專利名稱：用于成象的锝-99m標(biāo)記的肽的制作方法
發(fā)明的背景1.發(fā)明的領(lǐng)域本發(fā)明涉及放射性診斷試劑和肽，以及標(biāo)記的放射性診斷劑的制備方法。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及肽、肽的制備方法和用于制備這類肽的試劑盒、以及使用這類肽使哺乳動(dòng)物體內(nèi)的各部位成象的方法，所說(shuō)的哺乳動(dòng)物體使用锝-99m(Tc-99m)通過(guò)放射性結(jié)合基團(tuán)標(biāo)記，所說(shuō)的放射性鍵合基團(tuán)與Tc-99m形成中性配合物。
2.現(xiàn)有技術(shù)的描述在核藥物領(lǐng)域中，有時(shí)需要通過(guò)檢測(cè)少量體內(nèi)給藥的放射性標(biāo)記示蹤化合物(稱之為放射性指示劑或放射性藥物)的分布來(lái)定位某些疾病癥狀或評(píng)估疾病癥狀的嚴(yán)重程度。用于檢測(cè)這些放射性藥物的方法通常被稱之為成象方法或放射性成象方法。
在放射性成象中，放射性標(biāo)記是發(fā)射γ射線的放射性核素，其中使用檢測(cè)γ射線的照相機(jī)定位放射性指示劑(這種方法經(jīng)常被稱之為閃爍照相法)。成象部位之所以可檢測(cè)是因?yàn)檫x擇使用了可在病變部位定位的放射性指示劑(稱為正反差法)或特定地選擇使用了不能在病變部位定位(稱為負(fù)反差法)的放射性指示劑。
必須考慮各種不同的因素以使人體放射性成象達(dá)到最佳化。為了使檢測(cè)的效率達(dá)到最高，優(yōu)選使用發(fā)射γ射線的能量為100至200keV的放射性核素。為了使病人獲得最少量的放射性輻射，放射性核素的物理半衰期應(yīng)短至僅能滿足成象過(guò)程之所需。為了能夠在每天及在每天的任何一個(gè)時(shí)間進(jìn)行病理檢查，優(yōu)選在診所地點(diǎn)始終有一個(gè)可獲得的放射性核素源。
各種已知的放射性核素包括67Ga、99mTc(Tc-99m)、111In、123I、125I和169Yb都可用于放射性成象。其中Tc-99m是優(yōu)選的放射性核素，因?yàn)槠浒l(fā)出能量為140keV的γ射線，且具有6小時(shí)的物理半衰期以及使用鉬-99/锝-99m發(fā)生器易于當(dāng)?shù)孬@得。
使用放射性標(biāo)記肽的成象方法，其感光性要高于現(xiàn)有技術(shù)中使用其它已知放射性藥物進(jìn)行放射性成象的感光性。因?yàn)椋派湫噪牡奶禺愋越Y(jié)合使放射性信號(hào)集中在檢查所感興趣的區(qū)域。與靶向物特異性結(jié)合的小分子合成肽可以優(yōu)選地用作放射性指示劑的基質(zhì)。這是因?yàn)?.可用化學(xué)方法合成這類肽(不再要求其在生物系統(tǒng)中如細(xì)菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中制備，或者要求其從生物衍生的物質(zhì)如蛋白質(zhì)片段中分離)；2.它們是小分子，因而，可迅速地從體內(nèi)除去那些與非靶向物結(jié)合的放射性指示劑，由此減少了背景(非靶向物)放射性和更好地確定靶向物；3.小分子的肽可以容易地經(jīng)化學(xué)處理使其在特異性結(jié)合部位的親合力達(dá)到最大。
小分子易于合成的標(biāo)記肽優(yōu)選用作日常使用的放射性藥物。顯然，目前仍需要有能直接注入病人體內(nèi)并通過(guò)在疾病部位的定位使疾病部位成象的小分子合成的標(biāo)記肽。由于Tc-99m可用作成象用放射性核素的特性和特異性結(jié)合的小分子合成肽作為放射性指示劑分子的效用，Tc-99m標(biāo)記的小分子合成肽作為γ射線閃爍照相法的放射性指示劑明顯具有許多優(yōu)點(diǎn)。
現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)報(bào)道了放射性標(biāo)記的肽。
Ege等人在美國(guó)專利4,832,940中教導(dǎo)了用于定位T-淋巴細(xì)胞成象的放射性標(biāo)記的肽。
Olexa等人，于1982年，在歐洲專利申請(qǐng)823017009中公開(kāi)了選自從交聯(lián)的血纖維蛋白分離得到的片段E1和從交聯(lián)的血纖維蛋白分離得到的片段E2的藥學(xué)上可接受的放射性標(biāo)記的肽，和具有片段E1和片段E2之間的氨基酸序列中間體的肽。
Ranby等人，于1988年，在PCT/US88/02276中公開(kāi)了檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)血纖維蛋白的方法，該方法包括將放射性標(biāo)記的化合物共價(jià)結(jié)合到血纖維蛋白上。
Hadley等人，于1988年，在PCT/US88/03318中公開(kāi)了包括如下步驟的檢測(cè)體內(nèi)血纖維蛋白-血小板凝塊的方法(a)給病人施用標(biāo)記的稀釋溶解血栓蛋白，其中標(biāo)記選擇性地連接在血纖維蛋白結(jié)合區(qū)域之外的那部分溶解血栓蛋白上；(b)檢測(cè)病人體內(nèi)標(biāo)記的溶解血栓蛋白的分布狀況。
Lees等人，于1989年，在PCT/US89/01854中教導(dǎo)了用于動(dòng)脈成象的標(biāo)記肽。
Sobel，于1989年，在PCT/US89/02656中公開(kāi)了使用標(biāo)記的酶失活組織纖維蛋白溶酶原激活劑定位動(dòng)物體內(nèi)一個(gè)或多個(gè)血栓位置的方法。
Stuttle，于1990年，在PCT/GB90/00933中公開(kāi)了含有3至10個(gè)包含精氨酸-甘氨酸-天門(mén)冬氨酸(RGD)序列的氨基酸并能結(jié)合到體內(nèi)RGD結(jié)合部位上的放射性標(biāo)記的肽。
Maraganore等人，于1991年，在PCT/US90/04642中公開(kāi)了放射性標(biāo)記的血栓抑制劑，其包含(a)抑制劑部分；(b)連接部分；和(c)陰離子結(jié)合位置部分。
Rodwell等人，于1991年，在PCT/US91/03116公開(kāi)了“分子識(shí)別單元”與“效應(yīng)物域”的共軛物。
Tubis等人，于1968年，在Int.J.Appl.Rad.Isot.19835-840中描述了用锝-99m標(biāo)記肽的方法。
Sundrehagen，于1983年.在Int.J.Appl.Rad.Isot.341003中描述了用锝-99m標(biāo)記多肽的方法。
在現(xiàn)有技術(shù)中，螯合劑在放射性標(biāo)記多肽方法中的應(yīng)用以及使用Tc-99m標(biāo)記肽和多肽的方法都是已知的，并且公開(kāi)在共同待審的美國(guó)專利申請(qǐng)07/653,012和07/807,062中，這兩篇專利申請(qǐng)?jiān)诖艘米鳛閰⒖嘉墨I(xiàn)。
盡管Tc-99m最適宜用于放射性成象，但是，目前對(duì)于Tc-99m化學(xué)特性的研究還不象對(duì)其它元素化學(xué)特性的研究那樣全面。為此，至今尚未大量使用由Tc-99m標(biāo)記的方法。Tc-99m通常是以Tc-99m的高锝酸鹽(TcO-4，锝為+7價(jià)氧化態(tài))的形式獲得，一般從鉬-99/锝-99m發(fā)生器中得到。但是，高锝酸鹽不能良好地與其它化合物結(jié)合。因此，為了放射性標(biāo)記肽，必需將Tc-99m的高锝酸鹽轉(zhuǎn)化成其它的形式。由于锝在水溶液中不能形成穩(wěn)定的離子，所以必需將其以配位化合物的形式置于一種溶液中，所說(shuō)的溶液具有足夠的穩(wěn)定性以阻止其分解并最終使Tc-99m轉(zhuǎn)化成不溶的二氧化锝或再轉(zhuǎn)化成高锝酸鹽。
