專(zhuān)利名稱(chēng)：旋光對(duì)映純的(+)-利羅唑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的旋光對(duì)映純的式(I)化合物，它們可用于治療以正常的、腫瘤前的或腫瘤的上皮細(xì)胞的增殖加強(qiáng)和/或反常分化為特征的病癥。這些化合物在皮膚病領(lǐng)域特別有用。還公開(kāi)了含有這種新化合物的組合物以及使用該化合物治療上述病癥的方法。式(I)的右旋化合物可用于制造治療角化病的藥物。另外，本發(fā)明還提供了制備這種新化合物的方法。
本發(fā)明討論的新化合物是化合物利羅唑(Liarozole)的右旋異構(gòu)體及其可藥用的酸加成鹽。
利羅唑是一種外消旋的混合物，即，它的旋光異構(gòu)體的混合物，在EP-0,371,559中作為化合物28有專(zhuān)門(mén)敘述。該專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)岬较罄_唑之類(lèi)的化合物在治療上皮疾病中的應(yīng)用。EP-0,260,744敘述了利羅唑之類(lèi)化合物在抑制或減少雄激素形成方面的應(yīng)用。雖然EP-0,371,559和EP-0,260,744考慮到利羅唑之類(lèi)的化合物具有立體化學(xué)異構(gòu)形式，但是未給出旋光對(duì)映純形式的利羅唑?qū)嵗?br> 化學(xué)上利羅唑是(±)-5-[3-氯苯基]-1H-咪唑-1-基甲基]-1H-苯并咪唑，可用化學(xué)式(1)表示。由化學(xué)結(jié)構(gòu)可見(jiàn)，利羅唑有一個(gè)形成立體結(jié)構(gòu)的中心(式(I)中用星號(hào)表示)。 本發(fā)明的對(duì)象是利羅唑的旋光對(duì)映純的右旋異構(gòu)體或(+)-異構(gòu)體。該異構(gòu)體以后稱(chēng)作(+)-利羅唑。很多有機(jī)化合物以旋光體形式存在，即，它們能使平面偏振光的平面旋轉(zhuǎn)。在描述一種旋光化合物時(shí)，使用前綴D和L或R和S表示分子圍繞其手性中心的絕對(duì)構(gòu)型。前綴(+)和(-)或d和l用來(lái)表示平面偏振光被化合物轉(zhuǎn)動(dòng)的符號(hào)，(-)或l意味著化合物是左旋的，(+)或d意味著化合物是右旋的。對(duì)于指定的化學(xué)結(jié)構(gòu)，旋光性符號(hào)相反的旋光異構(gòu)體稱(chēng)作對(duì)映體。該對(duì)映體除了彼此成鏡象之外完全相同。這類(lèi)對(duì)映體的1∶1混合物稱(chēng)作外消旋混合物。
立體化學(xué)純度在藥學(xué)領(lǐng)域中很重要，因?yàn)楦鱾€(gè)對(duì)映體可能有不同的功效或者不同的活性。一種有益的異構(gòu)體的對(duì)映體甚至可能有害而只是簡(jiǎn)單地?zé)o作用。這類(lèi)差別的若干實(shí)例是工藝上已知的。
這里所用的術(shù)語(yǔ)“旋光對(duì)映純的”意味著產(chǎn)物中含有至少90％重量的一種對(duì)映體和10％重量或以下的另一種對(duì)映體。在大多數(shù)優(yōu)選的實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“旋光對(duì)映純的”意味著組成中含至少99％重量的一種對(duì)映體，另一對(duì)映體含量為1％或更少。
應(yīng)該指出，化學(xué)物質(zhì)的旋光性取決于實(shí)驗(yàn)參量。下面實(shí)驗(yàn)部分中顯示的數(shù)值是旋光率，諸如溫度、平面偏振光的波長(zhǎng)、溶劑和樣品的濃度等實(shí)驗(yàn)條件與常規(guī)方法中的相同。在例如形成酸加成鹽時(shí)，旋光性可能變化(甚至可能改變符號(hào)！)。在提到利羅唑的右旋異構(gòu)體或(+)-利羅唑時(shí)，這種堿形式的旋光性符號(hào)是指在后面給定的實(shí)驗(yàn)條件下。
還應(yīng)指出，在化學(xué)反應(yīng)不涉及立體結(jié)構(gòu)中心時(shí)，該立體中心的絕對(duì)構(gòu)型保持不變，雖然由該化學(xué)反應(yīng)生成的化合物的旋光性可能不同甚至符號(hào)相反。因此，為了避免混淆，具有與所要的最終產(chǎn)物對(duì)映體相同的立體中心絕對(duì)構(gòu)型的中間體，在其參照號(hào)之前標(biāo)以前綴(B)。
