專利名稱：控制釋放的可移植的生長激素組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種控制釋放的可植入的生長激素(somatotropin)組合物;并且尤其是涉及當以非腸道途徑給動物和人類給藥時能提供持續(xù)釋放的生物學活性的生長激素的一種控制釋放的可植入的生長激素組合物。
大多數(shù)生物學活性生長激素具有比較短的體內(nèi)半衰期。為了提供足夠高的生物學效應(yīng)并保持生長激素的延長了的生物學活性，由此，必須連續(xù)地和/或頻繁地施用該藥劑，從而可能使給藥的受治療者產(chǎn)生嚴重的副作用。因此，如果將生長激素體內(nèi)供藥時，需要一種延長其效果的無害的方案。因此，已進行了各種嘗試以便找到一種具有延長釋放特性的生長激素組合物，從而可以降低給藥的頻率及劑量。
到目前為止，大多數(shù)已有的控制釋放的生長激素組合物是可注射的制劑。例如，韓國專利公告No.89-2631和韓國專利公開No.87-1825公開了一種含有在油懸浮的賦形劑中的過渡金屬元素/生長激素的復合物，其中的油懸浮的賦形劑由植物油或礦物油與賦形劑和佐劑混合而成。
歐洲專利公告號1986/193，917和1989/314，421描述一種包括分散于水中或分散于含有碳水化合物聚合物如葡聚糖的油中的生長激素生物學活性大分子的組合物。
歐洲專利公告號1987/211，691還提供了一種包括分散于含有幾種蠟的植物油中的生長激素的組合物。韓國專利公告號92-5688和韓國專利公開號92-11513提供了一種包括分散于醋酸生育酚中的生長激素的組合物。
但是，上面描述的組合物具有如突發(fā)效應(yīng)的缺陷，并且，結(jié)果是已經(jīng)找到了通過使用例如一種可植入的制劑而在體內(nèi)供給生物學活性生長激素的另一種方法。
例如，韓國專利公告號90-6886告訴我們一種制造可植入藥丸的方法，該藥丸包括用如紫膠，蜂蠟和纖維素的部分阻擋的聚合物覆蓋層包裹一種生長激素晶粒，從而控制生長激素的釋放。同樣，韓國專利公告號93-8952闡述了一種制造藥丸形式的可植入制劑的方法，包括將生長激素，蔗糖和乙基纖維素混合，將該混合物配制成藥丸以及用微多孔的或非多孔的聚乙烯包裹該藥丸的步驟。
歐洲專利公告號1991/462，959還公開了一種制造可植入制劑的方法，包括用具有各種分子量和濃度的聚醋酸乙烯包裹金屬/生長激素復合物藥丸。同樣，美國專利號4，765，980告訴我們一種包含在硅酮管中的離子/生長激素復合物的可植入制劑。韓國專利公開號93-12035還顯示了一種制備可植入藥片的方法，包括使生長激素和水溶性聚合物的混合物成粒并用羥甲基纖維素包裹該顆粒的步驟。
PCT國際公告號WO90/11070提供一種通過使用一種溶劑和水不溶性聚合物而制備的可植入的生長激素藥丸。PCT國際公開號WO91/05548公開了一種包括分散于蠟和表面活性劑混合物中的生長激素的可植入組合物。
但是，上述的可植入的組合物常不能保持生長激素在所需的時期內(nèi)持續(xù)釋放，和/或需要復雜的制造過程如摻入金屬離子復合物，包裹制劑等。而且，由于其與機體組織的不相容性，在施用到機體內(nèi)后不久，該藥劑立即被纖維狀組織包成膠囊，從而導致嚴重后果。
另一方面，歐洲專利公告號1987/246，540公開了一種制備可植入制劑的方法，包括將生長激素與脂肪酸均勻混合，并將其配成所需形式。盡管，所說方法很容易應(yīng)用到有效低濃度要求的藥劑，如，胰島素，但將該技術(shù)應(yīng)用到要求較高的有效濃度的藥劑(例如，生長激素)相當困難，因為該制劑的釋放速率非常低。
因此，本發(fā)明的主要目的是提供一種可植入的生長激素組合物，當體內(nèi)給藥時該組合物能以時間控制的方式控制生物學活性生長激素的釋放，并且借助簡單方法可制備該組合物。
根據(jù)本發(fā)明，提供了一種新的可植入的生長激素組合物，包含有生長激素，水溶性聚合物和生物相容性蠟的均勻混合物。
根據(jù)下面描述的優(yōu)選實施例結(jié)合附圖可以清楚上面所述及其他的本發(fā)明目的和特征，其中