上述這類Tc-99m的配位化合物(以+1至+6價(jià)氧化態(tài))是已知的。但是，許多這類配位化合物由于其分子形狀的原因而不適合用于放射性標(biāo)記。為了進(jìn)行放射性標(biāo)記，特別有利的是將配位化合物制成螯合物，在該螯合物中通過(guò)單一的螯合配位體提供所有圍繞锝離子的供電子團(tuán)。由此，通過(guò)螯合劑和肽之間的單一連接體使螯合的Tc-99m共價(jià)結(jié)合到肽上。
這些配位體有時(shí)被稱為具有螯合部分和連接部分的雙功能螯合劑。這類化合物在現(xiàn)有技術(shù)中也是已知的。
Byme等人在美國(guó)專利4,434,151中描述了高半胱氨酸硫羥內(nèi)酯(thiolactone)衍生的雙功能螯合劑，該螯合劑能夠使放射性核素偶合到含有氨基末端的化合物上，所說(shuō)的含有氨基末端的化合物能夠在待成象的器官或組織中定位。
Fritzberg，在美國(guó)專利4,434,151中描述了一系列以2，3-二(巰基乙酰氨基)丙酸鹽為基質(zhì)的锝螯合劑。
Byme等人在美國(guó)專利4,571,430中描述了用于螯合放射性核素的新的高半胱氨酸硫羥內(nèi)酯雙功能螯合劑，，該螯合劑能夠使放射性核素偶合到含有氨基末端的化合物上，所說(shuō)的含有氨基末端的化合物能夠在待成象的器官或組織中定位。
Byme等人在美國(guó)專利4,575,556中描述了用于螯合放射性核素的新的高半胱氨酸t(yī)硫羥內(nèi)酯雙功能螯合劑，該螯合劑能夠使放射性核素偶合到含有氨基末端的化合物上，所說(shuō)的含有氨基末端的化合物能夠在待成象的器官或組織中定位。
Davison等人在美國(guó)專利4,673,562中描述了主要用作腎功能監(jiān)視劑的二酰氨基-二硫代-配位體的锝螯合物和其鹽。
Nicolotti等人在美國(guó)專利4,861,869中描述了用于與生物分子如抗體形成共軛物的雙功能偶合劑。
Fritzberg等人在美國(guó)專利4,965,392中描述了用于標(biāo)記蛋白質(zhì)的各種S-保護(hù)的以巰基乙?；拾滨；拾彼釣榛|(zhì)的螯合劑。
Fritzberg等人在歐洲專利申請(qǐng)86100360.6中描述了用于制備锝標(biāo)記的成象試劑的二巰基、二氨基、或二酰氨基羧酸或胺配合物。
Dean等人，于1989年，在PCT/US89/02634中描述了用于放射性標(biāo)記蛋白質(zhì)和肽的雙功能偶合劑。
Flanagan等人在歐洲專利申請(qǐng)90306428.5中公開(kāi)了通過(guò)一組有機(jī)螯合分子用Tc-99m對(duì)合成肽片段進(jìn)行標(biāo)記的方法。
Albert等人在歐洲專利申請(qǐng)WO91/01144中公開(kāi)了使用放射性標(biāo)記的肽進(jìn)行放射性成象的方法，所說(shuō)的放射性標(biāo)記的肽與生長(zhǎng)因子、激素、干擾素和細(xì)胞分裂素有關(guān)并含有共價(jià)連接在放射性核素螯合基團(tuán)上的特異性識(shí)別肽。
Dean在共同待審的美國(guó)專利申請(qǐng)07/653,012中教導(dǎo)了用于制備肽的試劑和方法，所說(shuō)的肽含有共價(jià)連接在用于體內(nèi)放射性成象的特異性結(jié)合肽上的Tc-99m螯合基團(tuán)，該美國(guó)專利申請(qǐng)?jiān)诖俗鳛閰⒖嘉墨I(xiàn)使用。
Baidoo & Lever于1990年，在Bioconjugate Chem，1132-237中描述了使用提供陽(yáng)離子锝配合物的雙氨雙巰基基團(tuán)標(biāo)記生命分子的方法。
可以簡(jiǎn)單地通過(guò)加入含巰基部分如半胱氨酸或巰基乙酸來(lái)標(biāo)記肽。這類方法在現(xiàn)有技術(shù)中已有描述。
Schochat等人在美國(guó)專利5,061,641中公開(kāi)了對(duì)含有至少一個(gè)“懸掛的”巰基的蛋白質(zhì)進(jìn)行直接放射性標(biāo)記的方法。
Dean等人在共同待審的美國(guó)專利申請(qǐng)07/807,062中教導(dǎo)了通過(guò)含有游離巰基的連接基團(tuán)來(lái)放射性標(biāo)記肽的方法，該美國(guó)專利申請(qǐng)?jiān)诖俗鳛閰⒖嘉墨I(xiàn)使用。
Goedemans等人在PCT申請(qǐng)WO89/07456中描述了使用環(huán)硫醇化合物，特別是2-亞氨基硫醇和其衍生物放射性標(biāo)記蛋白質(zhì)的方法。
Thornback等人在歐洲專利申請(qǐng)90402206.8中描述了使用含有巰基的化合物，特別是2-亞氨基硫醇進(jìn)行放射性標(biāo)記的蛋白質(zhì)的制備方法和應(yīng)用。
Stuttle在PCT申請(qǐng)WO90/15818中描述了Tc-99m標(biāo)記含有RGD的低聚肽的方法。
Burns等人，于1985年，在歐洲專利申請(qǐng)85104959.3中描述了用于制備少量中性Tc-99m腦成象劑的雙胺雙硫醇化合物。
Kung等人于1986年，在歐洲專利申請(qǐng)86105920.2中描述了用于制備少量中性Tc-99m成象劑的雙胺雙硫醇化合物。
Bergstein等人于1988年，在歐洲專利申請(qǐng)88102252.9中描述了用于制備少量中性Tc-99m腦成象劑的雙胺雙硫醇化合物。
Bryson等人于1988年，在Inorg.Chem.272154-2161中描述了對(duì)于過(guò)量配位體呈不穩(wěn)定狀態(tài)的锝-99的中性配合物。
Misra等人于1989年，在Tet.Let.301885-1888中描述了用于標(biāo)記的雙胺雙硫醇化合物。
Bryson等人于1990年，在Inorg.Chem.292948-2951中描述了可以生成中性Tc-99m配合物的含有二個(gè)酰氨基、一個(gè)巰基和一個(gè)取代的吡啶基的螯合劑。
Taylor等人于1990年，在J.Nucl.Med.31885(摘要)中描述了用于腦成象的中性Tc-99m配合物。
使用螯合劑對(duì)肽進(jìn)行放射性標(biāo)記，和用Tc-99m標(biāo)記肽的方法在現(xiàn)有技術(shù)中是已屬已知技術(shù)，并已公開(kāi)在下面共同待審的美國(guó)專利申請(qǐng)中07/653,012、07/807,062、07/871,282、07/886,752、07/893,981、07/955,466、08/019,864、08/073,577、08/210,822、08/236,402和08/241,625。為使血栓成象而用作閃爍照相成象劑的標(biāo)記肽在現(xiàn)有技術(shù)中也是已知的，并已公開(kāi)在下面共同待審的美國(guó)專利申請(qǐng)中07/886,752、07/893,981和08/044,825；以及公開(kāi)在國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/US92/00757、PCT/US92/10716、PCT/US93/02320、PCT/US93/03687、PCT/US93/04794、PCT/US93/05372、PCT/US93/06029、PCT/US93/09387、PCT/US94/01894、PCT/US94/03878和PCT/US94/05895。上述每篇文獻(xiàn)以其整體在此被引用作為參考文獻(xiàn)。
發(fā)明的簡(jiǎn)要說(shuō)明本發(fā)明提供了放射性標(biāo)記肽的閃爍照相成象劑。本發(fā)明的放射性標(biāo)記肽含有與體內(nèi)的靶向物特異性結(jié)合的肽并共價(jià)連接到放射性標(biāo)記結(jié)合部分，其中放射性標(biāo)記結(jié)合部分與放射性同位素相結(jié)合。本發(fā)明一個(gè)特有的優(yōu)點(diǎn)就是放射性標(biāo)記結(jié)合部分共價(jià)連接在含有肽的氨基酸殘基的側(cè)鏈上。
