專利名稱：蔗糖酯-c的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療病毒和炎癥疾病以及減少皮膚和粘膜表面炎癥所致疼痛的局部治療制劑和方法。本發(fā)明的制劑實(shí)例是含20到28個(gè)碳的脂肪醇例如正-二十二烷醇的乳劑。
發(fā)明的背景絕大多數(shù)抗病毒治療化合物在感染的靶細(xì)胞中有阻礙各種專一性病毒基因復(fù)制的機(jī)制。這些方法有缺點(diǎn)，包括對(duì)宿主細(xì)胞的毒性、誘導(dǎo)產(chǎn)生抗藥性的病毒-亞-菌株、對(duì)宿主細(xì)胞有誘變劑和/或致畸形藥的潛在行為。因此，搜尋新的能提供有效治療的且無(wú)這些對(duì)宿主有害結(jié)果的抗病毒化合物是首要重要的。的確，我們似乎已進(jìn)入了一個(gè)迄今為止尚無(wú)法分清轉(zhuǎn)錄病毒族中的病毒的新時(shí)代。
能夠產(chǎn)生抗病毒活性而無(wú)潛在的對(duì)感染的宿主的傷害性的化合物已被確定，且表現(xiàn)出一些有相當(dāng)前途的結(jié)果。例如在七十年代末，Snipes和其同事(W.Snipes，S.Person，G.Keller，W.Taylor，A.Keith；Antimicrob.Agents Chemother.II，98-104(1977)；J.Sands，D.Auperin，W.Snipes；Antimicrob.Agents Chemother.15，67-73(1979))報(bào)導(dǎo)了一系列研究證明中等鏈長(zhǎng)度的飽和和不飽和醇均有這些活性。最佳抗病毒活性是在含10-12個(gè)碳長(zhǎng)度的飽和醇上觀察到的；在14-18碳長(zhǎng)度的醇上觀察到了弱一些的抗病毒活性，更高鏈長(zhǎng)度的醇未被測(cè)試。當(dāng)C-10和C-12的醇表現(xiàn)出顯著的抗病毒活性的同時(shí)，這些化合物同時(shí)也展示出了細(xì)胞毒性的和溶血的作用。在不飽和醇和丙三醇單甘油酯上也觀察到了同樣的結(jié)果，含有三個(gè)雙鍵的C-18醇表現(xiàn)出峰值活性。隨后，Clark和其同事(L.L.Clark，炎癥皮膚疾病的治療，美國(guó)專利號(hào)4,670,471(1987)；P.T.McBride，L.L.Clark，G.G.Krueger；J.Invest.Dermatol.89，380-383(1987))斷定30個(gè)碳長(zhǎng)的飽和醇，三十烷醇，作為一種抗皰疹藥劑是有活性的。然而，由于組織培養(yǎng)研究證明三十烷醇缺乏直接抗病毒活性。可以推測(cè)在動(dòng)物研究中觀察到的明顯的抗皰疹活性可能反映了該化合物的推測(cè)性的免疫調(diào)節(jié)作用。
早在1974年，報(bào)導(dǎo)了正-二十二烷醇具有全身治療價(jià)值。例如Debat.美國(guó)專利號(hào)4,186,211曾報(bào)導(dǎo)1-二十二烷醇在口服時(shí)對(duì)治療前列腺肥大癥有效。類似的工作在十年后由Yamamoto等報(bào)導(dǎo)。例如美國(guó)專利號(hào)4,624,966，由于錯(cuò)誤地化學(xué)命名，將正-二十二烷醇稱為聚戊二烯基化合物并描述了在治療中口服或非腸道服用正-二十二烷醇。據(jù)本發(fā)明人所知，無(wú)論是Debat還是Yamamoto等或其他工作者們，都沒有對(duì)在局部治療中正-二十二烷醇可能是一種活性劑的可能性提出任何建議甚至是一點(diǎn)建議。
在檢查了Snipes和其同事的結(jié)果及意識(shí)到長(zhǎng)于18個(gè)碳的化合物并未被檢查確定它們是否具有局部抗病毒或炎癥活性后，我們推斷，兩倍于C-10或C-12長(zhǎng)的分子(該類C-10或C-12分子表現(xiàn)出峰值抗病毒活性時(shí)，同時(shí)也具有細(xì)胞毒性和溶血活性)可能會(huì)保留該類C-10或C-12分子對(duì)病毒的生物活性，但(也許是因?yàn)榉肿拥恼郫B)缺少短鏈分子的溶血和細(xì)胞毒性性質(zhì)。我們實(shí)驗(yàn)室中測(cè)定正-二十二烷醇的抗病毒性質(zhì)的研究是有利的(Katz，D.H.，美國(guó)專利號(hào)4,874,794)。
然而，制備穩(wěn)定的有效的含有正-二十二烷醇的局部制劑提出了一種挑戰(zhàn)。盡管某些傳統(tǒng)劑型，如，乳劑和軟膏對(duì)于初步估價(jià)在開始是足夠的，但我們發(fā)現(xiàn)某些賦形劑對(duì)正-二十二烷醇的活性是有害的。因此，顯然需要可長(zhǎng)期穩(wěn)定的，生理上可接受的并且適于對(duì)皮膚和膜局部使用的重現(xiàn)的有效的正-二十二烷醇制劑。制備穩(wěn)定的有效的含正-二十二烷醇的組合物，存在著一個(gè)意想不到的困難的挑戰(zhàn)。對(duì)絕大多數(shù)藥品來(lái)說(shuō)完全適于制備載體乳劑的傳統(tǒng)乳劑制劑并不令人滿意。盡管增強(qiáng)滲透性的化合物被認(rèn)為是比較理想的，但滲透性的增強(qiáng)并非是一個(gè)特別的問題。許多滲透增強(qiáng)劑是可以得到的，但并無(wú)理由認(rèn)為這些物質(zhì)與滲透增強(qiáng)作用相對(duì)應(yīng)，當(dāng)然也沒有理由預(yù)期用這些物質(zhì)中的任何一種能得到一種乳劑，該乳劑會(huì)產(chǎn)生增強(qiáng)的藥效，并且在存儲(chǔ)和處理期間產(chǎn)品所遇到的所有溫度下以及對(duì)于正常存儲(chǔ)和處理所預(yù)期的所有時(shí)間段，該乳劑都是穩(wěn)定的，此外，通過相變和/或暴露于比乳劑水性組份的冰點(diǎn)低且使本發(fā)明的高疏水長(zhǎng)鏈醇保持藥學(xué)活性的溫度下，該乳劑也是穩(wěn)定的。例如，Rajadhyaksha報(bào)告的Azone是一個(gè)極好的滲透增強(qiáng)劑，但它并未作為乳劑制劑中的穩(wěn)定組份而為人所知。椰子脂肪酸的蔗糖酯已被用作制劑的滲透增強(qiáng)劑，Cheng等人的美國(guó)專利4,865,848和其它專利。然而，Cheng等并未認(rèn)為這些物質(zhì)會(huì)導(dǎo)致任何乳劑的穩(wěn)定化作用，也無(wú)任何理由從Cheng等人的專利推測(cè)出這種穩(wěn)定化作用。有關(guān)這些化合物的文獻(xiàn)未暗示出這些物質(zhì)可以特別有效地穩(wěn)定含C-20至C-28脂肪醇的乳劑。本發(fā)明是專為解決這些問題的。本發(fā)明尤其是為得到一種用于治療的有效的，穩(wěn)定的，生理上可接受的，適于局部應(yīng)用的C-20至C-28脂肪醇，例如正-二十二烷醇乳劑。
通過試驗(yàn)測(cè)試了各種制劑組合物的穩(wěn)定性，并提供了一種乳劑，其中，長(zhǎng)鏈醇在局部應(yīng)用的乳劑中具有很高的生理活性。有些制劑穩(wěn)定性差而有些制劑生理活性差。發(fā)現(xiàn)只有本發(fā)明的制劑在穩(wěn)定性和活性上都是令人滿意的。
一個(gè)重要的結(jié)果完全令人吃驚-即它能立即減輕并且有時(shí)完全消除皮膚及粘膜炎癥所帶來(lái)的疼痛。
發(fā)明概述本發(fā)明包括一種用于消除表皮和膜的炎癥所引起的疼痛的治療乳劑(cream)，其中主要的生理活性治療組分是含有20到28個(gè)碳原子的長(zhǎng)鏈脂肪醇，例如正-二十烷醇，正-二十一烷醇，正-二十二烷醇，正-二十三烷醇，正-二十四烷醇，正-二十五烷醇，正-二十六烷醇，正-二十七烷醇，正-二十八烷醇或它們的混合物，正-二十二烷醇是這個(gè)直鏈飽和醇族中最易得到的，它在許多實(shí)驗(yàn)中是一個(gè)實(shí)例化合物。
本發(fā)明還包括用蔗糖及等同物糖基酯制備治療乳劑，已發(fā)現(xiàn)所述蔗糖和糖基酯具有獨(dú)特的穩(wěn)定乳劑的能力，這些乳劑含有至少一種含20到28個(gè)碳原子的長(zhǎng)鏈脂肪醇，例如正-二十烷醇，正-二十一烷醇，正-二十二烷醇，正-二十三烷醇，正-二十四烷醇，正-二十五烷醇，正-二十六烷醇，正-二十七烷醇，和正-二十八烷醇或它們的混合物，正-二十二烷醇本身或其與其它該類醇的混合物被作為實(shí)例。
本發(fā)明包括局部應(yīng)用的乳劑制劑，該制劑適用于治療動(dòng)物皮膚或膜的由病毒引發(fā)的和炎癥的疾病，也包括對(duì)人類的治療。乳劑的基本成分是至少一種含有20到28個(gè)碳原子的長(zhǎng)鏈脂肪醇(例如正-二十烷醇，正-二十一烷醇，正-二十二烷醇，正-二十三烷醇，正-二十四烷醇，正-二十五烷醇，正-二十六烷醇，正-二十七烷醇，和正-二十八烷醇，或它們的混合物，正-二十二烷醇本身或其與其它該類醇的混合物被作為實(shí)例)，生理活性組分，水，油，糖和脂肪酸的酯(該酯是生理惰性的或能為生物體所代謝)，和能幫助正-二十二烷醇滲透到皮膚或膜的感染區(qū)域的潤(rùn)膚劑。如所指出的，比正-二十二烷醇不易得到得多的和昂貴得多的含有20到28個(gè)碳鏈長(zhǎng)的脂肪醇的等同物，可以一起使用或代替正-二十二烷醇。糖基酯包括糖的部分和脂肪酸酯部分，糖部分的分子量大于約150，優(yōu)選大于250，脂肪酸酯部分的分子量大于約150或更高，優(yōu)選大于250；酯的分子量大約為400或更高。所用的術(shù)語(yǔ)“糖”是甜的或甜味的碳水化合物，它們是高級(jí)多元醇的酮或醛的衍生物，既包括單糖化合物也包括二糖化合物，優(yōu)選二糖基酯。高分子量的多元醇被取代可能會(huì)得到較滿意的結(jié)果，但遠(yuǎn)不是最佳結(jié)果，就此程度而言，高分子量多元醇與更傳統(tǒng)的糖是等同物。這種酯化的糖基表面活性劑可以在一般的化學(xué)文獻(xiàn)中及在各種目錄中找到，例如McCutcheno′s directories，卷1-“乳化劑和洗滌劑”，和卷2-“功能性物質(zhì)”，(McCutcheno′s Division，The Manufacturing ConfectionerPublishing Co.，Glen Rock，U.S.A.1993)。蔗糖脂肪酸酯是優(yōu)選的，并用于此后所示的實(shí)施例中。
