專利名稱：口服促神經(jīng)生長肽及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種利用生物酶制備的口服促神經(jīng)生長肽及其制備方法。
神經(jīng)生長因子(NGF)是60年代末首先從小鼠頜下腺分離純化獲得的一種蛋白質(zhì)。以后人們又從蛇毒人胎盤、牛精囊和豚鼠前列腺等臟器中發(fā)現(xiàn)也含有豐富的NGF，并相繼得到純化。1986年NGF的發(fā)現(xiàn)曾獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。80年代后，科學(xué)家們又發(fā)現(xiàn)，在腦中神經(jīng)突觸體上有與NGF結(jié)合的位點(diǎn)，當(dāng)刺激神經(jīng)元膜上的NGF受體時(shí)，可介導(dǎo)神經(jīng)元的營養(yǎng)功能，由此證明NGF對中樞神經(jīng)元的生長、存活，纖維的增生及遞質(zhì)特異性表現(xiàn)有獨(dú)特的作用。1982年Tatemoto等人首先從豬腦中發(fā)現(xiàn)并提取分離出神經(jīng)肽(NeuroGeptideNGP)，它對腦血管的收縮與舒張有影響。
據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)記載，哺乳類動(dòng)物的腦及腦干是一個(gè)高度專門化的器官集合體。進(jìn)化到人已是更為完善的器官，由于腦及腦干脊髓不同部位含有不同的神經(jīng)肽(目前已知的有20余種)，它們對支配機(jī)體運(yùn)動(dòng)、感覺、內(nèi)分泌等均有不同功能的相應(yīng)神經(jīng)肽NGP，且NGP是NGF中最重要的一種營養(yǎng)性多肽，具有廣泛的生理作用，能刺激新生動(dòng)物感官及交感神經(jīng)節(jié)的發(fā)育，在組織培養(yǎng)中也能刺激交感神經(jīng)節(jié)的生長。如促神經(jīng)生長肽中的CCK-33肽及CCK-8肽(CCK指膽囊收縮素)廣泛分布于動(dòng)物的腦區(qū)，尤以大腦皮質(zhì)中為多。CCK-8肽含量最高，在丘腦、腦干及脊髓中含量次之(為大腦皮質(zhì)的1/20)，能使食欲迅速減退，抗肥胖效果好;P-物質(zhì)在下丘腦、視前區(qū)和腦干中濃度較高，在小腦、大腦皮層等中也有分布，具有催涎作用可刺激垂體分泌催乳激素和生長激素;腦啡肽彌散于整個(gè)腦區(qū)、脊髓及外周神經(jīng)節(jié)，β-內(nèi)啡肽比較集中在丘腦-垂體平面以及延伸至間腦與橋腦前側(cè)。但至今對于這些促神經(jīng)生長肽的提純分離，并將之制成口服制劑，用于醫(yī)療保健品未見諸報(bào)道。
本發(fā)明的目的是從哺乳類動(dòng)物的腦及腦干中提取促神經(jīng)生長肽并將之制成口服制劑，用于治療腦的疾病與損傷。尤其治療卒中、腦發(fā)育不良、脊髓空洞癥早老性癡呆、腦和脊髓外傷等。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案如下依照本發(fā)明制得的口服促神經(jīng)生長肽，是取3-6個(gè)月健康哺乳動(dòng)物的腦及脊髓，經(jīng)過生物酶化處理后得神經(jīng)多肽，然后加入右旋糖酐、甘露醇和乳糖。制成干燥顆粒后，裝于藥用膠囊中或制成片劑，然后瓶裝。
依照本發(fā)明制備口服促神經(jīng)生長肽的方法是取健康哺乳動(dòng)物如豬、狗、人胎腦(經(jīng)PCR方法檢測無肝炎、梅毒、淋病、愛滋病)的腦及脊髓，取其不同的部位(如大腦、小腦、中腦、垂體、橋腦、腦干和脊髓)稱其重量，按重量比13的比例加入三蒸水或0.95%的生理鹽水，然后加入中性蛋白酶或胃蛋白酶、超氧化物歧化酶，進(jìn)行消化沉淀，得沉淀物量為50mg左右加入0.5%的正辛醇20滴左右;將所得混合物置于勻漿機(jī)，在12000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下勻漿3-5分鐘，反復