由于下述的多種原因，上述這種共價(jià)連接模式十分有利。第一、與肽的氨基酸組分的側(cè)鏈形成共價(jià)連接避免了共價(jià)連接的放射性標(biāo)記結(jié)合部分對(duì)于特異性結(jié)合肽的特異性結(jié)合特性的干擾。第二、這種連接方式可以使環(huán)肽(其定義是指端部不含有游離的氨基或羧基)與本申請(qǐng)公開(kāi)的用作閃爍照相成象劑的放射性標(biāo)記結(jié)合部分一起使用。第三、與氨基酸組分的側(cè)鏈形成的共價(jià)連接可以使照相檢查更為靈活地選取使用各種本發(fā)明的閃爍照相成象劑以最大限度地提高效率和降低抗原性等。與氨基酸側(cè)鏈的共軛作用使得放射性標(biāo)記結(jié)合部分可以在肽的合成過(guò)程中以氨基酸共軛物的形式加入肽中，或在肽的合成結(jié)束之后加入肽中。最后，環(huán)肽公知是抗外蛋白酶消化的，由此而將體內(nèi)的這種提高了穩(wěn)定性的肽結(jié)合至本發(fā)明的閃爍照相成象劑中。
本發(fā)明的第一個(gè)方面是提供可用于哺乳動(dòng)物體內(nèi)各部位成象的放射性標(biāo)記的肽。所說(shuō)的肽包含具有氨基酸序列和與該肽共價(jià)連接的放射性標(biāo)記結(jié)合部分的特異性結(jié)合的肽。另外，放射性標(biāo)記結(jié)合部分共價(jià)連接在包含該肽的氨基酸的側(cè)鏈上。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，放射性標(biāo)記結(jié)合部分共價(jià)連接在具有包含胺或硫醇的側(cè)鏈的氨基酸側(cè)鏈上，氨基酸最優(yōu)選的是賴氨酸或高半胱氨酸。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，放射性標(biāo)記是锝-99m。
本發(fā)明的第二個(gè)方面是提供一種用于制備哺乳動(dòng)物體內(nèi)各部位成象用的閃爍照相成象劑的試劑，所說(shuō)的試劑包含特異性結(jié)合的肽，該特異性結(jié)合的肽中放射性標(biāo)記結(jié)合部分通過(guò)肽的氨基酸的氨基酸側(cè)鏈共價(jià)連接在該肽上，所說(shuō)的放射性結(jié)合部分具有下面的通式IC(pgp)s-(aa)-C(pgp)s其中(pgp)s是保護(hù)的半胱氨酸，(aa)是任何不含硫羥基的初級(jí)α-或β-氨基酸。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，氨基酸是甘氨酸。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種用于制備哺乳動(dòng)物體內(nèi)各部位成象用的閃爍照相成象劑的試劑，所說(shuō)的試劑包含特異性結(jié)合的肽，其中放射性標(biāo)記結(jié)合部分通過(guò)肽的氨基酸的氨基酸側(cè)鏈共價(jià)連接在該肽上，所說(shuō)的放射性結(jié)合部分具有下面的通式IIA-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X其中A是H、HOOC、H2NOC、(氨基酸或肽)-NHOC、(氨基酸或肽)-OOC或R4；B是H、SH或-NHR3，-N(R2)-(氨基酸或肽)或R4；Z是H或R4；X是SH或-NHR3、-N(R3)-(氨基酸或肽)或R4；R1、R2、R3和R4分別為H或直鏈或支鏈低級(jí)烷基或低級(jí)環(huán)烷基；n是0、1或2；其中(肽)是2至約10個(gè)氨基酸的肽；和；(1)當(dāng)B為-NHR3或-N(R3)-(氨基酸或肽)時(shí)，X是SH和n是1或2；(2)其中當(dāng)X為-NHR3或-N(R3)-(氨基酸或肽)時(shí)，B是SH和n是1或2；(3)當(dāng)B為H或R4時(shí)，A是HOOC、H2NOC、(氨基酸或肽)-NHOC、(氨基酸或肽)-OOC，X是SH和n是0或1；(4)當(dāng)A為H或R4，而其中的B為SH時(shí)，X是-NHR3或-N(R3)-(氨基酸或肽)和當(dāng)X是SH時(shí)，B是-NHR3或-N(R3)-(氨基酸或肽)；(5)當(dāng)X為H或R4時(shí)，A是HOOC、H2NOC、(氨基酸或肽)-NHOC、(氨基酸或肽)-OOC和B是SH；(6)當(dāng)Z為甲基時(shí)，X是甲基，A是HOOC、H2NOC、(氨基酸或肽)-NHOC、(氨基酸或肽)-OOC和B是SH和n是0；和(7)當(dāng)B為SH和X為SH時(shí)，n不為0；以及其中硫羥基部分為還原形式和其中(氨基酸)是任何不含硫羥基的初級(jí)α-或β-氨基酸。
在本發(fā)明這一方面的具體實(shí)施方案中，放射性標(biāo)記結(jié)合的部分具有下面的通式IIa.-(氨基酸)1-(氨基酸)2-{A-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X}IIb.-{A-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X}-(氨基酸)1-(氨基酸)2IIc.-(伯α，ω-或β，ω-二氨基酸)-(氨基酸)1-{A-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X}或IId.-{A-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X}-(氨基酸)1-(初級(jí)α，β-或β，γ-二氨基酸)其中(氨基酸)1和(氨基酸)2分別為任何天然生成的、修飾的、取代的或改變的不含硫醇基的α-或β-氨基酸；A是H、HOOC、H2NOC、(氨基酸或肽)-NHOC、(氨基酸或肽)-OOC或R4；B是H、SH或-NHR3、-N(R2)-(氨基酸或肽)或R4；Z是H或R4；X是SH或-NHR3、-N(R3)-(氨基酸或肽)或R4；R1、R2、R3和R4分別為H或直鏈或支鏈低級(jí)烷基或低級(jí)環(huán)烷基；n是0、1或2；(肽)是2至約10個(gè)氨基酸的肽；和(1)當(dāng)B為-NHR3或-N(R3)-(氨基酸或肽)時(shí)，X是SH和n是1或2；(2)當(dāng)X為-NHR3或-N(R3)-(氨基酸或肽)時(shí)，B是SH和n是1或2；(3)當(dāng)B為H或R4時(shí)，A是HOOC、H2NOC、(氨基酸或肽)-NHOC、(氨基酸或肽)-OOC，X是SH和n是0或1；(4)當(dāng)A為H或R4，而B(niǎo)為SH時(shí)，X是-NHR3或-N(R3)-(氨基酸或肽)和當(dāng)X是SH時(shí)，B是-NHR3或-N(R3)-(氨基酸或肽)；(5)當(dāng)X為H或R4時(shí)，A是HOOC、H2NOC、(氨基酸或肽)-NHOC、(氨基酸或肽)-OOC和B是SH；(6)當(dāng)Z為甲基時(shí)，X是甲基，A是HOOC、H2NOC、(氨基酸或肽)-NHOC、(氨基酸或肽)-OOC和B是SH和n是0；和(7)當(dāng)B為SH和X為SH時(shí)，n不為0；以及其中硫羥基部分為還原形式。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于哺乳動(dòng)物體內(nèi)各部位成象的放射性標(biāo)記的肽，所說(shuō)的肽包含特異性結(jié)合的肽，該特異性結(jié)合的肽中放射性標(biāo)記結(jié)合部分通過(guò)肽的氨基酸的氨基酸側(cè)鏈共價(jià)連接在肽上，所說(shuō)的放射性結(jié)合部分具有下面的通式
{為了本發(fā)明的目的，具有這種結(jié)構(gòu)的放射性標(biāo)記結(jié)合部分將被稱之為吡啶甲酸(Pic)為基礎(chǔ)的部分}或
