專利名稱：可光硫化的藥糖氨基聚糖衍生物，交聯(lián)葡糖氨基聚糖及其生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過將一光反應(yīng)活性的化合物以化學(xué)方法連接到一葡糖氨基聚糖(以后有時縮寫為“GAG”)上而制備的各種可光硫化的葡糖氨基聚糖，和通過使所述衍生物進(jìn)行光化反應(yīng)使光反應(yīng)活性化合物進(jìn)行二聚而得到的具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的交聯(lián)葡糖氨基聚糖，涉及制備它們的方法，進(jìn)一步地，涉及含有它們的醫(yī)用的良好生物相容材料。
含有疏水聚合物體系以進(jìn)行光二聚作用而交聯(lián)的可光硫化的樹脂迄今已被尤其用于平版印刷，繪畫和印刷。相反，只有很少的已知例子其中親水聚合物被光交聯(lián)。
另一方面，人們曾試圖通過醛、環(huán)氧化合物、二乙烯基砜化合物等交聯(lián)GAGs，它們是典型的親水聯(lián)合物，以延長GAGs在體內(nèi)的作用，或用于制備作醫(yī)用的以膜或粉末形式的材料，例如用于防止組織粘連。然而，由于GAGs是大分子，而形成的交聯(lián)的GAGs衍生物的分子量更高，這使得從交聯(lián)的GAG衍生物中完全除去未反應(yīng)物和/或催化劑十分困難。因而當(dāng)給生物體給藥或移植時，所述衍生物將不斷產(chǎn)生副作用，故它們不適于實際應(yīng)用。另外，交聯(lián)的GAG衍生物以凝膠或固體存在，因而在交聯(lián)后不易塑模，故不適于實際應(yīng)用。此外，至于它們在持續(xù)或受控制釋放的藥物制劑(JP-A-62-129226對應(yīng)于美國專利5128326;這里所用的述語“JP-A”表示未審查的日本公開特許)中作載體時，活性成份的持續(xù)釋放只有利用交聯(lián)的GAG衍生物的粘性才能獲得，這一缺點使得它們不適于實際應(yīng)用。這些方法和交聯(lián)的GAG衍生物很難控制藥物的釋放速度。
已知通過微生物或植物衍生的多糖如支鏈淀粉，直鏈淀粉和甘露聚糖的羥基與作為光二聚功能基的肉桂?；セ苽涞墓饷舨牧峡捎米魑絼?，酶載體或色譜的載體或用于生產(chǎn)PS板或光刻膠或其它應(yīng)用[JP-B-56-14969，對應(yīng)于美國專利 3960685，(這里所用的述語“JP-B”表示審定的日本特許)，JP-A-60-219202]。
然而，上述光敏材料有一個保證安全性的問題，難以控制細(xì)胞粘接且在人體內(nèi)的生物共容性差，因而它們不適于用作直接應(yīng)用于生物體的醫(yī)用材料，尤其是人造器官，用于覆蓋傷口或外科中的醫(yī)用產(chǎn)品，藥物制劑中的載體，或用于其它醫(yī)療的其它材料。
據(jù)此，本發(fā)明的一個目的是提供可光硫化的葡糖氨基聚糖衍生物和從其衍生的交聯(lián)的葡糖氨基聚糖，它具有高度的安全性和生物相容性。
本發(fā)明的另一目的是提供一制備在需要時容易塑模，例如通過用溶劑鑄造，的可光硫化的葡糖氨基聚糖衍生物的方法，通過該方法，尤其將產(chǎn)生副作用的未反應(yīng)物可以容易地除去，以及一種從其生產(chǎn)交聯(lián)的GAGs的方法。
本發(fā)明的第三個目的是提供醫(yī)用的材料，它們以所述的可硫化的GAG衍生物或交聯(lián)的GAGs為基礎(chǔ)，并可廣泛應(yīng)用于各種目的。
本發(fā)明的第四個目的是提供含有交聯(lián)的葡糖氨基聚糖的無粘性防護(hù)材料，它與組織粘連但隨創(chuàng)傷愈合的速度而生物降解，它們的機(jī)械強(qiáng)度可以根據(jù)應(yīng)用部位的機(jī)械張力而容易地調(diào)節(jié)，以及含有在體內(nèi)經(jīng)光照射時容易轉(zhuǎn)化成交聯(lián)的葡糖氨基聚糖的可光硫化的葡糖氨基聚糖衍生物的無粘性防護(hù)材料。
本發(fā)明的第五個目的是提供用于實現(xiàn)受控藥物釋放的材料或制劑，它們含有交聯(lián)的葡糖氨基聚糖并使藥物釋放的速率適合于其中包括，夾帶或包埋的藥物，并適合于藥物應(yīng)用的目的，以及含有可光硫化的葡糖氨基聚糖的用于實現(xiàn)受控藥物釋放的材料，在上述材料或制劑中用作載體或作為原料。
本發(fā)明提供一種可光硫化的葡糖氨基聚糖衍生物(以后有時簡稱為“可光硫化的GAG”)它包括一葡糖氨基聚糖的與其結(jié)合的光反應(yīng)活性化合物，以及交聯(lián)的葡糖氨基聚糖(以后有時簡稱為“交聯(lián)的GAG”)，它通過使所述可光硫化的GAG與所述光反應(yīng)活性化合物進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)而制備。所述可光硫化的GAG最好通過使葡糖氨基聚糖的羥基或羧基與光反應(yīng)活性化合物的酯化反應(yīng)，通過活化葡糖氨基聚糖的羧基并使該活化的羧基與光反應(yīng)活性化合物酰胺化，或通過使葡糖氨基聚糖的羧基與光反應(yīng)活性的化合物在縮合劑的存在下酰胺化而制備。交聯(lián)的葡糖氨基聚糖可通過用光照射可光硫化的GAG，由此引發(fā)光反應(yīng)活性化合物部分之間的交聯(lián)反應(yīng)而制備。以所述交聯(lián)的GAG為基礎(chǔ)的材料適于醫(yī)用。給出所述交聯(lián)的GAG的可光硫化的GAG也可用作醫(yī)用材料。
附

圖1給出在實施例1中用于測定結(jié)合的肉桂酸的量的1H-NMR光譜。
附圖2給出UV/VIS光譜，說明實施例1中所制備交聯(lián)的透明質(zhì)酸膜曝光時在279nm的衰減吸收。
附圖3圖示了接觸角與在各種交聯(lián)的透明質(zhì)酸膜中肉桂酸殘基取代度(DS)的關(guān)系。
附圖4圖示了溶脹性與在各種交聯(lián)的透明質(zhì)酸膜中肉桂酸殘基的DS之間的關(guān)系。
附圖5包括顯示細(xì)胞形態(tài)的照片，它說明隨著在交聯(lián)的透明質(zhì)酸膜中肉桂酸殘基DS的不同而引起內(nèi)皮細(xì)胞粘著的不同。
附圖6圖示了在硫酸軟骨素-肉桂酸酯(組分CS-Cin-2)光硫化時凝膠化程度(%)與其在PBS溶液中濃度的關(guān)系。
附圖7圖示了在交聯(lián)的硫酸軟骨素凝膠形成中的凝膠化程度(%)及溶脹度與硫酸軟骨素-肉桂酸酯(組分CS-Cin-3)在PBS中曝光時間的關(guān)系。
附圖8圖示了在交聯(lián)的硫酸軟骨素凝膠形成中的凝膠化程度(%)及溶脹度與肉桂酸殘基的DS的關(guān)系。
附圖9圖示了溶脹度與交聯(lián)的硫酸軟骨素膜中DS的關(guān)系。
附圖10圖示了接觸角與實施例8中得到的交聯(lián)的硫酸軟骨素膜中肉桂酸殘基的DS的關(guān)系。
附圖11圖示了胸腺嘧啶二聚物形成百分?jǐn)?shù)與在實施例14中通過將HA-Thym-1曝露于紫外線中以形成交聯(lián)的透明質(zhì)酸膜的過程中UV(紫外線)照射時間的關(guān)系。
附圖12圖示了1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶/HA摩爾比與實施例16合成的HA-Thym的DS之間的關(guān)系。
附圖13圖示了1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶/CS摩爾比與實施例17合成的CS-Thym的DS之間的關(guān)系。
附圖14圖示了實施例18中胸腺嘧啶吸收(于270nm)變化與CS-Thym膜曝光過程的照射時間之間的關(guān)系。
附圖15圖示了實施例18中凝膠化程度(%)與CS-Thym膜曝光過程中的照射時間之間的關(guān)系。
附圖16圖示了實施例18中凝膠化程度(%)與另一CS-Thym膜曝光過程中照射時間之間的關(guān)系。
附圖17圖示了實施例18中溶脹度與HA-Thym膜曝光過程中照射時間之間的關(guān)系。
附圖18圖示了實施例18中溶脹度與HA-Thym膜曝光前后的DS之間的關(guān)系。
附圖19給出了實施例20中制備的硫酸軟骨素-(7-香豆氧基)乙酸酯的1H NMR譜。
附圖20圖示了酰基氯形式香豆素/硫酸軟骨素羥基(CS-OH)摩爾比與酯形式的DS之間的關(guān)系。
附圖21圖示了在實施例21中香豆素的吸收(在320nm)變化與硫酸軟骨素-(7-香豆氧基)乙酸酯薄膜曝光照射時間之間的關(guān)系。
附圖22圖示了實施例21中溶脹度與硫酸軟骨素-(7-香豆氧基)乙酸酯薄膜曝光照射時間之間的關(guān)系。
附圖23圖示了實施例21中溶脹度與硫酸軟骨素-(7-香豆氧基)乙酸酯薄膜曝光時的DS之間的關(guān)系。
附圖24圖示了實施例21中凝膠化程度(%)與硫酸軟骨素-(7-香豆氧基)乙酸酯薄膜曝光時間之間的關(guān)系。
附圖25圖示了實施例21中凝膠化程度(%)與含有所述酯的薄膜在曝光時硫酸軟骨素-(7-香豆氧基)乙酸酯的濃度之間的關(guān)系。
附圖26圖示了從具有如實施例28中測定的10%或50%的藥物含量的光交聯(lián)的HA-Thym膜(DS＝0.7)釋放藥物的速率，與時間的函數(shù)關(guān)系，所述的速率以吸收度(在269nm)的變化來表示。
附圖27圖示了從具有如實施例28中測定的10%或50%的藥物含量的光交聯(lián)的HA-Thym膜(DS＝2.2)釋放藥物的速度，作時間的函數(shù)，所說的速度以吸收度(在269nm)的變化表示。
附圖28圖示了從具有如實施例28中測定的10%或50%的藥物含量光交聯(lián)的CS-Thym膜(DS＝0.8)釋放藥物的速度作時間的函數(shù)，所說的速度以吸收度(在269nm)的變化來表示。
附圖29圖示了從具有如實施例28中測定的10%或50%的藥物含量的光交聯(lián)的CS-Thym膜(DS＝1.3)釋放藥物的速度作時間的函數(shù)，所說的速度以吸收度(在269nm)的變化來表示。
附圖30圖示了從具有如實施例28測定的10%或50%的藥物含量的光交聯(lián)的CS-Thym膜(DS＝1.8)釋放藥物的速度作時間的函數(shù)，所說的速度以吸收度(在269nm)上的變化來表示。
這里所用的術(shù)語“醫(yī)用材料”包括，尤其用于制備用于治療目的的診斷器的醫(yī)用設(shè)備或人造器官(人造血管，人造心臟，人造皮膚，等)的材料，構(gòu)成創(chuàng)傷覆蓋物，修復(fù)術(shù)的材料，無粘性材料或用于控制藥物釋放的器材，及人造細(xì)胞外基質(zhì)或在形成混合人造器官時用于內(nèi)皮細(xì)胞，上皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的粘附和繁殖的人造基膜。
本發(fā)明的可光硫化的GAG最好具有由下面給出的式[1]至[5]中之一代表的部分結(jié)構(gòu)，當(dāng)進(jìn)行光反應(yīng)時，給出交聯(lián)的GAG。在所述各式的下面，給出了相應(yīng)的反應(yīng)類型，其中g(shù)ag表示任何葡糖氨基聚糖的部份結(jié)構(gòu)，R1是光反應(yīng)活性基團(tuán)(即含有至少一個1，2-亞乙烯基的基團(tuán))，而R1-COOH，R1-NH2和R1-OH分別表示光反應(yīng)活性化合物。