前面所述的可藥用的酸加成鹽是指包括式(I)化合物能夠形成的有治療活性的無(wú)毒的酸加成鹽。它們可以方便地通過(guò)用適當(dāng)?shù)乃崽幚韷A形式得到，合適的酸包括無(wú)機(jī)酸，例如氫鹵酸(如鹽酸、氫溴酸等)、硫酸、硝酸、磷酸等；有機(jī)酸、例如乙酸、丙酸、羥基乙酸、2-羥基丙酸、2-氧代丙酸、乙二酸、丙二酸、丁二酸、(Z)-2-丁烯二酸、(E)-2-丁烯二酸、2-羥基丁二酸、2，3-二羥基丁二酸、2-羥基-1，2，3-丙三羧酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、4-甲基苯磺酸、環(huán)己烷氨基磺酸、2-羥基苯甲酸、4-氨基-2-羥基苯甲酸等。反之，鹽形式可以用堿處理，轉(zhuǎn)化成游離堿形式。術(shù)語(yǔ)“加成鹽”也包括式(I)化合物能夠形成的水合物和溶劑加成物形式。這些形式的實(shí)例是水合物、醇化物等。
優(yōu)選的可藥用的酸是鹽酸和(E)-2-丁烯二酸。
在EP-0,371,559和EP-0,260,744中對(duì)于包括利羅唑的結(jié)構(gòu)的一般制備方法已作了廣泛的說(shuō)明。
旋光對(duì)映純的(+)-利羅唑可以通過(guò)旋光對(duì)映純的式(B)-(II)中間體二胺與甲酸或其官能性衍生物反應(yīng)來(lái)制備。 甲酸的官能性衍生物意味著包括鹵化物、酸酐、酰胺和酯(包括原酸酯和亞氨酸酯)。也可以使用甲基酰亞胺酰胺或其酸加成鹽作為環(huán)化劑。
用于進(jìn)行上述和下述反應(yīng)的一般反應(yīng)條件、后處理步驟和常規(guī)的分離技術(shù)在先有技術(shù)中有說(shuō)明。當(dāng)需要更特殊的條件時(shí)則在后面提到。
式(B)-(II)的旋光對(duì)映純的中間體二胺可以通過(guò)式(B)-(III)中間體經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)的硝基至胺的還原反應(yīng)制得 所要的式(B)-(III)中間體對(duì)映體可以通過(guò)式(III)中間體的外消旋混合物用旋光對(duì)映純的手性酸分級(jí)結(jié)晶制備。優(yōu)選用于上述分級(jí)結(jié)晶的手性酸是7，7-二甲基-2-氧代雙環(huán)[2.2.1]庚烷-1-甲磺酸(即10-樟腦磺酸)。
進(jìn)行分級(jí)結(jié)晶的合適溶劑是水、酮類(lèi)(例如2-丙酮、2-丁酮)、醇類(lèi)(如甲醇、乙醇、2-丙醇)。酮與水的混合物很適合上述的分級(jí)結(jié)晶用。最好是使用2-丙酮與水的混合物。
水/2-丙酮的體積比可以從1/10到1/2變化。優(yōu)選的比例范圍是1/5至1/3。
分級(jí)結(jié)晶宜在低于室溫的溫度下進(jìn)行，最后是低于5℃。
還發(fā)現(xiàn)，可以進(jìn)行后繼的反應(yīng)步驟而不會(huì)發(fā)生明顯的外消旋化。
或者是，式(I)化合物的(+)-異構(gòu)體可以通過(guò)將式(B)-(IV)中間體按上述對(duì)式(B)-(II)中間體所述的步驟環(huán)化，然后將所得到的式(B)-(V)中間體脫硫來(lái)制備。在式(B)-(IV)和(B)-(V)中，R代表C1-6烷基，表示一個(gè)有1到6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈結(jié)構(gòu)的飽和烴基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基。最好R是甲基。 為制備式(B)-(IV)中間體，可以使式(B)-(VI)中間體與式(VII)的試劑反應(yīng)，將這樣形成的式(B)-(VIII)硫脲衍生物烷基化，隨后將式(B)-(IX)中間體環(huán)化并將(B)-(X)中間體的硝基還原。在式(VII)、(B)-(VIII)、(B)-(IX)和(B)-(X)中，R代表如上定義的C1-6烷基。
旋光對(duì)映純的式(B)-(VI)中間體可以通過(guò)工藝上已知的拆解技術(shù)制備，例如，利用使用手性固定相的色譜法，或者利用形成非對(duì)映的化合物，例如與一種旋光對(duì)映純的手性酸(如α-羥基苯乙酸，即扁桃酸)形成酰胺，或者用旋光對(duì)映的純手性酸形成非對(duì)映的鹽形式。
利羅唑在體內(nèi)和體外試驗(yàn)中具有類(lèi)維生素A的模擬作用。這意味著此化合物被認(rèn)為抑制維生素A酸(RA)的分解代謝，從而提高了維生素A酸(RA)的含量，導(dǎo)致在組織或細(xì)胞水平上顯著的RA作用。利羅唑還顯示出是雄激素生物合成的有效抑制劑。臨床前的和臨床的研究正顯示出利羅唑在腫瘤學(xué)和皮膚病學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用。