{為了本發(fā)明的目的，具有這種結(jié)構(gòu)的放射性標(biāo)記結(jié)合部分將被稱之為吡啶甲基胺(Pica)為基礎(chǔ)的部分}其中X為H或保護(hù)基團(tuán)；(氨基酸)是任何氨基酸；放射性標(biāo)記結(jié)合部分共價(jià)連接至肽上，放射性標(biāo)記結(jié)合部分和放射性標(biāo)記的配合物呈電中性。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，氨基酸是甘氨酸及X為乙酰氨基甲基保護(hù)基。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，肽通過(guò)氨基酸共價(jià)連接到放射性標(biāo)記結(jié)合部分上，最優(yōu)選的是氨基酸為甘氨酸和放射性標(biāo)記為锝-99m。
在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，提供了一種用于哺乳動(dòng)物體內(nèi)各部位成象的放射性標(biāo)記的肽，所說(shuō)的肽包含特異性結(jié)合的肽和通過(guò)肽的氨基酸側(cè)鏈共價(jià)連接到肽上的雙氨基雙巰基放射性標(biāo)記結(jié)合部分。在本發(fā)明的這一實(shí)施方案中的雙氨基雙巰基放射性標(biāo)記結(jié)合部分具有選自下面通式組的通式
其中每個(gè)R分別為H、CH3、或C2H5；每個(gè)(pgp)s分別為硫羥基保護(hù)基或H；m、n和p分別為2或3；A為直鏈或環(huán)狀的低級(jí)烷基、芳基、雜環(huán)基、它們的組合或取代的衍生物；和X為肽；以及
其中每個(gè)R分別為H、CH3、或C2H5；m、n和p分別為2或3；A是直鏈或環(huán)狀的低級(jí)烷基、芳基、雜環(huán)基、它們的組合或取代的衍生物；V為H或CO-肽；R’為H或肽；其前提條件是當(dāng)V為H時(shí)，R’是肽，而當(dāng)R’為H時(shí)，則V為肽。{為了本發(fā)明的目的，具有這些結(jié)構(gòu)的放射性標(biāo)記結(jié)合部分將被稱之為“BAT”部分}。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，肽通過(guò)氨基酸共價(jià)連接到放射性標(biāo)記結(jié)合部分，最優(yōu)選的是氨基酸為甘氨酸，放射性標(biāo)記為锝-99m。
在本發(fā)明上述這些方面的優(yōu)選實(shí)施方案中，特異性結(jié)合化合物是包含3至100個(gè)氨基酸的肽。最優(yōu)選的放射性標(biāo)記是锝-99m。
本發(fā)明提供的特異性結(jié)合肽包括(但并不僅限于這些)具有下述序列的肽甲酰-MLF(VGVAPG)3酰胺(VPGVG)4酰胺RALVDTLKFVTQAEGAK酰胺RALVDTEFKVKQEAGAK酰胺PLARITLPDFRLPELAIP酰胺GQQHHLGGAKAGDVPLYKKIIKKLLESLRALVDTLK酰胺GGGLRALVDTLK酰胺GGGLRALVDTLKFVTQAEGAK酰胺GGGRALVDTLKALVDTL酰胺GHRPLDKKREEAPSLRPAPPPISGGGYRPSPSPIHPAHHKRDRRQ酰胺GGGFD.Cpa.YWDKTFT酰胺
{SYNRGDSTC}3-TSEAGGGLRALVDTLK酰胺GCGGGLRALVDTLK酰胺GCYRALVDTLKFVTQAEGAK酰胺GC(VGVAPG)3酰胺本發(fā)明的試劑可以形成為其中特異性結(jié)合化合物或放射性標(biāo)記結(jié)合部分均共價(jià)連接在多價(jià)連接部分上。本發(fā)明的多價(jià)連接部分包含至少2個(gè)相同的能夠共價(jià)結(jié)合到特異性結(jié)合化合物或放射標(biāo)記結(jié)合部分上的連接體官能基團(tuán)。優(yōu)選的連接體官能基團(tuán)是伯胺或仲胺、羥基、羧酸基團(tuán)或巰基反應(yīng)基團(tuán)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，多價(jià)連接部分包含雙琥珀酰亞氨基甲基醚(BSME)、4-(2，2-二甲基乙?；?苯甲酸(DMAB)、三(琥珀酰亞氨基乙基)胺(TSEA)、N{2-N’，N’-二(2-琥珀酰亞氨基乙基)氨基乙基〕}-N6，N9-二(2-甲基-2-巰基丙基)-6，9-二氮壬酰胺(BAT-BS)、二-(乙酰亞氨基乙基)醚、三(乙酰亞氨基乙基)胺、二-(乙酰亞氨基乙基)醚、二-(乙酰亞氨基甲基)醚、α，ε-二乙?；嚢彼?、賴氨酸和1，8-二乙酰亞氨基-3，6-二氧雜辛烷。
本發(fā)明還包括本發(fā)明的肽和Tc-99m形成的配合物以及用Tc-99m放射性標(biāo)記本發(fā)明肽的方法。本發(fā)明提供的放射性標(biāo)記配合物是在還原劑存在下，由本發(fā)明的肽與Tc-99m反應(yīng)而制得。優(yōu)選的還原劑包括(但不僅限于這些)連二亞硫酸鹽離子、亞錫離子和亞鐵離子。本發(fā)明的配合物還可以通過(guò)本發(fā)明提供的預(yù)還原的Tc-99m配合物的配位體交換用Tc-99m標(biāo)記本發(fā)明的肽而制得。
本發(fā)明還提供了用于制備由Tc-99m標(biāo)記的本發(fā)明肽的試劑盒。用于由Tc-99m標(biāo)記本發(fā)明肽的試劑盒包括一個(gè)含有預(yù)定量本發(fā)明的肽和足夠量用于由Tc-99m標(biāo)記肽的還原劑的封閉的小瓶。
本發(fā)明提供了通過(guò)體內(nèi)的化學(xué)合成制備本發(fā)明肽的方法。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，肽通過(guò)固相肽合成方法來(lái)合成。
本發(fā)明提供了Tc-99m標(biāo)記的肽通過(guò)在體內(nèi)獲得γ射線閃爍照相法成象而使哺乳動(dòng)物體內(nèi)各部位成象的使用方法。這些方法包括施用診斷有效量的本發(fā)明的Tc-99m放射性標(biāo)記肽和檢測(cè)在哺乳動(dòng)物體內(nèi)的檢查部位定位的Tc-99m發(fā)射的γ射線。
本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案會(huì)通過(guò)下面一些優(yōu)選實(shí)施方案和權(quán)利要求的更為詳細(xì)的說(shuō)明變得十分明顯。
附圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1表示患有腫瘤大鼠體內(nèi)的99mTc-P587的成象。
發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明提供了用于在哺乳動(dòng)物體內(nèi)各靶向部位成象的Tc-99m標(biāo)記的肽，所說(shuō)的肽包含通過(guò)氨基酸側(cè)鏈共價(jià)連接在放射性標(biāo)記結(jié)合部分上的氨基酸序列，其中放射性標(biāo)記結(jié)合部分與放射性同位素相結(jié)合。
使用Tc-99m進(jìn)行標(biāo)記是本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)檫@種同位素的核特性和放射特性使其成為一種理想的閃爍照相成象劑。這種同位素具有140keV的單一光子能和約6小時(shí)的放射性半衰期，并且易于從99Mo，99mTc發(fā)生器中獲得。在現(xiàn)有技術(shù)中已知的其它放射性核素則具有太長(zhǎng)的有效半衰期(例如111In的半衰期為67.4小時(shí))或者具有毒性(例如125I)。