一般最佳乳劑制劑按重量百分比包括正-二十二烷醇*5-25％或更多，雖然更高的量比低量并不更有利，最好為大約10％±5％；蔗糖硬脂酸酯 0-15％，最好為大約3到10％(以重量計(jì))；蔗糖可可脂酸酯 0-15％，最好為大約3到10％；蔗糖二硬脂酸酯 0-15％，最好為大約3到10％；其條件為至少含有一種蔗糖酯或一種等同物糖基酯，該糖基酯占總組成的大約3％或更多，優(yōu)選大約為10％±5％；礦物油NF 3-5％，最好為大約8％±4％；丙二醇USP 2-10％，或功能相當(dāng)?shù)臐?rùn)膚劑(emollient)，最好為大約5％±2％；聚氧丙烯-15-十八烷基醚 0-5％，最好為大約2-3％；芐醇NF 0-5％，最好為大約2-3％；其條件為聚氧丙烯-15-十八烷基醚或芐醇或其功能等同物，以至少1％的含量存在，和水 40-70％，最好為大約45到65％；*或至少一種含20到28個(gè)碳原子的長(zhǎng)鏈脂肪醇，例如正-二十烷醇，正-二十一烷醇，正-二十二烷醇，正-二十三烷醇，正-二十四烷醇，正-二十五烷醇，正-二十六烷醇，正-二十七烷醇，和正-二十八烷醇或它們的混合物，正-二十二烷醇單獨(dú)使用或與這類醇混合使用作為實(shí)例。
本發(fā)明包括使用本發(fā)明的乳劑治療局部病毒感染的方法。在更一般的意義上，發(fā)明包括一般炎癥組織的局部治療。
附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1至圖3和圖6A，6B是涉及I型單純皰疹病毒(HSV-I)的實(shí)驗(yàn)，而圖4，5和圖7至9涉及II型單純皰疹病毒(HSV-II)。
圖1所示為制劑I(正-二十二烷醇10.0％；蔗糖硬脂酸酯11.0％；蔗糖可可脂酸酯(cocoate)5.0％；礦物油8.0％；丙二醇5.0％；2-乙基-1，3-己二醇2.7％和純水58.3％)，制劑II的三種不同制品(除5％蔗糖硬脂酸酯為蔗糖二硬脂酸酯代替，乙基己二醇為等當(dāng)量的聚氧丙烯-15-十八烷基醚所代替外其余與制劑I相同)和用于抑制HSV-I引起的對(duì)幾內(nèi)亞無(wú)毛豬皮膚損傷的制劑ZOVIRAX(無(wú)環(huán)鳥苷，Burroughs Wellcome Co.Research Triangle Park，NC；用于治療HSV感染目前所選擇的藥劑，它可抑制病毒DNA聚合酶的活性)的活性比較。
圖2所示為制劑I，制劑II，和制劑IA(正-二十二烷醇10.0％；蔗糖硬脂酸酯11.0％；蔗糖可可脂酸酯5.0％；礦物油8.0％；丙二醇5.0％；芐醇2.7％和純水58.3％)的活性比較。
圖3A示出制劑I對(duì)制劑III(正-二十二烷醇10.0％；蔗糖硬脂酸酯5.0％；礦物油8.0％；丙二醇5.0％；芐醇2.7％和純水58.3％)的活性比較。
圖3B描繪了對(duì)這些制劑作某些改變后的活性比較的數(shù)據(jù)。其中相關(guān)表面活性劑的濃度的變化是相對(duì)于制劑I而言的。已發(fā)現(xiàn)表面活性劑濃度的改變對(duì)藥物活性的程度具有明顯的有害影響。
圖4描述了表示制劑III對(duì)抑制HSV-2所引起的幾內(nèi)亞無(wú)毛豬的皮膚損傷的劑量應(yīng)答關(guān)系的數(shù)據(jù)。
圖5圖示了含有正-二十二烷醇的以蔗糖酯表面活性劑體系為基的乳劑(制劑III)也能抑制HSV-2所至幾內(nèi)亞無(wú)毛豬的皮膚損傷。
圖6A圖示描繪的數(shù)據(jù)證明在皰疹出現(xiàn)前施用以表面活性劑pluronicF-68配制的正-二十二烷醇懸浮液也能抑制HSV-I所至的水泡。懸浮液制劑不含有任何含有正-二十二烷醇乳劑的賦形劑，包括芐醇。
圖6B圖示描繪的數(shù)據(jù)證明在皰疹出現(xiàn)后施用正-二十二烷醇的非離子型表面活性劑pluronic F-68配制的懸浮液也能抑制HSV-I所至的水泡，懸浮液制劑不含有任何含有正-二十二烷醇乳劑的賦形劑，包括芐醇。
圖7至13描繪了闡明正-二十二烷醇藥理學(xué)的數(shù)據(jù)。
圖7描述了表示正-二十二烷醇抑制無(wú)環(huán)鳥苷抗性HSV-2的數(shù)據(jù)。Vero細(xì)胞在35mm的培養(yǎng)池中(每池6×105個(gè)細(xì)胞)在培養(yǎng)介質(zhì)本身中(＝無(wú))或在所述濃度的無(wú)環(huán)鳥苷，正-二十二烷醇-Pluronic F-68懸浮液或?qū)φ諔腋∫?只含pluronic F-68)存在下培養(yǎng)。培養(yǎng)物在24小時(shí)后接種150PFU的野生型HSV-2或接種經(jīng)過菌斑純化并在20mg/ml無(wú)環(huán)鳥苷中傳代44小時(shí)后的野生型HSV-2的無(wú)環(huán)鳥苷抗性實(shí)驗(yàn)室分離物，平皿經(jīng)過溫育，固定，染色和計(jì)菌斑數(shù)，所表示的數(shù)據(jù)是重復(fù)培養(yǎng)物的菌斑數(shù)均值。在以無(wú)環(huán)鳥苷或正-二十二烷醇處理的培養(yǎng)物中，相對(duì)于未處理的對(duì)照培養(yǎng)物中觀察到的抑制百分?jǐn)?shù)表示在括號(hào)中。
圖8描繪的數(shù)據(jù)表示正-二十二烷醇的局部乳劑制劑對(duì)幾內(nèi)亞豬的皮膚HSV的劑量應(yīng)答。將幾內(nèi)亞無(wú)毛豬的后背洗凈，用紋身器具刺穿皮膚來(lái)接種純化的HSV-2。在病毒接種2小時(shí)后，接種部位或不處理或以100μl含正-二十二烷醇的乳劑或?qū)φ召x形劑處理；該部位在病毒接種24，30，48，52和56小時(shí)后作類似處理。每個(gè)部位的水泡數(shù)量在指定的時(shí)間點(diǎn)測(cè)定。數(shù)據(jù)以由每次測(cè)量重復(fù)部位所產(chǎn)生的水泡數(shù)量的均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差來(lái)表示。括號(hào)中的數(shù)字描述在處理部位的水泡數(shù)與未處理部位相比較的抑制百分比。
圖9描述的數(shù)據(jù)表示在正-二十二烷醇處理過的Vero細(xì)胞表面HSV-2保留時(shí)間延長(zhǎng)。Vero細(xì)胞如圖7所述過程培養(yǎng)溫育過夜。然后將培養(yǎng)物冷至4℃，接種100PFU的HSV-2，在4℃溫育3小時(shí)。在零時(shí)刻，培養(yǎng)物以培養(yǎng)液清洗，接種新鮮的培養(yǎng)液(含有所指明的抑制劑)并在37℃溫育。在每個(gè)指定的時(shí)間段，將培養(yǎng)物以檸檬酸鹽緩沖液(pH2.5)清洗并重新接種新鮮的培養(yǎng)液(無(wú)抑制劑)，在總共44小時(shí)的溫育后，給培養(yǎng)物染色，計(jì)HSV-2所致菌斑數(shù)。數(shù)據(jù)以幾何均值和偏離每組三份重復(fù)的培養(yǎng)物所產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。
圖10描述的數(shù)據(jù)表明正-[14C]-二十二烷醇的放射性代謝物表現(xiàn)出磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺的性質(zhì)。一份(0.5ml)硅脂分級(jí)的甲醇洗脫液在氮?dú)獗Ｗo(hù)下蒸干，重新懸浮于20ml氯仿∶甲醇(3∶2，體積∶體積)中，在硅膠薄層色譜板上點(diǎn)板，在氯仿∶甲醇∶乙酸∶水(60∶50∶1∶4；體積∶體積∶體積∶體積)中展開；標(biāo)準(zhǔn)位置通過在碘蒸氣中染色而確定。在將塑料底的TLC板割成5mm條狀物后通過閃爍光譜法測(cè)定每個(gè)組分的每分鐘計(jì)數(shù)(cpm)。
圖11描述數(shù)據(jù)顯示Vero細(xì)胞對(duì)正-[14C]-二十二烷醇的代謝要比MDBK細(xì)胞多。Vero或MDBK細(xì)胞如說(shuō)明書中所述培養(yǎng)。將正-[14C]-二十二烷醇加至6mM
中，培養(yǎng)物在37℃/CO2中溫育72小時(shí)。提取出細(xì)胞，在TLC上用己烷∶乙醚∶乙酸(20∶30∶1，體積∶體積∶體積)作為展開劑進(jìn)行分析。在這個(gè)溶劑體系下，極性的磷脂保留在原點(diǎn)。正-二十二烷醇的遷移位置被指示出來(lái)重復(fù)的培養(yǎng)皿以相同的但無(wú)放射性標(biāo)記的懸浮液處理，在這些重復(fù)的培養(yǎng)皿中的細(xì)胞數(shù)通過使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器排除臺(tái)盼蘭染色的細(xì)胞而計(jì)數(shù)測(cè)定。
圖12描述數(shù)據(jù)表示正-二十二烷醇在體內(nèi)抑制Friend病毒所至的白血病和病毒血。給成年的BALB/C鼠靜脈內(nèi)注射75脾病灶形成單位的FV。處理組在病毒接種的同一天靜脈內(nèi)注射所指示劑量的正-二十二烷醇或只注射Pluronic賦形劑，并在隨后的三天每天注射一次。十天后，殺死每組中一半的動(dòng)物，檢查它們脾中的白血病病灶(A組)。剩余的鼠多保留十天后殺死以測(cè)定病毒血(B組)。病毒血是用X-C菌斑分析測(cè)量的。簡(jiǎn)單地說(shuō)，原纖維細(xì)胞培養(yǎng)物是通過用胰蛋白酶消化14天的BALB/C胚胎，然后在DMEM培養(yǎng)液加10％小牛血清中培養(yǎng)而得到的。72小時(shí)后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至16mm盤中(105/每孔)，用5μg/ml的溴化己二甲銨預(yù)處理，然后以75X-C菌斑形成單位的Friend病毒的測(cè)試血漿儲(chǔ)液或稀釋液感染。在溫育7天后，將培養(yǎng)物輻照，續(xù)加X-C細(xì)胞(3×105/每孔)。三天后，清洗培養(yǎng)物，染色，計(jì)多核巨細(xì)胞的菌斑數(shù)。所呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)是幾何平均值及每組中三個(gè)動(dòng)物所產(chǎn)生的脾病灶或X-C菌斑形成單位的標(biāo)準(zhǔn)偏差。
