專利名稱：傳染性囊病疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于新的傳染性囊病(IBD)疫苗以及新的傳染性囊病減毒的病毒菌株。
家禽的傳染性囊病是由屬于BIRNA族的病毒引起的，這些病毒在低pH的醚和氯仿中是比較穩(wěn)定的，它們含有兩個編碼它們的病毒蛋白的雙鏈RNA的片段。
已經(jīng)知道兩種血清型，即血清型Ⅰ和血清型Ⅱ，血清型Ⅰ引起小雞的IBD，血清型Ⅱ是由火雞中分離出來的，它對于小雞是非致病的。對于一種血清型的母體抗體不能保護免受另一種血清型的作用，但是，同源抗體確實保護雞免受這種疫病的危害。
傳染性囊病分布很廣并造成很大的經(jīng)濟損失。害這種病的雞遭受腹瀉、肌肉出血、法氏囊壞死并嚴重損害免疫系統(tǒng)，死亡率很高，存活下來的雞生長遲緩并且對其它疾病非常敏感。
多年來，人們已研制出幾種減毒活疫苗。例如，美國專利NO.3584055公布了一種對IBD有效的疫苗，它含有通過多次傳代得到的減毒的IBD病毒;美國專利NO.3769400公布了一種對IBD有效的疫苗，它含有通過在幼鼠中多次傳代而得到的減毒的IBD病毒;美國專利NO.4530831公布了一種活疫苗或滅活疫苗，將這種疫苗在通常的接種疫苗齡期對家禽一次用藥可有效地預防IBD，該疫苗含有作為ATCCVR-2041保藏的IBD病毒，這種疫苗是不致病的，它能穿透通常水平的源自母體的抗體而不損害母體免疫家禽的囊，因而用來為家禽提供預防。該疫苗是通過4步噬菌斑純化，然后2次卵傳代而獲得的;美國專利NO4824668公布了一種對家禽IBD有效的疫苗，它含有減毒或滅活的IBD病毒菌株VR2161以及載體或稀釋劑，可以給家禽用藥而不會在接種疫苗的家禽中產(chǎn)生IBD癥狀。這些疫苗一般是通過飲水給藥，直到1988年為止，它們提供了良好的免疫作用。PCT申請WO9001336公布了一種疫苗，該疫苗用來預防由對當時已知的各種疫苗不起反應的菌株(很明顯是“非典型的”菌株)引起的家禽IBD，如所述它含有死的或減毒的新的純化的IBD病毒。
1988年，先是在英國和荷蘭，隨后在世界上其它地區(qū)，出現(xiàn)了一種新的菌株，它的致病力很強，造成的死亡率遠遠高于“舊時的”菌株。已有的減毒活疫苗對這種新菌株已不起預防作用。就抗原而言，在歐洲分離出的這種新菌株未發(fā)現(xiàn)與舊時的、所謂“典型的”菌株有不同之處。另一方面，在美國分離出“變異”菌株，當用單克隆抗體試驗系統(tǒng)試驗時這種變異菌株與“典型的”菌株不一樣。作為本發(fā)明主題的以色列分離菌株，經(jīng)過試驗而發(fā)現(xiàn)與歐洲菌株相類似。
舊時的疫苗不能預防這些新的菌株尤其是因為，這些新菌株具有較高的致病性，能穿透由種母雞傳給小雞的母體抗體。剛孵化的小雞接種疫苗時，引入體內(nèi)的舊時的病毒由于這樣的母體抗體而失去活性。在孵化之后，母體抗體的效價以5天左右的半壽命減少。如果接種疫苗推遲到檢測不到母體抗體的齡期時進行，那么小雞就處在高度危險之中在使用疫苗菌株進行免疫之前，它們可能會感染上致病的野生菌株。因此，一般認為，疫苗菌株應具有一些致病性，這樣它可以在如上所述的野生菌株之前穿透母體抗體，也就是說，它應具有中等程度的毒性。
最近，H.J.Tsai和Y.M.Saif描述了兩種IBD的變異菌株(IN和E)[參見AvianDiseases36∶415-422(1992)]，它們在已建立的綠猴腎細胞系(BGM-70)中進行適應和傳代。在細胞培養(yǎng)中傳代導致致病性的喪失，而抗原性和免疫原性則保留下來。但是，將經(jīng)過傳代的病毒以活疫苗形式給予無特異致病菌的(SPF)小雞時，沒有產(chǎn)生對該疾病的預防作用。與之相反，本發(fā)明涉及一些經(jīng)過傳代、喪失了一些致病性但保留了抗原性的病毒，這些病毒為家禽提供了免疫性。