圖1顯示將含有根據(jù)本發(fā)明制備的豬生長激素的典型的組合物施用到大鼠時對重量增加的影響;以及圖2和3顯示將含有豬生長激素的典型組合物施用到切除垂體的大鼠時對重量增加的影響。
圖4顯示了將含有牛生長激素的典型組合物施用到切除垂體的大鼠時對重量增加的影響。
根據(jù)本發(fā)明，將一種水溶性的聚合物，一種生物相容性蠟和生長激素的凍干粉均勻混合以獲得本發(fā)明的組合物，按照需要，可以將得到的組合物配制成各種基質(zhì)類型。
可用于本發(fā)明的水溶性聚合物是具有分子量為1，000至40，000道爾頓范圍，優(yōu)選的是1，540到35，000道爾頓的聚乙二醇。各種聚乙二醇分子可單獨使用或?qū)⒃谏厦嫠龇秶鷥?nèi)的不同分子量的各個分子相互結(jié)合使用。在該組合物中使用的水溶性聚合物的量為占該組合物總重量的30%-50%(重量)范圍。
可用于本發(fā)明組合物中的生物相容性蠟包括石蠟和白蜂蠟等;并且可使用的蠟的量為占組合物總重量的30%-50%(重量)范圍。
用于本發(fā)明的組合物中的生物學活性生長激素是其任何一種凍干形式，它可以單獨使用或與卵磷脂，如，L-α-磷脂酰膽堿混合(“脂質(zhì)體生長激素”)使用，并且可以是動物生長激素，優(yōu)選的是牛生長激素或豬生長激素?？梢詮膭游镏刑崛』蚶弥亟MDNA技術(shù)從微生物培養(yǎng)物中生產(chǎn)上面所述生長激素。
可將本發(fā)明的組合物配制成適于給藥的各種基質(zhì)類型，例如，片劑或丸劑。
該制劑中活性成分的大小和含量隨著所需的生物學活性生長激素的量而變化但在不使接受者機體產(chǎn)生排斥或毒副作用的范圍內(nèi)。對于片劑，其直徑大小為3至15mm并且厚度為1至10mm。
下列提供的實施例僅是為了闡述本發(fā)明的目的并不是為了限制本發(fā)明范圍。
實施例1將5克豬生長激素凍干粉與10克具有分子量為35，000的聚乙二醇和10克石蠟混合，然后用一個球狀研磨機將該混合物均勻混合。
利用一個壓片機(KORSCH，MASHINENFABRIK，Germany)將上述得到的均勻混合的組合物250毫克制成直徑大小為7mm，厚度為6.2mm的片劑。
實施例2使用分子量為20，000的聚乙二醇代替分子量為35，000的聚乙二醇重復實施例1中描述的相同步驟。
實施例3使用分子量為12，000的聚乙二醇代替分子量為35，000的聚乙二醇重復實施例1中描述的相同步驟。
實施例4用分子量為8，000的聚乙二醇代替分子量為35，000的聚乙二醇重復實施例1中描述的相同步驟。
實施例5利用分子量為1，540的聚乙二醇代替分子量為35，000的聚乙二醇重復實施例1中描述的相同步驟。
實施例6重復實施例1中描述的相同步驟，所不同的是用凍干的脂質(zhì)體生長激素(豬生長激素與L-α-磷脂酰膽堿混合而得，是按照韓國專利申請No.90-23104公開的方法制備的)代替凍干的豬生長激素，并且制備的是266.5毫克的片劑。
比較例1在沒有豬生長激素時重復實施例中描述的相同步驟。
測定藥片的物理特性如硬度和濕度含量。使用一個硬度測試儀(ERWEKATBH-28)檢測片劑的硬度，使用濕度分析儀(SartoriusMoistureAnalyser)分析該片劑的濕度含量(參見表1)。
表1顯示了實施例1至6以及比較例1中制備的片劑的物理特性。
按下文中描述的方法測試實施例中制備的片劑的釋放率。
體外溶解檢測向溶解分析儀(CALEVAModel7ST)的溶液杯中加入400毫升的10mM磷酸緩沖鹽水，pH7.3以及在實施例1至5的各個實施例中制備的一個藥片;并且在37℃及100rpm的條件下，利用一個分光光度計在24小時內(nèi)以每隔2小時檢測280nm處溶液的吸收率。
生長激素的酪氨酸，苯丙氨酸和色氨酸殘基吸收波長為275nm和280nm的紫外光。上述氨基酸在生長激素中的結(jié)合含量幾乎是不變的，因此，生長激素的濃度與280nm處吸收值成比例。對于純的生長激素，當生長激素的濃度為1mg/ml并且紫外光通道長度為1cm時測得280nm處的吸收值作為1.0。
因此，根據(jù)下面的等式很容易計算釋放出的生長激素的量。
