專(zhuān)利名稱(chēng)：血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑及其制法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的，該抑制劑由以val-Pro-Pro作為有效成份的含特定數(shù)目氨基酸殘基的肽組成。
血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(下面稱(chēng)作ACE)主要存在于肺或血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)，它作用于由高血壓蛋白原酶分解的血管緊張素Ⅰ(Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-His-Leu)，從其C未端分離二肽(His-Leu)，產(chǎn)生出具有較強(qiáng)后葉加壓劑作用的血管緊張素Ⅱ。此外，該酶具有分解血管舒緩激肽及使之失活的作用，這種肽可降低血壓。由于ACE不僅產(chǎn)生升高血壓的肽(血管緊張素Ⅱ)，而且可以分解降低血壓的肽及使該肽(血管舒緩激肽)失活，所以表現(xiàn)出導(dǎo)致血壓升高的作用。出于這種考慮，開(kāi)發(fā)出一系列的通過(guò)抑制這種酶的活性來(lái)抑制血壓升高的物質(zhì)。
迄今為止，已報(bào)導(dǎo)了許多抑制ACE的天然和合成物質(zhì)，包括蛇毒液。其中合成的物質(zhì)如captopril(D-2-甲基-3-巰基-propanoyl-L-脯氨酸已作為口服血管減壓劑作用。但在許多情況下，這種藥表現(xiàn)出一些付作用，并且在安全用藥方面需要給予特別的注意。為了得到一種血管減壓劑，在許多領(lǐng)域內(nèi)已研究了如何從食品中得到毒性小，安全度高的ACE抑制劑。例如，迄今已報(bào)導(dǎo)了通過(guò)蛋白如酪蛋白(SusumuMaruyamaet.alA.B.C.，51(9)，2557-2561-(1987))，或魚(yú)肉蛋白(HiroyukiUkeda，NipponNogeiKagakuKaishi(J.ofJapanSocietyforBioscience，Biotechnology，andAgrochemistry)，66(1)，25-29(1992))的酶學(xué)水解法制備ACE抑制肽。
盡管如此，得到口服給藥獲得的有效數(shù)據(jù)支持的這些物質(zhì)仍然廖廖無(wú)幾。一直需要一種有效的血管減壓劑，可以口服給藥，劑量小而安全度高。
至今已知乳酸菌成份顯示出抑制ACE的能力，或者是降低血壓的作用，如SeiIto在“MedicineandBiology”，116(3)，159-161(1988)中所報(bào)導(dǎo)，并在日本特許公開(kāi)2-247127中所公開(kāi)。此外，已報(bào)導(dǎo)了一種大分子物質(zhì)顯示出降低血壓的作用，該物質(zhì)分子量不小于5000，從發(fā)酵牛奶中分離微生物和酪蛋白而得到，如日本特許公開(kāi)61-53216中所公開(kāi)的。但是，除了從微生物得到的ACE抑制劑外，關(guān)于ACE抑制劑的報(bào)導(dǎo)仍然很少。
其間，Rao等人已合成出作為膠原蛋白的部分成份的三肽val-pro-pro，并作為用于解釋消旋作用的一種物質(zhì)予以報(bào)導(dǎo)(RaoS.Rapaka，R.SBhatnagarandD.E.Nitecki，BIOPOLYMERS，15，317-324(1976))。不過(guò)，尚不了解該物質(zhì)具有ACE抑制活性。另一方面，用化學(xué)合成法很難合成出三肽val-pro-pro。因此一直需要開(kāi)發(fā)出一種易于工業(yè)化的生產(chǎn)這種三肽的方法。
本發(fā)明的目的是提供一種ACE抑制劑及其制法，該抑制劑通過(guò)口服給用較小劑量，就顯示出安全度高且有效的ACE抑制活性，該抑制劑可用作具有藥物或生理作用的食品。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種簡(jiǎn)單和廉價(jià)生產(chǎn)ACE抑制劑的方法。