本發(fā)明又涉及用于預防家禽的傳染性囊病的疫苗，它含有免疫有效量的、活的減毒的中等致病的IBD病毒，該病毒屬于以保藏號No.V92052301(MB)保藏在ECACC的菌株。
本發(fā)明涉及用于預防家禽的傳染性囊病的疫苗，它含有免疫有效量的、活的減毒的中等致病的IBD病毒，該病毒屬于以保藏號No.V92100106(MB-2)保藏在ECACC的菌株。
本發(fā)明還涉及一種用于預防家禽的傳染性囊病的疫苗，它含有免疫有效量的、活的減毒的中等致病的IBD病毒，該病毒屬于以保藏號No.V92102209(MB-1)保藏在ECACC的菌株。
此外，本發(fā)明還涉及一種預防家禽的傳染性囊病的方法，該方法是通過將免疫有效量的、含有以保藏號No.V92052301(MB)和/或No.92100106(MB-2)和/或No.V92102209(MB-1)保藏在ECACC的菌株的IBD病毒的疫苗給家禽用藥來實現(xiàn)的。
另一方面，本發(fā)明還涉及以保藏號NO.V92052301(MB)、NO.V92100106(MB-2)和NO.V92102209(MB-1)保藏在ECACC的三種新的病毒菌株。
此外，本發(fā)明還涉及一種用以預防家禽免于傳染性囊病的活疫苗的制備方法，所述活疫苗含有免疫有效量的、以保藏號NO.V92052301(MB)和/或NO.V92100106(MB-2)和/或NO.V92102209(MB-1)保藏在ECACC的菌株的病毒。
本發(fā)明涉及以保藏號NO.92052301(MB)、NO.V92100106(MB-2)和NO.V92102209(MB-1)保藏在ECACC的三種新病毒菌株。
如前所述，給家禽接種疫苗應在母體抗體消失之前及早進行，以避免雛雞被致病的野生的菌株所感染而發(fā)生危險。因此，一般認為，有效的疫苗菌株應保持一些致病性，這樣它就會穿透母體抗體。本發(fā)明的三種新菌株MB、MB-2和MB-1具有這種所要求的特性，它們是中等致病性的，因而可以穿透母體免疫性，但致病性沒有強到引起疾病的程度。在無IBD抗體的SPF雛雞中進行試驗時，MB-1菌株的致病性稍低于MB菌株，而MB-2菌株則更低。所有這三種菌株，即使在1-2周齡時通過飲水給藥也提供了良好的免疫性，對于母體免疫的肉用仔雞或取代的育種雞和產(chǎn)蛋雞則是非致病的。不過，在接種疫苗之后發(fā)生了某種程度的囊萎縮。
由1989年間在以色列中部的兩個飼養(yǎng)場中死于IBD的肉用仔雞的法氏囊中分離出原始菌株。該病毒可以在含胚雞蛋以及在細胞培養(yǎng)(例如雞胚成纖維細胞(CEF)組織培養(yǎng)、維羅(Vero)細胞系培養(yǎng)和其它適宜的培養(yǎng))中培育生長。細胞在旋轉(zhuǎn)瓶、燒瓶、微載體上或用其它培育組織培養(yǎng)的方法生長至80%融合。感染之后3-4天，細胞病的作用(CPE)形成，通過冷凍、解凍、然后低速離心來收獲病毒。將穩(wěn)定劑加到用于冷凍干燥過程的上清液中。病毒的減毒和繁殖將在下面的實施例中予以詳細說明。
疫苗的制造及其用藥也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。將含胚蛋接種，收獲胚胎和膜，由它們制成組織勻漿并添加禽類活疫苗中慣用的穩(wěn)定劑(例如胨、乳糖、干奶粉等)制成活疫苗。
以活疫苗形式使用時，劑量可以是在102-104EID50(EID50＝雞胚感染劑量50%)范圍內(nèi)。
本發(fā)明的活疫苗可以含有上述病毒菌株中的一種，或者上述菌株中任意二種的混合物，或者更進一步含有上述所有病毒菌株的混合物。