圖13描述數(shù)據(jù)顯示正-二十二烷醇體外抑制在PHA/IL-2-激發(fā)的人體外周血液?jiǎn)魏思?xì)胞的培養(yǎng)物中的HIV-1的復(fù)制。人體外周血液?jiǎn)魏思?xì)胞是在只含有1μg/mlPHA加上5單位/mlIL-2中或在含有100μg/mlPFA，所指示劑量的正-二十二烷醇/Pluronic，或含在高劑量的正-二十二烷醇/Pluronic中的F-68對(duì)照賦形劑的培養(yǎng)液中培養(yǎng)的。在溫育過夜后，培養(yǎng)物在1病毒粒子/每細(xì)胞的多重感染形式下接種HIV-1。在37℃中溫育24小時(shí)后，清洗培養(yǎng)物，用含有PHA和IL-2，但無(wú)抑制劑的新鮮培養(yǎng)液接種，四天后通過用于HIV-1的P24特異性的ELISA進(jìn)行病毒抗原定量分析來(lái)測(cè)定HIV-1的復(fù)制。
優(yōu)選具體實(shí)施方案的描述要制備乳劑，將正-二十二烷醇(≥98％純度；M.Michel and Co.，紐約，NY)，一種水不溶性化合物，在80℃與蔗糖可可脂酸酯，蔗糖硬脂酸酯，蔗糖二硬脂酸酯，礦物油，丙二醇和聚氧丙烯-15-十八烷基醚混合。加入水，混勻則制得乳劑。乳劑也可以通過將除正-二十二烷醇外的所有物質(zhì)加入水中形成乳劑基質(zhì)，然后將正-二十二烷醇混合到乳劑基質(zhì)中來(lái)制備。已發(fā)現(xiàn)下面的性質(zhì)一般來(lái)說(shuō)是優(yōu)化的。
*或至少一種含有20至28個(gè)碳原子的長(zhǎng)鏈脂肪醇，例如正-二十烷醇，正-二十一烷醇，正-二十二烷醇，正-二十三烷醇，正-二十四烷醇，正-二十五烷醇，正-二十六烷醇，正-二十七烷醇，和正-二十八烷醇或它們的混合物，正-二十二烷醇單獨(dú)使用或與其它這類醇形成混合物使用作為實(shí)例。
已發(fā)現(xiàn)含有2-乙基-1，3-己二醇而不是聚氧丙烯-十八烷基醚或芐醇和蔗糖酯的制劑也是有效的。但是已有人認(rèn)為將化合物2-乙基-1，3-己二醇包括在用于重復(fù)性局部使用的組合物中是不合適的。
第一種LIDAKOL(商標(biāo))正-二十二烷醇的顯示出希望的制劑描述于下面表1中表1正-二十二烷醇的制劑I組分重量百分比(％) 功能/基本原理正-二十二烷醇 10.0 活性藥物物質(zhì)蔗糖硬脂酸酯 11.0 乳化劑，潤(rùn)膚劑蔗糖可可脂酸酯5.0 乳化劑，潤(rùn)膚劑礦物油NF 8.0潤(rùn)膚劑丙二醇USP 5.0 共溶劑，致濕劑，皮膚感覺修飾劑，輔助防腐劑2-乙基-1，3-己二醇 2.7 共溶劑-輔助防腐劑純水qsad 58.3 賦形介質(zhì)這是第一個(gè)能足夠穩(wěn)定較長(zhǎng)一段時(shí)間的正-二十二烷醇乳劑，其間能對(duì)動(dòng)物進(jìn)行綜合系列的治療實(shí)驗(yàn)，并且其中的正-二十二烷醇在動(dòng)物皰疹模型中具有持續(xù)活性(圖1到3)，并被用于開始的I期人體臨床研究，該研究顯示該乳劑安全且尚好。然而，由于2-乙基-1，3-己二醇在美國(guó)以外的一些國(guó)家不適于重復(fù)使用，所以聚氧丙烯-15-十八烷基醚以等當(dāng)量(2.7％)取代了2-乙基-1，3-己二醇，5％的蔗糖硬脂酸酯被5％的蔗糖二硬脂酸酯代替。得到的正-二十二烷醇制劑II的組成描述于下面的表2中。
表2正-二十二烷醇制劑II組分 重量百分比％功能/基本原理正-二十二烷醇 10.0 活性藥物物質(zhì)蔗糖硬脂酸酯 6.0 乳化劑，潤(rùn)膚劑蔗糖可可脂酸酯 5.0 乳化劑，潤(rùn)膚劑蔗糖二硬脂酸酯 5.0 乳化劑，潤(rùn)膚劑礦物油NF8.0 潤(rùn)膚劑丙二醇USP 5.0 共溶劑，致濕劑，皮膚感聚氧丙烯-15-十八烷基 2.7 覺修飾劑，輔助防腐劑醚 共溶劑，輔助防腐劑純水qsad58.3賦形介質(zhì)這個(gè)改性的制劑II在取代乙基己二醇和對(duì)成藥提供了物理穩(wěn)定性上取得了成功，并且它在幾內(nèi)亞豬的皰疹動(dòng)物模型(見圖1和2)中表現(xiàn)良好。然而該制劑未通過美國(guó)藥典(USP)防腐有效性試驗(yàn)，因此被認(rèn)為不適用于人類臨床使用。這種微生物不穩(wěn)定性可以如下面所述通過以芐醇作為共溶賦形劑取代聚氧丙烯基-15-十八烷基醚而得到解決。
已發(fā)現(xiàn)使用所述表面活性劑類中的僅一種或兩種并且所使用的表面活性劑量大約在5％會(huì)得到穩(wěn)定的組成。僅使用一類或兩類表面活性劑并使用更低量的表面活性劑來(lái)制備穩(wěn)定的乳劑是一個(gè)意想不到的并且是我們實(shí)驗(yàn)室工作所期望的結(jié)果。過量的表面活性劑是不合適的，因?yàn)榇笥?％水平的過量表面活性劑有可能會(huì)增加刺激性。另外，含有過量非離子性表面活性劑的制劑經(jīng)常會(huì)有防腐有效性的問題(這有可能歸結(jié)于制劑II的微生物不穩(wěn)定性)。
使用親水性親油性平衡值(HLB)為9.0到13.0范圍內(nèi)的幾種表面活性劑混合物制備出各種的正-二十二烷醇乳劑并且對(duì)最優(yōu)乳化質(zhì)量，物理性質(zhì)，藥效和促進(jìn)了的物理穩(wěn)定性進(jìn)行篩選。雖然絕大多數(shù)的藥用乳化劑是以雙表面活性劑混合物為基質(zhì)來(lái)優(yōu)化HLB，本項(xiàng)目揭示出蔗糖硬脂酸酯本身在改進(jìn)了的正-二十二烷醇制劑中表現(xiàn)得跟任何一種表面活性劑混合物一樣好或更好。這個(gè)改進(jìn)了的正-二十二烷醇制劑(制劑III)的組成如下
表3正-二十二烷醇制劑III組分重量百分比(％)功能/基本原理正-二十二烷醇 10.0 活性藥物物質(zhì)蔗糖硬脂酸酯 5.0 乳化劑，潤(rùn)膚劑礦物油NF 8.0潤(rùn)膚劑丙二醇USP5.0 共溶劑，致濕劑，皮膚感覺修飾劑，輔助防腐劑芐醇NF 2.7 共溶劑，輔助防腐劑純水qsad69.3 賦形介質(zhì)與原制劑(制劑I)相比，對(duì)改進(jìn)的制劑III的改變包括以公知的具有很長(zhǎng)的安全使用歷史和重要地位的防腐劑和共溶劑-芐醇取代2-乙基-1，3-己二醇。芐醇的液體性質(zhì)和類似的功能使得對(duì)乙基己二醇的取代具有合理性和低冒險(xiǎn)性?？偟谋砻婊钚詣┑乃浇抵?％活性而不改變產(chǎn)品的藥學(xué)性質(zhì)，顯微鏡檢查對(duì)乳化質(zhì)量無(wú)負(fù)作用，促進(jìn)化試驗(yàn)中無(wú)物理穩(wěn)定性的喪失。蔗糖可可脂酸酯被發(fā)現(xiàn)不是必須的，并且可被刪去。
乳劑的制備可按原有的順序進(jìn)行，加熱后加入組分，或通過優(yōu)選的方法進(jìn)行，先將油溶性組分合并，分別加熱油溶性組分和水溶性組分，然后將熱的油溶性組分加到熱的水相中，同時(shí)劇烈混合。
表4總結(jié)了被評(píng)估的最重要的制劑。
表4制劑(％組成)組分 I II IA III 功能/基本原理正-二十二烷醇 10.010.0 10.010.0 活性藥物物質(zhì)蔗糖硬脂酸酯 11.06.011.05.0 乳化劑，潤(rùn)膚劑蔗糖可可脂酸酯 5.0 5.05.0 -- 乳化劑，潤(rùn)膚劑蔗糖二硬脂酸酯 -- 5.0-- -- 乳化劑，潤(rùn)膚劑礦物油NF 8.0 8.08.0 8.0 潤(rùn)膚劑丙二醇 5.0 5.05.0 5.0共溶劑，輔助防腐劑2-乙基-1，3-己二醇2.7 -- -- -- 共溶劑，輔助防腐劑聚氧丙烯基-15-十-- 2.7 -- --共溶劑，輔助防腐劑八烷基醚芐醇NF -- -- 2.7 2.7 共溶劑，防腐劑純水qsad58.358.358.369.3 賦形介質(zhì)改進(jìn)了的正-二十二烷醇制劑III通過了促進(jìn)物理穩(wěn)定性篩選(42℃儲(chǔ)存；冷凍-解凍循環(huán))，也通過了(美國(guó)藥典)USP防腐有效性試驗(yàn)。在幾內(nèi)亞豬皰疹模型中的藥效是在重復(fù)的場(chǎng)合下被證實(shí)的。
為控制穩(wěn)定性，正-二十二烷醇的乳劑制劑被保存在不同的條件下，于室溫(30℃)，在升高的溫度下(42℃)和在聚丙烯罐子中的冷凍-解凍條件下。冷凍-解凍樣品經(jīng)過48小時(shí)冷凍-解凍循環(huán)，即24小時(shí)在冷凍溫度(-15℃)和24小時(shí)在室溫的溫度下。貯存于各種相應(yīng)條件下的乳劑樣品，在各種時(shí)間點(diǎn)上目視檢查其物理穩(wěn)定性。在30℃下、12個(gè)月，42℃下、3個(gè)月或24個(gè)冷凍-解凍循環(huán)后所有樣品保持為米黃色乳劑。沒有脫水收縮或相分離的跡象，根據(jù)以上視覺檢查，含10％正-二十二烷醇的乳劑制劑III被認(rèn)為在任何所述存儲(chǔ)條件下都是物理穩(wěn)定的。
制劑III的精確的貨架壽命還未確定，但經(jīng)驗(yàn)告訴我們，這種貨架壽命足以滿足對(duì)含正-二十二烷醇的商品乳劑的要求。
為在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型中驗(yàn)證正-二十二烷醇乳劑對(duì)HSV所至傷害的有效性，及比較其與ZOVIRRAX的活性，給幾內(nèi)亞無(wú)毛豬接種1×106PFU的HSV-1，然后以含正-二十二烷醇的乳劑或?qū)φ杖閯┗騔OVIRAX軟膏處理。正-二十二烷醇乳劑具有所述構(gòu)成?？瞻兹閯┏龑⒄?二十二烷醇換成硬脂酸外，其余構(gòu)成與正-二十二烷醇乳劑相似。在病毒接種后的2小時(shí)或48小時(shí)開始治療，以水泡形成充膿的水泡作為標(biāo)準(zhǔn)，在指定的時(shí)間點(diǎn)對(duì)感染部位進(jìn)行評(píng)估。