R2a代表由具有與gag-OH(如HOOC-R3-COOH，HOOC-R3-NH2)反應(yīng)能力的間隔基和光反應(yīng)活性化合物的功能基衍生出的基團(tuán)。 gag-OH÷HOOC-R3-COOH→gag-O-CO-R3-COOH[D-1-a] gag-O-CO-R3-COOH÷R1-OH→gag-O-CO-R3-CO-O-R1＝[4a][D-1-b] gag-O-CO-R3-COOH÷R1-NH2→gag-O-CO-R3-CO-NH-R1＝[4b][D-2] gag-OH÷HOOC-R3-NH2→gag-O-CO-R3-NH2[D-2-a] gag-O-CO-R3-NH2÷R1-COOH→gag-O-CO-R3-NH-CO-R1＝[4c][E] gag-CO-R2b-R1[5]
R2b代表由具有與gag-COOH(如HO-R3-COOH，HO-R3-OH，HO-R3-NH2，H2N-R3-NH2，H2N-R3-COOH)反應(yīng)能力的間隔和光反應(yīng)活性化合物的功能基衍生出的基團(tuán)。[E-O-a] H2N-R3-NH2÷R1-COOH→H2N-R3-NH-CO-R1gag-COOH÷H2N-R3-NH-CO-R1[F-1]→gag-CO-NH-R3-NH-CO-R1＝[5-1][E-O-b] RNH-R3-NH2÷R1-COOH→RNH-R3-NH-CO-R1[F-2]RNH-R3-NH2-CO-R1[F-2]→H2N-R3-NH-CO-R1gag-COOH÷H2N-R3-NH-CO-R1[F-1] or[F-2]→gag-CO-NH-R3-NH-CO-R1＝[5-1]R is a protective group. gag-COOH÷HO-R3-COOH→gag-CO-O-R3-COOH[E-1-a] gag-CO-O-R3-COOH÷R1-OH→gag-CO-O-R3-CO-O-R1＝[5a][E-1-b] gag-CO-O-R3-COOH÷R1-NH2→gag-CO-O-R3-CO-NH-R1＝[5b][E-2] gag-COOH÷HO-R3-OH→gag-CO-O-R3-OH[E-2-a] gag-CO-O-R3-OH÷R1-COOH→gag-CO-O-R3-O-CO-R1＝[5c][E-3] gag-COOH÷HO-R3-NH2→gag-CO-O-R3-NH2[E-3-a] gag-CO-O-R3-NH2÷R1-COOH→gag-CO-O-R3-NH-CO-R1＝[5d] gag-COOH÷H2N-R3-OH→gag-CO-NH-R3-OH[E-4-a] gag-CO-NH-R3-OH÷R1-COOH→gag-CO-NH-R3-O-CO-R1＝[5e][E-5] gag-COOH÷H2N-R3-NH2→gag-CO-NH-R3-NH2[E-5-a] gag-CO-NH-R3-NH2÷R1-COOH→gag-CO-NH-R3-NH-CO-R1＝[5f][E-6] gag-COOH÷H2N-R3-COOH→gag-CO-NH-R3-COOH[E-6-a] gag-CO-NH-R3-COOH÷R1-OH→gag-CO-NH-R3-CO-O-R1＝[5g][E-6-b] gag-CO-NH-R3-COOH÷R1-NH2→gag-CO-NH-R3-CO-NH-R1＝[5h]R3優(yōu)選地為下列之一R3a:-(CH2)n-(n＝1至10);
R3b:-(CH2)p CHY-(Y為COOH或NH2以及p為1至10);
R3c-(CH2)m-C8H4-(CH2)l-(m＝1至10，1＝1或10)。
盡管在上面的例子中，只用了一個間隔基，但也可用多個間隔基。
在制備式[4b]，[5b]或[5h]產(chǎn)物時，上述光反應(yīng)活性的化合物[F-1]或[F-2]可用于代替R1-NH2。
原則上，作為光反應(yīng)活性基團(tuán)的R1可以是任意基團(tuán)，條件是它至少在曝光時進(jìn)行分子間和/或分子內(nèi)二聚形成環(huán)丁烷環(huán)。
在上述各式中，-COOH可以能與羥基或氨基反應(yīng)的反應(yīng)活性衍生物的形式(例如鹵化物，酸酐，活性酯)存在。
作為在式[1]，[4c]，[5c]至[5f]，等中存在的R1-CO-的特別優(yōu)選的例子，可以是具有下述結(jié)構(gòu)的基團(tuán)
其中R4的R5可以相同或不同，各自為氫原子或低級烷基或低級烷氧基或硝基或氨基;
其中R6為氫或鹵原子或低級烷基或鹵代低級烷基，R7為氫或鹵原子或氰基，羧基，低級烷氧羰基，低級烷基或鹵代低級烷基，而R8為低級亞烷基;
其中R9，R10和R11可以相同或不同，各自獨(dú)立地為氫原子或低級烷基，而R12為低級亞烷基。
上述式[6]至[8]的基團(tuán)作為與式[2]的相應(yīng)的R1a-CO-NH-R3-NH中的R1a-CO-(R1a為光反應(yīng)活性基團(tuán))及作為式[5-1]中的R1-CO-是特別優(yōu)選的，而R3a或R3b優(yōu)選作為R3。當(dāng)R3為R3b時，COOH優(yōu)選作為y。
作為式[3]，[4a]，[5a]，[5g]，等中的R1-O-優(yōu)選例子，可以是具有下述結(jié)構(gòu)的殘基
其中R13是氫或鹵原子或低級烷基或鹵代低級烷基，R14為氫或鹵原子或氰基，羧基，低級烷氧羰基，低級烷基或鹵代低級烷基，而R15為低級亞烷基;
其中R16和R17可以相同或不同，各自為氫原子或低級烷基或低級烷氧基或硝基或氨基。
下面舉例給出的式子的基團(tuán)也可作為R1的構(gòu)成單元
本發(fā)明可光硫化的GAG在曝光時可分子間二聚，于是包含在光反應(yīng)活性化合物分子中的光反應(yīng)活性基團(tuán)(至少含有一個乙烯基的基團(tuán))成對反應(yīng)，以下面給出的方程形成環(huán)丁烷環(huán)，給出相應(yīng)的交聯(lián)的GAG，它們具有二或三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，具有所需的交聯(lián)度。分子內(nèi)的二聚也與光硫化有關(guān)。
因此，根據(jù)本發(fā)明，具有所需交聯(lián)度，因而具有所需物理性質(zhì)(例如，機(jī)械結(jié)構(gòu)支撐性，水保留性，親水性，潤滑性，藥物釋放速度)和適于其應(yīng)用的所需生物學(xué)性質(zhì)(例如細(xì)胞粘連，生物降解性-吸收性、生理活性)的生物相容的光交聯(lián)GAGs可通過選擇或控制光反應(yīng)活性化合物和GAG(例如化學(xué)結(jié)構(gòu)，分子量等)和其中的光反應(yīng)活性化合物的含量(由光反應(yīng)活性化合物取代的程度(DS))而形成。這里所用的術(shù)語“取代程度(DS)”定義為連接在GAG中每個重復(fù)的二糖單元(每單元含一個糖醛酸和一個己糖胺)上的光反應(yīng)活性化合物或基團(tuán)的摩爾數(shù)。因而，例如，每個這種二糖元具有4個羥基(可取代的羥基)的透明質(zhì)酸當(dāng)用光反應(yīng)活性的化合物或基團(tuán)在所有羥基上連接時，給出DS為4，而硫酸軟骨素每個二糖單元中的三個羥基被光反應(yīng)活性化合物或基團(tuán)完全連接時產(chǎn)生的DS為3。
這里所用的術(shù)語“葡糖氨基聚糖”或“GAG”包括多聚乙酰神經(jīng)氨糖酸，透明質(zhì)酸(HA)，軟骨素，硫酸軟骨素(CS)，糖醛酸磷壁酸質(zhì)，硫酸皮膚素，肝素，硫酸乙酰肝素，硫酸角質(zhì)(硫酸角質(zhì)素)，多硫酸解質(zhì)，幾丁質(zhì)，脫乙酰幾丁質(zhì)，及它們的衍生物(?；苌铮嗔蛩峄?，去硫酸產(chǎn)品，去?；a(chǎn)品，等)。術(shù)語“低級”指上述的碳鏈，可以是直鏈或支鏈的，由1至6個碳原子組成。術(shù)語“鹵原子”包括氯，溴和碘原子以及術(shù)語“鹵代”用于指一個或多個氫原子被這些鹵原子取代。
在式[6]與式[1]，[4c]，[5-1]，[5C]至[5f]等的結(jié)合體中，R1CO-為，例如，由取代的或未取代的肉桂酸或其反應(yīng)活性衍生物衍生的殘基。作為取代的肉桂酸殘基，它們是那些在苯環(huán)的任何位置上有一或二個低級烷基，低級烷氧基，硝基或氨基的基團(tuán)。然而，從肉桂酸衍生的R1CO-是特別優(yōu)選的。
在式[7]與式[1]，[4C]，[5-1]，[5C]至[5f]，等的結(jié)合體中，R1CO-為，例如，由在1-位有一個羧基烷基作為取代基的尿嘧啶衍生物或其反應(yīng)活性衍生物衍生的殘基，在嘧啶環(huán)的5-位有由R6表示的氫或鹵原子或低級烷基或鹵代低級烷基，在6-位有由R7表示的氫或鹵原子或氰基，羧基，低級烷氧羰基，低級烷基或鹵代低級烷基，而低級亞烷基R8是由羧基烷基衍生的，并與gag的羥基在1-位形成酯鍵。尤其由1-(2-羧基乙基)胸腺嘧啶衍生的R1CO-是優(yōu)選的。
在式[8]與式[1]，[4C]，[5-1]，[5C]至[5f]，等的結(jié)合體中，R1CO-為，例如，由在7-羧基烷氧基取代的香豆素衍生物或其反應(yīng)活性衍生物衍生的殘基，在香豆素環(huán)的5，6和8位各自獨(dú)立地有分別由R9，R10，R11表示的氫原子或低級烷基，相應(yīng)地在7位，有由羧基烷氧基衍生的低級亞烷基R12，并與gag的羥基形成酯鍵。特別優(yōu)選的R1CO-基團(tuán)是由7-香豆氧基乙酸衍生的基團(tuán)。
在式[10]與式[3]，[4a]，[5a]，[5g]，等的結(jié)合體中，R1O-是由在1-羥基烷基取代的尿嘧啶衍生物或其反應(yīng)活性衍生物衍生的殘基，在嘧啶環(huán)的5位有由R13代表的氫或鹵原子或低級烷基或鹵代低級烷基，在6位有由R14代表的氫或鹵原子或氰基，羧基，低級烷氧羰基，低級烷基或鹵代低級烷基，在1位有由羥基烷基衍生的低級亞烷基R15，并與gag的羧基形成酯鍵。
在式[Ⅱ]與式[3]，[4a]，[5a]，[5g]，等的結(jié)合體中，R1O-為，例如，由取代或未取代的肉桂基醇或其反應(yīng)活性衍生物衍生的殘基。取代的肉桂基醇?xì)埢鶠?，例如，在苯環(huán)的任何位置有一或兩個低級烷基，低級烷氧基，硝基或氨基的基團(tuán)。
原起始化合物GAGsGAGs不限其來源或分子量。根據(jù)所需目的而選擇的GAGs既可以單獨(dú)使用也可以其兩種或多種的混合形式使用。但通常使用天然來源(動物器官提取物，發(fā)酵產(chǎn)品、等)的GAGs，需要時也用化學(xué)或酶促合成的GAGs或用半合成方法合成的GAGs。通過改變上述這些GAGs官能團(tuán)而衍生的產(chǎn)物也可使用。
GAG可以原有形式與光反應(yīng)活性化合物反應(yīng)，但經(jīng)常使用的形式為其與堿金屬如鈉，鉀等，堿土金屬如鎂，鈣，等，叔胺如三正丁基胺，三乙胺、吡啶，等形成的鹽。
當(dāng)與GAG鍵合的光反應(yīng)活性化合物不溶于水時，將光反應(yīng)活性的化合物加到含有GAG的有機(jī)溶劑中進(jìn)行反應(yīng)。
含有GAG的有機(jī)溶劑是這樣制備的例如，通過用陽離子交換劑處理GAG鈉鹽的水溶液形成羧酸根或硫酸根，將它們加到可與水混溶的有機(jī)溶劑[例如二甲基甲酰胺(DMF)，二甲亞砜(DMSO)，六甲基磷酰胺(HMPA)，吡啶，等]和叔胺(例如三正丁基胺)中形成GAG的銨鹽再蒸去水。