本發(fā)明的任一種活疫苗還可以含有其它的病毒，如新城病病毒、馬立克氏病病毒或傳染性支氣管炎病毒。
可以采用目前已有的接種方法將上述疫苗給小雞用藥，例如通過飲水，通過眼給藥(如滴眼劑、氣霧劑或用其它噴霧方法)，通過鼻給藥(如滴鼻劑)以及任何其它適宜的已知接種疫苗途徑。
用含有MB和/或MB-2和/或MB-1病毒的活疫苗接種后的小雞以沉淀的和類型特異中和的抗體應答，接種后的小雞在毒性很大的以色列IBD病毒菌株傳染和歐洲菌株的傳染之后有了免疫力。因此，本發(fā)明的疫苗顯示出提供多方面的抗IBD免疫力。
實施例1菌株的減毒由1989年間在以色列中部的兩個飼養(yǎng)場中死于IBD的肉用仔雞的法氏囊中分離原始病毒。將上述囊研磨、離心分離并通過0.2μ微孔過濾器進行過濾。將濾液注入11天含胚的SPF雞蛋中。孵化72-96小時后，收集胚胎和膜，將其均勻化，順次地重新注射到SPF小雞含胚蛋中進行減毒。
將MB菌株(ECACCNO.V92052301)傳代42次，MB-1菌株(ECACCNO.V92102209)傳代94次，并將由另一個飼養(yǎng)場分離出的MB-2菌株(ECACCNO.V92100106)傳代71次。把這些經(jīng)過傳代的菌株凍結(jié)真空干燥，用來作為工作種。
實施例2給母體免疫(M.I)的肉用仔雞接種MB疫苗在不同的齡期給肉用仔雞(每組15只)接種疫苗在2、7或14天一次接種，或在2和14天兩次接種(表1)。整個試驗期間小雞是在隔離單元中。接種疫苗是按每個劑量103.35EID50MB病毒通過飲水系統(tǒng)來進行的。孵化后2、7和14天時母體抗體分別是11/11、6/10和2/10(AGP陽性數(shù)目/試驗的血清數(shù)目;AGP＝瓊脂凝膠沉淀素)。在28天時用下面的兩種方法評定其效力(a)血清學應答沉淀的抗體(AGP)或酶連接的免疫吸附測定(ELISA)。發(fā)現(xiàn)在這些系統(tǒng)之間存在很好的相關(guān)性。
(b)保護對抗攻擊在28日齡時，使用強毒性的以色列IBD病毒菌株(每只小雞105EID50)經(jīng)眼內(nèi)對小雞進行攻擊。另外還用Weybridge攻擊52/70菌株進行了攻擊。三天之后將這些小雞殺死，利用AGP檢驗它們的法氏囊中IBD病毒的存在情況。經(jīng)過免疫的小雞是陰性的，而未經(jīng)免疫的小雞則是陽性的。用IBD病毒的強毒性以色列菌株和Weybridge52/70菌株進行攻擊，得到了相同的結(jié)果。因此，本發(fā)明的疫苗提供了對于以色列菌株和歐洲菌株的免疫力。
計算囊/體重比，檢驗囊的病理組織學損害。所有的試驗組還在14日齡時接種了活的商品的溫和的(lentogenic)新城病(NDV)疫苗。
表1接種的齡期對IBD的血清學應答被保護對抗對NDV的抗體體重(日)AGPELISA攻擊的小雞(HI)(克)20/14*1/142/12**3.6±0.91077±922+1413/1413/1414/143.1±0.51077±14876/147/1414/143.5±0.9958±1191415/1515/1514/143.8±0.81114±83對照組0/80/80/83.8±0.9995±88＊陽性的數(shù)目/試驗的數(shù)目＊＊被保護的數(shù)目/試驗的數(shù)目由表1的結(jié)果可以看出，在7日齡或更晚一些接種MB菌株疫苗時，小雞得到了保護。
在7天時，約半數(shù)的小雞血清學應答，所有的小雞均受到保護對抗攻擊。由血清學和對攻擊的抗力可以看出，在14天時所有的小雞都得到免疫。在2日齡進行接種時，沒有觀察到保護。在暴露于強毒性病毒環(huán)境三天之后，未保護組(對照組及在2日齡接種的組)的囊/體重比接近于0.25%，而被保護組(在2+14、7和14日齡接種的組)為0.07%。這些數(shù)字表明，病毒穿透母體抗體并引起囊萎縮。病理組織學檢驗表明有輕微的淋巴細胞損耗。在接種過IBD的組中對NDV接種的響應與對照組的相似。從統(tǒng)計數(shù)字來看，在試驗結(jié)束時接種過IBD的小雞的體重與對照組的沒有什么不同。
