專利名稱：作為抗病毒劑的大環(huán)二氟斯它酮衍生物的制作方法
目前正進(jìn)行大量的研究來開發(fā)治療人體和動(dòng)物病毒感染的治療劑和療法。值得注意的是人類AIDS和ARC的發(fā)生率以驚人的速度增長，AIDS的病人的5年存活率令人失望，這種病人的免疫系統(tǒng)由于感染而破壞嚴(yán)重，他們遭受著大量隨機(jī)的感染如卡波濟(jì)氏肉瘤和卡氏肺囊蟲肺炎的侵害。對AIDS的療法是未知的，目前大部分治療劑都還沒有足夠的證據(jù)證明有效，而且它們還有大量不利的副作用。對這種疾病的恐懼，引起了對這種疾病患者和懷疑為患這種疾病的人的社會(huì)排斥和歧視。
本發(fā)明涉及用作抗病毒劑的化合物，更具體的，本發(fā)明涉及作為逆病毒蛋白酶抑制劑的二氟斯它酮衍生物(difluorostatone)，而逆病毒蛋白酶是病毒的復(fù)制所必須的，逆病毒蛋白酶如HIV-1和HIV-2病毒蛋白酶，本發(fā)明也涉及對人類免疫缺乏病毒(HIV)感染的預(yù)防和治療，以及涉及對感染了HIV病毒的哺乳動(dòng)物后期的病癥如獲得性免疫缺乏綜合癥(AIDS)的治療。
本發(fā)明涉及下面通式I化合物和其立體異構(gòu)體，水合物和可藥用鹽 其中P2表示C1-6烷基，環(huán)戊基，羥基C1-6烷基，苯基，芐基或3-四氫呋喃基；P3表示選自氫，-CH3，-CH(CH3)2，-CH2CH(CH3)2，-CH(CH3)(CH2CH3)，-CH2SH，-CH2CH2SCH3，CH2OH，-CH(CH3)OH，-CH2(CH2)3NH2，CH2(CH2)2NHC(＝NH)NH2，-CH2CO2H，-CH2CH2CO2H，-CH2CONH2，-CH2CH2CONH2，芐基的基團(tuán)； R1表示氫，C1-15烷基，羥基C1-15烷基，CH([(CH2)d-O-CH2]f-R7)2，CH2Si(CH3)2(R8)，PDL，-(C1-6亞烷基)OR4，CH(Y)(Z)， 其中PDL是-(CH2)a-2-，3-或4-吡啶基，Y表示羥基C1-15烷基，C1-6烷基或(CH2)e-C6H4-(V)e’；Z表示(CH2)d-O-CHO，C1-6亞烷基-O-(CH2)d-(O-CH2-CH2)e-O-C1-6烷基，CHO，CO2R4，CONHR4，(CH2)d-(CH2)d’-R5，(CH2)e-OR4或下式基團(tuán) 其中V表示OR4或羥基C1-6亞烷基；條件是當(dāng)R5是哌嗪基，取代哌嗪基，哌啶基或嗎啉基時(shí)，d’＝2；R2的定義同R1，條件是當(dāng)R1是氫原子時(shí)，R2不是氫原子，或者R1和R2與它們所連的氮原子一起形成選自下述的基團(tuán) 其中R3表示CH2OR4，C(O)NHR4或CHO；R4表示氫原子，C1-6烷基，苯基或芐基；R5表示哌嗪基，取代哌嗪基，哌啶基，嗎啉基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基或苯基，其中取代的哌嗪基是指在它的一個(gè)氮原子上被CHO，C(O)NHR4，C1-4烷基或CO2R4取代的哌嗪基；
R6表示(H，OH)或＝OR7表示嘧啶基，吡啶基，吡嗪基或苯基；R8表示C1-6鏈烯基，C1-6烷氧基，C1-6亞烷基，羥基C1-6烷基，C1-6烷基或OH；a是0，1，2或3；b是0或1；d和d’各自獨(dú)立地是1或2；e和e’各自獨(dú)立地是0，1或2；f是0或1；和x是1，2，3或4。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了治療病毒感染病人的方法，該方法包括向所說的病人施用治療有效量的式(I)化合物。
此外，本發(fā)明還提供了抑制病人HIV蛋白酶的方法，這種方法包括給所說的病人施用抑制有效量的式(I)化合物。
術(shù)語“鹵素”，“鹵”或“鹵化物”是指氯，溴或碘原子。術(shù)語“立體異構(gòu)體”是指具有不可互變的不同的三-維結(jié)構(gòu)，由相同的原子組成通過同樣的價(jià)鍵連接的化合物。這種三維結(jié)構(gòu)稱之為構(gòu)型。術(shù)語“非對映異構(gòu)體”是指具有多于一個(gè)手性中心并且彼此不是鏡象的立體異構(gòu)體。術(shù)語“對映異構(gòu)體”是指其分子具有彼此不可疊加的鏡象的兩個(gè)立體異構(gòu)體。術(shù)語“外消旋混合物”或“外消旋變體”是指存在等量對映異構(gòu)體的混合物。術(shù)語“手性中心”是指四個(gè)不同的基團(tuán)所連接的碳原子。對氨基酸來說，L/D或R/S的意義如下文所述IUPAC-IUB Joint Commission on BiochemicalNomenclature，Eur.J.Biochem.，138，9-37(1984)。應(yīng)可理解式(I)化合物可以多種立體異構(gòu)的構(gòu)型存在，還應(yīng)該可以理解到只要式(I)化合物的構(gòu)型是固定的，對每個(gè)化合物而言可能的對映異構(gòu)體的最大的數(shù)目為2n，其中n表示化合物中手性中心的數(shù)目。式(I)化合物中最小數(shù)目的手性中心在下式中以星號(★)表示 其中取代基的定義如上所述，除了P3不為氫。
本發(fā)明化合物可以游離形式存在，例如無定形形式，或以鹽的形式存在，例如酸加成鹽或陰離子鹽形式。根據(jù)本領(lǐng)域熟知的方法，可以將游離形式的化合物轉(zhuǎn)化為其鹽的形式，反過來也是這樣。
式(I)化合物的可藥用鹽(以水溶液，或油-可溶的或可分散的產(chǎn)物形式存在)包括這些化合物的常規(guī)的無毒鹽或四級銨鹽，它們是由如無機(jī)酸或有機(jī)酸或堿生成的。這些化合物的實(shí)例包括乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊基丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽(hemisulfate)、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、paemoate、果膠酯酸鹽、過二硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫代氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和十二烷酸鹽。堿鹽的實(shí)例包括銨鹽、堿金屬鹽如鈉鹽和鉀鹽、堿土金屬鹽如鈣鹽和鎂鹽，與有機(jī)堿如二環(huán)己基胺、N-甲基-D-葡糖胺形成的鹽，以及與氨基酸如精氨酸、賴氨酸等形成的鹽。而且可以采用下述試劑將堿性含氮原子基團(tuán)轉(zhuǎn)化為四價(jià)低級烷基鹵化物如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物，溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯如二甲基、二乙基、二丁基酯和硫酸二戊基酯，長鏈鹵化物如癸烷基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂?；然?、溴化物和碘化物，芳烷基鹵化物如芐基溴和苯乙基溴等。
式(I)化合物的水合物是指具備下面結(jié)構(gòu)部分的水合化合物并且在最終使用時(shí)，它往往是活性形式 總的來說，除非另有說明，這里所采用的術(shù)語“烷基”包括其直鏈、支鏈和環(huán)狀的基團(tuán)，例如特別是下述基團(tuán)甲基、乙基、異丙基、正丁基、叔丁基、-CH2-叔丁基、環(huán)丙基、正丙基、戊基、環(huán)戊基、正己基、環(huán)己基和環(huán)己基甲基。當(dāng)使用術(shù)語“芳烷基”時(shí)，它包括芳基部分和亞烷基橋部分相連的基團(tuán)，亞烷基優(yōu)選是亞甲基或亞乙基。
“芳基”包括碳環(huán)和芳環(huán)部分，其中苯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚基、吲唑基、呋喃基和噻吩基是特別優(yōu)選的；這些基團(tuán)中也包括它們的位置異構(gòu)體，例如2-、3-、4-吡啶基，2-或3-呋喃基和噻吩基，1-、2-或3-吲哚基或1-和3-吲唑基，還包括呋喃基和噻吩基的二氫和四氫類似物。術(shù)語“芳基”也包括稠合碳環(huán)部分例如并環(huán)戊二烯、茚基、萘基、萸基(azulenyl)、庚搭烯、苊基(acenaphthylenyl)、芴基、苯乙肼基(phenalenyl)、菲基、蒽基、acenphenanthrylenyl、醋蒽烯基、苯并[9，10]菲，芘基、_基(chrysenyl)和并四苯。在術(shù)語“芳基”中也包括其它雜環(huán)基如2-或3-苯并噻吩基、2-或3-萘并[2，3-b]噻吩基、2-或3-噻蒽基、2H-吡喃-3-(或4-或5-)基、1-異苯并呋喃基、2H-色烯-3-基、2-或3-phenoxathiinyl、2-或3-吡咯基、4-或3-吡唑基、2-吡嗪基、2-嘧啶基、3-噠嗪基、2-中氮茚基、1-異氮雜茚基、4H-喹嗪-2-基、3-異喹啉基、2-喹啉基、1-氮雜蒽基、1，8-二氮雜萘(naphthyridinyl)、2-喹喔啉基、2-喹唑啉基、3-噌啉基、2-pteridinyl、4aH-咔唑-2-基、2-咔唑基、β-咔啉-3-基、3-菲啶基、2-吖啶基、2-珀啶基(perimidinyl)、1-吩嗪基、3-異噻唑基、2-吩噻嗪基、3-異噁唑基、2-吩噁嗪基、3-異苯并二氫吡喃、7-苯并二氫吡喃、2-吡咯啉-3-基、2-咪唑烷基、2-咪唑啉-4-基、2-吡唑烷基、3-吡唑啉-3-基、2-哌啶基、2-哌嗪基、1-二氫吲哚基、1-異二氫吲哚基、3-嗎啉基、苯并[b]異喹啉基和苯并呋喃基，其中包括其位置異構(gòu)體，除了一、二或三個(gè)取代基不能直接通過其氮原子與雜環(huán)相連，取代基獨(dú)立地選自C1-6烷基、鹵烷基、烷氧基、硫代烷氧基、氨基烷基氨基、二烷基氨基、羥基、鹵素、巰基、硝基、甲醛基、羧基、烷氧羰基和甲酰氨基。
類似的，術(shù)語“亞烷基”包括直鏈或支鏈基團(tuán)。一些支鏈亞烷基的實(shí)例包括乙基亞乙基、2-甲基三亞甲基、2，2-二甲基三亞甲基等。例如C3亞烷基是指 所有的(C1-15)部分中優(yōu)選的是(C1-6)部分，所有的(C1-6)部分例如C1-6烷基，C1-6鏈烯基，C1-6烷氧基和羥基C1-6烷基，更優(yōu)選的是C1-3部分(含1-3個(gè)碳原子而非1-6個(gè)碳原子)。
芴基甲氧基部分?？s寫為FMOC，也就是指-CH2O連接于芴基9-位的芴基部分。這里所用的其它術(shù)語為哌嗪基 或取代的哌嗪基 取代(★)只是在不與分子其余部分相連的一個(gè)氮原子上(通過氮原子連接)。取代基選自CHO，C(O)NH4，C1-4烷基或CO2R4。
更具體的，在P2是C1-6烷基或羥基C1-6烷基的情況下，-(CH3)3，-CH(CH3)2，-CH(CH3)(CH3)(C2H5)，-C(OH)(CH3)2和-CH(OH)CH3是優(yōu)選的。
哌啶基和嗎啉基均通過它們各自的氮原子與分子的其余部分相連， 而嘧啶基、吡啶基和吡嗪基可通過除其各自氮原子外的任何位置和分子的其余部分相連 以及羥基并不局限在烷基部分的終端碳原子上。
這里所用的術(shù)語“Pg”是指保護(hù)基。氨基類保護(hù)基是指(1)?；捅Ｗo(hù)基如甲?；?、三氟乙酰基、鄰苯二甲酰基、對甲苯磺?；?tosyl)、苯磺?；?、硝基苯基亞磺?；?、三苯甲基亞磺?；袜徬趸窖趸阴；?；(2)芳香尿烷型保護(hù)基如芐氧羰基和取代的芐氧羰基如對氯芐氧羰基、對甲氧基芐氧羰基、對硝基芐氧羰基、對溴芐氧羰基、1-(對-聯(lián)苯基)-1-甲基乙氧基羰基，α-，α-二甲基-3，5-二甲氧基芐氧羰基和二苯甲基氧羰基；(3)脂族尿烷型保護(hù)基如叔丁氧基羰基(Boc)，9-芴基甲氧羰基(FMOC)，二異丙基甲氧羰基、異丙氧基羰基、乙氧羰基和烯丙基羰基；(4)環(huán)烷基尿烷型保護(hù)基如環(huán)戊氧基羰基、金剛烷氧基羰基和環(huán)己氧基羰基；(5)硫代尿烷型保護(hù)基如苯基硫代羰基；(6)烷基型保護(hù)基如三苯基甲基(trityl)和芐基(bzl)；(7)三烷基甲硅烷保護(hù)基如三甲基甲硅烷(如果合適)。優(yōu)選的α-氨基保護(hù)基是叔丁氧基羰基(Boc)或芐氧羰基(CBZ)。采用Boc作為氨基酸的α-氨基保護(hù)基在下文中記載Bodansky et al.，“The Practice of Peptide Synthesis”，Springer-Verlag，Berlin(1984)，P.20。
當(dāng)存在除α-氨基之外的官能基時(shí)，例如那些可存在于P3上的基團(tuán)，這些基團(tuán)通常也需要被保護(hù)。這些官能基可采用與保護(hù)α-氨基不同的保護(hù)基所保護(hù)，使得可以除去一個(gè)保護(hù)基而不影響另一個(gè)保護(hù)基。對保護(hù)基組合和選擇性除去保護(hù)基的試劑的適當(dāng)?shù)倪x擇是本領(lǐng)域熟知的。例如參見M.Bodansky，“Peptide Chemistry，A practical Textbook”，Springer-Verlag(1988)；J.Stewart，et al.，“Solid Phase Peptide Synthesis”，2nded.，Pierce Chemical Co.(1984)。