與外消旋的利羅唑或利羅唑的旋光對(duì)映純的左旋異構(gòu)體(以后稱(chēng)作(-)-利羅唑)相比，(+)-利羅唑出乎意料地顯示出增大的類(lèi)維生素A模擬活性。更具體地說(shuō)，(+)-利羅唑是維生素A酸在人類(lèi)皮膚表皮和人舌鱗狀癌細(xì)胞(SCC 25)中的代謝的較強(qiáng)抑制劑。另外，(+)-利羅唑作為維生素A模擬物效率的增大，尤其是在皮膚病學(xué)領(lǐng)域中，可以由“無(wú)毛小鼠中誘發(fā)耳廓上皮增生”試驗(yàn)得到證實(shí)。維生素A酸在正常的人類(lèi)角化細(xì)胞水平上的作用也由于(+)-利羅唑而進(jìn)一步加強(qiáng)。另外，由毒性試驗(yàn)出乎意料地發(fā)現(xiàn)，與(-)-利羅唑相比，(+)-利羅唑更適合制造用于治療角化病的藥物。在后文的實(shí)驗(yàn)部分對(duì)(+)-利羅唑的增大的維生素A模擬活性有更詳細(xì)的敘述。由以上可知，通過(guò)服用有效數(shù)量的(+)-利羅唑，有可能實(shí)現(xiàn)“靶向”更強(qiáng)的皮膚病治療?！鞍邢颉备鼜?qiáng)的皮膚病學(xué)療法意味著，通過(guò)使用利羅唑的(+)-異構(gòu)體，在治療中使用維生素A模擬活性更高的化合物。
在本發(fā)明方法中使用(+)-利羅唑及其可藥用的酸加成鹽是基于它們延緩類(lèi)維生素A(例如所有的反式維生素A酸、13-順-維生素A酸及它們的衍生物)的分解代謝這一有用性質(zhì)。后面結(jié)果造成了類(lèi)維生素A物質(zhì)的更為持久/更高的組織濃度，并改進(jìn)了對(duì)各類(lèi)細(xì)胞的分化和生長(zhǎng)的控制。(+)-利羅唑的這一作用還稱(chēng)作維生素A模擬活性，因?yàn)榉?+)-利羅唑產(chǎn)生了與服用類(lèi)維生素A的相同效果。因此，(+)-利羅唑可以用來(lái)控制正常的、腫瘤前的和腫瘤的上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化速度。
因此，(+)-利羅唑及其可藥用的酸加成鹽可用于治療以表皮細(xì)胞的增殖加強(qiáng)和/或反常分化為特征的病癥的方法。(+)-利羅唑?qū)τ谄渖L(zhǎng)和分化基本上不受雄激素或雌激素作用調(diào)節(jié)或者對(duì)這種作用不敏感的細(xì)胞具有活性，尤其是對(duì)于其生長(zhǎng)和分化對(duì)類(lèi)維生素A敏感的細(xì)胞具有活性。具體的應(yīng)用包括能治療和/或減輕許多種角化病，例如紅斑痤瘡、痤瘡、牛皮癬、鱗癬、肉贅、胼胝、黑色棘皮癥，扁平苔癬、角膜上皮磨損、地圖樣舌、?？怂?福代斯病；癌癥前期皮膚癥狀，例如光化性角化病；以及瘢痕瘤，表皮松懈角化過(guò)度癥，毛囊角化病，毛發(fā)紅糠疹，先天性魚(yú)鱗樣癬，掌肌和跖肌角化過(guò)度癥，黑斑病，色素過(guò)度沉著等。(+)-利羅唑及其可藥用的酸加成鹽可用于制造治療角化病的藥物。
一般來(lái)說(shuō)，為治療以組織的過(guò)度增殖和/或反常分化為特征的病癥，有效數(shù)量是從每kg體重0.001mg至20mg，最好是每kg體重0.01mg至10mg。
本發(fā)明方法中使用的式(1)化合物最好是以合適的組合物的形式使用。作為合適的組合物，可以列舉通常用于全身或局部用藥的所有各種組合物。為了制備本發(fā)明的藥物組合物，將有效數(shù)量的特定化合物，可任選地以酸加成鹽的形式作為活性組分與一種可藥用載體充分混合，該載體可以采取各式各樣的形式，這取決于用藥所要求的制劑的形式。這些藥物組合物最好是制成適合口服、直腸用藥，經(jīng)皮用藥或非腸道注射的單一劑量形式。例如，在制備口服劑量形式的組合物時(shí)，可以使用任何常用的藥用介質(zhì)，例如在諸如懸浮液、糖漿、酏劑和溶液等口服液體制劑情形中的水、二元醇、油、醇等；或在粉劑、粒劑、膠囊和片劑等情形中的固體載體，如淀粉、糖、高嶺土、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑等。片劑和膠囊代表最方便的口服劑量單位形式。因?yàn)樗鼈內(nèi)菀追?，此時(shí)顯然是使用固體藥物載體，對(duì)于非腸道用藥的組合物，載體常常含有至少大部分的無(wú)菌水，但是也可以包含例如增加溶解度的其它組分。可以配制可注射的溶液。其中的載體為鹽溶液、葡萄糖溶液或鹽與葡萄糖溶液的混合物。也可以配制可注射的懸浮液，此時(shí)可以使用合適的液體載體、懸浮劑等。還包括打算在使用之前不久轉(zhuǎn)化成液體形式制劑的固體形式制劑。在適合經(jīng)皮用藥的組合物中，載體可任選地含有一種滲透增強(qiáng)劑和/或合適的潤(rùn)濕劑，任選地與合適的任何性質(zhì)的添加劑組合，這些添加劑均為少量組分，對(duì)皮膚無(wú)明顯的不良作用。作為適合局部施用的組合物可以提到常用于局部施用藥物的所有各種組合物，例如乳油，凝膠、敷料、洗發(fā)劑、酊劑、糊劑、油膏、軟膏、粉劑、液體或半液體制劑等。所述組合物可以以使用噴射劑(如氮、二氧化碳、氟利昂)或不用噴射劑(例如泵噴霧)的氣溶膠、滴劑、洗劑或可以用棉拭涂敷的增稠組合物之類(lèi)的半固體等各種形式施用。在具體的組合物中。諸如軟膏、乳油、糊劑、膏劑等半固體組合物便于使用。