在放射性標(biāo)記結(jié)合部分和與該部分共價(jià)連接的肽中(所說(shuō)的放射性標(biāo)記結(jié)合部分含有共價(jià)連接在本發(fā)明提供的硫羥基保護(hù)基[(pgp)5]上的硫羥基)，硫羥基保護(hù)基可以相同或不同并可以是(但并不僅限于這些)-CH2-芳基(芳基是苯基或烷基或烷氧基取代的苯基)；-CH-(芳基)2，(芳基是苯基或烷基或烷氧基取代的苯基)；-C-(芳基)3，(芳基是苯基或烷基或烷氧基取代的苯基)；-CH2-(4-甲氧基苯基)；-CH-(4-吡啶基〕(苯基)2；-C(CH3)3-9-苯基芴基；-CH2NHCOR(R是未取代的或取代的烷基或芳基)；-CH2-NHCOOR(R是未取代的或取代的烷基或芳基)；-CONHR(R是未取代的或取代的烷基或芳基)；-CH2-S-CH2-苯基優(yōu)選的保護(hù)基具有通式-CH2-NHCOR，其中R是具有1至8個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、苯基或有低級(jí)烷基、羥基、低級(jí)烷氧基、羧基或低級(jí)烷氧基羰基取代的苯基。最優(yōu)選的保護(hù)基是乙酰氨基甲基。
本發(fā)明的每個(gè)含有特異性結(jié)合肽的實(shí)施方案都包含氨基酸序列。本發(fā)明中所用的術(shù)語(yǔ)氨基酸是指天然生成或非天然生成的所有L-或D-氨基酸。
本發(fā)明的肽可以在體內(nèi)化學(xué)合成。通常，本發(fā)明的肽優(yōu)選在氨基酸合成器中制備。本發(fā)明的肽也可以這樣來(lái)合成，即其中使用本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員熟知的技術(shù)，使放射性標(biāo)記結(jié)合部分在體外化學(xué)合成過(guò)程中共價(jià)連接到肽上。由于可以確定共價(jià)連接的具體部位，因此，這種在合成中共價(jià)連接到放射性標(biāo)記結(jié)合部分上的肽是優(yōu)選的。
本發(fā)明中特別優(yōu)選將放射性標(biāo)記結(jié)合部分通過(guò)靶向特異性結(jié)合肽的氨基酸側(cè)鏈共價(jià)連接到肽上。上述的共價(jià)連接可以通過(guò)與特定的氨基酸側(cè)鏈形成共價(jià)鍵而將放射性標(biāo)記結(jié)合部分偶合到肽上來(lái)完成，或者也可以通過(guò)結(jié)合在肽合成中與放射性標(biāo)記結(jié)合部分共軛的氨基酸來(lái)完成。
在前一種情況下，例如，在pH8-10的條件下，將放射性標(biāo)記結(jié)合部分CLCH2CO.Gly-Gly-Cys-Lys酰胺(特別是，在合成過(guò)程中，通過(guò)半胱氨酸殘基中巰基的三苯甲基化來(lái)保護(hù))偶合到生長(zhǎng)激素釋放的抑制因子受體結(jié)合的肽cyclo.(N-CH2).Phc-Tyc-(p-Trp)-Lys-Val-Hcy上生成肽cyclo.(N-CH2).phc-Tyc-(p-Trp)-Lys-Val-Hcy.(CH2CO).Gly-Gly-Cys-Lys酰胺(接著脫去保護(hù))。在上述該通式中，應(yīng)該認(rèn)識(shí)到放射性標(biāo)記結(jié)合部分是共價(jià)連接在高半胱氨酸的側(cè)鏈硫原子上。
在另一種情況下，通過(guò)使用在肽合成過(guò)程中制得的賴氨酸衍生物，Na(Fmoc)-Nε(N9-(叔丁氧基羰基)-N6，N9-二(2-甲基-2-三苯基甲基硫代丙基)-6，9-二氮壬?；?賴氨酸將放射性標(biāo)記結(jié)合部分BAT(N6，N9-二(2-巰基-2-甲基丙基)-6，9-二氮壬酸)結(jié)合到白細(xì)胞結(jié)合肽，甲?；?Met-Leu-Phe-Lys.酰胺上。
本發(fā)明其它的放射性標(biāo)記結(jié)合部分可以在肽合成中引入靶向特異肽上?？梢詫⒑羞拎ぜ姿岬姆派湫詷?biāo)記結(jié)合部分共價(jià)連接到賴氨酸的ε-氨基上得到，例如，αN(Fmoc)-Lys-εN[Pic-Gly-Cys(保護(hù)基)]，其可以結(jié)合到肽鏈的任何位置上。該序列特別優(yōu)選，因?yàn)槠涮峁┝艘子诮Y(jié)合到靶向物結(jié)合肽的模式。
在放射性锝和本發(fā)明肽的配合物的制備方法中，在還原劑存在下，锝配合物，優(yōu)選為T(mén)c-99m的高锝酸鹽，與本發(fā)明的肽進(jìn)行反應(yīng)。優(yōu)選的還原劑是二亞硫酸鹽離子、亞錫離子和亞鐵離子。最優(yōu)選的還原劑是二氯化錫。在其它的優(yōu)選實(shí)施方案中，還原劑是固相還原劑。配合物和制備這類配合物的方法通常是以一個(gè)試劑盒的形式提供，所說(shuō)的試劑盒包含一個(gè)含有預(yù)定量待標(biāo)記的本發(fā)明的肽和足夠量用于由Tc-99m標(biāo)記肽的還原劑的封閉小瓶。另外，所說(shuō)的配合物也可以通過(guò)本發(fā)明的肽與預(yù)選制得的锝和另一種作為轉(zhuǎn)移配位體的已知化合物形成的易變配位化合物的反應(yīng)而生成。該方法是被稱之為配位體交換的已知方法并已為本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員所熟知。易變配位化合物可以使用象酒石酸鹽、檸檬酸鹽、葡糖酸鹽或甘露糖醇這樣的轉(zhuǎn)移配位體來(lái)制備。本發(fā)明使用的Tc-99m的高锝酸鹽包括堿金屬鹽如鈉鹽、或銨鹽或低級(jí)烷基銨鹽。
在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，提供了用于制備锝標(biāo)記的肽的試劑盒。本發(fā)明的肽可以使用本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員所熟知的和下述的方法和手段化學(xué)合成。由此制得的肽包含3-100個(gè)氨基酸殘基，并且這種肽共價(jià)連接在放射性標(biāo)記結(jié)合部分上，所說(shuō)的放射性標(biāo)記結(jié)合部分與放射性同位素相結(jié)合。肽是以足以能滿足用Tc-99m標(biāo)記肽的量被引入到含有還原劑如二氯化錫或固相還原劑的小瓶中。該小瓶中還包含了如上所述的轉(zhuǎn)移配位體(如酒石酸鹽、檸檬酸鹽、葡糖酸鹽或甘露糖醇)。本發(fā)明的锝標(biāo)記的肽可以通過(guò)將適量的Tc-99m或Tc-99m配合物加入到小瓶中并在下述實(shí)施例3中所述的條件下進(jìn)行反應(yīng)來(lái)制備。
本發(fā)明提供的放射性標(biāo)記的肽具有適量的放射性。在Tc-99m放射性配合物的制備中，通常，優(yōu)選制得在含放射性濃度為每毫升約0.01毫居里(mCi)至100mCi的溶液中的放射性配合物。
本發(fā)明提供的放射性標(biāo)記的肽可以用于使哺乳動(dòng)物體內(nèi)各部位顯象。根據(jù)本發(fā)明，將锝標(biāo)記的肽以一個(gè)單位的可注射劑量給藥。任何本領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員所熟知的常用載體，如無(wú)菌鹽水溶液或血漿都可以在放射性標(biāo)記之后，用于制備可注射的溶液。所說(shuō)的可注射溶液根據(jù)本發(fā)明的方法使各器官、腫瘤等診斷成象。通常，給藥的單位劑量具有的放射性為約0.01mCi至100mCi，優(yōu)選1至20mCi。以單位劑量注射的溶液為約0.01毫升至約10毫升。在靜脈注射給藥之后，可以在幾分鐘后使體內(nèi)的器官或腫瘤成象。但是，如果需要，也可在放射性標(biāo)記肽注射入病人體內(nèi)數(shù)小時(shí)或更長(zhǎng)的時(shí)間之后成象。在大多數(shù)情況下，在0.1小時(shí)內(nèi)，給藥劑量中有足夠量的放射性標(biāo)記肽在待成象的區(qū)域積累以進(jìn)行閃爍照相。任何診斷用的常用閃爍照相成象方法都可用于本發(fā)明。