通過(guò)下面的說(shuō)明，可使本發(fā)明的上述及其它目的更清楚。
本發(fā)明提供一種含有作為有效成份val-pro-pro并含有3-10個(gè)氨基酸殘基的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑。
本發(fā)明亦提供了一種制備上述血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的方法，該法包括用乳酸菌使含有作為組成成份的val-pro-pro的食品發(fā)酵。
下面進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。
在本發(fā)明的ACE制劑中，只要作為其有效成份的肽是含val-pro-pro的并帶有3-10個(gè)氨基酸殘基的肽，就滿(mǎn)足要求。也可以是這種肽的可藥用的鹽，如鹽酸鹽、硫酸鹽，琥珀酸鹽，檸檬酸鹽或酒石酸鹽。與val-pro-pro連接的氨基酸殘基最好連到N末端側(cè)。此外，最好氨基酸殘基的數(shù)目較少。優(yōu)選的肽包括由下列氨基酸順序表示的肽及其鹽加合物，如Val-Pro-Pro，Val-Val-Pro-Pro，Val-Val-Val-Pro-Pro，Pro-Val-Val-Val-Pro-Pro，Leu-Thr-Gln-Thr-Pro-Val-Val-Val-Pro-Pro，Leu-Val-Pro-Pro，Phe-Leu-Val-Pro-Pro，Pro-Val-Pro-ProandAla-Pro-Val-Pro-Pro，這些肽或其鹽加合物可單獨(dú)或組合使用。
用作本發(fā)明的ACE抑制劑含val-pro-pro的帶3-10個(gè)氨基酸殘基的肽不僅可用下面說(shuō)明的本發(fā)明的方法制備，也可用酶水解牛奶蛋白成份，如全或脫脂動(dòng)物乳或酪蛋白，玉米，玉米蛋白，小麥，小麥蛋白，大豆，脫脂大豆或大豆蛋白，制備，或用常規(guī)有機(jī)化學(xué)合成制備。
只要本發(fā)明ACE抑制劑含有上述特定的肽就足夠了。此外，也可與可藥用的添加劑，食品或飲料混合，并可以固體或液體形式口服。盡管其劑量隨癥狀的發(fā)展而變，或取決于其是用于治療或是用于預(yù)防，但如果該抑制劑用于成人的治療或預(yù)防，以含上述特定的val-pro-pro的帶3-10個(gè)氨基酸殘基的肽的用量計(jì)，最好日用量0.1mg-100mg，更好1-30mg。
至于本發(fā)明制備ACE抑制劑的方法，可用乳酸菌使下面稱(chēng)作VPP食品材料的一種食品發(fā)酵，該食品材料中含有含val-pro-pro的肽。
VPP食品材料可優(yōu)先例舉出如乳蛋白成份，如全或脫脂動(dòng)物乳或乳酪蛋白，玉米，玉米蛋白，小麥，小麥蛋白，大豆，脫脂大豆或大豆蛋白。上述乳酸菌優(yōu)選例舉出如屬于乳桿菌屬的乳酸菌，如瑞士乳酸桿菌，德氏乳桿菌亞種保加利亞乳桿菌等，屬于genusLactococcus的乳酸菌，如LactococcusLactis，屬于鏈球菌屬的乳酸菌，如Streptococcussalivariussubsp，屬于明串珠菌屬的乳酸菌，如LeuconostocLactis和屬于雙歧桿菌屬的乳酸菌，如BifidobacteriumLongumorBifidobacteriumbrcve。乳酸菌可與其它微生物酵母混合。這些酵母優(yōu)選例舉出如屬于酵母菌屬的酵母，如啤酒酵母，屬于假絲菌屬的酵母如產(chǎn)骯假絲酵母，屬于克魯維氏酵母菌屬的酵母如KluyveromycesmarxianusvarLactis及它們的混合物。