將上述的藥物組合物配制成易于用藥和劑量均一的劑量單位形式特別方便。在本文說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求中所說(shuō)的劑量單位形式是指適合單元?jiǎng)┝康奈锢砩戏蛛x的單位，每個(gè)單位中含有經(jīng)計(jì)算能產(chǎn)生所要求的治療效果的預(yù)定數(shù)量的活性組分及所需的藥物載體。這些劑量單位形式的實(shí)例是片劑(包括刻痕的或包衣的片劑)、膠囊、粒劑、粉末包、糯米紙囊劑、可注射的溶液或懸浮液，茶匙容量、湯匙容量等，以及它們的分離的復(fù)合體。
其它的組合物是化妝品類(lèi)型的制劑，例如花露水、潤(rùn)膚膏、洗液、潤(rùn)膚乳或乳狀洗液。這類(lèi)制劑中除了活性組分之外，還含有在這類(lèi)制劑中常用的化合物。這些化合物的實(shí)例有油、脂肪、蠟、表面活性劑、濕潤(rùn)劑、增稠劑、抗氧化劑、粘度穩(wěn)定劑、整合劑、緩沖劑、防腐劑、香料、染料、低碳醇等。如果需要，還可以在組合物中加入其它組分，例如，阻燃劑、抗菌劑、抗真菌劑、消毒劑、維生素、防曬劑、抗生素或其它的抗痤瘡劑。
在本發(fā)明的另一方面，提供了特殊的藥物或化妝品組合物，它們包含一種惰性載體、有效數(shù)量的(+)-利羅唑或其酸加成鹽，以及有效數(shù)量的維生素A酸、它們衍生物(特別是維生素A)或其立體化學(xué)異構(gòu)形式。
可以證實(shí)維生素A酸和(+)-利羅唑以協(xié)同的方式起作用。確實(shí)，兩種物質(zhì)的結(jié)合作用比它們?cè)诜謩e服用時(shí)各自作用之和要大。上述含維生素A酸的組合物對(duì)于治療痤瘡或延緩皮膚老化作用方面特別有用，而且通常會(huì)改進(jìn)皮膚的質(zhì)量，特別是人的面部皮膚。含有維生素A酸或其衍生物作為與皮膚病學(xué)可接受的載體緊密混合的活性組分的藥物或化妝品組合物，可以按照常規(guī)的混合技術(shù)制備，例如已知用于局部施用維生素A酸及其衍生物的技術(shù)，這些物質(zhì)可任選地與環(huán)糊精或其工藝上已知的衍生物混合。優(yōu)選的用于局部用藥的組合物是乳油、油膏或洗劑形式，其中在半固體或液體稀釋劑或載體中含有從0.001％至0.5％(特別是從0.01％至0.1％)的全反式維生素A酸、13-順-維生素A酸或其衍生物(特別是維生素A)和從0.1％到5％的(+)-利羅唑或其皮膚病學(xué)上可接受的酸加成鹽。
這些優(yōu)選的組合物最好是無(wú)刺激性的，而且應(yīng)該盡可能地?zé)o味和無(wú)毒。為了便于在皮膚上施用，該組合物中除水或有機(jī)溶劑之外應(yīng)該含幾種有機(jī)潤(rùn)膚劑、供組合物的水相和/或非水相用的乳化劑、潤(rùn)濕劑、防腐劑以及促進(jìn)活性藥劑在皮膚內(nèi)滲透和保持的試劑。
在使用時(shí)，本發(fā)明的含維生素A酸的組合物根據(jù)需要以固定的時(shí)間間隔局部施加到要治療和保護(hù)的部位，一般每周約7到21次。治療的期限取決于要治療的病癥的本質(zhì)和嚴(yán)重性，以及施用組合物的頻繁程度。
實(shí)例部分A.中間體的制備實(shí)施例1a)將(±)-4-[(3-氯苯基)-1H-咪唑-基甲基]-2-硝基苯胺(其制備在EP-371,559中有說(shuō)明)(500g)在2-丙酮(2000ml)和水(100ml)中的非均相混合物在22℃時(shí)攪拌。加入(-)-(1R)-7，7-二甲基-2-氧代-雙環(huán)[2.2.1]庚烷-1-甲磺酸(353.2g)，10分鐘后該混合物變均勻。將混合物先在20℃攪拌18分鐘，然后在0-5℃攪拌3小時(shí)。濾出沉淀，用2～丙酮/水的95/5混合物(150ml)洗，干燥，得到308.9g(36.2％)產(chǎn)物。將樣品(306.7g)分配在二氯甲烷(500ml)和水(750ml)中，加入氫氧化銨(100ml)。將此混合物攪拌15分鐘。分離出水層，用二氯甲烷萃取兩次(每次250ml)。分離出的有機(jī)層用水(250ml)洗，干燥、過(guò)濾、蒸發(fā)溶劑后得到179.7g(-)-(B)-4-[(3-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-2-硝基苯胺；熔點(diǎn)89.8℃； ＝-19.80°(c=0.5％，甲醇中)(中間體1)。b)將中間體(1)(179.7g)在甲醇(656ml)和氨/甲醇溶液(32.7ml)中的混合物在20-25℃于噻吩(0.27g)存在下氫化，用鉑/活性炭(13.1g)作為催化劑。在吸收了氫(3當(dāng)量)之后，濾出催化劑并用2-丙醇(30ml)洗，在＜30℃下向?yàn)V液中加入鹽酸在2-丙醇(522ml)中的溶液?；旌衔镌?0℃攪拌3小時(shí)，然后在0-5℃攪拌3小時(shí)。