實施例3給M.I肉用仔雞經(jīng)口或利用氣霧劑接種MB和MB-1疫苗從出生第1天就收養(yǎng)在隔離室中的肉用仔雞，在12日齡時接種(試驗組1和2，MB或MB-1疫苗)或在1+12日齡時接種(試驗組3和5，MB疫苗)，接種劑量為103.65EID50，在1+18日齡通過眼內(nèi)途徑(試驗組1-4)或在1+12日齡通過氣霧劑途徑(試驗組5-6)給小雞接種活的NDV疫苗(VH菌株)。在第5組中，進行IBDV(MB)和NDV(VH)的組合氣霧劑接種。在29日齡時將小雞放血并攻擊，三天后把它們殺死。在1日齡時，10/10的小雞具有源于母體的IBD抗體。
將MB和MB-1通過飲水或通過氣霧劑給藥時，它們賦予良好的保護對抗攻擊以及中等程度的血清學應答。由這一結(jié)果及前面的實施例可以看出，除了在1日齡和12-14日齡兩次接種之外，在12-14日齡一次接種也產(chǎn)生了免疫力。
沒有發(fā)現(xiàn)對體重或NDV效價產(chǎn)生不利的影響，不過觀察到某種程度的囊萎縮。
另外還可得出如下結(jié)論同時接種Gumboro的MB菌株和新城病疫苗是可行的，這將導致與單獨接種類似的結(jié)果。
表2IBD接種血清學應答被保護對抗對NDV的抗體體重組別日方法菌株AGPELISA攻擊的小雞(HI)(克)1 12 dw*MB-1 7/8 7/8 8/8 4.0±0.8 1304±109212dwMB7/88/80/84.6±1.01348±13131+12dwMB10/169/1616/164.3±0.71209±1164對照組----0/80/80/84.2/0.91256±1635 1+12 氣霧劑**MB 10/16 10/16 16/16 4.0±0.9 1031±996對照組----0/140/140/144.7±0.71154±102dw＊＝飲水＊＊組合的IBDV+NDV接種這種組合的接種是采用氣霧劑方法通過呼吸系統(tǒng)進行的，該方法推薦用于NDV接種。另外還表明，氣霧劑接種對于大批量接種MB疫苗是一種理想的方式。
實施例4MB菌株與減毒的Winterfield菌株的比較將14日齡的肉用仔雞通過眼內(nèi)途徑接種MB菌株(每只小雞103.75EID50)或Winterfield菌株(每只小雞104.28EID50)。Winterfield菌株是經(jīng)過減毒的菌株，它不能防止家禽免受流行的致病力較強的病毒的侵害。兩個對照組沒有接種IBDV。三個組在1日和17日齡接種NDV疫苗。在31日齡時將所有小雞放血并攻擊。結(jié)果匯總于表3中。
表3接種對下列病毒的抗體保護對抗攻擊IBDVNDVIBDVNDVMBVH10/105.210/10WinterfieldVH0/105.10/10--VH0/184.70/18----0/202.30/20由表3可以看出(a)Winterfield菌株不能保護對抗攻擊，也不產(chǎn)生抗IBD的抗體;(b)MB菌株賦于高度的保護作用及高的抗體水平;(c)MB菌株對NDV抗體效價沒有不良影響。
實施例5采用不同的劑量給小雞接種MB或MB-2疫苗在7或12日齡時通過滴眼劑在隔離單元中進行接種(每個試驗組1個單元)。在101.0-103.35EID50范圍內(nèi)采用各種不同劑量進行試驗。在本實施例中，給商品的M.I.肉用仔雞和SPF雞接種疫苗，結(jié)果匯總于表4和表5中。在21日齡(即接種后9或14天)時將這些小雞放血并攻擊。4天后把它們殺死，它們的囊進行IBD抗原檢驗并計算囊/體重比。