當(dāng)光反應(yīng)活性化合物是水溶性時，反應(yīng)可通過將光反應(yīng)活性化合物加到GAG(如鈉鹽)的水溶液中而進(jìn)行。
光反應(yīng)活性化合物如前所述被用于與GAGs或連接或可連接到GAGs上的間隔基的-OH，-COOH或-NH2這類基團(tuán)成鍵的光反應(yīng)活性化合物，具有-OH，-COOH或-NH2這類基團(tuán)。
(1)當(dāng)-COOH為功能團(tuán)時光反應(yīng)活性的化合物以酯的形式連接在GAGs或間隔基上，如式[1]，[5-1]，[5c]，[5d]，[5e]和[5f]，包括具有其中的OH或鹵素，例如，連接在式[6]至[8]的基團(tuán)上的化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物，即為取代或未取代的肉桂酸，1-羧基烷基-取代的尿嘧啶和7-羧基烷氧基取代的香豆素(7-香豆氧基羧酸)，和其反應(yīng)活性衍生物。作為反應(yīng)活性衍生物，可以是?；u(如酰氯等)和酸酐。
上述7-香豆氧基羧酸的酰鹵可通過將相應(yīng)的，任意取代的7-羥基香豆素與鹵代羧酸酯在堿存在下縮合并水解產(chǎn)生的7-香豆氧基羧酸酯而得到7-香豆氧基羧酸，或通過將相應(yīng)的任意取代的7-羥基香豆素與鹵代羧酸縮合得到7-香豆氧基羧酸，然后將這樣得到的，對應(yīng)于式[8]，可任意地帶有一個或多個取代基的7-香豆氧基羧酸與亞硫酰鹵(參見如 JP-A-3-48674)反應(yīng)而合成。
(2)當(dāng)-NH2為功能團(tuán)時下面給出的式[F-1]的光反應(yīng)活性化合物可以這樣得到將前述取代或未取代的肉桂酸，1-羧基烷基取代的尿嘧啶或7-羧基烷氧基取代的香豆素(7-香豆氧基羧酸)，或其反應(yīng)活性衍生物與式[X-1]化合物或通過將其氨基用叔丁氧羰基或芐氧羰基之類的氨基保護(hù)基保護(hù)而衍生的式[X-2]化合物反應(yīng)，如果需要再去保護(hù)。
(3)當(dāng)-OH為功能團(tuán)時相應(yīng)于式[9]的反應(yīng)活性衍生物可用作光反應(yīng)活性化合物。例如，可用在嘧啶環(huán)的1和2位間形成的環(huán)狀醚化合物。具體例子有1，2-O-橋亞乙基尿嘧啶，1，2-O-橋亞乙基胸腺嘧啶，1，2-O-橋亞乙基-5-氯尿嘧啶，1，2-O-橋亞乙基-5-三氯甲基尿嘧啶，1，2-O-橋亞乙基-6-氰基尿嘧啶，1，2-O-橋亞乙基-6-氯甲基尿嘧啶和1，2-O-橋亞乙基-6-三氯甲基尿嘧啶。
也要提到對應(yīng)于式[10]的取代或未取代的肉桂基醇。
(4)優(yōu)選的光反應(yīng)活性化合物盡管根據(jù)所需目的，所用的光反應(yīng)活性化合物應(yīng)從上述那些化合物中選擇，但從醫(yī)用觀點上優(yōu)選的是由既使當(dāng)以未反應(yīng)形式保留在交聯(lián)的GAGs中也最不可能產(chǎn)生副作用的化合物，如肉桂酸，胸腺嘧啶和香豆素衍生出的光活性化合物。
在本發(fā)明的實際應(yīng)用中，可光硫化的GAGs可含有一個或多個連接在同一個GAG分子或多個不同的GAG分子上的光反應(yīng)活性化合物。這也適用于上面的式[1]至[3]。因此，應(yīng)注意到本發(fā)明的交聯(lián)的GAGs在其意義上包括通過這類可光硫化的GAGs的交聯(lián)得到的產(chǎn)物。(1)與gag-OH的酯化反應(yīng)將一合適的GAG的叔胺鹽(例如三正丁基胺鹽，三乙胺鹽，吡啶鹽，等)，溶于一合適的溶劑(例如DMF，吡啶，DMSO，HNPA，等)，GAG的羥基與具有式[6]部分結(jié)構(gòu)的取代或未取代的肉桂酸，以每摩爾GAG的羥基0.5至5摩爾的量，或其反應(yīng)活性衍生物，例如酰鹵，在堿性催化劑(例如無水吡啶等)存在下進(jìn)行酯化反應(yīng)，或用具有式[7]或[8]部分結(jié)構(gòu)的R1COOH或其反應(yīng)活性衍生物在堿性催化劑(例如2-氯-1-甲基吡啶鎓碘化物，吡啶，等)，在0至100℃，優(yōu)選70至90℃，反應(yīng)幾十分鐘至幾十小時，優(yōu)選1至10小時酯化，給出本發(fā)明的可光硫化的GAG。
根據(jù)需要，每種可光硫化的GAG中的取代度(DS)可通過控制反應(yīng)條件而控制。例如，DS可通過增加R1COOH或其反應(yīng)活性衍生物相對起始GAG的摩爾比和/或延長反應(yīng)時間而增加。
反應(yīng)后，往反應(yīng)混合物中加入例如乙酸鈉飽和乙醇，乙醇，或甲醇，過濾收集產(chǎn)生的沉淀，用乙醇或甲醇洗滌，然后減壓干燥，這樣所需產(chǎn)品可以白色粉末的形式得到。
產(chǎn)生式[5c]或[5e]化合物的反應(yīng)可以與上述基本相同的方式進(jìn)行。
這樣得到的，其中每個二糖單元由一分子光反應(yīng)活性化合物取代的可光硫化的GAG的一些具體例子以單元的結(jié)構(gòu)式在下面示出。結(jié)構(gòu)不同的結(jié)構(gòu)單元，例如在所鍵合的光反應(yīng)活性基團(tuán)的數(shù)目上和/或其鍵合位置上不同的單元可以出現(xiàn)在同一分子中。
1)由將肉桂酸引入透明質(zhì)酸產(chǎn)生的可光硫化的GAG(HA-Cin)
2)由將1-(2-羧基乙基)胸腺嘧啶引入透明質(zhì)酸產(chǎn)生的可光硫化的GAG(HA-Thym)
3)由將7-香豆氧基乙酸引入硫酸軟骨素中產(chǎn)生的可光硫化的GAG
(2)用gag-COOH酰胺化[尤其是當(dāng)光反應(yīng)活性化合物被連到間隔基上時];參見式[5-1](2-1)當(dāng)R3＝R3a時當(dāng)式[X-1]或[X-2]的化合物為亞烷基二胺(如1，2-乙二胺)時，將GAG的合適叔胺鹽(如三正丁基胺鹽，三乙胺鹽，吡啶鹽，等)如上面方法(1)溶于適當(dāng)溶劑(如DMF，吡啶，DMSO，HMPA，等)，然后加入相對于GAG的羧基摩爾數(shù)稍過量的羥基化合物(如N-羥基琥珀酰亞胺，N-羥基鄰苯二甲酰亞胺，等)，和縮合劑(如二環(huán)己基碳二亞胺，1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳二亞胺，等)，反應(yīng)在0至50℃進(jìn)行1至20小時，給出其羧基被活化改進(jìn)的GAG。然后將該改進(jìn)的GAG與式[F-1]或[F-2]化合物的氨基在0至50℃進(jìn)行酰胺化反應(yīng)30分鐘至20小時，給出可光硫化的GAG。
可光硫化的GAG也可通過用GAG的水溶液并使式[F-1]或[F-2]化合物的氨基與GAG的羧基在縮合劑[如水溶性碳二亞胺如1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳二亞胺]的存在下于0至50℃進(jìn)行酰胺化反應(yīng)1至20小時而制備。
(2-2)當(dāng)R3＝R3b(Y＝COOH)當(dāng)式[X-1]或[X-2]化合物為例如堿性氨基酸(例如L-賴氨酸)時，GAG以水溶液的形式使用，式[F-1]或[F-2]化合物的氨基與GAG的羧基在0至50℃于縮合劑[例如水溶性碳二亞胺如1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳二亞胺]存在下進(jìn)行酰胺化反應(yīng)而給出可光硫化的GAG。
可光硫化的GAG也可以象方法(2-1)中那樣，通過GAG以合適的叔胺鹽的形式與羥基化合物如N-羥基琥珀酰亞胺在合適的溶劑如DMF中在縮合劑如二環(huán)己基碳二亞胺存在下反應(yīng)，并使產(chǎn)生的在其羧基上活化的GAG與式[F-1]或[F-2]化合物的氨基進(jìn)行酰胺化反應(yīng)而制備。
與式[2]，[4b]，[5b]或[5h]有關(guān)的反應(yīng)可以基本上與前述相同的方式進(jìn)行。
(3)與gag-COOH的酯化作用與前述方法(1)相似，將合適的GAG叔胺鹽(例如三正丁基胺鹽，三乙胺鹽，吡啶鹽，等)溶于適當(dāng)?shù)娜軇?如DMF，吡啶，DMSO，HMPA，等)中，式[9]尿嘧啶衍生物的反應(yīng)活性衍生物，例如環(huán)狀醚化合物，或取代或未取代的式[10]的肉桂基醇或其反應(yīng)活性衍生物與GAG的羧基在0至100℃于堿性催化劑(例如無水吡啶等)存在下進(jìn)行酯化反應(yīng)。
與式[4a]，[5a]或[5g]有關(guān)的反應(yīng)可以基本與前述相同的方式進(jìn)行。上述反應(yīng)之后，所形成的可光硫化的GAGs可用任何通常用于分離和純化GAGs的方法來分離和純化，沒有任何特殊限制。
因而，例如，可光硫化的GAGs，即所要產(chǎn)物，可與未反應(yīng)的GAGs或未反應(yīng)的光反應(yīng)活性化合物分離，并可這樣純化用陰離子或陽離子交換劑色譜的方法，利用其在有機(jī)溶劑中溶解性不同的方法(例如醇沉淀法)，鹽析或滲析。
當(dāng)本領(lǐng)域已知的那些交聯(lián)的葡糖氨基聚糖以凝膠或固體存在，因而未反應(yīng)物，催化劑，污染的微生物，熱原和其它雜質(zhì)很難從中除去，而本發(fā)明的可光硫化的GAGs由于可溶于水和/或有機(jī)溶劑因而可以較容易純化。由于這樣純化的可光硫化的GAGs在曝光時可發(fā)生光反應(yīng)活性基團(tuán)的分子間或分子內(nèi)二聚作用，因而容易產(chǎn)生被未反應(yīng)物，催化劑，污染的微生物，熱原等最低程度污染的交聯(lián)的GAGs。以上面方法合成和純化的可光硫化的GAGs的物理性質(zhì)隨用作原料的GAG，其分子量，所用的光反應(yīng)活性化合物，其用量及其它因素而變化，并可根據(jù)需要調(diào)節(jié)，使其適于預(yù)期的目的。一般地，它們的分子量范圍為4000至2，000，000，優(yōu)選10，000至1，000，000，由光反應(yīng)活性基團(tuán)取代的程度(DS)范圍為0.1至4.0，優(yōu)選0.1至3.0，并能溶于水和/或有機(jī)溶劑。溶解性可以根據(jù)需要控制。一般地，增加DS導(dǎo)致水溶性降低，但在有機(jī)溶劑如DMF中的溶解性增加。當(dāng)光反應(yīng)活性基為式[6]的肉桂酸衍生物，式[8]的7-香豆氧基羧酸或式[11]的肉桂基醇衍生物時，所得可光硫化的GAGs是相對疏水的。反之，當(dāng)光反應(yīng)活性基團(tuán)為式[7]或式[10]的尿嘧啶衍生物(無其是胸腺嘧啶衍生物)時，產(chǎn)生的可光硫化的GAGs是相對親水的。
優(yōu)選的DSs范圍隨可光硫化的GAG或交聯(lián)的GAG的預(yù)期用途，及所用的GAG和光反應(yīng)活性化合物而變化。對于生產(chǎn)對細(xì)胞非粘連的交聯(lián)的GAGs并將它們用作組織的非粘連材料，例如，DS在透明質(zhì)酸-肉桂酸酯(HA-Cin)的情況下，優(yōu)選為約0.1至0.5，在硫酸軟骨素-肉桂酸酯(CS-Cin)的情況下約0.1至3.0，在透明質(zhì)酸-胸腺嘧啶衍生物酯(HA-Thym)的情況下約0.2至1.0，在硫酸軟骨素-胸腺嘧啶衍生物酯(CS-Thym)的情況下約0.2至1.0。為了將生物物質(zhì)，藥物等包埋在交聯(lián)的GAGs的三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中，從而得到它們的控制釋放，1.0至2.5的DS對上述每個交聯(lián)的GAGs是優(yōu)選的。