慢慢濾出所得的沉淀，用甲醇(100ml)洗，50℃干燥，得到185.60g(83.2％)(+)-(B)-4-[(3-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-1，2-苯二胺三鹽酸化物，熔點(diǎn)172.5℃， ＝+23.73°(c＝1％，甲醇中)(中間體2)。實(shí)施例2a)將(4-氨基-3-硝基苯基)(3-氯苯基)甲酮(50g)、甲酰胺(375ml)和甲酸(63ml)的混合物攪拌和回流17小時(shí)。冷卻后，將混合物倒在冰上。濾出沉淀，干燥，得到55g(99.4％)(±)-N-[(4-氨基-3-硝基苯基)(3-氯苯基)甲基]甲酰胺(中間體3)。b)將中間體(3)(50.7g)、6N鹽酸(350ml)和2-丙醇(70ml)的混合物攪拌和回流17小時(shí)。濾出黃色沉淀，真空干燥，得到51g(97.8％)(±)-4-氨基-α-(3-氯苯基)-3-硝基苯甲胺一鹽酸鹽；熔點(diǎn)263℃(中間體4)。c)向中間體(4)(43g)在四氫呋喃(400ml)中的溶液里于室溫下依次加入N，N-二乙基乙胺(13.8g)和(R)-(-)-α-羥基苯乙酸(20.8g)。然后加入1-羥基苯并三唑一水合物(22.2g)在四氫呋喃(200ml)中的溶液。加完后，向混合物中加入N，N′-二環(huán)己基碳化二亞胺(33.9g)在二氯甲烷中(300ml)中的溶液。在室溫下攪拌2小時(shí)后，濾除N，N′-二環(huán)己基脲。濾液用碳酸鉀溶液(10％)洗，將有機(jī)層干燥，得到非對(duì)映體的混合物(60g)(級(jí)分1)。用中間體(4)(16g)作為起始物的同一實(shí)驗(yàn)得到26g非對(duì)映體混合物(級(jí)分2)。將級(jí)分1和2合并，用HPLC純化(洗脫液CH2Cl2/乙酸乙酯90∶10)得到30g(32.3％)(±)-(R，B)-N-[(4-氨基-3-硝基苯基)(3-氯苯基]甲基]-α-羥基苯乙酰胺(中間體5)。d)將中間體(5)(30g)、12N鹽酸(300ml)和1-丙醇(100ml)的混合物攪拌和回流17小時(shí)并倒在冰上?；旌衔镉靡宜嵋阴ポ腿?。水相用氫氧化銨堿化，用二氯甲烷萃取。將二氯甲烷萃取液干燥，過(guò)濾和蒸發(fā)，得到7.3g(36.0％)(+)-(B)-4-氨基-α-(3-氯苯基)-3-硝基苯甲胺(中間體6)。e)將中間體(6)(7.3g)、2-異硫氰酸根合-1，1-二甲氧基乙烷(4.8g)和甲醇(75ml)的混合物攪拌與回流2小時(shí)。將混合物蒸發(fā)成油狀殘余物，得到11g(100％)(+)-(B)-N-[(4-氨基-3-硝基苯基)(3-氯苯基)甲基]-N′-(2，2-二甲氧乙基)硫脲(中間體7)。f)將中間體(7)(11g)、碘代甲烷(2ml)和碳酸鉀(4.97g)的混合物在室溫下攪拌48小時(shí)。將溶劑蒸發(fā)，殘余物溶在二氯甲烷中用水洗。將有機(jī)層干燥、過(guò)濾、蒸發(fā)，得到11.4g(+)-(S)-甲基(B)-N-[(4-氨基-3-硝基苯基)(3-氯苯基)甲基]-N′-(2，2-二甲氧基乙基)氨甲酰硫代亞氨酸酯，為油狀殘余物(中間體8)。g)在0℃向中間體(8)(11.4g)中加入硫酸(100ml)(預(yù)冷于5℃)。將混合物在5℃攪拌至完全溶解，然后溫?zé)嶂潦覝?。在攪?小時(shí)后，將溶液倒在冰上，用氫氧化銨將其堿化。水溶液用乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層干燥，過(guò)濾、蒸發(fā)。殘余物用柱狀色譜法純化(洗脫液CH2Cl2/CH3OH 98∶2)。將所要級(jí)分的洗脫液蒸發(fā)，得到3.7g(38.0％)(+)-(B)-4[(3-氯苯基)[2-(甲硫基)-1H-咪唑-1-基]甲基]-2-硝基苯胺(中間體9)。h)將中間體(9)(6.2g)、阮內(nèi)鎳(6g)和甲醇(100ml)的混合物在室溫于2巴下氫化2小時(shí)。在吸收了計(jì)算數(shù)量的氫之后，濾出催化劑。濾液(+)-(B)-4-[(3-氯苯基)[2-(甲硫基)-1H-咪唑-1-基]甲基]-1，2-苯二胺(中間體10)用于下一步驟。i)將中間體(10)(5.7g)、甲基酰亞胺酰胺一乙酸鹽(5.2g)和甲醇(100ml)的混合物攪拌回流3小時(shí)。將反應(yīng)混合物蒸發(fā)，殘余物溶在二氯甲烷中用碳酸氫鈉(10％)洗。將有機(jī)層干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)。油狀殘余物用柱狀色譜法純化(洗脫液CH2Cl2/CH3OH，95∶5)。將所要級(jí)分的洗脫液蒸發(fā)，得到4.9g(83.7％)(+)-(B)-5-[(3-氯苯基)[2-(甲硫基)-1H-咪唑-1-基]甲基]-1H-苯并咪唑(中間體11)。B.最終化合物的制備實(shí)施例3將中間體(2)(185g)在水(512ml)中的混合物于20℃攪拌。加入289ml鹽酸。再加入61.17ml甲酸(85％)，將此混合物熱至55℃。