表4M.I.肉用小雞疫苗接種時的劑量血清學保護對抗囊/體重比體重日齡 EID50應答攻擊 (%) (克)MB 7 103.3514/17 17/17 0.07±0.03 900±69MB 12 102.359/10 10/10 0.07±0.02 921±95MB 12 101.359/11 11/11 0.07±0.01 918±86對照組-0/110/110.29±0.06915±72MB-2 12 103.05/10 10/10 0.07±0.03 988±88MB-2 12 102.05/10 10/10 0.07±0.02 974±94MB-2 12 101.04/10 10/10 0.10±0.03 988±93
表5SPF雛雞疫苗接種時的劑量接種后的血清學保護對抗囊/體重比體重日齡 EID50死亡率應答攻擊 (%) (克)MB 7 103.355/18 7/7 7/7 0.12±0.03 277±40MB 12 102.354/15 5/6 6/6 0.11±0.03 199±20MB 12 101.354/15 5/6 6/6 0.14±0.02 212±33對照組 - 0/15 0/3*0/8*0.43±0.17 205±13MB-2 12 103.00/15 5/8 8/8 0.11±0.02 264±27MB-2 12 102.00/15 7/8 8/8 0.13±0.03 224±44MB-2 12 101.00/15 6/8 8/8 0.12±0.02 233±17＊由于攻擊的結(jié)果，8只小雞中有5只死亡。在存活的3只中發(fā)現(xiàn)了抗原。在所有接種疫苗的組中攻擊之后沒有發(fā)生死亡。
可以看出(表4，5)，早在接種后9天MB和MB-2疫苗就賦予良好的保護使之對抗攻擊并有良好的血清學應答，即使劑量低至101EID50也是如此。
MB-2的致病低于MB(見表5中的SPF小雞接種后的死亡率)，并且引起稍弱的血清學應答。
實施例6給1日齡的SPF雛雞接種MB、MB-1和MB-2菌株1日齡時，在隔離單元中通過滴眼劑給SPF雛雞接種，每個劑量103.35EID50。在接種后第7天將每一組中的部分小雞殺死，計算囊/體重比。在21日齡時將剩余的小雞攻擊，方法與實施例5所描述的類似。
表6疫苗 7dpi*接種后的血清學應答保護對抗囊/體重比死亡率IBD攻擊MB0.12±0.038/182/66/6MB-10.15±0.043/180/77/7MB-20.12±0.030/182/99/9對照組0.29±0.050/150/80/8＊dpi＝免疫后的天數(shù)由表6可以看出，對于1日齡SPF雛雞的致病力程度(用死亡率衡量)，MB比較高，MB-1比較低，而MB-2為0。所有這些菌株保護對抗攻擊都很好。
實施例7MB和MB-2病毒蛋白的鑒別A.制備用于分析的病毒蛋白將雛雞隔離飼養(yǎng)至4周齡，把它們分成幾組，按如下所述進行感染第1組感染在以色列分離得到的野生型致病的病毒。
第2組感染另一IBDV分離物，本發(fā)明的MB菌株就是由該分離物通過卵傳代而產(chǎn)生的。
第3組感染MB菌株(保藏號NO.V92052301)。
第4組感染另一IBDV分離物，MB-2(保藏號NO.V92100106)是由該分離物通過卵傳代而產(chǎn)生的。
第5組感染MB-2菌株(保藏號NO.V92100106)。
在感染3天后將這些小雞殺死，將它們的法氏囊均化、冷凍和解凍。將每一組的病毒粒子在超速離心機中結(jié)合40%-60%的蔗糖。