圖1展示了制劑I和制劑II的三種不同制品以及ZOVIRAX的活性比較。正-二十二烷醇的制劑I和制劑II乳劑都顯示出了比ZOVIRAX軟膏大的抑制能力。
圖2展示了制劑I，制劑IA和制劑II的活性比較，所示三種制劑都被證明能有效地抑制HSV-1所至傷害。
圖3展示了制劑III對(duì)制劑I的活性比較，同時(shí)也描述了對(duì)這些制劑的某些改變，其中將制劑I中的表面活性劑濃度進(jìn)行了改變，發(fā)現(xiàn)表面活性劑濃度的改變會(huì)對(duì)藥物活性程度有相當(dāng)?shù)膿p害作用。制劑III顯示出對(duì)HSV-1所至傷害有強(qiáng)有力的抑制能力。
有復(fù)發(fā)口腔或生殖器HSV-I或II感染的患者志愿者在急性皰疹發(fā)作的各個(gè)不同階段以含正-二十二烷醇的局部用乳劑治療。當(dāng)在前驅(qū)癥狀階段開始治療時(shí)，正-二十二烷醇乳劑一般能抑制感染的進(jìn)一步擴(kuò)展(即阻止水泡形成)。當(dāng)水泡已經(jīng)形成后開始治療時(shí)，正-二十二烷醇乳劑能極大地縮短(例如縮小了50％或更多)治愈這種水泡傷害的時(shí)間(即完全的上皮再生成)。在迄今為止的100例以上被治療的口腔或生殖器患者案例中，觀察到大于95％的治療有效率。
因此，盡管絕大多數(shù)的正-二十二烷醇制劑是不穩(wěn)定的，特別的制劑優(yōu)選制劑III被發(fā)現(xiàn)既穩(wěn)定又有效。
對(duì)制劑中的10％正-二十二烷醇的選擇是通過對(duì)幾內(nèi)亞無(wú)毛豬的劑量-應(yīng)答研究來(lái)確定的。如前所述給幾內(nèi)亞無(wú)毛豬的背部接種HSV-2，接種部位以1％，5％，10％和20％的正-二十二烷醇制劑處理。不含正-二十二烷醇的賦形劑對(duì)照物也被納入研究。如圖4所描述，結(jié)果表明，在病毒接種72小時(shí)后，未治療處理的感染部位具有平均41個(gè)水泡。以20％和10％的含正-二十二烷醇乳劑治療，則水泡數(shù)分別被抑制了50％和60％。含1％和5％的正-二十二烷醇乳劑比10％的制劑的效果差。對(duì)照賦形劑沒有明顯的抑制效果。
在配制憎水和親水化合物的乳劑領(lǐng)域中的技術(shù)人員將會(huì)意識(shí)到可以進(jìn)行某些取代。例如，在稍調(diào)整一下比率的情況下，可使用甘油或另一種二醇化合物來(lái)替換丙二醇。其它以聚氧鏈烯為基礎(chǔ)的醚也可用來(lái)替換聚氧丙烯-15-十八烷基醚。基于糖基酯的相對(duì)比例可以有很大的變動(dòng)，只要存在的糖基酯的總量足夠使正-二十二烷醇穩(wěn)定。這個(gè)量被認(rèn)為是在大約5％到大約25％(重量百分比)之間，不過精確的最大值和最小值還未確定。
現(xiàn)行的最優(yōu)選的正-二十二烷醇制劑是制劑III，它含有10％正-二十二烷醇，5％蔗糖硬脂酸酯，8％礦物油NF，5％丙二醇USP，2.7％芐醇NF和69.3％的純化水。
由于有報(bào)導(dǎo)說(shuō)芐醇在一定環(huán)境下具有一些抗病毒活性(Farah，A.E.等，美國(guó)專利號(hào)4,200,655)，本發(fā)明的制劑被測(cè)試以確定芐醇在制劑中是否起抗病毒劑的作用。我們檢驗(yàn)了含芐醇和正-二十二烷醇的乳劑(10％正-二十二烷醇乳劑)和只含芐醇的(安慰劑)乳劑對(duì)幾內(nèi)亞無(wú)毛豬HSV-2所致皮膚損傷的作用，給幾內(nèi)亞豬的背部接種HSV-2，感染部位按圖5所示治療，在病毒接種48，56，72和78小時(shí)后對(duì)水泡形成進(jìn)行評(píng)估。在48小時(shí)，在未處理部位平均有44個(gè)水泡并保持相對(duì)恒定直至感染后72小時(shí)。在78小時(shí)，傷害的消失開始變得明顯，在96小時(shí)，接種后的水泡再無(wú)法見到。以正-二十二烷醇乳劑的治療在48～56小時(shí)抑制水泡數(shù)達(dá)到50～60％。在72～78小時(shí)，抑制水泡數(shù)稍有上升。以對(duì)照賦形劑治療時(shí)，在任何時(shí)間對(duì)水泡數(shù)目均無(wú)明顯效果。將未治療的和治療的部位切下并處理后作病毒培養(yǎng)。水泡的存在直接與感染病毒的存在相關(guān)，而與治療與否或分析時(shí)間(未示出)無(wú)關(guān)。因此，水泡數(shù)目在此中描述的研究中是疾病狀態(tài)的一個(gè)適當(dāng)?shù)闹甘緞?。另外，乳劑和安慰劑在II期引導(dǎo)研究中被測(cè)試，該研究包括68個(gè)患皰疹嘴唇的患者。雙盲試驗(yàn)結(jié)果表明，早期使用正-二十二烷醇乳劑使病程幾乎減半。治療組的平均發(fā)作期為3.4天，而安慰組的平均發(fā)作期為6.6天，上述結(jié)果表明，在制劑中存在正-二十二烷醇對(duì)有效的抗病毒作用是必須的。
正-二十二烷醇的抗病毒活性在正-二十二烷醇于非離子表面活性劑pluronic F-68中的懸浮劑制劑中也被證明，其中不含有10％正-二十二烷醇乳劑制劑中的任何賦形劑，包括芐醇在內(nèi)。圖6中總結(jié)的結(jié)果證明了重要的兩點(diǎn)。第一，如A組所示，正-二十二烷醇于pluronic F-68中的懸浮劑制劑在病毒感染2小時(shí)后使用也能抑制HSV-I所致水泡，正如在乳劑制劑中所觀察到的。因此，未治療部位在病毒感染48小時(shí)時(shí)具有平均74個(gè)水泡，但在用正-二十二烷醇/F-68治療的部位僅觀察到28個(gè)水泡(63％抑制率)。采用現(xiàn)行人感染HSV后所選擇的治療，即ZOVIRAX治療，也有水泡數(shù)目下降，但比用正-二十二烷醇時(shí)下降得少。連續(xù)以正-二十二烷醇治療也導(dǎo)致在72小時(shí)時(shí)更少的水泡。用于正-二十二烷醇制劑的賦形劑對(duì)照物在任何時(shí)間點(diǎn)上均無(wú)效。
從圖6得來(lái)的第二個(gè)要點(diǎn)是，正-二十二烷醇加速HSV-I所致疾病的治愈，即使是在水泡出現(xiàn)后使用(B組)。各個(gè)部位在48小時(shí)都顯示了幾乎相同數(shù)目的水泡，這是可以預(yù)見的，因?yàn)樗鼈冊(cè)谀菚r(shí)都未被治療。在未被治療部位水泡數(shù)目從48小時(shí)的平均73個(gè)降至72小時(shí)的43個(gè)。以ZOVIRAX治療在72小時(shí)時(shí)表現(xiàn)出中等程度的加速疾病消失(27個(gè)水泡，與未治療部位相比下降了37％)，這與其它相似設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)相一致。重要的是，應(yīng)用正-二十二烷醇/F-68顯著地使水泡消失，如示出的，與未治療組相比抑制了77％的水泡數(shù)。相同的結(jié)論在相同設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)中使用乳劑制劑而得到。這表明正-二十二烷醇不必預(yù)防性地使用來(lái)改變HSV所致疾病的過程。
三個(gè)安全性和耐受力研究是在健康的高加索男性和女性志愿者身上進(jìn)行的?？偣?8個(gè)健康志愿者暴露于藥物之下。安全研究表明，正-二十二烷醇10％乳劑制劑似乎沒有引起光毒性，但它仍是溫和的初級(jí)刺激劑，雖然發(fā)病率較低，它還是有可能引起過敏性敏化作用(78個(gè)暴露者中的一個(gè)經(jīng)歷了接觸性皮炎)。
二個(gè)臨床有效性研究已經(jīng)完成。研究A是對(duì)63個(gè)(男性和女性)復(fù)發(fā)性嘴唇皰疹患者的隨機(jī)、雙盲的、安慰劑作對(duì)照的2期研究。在A研究即嘴唇皰疹研究中，所有31個(gè)用10％正-二十二烷醇乳劑治療的患者完成了他們的治療。這31個(gè)患者中的2位在使用該乳劑后報(bào)告有灼燒或刺痛的感覺。在任意研究中均未顯示出在臨床實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)(血液化學(xué)，血液學(xué)和尿樣分析)中有臨床上顯著的變化。研究B是對(duì)44個(gè)女性復(fù)發(fā)性生殖器皰疹患者的隨機(jī)的、雙盲的、安慰性作對(duì)照的試驗(yàn)。在B研究即生殖器研究中，所有22個(gè)用10％正-二十二烷醇乳劑治療的患者完成了她們的治療且無(wú)與藥物相關(guān)的不利事件的報(bào)告。
研究A65個(gè)患者(年齡18～60歲)參與了研究A，32個(gè)患者開始隨機(jī)地接受10％正-二十二烷醇乳劑治療，而33個(gè)患者開始隨機(jī)地接受安慰劑乳劑。治療是患者開始的，若治療在前驅(qū)癥狀或紅斑階段開始，則定義治療開始為“早”，若治療在丘疹階段或更晚開始，則定義治療開始為“晚”。兩個(gè)患者被排除于分析之外。63個(gè)評(píng)估的患者中，有22個(gè)患者進(jìn)入研究的交叉期。另外有13個(gè)患者以同樣的研究藥物治療了多于一個(gè)案例(episode)。因此，總共分析了98個(gè)皰疹案例，其中，48個(gè)給以10％正-二十二烷醇乳劑治療，50個(gè)給以安慰劑乳劑處理。
根據(jù)表5中所列第一治療案例，交換治療和所有治療案例，總結(jié)了研究A的結(jié)果。