可以將本發(fā)明提供的锝標(biāo)記的肽和配合物置于任何靜脈注射常用的介質(zhì)如鹽酸水溶液介質(zhì)或血漿介質(zhì)中并通過(guò)靜脈注射給藥。上述這種介質(zhì)還可含有常用的藥物添加劑物質(zhì)如用于調(diào)節(jié)滲透壓的藥學(xué)上可接受的鹽、緩沖劑、防腐劑及類似物質(zhì)。優(yōu)選的介質(zhì)是常用的鹽水和血漿。
下面將用實(shí)施例更為全面地說(shuō)明制備和標(biāo)記這些化合物的方法。這些實(shí)施例說(shuō)明了上述方法的一些方面和有利的效果。它們只是用于說(shuō)明本發(fā)明，而并不是用來(lái)限定本發(fā)明。
實(shí)施例1固相肽合成使用Applied Biosystems Model 431A肽合成反應(yīng)器和使用二環(huán)己基碳化二亞胺/羥基苯并三唑或2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯/羥基苯并三唑(HBTU/HOBT)與9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)偶合的氨基末端保護(hù)和使用用于羧基末端酸的對(duì)羥基甲基苯氧基甲基聚苯乙烯(HMP)樹(shù)脂或用于羧基末端酰胺的Rink酰胺樹(shù)脂，以0.25毫摩爾(mmole)的規(guī)模，進(jìn)行固相肽合成(SPPS)。在室溫下，使用含有三乙酸、水、苯硫基甲烷、乙二硫醇和三乙基硅烷(含量比為100∶5∶5∶2.5)的溶液將樹(shù)脂結(jié)合產(chǎn)物裂解1.5-3小時(shí)。
在適當(dāng)?shù)那闆r下，通過(guò)下述步驟以引入αN-甲?；从迷?8％甲酸中的過(guò)量乙酸酐處理裂解和去保護(hù)后的肽，并攪拌約18小時(shí)，然后使用HPLC提純。在適當(dāng)情況下，通過(guò)用20％(體積/體積)在NMP(N-甲基吡咯烷酮)中的乙酸酐對(duì)結(jié)合在樹(shù)脂上的游離N-氨基末端肽處理30分鐘以引入N-乙?；┒恕Ｍㄟ^(guò)使用作為SPPS中待偶合的最后殘基的2-鹵代乙酸或者通過(guò)用2-鹵代乙酸/二異丙基碳化二亞胺/在2-鹵代乙酸酐的NMP中的N-羥基琥珀酰亞胺/在NMP中的二異丙基乙胺處理與樹(shù)脂結(jié)合的游離N-末端氨基肽以引入2-氯乙?；?-溴乙酰基。在適當(dāng)?shù)那闆r下，通過(guò)下述方法使用HPLC提純的2-鹵代乙?；碾沫h(huán)化，所述的方法包括將在含或不含0.5-1.0毫摩爾EDTA的碳酸氫鈉或氨水緩沖液(pH8)中的0.1-1.0毫克/毫升溶液攪拌1-48小時(shí)，然后用乙酸酸化，冷凍干燥和使用HPLC提純。在適當(dāng)?shù)那闆r下，通過(guò)用0.006摩爾K3Fe(CN)6的等分試樣處理以0.1毫克/毫升的濃度處于pH7緩沖溶液中的前體半胱氨酸-游離巰基肽直至其保持穩(wěn)定的黃色以使Cys-Cys二硫醚鍵發(fā)生環(huán)化。用過(guò)量的半胱氨酸還原過(guò)量的氧化劑，冷凍干燥混合物，然后用HPLC提純。
在適當(dāng)?shù)那闆r下，通過(guò)使用二異丙基碳化二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺使吡啶甲胺共軛到前體肽上以引入“Pica”基團(tuán)。通過(guò)使用作為SPPS中待偶合的最后殘基的BAT酸或用BAT酸/二異丙基碳化二亞胺/在NMP中的N-羥基琥珀酰亞胺處理結(jié)合在樹(shù)脂上的N-末端游離氨基肽以引入BAT配位體。通過(guò)下述方法使[BAM]共軛到肽上，所述方法包括，首先使用在DMF、NMP或CH2CL2中的二異丙基碳化二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺或HBTU/HOBt的混合物活化肽羧酸酯，然后，在二異丙基乙胺存在下，使其偶合；偶合后，按照上述的方法使所得的共軛物去保護(hù)。
在適當(dāng)情況下，在室溫下，通過(guò)含單一巰基的肽(濃度為5-50毫克/毫升，在50毫摩爾磷酸鈉緩沖液中的溶液，PH8)與預(yù)先溶解在乙腈中的0.5摩爾當(dāng)量BMME(二馬來(lái)酰亞氨基甲基醚)反應(yīng)約1-18小時(shí)制備BSME加成物。將反應(yīng)所得溶液濃縮并用HPLC提純濃縮得到的產(chǎn)物。
在適當(dāng)情況下，在室溫下，通過(guò)含單一巰基的肽(濃度為10-100毫克/毫升，在DMF中的肽溶液或濃度為5-50毫克/升，在毫克磷酸鈉(PH8)/乙腈或THF中的肽溶液)與預(yù)先溶解在乙腈中或DMF中的含或不含1摩爾當(dāng)量三乙醇胺的0.33摩爾當(dāng)量的TMEA(三(2-馬來(lái)酰亞氨基乙基)胺(其公開(kāi)在美國(guó)專利申請(qǐng)08/044,825中，該申請(qǐng)?jiān)诖艘米鳛閰⒖嘉墨I(xiàn)))反應(yīng)約1-18小時(shí)制備TSEA加成物。將含有加成物的反應(yīng)混合物濃縮，然后再用HPLC提純?cè)摷映晌铩?br> 在適當(dāng)情況下，在室溫下，通過(guò)通過(guò)含有單一巰基的肽(濃度為2-50毫克/毫升，在50磷酸鈉(PH8)/乙腈或THF中的肽溶液)與預(yù)先溶解在乙腈或THF中的0.5摩爾當(dāng)量的BAT-BM(N-[2-(N’，N’-二(馬來(lái)酰氨基甲基硫代丙基)氨基乙基)]-N9-(叔丁氧基羰基)-N6，N9-二(2-甲基-2-三苯基甲基硫代丙基)-6，9-二氮壬酰胺)(其公開(kāi)在美國(guó)專利申請(qǐng)08/044,825，該申請(qǐng)?jiān)诖艘靡米鳛閰⒖嘉墨I(xiàn))反應(yīng)約1-18小時(shí)制備BAT-BS加成物。將反應(yīng)所得溶液蒸發(fā)至干并通過(guò)用10毫升TFA和0.2毫三乙基硅烷處理1小時(shí)使[BAT-BS]-肽共軛物去保護(hù)。將溶液濃縮，用乙醚使產(chǎn)物加成物沉淀，然后再用HPLC濃縮。
通過(guò)制備性高壓液相色譜(HPLC)分離提純粗產(chǎn)物肽，其中使用WatersDdlta Pak C18柱和使用0.1％三氟乙酸在由乙腈改性的水中的溶液進(jìn)行梯度洗脫。在乙腈從洗脫餾份中蒸除之后，將該洗脫餾份冷凍干燥。由快速原子爆炸質(zhì)譜(FABMS)確認(rèn)每種產(chǎn)物都相同。
實(shí)施例2用Tc-99m進(jìn)行放射性標(biāo)記的一般方法將0.1毫克實(shí)施例2中制得的肽溶解在0.1毫升水或50毫升磷酸鉀緩沖液中(PH=5.6或7.4)。通過(guò)下述方法制備Tc-99m的葡庚糖酸鹽，該方法包括用含有至多200mCi的1.0毫升Tc-99m高锝酸鈉再配制一個(gè)Glucoscan小瓶(E.I.DuPont de Nemours，Inc.)并將其在室溫下放置15分鐘。然后，將25微升Tc-99m的葡庚糖酸鹽加入到肽中，并使其在室溫下或100℃下反應(yīng)15-30分鐘，通過(guò)0.2微米過(guò)濾器過(guò)濾。
通過(guò)使用下述條件的HPLC測(cè)定Tc-99m標(biāo)記肽的純度用放射性標(biāo)記肽裝載Waters DeltaPure RP-18，5μ，150毫米×3.9毫米分析柱；以1毫升/分鐘的溶劑流速洗脫肽。經(jīng)20分鐘從10％溶劑A(0.1％CF3COOH/H2O)至40％溶劑B90(0.1％CF3COOH/90％CH3CN/H2O)進(jìn)行梯度洗脫。
使用與積分記錄器相連的聯(lián)機(jī)放射性檢測(cè)器檢測(cè)放射性組分。在上述條件下，在1至4分鐘之間洗脫Tc-99m的葡庚糖酸鹽和Tc-99m高锝酸鈉，而Tc-99m標(biāo)記肽則在很長(zhǎng)一段時(shí)間之后才洗脫。
下面的表格說(shuō)明了用上述方法對(duì)實(shí)施例2制得的肽成功地進(jìn)行了Tc-99m標(biāo)記。
表I
表I(續(xù))