本發(fā)明方法中，用乳酸菌在操作條件下使VPP食品材料發(fā)酵，這些條件隨乳酸菌類(lèi)型和/或組合形式而變化。不過(guò)，優(yōu)選將VPP食品材料溶于水成為溶液，再與乳酸菌混合，利用發(fā)酵進(jìn)行培養(yǎng)。最好，培養(yǎng)溫度和時(shí)間分別為25-45℃和3-72hr。最重要的是，為了使乳酸菌發(fā)揮有效作用，培養(yǎng)中開(kāi)始發(fā)酵時(shí)的PH最好調(diào)到6-7。培養(yǎng)的終點(diǎn)可確定在如當(dāng)乳酸菌數(shù)目為不小于107/ml的那一刻或當(dāng)PH值為5.5或低于5.5的那一刻。除此之外，發(fā)酵過(guò)程中，通過(guò)加堿性物如NaOH或KOH將溶液保持在中性PH。培養(yǎng)時(shí)乳酸菌的比例用細(xì)菌數(shù)目表示，在發(fā)酵開(kāi)始時(shí)最好是1ml VPP食品材料溶液約5×106。也可以利用多次部分培養(yǎng)過(guò)程進(jìn)行培養(yǎng)。
用本發(fā)明方法制出的發(fā)酵牛奶可直接用作ACE抑制劑的有效成份。但也可用柱色譜法或任何生物化學(xué)法提純，除掉除有效成份外的其它成份如苦味成份。制出的發(fā)酵牛奶中含Val-Pro-Pro的肽(作為上述有效成份)的含量為1-4mg/100ml發(fā)酵牛奶。所以，如將發(fā)酵牛奶直接用作本發(fā)明的ACE抑制劑，成人口服用量為10-1000ml，最好50-300ml。
本發(fā)明的ACE抑制劑含有作為有效成份的確定的肽，只要口服很少量的該抑制劑，即顯示出最好的ACE抑制活性。此外，本發(fā)明方法在工業(yè)上非常有效，因?yàn)橛迷摲椒珊?jiǎn)單廉價(jià)地生產(chǎn)出該ACE抑制劑。
本發(fā)明可通過(guò)只作為舉例說(shuō)明的實(shí)施例得到進(jìn)一步說(shuō)明。
實(shí)例1制備發(fā)酵牛奶a將9g精制脫脂奶粉溶于100g水。在115℃消毒20min后，溶液冷卻到發(fā)酵溫度，用瑞士乳酸桿菌JCM-1004通過(guò)一鉑環(huán)線(xiàn)接種。37℃培養(yǎng)24hr.，制備出含5×108個(gè)乳酸菌/ml溶液的初級(jí)促酵物(PH3.5)。將180g精制脫脂奶粉溶于2Kg水，形成溶液，在90℃升高溫度下消毒。冷至發(fā)酵溫度后，用上述初級(jí)促酵物對(duì)該發(fā)酵溶液接種。37℃下培養(yǎng)24hr。得到二級(jí)促酵物。將4.5Kg精制脫脂奶粉溶于50Kg水，在90℃升高溫度下消毒。得到的溶液冷至發(fā)酵溫度，用上述二級(jí)促酵物接種。37℃培養(yǎng)24hr.得到約56Kg發(fā)酵牛奶a。
發(fā)酵牛奶中肽b(Val-pro-pro)的定量分析5ml上述發(fā)酵牛奶a在10000rpm離心分離5min，將分離的上清液倒入裝有1g“AMBERLITEXAD-7”(由ROHM&HAASCO.制備的一種樹(shù)脂的商品名)的柱子。用5ml水洗滌柱內(nèi)物料，并與非吸附餾份混合?；旌衔锏谷胗蓛筛癝EPPAKC18”(由WATERSINC.生產(chǎn)的一種柱子的商品名)柱子組成的一組合柱，用5ml蒸餾水洗滌。用5ml甲醇洗脫吸附餾份后，用離心濃縮器(“MODELCC-101”，TOMYSEIKOCO.，LTD)濃縮得到的產(chǎn)物并在減壓下凍干。將該凍干物溶于0.05mol的乙酸銨緩沖液(PH6.89)用“GS320HQ”柱(由ASAHICHEMICALINDUSTRYCO.，LTD.生產(chǎn)的該產(chǎn)品的商品名)進(jìn)行HPLC分離，由同樣緩沖液平衡。肽以0.6ml/min流速洗脫。將洗脫時(shí)間14.5-15.5min的峰分成幾部分，在下列條件下測(cè)定其量定量分析的條件柱子μBONDASPHERE5μC18，由WATERSINC制備，
洗脫條件溶液A;0.1wt%TFA水溶液;溶液B含0.1wt%TFA的乙腈，遞減洗脫(B/A+B)×100(%)0%-40%(60min)，流速1ml/min;檢測(cè)在215nm處紫外線(xiàn)吸收。
用得到的肽作標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算出濾液中所含肽b的重量。發(fā)現(xiàn)56Kg發(fā)酵牛奶a中含1.65g肽b。