表5研究A復(fù)發(fā)性嘴唇皰疹案例治愈的時(shí)間(天)A部分第一案例的分析10％正-二十二烷醇 安慰劑均值標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)數(shù)目(n) 均值標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)數(shù)目(n)早期治療2.52.4(10)6.84.2 (4)晚期治療6.83.2(21)7.32.7 (29)所有治療5.43.6(31)7.32.8 (32)B部分交叉研究的分析10％正-二十二烷醇 安慰劑均值標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)數(shù)目(n) 均值標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)數(shù)目(n)早期治療2.72.2(7) 7.0 (1)晚期治療5.62.1(15)8.02.6 (21)所有治療4.72.5(22)8.02.5 (22)C部分研究中所有治療案例的分析10％正-二十二烷醇安慰劑均值標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)數(shù)目(n) 均值標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)數(shù)目(n)早期治療3.43.0 (13) 6.73.9 (7)晚期治療6.52.7 (35) 7.42.7 (43)所有治療5.73.1 (48) 7.32.9 (50)31個(gè)患者用10％正-二十二烷醇治療了他們的第一案例的嘴唇皰疹，32個(gè)患者用安慰劑(A部分)。正-二十二烷醇組中的10位患者和安慰組中的4位患者被劃分為早期治療。在早期治療的正-二十二烷醇組中平均治愈時(shí)間是2.5天，與其它治療方法相比治愈的平均時(shí)間降低了4.3～4.8天。這種差別具有極高的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＝0.0001)而有利于正-二十二烷醇。在晚期治療組中，正-二十二烷醇對(duì)第一案例的平均治愈時(shí)間降低了0.5天，這在統(tǒng)計(jì)學(xué)上是沒有意義的。
對(duì)進(jìn)入交叉研究的22名患者，在兩部分研究中都參與早期治療他們的損傷(7名在交叉期使用正-二十二烷醇，1名使用安慰劑)的人數(shù)太小，因而不具有統(tǒng)計(jì)分析的意義(B部分)。然而，有實(shí)在數(shù)量(15名在交換期使用正-二十二烷醇，和21名使用安慰劑)的患者進(jìn)行晚期治療他們的損傷，因此，使患者間在這方面的比較成為可能。對(duì)各種晚期治療的結(jié)果分析揭示了一個(gè)有利于正-二十二烷醇的顯著性差異(p＝0.03)。
一起評(píng)估來(lái)自研究A的總共98個(gè)治療案例的數(shù)據(jù)(使用相同藥物的單一案例，交叉案例和附加案例)揭示了統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義的(p＝0.02)總治愈時(shí)間的降低，即1.6天，它得自正-二十二烷醇治療(5.7天)對(duì)安慰劑處理(7.3天)的患者(C部分)。在總共20個(gè)分類為早期治療的案例中，局部使用的正-二十二烷醇降低了平均治愈時(shí)間3.3天(p＝0.05)。最后，當(dāng)以正-二十二烷醇進(jìn)行早期治療的效率與所有其他治療方法相比較時(shí)，在早期治療的正-二十二烷醇組的平均治愈時(shí)間(3.4天)與其它組中的6.5到7.4天的范圍有顯著的差異；該差異是對(duì)正-二十二烷醇有利的極有意義的(p＝0.0002)。在用正-二十二烷醇(10％)的晚期治療和用安慰劑處理的早期和晚期治療之間無(wú)顯著性差異。
如表5中總結(jié)的數(shù)據(jù)所證明的，以10％正-二十二烷醇乳劑的早期治療(在前兆或紅斑階段)與用其他治療所得結(jié)果相比能導(dǎo)致治愈時(shí)間的極大縮短。另外，始于損傷出現(xiàn)之后的晚期治療在研究的交叉部分用正-二十二烷醇治療的小組中，導(dǎo)致了統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義的治愈時(shí)間的降低，而在其他分析中則沒有。
研究B在第一臨床研究中，60名女性復(fù)發(fā)性生殖器皰疹的患者在無(wú)癥狀及在非前兆階段進(jìn)入研究。30名初始隨機(jī)地接受10％正-二十二烷醇乳劑，30名接受安慰乳劑，該試驗(yàn)的開始是由患者決定的，是對(duì)早期復(fù)發(fā)性生殖器皰疹的治療。44名開始治療的患者帶著皰疹案例被返回臨床；這些患者中的22名接受了正-二十二烷醇，22名接受了安慰劑。
16個(gè)可評(píng)估的正-二十二烷醇患者的平均治愈時(shí)間為4.7天±1.9，范圍為從1.8到8.6天；對(duì)18個(gè)可評(píng)估的安慰劑患者，治愈完成在平均5.1天±2.3，范圍為從1.7到10.4天；這種差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＝0.5827，t-檢驗(yàn))。無(wú)生殖器損傷，無(wú)(疾病)主訴，用藥間斷，無(wú)可觀察到案例的先兆，或有并發(fā)酵母菌感染的患者被認(rèn)為沒有可評(píng)估價(jià)值。當(dāng)包括所有患者時(shí)，正-二十二烷醇組的平均治愈時(shí)間為5.5天±2.5，范圍為從1.8到9.8天；對(duì)安慰劑組，治愈在平均4.7天±2.3時(shí)達(dá)到，范圍為1.7到10.4天。在2個(gè)治療組之間平均治愈時(shí)間之差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＝0.2703。t-檢驗(yàn))。當(dāng)根據(jù)治療開始時(shí)患者的損傷階段進(jìn)行分類時(shí)(前兆，紅斑或丘疹)，各治療組之間的差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。根據(jù)患者定標(biāo)的平均治愈時(shí)間與根據(jù)臨床醫(yī)師的相似(對(duì)所有正-二十二烷醇患者的5.6天和對(duì)所有安慰劑患者的4.5天)。
根據(jù)患者對(duì)自我評(píng)估的疼痛進(jìn)行了三種疼痛分析對(duì)持續(xù)“無(wú)痛”的時(shí)間；第一次“無(wú)痛”的時(shí)間；和第一次疼痛減輕時(shí)間。持續(xù)“無(wú)痛”的時(shí)間是從在使用藥物后第一次疼痛的時(shí)間到當(dāng)1)疼痛被記錄為“無(wú)痛”至少2個(gè)連續(xù)的記錄的時(shí)間和2)在案例的其余部分，再次疼痛記錄并不更頻繁和比2個(gè)連續(xù)的“中等程度”疼痛的記錄的分別案例不更嚴(yán)重的時(shí)間來(lái)測(cè)得的。第一次“無(wú)痛”的時(shí)間被定義為從使用藥物時(shí)的第一次疼痛到“無(wú)痛”的第一次記錄之間的間隔。第一次疼痛減輕時(shí)間是從在使用藥物時(shí)的第一次疼痛到當(dāng)相對(duì)于前面的評(píng)估疼痛水平的減低被注意到的第一次時(shí)間來(lái)測(cè)得的。一些患者被排除在這些分析之外，同為他們或者在第一個(gè)24小時(shí)內(nèi)沒有疼痛，或沒有報(bào)告疼痛的主訴。
15名用正-二十二烷醇治療的可評(píng)估的患者比14名安慰劑患者早達(dá)到“無(wú)痛”的持續(xù)響應(yīng)正-二十二烷醇的患者的平均3.2天±1.9與安慰劑患者的4.1天±2.5相比較。正-二十二烷醇患者達(dá)到“無(wú)痛”也比安慰劑患者快。正-二十二烷醇患者第一次記錄“無(wú)痛”是在疼痛發(fā)作平均2.6天±2.1時(shí)，而安慰劑病人第一次報(bào)告“無(wú)痛”是在疼痛發(fā)作平均3.4天±2.1時(shí)。在可估價(jià)的正-二十二烷醇患者中，相對(duì)于在用藥之前的疼痛，第一次疼痛的減輕發(fā)生于疼痛發(fā)作后平均1.2天±1.0。發(fā)生于安慰劑患者的第一次疼痛減輕在平均1.8天±1.4。這些差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為p＝0.2775，0.325和0.1757，t-檢驗(yàn))。無(wú)生殖器損傷，無(wú)主訴或用藥間斷，無(wú)可觀察案例的先兆和并發(fā)酵母菌感染的患者被認(rèn)為沒有可評(píng)估價(jià)值。
根據(jù)它是有效的局部疼痛減緩劑的驚人發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明包括減少皮膚和膜表面炎癥的疼痛的方法。該方法包括對(duì)炎癥表面使用至少含有一個(gè)長(zhǎng)鏈脂肪醇的組合物，長(zhǎng)鏈脂肪醇含20到28個(gè)碳原子，選自正-二十烷醇，正-二十一烷醇，正-二十二烷醇，正-二十三烷醇，正-二十四烷醇，正-二十五烷醇，正-二十六烷醇，正-二十七烷醇，和正-二十八烷醇或它們的混合物。該醇在生理相容性的載體中。所述醇占所述組合物的重量百分比為大約5％到大約25％。優(yōu)選的，生理相容性的載體是乳劑基質(zhì)，它包含一個(gè)或多個(gè)選自蔗糖可可脂酸酯，蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯的化合物及一個(gè)或多個(gè)選自聚氧丙烯-15-十八烷基醚，乙基己二醇和芐醇的化合物。
雖然在研究B中接受10％正-二十二烷醇乳劑治療的患者與接受安慰劑乳劑處理的患者的治愈時(shí)間之間沒有發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的差異。不過在以正-二十二烷醇治療的可評(píng)估患者中有趨向于降低治愈時(shí)間的趨勢(shì)。三種不同的疼痛分析都顯示了接受正-二十二烷醇10％乳劑治療的患者有更快的疼痛消失；雖然沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義的差異。在該研究中，不能檢測(cè)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性可能部分反應(yīng)了(1)研究總數(shù)小；(2)就皰疹生殖器損傷自然歷史而言二個(gè)研究組之間的研究記載的差異；和(3)在案例和治療開始時(shí)二組損傷階段之間的一個(gè)不相等的分布。
除了臨床研究之外，還進(jìn)行了一些研究以闡明正-二十二烷醇的藥理學(xué)。這些研究導(dǎo)致了圖7～13所描述的數(shù)據(jù)，并討論如下。