將反應(yīng)混合物在55℃攪拌3小時(shí)，然后冷卻到20℃。加入二氯甲烷(1223ml)。在低于25℃的溫度下逐滴加入氫氧化銨(730ml)。分離出的有機(jī)層用水(500ml)洗，干燥、過(guò)濾，蒸走溶劑，得到152.88g(108.5％)產(chǎn)物。將一份樣品在55℃干燥18小時(shí)，得到3.18g(+)-(B)-5-[(3-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-1H-苯并咪唑；熔點(diǎn)113.7℃； ＝+43.46°(c＝1％，在甲醇中)(化合物1)。實(shí)施例4將中間體(11)(4.9g)、阮內(nèi)鎳(2g)和乙醇(100ml)的混合物攪拌回流5天，其間每天再加入一份阮內(nèi)鎳(2g)。濾出催化劑并用二氯甲烷沖洗。將濾液蒸發(fā)，殘余物用柱狀色譜法純化兩次(硅膠CH2Cl2/CH3OH 95∶5；CH2Cl2/CH3OH/NH4OH 80∶20∶3)。將所要級(jí)分的洗脫液蒸發(fā)，殘余物在2-丙醇和乙醇中轉(zhuǎn)化成鹽酸鹽。將該鹽自2-丁酮中重結(jié)晶，得到1.8g(37.2％)(+)-(B)-5-[(3-氯苯基)(1H-咪唑-1-基)甲基]-1H-苯并咪唑一鹽酸鹽；熔點(diǎn)212.1℃； ＝+42.43°(c＝1％，在乙醇中)(化合物2)。實(shí)施例5將化合物(1)(149.7g)溶在2-丁酮(2424ml)中。在20℃于2小時(shí)內(nèi)加入鹽酸在2-丙醇(82.6ml)和2-丁酮(727ml)中的混合物。將反應(yīng)混合物在20℃攪拌16小時(shí)。濾出沉淀，用2-丁酮(242ml)洗，80℃真空干燥，得到147.5g(99.3％)(+)-(B)-5-[(3-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-1H-苯并咪唑一鹽酸鹽；熔點(diǎn)214.5℃； ＝+36.20°(c＝1％，在甲醇中)(化合物2)。實(shí)施例6將化合物(1)(0.72g)在5.1ml變性乙醇中的混合物在20℃攪拌直至均勻。加入(E)-2-丁烯二酸(0.54g)。在20℃攪拌混合物18小時(shí)，然后冷卻至0-5℃，形成沉淀。加入更多的變性乙醇(2ml)，將混合物在20℃攪拌2小時(shí)。濾出沉淀，用乙醇洗(3ml，變性乙醇)，50℃真空干燥，得到0.26g(23.4％)(B)-5-[(3-氯苯基)-1H-咪唑-1-基甲基]-1H-苯并咪唑(E)-2-丁烯二酸鹽(2∶3)。乙醇化物(2∶1)，熔點(diǎn)111.2℃(化合物3)。C.藥理實(shí)施例實(shí)施例7維生素A酸在人舌鱗狀上皮癌細(xì)胞中的代謝將人舌鱗狀癌細(xì)胞(SCC 25)接種在6孔板中，于37℃生長(zhǎng)4天。所用的培養(yǎng)基由補(bǔ)充了氫化可的松和胎牛血清的Hans′F12及Dulbecco的改性Eagle培養(yǎng)基1∶1混合物組成。生長(zhǎng)4天后，用無(wú)培養(yǎng)基的角化細(xì)胞血清代替培養(yǎng)基，融合的細(xì)胞再孵育3天。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前16小時(shí)將培養(yǎng)基復(fù)新。為測(cè)定試驗(yàn)化合物對(duì)維生素A酸代謝作用的影響，向培養(yǎng)基中加入試驗(yàn)化合物和/或2μl二甲基亞砜(DMSO)，然后加入1μCi[11，12-3H]-維生素A酸開(kāi)始反應(yīng)。在37℃孵育3小時(shí)后，提取培養(yǎng)基加細(xì)胞，按Van Wauwe等所述(J.Pharmacol.Exp.Ther.(1992)，261773-779)用HPLC分析[11，12-3H]-維生素A酸。這一試驗(yàn)的結(jié)果表明，化合物2(即(+)-利羅唑的HCl鹽)抑制了維生素A酸在人舌鱗狀癌細(xì)胞中的羥基化，IC50值為1.0μM，外消旋利羅唑的HCl鹽的IC50值為2.9μM，(-)-利羅唑鹽酸鹽幾乎無(wú)效。實(shí)施例8無(wú)毛鼠中耳廓表皮增生的引發(fā)類(lèi)維生素A的皮膚效應(yīng)之一是它們?cè)诨铙w內(nèi)引發(fā)表皮增生的有效能力(Conner，Models in dermatology 1987，V3 Karger，Basel，1987，p.23-28)。因此，對(duì)利羅唑及其兩種立體化學(xué)異構(gòu)體與全反式維生素A酸引發(fā)無(wú)毛鼠內(nèi)表皮增生的能力作了比較。
雌性無(wú)毛鼠(重25-30g)每天一次連續(xù)14天口服無(wú)效對(duì)照劑(PEG 200)、全反式維生素A酸或試驗(yàn)化合物。在第15天殺死動(dòng)物，收集耳組織，從中制備2μm厚的切片用于形態(tài)分析。測(cè)定活的表皮的總厚度，用無(wú)效對(duì)照劑處理的小鼠的表皮由薄的上皮構(gòu)成，相反，用RA或試驗(yàn)化合物處理過(guò)的動(dòng)物的表皮是增生的。結(jié)果列在表1中。