總的來說，本發(fā)明化合物可以采用與本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)反應(yīng)類似的方法制備。更具體地說，式(3)化合物的制備是本領(lǐng)域熟知的，通常如Schirlin，D.和Van Dorsselaer，V.在PCT/US91/09741中所述，該文獻(xiàn)于1992年7月23日公開，其國際公開號為WO92/12123。例如反應(yīng)路線II中所需的起始原料結(jié)構(gòu)(3)和(4)化合物，可以通過反應(yīng)路線I所述的方法制備。在反應(yīng)路線I和II中所用的術(shù)語“Pg”是指前面定義的保護(hù)基，但不包括芐基或芳香尿烷保護(hù)基。除非另外定義，所有其余的取代基的定義如上所述。對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，試劑和起始原料都很容易得到。
反應(yīng)路線I
在反應(yīng)路線I步驟A中，在鋅存在下，在無水非質(zhì)子溶劑如四氫呋喃、二乙醚、叔丁基甲基醚等中，在氮?dú)饣驓鍤舛栊詺夥罩校谷?1)與溴代二氟乙酸的酯優(yōu)選乙酯進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)通常在約60℃加熱1-12小時(shí)或超聲振蕩得到所需的酯(2)。在醛(1)中優(yōu)選的氨基保護(hù)基(Pg’)是叔丁氧基羰基。
或者，可在反應(yīng)路線I步驟A中采用下述方法，使得縮合產(chǎn)生酯(2)的反應(yīng)可以得到較高的產(chǎn)率和在較低的反應(yīng)溫度下進(jìn)行。在惰性氣氛如氮?dú)鈿夥罩?，將?1)溶于合適的無水有機(jī)溶劑中。合適的無水有機(jī)溶劑的實(shí)例包括四氫呋喃、二乙醚、叔丁基甲基醚等。將上述得到的溶液冷卻到約0℃，向該溶液中加入約0.3當(dāng)量的乙酸銀，約2.1當(dāng)量的鋅粉和約2當(dāng)量的溴代二氟乙酸乙酯。向反應(yīng)中緩慢加入0.34當(dāng)量的二乙基氯化鋁(以甲苯溶液的形式加入)并保持反應(yīng)溫度低于12℃。在約0℃攪拌反應(yīng)1-3小時(shí)，然后再在室溫?cái)嚢?-12小時(shí)。隨后將反應(yīng)冷卻到約10℃并用飽和氯化銨水溶液使之停止，然后通過本領(lǐng)域熟知的技術(shù)分離和純化酯(2)。例如可加入酒石酸氫鈉溶液并使反應(yīng)混合物從10℃升溫到室溫，過濾混合物，用合適的有機(jī)溶劑如乙酸乙酯洗滌得到的固體，分離各層濾液。用乙酸乙酯提取水層，合并有機(jī)層和提取物，用無水硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。采用合適的洗脫劑如環(huán)己烷/乙酸乙酯，通過硅膠快速色譜純化殘留物后得到酯(2)。
在反應(yīng)路線I步驟B中，使酯(2)進(jìn)行酰胺化反應(yīng)得到結(jié)構(gòu)(3)表示的酰胺。將酯(2)溶于合適的有機(jī)溶劑如四氫呋喃中，并在0-80℃溫度下用合適的R1，R2-取代的胺處理得到酰胺(3)。
或者在惰性氣氛如氮?dú)鈿夥罩?，將按需要保護(hù)的適當(dāng)R1，R2-取代的胺溶于合適的有機(jī)溶劑如二氯甲烷中。向所得的溶液中滴加入1當(dāng)量的2M三甲基鋁的甲苯溶液，約15分鐘后，將此溶液加到約0.3當(dāng)量的酯(2)中，酯(2)是溶于合適的有機(jī)溶劑如二氯甲烷中的。使反應(yīng)在約室溫-40℃溫度下，攪拌約15-24小時(shí)，然后采用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)分離產(chǎn)物。例如可加入冷稀鹽酸水溶液和乙酸乙酯，分離有機(jī)層并用水，鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮得到酰胺(3)。
或者可在本領(lǐng)域熟知的條件下，將酯(2)水解為相應(yīng)的酸，并采用本領(lǐng)域熟知的肽形成偶合方法使其與合適的R1，R2-取代胺偶合，得到酰胺(3)。
在反應(yīng)路線I步驟C中，在本領(lǐng)域熟知的條件下，將酯(2)的苯酚醚部分脫芐基化得到結(jié)構(gòu)(2a)表示的苯酚。例如，將酯(2)溶于合適的溶劑混合物中，例如4.4％甲酸/甲醇的混合物，在約1小時(shí)至6天時(shí)間內(nèi)分批加入催化量的鈀黑，直到薄層色譜或HPLC表示出脫芐基化反應(yīng)完成。然后分離產(chǎn)物并通過本領(lǐng)域熟知的技術(shù)如快速色譜法進(jìn)行純化，例如將反應(yīng)混合物過濾，真空濃縮濾液并通過硅膠快速色譜法純化殘留物，采用合適的洗脫劑如環(huán)己烷/乙酸乙酯洗脫，得到苯酚(2a)。
在反應(yīng)路線I步驟D中，使苯酚(2a)進(jìn)行酰胺化反應(yīng)得到式(4)表示的酰胺。例如在惰性氣氛如氮?dú)鈿夥罩?，將按需要保護(hù)的合適的R1，R2-取代胺，例如O-芐基-D-纈氨醇(valinol)，溶于合適的有機(jī)溶劑如二氯甲烷中。向所得的溶液中滴加入2M三甲基鋁的甲苯溶液，約15分鐘后，將此溶液加到約0.3當(dāng)量(2a)中，(2a)化合物是溶于合適的有機(jī)溶劑如二氯甲烷中的。使反應(yīng)在約室溫-40℃溫度下，攪拌約15-24小時(shí)，然后采用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)分離產(chǎn)物。例如可加入冷稀鹽酸水溶液和乙酸乙酯，分離有機(jī)層并用水，鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮得到酰胺(4)。
可以根據(jù)反應(yīng)路線II制備式(I)化合物。除非另外定義，所有的取代基的定義如上所述。對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，反應(yīng)試劑和起始原料都很容易得到。
反應(yīng)路線II
反應(yīng)路線II(續(xù))
反應(yīng)路線II(續(xù))
對式(Ia)來說，P3不被保護(hù)。
對結(jié)構(gòu)(11)來說，P3按需要被保護(hù)。
(11)脫保護(hù)后得到式(Ib)。
在反應(yīng)路線II步驟A中，使酰胺(3)脫芐基后得到結(jié)構(gòu)(4)化合物。例如，通常根據(jù)E1 Amin et al.J.Org.Chem.，44，3442(1979)所述的方法，將酰胺(3)溶于合適的溶劑混合物中，例如4.4％甲酸/甲醇的混合物，加入催化量的鈀黑。攪拌所得的反應(yīng)混合物約4-6小時(shí)，如果需要，每間隔約45分鐘加入另外的鈀黑，直到反應(yīng)完成。然后將反應(yīng)混合物過濾，真空濃縮濾液。通過本領(lǐng)域熟知的技術(shù)如重結(jié)晶純化殘留物，例如采用合適的溶劑混合物，例如環(huán)己烷/乙酸乙酯混合物，重結(jié)晶殘留物得到苯酚(4)。
在反應(yīng)路線II步驟B中，將苯酚(4)烷基化得到結(jié)構(gòu)(5)所示的醚，例如將苯酚(4)溶于合適的有機(jī)溶劑如丙酮中，加入約1.2當(dāng)量合適的堿如碳酸鉀，接著加入約1.15當(dāng)量合適的烷基鹵化物。合適的烷基鹵化物的實(shí)例是溴代乙酸乙酯，溴代乙酸甲酯，3-溴代丙酸乙酯，3-氯丙酸乙酯，4-溴代丁酸乙酯，4-氯丁酸乙酯，5-溴代戊酸乙酯等。隨后加入催化量的碘化鉀并攪拌反應(yīng)1-3天。采用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)如提取和結(jié)晶分離和純化產(chǎn)物，例如可將反應(yīng)混合物傾入到合適的溶劑混合物中，例如乙酸乙酯/稀氯化鈉水溶液的混合物，分離有機(jī)層。然后用稀氫氧化鉀水溶液，鹽水洗滌有機(jī)層，用無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。采用合適的溶劑混合物如環(huán)己烷/乙酸乙酯將殘留物重結(jié)晶，得到醚(5)。
在反應(yīng)路線II步驟C中，根據(jù)T.H.Green，“Protective Groups inOrganic Synthesis”，John Wiley和Sons，1981，Chapter7所述的方法，在本領(lǐng)域熟知的條件下，使醚(5)被保護(hù)的胺部分脫保護(hù)。例如當(dāng)Pg’是叔丁氧基羰基時(shí)，用過量的三氟乙酸(TFA)處理醚(5)并在氮?dú)鈿夥罩袛嚢杷玫姆磻?yīng)混合物約2小時(shí)，然后真空濃縮反應(yīng)，將殘留物分兩次溶于乙酸乙酯中，每次真空濃縮得到脫保護(hù)的胺(6)，為TFA鹽?；蛘弋?dāng)Pg’是叔丁氧基羰基時(shí)，可用過量的甲酸處理醚(5)并在室溫下將其攪拌約1-2小時(shí)。采用碳酸氫鈉水溶液處理并用合適的有機(jī)溶劑如乙酸乙酯提取，可以分離得到脫保護(hù)的胺(6)。用無水硫酸鎂干燥有機(jī)提取物，過濾并真空濃縮得到脫保護(hù)的胺(6)。
在反應(yīng)路線II步驟D中，在本領(lǐng)域熟知的條件下，使脫保護(hù)的胺(6)與結(jié)構(gòu)式(6a)所示的酸立即進(jìn)行偶合反應(yīng)[避免(6)化合物可能的內(nèi)酰胺化反應(yīng)] 得到結(jié)構(gòu)式(7)所示的酰胺，其中P3按要求進(jìn)行保護(hù)以避免不必要鍵的生成。
當(dāng)P3是-CH2SH，-CH2OH，-CH(CH3)OH，-CH2(CH2)3NH2，-CH2(CH2)2NHC(＝NH)NH2，-CH2CO2H，-CH2CH2CO2H， ，P3需要合適的保護(hù)基，否則P3不需要被保護(hù)?？梢圆捎玫谋Ｗo(hù)基，它們的選擇和隨后的除去都在本領(lǐng)域的范圍內(nèi)，例如可以參考T.H.Green，“Protective Groups in Organic Chemistry”，John Wiley &Sons，NewYork(1981)；“The PeptidesAnalysis，Synthesis，Biology”，Vol.3，Academic Press，New York(1981)；M.Bodansky，“Peptide Chemistry，APractical Textbook”，Springer-Verlag(1988)；和J.Stewart，et al.，“SolidPhase Peptide Synthesis”，2nd ed.，Pierce Chemical Co.(1984)。
對合適的偶合反應(yīng)方法的選擇屬于本領(lǐng)域的范圍。偶合反應(yīng)可采用標(biāo)準(zhǔn)偶合方法如疊氮化物法，混合碳酸酐(氯甲酸異丁基酯)法，碳化二亞胺(二環(huán)己基碳化二亞胺，二異丙基碳化二亞胺或水-溶碳化二亞胺)法，活性酯(對硝基苯基酯，N-羥基瑚珀酸亞氨基酯)法，Woodward試劑K方法，羰基二咪唑法，磷試劑法磷試劑如BOP-Cl，或氧化-還原法。其中一些方法(特別是碳化二亞胺法)可以通過加入1-羥基苯并三唑得到加強(qiáng)。例如可在攪拌下，惰性氣氛如氮?dú)鈿夥罩校瑢⒚摫Ｗo(hù)的胺(6)[以游離堿或TFA鹽的形式存在]溶于合適的有機(jī)溶劑混合物中，如二氯甲烷/二甲基甲酰胺(1∶1)的混合物，加入約1.06當(dāng)量的1-羥基苯并三唑水合物(HOBT)，接著加入N-甲基嗎啉[若(6)是游離堿形式則為1.1當(dāng)量，和若(6)是TFA鹽形式則為2.2當(dāng)量]，約1.06當(dāng)量的(6a)和約1.11當(dāng)量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)。將反應(yīng)攪拌約12小時(shí)-3天，然后通過本領(lǐng)域熟知的技術(shù)如提取，快速色譜法和重結(jié)晶分離和純化產(chǎn)物。例如，可將反應(yīng)傾入水中并用合適的有機(jī)溶劑如乙酸乙酯提取混合物，用稀鹽酸水溶液，碳酸氫鈉水溶液，鹽水洗滌有機(jī)提取物，用無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。然后通過硅膠固定相的快速色譜法純化殘留物，以合適的洗脫劑如乙酸乙酯/環(huán)己烷洗脫，接著采用合適的溶劑混合物如乙酸乙酯/環(huán)己烷進(jìn)行結(jié)晶，得到酰胺(7)。
在反應(yīng)路線II步驟E和F中，將酰胺(7)的酯部分轉(zhuǎn)化為結(jié)構(gòu)式(8)所示的活化的五氟苯基酯。例如可將酰胺(7)懸浮于合適的溶劑混合物如甲醇/水(19∶1)中，在攪拌下加入約1.4當(dāng)量合適的堿如氫氧化鋰，攪拌反應(yīng)約2-4小時(shí)，然后真空濃縮反應(yīng)混合物。通過本領(lǐng)域熟知的技術(shù)純化從相應(yīng)酸得到的鹽，例如將所得的鹽溶于水中并用乙醚洗滌，然后向水相中加入合適的有機(jī)溶劑如乙酸乙酯，并在劇烈攪拌下加入0.1N硫酸氫鈉直到水相變?yōu)樗嵝浴ｋS后分離有機(jī)層，用無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮得到相應(yīng)的酸。然后將酸溶于二氯甲烷中，并在攪拌下向得到的溶液中加入約1.3當(dāng)量的五氟苯酚和約1.2當(dāng)量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽。使反應(yīng)進(jìn)行約3小時(shí)-3天，然后通過本領(lǐng)域熟知的技術(shù)分離和純化產(chǎn)物。例如可用水稀釋反應(yīng)混合物，通過過濾收集所得的固體，接著用水和乙醚漂洗?？捎煤线m的溶劑混合物如環(huán)己烷/乙酸乙酯將其重結(jié)晶，得到五氟苯基酯(8)。