B.Western印跡分析在SDS處理之后，采用SDS-PAGE(十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳)在9W下分離蛋白質(zhì)14小時。每個凝膠體的一半用考馬斯藍染色，另一半送到hybond-C過濾器與SPF陰性血清(GelA)或者與恢復期的雞血清(GelB)進行反應。將這些凝膠體與免抗雞血清和過氧化物酶反應。

圖1是這種試驗的一個有代表性的例子。各凝膠體中的1-5泳道相應于上述的1-5組。VP＝病毒蛋白。
由圖1可以看出，恢復期的血清(GelB)與IBD病毒的VP2和VP3發(fā)生反應，而SPF陰性血清與這些病毒蛋白(GelA)未發(fā)生反應。
此外，還可以看出a)MB的VP2及其原始菌株-泳道2和3-的大小尺寸與野生型菌株(泳道1)不同。
b)減毒的MB-2菌株的VP2(泳道5)與恢復期的血清進行反應不如其原始菌株的VP2(泳道4)那樣強烈。
它在凝膠體上的位置與除MB和MB原始菌株之外所有其它病毒的VP2相似。
具有重大意義的是發(fā)現(xiàn)了MB-2明顯地不同于它的原始菌株，并且MB不同于在以色列分離出的大部分其它IBD病毒。
實施例8沒有回復病毒性本實施例旨在表明，在由雞到雞的病毒傳代過程中MB菌株的殘留致病性程度沒有改變。將15只SPF雛雞在1日齡時接種MB病毒(每只雞103.65EID50)。三天后殺死5只雞，用它們的囊感染第2組1日齡的雞。在每次感染之后7天按如下所述測定病毒的毒性a)囊/體重比;
b)囊的病理組織學檢驗。
相繼進行5次這樣的從雞到雞的傳代。對于每一次傳代，將對照組感染MB菌株，比較雞傳代病毒的致病性和MB感染接種物的致病性。將第一次MB感染的致病性人為地定義為1.00，它由兩個參數(shù)表示，即囊/體重比和病理組織學評分，在表7中把它們稱為“致病性指數(shù)”。
表7致病性指數(shù)aIBDV效價囊/體重比b病理組織學cEID50/劑量第1次MB感染 103.651.00 1.00第1次雞傳代 >106.30.93 0.88第2次雞傳代 105.620.92 0.96第3次雞傳代 104.921.00 0.96第4次雞傳代 104.931.07 1.04第5次雞傳代 104.650.93 1.04a致病性指數(shù)雞傳代的病毒的致病性與第1次MB感染的致病性(定義為1.00)之比。b第1次MB感染的雛雞的囊/體重比是0.12%-0.15%，而未感染的7日齡雛雞的囊/體重比是0.30%。c病理組織學評分0-正常，沒有淋巴損耗;4-嚴重的淋巴損耗。第1次MB感染的病理組織學評分是2.5-2.9，而未感染的對照組的病理組織學評分是0.23。
由表7可以得出結(jié)論，MB菌株的致病性在5次由雞到雞的傳代過程中沒有提高。
權(quán)利要求
1.一種用于預防家禽的傳染性囊病的疫苗，它含有免疫有效量的、活的減毒的中等毒性的傳染性囊病病毒，該病毒屬于以保藏號NO.V92052301(MB)保藏在ECACC的菌株。
2.一種用于預防家禽的傳染性囊病的疫苗，它含有免疫有效量的、活的減毒的中等毒性的傳染性囊病病毒，該病毒屬于以保藏號NO.V92100106(MB-2)保藏在ECACC的菌株。
3.一種用于預防家禽的傳染性囊病的疫苗，它含有免疫有效量的、活的減毒的中等毒性的傳染性囊病病毒，該病毒屬于以保藏號NO.V92102209(MB-1)保藏在ECACC的菌株。
4.權(quán)利要求1-3中任一項所述的疫苗，在從1日齡起的任何齡期對雛雞一次給藥即可產(chǎn)生效力。
5.權(quán)利要求1-4中任一項所述的疫苗，用于在母體免疫降低的齡期給雛雞用藥。
6.權(quán)利要求5所述的疫苗，用于在10-17日齡時給雛雞用藥。
7.一種凍結(jié)真空干燥的病毒組合物，它含有以保藏號NO.V92052301(MB)保藏在ECACC的傳染性囊病病毒。