更準(zhǔn)確地說，當(dāng)可光硫化的GAG是式[1]的可光硫化的透明質(zhì)酸衍生物時，分子量優(yōu)選在100，000至1，000，000的范圍，而由光反應(yīng)活性化合物的取代度(DS)優(yōu)選在0.1至3.0的范圍。當(dāng)可光硫化的GAG為式[1]的可光硫化的硫酸軟骨素衍生物時，分子量優(yōu)選的范圍為10，000至60，000，而DS在0.1至3.0的范圍。
在用作醫(yī)用材料時，可光硫化的GAGs和交聯(lián)的GAGs可具有任何形式。因此它們可以各種形式應(yīng)用，如溶液，凝膠，固體，等。基于所述可光硫化的GAGs或交聯(lián)的GAGs的本發(fā)明醫(yī)用材料根據(jù)需要可含有各種溶劑(如水，緩沖液，PBS，DMF，DMSO，等)，載體(如紗布，綿織或紡織纖維，非紡織纖維，軟填料或棉花狀材料，長絲或紗線，薄膜，多孔海綿，橡膠，塑料，金屬，人造器官，生物體組織表面，生物體的切口或傷口)，生物物質(zhì)(膠原，明膠，肝素，硫酸軟骨素，透明質(zhì)酸，硫酸皮膚素，等)，藥物，等等。對于用作醫(yī)用材料，可光硫化的GAGs可以塑模成特定形狀(膜狀，管狀，粒狀)或施加于，覆蓋在，粘貼或包埋其它物質(zhì)或如上所述的載體材料在內(nèi)。在這類情況下，可光硫化的GAGs在光反應(yīng)之前將它們?nèi)苡谒?優(yōu)選凈化水)，緩沖溶液(例如磷酸鹽緩沖液，碳酸鹽緩沖液)或醫(yī)學(xué)上可接受級別的有機(jī)溶劑(例如，DMF，DMSO)，將該溶液在由玻璃，石英，聚氯乙烯，聚苯乙烯，聚氨基甲酸乙酯等制成的平板或表面或容器中放置或展開，并將其風(fēng)干或用其它方法干燥來模塑，給出厚度為1μm至1mm的膜。交聯(lián)的GAGs可通過將用上述方法塑模的或溶液形式的可光硫化的GAGs在用于光交聯(lián)的射線或輻射曝光，從而引發(fā)光二聚反應(yīng)而產(chǎn)生。所用波長或波長范圍隨光反應(yīng)活性基團(tuán)的性質(zhì)而改變，但一般落在約260至400nm的范圍內(nèi)。更準(zhǔn)確地說，例如，高壓汞燈(450W)發(fā)出的光線可用于曝光(照射)，但應(yīng)濾去波長短于260-270nm的射線。盡管所需的曝光(反應(yīng))時間隨波長范圍，溫度和離光源的距離等因素而變化，但優(yōu)選能使反應(yīng)在30分鐘內(nèi)完成的條件。凝膠化(硫化)程度可通過在光反應(yīng)時調(diào)節(jié)可光硫化的GAG的濃度而控制。通常，所述濃度為1至30%，優(yōu)選為約2至20%。
由可光硫化的GAGs的光反應(yīng)而產(chǎn)生的二聚物結(jié)構(gòu)具體例子如下1)當(dāng)光反應(yīng)活性化合物是肉桂酸時
2)當(dāng)光反應(yīng)活性化合物為1-(2-羧基乙基)胸腺嘧啶時
3)當(dāng)光反應(yīng)活性化合物為7-香豆基氧基乙酸時 這樣制備的本發(fā)明交聯(lián)的GAGs的物理性質(zhì)可通過如GAG的性質(zhì)，光反應(yīng)活性基團(tuán)(化合物)的性質(zhì)，可光硫化的GAG的濃度，由光反應(yīng)活性化合物取代的程度(DS)，交聯(lián)度及光反應(yīng)時間等因素而控制。然而，一般地，它們顯示出的溶脹性＝[(溶脹態(tài)的重量-干燥態(tài)的重量)/干燥態(tài)的重量]在一定范圍(0.1至200)內(nèi)，因而其中可包括和存留的水的量在一定范圍。
隨由光反應(yīng)活性基團(tuán)(化合物)的DS和交聯(lián)度的增加，溶脹性值降低。
它們也顯示出與水的接觸角在一定范圍內(nèi)(10°至100°)。接觸角反映了交聯(lián)的GAG表面的疏水性/親水性。光反應(yīng)活性基團(tuán)的交聯(lián)(二聚)速率的增加導(dǎo)致接觸角值的增加，即疏水程度的增加。
交聯(lián)度(前述光反應(yīng)活性基團(tuán)進(jìn)行二聚化的百分?jǐn)?shù))可通過增加DS而增加。它還可通過控制所述光反應(yīng)而進(jìn)一步控制。
因而，交聯(lián)的GAGs的生物功能可通過改變交聯(lián)度而控制。例如，內(nèi)皮細(xì)胞之類的細(xì)胞傾向于與顯示高交聯(lián)度的交聯(lián)的GAGs粘連，盡管這一趨勢根據(jù)GAG和光反應(yīng)活性化合物的性質(zhì)而不同。這種趨勢對不含硫酸基團(tuán)的透明質(zhì)酸是明顯的。(參見實施例部分的照片)，而這種趨勢對含硫酸的GAGs(例如硫酸軟骨素)是很小的?；谶@一點，也可通過結(jié)合使用兩種或多種GAGs以促進(jìn)或抑制細(xì)胞粘連。而且，這一性質(zhì)可以用來在功能上區(qū)分人造血管的內(nèi)膜(最里面的壁)和外膜，即通過選擇GAGs和光反應(yīng)活性的基團(tuán)并控制DS和/或交聯(lián)度而制備細(xì)胞粘連性不同的不同的交聯(lián)的GAGs覆蓋內(nèi)膜和外膜。這樣，例如，內(nèi)膜可以作成對細(xì)胞非粘性的以防止血栓形成，而外膜可作成對細(xì)胞粘連的，因而允許纖維細(xì)胞與其粘連使其不漏血。本發(fā)明可光硫化的GAGs和交聯(lián)的GAGs可作為醫(yī)用材料，除了上面所述的用于制造人造血管的內(nèi)膜和外膜的材料外，還包括尤其用于制作人造皮膚，組織非粘性膜或材料，創(chuàng)傷愈合促進(jìn)材料，混合的人造器官，人造細(xì)胞外基質(zhì)和人造基膜。而且，藥物包埋可以通過將可光硫化的GAG溶液與生理活性物質(zhì)(如肝素，硫酸皮膚素，硫酸乙酰肝素，抗癌劑，抗炎劑，細(xì)胞激動素，激素，生長因子，或酶如組織血纖維蛋白溶酶原活化素，超氧化物歧化酶，或尿激酶)混合，并使這樣的溶液或由其得到的塑模進(jìn)行交聯(lián)的光反應(yīng)而實現(xiàn)。因此，可光硫化的GAGs和交聯(lián)的GAGs也可用作實現(xiàn)包埋于其中的藥物控制釋放的載體。
一些典型應(yīng)用由下更具體描述[非粘連材料]本發(fā)明的交聯(lián)的GAGs可作為非粘連材料，用于防治外科創(chuàng)傷不希望發(fā)生的粘連并促進(jìn)愈合，例如，使用交聯(lián)GAGs膜覆蓋腹膜壁和腹膜內(nèi)器官(如肝等)，借此保護(hù)腹膜中的損傷(缺損)，從而防止粘連并促進(jìn)創(chuàng)傷愈合。所述膜可根據(jù)創(chuàng)傷愈合速率被降解和吸收。
溶液形式的可光硫化的GAGs可用與上所述的相同目的，通過向創(chuàng)傷部位注射該溶液并覆蓋表面，然后用光照射同一部位從而導(dǎo)致在體內(nèi)形成交聯(lián)膜。更具體講，這種技術(shù)可用于防止粘連和/或填塞內(nèi)窺鏡操作中的缺損。
對于其作為非粘連材料的應(yīng)用，交聯(lián)GAGs(包括體內(nèi)交聯(lián)GAGs在內(nèi))最好應(yīng)具有適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度，以防止膜破裂，并阻止組織(細(xì)胞)粘連，及正比于傷口愈合速度的生物降解能力;生物降解產(chǎn)物應(yīng)當(dāng)基本上是無毒的，既使當(dāng)其被活有機(jī)體吸收時也如此。通過選擇可光硫化的GAG(選擇GAG種類和光反應(yīng)活性化合物，以及DS)以及照射條件(如離光源的距離，光源種類，強(qiáng)度，膜厚度等)來控制這些功能。
本發(fā)明的交聯(lián)GAGs可做為包嵌藥物在其三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中以達(dá)到受控釋放藥物目的的材料(載體或賦形劑)。因而，包嵌或包合的藥物可依據(jù)藥物性質(zhì)和使用方式在一定時間內(nèi)釋放出來，并在需要藥物的藥物釋放的周圍維持一定范圍的藥物濃度。
受控藥物釋放的速率可通過選擇可光硫化的GAG(選擇GAG種類和光反應(yīng)活性基團(tuán)，以及DS)和照射條件(如曝光時間，離光源的距離，光源功率等)來控制。既然如此，盡管釋放速率通常隨著藥物的分子量和藥物與交聯(lián)GAG之間的靜電引力的增加而降低，但所述速率通過按照其相應(yīng)的化學(xué)結(jié)構(gòu)(根據(jù)分子量，電荷狀態(tài)(親水度或疏水度)，等)選擇上述與藥物結(jié)合的可光硫化的GAG來控制達(dá)到預(yù)定范圍。
在本發(fā)明的該目的中，藥物在溫和條件下被固定，因而在藥物分解的過程中藥物是穩(wěn)定的，并且與先有技術(shù)相比可以防止其中活性的降低。
受控釋放藥物材料或制劑各自包含交聯(lián)GAG和包嵌在其內(nèi)的藥物，根據(jù)藥物性質(zhì)和使用方式，它們可制成任何所要形式。因此，例如，它們可被制成膜(膜，涂層)，凝膠，凍膠，乳膏，懸浮劑，微膠囊，片劑，粒劑，粉劑等等。也可以通過用包含可光硫化的GAG和藥物的組合物浸漬載體(如沙布，敷料材料，編織或紡織纖維，紙，棉花，非紡織品，膜，多孔海綿)或者把所述組合物施加到這種載體上使可光硫化的GAG成為備用狀態(tài)，隨后通過照射轉(zhuǎn)換成交聯(lián)GAG。此外，包含可光硫化的GAG和藥物的組合物可被施加到這種如人工器官(如人造血管，人工心臟)的結(jié)構(gòu)的表面和內(nèi)部，然后進(jìn)行硫化(交聯(lián))。
為包嵌藥物在本發(fā)明交聯(lián)GAG之內(nèi)，藥物溶在或懸浮在水溶液或有機(jī)溶劑(如DMF)溶液中，所述溶液含有約1至30%重量，例如，相應(yīng)可光硫化的GAG和藥物的濃度約0.001至80%，在加入所需要的各種添加劑之后，將形成的組合物塑模，干燥，然后用光照射。交聯(lián)后，模制品就此應(yīng)用或視需要得到固體，半固體或懸浮體形式的受控釋放藥物材料。