在反應(yīng)路線II步驟G中，可根據(jù)T.H.Green，“Protective Groups inOrganic Synthesis”，John Wiley和Sons，1981，Chapter7所述的方法，在本領(lǐng)域熟知的條件下，將五氟苯基酯(8)被保護(hù)的胺部分脫保護(hù)，得到結(jié)構(gòu)式(9)所示的脫保護(hù)的胺。例如當(dāng)Pg’是叔丁氧基羰基時(shí)，可在攪拌下用過量的4N氯化氫/二惡烷處理五氟苯基酯(8)，使反應(yīng)攪拌30分鐘-2小時(shí)，然后真空濃縮反應(yīng)混合物得到脫保護(hù)的胺(9)，為鹽酸鹽。
在反應(yīng)路線II步驟H中，使脫保護(hù)的胺(9)的鹽酸鹽進(jìn)行環(huán)化反應(yīng)，得到結(jié)構(gòu)式(10)所示的大環(huán)醇。例如可用合適的堿和有機(jī)溶劑混合物如稀碳酸氫鈉水溶液/二氯甲烷處理脫保護(hù)的胺(9)，劇烈攪拌反應(yīng)1-3天，然后通過本領(lǐng)域熟知的技術(shù)分離和純化產(chǎn)物。例如，隨后將反應(yīng)混合物過濾并用水和乙醚漂洗，得到大環(huán)醇(10)，它可通過本領(lǐng)域熟知的技術(shù)純化。
可將酰胺(7)轉(zhuǎn)化為大環(huán)醇(10)的另一個(gè)方法是分兩步進(jìn)行的。當(dāng)酰胺(7)上Pg是FMOC保護(hù)基時(shí)，用約2當(dāng)量的合適的堿如氫氧化鋰處理酰胺(7)，得到酸和脫保護(hù)的結(jié)構(gòu)式(7a)所示的胺。 使(7a)按前面反應(yīng)路線II步驟D所述的標(biāo)準(zhǔn)偶合條件使得(7a)進(jìn)行環(huán)化，得到大環(huán)醇(10)。
在反應(yīng)路線II步驟I中，在本領(lǐng)域熟知的條件下將大環(huán)醇(10)氧化，在P3未被保護(hù)時(shí)得到式(Ia)大環(huán)酮，或當(dāng)P3被適當(dāng)保護(hù)時(shí)得到結(jié)構(gòu)式(11)所示的大環(huán)酮。例如可在氮?dú)鈿夥罩?，將大環(huán)醇溶于合適的有機(jī)溶劑的混合物如二甲亞砜/二氯甲烷(3∶1)中并冷卻到約-15℃至-17℃。向溶液中滴加約9當(dāng)量的草酰氯，經(jīng)過約1小時(shí)后，向反應(yīng)中加入約19當(dāng)量的三乙胺，然后使之緩慢升溫到室溫并攪拌約17小時(shí)。隨后通過本領(lǐng)域熟知的技術(shù)如提取，快速色譜法和重結(jié)晶分離和純化產(chǎn)物。例如可用合適的有機(jī)溶劑混合物如水/乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物，分離有機(jī)層并用水，鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥，過濾并真空濃縮。通過快速色譜法純化殘留物，以合適的洗脫劑如乙酸乙酯/甲醇(19∶1)洗脫，并隨后用合適的溶劑混合物如乙酸乙酯/2，2，2-三氟乙醇重結(jié)晶，得到大環(huán)酮(Ia)或大環(huán)酮(11)。
或者采用Dess-Martin Periodinane(即1，1，1-三乙酰氧基-1，1-二氫-2，1-benzoxiodol-3(1H)-酮)[參考Dess Martin，J.Org.Chem.，48，4155，(1983)]進(jìn)行氧化。這一氧化反應(yīng)是在惰性氣氛中(優(yōu)選氮?dú)鈿夥?，在無水條件下，在0℃-50℃(優(yōu)選室溫)，使約1當(dāng)量的醇和1-10當(dāng)量的periodinane(優(yōu)選大于5當(dāng)量)接觸并使反應(yīng)物彼此作用約1-48小時(shí)進(jìn)行的，所說的試劑是懸浮于惰性溶劑(例如二氯甲烷)中的。然后根據(jù)上述本領(lǐng)域熟知的技術(shù)分離和純化所需的酮。
在反應(yīng)路線II步驟J中，在本領(lǐng)域熟知的條件下將大環(huán)酮(11)P3被保護(hù)的部分脫保護(hù)，得到式(Ib)大環(huán)酮。
在反應(yīng)路線III中制備式(I)化合物的另一方法如下所述，其中由反應(yīng)路線II制備的脫保護(hù)的胺(6)作為起始原料。除非另外定義，所有其余取代基的定義如上所述。對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說，反應(yīng)試劑和起始原料都很容易得到。
反應(yīng)路線III
在反應(yīng)路線III步驟A中，在反應(yīng)路線II步驟D所述的偶合條件下，使脫保護(hù)的胺與式(6b)所示的酸進(jìn)行偶合反應(yīng)， 得到式(12)酰胺。
在反應(yīng)路線III步驟B中，在反應(yīng)路線II步驟C所述的條件下，將式(12)酰胺脫保護(hù)得到脫保護(hù)的胺，在前面反應(yīng)路線II步驟D所述的偶合條件下，使其再與式(6c)所示的酸進(jìn)行偶合反應(yīng) 得到式(7)酰胺。然后如反應(yīng)路線II所述將式(7)酰胺轉(zhuǎn)化為式(I)化合物。
可以利用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)例如在Jacques，J.et al.“Enantiomers，Racemates，and Resolutions”，John Wiley和Sons，Inc.，1981中描述的結(jié)晶技術(shù)，或通過色譜法利用合適的固定相如HPLC(高壓液相色譜)或快速色譜條件下的手性固定相，分離式(I)化合物的非對映體和拆分式(I)化合物的對映體。
下面的實(shí)施例提供了反應(yīng)路線I，II和III所述的典型合成方法，應(yīng)當(dāng)理解這些實(shí)施例只是說明性的而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。下面的實(shí)施例中下述術(shù)語的意義如下所述“eq”表示當(dāng)量，“g”表示克，“mg”表示毫克，“mmol”表示毫摩爾，“ml”表示毫升，“℃”表示攝氏度，“TLC”表示薄層色譜，對1H NMR來說“δ”是指與四甲基甲硅烷相比低磁場方向每百萬分之的差異，和對19F NMR來說“δ”是指與四甲基甲硅烷相比高磁場方向每百萬分之的差異。
實(shí)施例1制備[9(S)，12(S)]-α，α-二氟-9-(1-甲基乙基)-β，4，7，10-四氧代-N-(苯基甲基)-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-14，16，17-三烯-12-丙酰胺 制備反應(yīng)路線I的起始原料O-芐基-N-(叔丁氧基羰基)-L-酪氨酸醛(tyrosinal)(1)[根據(jù)Schirlin，D.和Van Dorsselaer，V.在PCT/US91/09741所述的方法，公開于1992年7月23日，國際公開號是WO/92/12123。]在0℃攪拌N-叔丁氧基羰基-L-芐基酪氨酸(37.1g，100mmol)，二環(huán)己基碳化二亞胺(20.6g，100mmol)和N羥基苯并三唑水合物(15.3g，100mmol)混合物的無水二氯甲烷(350ml)溶液10分鐘，在0℃下向其中加入N，O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(9.75g，100mmol)和N-甲基嗎啉(10.1g，100mmol)。溫?zé)岬绞覝夭⒗^續(xù)攪拌15小時(shí)，然后濾出白色的沉淀并用二氯甲烷漂洗。真空濃縮濾液并通過快速色譜法純化殘留物(硅膠，乙酸乙酯/環(huán)己烷2∶8)，得到N-叔丁氧基羰基-L-O-芐基酪氨酸-N，O-二甲基-異羥肟酸酯(hydroxamate)(34，3g)，為白色固體(RF＝0.36，乙酸乙酯/環(huán)己烷，1∶1)。
將N-叔丁氧基羰基-L-O-芐基酪氨酸-N，O-二甲基-異羥肟酸酯(18.2g，44mmol)溶于無水乙醚/二甲氧基乙烷(300ml，4∶1)的混合物中并冷卻到0℃，分批向其中加入氫化鋁鋰(1.82g，48mmol)，在0℃攪拌所得的反應(yīng)混合物1.5小時(shí)。隨后在攪拌下向反應(yīng)中滴加入1M硫酸氫鉀溶液(55ml)。添加完成后傾析水相并用乙酸乙酯(2×100ml)提取。用3N鹽酸(250ml)，水(200ml)，飽和碳酸氫鈉(150ml)和鹽水洗滌合并的有機(jī)層，然后用無水硫酸鎂干燥有機(jī)層，過濾并真空濃縮，用乙酸乙酯/戊烷將殘留物重結(jié)晶得到N-叔丁氧基羰基-L-O-芐基酪氨醛(13g)。制備4-叔丁氧基羰基氨基-2，2-二氟-3-羥基-5-(4-芐氧基)苯基戊酸乙酯反應(yīng)路線I步驟A；在0℃20分鐘內(nèi)，向攪拌下N-叔丁氧基羰基-L-O-芐基酪氨醛(13.0g，36.6mmol)，乙酸銀(1.82g，10.9mmol)，活化鋅粉(5.02g，76.8mg-原子，用3N鹽酸，水，丙酮和乙醚洗滌過)和溴代二氟乙酸乙酯(14.8g，72.9mmol)混合物的無水四氫呋喃(120ml)溶液中，加入二乙基氯化鋁(22.4ml 1.8M的甲苯溶液)，在添加過程中溫度保持12℃以下。然后使反應(yīng)在0℃攪拌90分鐘，再在室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后將反應(yīng)冷卻到10℃并用飽和氯化銨水溶液(200ml)處理。加入1M酒石酸氫鈉(200ml)溶液并使反應(yīng)溫?zé)岬绞覝?。過濾反應(yīng)混合物并用乙酸乙酯漂洗得到的固體。分離濾液層并用乙酸乙酯提取水層。用無水硫酸鎂干燥合并的有機(jī)層，過濾并真空濃縮。通過快速色譜法純化殘留物(環(huán)己烷/乙酸乙酯，4∶1)后得到標(biāo)題化合物(8.34g)。非對映體的比值約為1∶1。制備4-叔丁氧基羰基氨基-2，2-二氟-3-羥基-5-(4-芐氧基)苯基-N-(苯基甲基)戊酰胺反應(yīng)路線I步驟B在0℃向4-叔丁氧基羰基氨基-2，2-二氟-3-羥基-5-(4-芐氧基)苯基戊酸乙酯(5.5g，11.5mmol)的無水四氫呋喃(50ml)溶液中加入芐基胺(6.15g，57.5mmol)。在0℃攪拌反應(yīng)3小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢?5小時(shí)。隨后用乙酸乙酯(100ml)稀釋反應(yīng)，用0.1N鹽酸水溶液(2×50ml)，水(50ml)，鹽水(50ml)洗滌并用無水硫酸鎂干燥。然后過濾并真空濃縮，用乙酸乙酯/戊烷將殘留物重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(5.17g)，為白色固體。制備[3ξ，4(S)]-2，4，5-三脫氧-4-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-氨基]-2，2-二氟-5-[4-(羥基)苯基]-N-(苯基甲基)-L-甘油基-戊糖酰胺(pentonamide)反應(yīng)路線II步驟A；向攪拌下鈀黑(300mg)的4.4％HCO2H/CH3OH(25ml)溶液中，加入4-叔丁氧基羰基氨基-2，2-二氟-3-羥基-5-(4-芐氧基)苯基-N-芐基戊酰胺(6∶1 R/S比，1.39g，2.57mmol)。在0.75小時(shí)，1.5小時(shí)和2.25小時(shí)時(shí)加入另外的300mg鈀黑，共經(jīng)過4.25小時(shí)后，濾除催化劑(甲醇漂洗)，并將濾液與類似的試驗(yàn)得到的物質(zhì)合并(采用51mg 4-叔丁氧基羰基氨基-2，2-二氟-3-羥基-5-(4-芐氧基)苯基-N-芐基戊酰胺)，并且真空濃縮。用環(huán)己烷/乙醇重結(jié)晶得到1.10g(92％)標(biāo)題化合物(約6∶1 R/S比值)，為細(xì)象牙色粉末；熔點(diǎn)163-166℃