*上標(biāo)是指下面的標(biāo)記條件1=室溫下，在10％HPCD中，2=在室溫下，在50/50乙醇/水中3=在100℃，在0.9％NaCl中HPLC方法(用RT后的上標(biāo)表示)Waters-1柱，在10分鐘內(nèi)100％溶液A→100％溶液B
表II
*下述是相應(yīng)的肽使用的標(biāo)記條件1.將肽溶解在50毫摩爾磷酸鉀緩沖液(PH7.4)中并在室溫下標(biāo)記。
2.將肽溶解在50毫摩爾磷酸鉀緩沖液(PH7.4)中并在100℃下標(biāo)記。
3.將肽溶解在水中并在室溫下標(biāo)記。
4.將肽溶解在水中并在100℃下標(biāo)記。
5.將肽溶解在50毫摩爾磷酸鉀緩沖液(PH6.0)中并在100℃下標(biāo)記。
6.將肽溶解在50毫摩爾磷酸鉀緩沖液(PH5.0)中并在室溫下標(biāo)記。
**HPLC方法一般方法 溶劑A ＝0.1％CF3COOH/H2O溶劑B70＝0.1％CF3COOH/70％CH3CN/H2O溶劑B90＝0.1％CF3COOH/90％CH3CN/H2O溶劑流速＝1毫升/分鐘Vydak柱＝帶有防護(hù)柱的Vydak218TP54RP-18，5μ×220毫米×4.6毫米分析柱Brownlee柱＝Brownlee Spheri-5 RP-18，5μ×220毫米×4.6毫米分析柱Waters柱＝Waters Delta-Pak C18，5μm，39毫米×150毫米方法1Brownlee柱10分鐘內(nèi)從100％A至100％B70方法2Vydak柱 10分鐘內(nèi)從100％A至100％B90方法3Vydak柱 10分鐘內(nèi)從100％A至100％B70方法4Brownlee柱10分鐘內(nèi)從100％A至100％B90方法5Waters柱 10分鐘內(nèi)從100％A至100％B90用單一字母縮寫(xiě)表示氨基酸可以在G.Zubay，Biochemistry(2d.ed.)，1988(MacMillenPublishingNew york)第33頁(yè)上找到；Ac＝乙酰基；Pic＝吡啶甲酰基(吡啶-2-羰基)＝6氨基己酸；Hly＝高賴氨酸(homolysine)；Acm＝乙酰亞氨基甲基；pGlu＝焦谷氨酸；Mob＝4-甲氧基芐基；Pica＝吡啶甲基胺(2-(氨基甲基)吡啶)；Apc＝L-[S-(3-氨基丙基)半胱酸；FD＝D-苯基丙氨酸；WD＝D色氨酸；YD＝D酪氨酸；Cpa＝L(4-氯苯基)丙氨酸；Thp＝4-氨基-四氫噻喃-4-羧酸；ma＝巰基乙酸；DNal＝D-2-萘基丙氨酸；Dpg＝-二丙基甘氨酸；Nle＝正亮氨酸；BAT＝N6，N9-二(2-巰基-2-甲基丙基)-6，9-二氮壬酸；BAT酸(保護(hù)的)＝N9-(叔丁氧基羰基)-N6，N9-二(2-甲基-2-三苯基甲基硫代丙基)-6，9-二氮壬酸；BAM＝N1，N4-二(2-巰基-2-甲基丙基)-1，4，10-三氮癸烷；BAM(保護(hù)的)＝N1-(叔丁氧基羰基)-N1，N4-二(2-甲基-2-三苯基甲基硫代丙基)-1，4，10-三氮癸烷；[BAT-BM]＝N-[2-(N’，N’-二(2-馬來(lái)酰亞氨基乙基)氨基乙基]-N9-(叔丁氧基羰基)-N6，N9-二(2-甲基-2-三苯基甲基硫代丙基)-6，9-二氮壬酰胺；[BAT-BS]＝N-[2-(N’，N’-二(2-琥珀酰亞氨基乙基)氨基乙基]-N6，N9-二(2-巰基-2-甲基丙基)-6，9-二氮壬酰胺；[BMME]＝二馬來(lái)酰亞氨基甲基醚；[BSME]＝二琥珀酰亞氨基甲基醚；[DTPA]＝二亞乙基三胺五乙酸；Amp＝4-脒基苯基丙氨酸。
實(shí)施例3在高膽固醇血癥兔子模型中使用Tc-99m標(biāo)記化合物P215使動(dòng)脈粥樣硬化斑定位和體內(nèi)成象將22個(gè)兩種性別體重為2-3公斤的新西蘭白兔(NZW)分成兩組。將對(duì)照組的兔籠養(yǎng)并喂食商購(gòu)的兔食(Purina)。從7周齡開(kāi)始給HC組的兔喂食標(biāo)準(zhǔn)化的高膽固醇食物(混合了1％重量/重量濃度的膽固醇的兔食)直至兔長(zhǎng)到28周齡。給所有的兔隨意喝水。
按照上述實(shí)施例1的方法制備Tc-99m標(biāo)記的P215({BAT}.RA1VDTLKFVTQAEGAK酰胺)。用140-160mCi的Tc-99m標(biāo)記約250-400微克的肽并將其制成在0.2毫升體積劑量中含7-8mCi(12.5-20.0微克/兔；6-7微克/公斤)的單位劑量。以慢速濃輸液的方式(約0.1毫升/分鐘)從兔耳外側(cè)的靜脈給成年兔靜脈給藥Tc-99m標(biāo)記的肽。使用裝有針孔準(zhǔn)直器(5毫米孔)和Tc-99m的能量視窗組并且程序設(shè)置為累計(jì)計(jì)數(shù)500,000次或掃描所需時(shí)間的γ射線照相機(jī)來(lái)獲得成象。在成象前的瞬間，使用克他命和甲苯噻嗪的混合物麻醉動(dòng)物(5∶1，1毫升/公斤肌肉內(nèi)給藥)。
在心臟正上方的40°-50°處(左斜前方取景區(qū))收集γ射線照相成象以勾畫(huà)出主動(dòng)脈弓并檢查下行的主動(dòng)脈。在注射后的1小時(shí)和2小時(shí)得到成象，在注射后的3小時(shí)和5小時(shí)間或性地得到成象。在每次收集成象之前根據(jù)需要對(duì)動(dòng)物進(jìn)行補(bǔ)充麻醉。
在2.5小時(shí)(在2小時(shí)掃描之后)時(shí)，給動(dòng)物施用靜脈劑量的戊巴比妥鈉以使其致死。根據(jù)驗(yàn)尸，從中腹區(qū)的主動(dòng)瓣膜中移出主動(dòng)脈和切除分枝血管。使用平行孔準(zhǔn)直器，再?gòu)能|體外使主動(dòng)脈成象。然后，縱向打開(kāi)主動(dòng)脈并用蘇丹第四染色，由此使動(dòng)脈粥樣硬化斑變成深磚紅色。脫脂的和未損傷的主動(dòng)脈內(nèi)皮仍保持其原樣，并且在這些條件下所說(shuō)主動(dòng)脈內(nèi)皮的外觀呈現(xiàn)白桃紅色。在體內(nèi)和體外的Tc-99m P215成象中的正反差和在HC-處理的兔主動(dòng)脈中蘇丹IV的沉積圖案表明，本發(fā)明的閃爍照相成象劑能夠使動(dòng)脈粥樣硬化斑成象。
實(shí)施例4在體內(nèi)使用Tc-99m標(biāo)記的化合物P357使犬模型的深靜脈栓塞成象肌肉注射給藥克他命和乙酰丙嗪的結(jié)合物使Mongrel狗鎮(zhèn)靜，然后，靜脈注射給藥戊巴比妥鈉使其麻醉。將18號(hào)口徑的血管導(dǎo)管(angiocath)從右側(cè)股骨靜脈的靠遠(yuǎn)端的一半處插入靜脈并將由8毫米Dacron纏繞的不銹鋼繞制線圈(Cook Co.，Bloomington 1N)置于每個(gè)動(dòng)物接近股骨中部的股骨靜脈中。取出血管導(dǎo)管，縫合傷口并通過(guò)X光記錄線圈的移動(dòng)。然后，使各動(dòng)物過(guò)夜后蘇醒。
在線圈移動(dòng)一天后，將每個(gè)動(dòng)物再次麻醉，在動(dòng)物的每個(gè)前肢上經(jīng)靜脈輸液生理鹽水并插膀胱導(dǎo)管收集尿樣。將動(dòng)物仰臥置于低耗能狀態(tài)，且在裝有各種用途準(zhǔn)直器的γ射線照相機(jī)下，使Tc-99m達(dá)到光峰。在NuclearMac計(jì)算機(jī)系統(tǒng)中獲得成象。
將Tc-99m標(biāo)記的P357{(CH2CO-YD.Apc.GDCGGCAcmGCAcmGGC.酰胺)2-[BAT-BS]}{185-370mBq(5-10mCi)Tc-99m和0.2-0.4毫克P357}注射進(jìn)入插入點(diǎn)處的一條前肢靜脈血管中。保持第二條前肢血管用于收集血樣。在注射后約10-20分鐘和在注射后約1，2，3，和4小時(shí)，獲取500,000次或20分鐘的(無(wú)論哪種方式，只選取更短時(shí)間的那種)腿部的腹面成象。通過(guò)心內(nèi)注射或藥團(tuán)靜脈注射給藥安樂(lè)死劑量的飽和氯化鉀溶液，然后用肝磷脂注射器通過(guò)心臟穿刺收集兩種血樣。將含有血栓的股骨靜脈和大腿肌肉試樣細(xì)心地剖開(kāi)分離。然后，從血管中切割下血栓并置于預(yù)先稱重的試管中。稱重血栓試樣并用Tc-99m通道中的γ井式計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)。另外，還計(jì)數(shù)已知餾份的注射劑量。