為了研究正-二十二烷醇的生化活性，較難克服的障礙之一是開發(fā)一種能夠使化合物可接收地釋放到生物體系中的適當(dāng)?shù)闹苿?。開始時(shí)，這是通過在惰性，無(wú)毒的非離子性表面活性劑，pluronic F-68中配制憎水化合物的懸浮液來(lái)完成的。這種懸浮液被證明在質(zhì)量上是均相的并由含平均粒度0.10微米的正-二十二烷醇組成。以這種方式懸浮的正-二十二烷醇具有極佳的在體外對(duì)猿和人類細(xì)胞的I型和II型單純性皰疹病毒(HSV)傳染性的抵抗作用。重要的是正-二十二烷醇/Pluronic懸浮液可以同樣有效地抵抗野生型的HSV和抗無(wú)環(huán)鳥苷的HSV突變體。因此，如圖7中A組所示，無(wú)環(huán)鳥苷和正-二十二烷醇都一樣抑制由野生型HSV-2所致的菌斑形成。圖7B組描述了抗無(wú)環(huán)鳥苷的HSV-2突變體如預(yù)期的那樣不能對(duì)無(wú)環(huán)鳥苷產(chǎn)生應(yīng)答，但明顯地對(duì)正-二十二烷醇的抑制活性敏感。在兩組中的最后一條描述了單獨(dú)的pluronic表面活性劑缺乏任何抗病毒活性，甚至用300mM正-二十二烷醇也未觀察到宿主細(xì)胞毒性。
用于這些組織培養(yǎng)研究中的顯然是非常高劑量的正-二十二烷醇值得特別說(shuō)明。這實(shí)際是在體外系統(tǒng)中的人為現(xiàn)象，是源于分子從顆粒懸浮劑到附著細(xì)胞的限制性釋放。轉(zhuǎn)移可能有幾種原因而被限制。第一，這類懸浮劑的密度使絕大多數(shù)的顆粒朝上飄浮。結(jié)果，在組織培養(yǎng)孔中產(chǎn)生出了一種物理化學(xué)人為現(xiàn)象，為得到釋放生物活性劑量到貼壁的靶細(xì)胞單層所需的液體動(dòng)力學(xué)梯度，這種組織培養(yǎng)孔需要高周圍量的懸浮藥物。其次，將正-二十二烷醇分子從熱力學(xué)穩(wěn)態(tài)顆粒轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)細(xì)胞中預(yù)期不是一種有效過程。如攝入研究所示，在這些培養(yǎng)物中，正-二十二烷醇的實(shí)際生物活性劑量是圖7和9所示劑量的1/1000，實(shí)際上可將所示的mM數(shù)簡(jiǎn)單地轉(zhuǎn)譯為μM。
在組織培養(yǎng)系統(tǒng)中的抗病毒活性并不總是轉(zhuǎn)譯為在整體動(dòng)物或人體研究中的藥效。因此，我們檢查了用于人類的局部乳劑在治療HSV-2所致的幾內(nèi)亞豬的皮膚損傷活性(該乳劑專門設(shè)計(jì)了使皮膚滲透力增至最大和使?jié)撛诘木植看碳し磻?yīng)降低到最小)。HSV-1或2用紋身器具接種于幾內(nèi)亞無(wú)毛豬的背部皮膚，這些接種部位或不作處理或以不同濃度的含正-二十二烷醇的乳劑或?qū)φ召x形劑處理，治療是在接種2小時(shí)后進(jìn)行的，然后在24，36和48小時(shí)再進(jìn)行。接種后56和72小時(shí)在接種部位計(jì)數(shù)水泡的形成，分別代表疾病的蜂期和消失期。圖8中所示數(shù)據(jù)表示檢測(cè)濃度為1％，5％，10％和20％的正-二十二烷醇乳劑抑制HSV-2所致幾內(nèi)亞無(wú)毛豬皮膚損傷的劑量-應(yīng)答研究。與10％含正-二十二烷醇制劑相對(duì)應(yīng)的安慰劑也包括在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，用該安慰劑得到的數(shù)據(jù)描述于線狀圖的上方的水平柱欄中，數(shù)據(jù)點(diǎn)用箭頭指出。僅72小時(shí)時(shí)間點(diǎn)的數(shù)據(jù)被示出，但在早些時(shí)間觀察到相似的抑制形式。如所示，這個(gè)正-二十二烷醇的局部制劑具有很好的抗病毒活性；最優(yōu)的抑制活性是用10％乳劑得到的(60％抑制率)，用20％的制劑觀察到基本上相當(dāng)?shù)幕钚浴?0％乳劑的稍低的抑制活性能恒定地觀察到，最可能是與正-二十二烷醇分子的憎水性所引起的表面活性劑的飽和相關(guān)。有證據(jù)顯示，乳劑在皮膚上消失所需的時(shí)間較長(zhǎng)(未示出)。含5％和1％正-二十二烷醇的乳劑顯然比10％的制劑有效性低，與10％乳劑相比安慰劑絕對(duì)沒有活性。雖然未示出，用HSV-1所致幾內(nèi)亞無(wú)毛豬皮膚損傷的模型已得到相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。因此，10％正-二十二烷醇乳劑在降低HSV所致幾內(nèi)亞豬皮膚損傷中是有效的。
已進(jìn)行了廣泛的研究用于描述正-二十二烷醇發(fā)揮其抗病毒活性的機(jī)理。研究結(jié)果的總體含義是化合物看來(lái)干擾病毒進(jìn)入細(xì)胞并遷移到被感染靶細(xì)胞的細(xì)胞核的一條或多條常見途徑。支持這種說(shuō)法的證據(jù)的關(guān)鍵點(diǎn)可總結(jié)如下(a)化合物無(wú)直接殺病毒活性，因?yàn)椴《究膳c正-二十二烷醇懸浮液混合，然后從懸浮液中分離出來(lái)并顯示保留了正常傳染性；(b)雖然化合物并不干擾皰疹病毒與靶細(xì)胞上的HSV特異性受體結(jié)合，在正-二十二烷醇存在下結(jié)合于靶細(xì)胞受體的HSV病毒粒子可以在細(xì)胞表面停留延長(zhǎng)的時(shí)間；和(c)被內(nèi)在化的病毒隨后的向細(xì)胞核的遷移被極大地抑制了，這已被可測(cè)得的HSV核心和包容蛋白，表達(dá)直接早期蛋白ICP-4的細(xì)胞數(shù)，和二級(jí)菌斑分析所測(cè)。
上面所描述的病毒內(nèi)在化的延遲在圖9所總結(jié)的實(shí)驗(yàn)中已被說(shuō)明。在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，HSV-2在4℃，在正-二十二烷醇存在或不存在下與Vero細(xì)胞一起溫育，使受體與病毒結(jié)合。在3小時(shí)末，所有培養(yǎng)物被清洗，然后在37℃再培養(yǎng)以便起始病毒進(jìn)入過程，在20分鐘間隔后，在除去和去活化表面束縛的，但未使HSV病毒粒子內(nèi)在化的條件下，將各種培養(yǎng)物暴露于pH3.0的檸檬酸鹽緩沖液中，然后重新培養(yǎng)，時(shí)間為發(fā)展最優(yōu)HSV菌斑所需的全部44小時(shí)。如預(yù)期的，所有在“0”時(shí)暴露于檸檬酸鹽緩沖液的培養(yǎng)物都沒能發(fā)展菌斑。如圖中最上面的線所示，在未處理的和pluronic對(duì)照-處理的培養(yǎng)物中HSV-2的內(nèi)在化在變到37℃后于20分鐘內(nèi)基本上已完成。相反的，在正-二十二烷醇處理的培養(yǎng)物中HSV的內(nèi)在化在20分鐘時(shí)完成不足40％，且需要多于1個(gè)小時(shí)才達(dá)到完成。這些結(jié)果清楚地表明病毒融合和/或跨膜遷移被正-二十二烷醇以某種方式延緩了。
在正-二十二烷醇處理的細(xì)胞中甚至在內(nèi)在化達(dá)到完成后，緊接著的病毒向細(xì)胞核的遷移被極大地抑制了。因此，HSV核及通過ELISA可檢測(cè)的包容蛋白抗原的量以及通過免疫熒光法表達(dá)核間HSV-特異性直接早期蛋白，ICP-4的感染細(xì)胞數(shù)目下降大于80％。最后，在正-二十二烷醇處理的細(xì)胞中，在二級(jí)菌斑分析培養(yǎng)物中測(cè)得的傳染性病毒粒子的復(fù)制顯著地下降了99％或更多。
總之，正-二十二烷醇的存在對(duì)病毒結(jié)合的初始步驟無(wú)作用，但它相當(dāng)大地延緩了病毒通過一些仍需確定的機(jī)理進(jìn)入靶細(xì)胞胞質(zhì)。另外，遷移到和定位于核的過程被極大地阻礙了。最終效果是病毒復(fù)制生產(chǎn)的顯著下降。
為了更好地定義正-二十二烷醇發(fā)揮其抗病毒活性的精確機(jī)理，我們最近研究了以表面活性劑穩(wěn)定化的正-二十二烷醇懸浮液的細(xì)胞攝取，分布和代謝。這一研究結(jié)果對(duì)研究化合物抗病毒作用的代謝基礎(chǔ)提供了一些有趣的視點(diǎn)。第一，我們能夠表明放射性標(biāo)記的正-二十二烷醇會(huì)逐漸并入培養(yǎng)的Vero細(xì)胞，在暴露后6和12小時(shí)間達(dá)到每細(xì)胞的峰值攝取量。這一過程是不可逆的，因?yàn)橐坏┗衔锱c細(xì)胞結(jié)合后，甚至在用溴化銫強(qiáng)化沖洗也不能除去它，而溴化銫是能有效地除去非專一性結(jié)合的細(xì)胞束縛粒子。
第二，在飽和濃度下24小時(shí)內(nèi)，加入培養(yǎng)物的低于1％的全部正-二十二烷醇會(huì)變成細(xì)胞結(jié)合的。然而，這相應(yīng)于將近8×109個(gè)分子每個(gè)細(xì)胞，是一個(gè)驚人的量，與質(zhì)膜中典型的磷脂分子的數(shù)目接近。在加入培養(yǎng)物的懸浮液中的少部分正-二十二烷醇變成細(xì)胞結(jié)合的這一事實(shí)說(shuō)明實(shí)際的生物活性劑量比加到培養(yǎng)物中的藥物的量要小幾個(gè)數(shù)量級(jí)。
檢查從以超聲破壞細(xì)胞的差速離心機(jī)分離得到的亞細(xì)胞部分的細(xì)胞分布研究證明在暴露12小時(shí)后，細(xì)胞膜中含有75％的放射性化合物，并且不到1％與核部分相連；放射活性的平衡與胞質(zhì)的可溶性部分有關(guān)。
正-二十二烷醇的代謝轉(zhuǎn)化分析表明化合物是被逐漸代謝為極性化合物。薄層層析證明其為磷脂，或由合成代謝(醚連接)或降解代謝(氧化)反應(yīng)生成。圖10表示了正-二十二烷醇處理過的Vero細(xì)胞提取物在硅膠柱上的甲醇洗脫液組分(含磷脂)的薄層層析分析。未代謝的正-二十二烷醇先被從硅膠柱中用氯仿洗脫掉。如圖所示，約62％的點(diǎn)數(shù)遷移在磷脂酰膽堿區(qū)，38％遷移在磷脂酰乙醇胺區(qū)。我們的研究表明這種代謝轉(zhuǎn)換能夠被適當(dāng)?shù)拇x抑制劑所阻滯。因此，有效能量毒化疊氮化鈉，2-脫氧葡萄糖既降低Vero細(xì)胞對(duì)正-二十二烷醇攝取的90％又降低代謝轉(zhuǎn)換為極性代謝物的80％。有可能疊氮化鈉和2-脫氧葡萄糖的組合主要通過抑制細(xì)胞攝取作用來(lái)抑制正-二十二烷醇的細(xì)胞攝入。然而，其它的攝取機(jī)理包括一個(gè)能量依賴的融合機(jī)理，或一個(gè)由正-二十二烷醇的緊接著的能量依賴代謝所促進(jìn)的被動(dòng)擴(kuò)散機(jī)理，也能被這些能量毒素所抑制。
