺公司