生長激素的釋放量(mg)＝280nm處的吸收值(O.D.)×在溶解檢測中使用的溶液的體積(ml)用表2中顯示的系數(shù)可得到從各種組合物(在實施例1至5中制備)釋放的生長激素的量相對于消逝時間的線性等式，即，y＝ax+b(其中y是釋放的生長激素的量，x是消逝的時間，系數(shù)a和b分別代表斜率和截距)。利用最小二乘法可獲得相關(guān)系數(shù)r并且相關(guān)系數(shù)r代表線性的測試結(jié)果。
表2.線性等式的系數(shù)代表釋放量和消逝時間的關(guān)系 (y＝ax+b)
體內(nèi)效果檢測(1)對正常大鼠體重增加的影響利用實施例1至5和比較例1制備的藥片通過體內(nèi)檢測測定本發(fā)明的生長激素組合物對體重的影響。將重為200-250克的三十頭雌SD大鼠(ToxicologyResearchCenter，KoreaResearchInstituteofChemicalTechnology，Daejeon，Korea)切開其左背的皮下組織，然后以5頭大鼠為一組進行分組并分別在各組植入實施例1至5獲得的藥片，并縫上切開的皮膚。在第六組的5個鼠中植入比較例1中獲得的藥片，以該組作為對照組。在植入后10天時間內(nèi)每天在相同時間將大鼠稱重，將重量與植入前短時間內(nèi)稱重的重量進行比較以測定其重量的增加，結(jié)果顯示于表3。
(2)對切除垂體的大鼠的體重的影響根據(jù)實施例1中描述的步驟將實施例1，2和6的組合物各50mg制成直徑大小為7mm以及厚度為1.4mm的片劑。利用上述片劑通過體內(nèi)檢測本發(fā)明的組合物對切除垂體的大鼠的體重增加的影響。利用旁咽(parapharyngeal)方法(H.B.Waynforth，ExperimentalandSurgicalTechniqueintheRat，pp.143-150，AcademicPress(1980))切去重為80-120克的雌性SD大鼠的垂體。從手術(shù)后兩個星期開始，1周后每天在相同時間將大鼠稱重，以選擇其重量維持最小變化的十六頭大鼠。將上面制備的藥片分別植入每組為四頭的三個組的大鼠的切開的左背皮下組織中，并縫上切開的皮膚。將比較例的50毫克組合物制成與前面所述相同大小的藥片;每頭都植入該藥片的四個大鼠作為對照組。在10天時間內(nèi)每天在同一時刻將16頭大鼠稱重，并將稱得的重量與植入前三天稱得的重量進行比較以決定其重量的增加。結(jié)果顯示于表4中。其重量的增加表示為平均值±標準偏差。
實施例7根據(jù)實施例1描述的步驟將實施例1的組合物50毫克(含10毫克豬生長激素)制成直徑大小為4mm以及厚度為3.6mm的藥片。
實施例8利用實施例7中描述的操作法將40mg(含10mg豬生長激素)的組合物制成藥片，該組合物是按照實施例1描述的步驟制備的，與實施例1不同的是使用了7.5克聚乙二醇(MW＝35，000)以及7.5克石蠟。
實施例9利用實施例7中描述的步驟將30mg(含10mg豬生長激素)組合物制成藥片，其中的組合物是按照實施例1中描述的方法制備的，與實施例1不同的是，使用了5克聚乙二醇(MW＝35，000)以及5克石蠟。
比較例2根據(jù)歐洲專利公告No.1987/246，540中實施例3的描述，使用一個球狀研磨機，將32.5mg軟脂酸，7.5mg的膽固醇以及10mg豬生長激素均勻混合，然后將該組合物50mg制成直徑大小為4mm以及厚度為3.6mm的藥片。
根據(jù)前面描述的方法，使用實施例7至9以及比較例2中制備的藥片，在切除垂體的大鼠中完成體內(nèi)檢測。
結(jié)果顯示于下面表5中。在表5中，給出的重量增加值為平均值±標準偏差，并以未處理的切除垂體的大鼠作為對照組。
表5.切除垂體的大鼠重量的增加(克)
實施例10按照相同于實施例7描述的方法，使用10mg牛生長激素代替10mg豬生長激素，制備每個藥片。按照前面描述的方法，使用上面制備的藥片，在切除垂體的大鼠中進行體內(nèi)試驗，以未處理的切除垂體的大鼠作為對照組。結(jié)果顯示于下面表6中。在表6中，給出的重量增加值為平均值±標準偏差。