表1
實(shí)施例9毒性試驗(yàn)使狗逐日服用口服劑量的試驗(yàn)化合物一個(gè)月，試驗(yàn)化合物為化合物2及(-)-利羅唑的鹽酸鹽。在劑量為10mg/kg/天時(shí)，大多數(shù)狗組織中化合物2的濃度比(-)-利羅唑鹽酸鹽的濃度至少低10倍。D.組合物實(shí)施例以下的配方示例表示了適合根據(jù)本發(fā)明對(duì)動(dòng)物和人進(jìn)行全身或局部用藥的典型的藥物組合物。
這些實(shí)施例中使用的“活性組分”(A.I.)涉及式(1)化合物或其可藥用的酸加成鹽。實(shí)施例10口服滴劑在60～80℃將500g A.I.溶在0.5L 2-羥基丙酸和1.5L聚乙二醇中。在冷卻到30～40℃之后加入35L聚乙二醇，充分?jǐn)嚢柙摶旌衔?。然后加?750g糖精鈉在2.5L純水中的溶液，在攪拌下加入2.5L可可香料和適量的聚乙二醇至體積為50L，形成含10mg/ml A.I.的口服滴劑溶液。將形成的溶液裝入合適的容器中。實(shí)施例11口服溶液將9g 4-羥基苯甲酸甲酯和1g 4-羥基苯甲酸丙酯溶在4L沸騰的純水中。在3L這樣的溶液中先溶解10g 2，3-二羥基丁二酸，然后溶解20g A.I.。后一溶液與前一溶液的剩余部分合并，向其中加入12L 1，2，3-丙三醇及3L山梨醇的70％溶液。將40g糖精鈉溶在0.5L水中，加入2ml覆盆子香精和2ml鵝莓香精。將后一溶液與前一溶液合并，加入適量水至體積為20L，形成每茶匙(5ml)含5mg A.I.的口服溶液。將所形成的溶液裝入合適的容器中。實(shí)施例12膠囊將20g A.I.、6g十二烷硫酸鈉、56g淀粉、56g乳糖、0.8g膠體二氧化硅和1.2g硬脂酸鎂在一起激烈攪拌。隨后將所形成的混合物裝入1000只合適的硬明膠膠囊中，每只中含20mg A.I.。實(shí)施例13薄膜包衣片劑片芯的制備將100g A.I.、570g乳糖和200g淀粉充分混合，然后用5g十二烷基硫酸鈉和10g聚乙烯吡咯烷酮(Kollidon-K90)在約200ml水中的溶液潤(rùn)濕。將濕的粉末混合物過(guò)篩，干燥，再過(guò)篩。然后加入100g微晶纖維素(Avicel)和15g氫化植物油(Sterotex)。將其充分混合，壓制成片，得到10000片，每片含10mg活性組分。包衣向10g甲基纖維素(Methocel 60HG)在75ml變性酒精中的溶液里加入5g乙基纖維素(Ethocel 22 CPS)在150ml二氯甲烷中的溶液。隨后加入75ml二氯甲烷和2.5ml 1，2，3-丙三醇。將10g聚乙二醇熔化并溶在75ml二氯甲烷中。將后面這個(gè)溶液加到前面的溶液中，然后加入2.5g十八烷酸鎂、5g聚乙烯吡咯烷酮和30ml濃的色料懸浮液(OpasprayK-1-2109)，將整個(gè)混合物均化。用這樣形成的混合物在包衣裝置中將片芯包衣。實(shí)施例14可注射的溶液將1.8g 4-羥基苯甲酸甲酯和0.2g 4-羥基苯甲酸丙酯溶在約0.5L沸騰的注射用水中。在冷卻到約50℃后，在攪拌下加入4g乳酸、0.05g丙二醇和4g A.I.。將溶液冷卻到室溫，補(bǔ)加適量的注射用水至體積為1L。得到含4mg/ml A.I.的溶液。將溶液過(guò)濾消毒(美國(guó)藥典XVII p.811)，裝入滅菌的容器中。實(shí)施例15栓劑將3g A.I.溶在3g 2，3-二羥基丁二酸在25ml丙二醇400中的溶液里。將12g表面活性劑(Span)和甘油三酯(Witepsol 555，適量至300g)一起熔化。將后一混合物與前面的溶液充分混合。這樣形成的混合物倒入溫度為37～38℃的模具中，形成100只栓劑，每只含30mg活性組分。實(shí)施例162％乳油將75mg硬脂醇、2mg十六烷醇、20mg失水山梨醇單硬脂酸酯和10mg十四烷酸異丙酯加到雙層壁的夾套容器中，加熱至混合物完全熔化。將此混合物加到一份另外制備的由純水、200mg丙二醇和15mg聚山梨酸酯60構(gòu)成的70至75℃的混合物中，其間對(duì)液體使用均化器。在連續(xù)攪拌下令所形成的乳狀液冷卻至25℃以下。隨后將20mg A.I.、1mg聚山梨酸酯80和純水及2mg無(wú)水亞硫酸鈉在純水中的溶液于連續(xù)攪拌下加到該乳狀液中，將含1g A.I.的乳油均化裝入合適的管中。實(shí)施例172％局部用凝膠在攪拌下向200mg羥丙基β-環(huán)糊精在純水中的溶液里加入20mgA.I.。加入鹽酸直至完全溶解，然后加NaOH至pH為6.0。將此溶液于攪拌下加到10mg鹿角菜膠PJ在50mg丙二醇中的分散體中。在緩慢的混合下將混合物熱至50℃，令其冷卻到約35℃，隨后加入50mg乙醇(95％v/v)。加入適量的剩余純水至1g，將混合物混合均勻。實(shí)施例182％局部用乳油在攪拌下向200mg羥丙基β-環(huán)糊精在純水中的溶液里加入20mgA.I.。