專利名稱：云谷霉素(谷氏菌素)作為抗腫瘤藥物的應用的制作方法
云谷霉素(Yungumycin)是從我國云南省關坪自然保護區(qū)土壤中分離得到的鏈霉菌2321號菌株產生的抗腫瘤活性物質。研究證明云谷霉素對體外培養(yǎng)的腫瘤細胞顯示殺傷作用，對實驗動物腫瘤有顯著療效，有可能用于腫瘤治療。(云谷霉素的產生菌已保藏在“中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心”，北京中關村。保藏日期1995年7月26日，編號0234)。
經理化性質與鑒別研究確定，云谷霉素與前已報道的谷氏菌素(gougerotin)相同 據早期文獻報道，谷氏菌素是廣譜抗菌抗生素，但僅有弱的抗菌活性；未報道有抗腫瘤活性(Journal of Antibiotics，Series A，1962；1593)。據報道星霉素(asteromycin)與谷氏菌素相同，星霉素在體外試驗對HeLa細胞有抑制作用，有效濃度為1-2μg/ml；據稱星霉素腹腔內注射對小鼠肉瘤180(腹水型)有活性，但未報道具體數據(Journal of Antibiotics，1972；25548)。慶豐霉素據報告是一個化學結構與谷氏菌素相類似的抗生素，但未報道有抗腫瘤活性(微生物學報，1975；15101)。寧南霉素據稱為谷氏菌素同分異構體，未報告有抗腫瘤作用(中華人民共和國發(fā)明專利申請公開說明書，申請?zhí)?3104287.9)。綜上所述，迄今國內外未見報道谷氏菌素動物體內試驗對腫瘤有確切療效，也未見報道谷氏菌素應用于臨床腫瘤治療。云谷霉素經研究確定與谷氏菌素相同。本項發(fā)明的研究證明，云谷霉素對動物腫瘤有顯著療效，可能用于治療腫瘤。
本發(fā)明的目的是利用云谷霉素(谷氏菌素)作為抗腫瘤藥物，治療腫瘤。
本項發(fā)明的內容與要點是1.云谷霉素對腫瘤細胞的殺傷作用體外培養(yǎng)人體癌細胞(口腔鱗癌KB細胞)，用克隆形成測定法檢測，藥物與癌細胞接觸6天，研究證明云谷霉素對KB細胞有殺傷作用，抑制50％克隆形成的濃度(IC50)為3μg/ml(附圖1)。
2.云谷霉素對小鼠結腸癌的療效取結腸癌26的瘤組織小塊(直徑2mm)接種在BALB/c小鼠腋部皮下；接種后24小時經腹腔內注射(ip)或灌胃(po)給藥，對照組動物給予生理鹽水，10天后處死動物，取腫瘤稱重量，計算抑瘤率。研究結果表明，云谷霉素ip給藥對腸癌26有一定療效，抑瘤率為41％-43％，p＜0.01(表1)。云谷霉素po給藥有顯著療效，抑瘤率可達72％-86％(表2)。
表1云谷霉素腹腔內注射對小鼠結腸癌26的抑制作用劑量動物 體重(g) 瘤重(g)抑制率(mg/kg) 死亡數開始/結束 X±SD (％)對照 0 19.8/21.51.73±0.31云谷霉素 0.06×100 20.2/19.91.58±0.7140.12×100 19.4/17.91.34±0.28220.25×100 20.5/16.80.97±0.3543*對照 0 18.6/17.82.44±0.56云谷霉素 0.25×5 0 19.0/18.41.80±0.3426*0.50×5 0 20.9/17.01.44±0.2441**1.00×3 0 18.7/18.51.39±0.1943**皮下接種腫瘤，ip給予云谷霉素；n＝6*p＜0.05，**p＜0.01，與對照組比較。
表2云谷霉素灌胃給藥對小鼠結腸癌26的抑制作用劑量 動物 體重(g)瘤重(g)抑制率(mg/kg) 死亡數 開始/結束X±SD (％)對照0 22.7/19.4 1.40±0.19云谷霉素 12.5×3 0 22.5/15.2 0.39±0.1572**25.0×3 1 22.4/16.9 0.20±0.0886**皮下接種腫瘤，灌胃給予云谷霉素；n＝6**p＜0.01，與對照組比較。