制備肽b為了提純發(fā)酵牛奶a中所含肽。采用下列提純方法。
用10N的NaOH溶液調(diào)61發(fā)酵牛奶a至PH約7.3，與大約11樹(shù)脂(由ROHM&HAASCO制造，商品名“AMBERLITEXAD-2”)混合，再與蒸餾水混合，使總體積達(dá)到約20l。得到的產(chǎn)物攪動(dòng)90min，通過(guò)漂白布過(guò)濾分離樹(shù)脂。經(jīng)20l蒸餾水洗滌后，將樹(shù)脂加到11甲醇內(nèi)，攪動(dòng)30min。得到的產(chǎn)物用200篩目的綿綸絨過(guò)濾，再于減壓下用硬濾紙過(guò)濾。55℃下，用蒸餾器減壓下濃縮得到的濾液，使?jié)饪s至200ml的液體，該液體再與250ml樹(shù)脂(ROHM&HAASCO制造，商品名“AMBERLITEIRA-400”(OH型))混合，并用刮刀攪動(dòng)使液體的黃色消失。得到的液體減壓通過(guò)硬濾紙過(guò)濾，再用1N鹽酸溶液調(diào)濾液至PH7，凍干。得到的凍干物溶于少量蒸餾水，倒入柱子(由PHARMACIAFINECHEMICALSCO.制造，商品名“SEPHADEXG-25”)。用蒸餾水洗脫后收集活性餾份，凍干得到50mg粉末。將干燥粉末溶于0.05M乙酸緩沖液(PH4.5)，倒入用同樣緩沖液平衡的柱子(由PHARMACIAFINECHEMICALSCO.制造，商品名“SP-SEPHADEXG-25”)，用緩沖液洗脫。收集活性成份并凍干。將凍干物溶于少量0.1wt%TFA的水溶液，用高速高性能液相色譜法(HPLC)分離，進(jìn)行HPLC分離時(shí)，用反相柱(由YAMAMURACHEMICALLAB.CO.，LTD.制造，商品名“YMS-PACKA-302”)，并在線(xiàn)性梯度0-40%(60min)，含0.1wt%TFA的2-丙醇/乙腈(兩者比例7∶3)作溶劑的條件下進(jìn)行分離，得到1mg只有單峰的肽b，該肽顯示出ACE抑制活性。
用下列方法分析得到的肽b。
氨基酸組成將1μg得到的肽b溶于6N常恒鹽酸，真空下110℃水解24hr.。用水合茚三酮著色法，在分析儀(由HITACHILTD.制造，商品名“HITACHIL-8500TYPEAMINOACIDANALYZER”)上分析得到的產(chǎn)物組成。Val-Pro摩爾比為1.00∶2.08。
氨基酸序列用分析儀(由SHIMADZUCO制造，商品名“SHIMADZUPROTEINSEQUENCERPSQ-1”)分析測(cè)定N末端的氨基酸順序。發(fā)現(xiàn)N端氨基酸順利為val-Pro-Pro。測(cè)定ACE抑制活性。
根據(jù)Cushman和Cheung在D.W.CushmanandH.S.Cheung，Biochem.Pharmacol.201637(1971)”中所述方法，測(cè)定ACE抑制活性。
將上述制備的肽b樣品，用含0.3MNaCl，PH8.3的0.1M硼酸緩沖液調(diào)節(jié)濃度到12.5，25.0，50.0，100和200μg/ml，并以0.08ml的量裝入每一試管。將0.2ml馬尿?；M氨?；涟彼?Hip-His-Leu，由SIGMACHEMICALCO.制備)用含0.3MNaCl的0.1M硼酸緩沖液(PH8.3)調(diào)至5mM，與0.02ml酶水溶液(ACE，0.1μ/ml，由SIGMACHEMICALCO.制備)按該順序作為基質(zhì)加入到每一試管的物料中，反應(yīng)在37℃進(jìn)行30min.，再向每一試管加0.25ml的1N鹽酸。反應(yīng)終止后，向每一試管加1.7ml乙酸乙酯，繼續(xù)攪動(dòng)20秒。在3000rpm下離心分離10分鐘后，分離出1.4ml乙酸乙酯層，120℃下加熱40min除去溶劑。除去溶劑后加1ml蒸餾水，測(cè)出提取的馬尿酸在228mn處的吸收，并用作ACE抑制活性。用下列方程計(jì)算抑制比抑制百分?jǐn)?shù)＝[(A-B)/(A-C)]×100(%)式中A是無(wú)樣品(肽b)的馬尿酸在228nm處的吸收，B是混有樣品(肽b)的馬尿酸在228nm處的吸收，C是不含酶和樣品(肽b)的馬尿酸在228nm處的吸收。