表6.切除垂體的大鼠重量的增加(克)
實施例11將本發(fā)明的豬生長激素組合物植入豬中，并且在植入后4周內(nèi)檢測豬增加的重量以及喂養(yǎng)效率。用重量約為75kg的12只雄豬完成檢測。
每2周將實施例1中制備的重為500mg(含100mg的豬生長激素)的各個藥片植入到6只豬的每一只的皮下組織中。另外6只豬未進行處理用作為對照組。在植入前，植入后2周和4周測豬的重量。計算平均日增重(ADG)，飼料攝取量以及喂養(yǎng)效率(飼料攝取量/體重增加的量)，結(jié)果與增加的重量值一并列于表7中。
從上述結(jié)果可看出，以體內(nèi)供藥時本發(fā)明制備的組合物顯示出持續(xù)的效果，并且這些組合物是用簡單方法制備的。另外，這些組合物的副作用是微不足道的，從而，適用于長期給藥。
對于由上述特定實施例描述本發(fā)明時，應(yīng)認識到可對其涉及的發(fā)明進行本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員顯而易見的各種修改和變化，并且這種變化都是在下面的權(quán)利要求定義的發(fā)明范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種控制釋放的可植入的組合物，它包含一種水溶性的聚合物，一種生物相容性蠟以及有效量的生長激素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的水溶性聚合物的量是在占該組合物總量的30%至50%(重量)范圍內(nèi)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的生物相容性蠟的量是在占該組合物總量的30%至50%(重量)范圍內(nèi)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的體生長素是動物生長激素。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其中所述的生長激素是牛或豬生長激素。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的生長激素是采用重組DNA技術(shù)制備的。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的生長激素是凍干的或脂質(zhì)體生長激素。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的組合物，其中所述的脂質(zhì)體生長激素包括生長激素和α-磷脂酰膽堿。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的水溶性聚合物是聚乙二醇。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述的聚乙二醇分子量為1，000至40，000道爾頓范圍。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的生物相容性蠟為石蠟。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的可植入的組合物是藥片或藥丸的形式。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物，其中所述的藥片或藥丸的直徑大小為3至15mm并且其厚度為1至10mm。
全文摘要
本發(fā)明涉及控制釋放的可植入的組合物，它包括一種生長激素，一種生物相容性蠟和水溶性聚合物。本發(fā)明的組合物有優(yōu)越的持續(xù)的效果，并幾乎沒有副作用，適合于長期給藥。
文檔編號A61K9/22GK1093597SQ9312146
公開日1994年10月19日 申請日期1993年12月28日 優(yōu)先權(quán)日1992年12月28日
發(fā)明者金南中, 趙興洙, 宋孟錫, 崔允貞, 李炳建 申請人:株式會社樂喜