3.云谷霉素對小鼠肉瘤180的療效取小鼠肉瘤180腹水加生理鹽水(1∶3)稀釋，接種于昆明種小鼠腋部皮下，每鼠0.2ml。接種后24小時灌胃給予云谷霉素，對照動物給予生理鹽水，10天后處死動物，取腫瘤稱重量，計算抑瘤率。研究結果表明，云谷霉素灌胃給藥對小鼠肉瘤180(實體型)有顯著療效，使用可耐受劑量(25mg/kg)，單次給藥的抑瘤率可達83％，p＜0.01；使用較小劑量(15mg/kg和20mg/kg)，3次給藥的抑瘤率分別為72％和81％，p＜0.01(表3)。
表3云谷霉素灌胃給藥對小鼠肉瘤180的抑制作用劑量 動物 體重(g) 瘤重(g)抑制率(mg/kg) 死亡數 開始/結束 X±SD (％)I.對照0 19.1/28.82.86±0.52云谷霉素 15×10 19.8/27.31.59±0.6744**20×10 19.0/25.40.84±0.2971**25×10 20.3/24.80.50±0.2083**II.對照 19.5/29.42.74±0.86云谷霉素 15×30 19.0/28.60.76±0.3272**20×31 20.1/24.70.52±0.2081**25×31 19.7/25.10.47±0.1883**皮下接種腫瘤，ip給予云谷霉素；n＝10**p＜0.01，與對照組比較。
4.云谷霉素與5-氟尿嘧啶的抗腫瘤作用比較采用上述(3)的試驗方法，小鼠皮下接種肉瘤180細胞，灌胃給予云谷霉素或5-氟脲嘧啶，使用劑量分別相當于1/3LD50，即云谷霉素15mg/kg，5-氟脲嘧啶40mg/kg；共給藥3次。研究結果證明，云谷霉素與5-氟脲嘧啶對肉瘤180(實體型)的療效相近，抑瘤率分別為72％和70％，兩者比較p＞0.05(附圖2)。
5.云谷霉素的毒性對小鼠的急性毒性LD50(po)為90mg/kg。云谷霉素灌胃給藥組動物(25mg/kg×1或25mg/kg×3，對肉瘤180的抑瘤率為83％)，經病理組織學檢查，心、肺、肝、腎、脾、胃、小腸等均未見毒性病變。
本發(fā)明的優(yōu)點與積極效果是為云谷霉素(谷氏菌素)開拓了新的用途。云谷霉素口服給藥對實驗動物腫瘤有顯著療效。云谷霉素與目前臨床使用的5-氟脲嘧啶的抗腫瘤效果相近，但化學結構有別，預期云谷霉素(谷氏菌素)用于臨床腫瘤治療，將可取得良好的效果。


圖1云谷霉素對口腔鱗癌KB細胞的殺傷作用；圖2云谷霉素與5-對小鼠肉瘤180的抑制作用。
(n＝10)
權利要求
1.云谷霉素(谷氏霉素)用作抗腫瘤藥的應用，其特征是，云谷霉素體外試驗對腫瘤細胞有殺傷作用，體內試驗對腫瘤有顯著治療效果。
2.按照權利要求1.所述的抗腫瘤藥的應用，其特征是體外培養(yǎng)人體癌細胞，用克隆形成法檢測，云谷霉素對人口腔鱗癌KB細胞有殺傷作用，IC50為3μg/ml。
3.按照權利要求1.所述的抗腫瘤藥的應用，其特征是動物體內試驗，在BALB/c小鼠皮下接種結腸癌26，或在昆明種小鼠皮下接種肉瘤180，接種24小時后給藥，10天后處死動物，判斷腹腔內注射給藥和灌胃給藥的抑瘤率。
全文摘要
一種具有已知結構的云谷霉素(谷氏菌素)，體外試驗用培養(yǎng)的人體癌細胞(KB細胞)，克隆形成測定法檢測，它對KB細胞有殺傷作用，抑制50％克隆形成的濃度(IC50)為3μg/ml；體內試驗用結腸癌26和肉瘤180，分別取結腸癌26組織小塊接種在BALB/c小鼠腋部皮下或取小鼠肉瘤180腹水加生理鹽水(1∶3)稀釋，接種于昆明小鼠腋部皮下，24小時后經腹腔內注射(ip)和灌胃(po)給藥，抑瘤率分別為結腸癌(ip)41-43％，(po)72-86％，肉瘤180(po)83％，其效果與臨床常用的抗癌藥5-氟脲嘧啶相近，開拓了云谷霉素(谷氏菌素)治療腫瘤新用途。
文檔編號A61K31/7042GK1127117SQ95115838
公開日1996年7月24日 申請日期1995年9月1日 優(yōu)先權日1995年9月1日
發(fā)明者甄永蘇, 戚長菁, 薛玉川, 胡繼蘭, 陳文君, 張春穎 申請人:中國醫(yī)學科學院醫(yī)藥生物技術研究所