由此得到抑制百分?jǐn)?shù)為50%時(shí)抑制劑的濃度。肽b的IC50值為14μM。
測(cè)定對(duì)口服用藥大鼠的血管減壓劑作用用下列方法測(cè)定制出的發(fā)酵牛奶a和肽b的血管減壓劑作用。
將由CHARLESRIBERJAPANINC提供的每只26周齡的自發(fā)性高血壓患鼠(SHR)(每組4只)，于保持在溫度23±2℃，濕度55±5%的動(dòng)物房?jī)?nèi)隨意喂食水和飼料(由CLEAJAPANINC制造，商品名“CE-2”)，加以馴服飼養(yǎng)。SHR自試驗(yàn)前一天禁食水過(guò)夜，試驗(yàn)時(shí)，用胃探針強(qiáng)迫性口喂生理鹽水、發(fā)酵牛奶a和溶于生理鹽水的肽b，口服量分別為每只鼠2ml和150μg。口服前直接及服后4和8小時(shí)測(cè)量患鼠血壓。量血壓時(shí)用尾根套箍法，使用程控的electrosphygomanometer(由NARCOBIO-SYSTEMSCO.，ITD制造，商品名“PE-300”)。表1示出口服前直接測(cè)量的血壓與口服后4小時(shí)和8小時(shí)血壓差別。
表1樣品4hrs后8hrs后生理鹽水(對(duì)照)-0.5mmHg-2.4mmHg發(fā)酵牛奶a-37.0mmHg-31.5mmHg肽b-32.0mmHg-26.5mmHg實(shí)施例2向例1制備的55Kg發(fā)酵牛奶a加入5Kg樹(shù)脂(由ROHM&HAASCO.制備，商品名“AMBERLITEXAD-2”)?；旌衔锸覝叵聰噭?dòng)90分鐘，用漂白布過(guò)濾分離樹(shù)脂。經(jīng)10l水洗滌后，將樹(shù)脂加到2.5l乙醇中，攪30分鐘。產(chǎn)物經(jīng)200篩目尼綸絨布過(guò)濾后，再于減壓下用硬濾紙過(guò)濾。濾液在55℃用蒸發(fā)器減壓濃縮并凍干，得到約3.1g肽粉。該肽粉定量分析的方法類(lèi)似于例1發(fā)酵牛奶中肽b的定量分析法。分析后發(fā)現(xiàn)含0.4g肽b。
將40.0份重乳糖，34.8份重蔗糖，5.0份重黃蓍膠粉和0.2份重薄荷油混合。將20份重肽粉溶于20份重蒸餾水的溶液加到上述混合物中，充分捏和。得到的捏和物鋪在噴灑了淀粉的玻璃板上形成薄片，然后將薄片與基質(zhì)沖擊成膜，干燥成為每個(gè)重1g的錠劑。
實(shí)例3合成Phe-Leu-Val-Pro-Pro將0.01mmolFmoc-Leu樹(shù)脂和各0.1mmol的Fmoc-phe，F(xiàn)moc-Pro，F(xiàn)moc-Pro和Fmoc-Val裝入肽合成器(由SHIMADZUCO制造，商品名“PSSM8”)，用縮合劑PyBOP(苯并三唑-1-基-氧-三(Pyrrolidino)鏻六氟磷酸鹽)合成Fmoc-Phe-Leu-Val-Pro-Pro-Phe樹(shù)脂。得到的樹(shù)脂經(jīng)1ml甲醇洗滌5次，1ml叔丁基甲基醚洗2次后干燥。
用苯甲醚-1，2-乙二硫醇-TFA(5∶1∶94)混合溶液從樹(shù)脂上洗脫肽后，再將該肽用無(wú)水乙醚洗滌3次，溶于0.01MHCl。該溶液冷凍-干燥得到2.65ml白色粉末。
將這些粉末溶于1ml0.1M含0.9MKCl的三-HCl(PH7.5)。加入6毫單位的“(ARBOXY-PEPTIDASEA”.(得自牛胰腺，由SIGMACHEMICALCO制造)。反應(yīng)在37℃下進(jìn)行24hr.，從C末端側(cè)分解出氨基酸Phe和Leu。反應(yīng)完成后，由HPLC顯示出在相當(dāng)于洗脫時(shí)間35.2分鐘的位置上，有一個(gè)肽的單峰。由HPLC的洗脫按與例1相同方式進(jìn)行。將峰分成幾部分，減壓離心濃縮及冷凍-干燥后，得到891mg白色粉末。
氨基酸組成將一部分肽溶于恒沸6N鹽酸，真空下，110℃水解24hr。分析得到的產(chǎn)物的組成，用OPA著色法在氨基酸分析儀(由JAPANSPECTROSCOPICCO.LTD，制造，商品名“PU980”)上進(jìn)行分析。發(fā)現(xiàn)肽由Val∶Pro∶Leu∶Phe＝1.00∶2.00∶1.06∶1.08組成。