IR(KBr)νmax3412，3362，1682，1545，1518，1165cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ9.18(nm，2H)，7.35-7.2(m，5H)，6.99(d，2H，J＝8.2Hz)，6.66(d，2H，J＝8.2Hz)，6.19(d，1H，J＝9.1Hz)，6.02(d，1H，J＝8.1Hz)，4.36(dd，1H，J＝15.5，6.0Hz)，4.27(dd，1H，J＝15.5，6.2Hz)，4.0-3.87(m，2H)，2.64(m，2H)，1.33(major)和1.24(2s，9H)；19F NMR(DMSO-d6)δ主要非對映體-110.82(dd.J＝255，6Hz)，-122.39(dd，J＝255，20Hz)，次要非對映體-111.05(dd，J＝255，6Hz)，-121.78(dd，J＝255，21Hz)；質(zhì)譜nm/z 479(M++29)，451(M++1)，423，379，352，351(100)，333，243，91.制備[3ξ，4(S)]-2，4，5-三脫氧-4-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二氟-5-[4-[2-甲氧基-2-(氧代)乙氧基]苯基]-N-(苯基甲基)-L-甘油基-戊糖酰胺反應(yīng)路線II步驟B；向攪拌下的[3ξ，4(S)]-2，4，5-三脫氧-4-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]-氨基]-2，2-二氟-5-[4-(羥基)苯基]-N-(苯基甲基)-L-甘油基-戊糖酰胺(441mg，0.979mmol)的丙酮(6ml)溶液中，加入碳酸鉀粉末(165mg，1.20mmol)，BrCH2CO2CH3(110μl，1.16mmol)和催化量粉末狀碘化鉀。將燒瓶塞好并連續(xù)攪拌3天，將反應(yīng)混合物傾入到乙酸乙酯/稀氯化鈉水溶液的混合物中，然后分離有機(jī)層并用稀氫氧化鉀水溶液，鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥。過濾有機(jī)層并真空濃縮得到413mg(81％)標(biāo)題化合物，為粘性的白色固體。用環(huán)己烷/乙酸乙酯重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(R/S值5.5∶1)，為白色粉末熔點(diǎn)93.5-99.5℃； IR(KBr)νmax3352，1690，1530，1512，1215，1177cm-1；1H NMR(CDCl3)δ7.38-7.24(m，5H)，7.18(nm，1H)，7.10(d，2H，J＝8.6Hz)，6.81(d，2H，J＝8.6Hz)，5.00(d，1H，J＝9.2Hz)，4.72(nm，1H)，4.60和4.58(主要)(2s 1∶5.5比值，2H)，4.50(dd，1H，J＝14.8，5.7Hz)，4.42(dd，1H，J＝14.8，5.7Hz)，4.1-3.94(m，2H)，3.80 and 3.79(major)(2s in 1∶5.5 ratio，3H)，3.0-2.8(m，2H)，1.42 and 1.38(2s，9H)；19F NMR(CDCl3)δ次要非對映體-113.49(dd，J＝262，9Hz)，主要非對映體-115.83(dd，J＝262，9Hz；次要非對映體的其它F掩藏于此峰中)，-120.07(dd，J＝262，14Hz)；質(zhì)譜，m/z522(M+)，495，451，423(100)，405，243，223，91；[α]20D-33.0°(c 0.81，CH3OH).制備[3ξ，4(S)]-2，4，5-三脫氧-4-[[2-[[[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]乙?；鵠氨基]-3-甲基-1-氧代丁基]氨基]-2，2-二氟-5-[4-[2-甲氧基-2-(氧代)乙氧基]苯基]-N-(苯基甲基)-L-甘油基-戊糖酰胺反應(yīng)路線II步驟C和D；在氮?dú)鈿夥罩袛嚢鑋3ξ，4(S)]-2，4，5-三脫氧-4-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二氟-5-[4-[2-甲氧基-2-(氧代)乙氧基]苯基]-N-(苯基甲基)-L-甘油基-戊糖酰胺(413mg，0.790mmol)的三氟乙酸(TFA)(4ml)溶液2小時(shí)，真空濃縮溶液并分兩次將殘留物溶于乙酸乙酯中，并且再次濃縮。在氮?dú)鈿夥罩袛嚢柘聦⒌玫降腡FA鹽溶于1∶1CH2Cl2/DMF(3ml)中，并按順序加入1-羥基苯并三唑水合物(HOBT)(128mg，0.84mmol)，N-甲基嗎啉(NMM)(190μl，1.73mmol)，Boc-gly-val-OH(230mg，0.84mmol，在標(biāo)準(zhǔn)條件下通過市場上可得到的gly-val-OH與碳酸二叔丁基酯的反應(yīng)制備)，和EDC(168mg，0.88mmol)。3天后，將混合物傾入水中并用乙酸乙酯提取兩次。用稀鹽酸，碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌合并的有機(jī)提取物，并用無水硫酸鎂干燥。真空濃縮有機(jī)層得到549mg膠狀固體，通過快速色譜法將其純化(3∶1乙酸乙酯/環(huán)己烷)得到標(biāo)題化合物(443mg)，為白色固體。用乙酸乙酯/環(huán)己烷重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(6.6∶1 R/S值)，為白色顆粒熔點(diǎn)161-166℃ IR(KBr)νmax3395，3298，1684，1647，1537，1514，1206，1179cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ9.14(nm，1H)，7.76(d，1H，J＝8.7Hz)，7.55(d，1H，J＝8.8Hz)，7.35-7.2(m，5H)，7.13(d，2H，J＝8.6Hz)，7.09(m，1H)，6.84(d，2H，J＝8.6Hz)，6.32(d，1H，J＝7.6Hz)，4.75(主要)and 4.73(2s 6.6∶1比值，2H)，4.4-3.93(m，5H)，3.69(major)and 3.69(2s，3H)，3.56(明顯的AB峰的內(nèi)峰，AB，2H)，2.75(dd，1H，J＝13.4，8.1Hz)，2.62(dd，1H，J＝13.4，6.0Hz)，1.98(m，1H)，1.38(major)and 1.36(2s，9H)，0.80(d，3H，J＝6.7Hz)，0.76(d，3H，J＝6.6Hz)；19F NMR(CDCl3)δ主要非對映體-110.67(d，J＝255Hz)，-122.89(dd，J＝255，20Hz)，次要非對映體-110.93(d，J＝257Hz)，-122.29(dd，J＝257，20Hz)；質(zhì)譜，m/z 707(M++29)，679(M++1)，623，579，405(100).
用甲醇/丁酮/乙酸乙酯重結(jié)晶后得到純[(3(S)，4(S)]標(biāo)題化合物，為白色粉末熔點(diǎn)209-211℃IR(KBr)νmax3306，1680，1653，1537，1514，1211，1179cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)成體9.25(t，1H，J＝6.0Hz)，7.94(d向高磁場方向肩峰，1H，J＝8.6Hz)，7.41-7.21(m，6H)，7.08-7.00(m，3H)，6.77(d，2H，J＝8.4Hz)，6.25(bs，1H)，4.72(s，2H)，4.36(m，2H)，4.24-3.95(m，3H)，3.69(s，3H)，3.53(明顯的AB峰的內(nèi)峰，未積分)，2.94-2.81(m，1H)，2.61(dd，1H，J＝14.1，10.7Hz)，1.87(m，1H)，1.38(2s，9H)，0.72(d，3H，J＝7.0Hz)，0.69(d，3H，J＝7.0Hz)；19FNMR(CDCl3)δ-109.90(dd，J＝252，7Hz)，-119.82(dd，J＝252，19Hz)[肩峰于δ-109.8和-119.9]；FAB質(zhì)譜，m/z 679(M++1)，579，423，405，358，307(100)，289.制備[3ξ，4(S)]-2，4，5-三脫氧-4-[[2-[[[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]乙?；鵠氨基]-3-甲基-1-氧代丁基]氨基]-2，2-二氟-5-[4-[2-氧代-2-(五氟苯氧基)乙氧基]苯基]-N-(苯基甲基)-L-甘油基-戊糖酰胺反應(yīng)路線II步驟E和F；向攪拌下的[3ξ，4(S)]-2，4，5-三脫氧-4-[[2-[[[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]乙?；鵠氨基]-3-甲基-1-氧代丁基]氨基]-2，2-二氟-5-[4-[2-甲氧基-2-(氧代)乙氧基]苯基]-N-(苯基甲基)-L-甘油基-戊糖酰胺(400mg，0.589mmol)的19∶1甲醇/水(20ml)懸浮液中加入LiOH·H2O(29mg，0.069mmol)，2小時(shí)后，加入另外的LiOH·H2O(共5mg，0.81mmol)，再過2小時(shí)后，真空濃縮溶液。將殘留物溶于水中；用乙醚洗滌水溶液，用乙酸乙酯覆蓋，并在劇烈攪拌下通過加入0.1N硫酸氫鈉酸化(10ml)。分離有機(jī)層，用另一部分乙酸乙酯提取水層。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層并用無水硫酸鎂干燥。真空濃縮有機(jī)層得到407mg(理論值392mg)相應(yīng)的酸，將其溶于二氯甲烷(5ml)和DMSO-d6(1ml)中。在氮?dú)鈿夥罩邢驍嚢柘碌脑撊芤褐屑尤隒6F5OH(139mg，0.755mmol)和EDC(140mg，0.73mmol)。3天之后用水稀釋反應(yīng)混合物并過濾，用水和乙醚洗滌得到的象牙色固體。試著用CF3CH2OH/乙酸乙酯重結(jié)晶會(huì)引起部分酯基轉(zhuǎn)移作用生成三氟乙酯?；旌衔锟梢栽砘驮脔セ玫?94mg標(biāo)題化合物粗品。在類似的試驗(yàn)中用CF3CH2OH/乙酸乙酯重結(jié)晶(通過助濾劑過濾熱溶液)也可得到純標(biāo)題化合物，為細(xì)小無光澤的白色晶體熔點(diǎn)202-204℃ IR(KBr)νmax3389，2974，1684，1653，1522，1173，1121，1080，997cm-1；1H NMR(DMSO-d6)δ9.14(m，1H)，7.77(d，1H，J9Hz)，7.54(d，1H，J＝8.9Hz)，7.35-7.22(m，5H)，7.17(d，2H，J＝8.7Hz)，7.08(nm，1H)，6.95(d，2H，J＝8.7Hz)，6.33(d，1H，J＝7.6Hz)，5.34(s，2H)，4.4-4.18(m，4H)，4.08-3.95(m，1H)，3.55(nm，2H)，2.8-2.58(m，2H)，1.97(m，1H)，1.38(主要)and 1.36(2s，9H 共1)，0.80(d，3H，J＝6.6Hz)，0.76(d，3H，J＝6.7Hz)；19F NMR(DMSO-d6)δ-110.69(d，J＝256Hz)，-122.89(dd，J＝255，20Hz)，-152.37(d，J＝20Hz)，-156.95(t，J＝23Hz)，-161.75(dd，J＝23，20Hz)；質(zhì)譜，m/z 831(M++1)，775，731.-標(biāo)題化合物可以不經(jīng)過分離，但可以直接轉(zhuǎn)化為大環(huán)內(nèi)酯。制備[9(S)，12(S)]-α，α-二氟-β-羥基-9-(1-甲基乙基)-4，7，10-三氧代-N-(苯基甲基)-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-14，16，17-三烯-12-丙酰胺反應(yīng)路線II步驟G和H；在攪拌下使[3ξ，4(S)]-2，4，5-三脫氧-4-[[2-[[[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]乙?；鵠氨基]-3-甲基-1-氧代丁基]氨基]-2，2-二氟-5-[4-[2-氧代-2-(五氟苯氧基)乙氧基]苯基]-N-(苯基甲基)-L-甘油基-戊糖酰胺(494mg，0.595mmol)懸浮于4N Hcl/二惡烷(16ml)，經(jīng)過2小時(shí)后生成澄清的膠狀物。真空除去溶劑和HCl，并在劇烈攪拌下使殘留的固體懸浮于稀碳酸氫鈉水溶液/二氯甲烷中3天。過濾混合物，用水和乙醚洗滌得到的象牙色固體。熱乙酸乙酯與剛好足夠溶解大多數(shù)固體的CF3CH2OH一起加入；通過助濾劑過濾并真空濃縮得到256mg標(biāo)題化合物。在類似的試驗(yàn)中，濃縮濾液并用熱乙酸乙酯稀釋得到標(biāo)題化合物的(R)-醇，為細(xì)微的白色顆粒；熔點(diǎn)＞255℃。
IR(KBr)νmax3412，3318，1663，1537，1514cm-1；1HNMR(DMSO-d6)δ9.17(m，1H)，7.90(m，1H)，7.64(m，1H)，7.37-7.2(m，5H)，7.11(m，1H)，7.01(m，1H)，6.93(m，1H)，6.81(m，1H)，6.46(m，1H)，6.14(dd，1H，J＝7.4，0.9Hz)，4.60(″d″，1H，J＝15Hz)，4.5-4.1(m，6H)，3.96(m，1H)，3.72-3.54(2m，2H)，2.76(m，1H)，1.78(m，1H)，0.77-0.71(m，6H)；19F NMR(DMSO-d6)δ主要構(gòu)象異構(gòu)體(85％)-109.96(dd，J＝256，5Hz)，-122.71(dd.J＝256，20Hz)，次要構(gòu)象異構(gòu)體(15％)-110.45(d，痕量雜質(zhì))，-122.3(m，痕量雜質(zhì)y)；質(zhì)譜，m/z 547(M++1).