這些研究的一個(gè)有趣的方面是表明了在化合物的抗病毒活性中正-二十二烷醇極性代謝物的一個(gè)可能作用。最近已證明，鼠的成纖維細(xì)胞對(duì)聚乙二醇所致融合的抵抗與游離脂肪醇的增加和甘油酯，包括一種醚連接的化合物的增加相關(guān)，該醚連接的化合物是如上所述的正-二十二烷醇通過代謝轉(zhuǎn)換得到的產(chǎn)物類似物。因此，我們施行了實(shí)驗(yàn)來(lái)研究正-二十二烷醇的酶促轉(zhuǎn)化是它的抗病毒活性的必須先決條件的可能性。這些研究的結(jié)果已證明，首先，正-二十二烷醇變成它的極性代謝物的代謝轉(zhuǎn)換速度和程度，而不是它的細(xì)胞攝取，是由用于懸浮化合物的表面活性劑的性質(zhì)所決定，以及，事實(shí)上，代謝轉(zhuǎn)換的功效直接與正-二十二烷醇的抗病毒活性的大小相關(guān)。
在施行這種研究的最初一步涉及選用一種不同的表面活性劑用于懸浮正-二十二烷醇、Tetronic908與pluronic F-68緊密相關(guān)；兩個(gè)都是環(huán)氧乙烷和環(huán)氧丙烷的嵌段共聚物。然而，pluronic是一個(gè)雙功能分子量為8,400的聚合物，Tetronic908是一個(gè)四功能共聚物，通過將環(huán)氧丙烷和環(huán)氧乙烷加入乙二胺而制得，得到平均分子量為25,000的分子。在其它事情中，當(dāng)Vero細(xì)胞暴露于同劑量的懸浮于Tetronic和pluronic中的正-二十二烷醇，Tetronic的化合物代謝成為極性代謝物的速率和程度比在Pluronic懸浮液中要高許多。在兩種不同懸浮制劑中的放射性正-二十二烷醇的總攝取量是相同的。僅代謝轉(zhuǎn)含有極大的不同。與這個(gè)在Tetronic懸浮液中比在Pluronic懸浮液中要高的代謝轉(zhuǎn)換相關(guān)的是發(fā)現(xiàn)正-二十二烷醇抑制HSV復(fù)制的ED50在Tetronic中是5-10mM，在Pluronic中幾乎高3倍。這看來(lái)與用在Tetronic中的正-二十二烷醇治療的細(xì)胞中的3倍高代謝轉(zhuǎn)換水平相關(guān)。
為消除這些發(fā)現(xiàn)是對(duì)Vero細(xì)胞培養(yǎng)物系統(tǒng)特異的可能性，我們做了重復(fù)分析而利用這樣的事實(shí)即和Vero細(xì)胞相比類上皮小牛腎細(xì)胞系MDBK，顯示出有趣的對(duì)正-二十二烷醇的抗HSV活性的明顯的抵抗力。這種差異是顯著的因?yàn)檎?二十二烷醇在抑制Vero細(xì)胞中HSV所致菌斑時(shí)要比在MDBK細(xì)胞中有效3-4倍。當(dāng)我們比較總的細(xì)胞攝取和相對(duì)代謝時(shí)，結(jié)果驚人地清晰。第一，在Vero細(xì)胞中的正-二十二烷醇的攝取總量和相對(duì)代謝轉(zhuǎn)換量都比在MDBK細(xì)胞中要高3-4倍。在MDBK中比在Vero細(xì)胞中的攝取降低和代謝降低的結(jié)合效果以曲線方式描述于圖11，它明確地示出在72小時(shí)后，Vero細(xì)胞在溶劑體系中的初始點(diǎn)含有幾乎4倍量高的磷脂代謝物。然而，就兩個(gè)細(xì)胞系中代謝的點(diǎn)數(shù)，在所形成的主類的磷脂代謝物中，磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺的相對(duì)量，在二個(gè)細(xì)胞系中無(wú)差別。進(jìn)一步而言，脈沖追綜實(shí)驗(yàn)表明二個(gè)系最終將所有的結(jié)合點(diǎn)都轉(zhuǎn)換為更極化的形式。這些結(jié)果表明，MDBK細(xì)胞可能通過一種反饋型機(jī)理有效地調(diào)節(jié)對(duì)正-二十二烷醇的攝取和代謝，而該機(jī)理對(duì)Vero細(xì)胞或低效或不可行。
與上面總結(jié)的機(jī)理觀察相一致，我們預(yù)計(jì)正-二十二烷醇可能具有潛在的干擾各種不同病毒的能力，尤其對(duì)那些在它們的外膜含磷脂的并使用融合機(jī)理進(jìn)入易感染靶細(xì)胞的病毒。表5總結(jié)了人體和鼠的磷脂膜病毒，至今，它已顯示出對(duì)正-二十二烷醇的抗病毒活性是敏感的。
表6正-二十二烷醇*抵抗磷脂膜病毒的抗病毒活性譜人體病毒鼠病毒單純性皰疹病毒-1和2 細(xì)胞肥大病毒水痘帶狀皰疹病毒 Friend白血病病毒人體皰疹病毒-6 LP-BM5病毒呼吸道合胞體病毒細(xì)胞肥大病毒流感AHIV-1*或至少一個(gè)含有20到28個(gè)碳原子的長(zhǎng)鏈脂肪醇，例如正-二十烷醇，正-二十一烷醇，正-二十二烷醇，正-二十三烷醇，正-二十四烷醇，正-二十五烷醇，正-二十六烷醇，正-二十七烷醇和正-二十八烷醇或它們的混合物，正-二十二烷醇單獨(dú)使用或與其它這種醇混用被作為模型。
每個(gè)所測(cè)試的磷脂膜病毒可以有效被這藥物所阻滯。與它的抗磷脂膜病毒的同一有效性相反，該藥物對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒和呼吸道腸道病毒沒有可測(cè)得的活性，二者是我們用于檢測(cè)對(duì)化合物的敏感性的非膜性病毒。
正-二十二烷醇在體內(nèi)和體外都有抗反轉(zhuǎn)錄病毒活性。一種具有抗反轉(zhuǎn)錄病毒活性和無(wú)毒性的制劑會(huì)對(duì)治療人體或家養(yǎng)動(dòng)物的各種反轉(zhuǎn)錄病毒疾病有實(shí)質(zhì)性的用處。盡管未牽涉AIDS的治療，但由反轉(zhuǎn)錄病毒，如貓白血病毒，小牛白血病毒和HTLV-1和2引起的疾病的可行的治療方案在人道主義的意義上是實(shí)質(zhì)性有意義的。我們的研究已明確了正-二十二烷醇確實(shí)在體內(nèi)和體外抑制鼠反轉(zhuǎn)錄病毒的復(fù)制。
初始研究集中在鼠Friend白血病病毒(FV；8)。對(duì)成年鼠接種FV導(dǎo)致紅細(xì)胞系祖代細(xì)胞，尤其是嗜堿性成紅細(xì)胞的白血病誘發(fā)。這種紅白血病的特征在于病毒感染的紅細(xì)胞系細(xì)胞的快速繁殖，和毒血癥，免疫抑制和最終動(dòng)物死亡。靜脈注射FV將循環(huán)通過造血器官，例如脾，感染紅細(xì)胞系細(xì)胞。若這被感染的脾在病毒感染10天后治愈，分散的微觀小結(jié)能夠在器官表面上可被看到；這些代表白血病細(xì)胞的克隆且形成了以脾為中心的分析基礎(chǔ)。
圖12中所總結(jié)的實(shí)驗(yàn)說(shuō)明了正-二十二烷醇抑制靜脈注射了75病灶形成單位的Friend病毒的成年鼠的Friend病毒所致白血病和病毒血癥。治療組在病毒接種同天和在其后的三天每天一次靜脈注射了不同劑量的正-二十二烷醇或僅Pluronic賦形劑。十天后，每組中一半數(shù)目的動(dòng)物被殺死，檢查它們脾中白血病病灶的存在，而剩余的動(dòng)物保持另外十天來(lái)檢測(cè)病毒血癥。用正-二十二烷醇治療的示出了一個(gè)非常明確的對(duì)白血病病灶的發(fā)展(示于表A)和病毒血癥的發(fā)展(示于表B)的劑量相關(guān)抑制作用。相反，以相應(yīng)量的僅Pluronic賦形劑作為對(duì)照的未示出可辨別的效果。我們相信這些結(jié)果反映了正-二十二烷醇對(duì)病毒復(fù)制的抑制活性，因?yàn)轶w外的推論研究證明這藥物對(duì)在胚胎成纖維細(xì)胞前體培養(yǎng)物中的Friend病毒復(fù)制的抵抗有非常強(qiáng)的活性。
正-二十二烷醇在體外抑制HIV-1和人體皰疹病毒6的復(fù)制。我們最初對(duì)HIV的研究是與美國(guó)國(guó)家健康實(shí)驗(yàn)研究院(U.S.National Institutes ofHealth Laboratory)合作的。幾個(gè)這類實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)實(shí)驗(yàn)總結(jié)于圖13。正常的人體外周血液?jiǎn)魏思?xì)胞以在介質(zhì)中僅含1mg/mlPHA加上5單位/ml的IL-2或在正-二十二烷醇，Pluronic F-68對(duì)照賦形劑，或膦?；姿?PFA)的存在下被活化。第二天，培養(yǎng)物接種HIV-1，四天后通過檢測(cè)p24病毒抗原來(lái)檢查病毒復(fù)制的證據(jù)。與在未處理組中觀察到的相比，有實(shí)質(zhì)水平的HIV-1復(fù)制存在于處理對(duì)照組中。如圖所示，正-二十二烷醇展示出了對(duì)PHA/1L-2刺激的人體周邊血液?jiǎn)魏思?xì)胞培養(yǎng)物中HIV-1的一個(gè)劑量相關(guān)抑制活性。在最高劑量時(shí)的活性可與在非常強(qiáng)的抗病毒化合物，膦?；姿?PFA)中觀察到的相比較。因?yàn)檫@些最初的實(shí)驗(yàn)已經(jīng)進(jìn)行，我們?cè)谖覀冏约旱膶?shí)驗(yàn)室中重新進(jìn)行了這些觀察，結(jié)果顯示在使用更有利的懸浮于Tetronic中的正-二十二烷醇制劑時(shí)有更高水平的抗病毒HIV活性。HIV-1對(duì)正-二十二烷醇的劑量響應(yīng)指示出ED 50大約為6-9mM。