氨基酸順序利用分析儀(由SHIMADZU制造，商品名“SHIMADZUPROTEINSEQUENCERPSQ-1”)分析結(jié)果是，肽的氨基酸順序是Phe-Leu-Val-Pro-Pro。
化學(xué)合成含Val-Pro-Pro的其它肽。
根據(jù)上述Phe-Leu-Val-Pro-Pro的合成方法，合成Val-Pro-Pro，Val-Val-Pro-Pro，Val-Val-Val-Pro-Pro，Pro-Val-Val-Val-Pro-Pro，Leu-Thr-Gln-Thr-Pro-Val-Val-Val-Pro-Pro，Leu-Val-Pro-Pro，Phe-Leu-Val-Pro-Pro和Ala-Pro-Val-Pro-Pro測(cè)定ACE抑制活性對(duì)用上述化學(xué)合成方法合成的每一種肽，按與例1中測(cè)定ACE抑制活性的相同方法測(cè)出IC50值。結(jié)果示于表2。
表2合成的肽 IC50(μM)Phe-Leu-Val-Pro-Pro12Val-Pro-Pro9Val-Val-Pro-Pro285Val-Val-Val-Pro-Pro873Pro-Val-Val-Val-Pro-Pro117Leu-Thr-Gln-Thr-Pro-Val-Val-Val-Pro-Pro160Leu-Val-Pro-Pro125Pro-Val-Pro-Pro181Ala-Pro-Val-Pro-Pro62權(quán)利要求
1.一種含有作為有效成份的Val-Pro-Pro并且含有3-10個(gè)氨基酸殘基的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抑制劑，其中有效成分是向其加入選自鹽酸鹽、硫酸鹽、琥珀酸鹽，檸檬酸鹽和酒石酸鹽的可藥用鹽的肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抑制劑，其中有效成份選自Val-Pro-Pro，Val-Val-Pro-Pro，Val-Val-Val-Pro-Pro，Pro-Val-Val-Val-Pro-Pro，Leu-Thr-Gln-Thr-Pro-Val-Val-Val-Pro-Pro，Leu-Val-Pro-Pro，Phe-Leu-Val-Pro-Pro，Pro-Val-Pro-ProandAla-Pro-Val-Pro-Pro，及它們的鹽加合物
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述抑制劑，抑制劑給成人的服用量是0.1-100mg/日(按有效成份計(jì))。
5.一種制備權(quán)利要求1所述抑制劑的方法，包括用乳酸菌使含作為有效成份的Val-Pro-Pro的食品材料發(fā)酵。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中所說(shuō)的食品材料選自全動(dòng)物乳，脫脂動(dòng)物乳，乳酪蛋白，玉米，玉米蛋白，小麥，小麥蛋白，大豆，脫脂大豆，大豆蛋白及它們的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中的食品材料在酵母存在下發(fā)酵。
全文摘要
一種含有作為有效成分的Val—Pro—Pro及含有3—10個(gè)氨基酸殘基的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑。制備上述血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑的方法包括用乳酸菌使含作為有效成分的Val—Pro—Pro的食品材料發(fā)酵。
文檔編號(hào)A61P9/12GK1090201SQ93116559
公開(kāi)日1994年8月3日 申請(qǐng)日期1993年7月23日 優(yōu)先權(quán)日1992年7月23日
發(fā)明者中村康則, 高野俊明 申請(qǐng)人:可爾必思食品工業(yè)株式會(huì)社