為了制備標(biāo)題化合物，可以用幾部分沸騰的甲醇研制通過脫保護(hù)/環(huán)化得到的粗產(chǎn)物，以溶解標(biāo)題化合物的(S)-醇并除去一些不溶聚合物質(zhì)。真空除去溶劑并用幾部分沸騰的CF3CH2OH研制殘留物。不溶的灰色粉末即標(biāo)題化合物的(S)-醇IR(KBr)νmax3401，3298，1678，1643，1543，1514cm-1；19F NMR(DMSO-d6)δ-108.94，(dd，J＝253，6Hz)，121.27(dd，J＝253，20Hz)；質(zhì)譜m/z575(M++29)，547(M++1)，113(100)；C27H33F2N4O6的精確分子量547.2368，實(shí)測值547.2344。在這個(gè)特定的試驗(yàn)中標(biāo)題化合物的(S)-醇并未生成；但是它可以按照與(R)-醇類似的方式接著進(jìn)行下面的反應(yīng)，得到最終的標(biāo)題化合物。此外，(R)和(S)-醇的混合物也可按類似的方式進(jìn)行下述反應(yīng)，得到最終產(chǎn)物。在該醇的最后氧化過程中，不對稱中心被破壞得到酮，因此這些醇的分離并不是關(guān)鍵。制備[9(S)，12(S)]-α，α-二氟-9-(1-甲基乙基)-β，4，7，10-四氧代-N-(苯基甲基)-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-14，16，17-三烯-12-丙酰胺反應(yīng)路線II步驟I；在氮?dú)鈿夥罩袆×覕嚢柘峦ㄟ^在60℃加熱將[9(S)，12(S)]-α，α-二氟-β-羥基-9-(1-甲基乙基)-4，7，10-三氧代-N-(苯基甲基)-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-14，16，17-三烯-12-丙酰胺(240mg，0.439mmol)溶于DMSO(6ml)中，在冷卻下用二氯甲烷(2ml)稀釋并在冰/甲醇浴中冷卻到-15℃至-17℃。向其中滴加入2M的草酰氯/二氯甲烷(2.0ml)得到糖漿。1小時(shí)后加入三乙胺(1.15ml，8.25mmol)并使混合物緩慢溫?zé)岬绞覝亍?7小時(shí)后，用水/乙酸乙酯稀釋混合物，分離有機(jī)層并用第二部分乙酸乙酯提取水層；還存在一些不溶的白色固體(18mg)，即起始原料。用水，鹽水洗滌合并的有機(jī)提取物三次，并用無水硫酸鎂干燥。然后過濾有機(jī)層并真空濃縮，通過快速色譜法(19∶1乙酸乙酯/甲醇)純化白色殘留物粗品(101mg)，得到27mg非極性油狀物(丟棄)和70mg白色固體/膠狀物。重復(fù)用乙酸乙酯/CF3CH2OH重結(jié)晶得到白色膠狀物，用19∶1二氯甲烷/甲醇將其洗滌得到17mg標(biāo)題化合物，為米色粉末，即主要由少量[9(S)，12(R)]-非對映體，也含[(9S)，12(S)]非對映體以及可能含[9(S)，12(R)]非對映體水合物組成的混合物。用同樣的溶劑混合物進(jìn)一步結(jié)晶不溶的膠狀物，得到5mg[9(S)，12(S)]非對映體，為細(xì)小淺米色顆粒。對混合物來說IR(KBr)νmax3420，1669，1530，1514cm-1；19F NMR(DMSO-d6)δ[9(S)，12(R)]非對映體-105.89(d，J＝263Hz)，-111.90(d，J＝263Hz)；[9(S)，12(S)]非對映體-109.13(d，J＝274Hz)-111.77(d，J＝274Hz)；假定為水合物[9(S)，12(R)]非對映體的水合物-105.62(d，J＝271Hz)，-123.35(d，J＝271Hz)(70∶18∶12混合物，分別的)；質(zhì)譜(CI，70eV)，m/z 573(M++29)，571，545(M++1)，308，268，250(100)，190，91；分子量計(jì)算值C27H30F2N4O6545.2212，實(shí)測值545.2239.[9(S)，12(S)]非對映體IR(KBr)νmax3418，1667，1535，1514cm-1；19F NMR(DMSO-d6)δ-109.12(d，J＝274Hz)；-111.77(d，J＝274Hz)，加少量雜質(zhì)；質(zhì)譜(CI，70eV)，m/z 573(M++29)，545(M++1)，308(100)，91；分子量計(jì)算值C27H30F2N4O6545.2212，實(shí)測值545.2230.
實(shí)施例2制備[9(S)，12(S)]-α，α-二氟-9-(1-甲基乙基)-β，4，7，10-四氧代-N-[2-甲基-1-[(苯基甲氧基)甲基]丙基]-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-14，16，17-三烯-12-丙酰胺 制備下面反應(yīng)所需的起始原料O-芐基-D-纈氨醇在室溫下攪拌D-纈氨醇(5.1g，49.4mmol)和碳酸二叔丁基酯(10.9g，52mmol)的甲醇(60ml)溶液17小時(shí)，真空濃縮后，利用快速色譜法純化殘留物(硅膠，乙酸乙酯/石油醚3/7，Rf0.37)定量得到N-叔丁氧基羰基-D-纈氨醇(10.07g，無色油狀物)。
在-5℃和氮?dú)鈿夥罩?，向N-叔丁氧基羰基-D-纈氨醇(10g，49.3mmol)和芐基溴化物(5.86ml，49.3mmol)的無水二甲基甲酰胺(50ml)溶液中，分批加入叔丁醇鉀(11.06g，98.6mmol)固體，添加時(shí)應(yīng)使內(nèi)在溫度不超過+5℃。在0℃攪拌反應(yīng)混合物2小時(shí)，用乙酸乙酯(2×300ml)稀釋，用1N硫酸氫鉀溶液(50ml)和水(250ml)提取并用水(2×200ml)洗滌兩次。用無水硫酸鎂干燥有機(jī)相后，過濾并真空濃縮，通過快速色譜法純化所得的油狀物(硅膠，乙酸乙酯/石油醚1/9，Rf0.42)，得到N-叔丁氧基羰基-O-芐基-D-纈氨醇，為無色油狀物(9.95g，產(chǎn)率69％)。
在室溫?cái)嚢鐽-叔丁氧基羰基-O-芐基-D-纈氨醇(9.95g，34mmol)的甲酸(50ml)溶液4小時(shí)，真空除去甲酸后，將粘稠殘留物溶于水(100ml)中，用飽和碳酸氫鈉溶液(100ml)中和，并用乙酸乙酯(2×100ml)提取有機(jī)相兩次，用水(2×100ml)洗滌有機(jī)相直到呈中性并用無水硫酸鈉干燥合并的有機(jī)層。過濾并真空濃縮得到O-芐基-D-纈氨醇，為淺黃色油狀物(5.20g，79％)。
反應(yīng)路線II步驟C；在氮?dú)鈿夥罩袑?-叔丁氧基羰基氨基-2，2-二氟-3-羥基-5-(4-芐氧基)苯基戊酸乙酯(756mg，1.58mmol，根據(jù)實(shí)施例1，反應(yīng)路線I步驟A制備)和4.4％甲酸/甲醇(9ml)混合，加入鈀黑(171mg)并攪拌1小時(shí)。經(jīng)過1小時(shí)，然后4小時(shí)并最后經(jīng)過2天后，分別加入其余的鈀黑(80mg，378mg和111mg)，6天后過濾反應(yīng)并真空濃縮濾液。通過快速色譜法純化殘留物(硅膠，環(huán)烷基/乙酸乙酯，2/1接著1∶1)得到脫芐基的產(chǎn)物(380mg，58％)，為淺黃色泡沫狀物。
反應(yīng)路線I步驟D；在氮?dú)鈿夥罩?，將三甲基鋁(1.55ml 2M的甲苯溶液)滴加入O-芐基-D-纈氨醇(600mg，3.11mmol，前面已制備)的無水二氯甲烷(1ml)溶液中。攪拌反應(yīng)15分鐘并加入上述制備的脫芐基產(chǎn)物(380mg，0.976mmol)的無水二氯甲烷(1ml)溶液，加入另外的二氯甲烷(3ml)并在室溫?cái)嚢?9小時(shí)。加入無水四氫呋喃(5ml)并攪拌3小時(shí)。使反應(yīng)混合物在冷稀鹽酸水溶液和乙酸乙酯之間分配，分離各層并用水和鹽水洗滌有機(jī)層。用無水硫酸鎂干燥有機(jī)層，過濾并真空濃縮。在與前述同樣的條件下使殘留物進(jìn)行第二步酰胺化反應(yīng)促使反應(yīng)進(jìn)一步完成。按與第一步反應(yīng)類似的方式處理第二步反應(yīng)。通過快速色譜法純化殘留物(硅膠，環(huán)己烷/乙酸乙酯，5∶3)得到不純的產(chǎn)物(351mg)，其中混有酯起始原料。為了純化產(chǎn)物，將上述不純產(chǎn)物進(jìn)一步溶于甲醇(10ml)和水(0.5ml)中，加入氫氧化鋰一水合物(48mg)并攪拌3小時(shí)。然后在真空條件下部分濃縮反應(yīng)，用水稀釋，加入乙醚和冷稀鹽酸水溶液。分離各層并用乙醚提取水層。合并有機(jī)層，提取并用水，碳酸氫鉀水溶液(2×)和鹽水洗滌。用無水硫酸鎂干燥有機(jī)層，過濾并真空濃縮得到酰胺(3.5∶1 R/S于羥基上)(266mg，51％)19F NMR(CDCl3)δ(R)非對映體-115.57(dd，J＝260，8Hz)，-121.65(dd，J＝260，17Hz)；(S)非對映體-112.00(d，J＝266Hz)，-120.7(dd，J＝266，18Hz).
反應(yīng)路線II步驟B；在氮?dú)鈿夥障掠诒?3ml)中，將前面制備的酰胺(266mg，0.496mmol)與碳酸鉀粉末(80mg，0.58mmol)混合，向攪拌下的混合物中滴加入溴代乙酸甲酯(56μl，0.59mmol)，攪拌反應(yīng)3天。按類似實(shí)施例1，反應(yīng)路線II步驟B所述的方式處理所得的產(chǎn)物。如果還存在起始原料，則加入催化量碘化鉀將不純的產(chǎn)物置于如上所述同樣的烷基化條件下，攪拌24小時(shí)，根據(jù)前述的處理方法分離產(chǎn)物。通過快速色譜法純化殘留物(硅膠，環(huán)己烷/乙酸乙酯，5∶3)得到所需的烷基化產(chǎn)物(143mg，47％，5∶1 R/S于羥基上)19F NMR(CDCl3)δ(R)非對映體-155.53(dd，J＝261，7Hz)，-122.06(dd，J＝261，17Hz)；(S)非對映體-113.83(d，J＝256Hz)，-127.56(dd，J＝256，19Hz).
反應(yīng)路線II步驟C；將上述烷基化產(chǎn)物(143mg，0.235mmol)與甲酸(3ml，96％)混合并在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1.5小時(shí)，真空濃縮反應(yīng)并使殘留物在乙酸乙酯和稀碳酸氫鈉水溶液之間分配。分離有機(jī)層并用水(2×)洗滌，真空濃縮得到脫保護(hù)胺(114mg，95％)。
反應(yīng)路線II步驟D；在0℃二氯甲烷/二甲基甲酰胺中，將上述的脫保護(hù)胺(114mg)，1-羥基苯并三唑水合物(38mg，0.25mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(55mg，0.29mmol)，N-甲基嗎啉(28μl，0.25mmol)和Boc·gly·val(69mg，0.25mmol)混合，使反應(yīng)升溫到室溫，并在16小時(shí)后將混合物傾入到水中和用乙酸乙酯提取兩次。用稀鹽酸，碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌合并的有機(jī)提取物，并用無水硫酸鎂干燥。過濾有機(jī)層并真空濃縮，通過快速色譜法純化殘留物(硅膠，乙酸乙酯/環(huán)己烷，70∶30)，接著用環(huán)己烷/乙酸乙酯重結(jié)晶得到所需的酰胺(137mg，76％)，為細(xì)微白色顆粒熔點(diǎn)161.5-163.5℃IR(KBr)νmax1696，1653，1514cm-1；1H NMR(CDCl3)δ7.37-7.26(m，5H)，7.11(d，2H，J＝8.6Hz)，6.9(m，2H)，6.78(d，2H，J＝8.6Hz)，6.62(bd，1H)，5.44(m，1H)，4.86(bs，1H)，4.60(s，2H)，4.54(d，1H，J＝11.9Hz)，4.46(d，1H，J＝11.9Hz)，4.4-4.3(m，1H)，4.2-4.03(m，2H)，3.9-3.75(m，2H)，3.81(s，3H)，3.67-3.59(m，2H)，3.49(dd，1H，J＝10.0，3.8Hz)，2.89(明顯的雙峰，2H)，2.15-1.92(m，2H)，1.45(s，9H)，0.94(d，6H，J＝6.75Hz)，0.88(d，3H，J＝6.7Hz)，0.84(d，3H，J＝6.6Hz)；19F NMR(CDCl3)δ-116.78(d，J＝258Hz)，-120.16(dd，J＝258，9Hz)；質(zhì)譜(FAB)，m/z765(M++1)，709，665，509(100)，419，382.