本發(fā)明的受控釋放藥物材料可用作藥物制劑。那么，包含藥物的交聯(lián)GAGs可以本身單獨(dú)制劑或與常規(guī)藥學(xué)上可接受的添加劑如防腐劑，穩(wěn)定劑，局部麻醉劑，分散劑，模壓性能改性劑，加溶劑等等一同制劑成所要劑型。例如，在調(diào)節(jié)其粒度為約0.5至40μm之后，包含藥物的交聯(lián)GAGs可與分散劑(如吐溫80，HCO60(Nippon Chemicals)，羧甲基纖維素，藻酸鈉等)，防腐劑(如對羥苯甲酸甲酯，對羥苯甲酸丙酯，芐醇，2-三氯叔丁醇等)，等滲張劑(isotonizsing agents)(如氯化鈉，甘油，山梨醇，葡萄糖等)以及其它可能需要的添加劑一同配制水懸(浮)液，或者通過將其分散在植物油如橄欖油，芝麻油，花生油，棉子油，玉米油，或丙二醇等中配制油懸(浮)液。包含藥物的交聯(lián)GAGs也可單獨(dú)或與賦形劑(如淀粉，碳酸鈣等)，粘合劑(如淀粉，阿拉伯樹膠，羧甲基纖維素，聚乙烯吡咯烷酮，羥丙纖維素等)，潤滑劑(如滑石，硬脂酸鎂，聚乙二醇6000等)和/或類似物的混合物通過直接壓模制備片劑或制備粉劑，粒劑等。如將粉劑，粒劑或其它制劑填入膠囊內(nèi)便得到包含藥物的膠囊。此外，包含藥物的交聯(lián)GAGs本身也可塑模成膜或固定在一些其它載體上，從而得到可用于經(jīng)皮吸收的制劑，眼制劑(如角膜創(chuàng)傷愈合促進(jìn)劑)，用于包嵌在生物體內(nèi)的制劑，或可的可光硫化的GAG的一些具體例子以單元的結(jié)構(gòu)式在下面示出。結(jié)構(gòu)不同的結(jié)構(gòu)單元，例如在所鍵合的光反應(yīng)活性基團(tuán)的數(shù)目上和/或其鍵合位置上不同的單元可以出現(xiàn)在同一分子中。
1)由將肉桂酸引入透明質(zhì)酸產(chǎn)生的可光硫化的GAG(HA-Cin)
2)由將1-(2-羧基乙基)胸腺嘧啶引入透明質(zhì)酸產(chǎn)生的可光硫化的GAG(HA-Thym)
10.類固醇如氫化可的松，去氫氧化可的松，地塞米松，倍他米松等;
11.創(chuàng)傷愈合促進(jìn)劑如生長因子，膠原等(參看JP-A-60-222425)。
此外，上述藥物還包括具有生理活性的多肽，激素，結(jié)核菌抑制藥，止血藥，抗糖尿病藥，血管舒張藥，抗心律不齊藥，強(qiáng)心劑，抗過敏劑，抗抑郁藥，鎮(zhèn)癲藥，肌肉松弛藥，鎮(zhèn)咳祛痰藥，抗生素等等。
本發(fā)明的受控釋放藥物材料可作為醫(yī)學(xué)材料用作制備如人工器官(如人工血管，人工心臟等)之類結(jié)構(gòu)的成分(如表面)。在這種情況下，它們尤其用作形成與血液接觸的表面的醫(yī)學(xué)材料，其中抗凝劑(如肝素，乙酰肝素硫酸鹽，血栓調(diào)節(jié)蛋白);纖維蛋白溶解激活劑(如纖維蛋白激酶，尿激酶)和/或抗血小板物質(zhì)可包嵌在交聯(lián)GAGs內(nèi)以得到控制釋放這些物質(zhì)的目的和使所述表面變?yōu)榭寡ㄐ纬??；蚺c細(xì)胞粘性蛋白如膠原，明膠和纖維結(jié)合素混合的或者在化學(xué)結(jié)合此處所述的這類蛋白質(zhì)之后的本發(fā)明可光硫化的GAGs可轉(zhuǎn)換成交聯(lián)GAGs，這種GAGs可用作容許細(xì)胞(內(nèi)皮細(xì)胞，上皮細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞等)粘連和生長的人工細(xì)胞外基質(zhì)和人工基膜(參看 JP-A-1-124465，61-128974，和62-270162)。它們還可用作雜種類型的人工器官(人工血管，人工皮膚等)。
下述實施例用于進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不能認(rèn)為限制本發(fā)明的范圍。
實施例中，一些典型的物理特性和生理功能按照下述方法利用下面給定的儀器測定或評估。
1H NMR光譜使用JOEL JNM-JX270 FTNMR光譜儀測量，UV/VIS光譜利用JASCO Ubest-30 UV/VIS光譜儀測量。
各個光反應(yīng)活性化合物的取代度(DS)依據(jù)1H NMR或UV數(shù)據(jù)計算，也可通過比較低分子量的典型化合物(GAG降解產(chǎn)物)和所連接的光反應(yīng)活性化合物的紫外吸收數(shù)據(jù)測定取代度。
各個交聯(lián)GAGs衍生物的溶脹度按下所述測定溶脹度-[Wg(溶脹)-Wg(干燥)]/Wg(干燥)其中Wg(干燥)表示干燥的經(jīng)光照射所制備的交聯(lián)GAG膜的重量，以及Wg(溶脹)表示交聯(lián)GAG膜在純化的水中浸漬24小時后的重量。
至于接觸角，前置接觸角和后退接觸角通過利用接觸角測角計(靜態(tài)Kyowa接觸角儀CA-D，Kyowa Kaimen Kagaku K.K.)按液滴方法測量。當(dāng)單獨(dú)使用述語“接觸角”時，一般是指“前進(jìn)接觸角”。
內(nèi)皮細(xì)胞粘連實驗按下述方法進(jìn)行。各種可光硫化的GAG通過從溶劑中鑄型制成膜，并將該膜固定在由聚苯乙烯(TCPS)制造的組織培養(yǎng)皿的底部。利用從牛主動脈上取得的內(nèi)皮細(xì)胞在無菌條件下接種。所用的培養(yǎng)基是補(bǔ)充有10-15%胎兒的腓腸血清(FCS)的Dulbecco′s modified Eagle medium(DMEM)。在37℃培育24小時后，通過借助相襯顯微鏡觀察判斷細(xì)胞粘連是否發(fā)生。對于細(xì)胞生長的評價，使用1-2天后的生長速率。
實施例1制備透明質(zhì)酸-肉桂酸酯以及通過它們的光化反應(yīng)制備交聯(lián)透明質(zhì)酸(1)制備透明質(zhì)酸-肉桂酸酯將無水吡啶(30ml)加到透明質(zhì)酸(分子量880，000)三正丁基胺鹽的二甲基甲酰胺(DMF)(150mg/35ml)溶液中，隨后于室溫在劇烈攪拌的情況下加入26.64mg肉桂酰氯。在75℃將酯化反應(yīng)進(jìn)行2小時，然后向反應(yīng)混合物中加入被乙酸鈉飽和的乙醇，收集產(chǎn)生的沉淀并用乙醇充分洗滌以除去未反應(yīng)的肉桂酰氯，得到透明質(zhì)酸的肉桂酸酯。組份(lot)HA-Cin-3產(chǎn)量95.6mg結(jié)合的肉桂酸11.0Wt.%(基于1H NMR光譜)DS0.50上述產(chǎn)物的1H NMR光譜見附圖1所示。典型的特征吸收見下6-8ppm:歸因于肉桂酸苯環(huán)和肉桂酸雙鍵上的質(zhì)子;
2ppm:歸因于透明質(zhì)酸N-乙?；霞谆馁|(zhì)子。
計算這些質(zhì)子數(shù)量之間的比值并用于測定由上給出的結(jié)合的肉桂酸量，DS值。
(2)制備硫化(交聯(lián))的透明質(zhì)酸膜將30mg組分HA-Cin-3的DMF溶液置于載玻片上(24mm×24mm)并使用無菌空氣加熱至40℃干燥。使用450-W高壓汞燈通過被水覆蓋的派熱克斯濾光片照射，使所形成的膜曝光，上述濾光片用來濾去270nm以前波長的光。這樣得到硫化(即交聯(lián))的透明質(zhì)酸膜。
279nm的吸收峰隨著照射而衰減(附圖2)。當(dāng)衰減百分率穩(wěn)定后停止照射(照射時間30分鐘)。
組分HA-Cin-3-2實施例2使用相同原料和實施例1中所用的方法制備透明質(zhì)酸-肉桂酸酯，但透明質(zhì)酸與肉桂酸間的用量比按下列表1中所述變化(透明質(zhì)酸的用量保持150mg)。并且按實施例1的方法制備硫化(交聯(lián))的透明質(zhì)酸膜表1透明質(zhì)酸-肉桂酸酯 交聯(lián)的透明質(zhì)酸組分 產(chǎn)率 結(jié)合肉桂酸 DS 組分HA-Cin-1 92.3mg 2.0Wt% 0.10 HA-Cin-1-22 97.3 6.5 0.35 2-24 111.4 14.0 0.87 4-25 117.0 22.5 1.28 5-26 139.2 36.0 2.43 6-27 149.7 46.0 3.65 7-2實施例3硫化的透明質(zhì)酸膜的接觸角測定由實施例1和2所得的各種硫化的透明質(zhì)酸膜的前進(jìn)和后退接觸角。結(jié)果列于附圖3。兩種接觸角很清楚地隨著肉桂酸殘基的DS增加而增加。
接觸角的增加反映出膜表面疏水性的增加。
實施例4硫化的透明質(zhì)酸膜的溶脹度的測量通過將由實施例1和2所得到的各種硫化的透明質(zhì)酸膜在純化水中溶脹24小時測量它們的溶脹度。結(jié)果見附圖4所示。
如附圖4所示，溶脹度隨著肉桂酸殘基DS的增加而降低。
溶脹度的降低反映出所述膜的疏水性的增加。
實施例5內(nèi)皮細(xì)胞對硫化的透明質(zhì)酸膜的粘連培育24小時之后，評估內(nèi)皮細(xì)胞對實施例1和2所得到的硫化的透明質(zhì)酸膜[組分HA-Cin-3-2(DS＝0.5)，4-2(DS＝0.87)，5-2(DS＝1.28)，和6-2(DS＝2.43)]的粘連力或附著力。結(jié)果見附圖5所示(像片)。
如附圖5所示，內(nèi)皮細(xì)胞的粘連力隨著肉桂酸殘基的DS值的增加而趨于增加。
DS＝0.5的膜HA-Cin-3-2顯示出足夠的細(xì)胞非粘連效果。從而被發(fā)現(xiàn)具有組織防粘材料所需要的基本特性。
所得資料也可作為與利用本發(fā)明的交聯(lián)GAGs與細(xì)胞粘性蛋白質(zhì)如膠原，明膠和纖維結(jié)合素結(jié)合制備人工細(xì)胞外基質(zhì)或人工基膜，并容許內(nèi)皮細(xì)胞，上皮細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞粘附于生長于上所述基質(zhì)或膜，提供雜種(hybrid type)人工器官(人工血管，人工皮膚等)有關(guān)的基本資料。
實施例6制備硫酸軟骨素-肉桂酸酯以及通過它們的光化反應(yīng)制備交聯(lián)的硫酸軟骨素(1)制備硫酸軟骨素-肉桂酸酯將無水吡啶(30ml)加到硫酸軟骨素(分子量＝60，000)的三正丁基胺鹽的二甲基甲酰胺(247mg/15ml)溶液中。隨后在室溫及劇烈攪拌下，向混合物中加入19.78mg肉桂酰氯。反應(yīng)在75℃進(jìn)行2小時。向反應(yīng)混合物中加入被乙酸鈉飽和的乙醇，收集產(chǎn)生的沉淀，用乙醇充分洗滌，減壓干燥。
組分CS-Cin-1產(chǎn)量152mg結(jié)合肉桂酸7.52Wt.%DS0.33(2)制備交聯(lián)的硫酸軟骨素膜將上述步驟(1)中制備的產(chǎn)物CS-Cin-1溶在磷酸鹽緩沖溶液中，濃度15%，然后使用與實施例1中所用的相同汞燈照射產(chǎn)生凝膠體。
組分CS-Cin-1-2
實施例7使用與實施例6中所用的相同材料和方法制備硫酸軟骨素-肉桂酸酯，但硫酸軟骨素與肉桂酸間的用量比按下表2中所述變化(硫酸軟骨素的用量保持247mg)，并從此按與實施例1所用的相同方法制備交聯(lián)硫酸軟骨素膜。
表2硫酸軟骨素-肉桂酸酯 交聯(lián)的硫酸軟骨素組分 產(chǎn)量 結(jié)合的肉桂酸 DS 組分CS-Cin-2 165.7mg 11.59wt% 0.51 CS-Cin-2-23 170.0 14.0 0.65 3-24 195.3 25.8 1.37 4-25 233.8 38.6 2.43 5-2將組分CS-Cin-2(DS＝0.51)溶于磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中，形成不同濃度的溶液，將溶液用光照射30分鐘，然后檢查膠凝度(degree of gelalion)，所得結(jié)果見附圖6所示。如附圖6所示，膠凝度隨著濃度的增加而增加。
膠凝度(%)按下式計算百分膠凝度(%)＝100×(A-X)/(A-B)其中A＝照射前吸光度(OD 275nm)B＝充分照射至吸光度達(dá)到穩(wěn)定常數(shù)后得到的吸光度(OD 275nm)，以及X＝照射30分鐘后吸光度(OD 275nm)。