8.一種凍結(jié)真空干燥的病毒組合物，它含有以保藏號NO.V92100106(MB-2)保藏在ECACC的傳染性囊病病毒。
9.一種凍結(jié)真空干燥的病毒組合物，它含有以保藏號NO.V92102209(MB-1)保藏在ECACC的傳染性囊病病毒。
10.一種用于預防家禽的傳染性囊病的疫苗，它含有至少一種免疫有效量的、活的減毒的傳染性囊病病毒，所述病毒選自以保藏號NO.V92052301(MB)、NO.V92100106(MB-2)和NO.V92102209(MB-1)保藏在ECACC的菌株。
11.權(quán)利要求10所述用于家禽的疫苗，它還含有至少一種免疫有效量的附加的家禽病病毒。
12.權(quán)利要求11所述用于家禽的疫苗，其中所述附加的家禽病病毒是溫和的(lentogenic)新城病病毒或馬立克病病毒或傳染性支氣管炎病毒。
13.一種預防家禽患傳染性囊病的方法，該方法包括，將免疫有效量的、權(quán)利要求1-5中任一項或權(quán)利要求10所述疫苗或權(quán)利要求7-9中任一項所述病毒組合物給家禽用藥。
14.權(quán)利要求13所述的方法，其中所述的免疫有效量是每劑量約101-104EID50。
15.一種預防家禽患傳染性囊病和/或新城病和/或馬立克病和/或傳染性支氣管炎的方法，該方法包括，將免疫有效量的、權(quán)利要求11或12所述的疫苗給雛雞用藥。
16.權(quán)利要求13-15中任一項所述的方法，包括在任何接種疫苗的齡期一次給藥。
17.權(quán)利要求13-15中任一項所述的方法，包括用所述的疫苗反復給藥。
18.權(quán)利要求13-17中任一項所述的方法，其中，所述疫苗或病毒組合物是通過飲水給藥。
19.權(quán)利要求13-17中任一項所述的方法，其中，所述疫苗或病毒組合物是以滴眼劑的形式通過眼內(nèi)途徑給藥。
20.權(quán)利要求13-17中任一項所述的方法，其中，所述疫苗或病毒組合物是以滴鼻劑形式通過鼻內(nèi)途徑給藥。
21.權(quán)利要求13-17中任一項所述的方法，其中，所述疫苗或病毒組合物通過用該疫苗或病毒組合物給家禽噴霧給藥，或通過粗噴霧或氣霧劑給藥。
22.一種用于預防家禽患傳染性囊病的活疫苗的制造方法，它包括下列步驟a)在SPF含胚雞蛋、雞胚胎成纖維細胞(CEF)或維拉細胞系中培育傳染性囊病病毒;b)收獲a)步驟中得到的病毒物質(zhì);c)將b)步驟中得到的物質(zhì)穩(wěn)定化;d)凍結(jié)真空干燥c)步驟所得到的物質(zhì);其中，a)步驟中培育的傳染性囊病病毒是下列菌株之一的病毒MB(ECACC保藏號NO.V92052301)、MB-1(ECACC保藏號NO.V92102209)或MB-2(ECACC保藏號NO.V92100106)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用來預防家禽的傳染性囊病的疫苗，它含有免疫有效量的、屬于在ECACC以NO.V92052301(MB)保藏的菌株的、活的減毒的中等致病力的IBD病毒；免疫有效量的、屬于在ECACC以NO.V92100106保藏的菌株的、活的減毒的中等致病力的IBD病毒；或免疫有效量的、屬于在ECACC以NO.V92102209(MB-1)保藏的活的減毒的中等致病力的IBD病毒。本發(fā)明還涉及通過將免疫有效量的上述疫苗給家禽用藥來預防家禽的傳染性囊病的方法。另外，本發(fā)明還涉及制造活疫苗的方法。
文檔編號A61K39/395GK1113158SQ93121559
公開日1995年12月13日 申請日期1993年12月1日 優(yōu)先權(quán)日1992年12月1日
發(fā)明者B·古特 申請人:阿比克有限公司