加入鹽酸直至完全溶解，然后加NaOH至pH為6.0。在攪拌下加入50mg甘油和35mg聚山梨酸酯60，將混合物熱至70℃。在緩慢攪拌下將所形成的混合物加到100mg礦物油、20mg硬脂醇、20mg十六烷醇、20mg甘油單硬脂酸酯和15mg山梨酸酯60的70℃的混合物中。在冷卻至25℃以下之后，加入適量的剩余純水至1g，將混合物混合均勻。實(shí)施例192％脂質(zhì)體制劑將2g A.I.微細(xì)粉、20g卵磷脂、5g膽固醇和10g乙醇的混合物在55-60℃加熱攪拌直至完全溶解，將它在均化作用下加到0.2g羥苯甲酸甲酯、0.02g羥苯甲酸丙酯、0.15g EDTA二鈉鹽和0.3g氯化鈉的純水溶液中。加入總量為100g的0.15g羥丙基甲基纖維素/純水，繼續(xù)混合直至溶脹完全。實(shí)施例202％脂質(zhì)體制劑將10g卵磷脂和1g膽固醇在7.5g乙醇中的混合物在40℃攪拌和加熱，直到完全溶解。將2g A.I.微細(xì)粉在40℃加熱溶于純水中。將醇溶液在10分鐘內(nèi)于均化作用下慢慢加到水溶液中。于攪拌下加入1.5g羥丙基甲基纖維素的純水溶液，直到溶脹完全。用1N NaOH將所形成的溶液調(diào)節(jié)至pH5.0，用余下的純水稀釋至100g。
權(quán)利要求
1.式(1)的右旋化合物或其可藥用的酸加成鹽
2.根據(jù)權(quán)利要求1的一種化合物，其中該化合物是(+)-5-[3-氯苯基]-1H-咪唑-1-基甲基]-1H-苯并咪唑鹽酸鹽(1∶1)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的一種化合物，其中該化合物是(+)-5-[3-氯苯基]-1H-咪唑-1-基甲基]-1H-苯并咪唑(E)-2-丁烯二酸鹽(2∶3)。
4.用于治療角化病的一種組合物，其中包含有一種可藥用的載體和治療上有效數(shù)量的權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的化合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的一種組合物，其中該組合物的形式適合局部用藥。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的一種組合物，其中該組合物還含有有效數(shù)量的維生素A酸、它的衍生物或它們的立體化學(xué)異構(gòu)體。
7.使用權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的化合物作為藥物。
8.使用權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的化合物制造用于治療角化癥的藥物。
9.使用權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的化合物制造用于治療皮膚病學(xué)領(lǐng)域的藥物。
10.使用權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的化合物制造用于治療痤瘡、鱗癬或牛皮癬的藥物。
11.一種旋光對(duì)映純的式(B)-(II)中間體或其酸加成鹽。
12.一種制備權(quán)利要求1的化合物的方法，其特征在于a)在適當(dāng)?shù)娜軇┲杏靡环N旋光對(duì)映純的手性酸，例如7，7-二甲基-2-氧代雙酸[2.2.1]庚烷-1-甲磺酸，將式(III)中間體拆解；b)將這樣得到的旋光對(duì)映純的式(B)-(III)中間體還原； c)用甲酰亞胺酰胺、甲酸或其官能性衍生物將旋光對(duì)映純的式(B)-(III)中間體環(huán)化，得到旋光對(duì)映純的式(I)化合物； 如果需要，將式(I)化合物用合適的酸處理，轉(zhuǎn)化成可藥用的酸加成鹽，或者反過(guò)來(lái)，用堿將酸加成鹽轉(zhuǎn)化成游離堿形式。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)的新的旋光對(duì)映純的利羅唑(Liarozole)右旋異構(gòu)體。這些化合物特別適合治療以正常的、腫瘤前的或腫瘤的上皮細(xì)胞的增殖加強(qiáng)和/或反常分化為特征的病癥。這些化合物在皮膚病學(xué)領(lǐng)域特別有用。還公開(kāi)了含所述新化合物的組合物，制備這些新化合物的方法，以及使用所述的化合物治療上述病癥的方法。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1141042SQ95191684
公開(kāi)日1997年1月22日 申請(qǐng)日期1995年2月10日 優(yōu)先權(quán)日1994年2月18日
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