將組分CS-Cin-3(DS＝0.65)的PBS 15%溶液用光照射，膠凝狀態(tài)遵循時間函數(shù)。因而，在每次曝光周期之后，將所形成的凝膠體在去離子水中浸漬24小時，除去凝膠體表面的水份后稱重。然后干燥凝膠體，計算溶脹度。同時也測定膠凝度。所得結(jié)果見附圖7所示。
膠凝度隨著曝光時間的延長而增加，但溶脹度卻隨著曝光時間的延長而降低。
對組份CS-Cin-1至5也評估了它們在PBS中的膠凝特性，以及產(chǎn)生的凝膠體的溶脹度。從而所發(fā)現(xiàn)的膠凝度或溶脹度與肉桂酸殘基(摩爾比以載有雙糖的硫酸軟骨素單位為基準(zhǔn))的DS值間的關(guān)系見附圖8所示。
肉桂酸殘基的DS值的增加導(dǎo)致膠凝度增加，但溶脹度迅速降低。
實施例8硫化的硫酸軟骨素膜的溶脹度評估將實施例6和7中所合成的硫酸軟骨素-肉桂酸酯塑模成可光硫化膜，然后將該膜用光照射30分鐘進(jìn)行交聯(lián)，得到硫化的硫酸軟骨素膜。
測量這些硫化的軟骨素膜的溶脹度，結(jié)果見附圖9所示。
結(jié)果表明與硫化的透明質(zhì)酸膜不同，硫化的硫酸軟骨素膜的溶脹度在既使當(dāng)肉桂酸殘基的DS值增加時也不象硫化的透明質(zhì)酸膜那樣迅速降低。這大概是由于硫化的硫酸軟骨素膜具有硫酸根以及比硫化透明質(zhì)酸膜高的親水性的原因。
實施例9測量實施例8中所得到的硫化的硫酸軟骨素膜的接觸角，并畫出其對肉桂酸殘基的DS值的關(guān)系曲線。結(jié)果見附圖10所示。附圖10中的圖解表示表明交聯(lián)硫酸軟骨素與交聯(lián)透明質(zhì)酸比較，顯示出較小的接觸角。這大概也是由于親水性不同的原因。
實施例10內(nèi)皮細(xì)胞對硫化的硫酸軟骨素膜的粘連按與實施5所述的相同方法，檢查內(nèi)皮細(xì)胞對實施8所得的硫化的硫酸軟骨素膜的粘連。與硫化的透明質(zhì)酸膜不同，觀察到與肉桂酸殘基的DS值無關(guān)的非粘連性。
實施例11肉桂酸衍生物與透明質(zhì)酸的羧基的結(jié)合及交聯(lián)(1)合成肉桂?；叶孵０穼⑷夤瘐Ｂ?1.666g)溶于100ml氯仿中，并在0℃向溶液中滴加入6g1，2-乙二胺的氯仿溶液。在40℃攪拌20小時后，反應(yīng)混合物用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌，然后用水充分洗滌。減壓濃縮有機(jī)溶劑層，殘余物用乙醇重結(jié)晶，得到所要產(chǎn)物(1.58g，以下稱作化合物A)。
(2)合成Nα-肉桂?；?L-賴氨酸將N∈-叔丁氧羰基-L-賴氨酸(2.58g)溶于50ml二甲基甲酰胺中，向該溶液中加入30ml無水吡啶。向混合物中加入肉桂酰氯的氯仿溶液(1.665g/20ml)，反應(yīng)在40℃下進(jìn)行。減壓濃縮反應(yīng)混合物至干，將殘余物溶在3.6N HCl/二噁烷(33ml)中，放置4小時后，減壓濃縮溶液，得到所要產(chǎn)物(2.43g，以下稱作化合物B)。
(3)將肉桂?；叶孵０放c透明質(zhì)酸結(jié)合將150mg透明質(zhì)酸鈉(分子量＝1，200，000)溶在30ml水中，隨后加入42.75mg化合物A和71.9mg 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽。反應(yīng)在室溫下進(jìn)行20小時。向反應(yīng)混合物中加入1M碳酸氫鈉水溶液，室溫放置1小時后，再加入乙酸鈉飽和的乙醇。收集產(chǎn)生的白色沉淀，并用乙醇充分洗滌。
組分HA-CinA-1產(chǎn)量176.2mg結(jié)合的化合物A16.58Wt.%DS0.5(4)將Nα-肉桂?；?L-賴氨酸與透明質(zhì)酸結(jié)合向透明質(zhì)酸的三正丁基胺鹽(分子量＝880，000)的二甲基甲酰胺溶液(150mg/35ml)內(nèi)加入1.224g N-羥基琥珀酰亞胺和55mg二環(huán)己基碳化二亞胺，并將反應(yīng)先在0℃進(jìn)行1小時，然后在室溫進(jìn)行10小時，用于活化透明質(zhì)酸的羧基。向反應(yīng)混合物中加入乙醚并收集產(chǎn)生的沉淀，乙醚洗滌，減壓干燥，得到相應(yīng)的活化的透明質(zhì)酸酯。
將該活化的透明質(zhì)酸溶于二甲基甲酰胺中，向該溶液中加入化合物B的二甲基甲酰胺溶液(44mg/50ml)，反應(yīng)在室溫下進(jìn)行20小時。向反應(yīng)混合物中加入乙酸鈉飽和的乙醇，濾出所產(chǎn)生的沉淀并用乙醇洗滌純化。
組分HA-CinB-1產(chǎn)量122.1mg結(jié)合的化合物B25.92Wt.%DS0.5(5)制備硫化的透明質(zhì)酸膜按與實施例1所述的相同方法，將組分HA-CinA-1和HA-CinB-1(各自30mg)模塑成膜，并利用光照射交聯(lián)。
如此制備的硫化的透明質(zhì)酸膜(組分各自為HA-CinA-1-2和HA-CinB-1-2)各自顯示出溶脹度值為1.2和1.4g H2O/g凝膠體。
實施例12合成透明質(zhì)酸-[(1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶]酯(1)向含有0.317g碘化2-氯-1-甲基吡啶鎓的透明質(zhì)酸(分子量1，000，000)(以下稱作HA100)二甲基甲酰胺(DMF)溶液(175mg/50ml)中加入0.245g 1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶和0.461g三乙胺，反應(yīng)在90℃進(jìn)行4小時。減壓除去DMF，加入過量乙醇，收集所產(chǎn)生的沉淀，用乙醇洗滌，減壓干燥。所得到的白色沉淀是透明質(zhì)酸-[1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶]酯。
組分HA-Thym-1產(chǎn)量160.0mg
結(jié)合的胸腺嘧啶9.1Wt.%DS0.46(DS值依據(jù)由1H NMR所測定的胸腺嘧啶的甲基質(zhì)子的數(shù)目與透明質(zhì)酸的乙酰基質(zhì)子的數(shù)目間的比率來測定。)實施例13合成透明質(zhì)酸-[1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶]酯(2)按與實施例12中所述的相同方法，制備幾組透明質(zhì)酸-[1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶]酯，但使用表3中所述條件。
表3反應(yīng)條件 物理特性組份 胸腺嘧啶/ 溫度 時間 DS 溶解度(mg/ml)HA OH摩爾比 (℃) (hrs) 水 DMFHA-Thym-2 0.5/1.0 90 3 0.05 1 203 1.0/1.0 75 2 0.125 10 804 2.0/1.0 75 2 0.14 10 805 0.67/1.0 90 4 0.17 50 806 1.0/1.0 90 3 0.26 20 807 1.0/1.0 90 6 0.35 20 808 0.67/1.0 100 4 0.37 50 809 3.0/1.0 90 3 2.40 0 100
實施例14利用透明質(zhì)酸-[1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶]酯(1)的光化反應(yīng)制備交聯(lián)的透明質(zhì)酸按照與實施例1中所述的相同方法，利用組份HA-Thym-1(DS＝0.46)制備膜，并將膜用氬燈放射出的紫外(UV)射線照射。胸腺嘧啶二聚體形成的過程被發(fā)現(xiàn)可作為曝光時間的函數(shù)，見附圖11所示。
實施例15利用透明質(zhì)酸-[1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶]酯(2)的光硫化作用(光化反應(yīng))制備硫化的透明質(zhì)酸膜按與實施1中所述的相同方法，將實施例13中所制得的組分HA-Thym-3，4，6，7，8和9(DS值各自為0.125，0.14，0.26，0.35，0.37和2.40)各自模塑成膜，并將各膜利用氬燈用UV照射。如此得到的硫化的透明質(zhì)酸膜各自被稱作組分HA-Thym-3-2，4-2，6-2，7-2，8-2和9-2。這些膜的膠凝度(%)和溶脹度數(shù)值見下表4所示。
表4組分 膠凝度(%) 溶脹度HA-Thym-3-2 75.39 34.764-2 74.5 45.006-2 88.9 32.637-2 94.0 40.178-2 99.4 32.179-2 98.0 0.56實施例16合成透明質(zhì)酸-[1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶]酯(3)將透明質(zhì)酸的DMF溶液(1.0mM)在分子篩預(yù)干燥后再進(jìn)一步脫氣4小時充分脫水。單獨(dú)將含有1-(2-羧乙基)-胸腺嘧啶(相對于透明質(zhì)酸的各羥基基團(tuán)改變摩爾比率，參看附圖12)，碘化2-氯-1-甲基吡啶鎓(1.2mM)和三乙胺(1.2mM)的DMF的溶液在室溫攪拌30分鐘。將該溶液滴加到補(bǔ)充有三乙胺(1.2mM)的上述透明質(zhì)酸溶液。將形成的混合物在90℃攪拌3，5或8小時。減壓濃縮反應(yīng)混合物并向殘余物中加入甲醇。濾出所生成的沉淀，甲醇洗滌，干燥。在該情況下，得到DS值不同的透明質(zhì)酸-[1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶]酯(HA-Thym;DS＝0.2，0.4，0.6，0.7，0.9，1.3，1.8，2.2)。
所用的1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶的摩爾比率與DS值之間的關(guān)系曲線的例子見附圖12所示。
實施例17合成硫酸軟骨素-[1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶]酯使用硫酸軟骨素(分子量＝60，000)進(jìn)行實施例16的步驟，1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶的摩爾比相對于硫酸軟骨素的各羥基基團(tuán)而變化，且酯化反應(yīng)時間為3，5或9小時。向各反應(yīng)混合物中加入甲醇或二乙醚用于沉淀產(chǎn)物。當(dāng)使用二乙醚時，沉淀用甲醇充分洗滌。這樣得到DS值不同的硫酸軟骨素-[1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶]酯(CS-Thym;DS＝0.09，0.4，0.8，0.9，1.3，1.7，1.8，2.2)。
所用的1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶的摩爾比率與DS值之間的關(guān)系曲線的例子見附圖13所示。
DS-溶解性(在水或DMF中)的關(guān)系見表5所示。
表5溶解性DS 水 DMF0.4 溶解 溶解0.9 溶解 溶解1.3 微溶 溶解1.7 不溶 溶解實施例18利用胸腺嘧啶衍生物制備硫化的透明質(zhì)酸膜和硫化的硫酸軟骨素膜使用實施例16或17中所得到的各種GAG的1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶酯制備上述膜。