(fù)3-5次;置勻漿物于-20℃左右的環(huán)境中反復(fù)凍融6次以上，或超聲打碎，使細(xì)胞裂解;然后在4℃左右的環(huán)境中，用離心機(jī)在4000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下離心25-35分鐘，棄沉淀物，取上清物;再在所取的上清物中加入5/1000的DNA酶及0.4U胰蛋白酶或中性蛋白鉻蛋白酶47U于25℃的環(huán)境條件下，在PH值為76含鈣的環(huán)境中裂解;將裂解物置于4℃的環(huán)境中，用8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心30分鐘左右。取上清物棄沉淀，再根據(jù)治療目的的需要，取分子量的膜為3萬的超濾膜進(jìn)行超濾。再將超濾所得物置于90℃環(huán)境中變性15-20分鐘過柱(目地為使其具有耐熱穩(wěn)定性)，再加賦型劑，除菌、干燥，賦型劑可以是右旋糖酐甘露醇和乳糖。干燥后的所得即為口服促神經(jīng)生長肽粉末，可以將之裝在藥用膠囊中或制成片劑，瓶裝室溫保存仍具有穩(wěn)定性和生物活性，可保存2-3年。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于依照本發(fā)明的制備方法制得的口服促神經(jīng)生長肽對治療人體的腦疾病與損傷效果良好，特別是對于治療卒中、腦發(fā)育不良、脊髓空洞癥帕金森氏病、早老性癡呆，腦、脊髓損傷效果更好。
權(quán)利要求
1.一種口服促神經(jīng)生長肽，其特征在于它由神經(jīng)多肽、右旋糖酐、甘露醇和乳糖組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的口服促神經(jīng)生長肽的制備方法，其特征在于(1)取健康哺乳動(dòng)物的腦及脊髓，稱其重量，按重量比13的比例加入三蒸水或0.95%生理鹽水，中性蛋白酶或胃蛋白酶，超氧化物歧化酶，消化沉淀;(2)在(1)的沉淀物中取每50mg加入0.5%的正辛醇20滴左右，將所得混合物在12000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下勻漿3-5分鐘，反復(fù)3-5次;(3)置(2)的勻漿物于-20℃左右的環(huán)境中反復(fù)凍融6次以上，或超聲打碎，細(xì)胞裂解;(4)將(3)的所得物在4℃左右的環(huán)境條件下，在4000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速條件下離心25-35分鐘;棄沉淀物，取上清物;(5)將(4)所得之上清物中加入5/1000的DNA酶及0.4U胰蛋白酶或中性蛋白酶鉻蛋白酶47U，在PH值為7.6含鈣環(huán)境下置25℃的環(huán)境條件下裂解;(6)將(5)的裂解物在4℃的環(huán)境條件下;用8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速離心30分鐘左右，取上清物;(7)將(6)所得之上清物5000～2萬～10萬分子量的超濾膜進(jìn)行超濾，超濾后置90℃環(huán)境條件下變性15～20分鐘;之后過柱;(8)將(7)所得變性物中加入右旋糖酐、甘露醇或乳糖賦型劑賦型，然后干燥成粉末，裝膠囊或制成片劑，裝瓶。
全文摘要
一種口服促神經(jīng)生長肽及其制備方法，是利用生物酶分離方法從動(dòng)物的腦及脊髓中制備口服促神經(jīng)生長肽。該促神經(jīng)生長肽由神經(jīng)肽、右旋糖酐、甘露醇和乳糖組成，其制備方法包括哺乳動(dòng)物腦及脊髓消化沉淀→勻漿→裂解→離心→裂解→離心→超濾→糖蛋白修飾→等制備過程，制得的口服促神經(jīng)生長肽對人體的腦疾病和神經(jīng)損傷有顯著療效。
文檔編號A61K47/10GK1112443SQ9410606
公開日1995年11月29日 申請日期1994年5月27日 優(yōu)先權(quán)日1994年5月27日
發(fā)明者徐飛 申請人:徐飛