總之，最初在制備含有有效量的C-20到C-28的正脂肪醇(最優(yōu)選基本上僅是正-二十二烷醇或其與其他這類醇的混合物)的困難已被克服且這些化合物的藥理學(xué)已被闡明。作為一個(gè)組合物，本發(fā)明包括一種長(zhǎng)期穩(wěn)定的局部乳劑，該乳劑的貨架壽命在正常儲(chǔ)存條件下大于一年，即在室溫下穩(wěn)定一年或更長(zhǎng)，能夠經(jīng)受住重復(fù)的冷凍-融解循環(huán)，適用于治療動(dòng)物包括人類在內(nèi)的皮膚或膜由病毒所致的和炎癥的疾病。乳劑基本的成分是正-二十二烷醇，單獨(dú)存在或是其與其他正長(zhǎng)鏈(C-20到C-28)脂肪醇的混合物，生理學(xué)活性成分，水，油，糖和脂肪酸的酯，該酯為生理學(xué)惰性及能夠被活體所代謝，和有助于正-二十二烷醇滲透到皮膚或膜的感染區(qū)域并與酯共同作用形成一個(gè)對(duì)生理活性的醇的穩(wěn)定載體的潤(rùn)膚劑。糖基酯包括具有分子量大于大約150，最好為大約250的糖的部分和一個(gè)具有分子量大約150或更高，最好大于250的酯肪酸酯的部分。酯的分子量為大約400或更高。在這兒所用術(shù)語(yǔ)，糖是甜的或甜的碳水化合物，它是更高聚醇的酮或醛的衍生物，即包括糖類又包括二糖類。二糖基酯是優(yōu)選的。高分子量的多元醇可作為比更傳統(tǒng)的糖稍差的等同物而被取代。
同時(shí)，可能對(duì)讀者很明顯的，藥理學(xué)研究是用懸浮液進(jìn)行的。懸浮液對(duì)這些研究中所用的細(xì)胞是更相容的，但不適于作為局部藥劑，缺乏有效的局部治療所需的體相和穩(wěn)定性。
基于最終乳劑制劑的總重量(以重量百分比計(jì))，通常優(yōu)選的乳劑包括正-二十二烷醇，5-25％，或更優(yōu)選的大約10％±5％，蔗糖硬脂酸酯0-15％，優(yōu)選的大約為3-10％，和/或蔗糖可可脂酸酯，0-15％，優(yōu)選的為3到10％，和/或蔗糖二硬脂酸酯0-15％，優(yōu)選的為3到10％，至少一種蔗糖酯或相當(dāng)量的糖基酯，含量為總組合物的大約3個(gè)重量百分比，優(yōu)選的為大約10±5個(gè)重量百分比，油，如礦物油NF 3-15％，優(yōu)選的大約為8％±4％，二醇，如丙二醇USP或等同物，2-10％，優(yōu)選的為大約5％±2％，一種潤(rùn)膚劑乙二醇醚，如聚氧丙烯-15-十八烷基醚或芐醇，0～5％，優(yōu)選的大約為2～3％和水40～70％，優(yōu)選的大約為45％到65％。在這種一般制劑中，基于上面所示出的數(shù)據(jù)、在說(shuō)明書中的講授的精神和在說(shuō)明書中提供的準(zhǔn)則，將可以制備許多特別的制劑，它們穩(wěn)定且顯示出所示的治療作用，本文提供第一種有效局部治療組合物的基礎(chǔ)，其中的治療活性物質(zhì)主要由正-二十二烷醇，單獨(dú)的或其與正長(zhǎng)鏈(C-20到C-28)脂肪醇的混合物組成。
工業(yè)應(yīng)用本發(fā)明在制備藥品和在治療人類和動(dòng)物患者時(shí)有用。
權(quán)利要求
1.一種在病毒和炎癥疾病治療中應(yīng)用于皮膚和膜的治療乳劑(cream)，該乳劑基本上由糖基酯表面活性劑，大于大約百分之五重量的正-二十二烷醇，礦物油，潤(rùn)膚劑共溶劑和水組成，該乳劑在至少40℃的溫度下保持至少3個(gè)月的時(shí)間和在重復(fù)冷凍融解循環(huán)后是穩(wěn)定的。
2.權(quán)利要求1的治療乳劑，其中糖基酯表面活性劑選自蔗糖可可脂酸酯，蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯。
3.權(quán)利要求2的治療乳劑，其中的潤(rùn)膚劑共溶劑選自聚氧丙烯-十八烷基醚，乙基己二醇、和芐醇、或它們的混合物。
4.一種在病毒和炎癥疾病治療中應(yīng)用于皮膚和膜的治療乳劑，該乳劑基本上由糖基酯表面活性劑，大于大約百分之五重量的至少一種具有20至28個(gè)碳原子的長(zhǎng)鏈脂肪醇，礦物油，潤(rùn)膚劑共溶劑和水組成，所述長(zhǎng)鏈脂肪醇選自正-二十烷醇，正-二十一烷醇，正-二十二烷醇，正-二十三烷醇，正-二十四烷醇，正-二十五烷醇，正-二十六烷醇，正-二十七烷醇，正-二十八烷醇或它們的混合物，該乳劑在至少40℃的溫度下保持至少3個(gè)月的時(shí)間和在重復(fù)冷凍-融解循環(huán)后仍是穩(wěn)定的。
5.權(quán)利要求4的治療乳劑，其中糖基酯表面活性劑包括至少一種選自蔗糖酯的化合物，所述蔗糖酯包括蔗糖可可脂酸酯，蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯，其中蔗糖酯占乳劑重量的大約百分之3或更多。
6.權(quán)利要求4的治療乳劑，其中蔗糖酯占乳劑重量的大約百分之10±5或更多。
7.權(quán)利要求6的治療乳劑，其中的潤(rùn)膚劑共溶劑選自聚氧丙烯-十八烷基醚，乙基己二醇，和芐醇，或它們的混合物。
8.權(quán)利要求7的治療乳劑，其中的正長(zhǎng)鏈脂肪醇占乳劑重量的至少大約百分之10。
9.一種穩(wěn)定的有效的治療乳劑，其中一種主要治療成分基本上由至少一種含20到28個(gè)碳原子的長(zhǎng)鏈脂肪醇組成，其選自正-二十烷醇，正-二十一烷醇，正-二十二烷醇，正-二十三烷醇，正-二十四烷醇，正-二十五烷醇，正-二十六烷醇，正-二十七烷醇，正-二十八烷醇或它們的混合物，其中乳劑基含一種至多種選自蔗糖可可脂酸酯，蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯以及一種至多種選自聚氧丙烯-十八烷基醚、乙基己二醇和芐醇的化合物。
10.權(quán)利要求9的治療乳劑，其中蔗糖酯占乳劑重量的大約百分之10±5或更多。
11.權(quán)利要求10的治療乳劑，其中的潤(rùn)膚劑共溶劑選自聚氧丙烯十八烷基醚，乙基己二醇，和芐醇，或它們的混合物。
12.權(quán)利要求11的治療乳劑，其中的具有20到28個(gè)碳原子的正長(zhǎng)鏈脂肪醇至少占乳劑重量的大約百分之10。
13.權(quán)利要求12的治療乳劑，其中的治療組分基本由正-二十二烷醇組成。
14.權(quán)利要求12的治療乳劑，其組成為至少一種具有20到28個(gè)碳原子的長(zhǎng)鏈脂肪醇，它選自正-二十烷醇，正-二十一烷醇，正-二十二烷醇，正-二十三烷醇，正-二十四烷醇，正-二十五烷醇，正-二十六烷醇，正-二十七烷醇，正-二十八烷醇或它們的混合物，它占總?cè)閯┲亓康?％到15％；蔗糖硬脂酸酯，它占總?cè)閯┲亓康?％到15％；蔗糖可可脂酸酯，它占總?cè)閯┲亓康?％到10％；和蔗糖二硬脂酸酯，它占總?cè)閯┲亓康?％到10％；其條件是至少存在一種蔗糖酯且為總組合物的至少大約百分之3；礦物油，它占總?cè)閯┲亓康?％到15％；芐醇，它占總?cè)閯┲亓康?.5％到10％；和水，它占總?cè)閯┲亓康?5％到70％。
15.一種治療皮膚和粘膜的病毒感染和炎癥的方法，包括施用一種穩(wěn)定的局部用治療乳劑，該乳劑中的治療活性成分基本由正-二十二烷醇組成，且其中的乳劑基基本由糖基酯表面活性劑，至少一種具有20到28個(gè)碳原子長(zhǎng)鏈脂肪醇，礦物油，潤(rùn)膚劑共溶劑和水組成，所述長(zhǎng)鏈脂肪醇選自正-二十烷醇，正-二十一烷醇，正-二十二烷醇，正-二十三烷醇，正-二十四烷醇，正-二十五烷醇，正-二十六烷醇，正-二十七烷醇，正-二十八烷醇或它們的混合物。
16.權(quán)利要求15的方法，其中正-二十二烷醇占長(zhǎng)鏈脂肪醇的一半以上。
17.一種治療皮膚和粘膜的病毒感染和炎癥的方法，包括施用具有如下配方的局部用乳劑正-二十二烷醇 5～20％蔗糖硬脂酸酯 0～15％蔗糖可可脂酸酯 0％～10％蔗糖二硬脂酸酯 0％～10％其條件為至少有一種蔗糖酯存在，且其中的蔗糖酯占乳劑重量的大約百分之3或更多。礦物油 3～15％丙二醇 2～10％聚氧丙烯-15-十八烷基醚 0～5％芐醇0.5～5％其條件為存在聚氧丙烯-十八烷基醚或芐醇且其含量至少為1％；和水 40～70％
18.權(quán)利要求17的方法，其中蔗糖酯占乳劑重量的大約百分之10±5或更多。
19.一種抗炎和抗病毒的乳劑，它具有下述配方正-二十二烷醇 5～20％蔗糖硬脂酸酯0～15％蔗糖可可脂酸酯 0％～10％蔗糖二硬脂酸酯 0％～10％其條件為至少存在一種蔗糖酯，其中蔗糖酯占乳劑重量的大約百分之3或更多，礦物油 3～15％丙二醇 2～10％聚氧丙烯-十八烷基醚 0～5％芐醇0～5％其條件為存在聚氧丙烯-十八烷基醚或芐醇，且其含量為大約1％或更多；和水 40～70％。
20.權(quán)利要求19的抗炎乳劑，其中蔗糖酯占乳劑重量的大約百分之10±5或更多。
21.降低皮膚或膜的表面炎癥的疼痛的方法，包括向發(fā)炎表面施用一種組合物，它為在一種生理相容載體中含有至少一種具有20到28個(gè)碳原子的長(zhǎng)鏈脂肪醇，所述長(zhǎng)鏈脂肪醇選自正-二十烷醇，正-二十一烷醇，正-二十二烷醇，正-二十三烷醇，正-二十四烷醇，正-二十五烷醇，正-二十六烷醇，正-二十七烷醇，正-二十八烷醇或它們的混合物，所述的醇占所述組合物重量的大約5％到大約25％。
22.權(quán)利要求21的方法，其中的生理相容的載體是一種乳劑基，它含有一種或多種選自蔗糖可可脂酸酯，蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯的化合物以及一種或多種選自聚氧丙烯-十八烷基醚，乙基己二醇和芐醇的化合物。
23.權(quán)利要求21的方法，其中的長(zhǎng)鏈醇基本上由正-二十二烷醇組成。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種穩(wěn)定的，有效的治療乳劑，其中主要治療化合物是一種或多種C-20到C-28長(zhǎng)鏈脂肪醇，例如正-二十二烷醇，還含有蔗糖可可脂酸酯，蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯，或它們的混合物。
文檔編號(hào)A61K47/26GK1142764SQ9419495
公開日1997年2月12日 申請(qǐng)日期1994年9月2日 優(yōu)先權(quán)日1993年12月13日
發(fā)明者D·H·卡茲, M·H·卡利爾, J·F·馬塞列蒂, L·E·波普, L·R·卡茲 申請(qǐng)人:里達(dá)克藥品公司