例如，將各種透明質(zhì)酸-[1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶]酯(HA-Thym;DS＝0.2，0.4，0.6，0.7，0.9，1.3，1.8，2.2)和硫酸軟骨素-[1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶]酯(CS-Thym;DS＝0.09，0.4，0.8，0.9，1.3，1.7，1.8，2.2)溶在DMF中，得到5%溶液，將200μl溶液置于載片上(直徑14mm)，用滅菌空氣在35℃干燥。所生成的膜用來自400W高壓汞燈通過被水覆蓋的派熱克斯濾光片的射線照射，得到交聯(lián)的GAG膜。
已發(fā)現(xiàn)當(dāng)按上述方式照射干燥的薄的硫酸軟骨素-[1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶]酯(CS-Thym)膜(DS＝0.09，厚度＝2-3μm)時，在270nm的吸收變化與曝光時間間的關(guān)系，曲線見附圖14所示。并發(fā)現(xiàn)在那種情況下，膠凝度(%)與曝光時間間的關(guān)系曲線見附圖15所示。具有適合實際應(yīng)用厚度(10-12μm)的CS-Thym(DS＝0.09)膜也按相同方式照射;膠凝度(%)與曝光時間間的關(guān)系曲線見附圖16所示。
按照相同方式照射干燥的透明質(zhì)酸-[1-(2-羧乙基)胸腺嘧啶]酯(HA-Thym)膜(DS＝0.9，厚度＝10-12μm)，所得到的溶脹度-曝光時間的關(guān)系曲線見附圖17所示。在照射前和照射后(3小時)測量各種DS值不同的HA-Thym膜的溶脹度，并畫出DS對所得數(shù)值的關(guān)系曲線，所得曲線見附圖18所示。
本實施例中所得到的且DS值不同的幾種HA-Thym-或CS-Thym-衍生的光硫化的膜的接觸角和溶脹度值見表6所示。
表6可光硫化的GAG 接觸角(度)±SD 溶脹度HA-Thym(0.6) - 32±7HA-Thym(0.9) - 13±4HA-Thym(1.3) - 7HA-Thym(1.8) 54±3 0CS-Thym(0.9) - 40±13CS-Thym(1.3) - 22±5CS-Thym(1.8) -CS-Thym(2.2) 70±2 3實施例19內(nèi)皮細(xì)胞對交聯(lián)的透明質(zhì)酸膜的粘連性將內(nèi)皮細(xì)胞在如實施例18中用胸腺嘧啶衍生物制備的DS值不同的交聯(lián)的透明質(zhì)酸膜(DS＝0.4，0.6，1.3，1.8)中培養(yǎng)，待培養(yǎng)6小后評估細(xì)胞的粘連度。
結(jié)果，在任何DS值不同的交聯(lián)透明質(zhì)酸膜上基本上沒有觀察到細(xì)胞的粘連，增大(擴(kuò)展)及生長。相反，在對比TCPS的孔中發(fā)現(xiàn)正常結(jié)合，增大(擴(kuò)展)和生長。
實施例20合成硫酸軟骨素-(7-香豆氧基乙酸)酯[Chondroitin Sulfate-(7-Coumaryloxyacetic acid)ester]將硫酸軟骨素三正丁基胺鹽的DMF溶液(10.25mg/ml)用分子篩預(yù)干燥，并將70ml該溶液在100ml三口燒瓶中于室溫且攪拌下真空干燥。在燒瓶內(nèi)空氣被氮?dú)廒s走后，加入15ml蒸餾過的吡啶。向該溶液中加入相對于硫酸軟骨素的各羥基基團(tuán)為1摩爾當(dāng)量的7-香豆氧基乙酰氯[酰氯式香豆素](1.12g)的5ml DFM溶液。反應(yīng)通過在氮?dú)夥障掠?0℃回流混合物進(jìn)行3小時。然后濃縮反應(yīng)混合物并滴加入二乙醚，回收所產(chǎn)生的沉淀，并溶在去離子水中，用流動水滲析3天。將濾析液冷凍干燥，得到硫酸軟骨素-(7-香豆氧基乙酸)酯，白色固體。
產(chǎn)量965.1mgDS0.021溶脹度2.8g H2O/g干燥膠凝體1H-NMR光譜見附圖19重復(fù)上述步驟，但改變酰基氯式香豆素與硫酸軟骨素的羥基基團(tuán)的摩爾比并畫出摩爾比對DS值的關(guān)系曲線。結(jié)果見附圖20所示。
實施例21由硫酸軟骨素-(7-香豆氧基乙酸)酯制備可光硫化的硫酸軟骨素膜將實施例20中合成得到的硫酸軟骨素-(7-香豆氧基乙酸)酯按實施例1中所述制成干燥膜，將膜用紫外光(320nm)照射，得到可光硫化的硫酸軟骨素膜。
曝光時間與香豆素的吸收光譜(320nm)變化間的關(guān)系曲線見附圖21所示。測定所制備膜的溶脹度(g H2O/g干燥膠凝體)并畫出曝光時間和DS值對溶脹度的關(guān)系曲線。結(jié)果各自見附圖22和23所示。此外，還測定了膠凝度(%)并畫出曝光時間和硫酸軟骨素-(7-香豆氧基乙酸)酯的濃度對膠凝度(%)的關(guān)系曲線，結(jié)果各自見附圖24和25所示。
實施例22交聯(lián)的透明質(zhì)酸/硫酸軟骨素膜將實施例1中所得的HA-Cin-3(DS＝0.5)溶于20%DMF水溶液中，最終濃度為5%重量比。然后，將實施例7所得的CS-Cin-4(DS＝1.37)溶在上述溶液中，最終濃度達(dá)到5%重量比，得到了透明質(zhì)酸/肉桂酸酯和硫酸軟骨素-肉桂酸酯的混合溶液。將該溶液按實施例1所述方法進(jìn)行壓片和照射，得到交聯(lián)的透明質(zhì)酸/硫酸軟骨素膜。
同樣制備含有比率為2∶1或1∶2(重量比)的HA-Cin-3和CS-Cin-4的混合溶液并測定各制備膜的防粘連效果(見下文所述)。
實施例23合成肝素-肉桂酸酯和制備交聯(lián)的肝素膜(1)制備肝素-肉桂酸酯向肝素三正丁基胺鹽的二甲基甲酰胺(DMF)溶液(500mg/125ml)中加入20ml吡啶，將混合物減壓脫水。然后于室溫和劇烈攪拌下加入69.35mg肉桂酰氯。反應(yīng)在75℃進(jìn)行2小時，然后在40℃將反應(yīng)混合物減壓濃縮至30ml。向該殘余物中加入乙醚，回收所生成的沉淀，減壓干燥。將沉淀溶于5ml DMF中，隨后加入40ml PBS，將溶液充分?jǐn)嚢琛⑷芤和ㄟ^滲析膜滲析以徹底除去低分子化合物，然后冷凍干燥，得到440mg所要的酯化合物。
組分Hep-Cin-1結(jié)合的肉桂酸量(由1H-NMR測量)，DS和溶解性見表7所示。
表7結(jié)合肉桂酸 溶解性組分 (重量%) DS DMF 水Hep-Cin-1 12.4 0.5 0 △2 21.7 1.1 0 X3 31.7 1.8 0 X4 40.2 2.5 0 X0完全溶解△非完全溶解但為類凝膠X不溶(2)制備交聯(lián)的肝素膜在DMF中溶解30mg組分(Hep-Cin-1)并將溶液置于玻璃載片(24mm×24mm)上并在40℃用滅菌熱空氣干燥。所形成的膜用450W高壓汞燈通過被水覆蓋的派熱克斯濾光片照射，得到交聯(lián)肝素膜。
組分Hep-Cin-1-2接觸角(前進(jìn)和后退接觸角)和水溶脹度見表8所示。
表8接觸角(°)組分 前進(jìn)接觸角 后退接觸角 水溶脹度Hep-Cin-1-2 89.3 54.8 0.132-2 76.2 41.5 0.023-2 90.3 56.5 0.05(3)使用與上述相同的原料和方法，但改變肝素與肉桂酰氯的比率(肝素保持為500mg)來制備酯(Hep-Cin-2，Hep-Cin-3，Hep-Cin-4)。測定結(jié)果也見表7所示。此外，按相同方式制備交聯(lián)肝素膜(Hep-Cin-2-2，Hep-Cin-3-2)，這些膜的物理特性也見表8所示。
實施例24將透明質(zhì)酸三正丁基銨鹽(1.5g相應(yīng)于10mmol OH基團(tuán))的干燥DMF(200ml)溶液保持在氬氣氛中并冷卻至0℃，依次加入4-二甲氨基-吡啶(0.305g，2.5mmol)，肉桂酸酐(2.78g，10mmol)，和三正丁基胺(4.76ml，10mmol)，反應(yīng)在室溫下進(jìn)行24小時。冷至0℃后，逐漸加入溶在水(100ml)中的5% NaHCO3并將溶液在室溫下攪拌48小時。通過逐步加入1M HCl消去過量的NaHCO3至PH4，加入1M NaOH至PH7。在攪拌下加入冷乙醇。傾析后將沉淀溶在水中，用乙醇重復(fù)沉淀步驟。離心出沉淀并溶于水中，在4℃通過Dowex50(H+)陽離子交換樹脂柱。酸用1M NaOH中和并冷凍干燥。
實施例25光硫化的透明質(zhì)酸膜的非粘連效果按與實施例1制備組分HA-Cin-3-2的相同方法制備可光硫化的透明質(zhì)酸-肉桂酸酯膜，將該膜用作非粘連材料并進(jìn)行下列試驗。
在麻醉條件下剖腹鼠并將腹膜壁機(jī)械損傷制備-外露肌層部位。該部位用上述制備的非粘連材料覆蓋。覆蓋后1周和2周移開植入物，利用光學(xué)顯微術(shù)(在用蘇木精-曙紅染色之后)和電子顯微術(shù)檢查評估對膜表面的組織粘合程度。將損傷部位沒被覆蓋的鼠用于比較。
在使用本發(fā)明非粘連材料的試驗中，樣品覆蓋一周和兩周后，所有樣品基本上沒發(fā)現(xiàn)有纖維蛋白沉淀和細(xì)胞粘連。兩周后的發(fā)現(xiàn)證明膜的生物降解作用早已發(fā)生。
另一方面，在對比試驗中，損傷部位相繼發(fā)生纖維蛋白沉淀，漿細(xì)胞侵入，成纖維細(xì)胞等。一周后膠原蛋白產(chǎn)物和腸道緊密地粘附于損傷部位。
重復(fù)上述試驗，但使用實施例22所制備的交聯(lián)HA-Cin-3/CS-Cin-4膜。與上述同類HA-Cin-3膜(HA-Cin-3-2)比較，生物降解能力增強(qiáng)，結(jié)果膜的生物降解作用在移植后一周內(nèi)已發(fā)生，附帶有細(xì)胞侵入膜內(nèi)，降解進(jìn)程在兩周時已十分明顯。
實施例26光硫化的硫酸軟骨素膜(原地膠化)的非粘連效果將實施例7所制備的硫酸軟骨素-肉桂酸酯組分CS-Cin-3(DS＝0.65)溶在磷酸鹽緩沖液中，最終濃度為20%重量，得到溶液形式的非粘連材料。
制備如實施例25中所用的動物損傷器官樣本并將損傷部位用上述非粘連材料涂層。然后用紫外光照射這種材料15分鐘，原地發(fā)生膠化作用。顯微解剖學(xué)檢查顯示出形成了一與腹部腹膜組織表面緊密接觸的膠層。
按與實施例25中所用的方法相同順序觀察損傷部位，與實施例25相同顯示出非粘連性。
實施例27光硫化(交聯(lián))的透明質(zhì)酸膜和光硫化(交聯(lián))的硫酸軟骨素膜的非粘連效果。
將按與實施例1和2所述的相同方法制備的光硫化的透明質(zhì)酸-肉桂酸酯(HA-Cin)膜(DS＝0.1，0.5)和按與實施例18所述的相同方法制備的光硫化的透明質(zhì)酸-胸腺嘧啶衍生物酯(HA-Thym;DS＝0.2，0.6，0.9，1.8)和光硫化的硫酸軟骨素-胸腺嘧啶衍生物酯(CS-Thym;DS＝0.4，0.9)膜用作非粘連材料并進(jìn)行下述試驗。而且將各種光硫化膜(直徑14mm;厚度15-20μm)通過在70%乙醇中浸漬30分鐘，然后在無菌水中漂浮1小時滅菌。至于低DS值樣品，它們在浸漬在水中以除去乙醇之后進(jìn)行干燥并在動物試驗之前，在無菌水中浸漬漂浮10分鐘。吸收水的膜溶脹形成水凝膠。