反應(yīng)路線II步驟E和F；在甲醇(4.5ml)和水(0.5ml)中將前面制備的酰胺(137mg，0.179mm0l)與氫氧化鋰一水合物(12mg，0.29mmol)混合，攪拌反應(yīng)3小時(shí)，然后真空濃縮反應(yīng)，將殘留物溶于水中。用乙醚洗滌水溶液，用乙酸乙酯覆蓋并在劇烈攪拌下加入0.1N硫酸氫鈉酸化。分離有機(jī)層，并用第二部分乙酸乙酯提取水層。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層并用無水硫酸鎂干燥，真空濃縮有機(jī)層得到相應(yīng)的酸，將其溶于二氯甲烷(3ml)中。在氮?dú)鈿夥罩邢驍嚢柘碌脑撊芤褐屑尤隒6F5OH(40μl，0.35mmol)和EDC(45mg，0.23mmol)，1天后用水稀釋混合物并過濾得到所需的五氟苯基酯(161mg，98％)，為細(xì)微白色顆粒。用環(huán)己烷/乙酸乙酯重結(jié)晶得到五氟苯基酯熔點(diǎn)139.5-143℃；IR(KBr)νmax3416，3376，3312，1697，1661，1522，1171，1121，1078，997cm-1；1H NMR(CDCl3)δ7.39-7.25(m，5H)，7.16(d，2H，J＝8.5Hz)，6.94-6.78(m，2H)，6.86(d，2H，J＝8.6Hz)，6.57(d，1H，J＝9.0Hz)，5.24(nm，1H)，4.96(s，2H)，4.74(nm，1H)，4.54(d，1H，J＝11.9Hz)，4.45(d，1H，J＝11.9Hz)，4.30(m，1H)，4.19-3.99(m，2H)，3.9-3.79(m，1H)，3.73(dd，1H，J＝18.2，5.6Hz)，3.64(m，2H)，3.49(m，1H)，2.91(明顯的窄的d，2H)，2.11(m，1H)，1.99(m，1H)，1.45(s，9H)，0.94(d，3H，J＝6.7Hz)，0.93(d，3H，J＝6.75Hz)，0.89(d，3H，J＝6.75Hz)，0.84(d，3H，J＝6.95Hz)；19F NMR(CDCl3)δ-116.65(d，1F，J＝259Hz)，-120.28(dd，1F，J＝262，9Hz)，-152.68(d，2F，J＝18Hz)，-157.39(t，1F，J＝22Hz)，-162.13(dd，2F，J＝22，18Hz)；質(zhì)譜(FAB)，m/z917(M++1)，861，817，661(100)，571，534，360，331，173.
反應(yīng)路線II步驟G和H；將前面制備的五氟苯基酯(155mg，0.169mmol)與甲酸(4.5ml，96％)混合并攪拌2小時(shí)，真空濃縮反應(yīng)，加入二氯甲烷(50ml)和飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)，攪拌反應(yīng)3天。加入乙酸乙酯并通過細(xì)小玻璃漏斗過濾。用水洗滌合并的膠狀物，分離濾液中的有機(jī)層，用水(3×)洗滌并真空濃縮。通過快速色譜法純化殘留物(硅膠，95％甲醇/乙酸乙酯)得到大環(huán)醇(9mg，8％(R)非對映體，于羥基上)，為蠟狀固體1H NMR(CD3OD)δ7.42-7.27(m，5H)，7.23(m，1H)，7.00(m，1H)，6.91(m，1H)，6.58(m，1H)，4.71(d，1H，J＝16.0Hz)，4.65-4.5(m，1H)，4，59(d，1H，J＝12.1Hz)，4.56(d，1H，J＝15.6Hz)，4.54(d，1H，J＝12.1Hz)，4.24(m，1H)，4.08-4.01(m，2H)，3.94(窄m，1H)，3.70-3.57(m，3H)，2.93(dd，1H，J＝13.2，3.4Hz)，2.73(dd，1H，J＝13.1，12.5Hz)，2.01(m，1H)，1.89(m，1H)，1.01(d，3H，J＝6.2Hz)，0.99(d，3H，J＝5.9Hz)，0.91(d，3H，J＝6.9Hz)，0.87(d，3H，J＝6.8Hz)；19F NMR(CD3OD)δ-114.75(dd，J＝258，9Hz)，-121.97(dd，J＝258，17Hz).
反應(yīng)路線II步驟I；在氮?dú)鈿夥罩邢驍嚢柘律鲜鲋苽涞拇蟓h(huán)醇(9mg，0.014mmol)的1∶1二氯甲烷/乙腈(8ml)溶液中，加入Dess-Martinperiodinane(30mg，0.071mmol)。在室溫?cái)嚢杷玫膽腋∫?天，然后用乙酸乙酯/碳酸氫鈉和硫代硫酸鈉水溶液稀釋混合物。10分鐘后，分離有機(jī)層，用水洗滌并真空濃縮得到回收的醇，酮和酮水合物的混合物。采用溶于3∶1乙腈/二氯甲烷(4ml)中的periodinane(30mg，0.071mmol)對得到的混合物再進(jìn)行氧化，7天后如上處理混合物得到標(biāo)題化合物和標(biāo)題化合物水合物的混合物(共6mg)，為白色固體19F NMR(CD3CN)δ酮-111.93和-111.96(2s，AB類型的內(nèi)峰)，酮水合物-115.36(d，J＝257Hz)，-119.02(d，J＝257Hz)。
實(shí)施例3制備N-芐基-3-(6-芐基-9-異丙基-4，7，10-三氧代-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-1(17)，14(18)，15-三烯-12-基)-2，2-二氟-3-氧代丙酰胺 反應(yīng)路線II步驟C和D；在氮?dú)鈿夥罩袛嚢鑋3ξ，4(S)]-2，4，5-三脫氧-4-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二氟-5-[4-[2-甲氧基-2-(氧代)乙氧基]苯基]-N-(苯基甲基)-L-甘油基-戊糖酰胺(0.790mmol，根據(jù)實(shí)施例1反應(yīng)路線II步驟B制備)的三氟乙酸(TFA)(4ml)溶液2小時(shí)，真空濃縮溶液并分兩次將殘留物溶于乙酸乙酯中，并且再次濃縮。在氮?dú)鈿夥罩袛嚢柘聦⒌玫降腡FA鹽溶于1∶1 CH2Cl2/DMF(3ml)中，并按順序加入1-羥基苯并三唑水合物(HOBT)(128mg，0.84mmol)，N-甲基嗎啉(NMM)(190μl，1.73mmol)，Boc-phe-val-OH(0.84mmol)，和EDC(168mg，0.88mmol)。3天后，將混合物傾入水中并用乙酸乙酯提取兩次。用稀鹽酸，碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌合并的有機(jī)提取物，并用無水硫酸鎂干燥。真空濃縮有機(jī)層得到所需的酰胺。
反應(yīng)路線II步驟E和F；向攪拌下上述制備的酰胺(0.589mmol)的19∶1甲醇/水(20ml)懸浮液中加入LiOH·H2O(34mg，0.81mmol)，2小時(shí)后，真空濃縮溶液。將殘留物溶于水中；用乙醚洗滌水溶液，用乙酸乙酯覆蓋，并在劇烈攪拌下通過加入0.1N硫酸氫鈉酸化(10ml)。分離有機(jī)層，用另一部分乙酸乙酯提取水層。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層并用無水硫酸鎂干燥。真空濃縮有機(jī)層得到相應(yīng)的酸，將其溶于二氯甲烷(5ml)中。在氮?dú)鈿夥罩邢驍嚢柘碌脑撊芤褐屑尤隒6F5OH(139mg，0.755mmol)和EDC(140mg，0.73mmol)。1天之后用水稀釋反應(yīng)混合物并過濾，用水和乙醚洗滌固體得到所需的五氟苯基酯?；蛘呖梢酝ㄟ^本領(lǐng)域熟知的提取方法分離所需的五氟苯基酯。
反應(yīng)路線II步驟G和H；在攪拌下將前面制備的五氟苯基酯懸浮于4NHCl/二惡烷(16ml)，經(jīng)過2小時(shí)后真空除去溶劑和HCl，并在劇烈攪拌下使殘留的固體/膠狀物懸浮于稀碳酸氫鈉水溶液/二氯甲烷中3天。過濾混合物，用水和乙醚洗滌得到的固體。熱乙酸乙酯與剛好足夠溶解大多數(shù)固體的CF3CH2OH一起加入；通過助濾劑過濾并真空濃縮得到所需的大環(huán)醇。
反應(yīng)路線II步驟I；在氮?dú)鈿夥罩邢驍嚢柚猩鲜鲋苽涞拇蟓h(huán)醇(0.014mmol)的1∶1二氯甲烷/乙腈(8ml)溶液中，加入Dess-Martinperiodinane(60mg，0.14mmol)。在室溫?cái)嚢杷玫膽腋∫?天，然后用乙酸乙酯/碳酸氫鈉和硫代硫酸鈉水溶液稀釋混合物。10分鐘后，分離有機(jī)層，用水洗滌并真空濃縮得到標(biāo)題化合物。
實(shí)施例4制備3-[12-(芐基氨基甲?；?二氟-乙?；?-9-異丙基-4，7，10-三氧代-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-1(17)，14(18)，15-三烯-6-基]丙酸 反應(yīng)路線II步驟A；在氮?dú)鈿夥罩袛嚢鑋3ξ，4(S)]-2，4，5-三脫氧-4-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二氟-5-[4-[2-甲氧基-2-(氧代)乙氧基]苯基]-N-(苯基甲基)-L-甘油基-戊糖酰胺(0.790mmol，根據(jù)實(shí)施例1反應(yīng)路線II步驟B制備)的三氟乙酸(TFA)(4ml)溶液2小時(shí)，真空濃縮溶液并分兩次將殘留物溶于乙酸乙酯中，并且再次濃縮得到脫保護(hù)胺的TFA鹽。
反應(yīng)路線III步驟A；在氮?dú)鈿夥罩袛嚢柘?，將上述得到的脫保護(hù)胺的TFA鹽溶于1∶1 CH2Cl2/DMF(3ml)中，并按順序加入1-羥基苯并三唑水合物(HOBT)(128mg，0.84mmol)，N-甲基嗎啉(NMM)(190μl，1.73mmol)，Boc-val-OH(0.84mmol)，和EDC(168mg，0.88mmol)。3天后，將混合物傾入水中并用乙酸乙酯提取兩次。用稀鹽酸，碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌合并的有機(jī)提取物，并用無水硫酸鎂干燥。真空濃縮有機(jī)層得到所需的酰胺。
反應(yīng)路線III步驟B和C；在氮?dú)鈿夥罩袛嚢枭鲜鲋苽涞孽０?0.790mmol)的三氟乙酸(TFA)(4ml)溶液2小時(shí)，真空濃縮溶液并分兩次將殘留物溶于乙酸乙酯中，并且再次濃縮得到脫保護(hù)胺的TFA鹽。在氮?dú)鈿夥罩袛嚢柘?，將上述得到的脫保護(hù)胺的TFA鹽溶于1∶1 CH2Cl2/DMF(3ml)中，并按順序加入1-羥基苯并三唑水合物(HOBT)(128mg，0.84mmol)，N-甲基嗎啉(NMM)(190μl，1.73mmol)，Nα-FMOC-γ-叔丁基酯-glu-OH(0.84mmol)，和EDC(168mg，0.88mmol)。3天后，將混合物傾入水中并用乙酸乙酯提取兩次。用稀鹽酸，碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌合并的有機(jī)提取物，并用無水硫酸鎂干燥。真空濃縮有機(jī)層得到所需的酰胺。另一環(huán)化方法；將上述制備的酰胺(0.6mmol)溶于甲醇/水(19∶1)中并在攪拌下加入LiOH·H2O(1.2mmol)。5小時(shí)后，用水稀釋反應(yīng)混合物并用乙醚漂洗，用0.1N硫酸氫鈉水溶液將水層的PH調(diào)至4.5-5。然后用乙酸乙酯提取酸化的水層，用無水硫酸鎂干燥有機(jī)層，過濾并真空濃縮，得到如下所示的需要的酸/脫保護(hù)胺。 在氮?dú)鈿夥罩袛嚢柘?，將上述得到的?脫保護(hù)胺(0.70mmol)溶于1∶1CH2Cl2/DMF(3ml)中，并按順序加入1-羥基苯并三唑水合物(HOBT)(128mg，0.84mmol)，N-甲基嗎啉(NMM)(95μl，0.87mmol)和EDC(168mg，0.88mmol)。3天后，將混合物傾入水中并用乙酸乙酯提取兩次。用稀鹽酸，碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌合并的有機(jī)提取物，并用無水硫酸鎂干燥。真空濃縮有機(jī)層得到大環(huán)醇。
反應(yīng)路線II步驟I；在氮?dú)鈿夥罩邢驍嚢柚猩鲜鲋苽涞拇蟓h(huán)醇(0.014mmol)的1∶1二氯甲烷/乙腈(8ml)溶液中，加入Dess-Martinperiodinane(60mg，0.14mmol)。在室溫?cái)嚢杷玫膽腋∫?天，然后用乙酸乙酯/碳酸氫鈉和硫代硫酸鈉水溶液稀釋混合物。10分鐘后，分離有機(jī)層，用水洗滌并真空濃縮得到酮。
反應(yīng)路線II步驟J；將前面制備的酮(0.013mmol)溶于二氯甲烷(4ml)中并加入三氟乙酸(1ml)，在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)3天并真空濃縮得到標(biāo)題化合物。
實(shí)施例5制備3-[6-(4-氨基-丁基)-9-異丙基-4，7，10-三氧代-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-1(17)，14(18)，15-三烯-12-基]-N-芐基-2，2-二氟-3-氧代丙酰胺 反應(yīng)路線II步驟C和D；在氮?dú)鈿夥罩袛嚢鑋3ξ，4(S)]-2，4，5-三脫氧-4-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二氟-5-[4-[2-甲氧基-2-(氧代)乙氧基]苯基]-N-(苯基甲基)-L-甘油基-戊糖酰胺(0.790mmol，根據(jù)實(shí)施例1反應(yīng)路線II步驟B制備)的三氟乙酸(TFA)(4ml)溶液2小時(shí)，真空濃縮溶液并分兩次將殘留物溶于乙酸乙酯中，并且再次濃縮。在氮?dú)鈿夥罩袛嚢柘聦⒌玫降腡FA鹽溶于1∶1 CH2Cl2/DMF(3ml)中，并按順序加入1-羥基苯并三唑水合物(HOBT)(128mg，0.84mmol)，N-甲基嗎啉(NMM)(190μl，1.73mmol)，Nα-t-Boc-Nε-Cbz-L-lys-val-OH(0.84mmol)，和EDC(168mg，0.88mmol)。1天后，將混合物傾入水中并用乙酸乙酯提取兩次。用稀鹽酸，碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌合并的有機(jī)提取物，并用無水硫酸鎂干燥。真空濃縮有機(jī)層得到所需的酰胺。
反應(yīng)路線II步驟E和F；向攪拌下上述制備的酰胺(0.589mmol)的19∶1甲醇/水(20ml)懸浮液中加入LiOH·H2O(34mg，0.81mmol)，2小時(shí)后，真空濃縮溶液。將殘留物溶于水中；用乙醚洗滌水溶液，用乙酸乙酯覆蓋，并在劇烈攪拌下通過加入0.1N硫酸氫鈉酸化(10ml)。分離有機(jī)層，用另一部分乙酸乙酯提取水層。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層并用無水硫酸鎂干燥。真空濃縮有機(jī)層得到相應(yīng)的酸，將其溶于二氯甲烷(5ml)中。在氮?dú)鈿夥罩邢驍嚢柘碌脑撊芤褐屑尤隒6F5OH(139mg，0.755mmol)和EDC(140mg，0.73mmol)。1天之后用水稀釋反應(yīng)混合物并過濾，用水和乙醚洗滌固體得到所需的五氟苯基酯。或者可以通過本領(lǐng)域熟知的提取方法分離所需的五氟苯基酯。
反應(yīng)路線II步驟G和H；在攪拌下將前面制備的五氟苯基酯懸浮于4NHCl/二惡烷(16ml)，經(jīng)過2小時(shí)后真空除去溶劑和HCl，并在劇烈攪拌下使殘留的固體/膠狀物懸浮于稀碳酸氫鈉水溶液/二氯甲烷中3天。過濾混合物，用水和乙醚洗滌得到的固體。熱乙酸乙酯與剛好足夠溶解大多數(shù)固體的CF3CH2OH一起加入；通過助濾劑過濾并真空濃縮得到所需的大環(huán)醇。
反應(yīng)路線II步驟I；在氮?dú)鈿夥罩邢驍嚢柚猩鲜鲋苽涞拇蟓h(huán)醇(0.014mmol)的1∶1二氯甲烷/乙腈(8ml)溶液中，加入Dess-Martinperiodinane(60mg，0.14mmol)。在室溫?cái)嚢杷玫膽腋∫?天，然后用乙酸乙酯/碳酸氫鈉和硫代硫酸鈉水溶液稀釋混合物。10分鐘后，分離有機(jī)層，用水洗滌并真空濃縮得到所需的酮。
反應(yīng)路線II步驟J；向攪拌中的鈀黑(10mg)的4.4％甲酸/甲醇(5ml)懸浮液中，加入前面制備的酮(0.014mmol)，4小時(shí)后過濾反應(yīng)并真空濃縮濾液得到標(biāo)題化合物。
實(shí)施例6制備N-芐基-3-[6-(2-氨基甲?；一?-9-異丙基-4，7，10-三氧代-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-1(17)，14(18)，15-三烯-12-基]-2，2-二氟-3-氧代-丙酰胺 反應(yīng)路線II步驟C和D；在氮?dú)鈿夥罩袛嚢鑋3ξ，4(S)]-2，4，5-三脫氧-4-[[(1，1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]-2，2-二氟-5-[4-[2-甲氧基-2-(氧代)乙氧基]苯基]-N-(苯基甲基)-L-甘油基-戊糖酰胺(0.790mmol，根據(jù)實(shí)施例1反應(yīng)路線II步驟B制備)的三氟乙酸(TFA)(4ml)溶液2小時(shí)，真空濃縮溶液并分兩次將殘留物溶于乙酸乙酯中，并且再次濃縮。在氮?dú)鈿夥罩袛嚢柘聦⒌玫降腡FA鹽溶于1∶1 CH2Cl2/DMF(3ml)中，并按順序加入1-羥基苯并三唑水合物(HOBT)(128mg，0.84mmol)，N-甲基嗎啉(NMM)(190μl，1.73mmol)，Boc-gln-val-OH(0.84mmol)，和EDC(168mg，0.88mmol)。1天后，將混合物傾入水中并用乙酸乙酯提取兩次。用稀鹽酸，碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌合并的有機(jī)提取物，并用無水硫酸鎂干燥。真空濃縮有機(jī)層得到所需的酰胺。
反應(yīng)路線II步驟E和F；向攪拌下上述制備的酰胺(0.589mmol)的19∶1甲醇/水(20ml)懸浮液中加入LiOH·H2O(34mg，0.81mmol)，2小時(shí)后，真空濃縮溶液。將殘留物溶于水中；用乙醚洗滌水溶液，用乙酸乙酯覆蓋，并在劇烈攪拌下通過加入0.1N硫酸氫鈉酸化(10ml)。分離有機(jī)層，用另一部分乙酸乙酯提取水層。用鹽水洗滌合并的有機(jī)層并用無水硫酸鎂干燥。真空濃縮有機(jī)層得到相應(yīng)的酸，將其溶于二氯甲烷(5ml)中。在氮?dú)鈿夥罩邢驍嚢柘碌脑撊芤褐屑尤隒6F5OH(139mg，0.755mmol)和EDC(140mg，0.73mmol)。1天之后用水稀釋反應(yīng)混合物并過濾，用水和乙醚洗滌固體得到所需的五氟苯基酯。或者可以通過本領(lǐng)域熟知的提取方法分離所需的五氟苯基酯。
反應(yīng)路線II步驟G和H；在攪拌下將前面制備的五氟苯基酯懸浮于4NHCl/二惡烷(16ml)，經(jīng)過2小時(shí)后真空除去溶劑和HCl，并在劇烈攪拌下使殘留的固體/膠狀物懸浮于稀碳酸氫鈉水溶液/二氯甲烷中3天。過濾混合物，用水和乙醚洗滌得到的固體。熱乙酸乙酯與剛好足夠溶解大多數(shù)固體的CF3CH2OH一起加入；通過助濾劑過濾并真空濃縮得到所需的大環(huán)醇。
反應(yīng)路線II步驟I；在氮?dú)鈿夥罩邢驍嚢柚猩鲜鲋苽涞拇蟓h(huán)醇(0.014mmol)的1∶1二氯甲烷/乙腈(8ml)溶液中，加入Dess-Martinperiodinane(60mg，0.14mmol)。在室溫?cái)嚢杷玫膽腋∫?天，然后用乙酸乙酯/碳酸氫鈉和硫代硫酸鈉水溶液稀釋混合物。10分鐘后，分離有機(jī)層，用水洗滌并真空濃縮得到所需的酮。
本發(fā)明另一方面提供了對病毒感染病人的治療方法，該方法包括向病人施用抗病毒有效量的式(I)化合物。
這里所用的術(shù)語“病毒感染”是指以細(xì)胞的病毒轉(zhuǎn)化，病毒復(fù)制和繁殖為特征的不正常狀態(tài)或情況?？捎檬?I)化合物治療的病毒感染特別包括逆病毒感染，例如但不陷于下述病毒HTLV-I，HTLV-II，HTLV-III(HIV病毒)，鼠白血病病毒，豬白血病病毒，巨細(xì)胞病毒(CMV)，雞肉瘤病毒等。此外式(I)化合物可用于治療HIV感染的許多情況AIDS，ARC(AIDS相關(guān)綜合癥)，有癥狀和無癥狀的，急性或潛伏的HIV感染。例如，本發(fā)明化合物可用于防止接觸HIV后可能的HIV感染，接觸HIV的途徑如輸血、偶然的針頭感染或在手術(shù)中接觸了病人血液。
術(shù)語式(I)化合物的“抗病毒有效量”是指給病人施用的單一或復(fù)合劑量在控制病毒的生長或延長病人預(yù)期的壽命(無這種治療措施時(shí))方面是有效的。這里使用的“控制病毒感染”是指延緩、打斷、抑制或中止細(xì)胞的病毒轉(zhuǎn)化或病毒的復(fù)制和增生，并不一定表示完全消滅了病毒。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了抑制有關(guān)病人體內(nèi)HIV蛋白酶的方法，該方法包括向所說的病人施用抑制有效量的式(I)化合物。
應(yīng)可理解感染了逆病毒如HTIV-III的病人需要HIV蛋白酶抑制劑，抑制劑如式(I)化合物。
這里所用的術(shù)語“病人”是指有特定病毒感染的溫血?jiǎng)游锶绮溉閯?dòng)物，應(yīng)理解人類、小鼠和大鼠包括在術(shù)語“病人”的范圍。
給病人施用式(I)化合物可抑制病人體內(nèi)HIV蛋白酶。因此通過用式(I)化合物治療，病人的逆病毒如HTLV-III可得到抑制或壓制。
對病人需要用抑制HIV蛋白酶的制劑，如式(I)化合物，進(jìn)行治療，這里病人是指特定的病毒感染的病人，其中HIV蛋白酶一個(gè)是與疾病的發(fā)展有關(guān)的因素。
在標(biāo)準(zhǔn)臨床和試驗(yàn)室的試驗(yàn)和方法的基礎(chǔ)上，一個(gè)主治診斷醫(yī)生，即本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員，可以很容易地確定需要采用抑制HIV蛋白酶的制劑，如式(I)化合物治療的病人。
式(I)化合物的“抑制有效量”是指給病人施用單一或復(fù)合劑量時(shí)，可以對HIV蛋白酶有抑制作用的式(I)化合物的量。
這里所用的術(shù)語“有效量”是指式(I)化合物的抗病毒或抑制有效量。主治診斷醫(yī)生，即本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員，可以利用已知的技術(shù)和通過觀察類似情況下的試驗(yàn)結(jié)果，很容易地確定有效量。在決定有效量或劑量時(shí)，主治醫(yī)生需要考慮一系列的因素，這些因素包括但不限于哺乳動(dòng)物的種類；其體形、年齡和綜合健康狀況；涉及的特定的病毒感染；病毒感染的程度或深度或嚴(yán)重程度；具體病人的反應(yīng)；施用的特定化合物；施用的模式；施用制劑的生物利用特征；選擇的劑量范圍；協(xié)同使用的醫(yī)療措施；和其它相關(guān)的條件。
式(I)化合物的有效量是在約0.1mg/kg體重/天(mg/kg體重/天)至約100mg/kg體重/天，優(yōu)選是在約0.5-約10mg/kg體重/天的范圍內(nèi)。
為了有效的治療病毒感染的病人，可以采用任何能生物利用有效量化合物的施用形式或模式，包括口服和非腸道途徑。例如式(I)化合物可以口服、皮下、肌內(nèi)、靜脈、經(jīng)皮的，鼻內(nèi)，直腸等方式施用?？诜莾?yōu)選的。制劑領(lǐng)域的熟練技術(shù)人員根據(jù)所選擇的化合物的具體的特點(diǎn)、欲治療的病毒感染，感染的程度和其它有關(guān)的因素，可以很容易地選擇正確的施用方式和模式。
式(I)化合物可以單獨(dú)施用，或以與可藥用載體或賦形劑混合的藥物組合物的形式施用，其比例和性質(zhì)是根據(jù)所選擇化合物的溶解度和化學(xué)性質(zhì)、所選擇的施用途徑和標(biāo)準(zhǔn)藥物學(xué)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)決定的。自身有效的本發(fā)明化合物，可以制成其可藥用鹽形式并以這種形式施用，這是為了獲得穩(wěn)定性、結(jié)晶的簡便性，增加溶解度等。
另一方面，本發(fā)明提供了含式(I)化合物與一種或多種載體混合或結(jié)合的組合物。這些組合物可用作，例如試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)、進(jìn)行大宗運(yùn)輸?shù)暮啽惴椒ɑ蛩幬锝M合物。式(I)化合物的試驗(yàn)量是指根據(jù)本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員所熟悉的和贊賞的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法和步驟很容易測量的數(shù)量。式(I)化合物的可檢測量通常是在約0.001％-約75％組合物重量范圍內(nèi)。惰性載體可為不降低式(I)化合物作用或另外不與式(I)化合物發(fā)生共價(jià)反應(yīng)的任何物質(zhì)。合適的惰性載體的實(shí)例是水；含水緩沖液如在高壓液相色譜(HPLC)分析中常用的緩沖液；有機(jī)溶劑如乙腈、乙酸乙酯、己烷等；和可藥用載體或賦形劑。
更具體的，本發(fā)明提供了含有治療有效量式(I)化合物和混有或結(jié)合有一種或多種可藥用載體或賦形劑的藥物組合物。
可根據(jù)藥物領(lǐng)域所熟悉的方式制備藥物組合物，載體或賦形劑是可以作為活性物質(zhì)的載體或介質(zhì)使用固體、半固體或液體物質(zhì)。合適的載體或賦形劑在本領(lǐng)域是熟知的。藥物組合物可以適合于口服或非腸道施用，并且可以片劑、膠囊、栓劑、溶液、懸浮液等形式給病人施用。
例如，本發(fā)明化合物可以與惰性稀釋劑或可食用載體一起口服施用，它們可被包含在膠囊中或壓制成片劑?？诜委熓┯脮r(shí)，化合物可與賦形劑結(jié)合并以片劑、錠劑、膠囊、甘香酒劑、懸浮液、糖漿、糯米紙囊劑、可嚼樹膠等形式使用。這些制劑應(yīng)含有至少4％的本發(fā)明化合物，即活性成分，但含量也可根據(jù)特定的形式而變化并且可在4％-約70％重量單位之間很方便地變化。組合物中本發(fā)明化合物的量是要能夠得到一合適的劑量，制備的優(yōu)選本發(fā)明組合物和制劑是使得口服劑量單位中含5.0-300mg本發(fā)明化合物。
在片劑、丸劑、膠囊、錠劑等中也可含有一種或多種下述輔劑結(jié)合劑如微晶纖維素、黃著膠或明膠；賦形劑如淀粉或乳糖；崩解劑如藻酸、淀粉羥乙酸鈉(Primogel)、玉米淀粉等；潤滑劑如硬脂酸鎂或硬脂酸類潤滑粘結(jié)劑；助流劑如膠體二氧化硅；和可加入甜味劑如蔗糖或糖精或調(diào)味劑如薄荷、水楊酸甲酯或橙味調(diào)味劑。當(dāng)劑量單位形式是膠囊時(shí)，除了上述類型的物質(zhì)外，還可含有液體載體如聚乙二醇或脂肪油。在其它的單位劑量形式中可以含有可調(diào)整單位劑量的物理形式的各種物質(zhì)，例如涂層。因此可用糖、紫膠片或其它腸衣涂布劑給片劑或丸劑涂層。除了本發(fā)明化合物外，糖漿中可含有蔗糖作為甜味劑和含有特定的防腐劑、染料和著色劑以及調(diào)味劑。制備上述各種組合物時(shí)所采用的物質(zhì)在其用量上應(yīng)當(dāng)是藥學(xué)純的和無毒的。
非腸道施用治療時(shí)，可將本發(fā)明化合物加入溶液或懸浮液中。這些制劑可以含有至少0.1％的本發(fā)明化合物，但其含量可在0.1％和約50％重量之間變化。在這樣的組合物中的本發(fā)明化合物的量應(yīng)使得能夠得到一合適的劑量。本發(fā)明的優(yōu)選的組合物和制劑是指非腸道施用的劑量單位中含5.0-100mg的本發(fā)明化合物。