將患有白化化病的Wistar雄鼠(300g)用乙醚麻醉并在手術(shù)前用乙醚和氧氣維持麻醉狀態(tài)。每種樣品使用一只鼠。在鼠腹部切割出一垂直正中切口以使暴露出肝。將外露肝表面機(jī)械損傷，構(gòu)成一操作的腹部部位(1平方厘米)，并施加上述溶脹的光硫化膜。由于膜不能被固定在損傷部位上，故在四個角上點上聚氨基甲酸酯粘合劑以固定上述膜。然后，用尿龍縫合施行腹壁縫合術(shù)。植入后一周和兩周，將鼠殺死并將縫合部位切割開。肉眼檢查覆蓋著肝的膜，將覆蓋部分及其周圍組織割去，利用光顯微術(shù)進(jìn)行組織檢查，結(jié)果見表9所示。
表9肉眼觀察 顯微鏡觀察光交聯(lián)膜 DS 移植后時間 粘連性 粘連性 生物降解能力 膜開裂HA-Cin 0.1 1 week - - + -HA-Cin 0.5 1 week + - - -,+
HA-Thym 0.2 1 week - - ++ -HA-Thym 0.6 1 week - - + -HA-Thym 0.6 2 week - -HA-Thym 0.9 1 week - - + -HA-Thym 0.9 2 week - - ++ -HA-Thym 1.8 1 week + -
CS-Thym 0.4 1 week - - ++ -CS-Thym 0.9 1 week - - + --沒有+附加或觀察到(Added or observed)++明顯光硫化HA-Cin(DS＝0.1)膜的組織檢查，例如，在移植后一周顯示出膜表面上完全沒有細(xì)胞粘連，且膜的生物降解作用已經(jīng)發(fā)生，并觀察到組織侵入。對于光硫化的HA-Thym(DS＝0.2)膜，同腹壁細(xì)胞一樣，在最外層觀察到有偏細(xì)胞(flat cells)，且生物降解作用已經(jīng)發(fā)生，以及僅有少許中心部分保留。
使用未覆蓋的損傷部位作為比較，1周后進(jìn)行類似觀察。結(jié)果，在肝損傷表面與腹壁之間發(fā)現(xiàn)有不能被鈍手術(shù)操作(如利用手術(shù)刀或手掌背面，而不用刀切割的手術(shù))分離開的粘連。
實施例28利用光硫化的透明質(zhì)酸和光硫化的硫酸軟骨素膜作為載體的藥物的受控釋放(1)消炎痛的受控釋放將實施例16所得到的具有變動DS值的HA-Thym溶于DMF中，且最終濃度為5%，并將1μg消炎痛溶于200μl上述溶液中。將產(chǎn)生的溶液置于玻璃載片上(直徑15mm)，利用滅菌熱空氣在35℃空氣干燥。這樣所得的膜按與實施例18所述的相同方法照射，得到包含消炎痛的交聯(lián)透明質(zhì)酸膜。藥物含量控制在10%。按相同方式制備含有30%，50%和73%藥物的交聯(lián)的透明質(zhì)酸膜。此外，利用實施例17所得到具有變動DS值的CS-Thym，按相同方式制備含有10%，30%和50%藥物的交聯(lián)的硫酸軟骨素膜。
藥物從各種制備膜中釋放的試驗按下述方法進(jìn)行。例如，將測試膜懸浮在水(20℃)或磷酸鹽-緩沖的鹽水中(PBS)(37℃)并攪拌。在預(yù)定時間間隔將液相采樣并測量其在269nm的紫外吸收光譜。
表10顯示了具有30%藥物含量的光硫化的透明質(zhì)酸膜(DS＝0.7，1.3，1.8)的水溶解試驗數(shù)據(jù)與DS和溶脹度的關(guān)系。至于溶解試驗數(shù)據(jù)是指當(dāng)20%藥物從所用膜中釋放出時的時間。
表10DS 溶脹度 20%釋放時間(分)0.7 8 251.3 5 1201.8 0.2 360從表10可以看出，很明顯作為一種趨勢，DS值越高，交聯(lián)度也越高，因此膜就越硬，其結(jié)果溶脹度降低以及藥物的釋放速率也協(xié)同降低。該發(fā)現(xiàn)說明膜的吸水容量對藥物釋放速率是一重要指數(shù)。關(guān)于DS值為1.3和1.8的膜，藥物釋放速率趨向于隨著藥物含量的增加而降低。
比較光硫化的透明質(zhì)酸膜(DS＝0.7，2.2)和光硫化的硫酸軟骨素膜(DS＝0.8，1.3，1.8)當(dāng)藥物含量為10%和50%時在PBS中的藥物釋放速率。結(jié)果見附圖26至30所示。根據(jù)這些圖，很明顯可以看出對于具有不小于一定限度DS值的膜(對于CS-Thym，DS＝1.3)，藥物受控釋放是可行的。
(2)肝素的受控釋放在20% DMF水溶液中溶解實施例7所得的硫酸軟骨素-肉桂酸酯[CS-Cin-4(DS＝1.37)CS-Cin-5(DS＝2.43)]，最終濃度為20%重量比，以及溶解實施例1和2中所得的透明質(zhì)酸-肉桂酸酯[HA-Cin-3(DS＝0.50)，HA-Cin-5(DS＝1.28)，HA-Cin-6(DS＝2.43)]，其最終濃度達(dá)到10%重量比。向各10ml這些溶液中加入100mg肝素并將溶液涂層在玻璃上(10cm×10cm)，室溫干燥1小時得到膜。該膜用450W高壓汞燈照射30分鐘。各膜的厚度大約為100μm。
將各個載在玻璃片上的膜完全浸入在含有100ml水的容器內(nèi)并以60rpm攪拌。按照咔唑-硫酸法，測量隨著時間變化肝素的釋放量。結(jié)果表明所有膜都保證肝素的受控釋放。
此外，各種上述控制肝素釋放膜在試管內(nèi)壁上形成，然后，按照J(rèn)P-A-4-41432，加入檸檬酸化血液并測量凝結(jié)時間。所有樣品都顯示出抗血栓形成活性。
(3)生長激素釋放因子的控制釋放在20% DMF水溶液中溶解透明質(zhì)酸-肉桂酸酯[HA-Cin-3(DS＝0.50)]，其最終濃度達(dá)到10%(重量比)，1ml上述溶液內(nèi)混合1mg生長激素釋放因子(GRF，人體;分子量5039.8)。然后將混合物在玻璃片(3cm×3cm)上涂層并在室溫下干燥1小時，得到膜。該膜用450W高壓汞燈照射30分鐘。該膜厚度為110μm。
將上述載于玻璃片上的膜完全侵入在含有10ml水的容器內(nèi)，并以60rpm攪拌。借助高效液相色譜測定隨時間變化釋放的GRF并計算釋放的累積量。已發(fā)現(xiàn)GRF的控制釋放可以成功地完成。
實施例29人造血管將具有小腔(內(nèi)徑3mm)的人工血管的內(nèi)表面用實施例1所制得的HA-Cin-3溶液通過旋轉(zhuǎn)涂層技術(shù)涂層，干燥后，涂層膜利用紫外線輻射器使用小口徑光學(xué)纖維硫化，從而得到內(nèi)部被硫化的透明質(zhì)酸涂層的人造血管。本發(fā)明很容易通過選擇這里具體描述的作為高度安全和生物共容原料的這些光活性化合物和氨基葡聚糖，并將前者與后者結(jié)合提供易純化的可光硫化的GAGs。本發(fā)明通過利用光照射上述可光硫化的GAGs進(jìn)一步提供了醫(yī)用材料。該材料具有兩或三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)并且是高度安全，生物共容和生物可降解/吸收的。本發(fā)明通過適當(dāng)選擇GAG分子量，光活性化合物的DS值，以及其它因素還進(jìn)一步提供了具有醫(yī)學(xué)材料所需要的理想物理特性的交聯(lián)GAG基礎(chǔ)材料，因此本發(fā)明在醫(yī)學(xué)的不同領(lǐng)域具有十分寬廣的應(yīng)用前景。
權(quán)利要求
1.一種包含葡糖氨基聚糖和與其鍵合的光反應(yīng)活性化合物的可光硫化的葡糖氨基聚糖衍生物。
2.如權(quán)利要求1所述的可光硫化的葡糖氨基聚糖衍生物，其中所述葡糖氨基聚糖為選自多聚乙酰神經(jīng)氨糖酸，透明質(zhì)酸，軟骨素，硫酸軟骨素，糖醛酸磷壁(酸)質(zhì)，硫酸皮膚素，肝素，硫酸乙酰肝素，硫酸角質(zhì)，多硫酸角質(zhì)，幾丁質(zhì)和脫乙酰幾丁質(zhì)及其衍生物中的至少一員，而其中所述光反應(yīng)活性化合物為至少一種選自取代或末取代的肉桂酸及其反應(yīng)活性衍生物，在1位上具有一羧基烷基作為取代基的尿嘧啶及其反應(yīng)活性衍生物，在7位上具有一羧基烷基作取代基的香豆素衍生物及其反應(yīng)活性衍生物中的化合物。
3.通過將所述光反應(yīng)活性化合物進(jìn)行分子間和/或分子內(nèi)交聯(lián)而由權(quán)利要求1的可光硫化的葡糖氨基聚糖衍生物所衍生出的交聯(lián)的葡糖氨基聚糖。
4.一種生產(chǎn)權(quán)利要求1的可光硫化的葡糖氨基聚糖衍生物的方法，包括使葡糖氨基聚糖的羧基或羧基基團(tuán)與光反應(yīng)活性化合物進(jìn)行酯化反應(yīng)。
5.一種生產(chǎn)權(quán)利要求1的可光硫化的葡糖氨基聚糖衍生物的方法，包括將葡糖氨基聚糖的羧基活化，并使產(chǎn)生的活化的羧基與光反應(yīng)活性化合物進(jìn)行酰胺化反應(yīng)。
6.一種生產(chǎn)權(quán)利要求1的可光硫化的葡糖氨基聚糖衍生物的方法，包括使葡糖氨基聚糖的羧基與光反應(yīng)活性化合物在縮合劑存在下進(jìn)行酰胺化反應(yīng)。
7.一種生產(chǎn)交聯(lián)的葡糖氨基聚糖的方法，包括用光照射權(quán)利要求1的可光硫化的葡糖氨基聚糖衍生物，由此引發(fā)所述光反應(yīng)活性化合物的分子間和/或分子內(nèi)交聯(lián)。
8.一種以包括葡糖氨基聚糖和與其鍵合的光反應(yīng)活性化合物的可光硫化的葡糖氨基聚糖衍生物為基礎(chǔ)的醫(yī)用材料。
9.一種如權(quán)利要求8所述的醫(yī)用材料，它被用作非粘性材料。
10.一種醫(yī)用材料，它以通過使權(quán)利要求1的可光硫化的葡糖氨基聚糖衍生物發(fā)生所述光反應(yīng)活性化合物的分子間和/或分子內(nèi)交聯(lián)反應(yīng)而產(chǎn)生的交聯(lián)的葡糖氨基聚糖為基礎(chǔ)。
11.一種如權(quán)利要求10所述的醫(yī)用材料，被用作非粘性材料。
12.一種如權(quán)利要求10所述的醫(yī)用材料，被用作控制藥物釋放的載體。
13.一種控制藥物釋放的材料，包括權(quán)利要求12的用于控制藥物釋放的載體和包括于其中的藥物。
14.包含葡糖氨基聚糖和與其鍵合的光反應(yīng)活性化合物的可光硫化的葡糖氨基聚糖衍生物用于制備防止細(xì)胞粘連的醫(yī)用組合物。
15.包含葡糖氨基聚糖和與其鍵合的光反應(yīng)活性化合物的交聯(lián)的葡糖氨基聚糖用于制備防止細(xì)胞和/或組織粘連的醫(yī)用組合物。
全文摘要
提供了高度安全和生物相容的可光硫化的葡糖氨基聚糖(GAG)衍生物和交聯(lián)的葡糖氨基聚糖，制備這類在需要時通過用溶劑鑄造而容易塑模的可光硫化的GAG衍生物的方法，用該方法可以容易地將會引起副作用的未反應(yīng)物除去，以及制備交聯(lián)的GAGS的方法及以可光硫化的GAG衍生物或交聯(lián)的GAGS為基礎(chǔ)的醫(yī)用材料。包含葡糖氨基聚糖和與其鍵合的光反應(yīng)活性化合物的可光硫化的GAG衍生物可以例如通過使葡糖氨基聚糖的羥基或羧基基團(tuán)分別與光反應(yīng)活性化合物進(jìn)行酯化反應(yīng)或酰胺化反應(yīng)而生產(chǎn)。交聯(lián)的GAG通過將可光硫化的GAG衍生物中所鍵合的光反應(yīng)活性化合物進(jìn)行分子間交聯(lián)而衍生得到。
文檔編號A61L27/20GK1075970SQ9310268
公開日1993年9月8日 申請日期1993年2月5日 優(yōu)先權(quán)日1992年2月5日
發(fā)明者松田武久, M·J·莫加丹姆, 櫻井勝清 申請人:生化學(xué)工業(yè)株式會社