溶液或懸浮液也可以含有一種或多種下述輔劑無菌稀釋劑如注射用水、鹽水溶液、固定油類、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑如芐基醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯類；抗氧化劑如抗壞血酸或亞硫酸鈉；螯合劑如乙二胺四乙酸；緩沖液如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；以及調(diào)節(jié)等滲的試劑如氯化鈉或葡萄糖。非腸道施用的制劑可以裝入安瓿、一次性使用注射器或用玻璃或塑料制成的復(fù)合劑量管瓶中。
本發(fā)明也涉及HIV蛋白酶-抑制化合物與一種或多種可治療AIDS的制劑的聯(lián)合使用，如與適合于治療HIV1和HIV2感染，例如AZT，的已知抗病毒制劑聯(lián)合使用，與或不與PNP酶抑制劑聯(lián)合使用，或在聯(lián)合療法中與DDI和PNP酶使用。
利用下述技術(shù)測量本發(fā)明化合物的HIV-蛋白酶抑制作用。
逆病毒酶的制備和蛋白酶抑制作用的試驗(yàn)A)制備逆病毒酶為了制備重組體蛋白酶，根據(jù)C.Gu ēnet等出版的著作，即在European Journal of Pharmacology Molecular PharmacologySection，172，443-451，(1989)中所述的方法，通過E.Coli表達(dá)HIV蛋白酶。根據(jù)Darke，P.L.et al.，J.Biol.Chem.，256，2307(1989)所述的方法部分純化重組體酶。B)酶試驗(yàn)部分純化的蛋白酶的特定活性是在10-100單位/100mg蛋白質(zhì)范圍內(nèi)(一個(gè)單位定義為在試驗(yàn)條件下于37℃每分鐘解離1mol H-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-NH2所需的酶的量)。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HIV-1抗八肽H-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-NH2，該反應(yīng)是在0.1ml含0.05M乙酸鈉，0.5M氯化鈉，1mM EDTA，0.5％BSA，5％乙二醇，10％甘油的緩沖液中進(jìn)行的，緩沖液的PH為5.5。在37℃孵育1小時(shí)后使反應(yīng)停止，這是通過高氯酸猝滅實(shí)現(xiàn)的(最終濃度0.4M)，并且離心5分鐘(Eppendorf)。在C18柱上通過HPLC(Ultrasphere ODS，4.6×150mm，5mm，Beckman)，通過對相應(yīng)的峰面積的積分來分析反應(yīng)得到的產(chǎn)物H-Ser-Gln-Asn-Tyr-OH(P1)和H-Pro-Ile-Val-NH2(P2)。采用乙腈梯度洗脫(5％腈，PH3.0-60％乙腈，PH3.0，在10分鐘內(nèi)以1ml/分鐘的流速進(jìn)行；保留時(shí)間P1＝6分鐘，P2＝7分鐘和S＝8.3分鐘)。在狄氏繪標(biāo)上測量Ki值(1/v對[I]，參考Segal，I.H.，EnzymeKinetics，109(1975)。[9(S)，12(S)]-α，α-二氟-9-(1-甲基乙基)-β，4，7，10-四氧代-N-[2-甲基-1-[(苯基甲氧基)甲基]丙基]-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-14，16，17-三烯-12-丙酰胺的Ki值＝10-30nM。
根據(jù)上述的技術(shù)以及利用其它已知的技術(shù)，以及通過與已知的用于治療上述疾病的化合物的比較，我們確信已提供了足夠的材料使得本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠?qū)嵤┍景l(fā)明。
對于具有特定一般用途的任何組結(jié)構(gòu)相關(guān)的化合物，在最終應(yīng)用上某些組別和構(gòu)型對式(I)化合物是優(yōu)選的。
其中X是1的式(I)化合物通常是優(yōu)選的。其中P3是下述基團(tuán)的化合物通常是優(yōu)選的-CH2CO2H，-CH2CONH2，-CH2(CH2)3NH2，-CH2CH2CO2H，-CH2CH2CONH2，芐基的基團(tuán)和基團(tuán) 其中P2是-CH(CH3)2，環(huán)戊基和苯基的式(I)化合物通常是優(yōu)選的。P3所連接環(huán)結(jié)構(gòu)的碳原子的構(gòu)型是D構(gòu)型的式(I)化合物通常是優(yōu)選的。其中R1是氫原子和R2是芐基，2-吡啶基，3-吡啶基和下式基團(tuán)的式(I)化合物通常是優(yōu)選的 本發(fā)明化合物的實(shí)例如下1)[9(S)，12(S)]-α，α-二氟-9-(1-甲基乙基)-β，4，7，10-四氧代-N-(苯基甲基)-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-14，16，17-三烯-12-丙酰胺；2)[9(S)，12(S)]-α，α-二氟-9-(1-甲基乙基)-β，4，7，10-四氧代-N-[2-甲基-1-[(苯基甲氧基)甲基]丙基]-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-14，16，17-三烯-12-丙酰胺；3)N-芐基-3-(6-芐基-9-異丙基-4，7，10-三氧代-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-1(17)，14(18)，15-三烯-12-基)-2，2-二氟-3-氧代丙酰胺；4)3-[12-(芐基氨基甲?；?二氟-乙?；?-9-異丙基-4，7，10-三氧代-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-1(17)，14(18)，15-三烯-6-基]丙酸；5)3-[6-(4-氨基-丁基)-9-異丙基-4，7，10-三氧代-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-1(17)，14(18)，15-三烯-12-基]-N-芐基-2，2-二氟-3-氧代丙酰胺；6)N-芐基-3-[6-(2-氨基甲?；一?-9-異丙基-4，7，10-三氧代-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-1(17)，14(18)，15-三烯-12-基]-2，2-二氟-3-氧代-丙酰胺；7)[12-(芐基氨基甲?；?二氟-乙?；?-9-異丙基-4，7，10-三氧代-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-1(17)，14(18)，15-三烯-6-基]-乙酸；8)N-芐基-3-(6-氨基甲?；谆?9-異丙基-4，7，10-三氧代-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-1(17)，14(18)，15-三烯-12-基)-2，2-二氟-3-氧代-丙酰胺；9)N-芐基-2，2-二氟-3-(9-異丙基-4，7，10-三氧代-6-吡啶-3-基甲基-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-1(17)，14(18)，15-三烯-12-基)-3-氧代-丙酰胺；以及它們的立體異構(gòu)體，水合物和可藥用鹽。
權(quán)利要求
1.通式I化合物和其立體異構(gòu)體，水合物和可藥用鹽 其中P2表示C1-6烷基，環(huán)戊基，羥基C1-6烷基，苯基，芐基或3-四氫呋喃基；P3表示選自氫，-CH3，-CH(CH3)2，-CH2CH(CH3)2，-CH(CH3)(CH2CH3)，-CH2SH，-CH2CH2SCH3，CH2OH，-CH(CH3)OH，-CH2(CH2)3NH2，CH2(CH2)2NHC(＝NH)NH2，-CH2CO2H，-CH2CH2CO2H，-CH2CONH2，-CH2CH2CONH2，芐基的基團(tuán)； R1表示氫，C1-15烷基，羥基C1-15烷基，CH([(CH2)d-O-CH2]f-R7)2，CH2Si(CH3)2(R8)，PDL，-(C1-6亞烷基)OR4，CH(Y)(Z)， 其中PDL是-(CH2)a-2-，3-或4-吡啶基，Y表示羥基C1-15烷基，C1- 6烷基或(CH2)e-C6H4-(V)e’；Z表示(CH2)d-O-CHO，C1-6亞烷基-O-(CH2)d-(O-CH2-CH2)e-O-C1-6烷基，CHO，CO2R4，CONHR4，(CH2)d-(CH2)d’-R5，(CH2)e-OR4或下式基團(tuán) 其中V表示OR4或羥基C1-6亞烷基；條件是當(dāng)R5是哌嗪基，取代哌嗪基，哌啶基或嗎啉基時(shí)，d’＝2；R2的定義同R1，條件是當(dāng)R1是氫原子時(shí)，R2不是氫原子，或者R1和R2與它們所連的氮原子一起形成選自下述的基團(tuán) 其中R3表示CH2OR4，C(O)NHR4或CHO；R4表示氫原子，C1-6烷基，苯基或芐基；R5表示哌嗪基，取代哌嗪基，哌啶基，嗎啉基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基或苯基，其中取代的哌嗪基是指在它的一個(gè)氮原子上被CHO，C(O)NHR4，C1-4烷基或CO2R4取代的哌嗪基；R6表示(H，OH)或＝OR7表示嘧啶基，吡啶基，吡嗪基或丙基；R8表示C1-6鏈烯基，C1-6烷氧基，C1-6亞烷基，羥基C1-6烷基，C1-6烷基或OH；a是0，1，2或3；b是0或1；d和d’各自獨(dú)立地是1或2；e和e’各自獨(dú)立地是0，1或2；f是0或1；和x是1，2，3或4。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中X是1。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中P2是-CH(CH3)2。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中R1是氫和R2芐基。
5.權(quán)利要求3的化合物，其中R1是氫和R2是2-(3-甲基-1-苯基甲氧基)丁基。
6.權(quán)利要求4的化合物，其中P3是氫。
7.權(quán)利要求4的化合物，其中P3是CH2CO2H。
8.權(quán)利要求4的化合物，其中P3是CH2CONH2。
9.權(quán)利要求4的化合物，其中P3是CH2CH2CO2H。
10.權(quán)利要求4的化合物，其中P3是CH2CH2CONH2。
11.權(quán)利要求4的化合物，其中P3是芐基。
12.權(quán)利要求4的化合物，其中P3是下式基團(tuán)
13.權(quán)利要求4的化合物，其中P3是CH2(CH2)3NH2。
14.權(quán)利要求4的化合物，其中P3所連接的大環(huán)上的碳原子是D構(gòu)型的。
15.權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是[9(S)，12(S)]-α，α-二氟-9-(1-甲基乙基)-β，4，7，10-四氧代-N-(苯基甲基)-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-14，16，17-三烯-12-丙酰胺。
16.權(quán)利要求1的化合物，其中的化合物是[9(S)，12(S)]-α，α-二氟-9-(1-甲基乙基)-β，4，7，10-四氧代-N-[2-甲基-1-[(苯基甲氧基)甲基]丙基]-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-14，16，17-三烯-12-丙酰胺。
17.治療病毒感染病人的方法，該方法包括給所述的病人施用抗病毒有效量的權(quán)利要求1化合物。
18.控制病人體內(nèi)病人病毒感染的方法，該方法包括給所述的病人施用抗病毒有效量的權(quán)利要求1化合物。
19.抑制病人體內(nèi)HIV蛋白酶的方法，該方法包括給所述的病人施用抑制有效量的權(quán)利要求1化合物。
20.權(quán)利要求17-19任意一項(xiàng)所述的方法，其中的化合物是[9(S)，12(S)]-α，α-二氟-9-(1-甲基乙基)-β，4，7，10-四氧代-N-(苯基甲基)-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-14，16，17-三烯-12-丙酰胺。
21.權(quán)利要求17-19任意一項(xiàng)所述的方法，其中的化合物是[9(S)，12(S)]-α，α-二氟-9-(1-甲基乙基)-β，4，7，10-四氧代-N-[2-甲基-1-[(苯基甲氧基)甲基]丙基]-2-氧雜-5，8，11-三氮雜雙環(huán)[12.2.2]十八碳-14，16，17-三烯-12-丙酰胺。
全文摘要
本發(fā)明提供了用作抗病毒劑的新的二氟斯它酮衍生物，更具體的，這些新的化合物可以作為病毒復(fù)制所必須的，逆病毒蛋白酶的抑制劑，逆病毒蛋白酶如HIV-1和HIV-2病毒蛋白酶，從而用于治療人類免疫缺乏病毒(HIV)的感染和用于治療后期的病狀如可被HIV病毒感染的哺乳動(dòng)物的獲得性免疫缺乏綜合癥(AIDS)。
文檔編號A61P31/12GK1142830SQ94194939
公開日1997年2月12日 申請日期1994年11月28日 優(yōu)先權(quán)日1994年2月4日
發(fā)明者R·A·法爾, B·L·波德勞加爾 申請人:默里爾藥物公司