測(cè)定新鮮的血栓重量、安樂(lè)死之前獲得的血栓和血液中的百分注射劑量(％ID)/克以及血栓/血液比和血栓/肌肉比。通過(guò)對(duì)在靶向區(qū)(ROI)中測(cè)得的計(jì)數(shù)/象素的分析來(lái)確定血栓/背景比率，所說(shuō)的靶向區(qū)是根據(jù)儲(chǔ)存在計(jì)算機(jī)中的成象，在血栓和其相鄰肌肉區(qū)域上畫(huà)出的。
上述所得結(jié)果用來(lái)說(shuō)明可以在體內(nèi)迅速而有效地定位深靜脈血栓。
實(shí)施例5閃爍照相成象和Tc-99m標(biāo)記的肽的生物分布為了說(shuō)明上面給出的Tc-99m標(biāo)記肽的作用，在新西蘭白兔的左腓腸部上肌肉內(nèi)注射大腸桿菌有效染劑。在肌肉內(nèi)注射克他命和甲苯噻嗪使動(dòng)物鎮(zhèn)靜24小時(shí)之后，給動(dòng)物靜脈注射Tc-99m標(biāo)記的肽(≤150微克，2-10mCi)。將動(dòng)物以仰臥姿式置于γ射線照相機(jī)(LEAP準(zhǔn)直器/Tc-99m達(dá)到光峰)的取景區(qū)中，并在注射1小時(shí)后開(kāi)始成象，然后，在此后的3小時(shí)內(nèi)每間隔約1小時(shí)進(jìn)行成象。在獲取成象和根據(jù)需要再次使動(dòng)物麻醉之間使動(dòng)物蘇醒。
在完成最后一次成象后，通過(guò)靜脈注射過(guò)量的苯巴比妥使每個(gè)動(dòng)物致死，并解剖獲取血樣和感染組和對(duì)照組肌肉組織的試樣。稱重組織試樣，使用γ計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)組織試樣和注射劑量的標(biāo)準(zhǔn)量，并測(cè)定留在組織中的百分注射劑量(每克組織)。對(duì)于每種肽計(jì)算出每克感染組織的百分注射劑量，感染肌肉組織與非感染肌肉組織的比率，以及感染肌肉組織與血液的比率。下面的表中給出了使用具有下述通式的本發(fā)明Tc-99m標(biāo)記試劑所獲得的這些結(jié)果甲?；鵐LFK(BAT).酰胺表III
A＝％ID/克感染的肌肉B＝％ID/克對(duì)照組的肌肉C＝感染的肌肉與對(duì)照組的肌肉之比D＝％ID/克血液E＝感染的肌肉與血液之比實(shí)施例6用大鼠腫瘤表達(dá)的生長(zhǎng)激素釋放抑制因子受體(SSTR)的定位和體內(nèi)成象用基本上如Bakker等人(1991，Life Sciences491593-1601)所述的方法進(jìn)行由大鼠腫瘤細(xì)胞表達(dá)的生長(zhǎng)激素釋放抑制因子受體的體內(nèi)成象。
將采樣并冷凍的腫瘤接髓質(zhì)解凍后獲得的CA20948鼠的胰腫瘤細(xì)胞，以每個(gè)動(dòng)物0.05-0.1.05-0.1毫升細(xì)胞懸浮液的劑量，通過(guò)肌肉注射植入6周齡Lewis鼠的右后腿。使腫瘤長(zhǎng)至約0.5-2克，采樣，并將腫瘤接髓質(zhì)植入第二個(gè)鼠，自然組Lewis鼠。重復(fù)這種轉(zhuǎn)種方式以生產(chǎn)患腫瘤動(dòng)物的下一代。用于體內(nèi)研究的患腫瘤動(dòng)物通常是第三至第五代轉(zhuǎn)種的且長(zhǎng)有0.2-2克腫瘤的鼠。
為了研究放射性試劑對(duì)于腫瘤的特異性，在注射放射性試劑之前30分鐘，給選擇的動(dòng)物施用皮下SSTR阻斷劑量(4毫克/公斤)的奧曲肽(Bakker等人已對(duì)此發(fā)表了實(shí)驗(yàn)報(bào)告，其結(jié)果是111In-[DTPA]奧曲肽腫瘤吸收下降了40％)。
將第三至第五代轉(zhuǎn)種的CA20948患有腫瘤的Lewis鼠禁錮并通過(guò)背側(cè)的尾靜脈注射，對(duì)應(yīng)于0.2-0.4毫升中3-8微克肽，劑量為0.15-0.20mCi的99mTc-標(biāo)記的肽。
在選定的時(shí)間，將動(dòng)物頸部脫位而致死并對(duì)其進(jìn)行選擇性驗(yàn)尸。稱重采樣的組織試樣并在γ井式計(jì)數(shù)器中逐個(gè)計(jì)數(shù)注射劑量的可分量。
表1中給出了選擇的放射性標(biāo)記肽的90分鐘生物分布。其中99mTc-P587、99mTc-P617、99mTc-P726、和99mTc-P736顯著地表明非常高的腫瘤吸收，腫瘤/血液比率表明了它們?cè)诎邢?腫瘤)組織中高的特異性吸收。
圖1表明了患腫瘤鼠中99mTc-P587的成象。在腿下部(箭頭所指部分)腫瘤中的高吸收清晰可見(jiàn)。
對(duì)于經(jīng)預(yù)先注射奧曲肽處理或沒(méi)有經(jīng)預(yù)先注射奧曲肽處理兩種情況，比較99mTc-P587在鼠腫瘤中的吸收，其中已經(jīng)知曉生長(zhǎng)激素釋放抑制因子結(jié)構(gòu)類似物結(jié)合在體內(nèi)的生長(zhǎng)激素釋放抑制因子受體之上。在這些實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)在施用99mTc-P587之前施用奧曲肽而阻斷受體可使放射性標(biāo)記肽的特異性腫瘤吸收下降76％。這些結(jié)果證實(shí)體內(nèi)99mTc-P587的結(jié)合是SSTR特異性。
表IV
應(yīng)該認(rèn)識(shí)到上述公開(kāi)的本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案以及所有在此基礎(chǔ)上所做的改進(jìn)或變化的等同物都在本申請(qǐng)權(quán)利要求中所述的本發(fā)明的精神和保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種用于制備哺乳動(dòng)物體內(nèi)各部位成象所用的閃爍照相成象劑的試劑，其包括具有含3-100個(gè)氨基酸的氨基酸序列的特異性結(jié)合肽和與所說(shuō)的肽共價(jià)連接的放射性標(biāo)記結(jié)合部分，其中放射性結(jié)合部分共價(jià)連接在特異性結(jié)合肽的氨基酸殘基的側(cè)鏈上。
2.權(quán)利要求1的試劑，其中特異性結(jié)合肽和放射性標(biāo)記結(jié)合部分通過(guò)賴氨酸殘基或高半胱氨酸殘基共價(jià)連接。
3.包含權(quán)利要求1試劑的閃爍照相成象劑，其中放射性標(biāo)記配合部分與放射性標(biāo)記相結(jié)合。
4.權(quán)利要求3的試劑，其中放射性標(biāo)記是锝-99m、銦-111、或鎵-68。
5.權(quán)利要求1的試劑，其中放射性標(biāo)記結(jié)合部分具有選自下列的通式ICp(aa)Cp其中Cp是保護(hù)的半胱氨酸，(aa)是不含硫羥基的任何初級(jí)α-或β-氨基酸；和
其中X＝H或保護(hù)基；(氨基酸)＝不含硫羥基的任何初級(jí)α-或β-氨基酸；V
其中，每個(gè)R5分別為H、CH3或C2H5；每個(gè)(pgp)s分別為硫羥基保護(hù)基或H；m、n和p分別為2或3；A＝直鏈或環(huán)狀的低級(jí)烷基、芳基、雜環(huán)基、它們的組合或取代的衍生物；V＝H或-CO-特異性結(jié)合化合物；X＝特異性結(jié)合的化合物；
其中，每個(gè)R5分別為H、具有1至6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基、苯基或有低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基取代的苯基；m、n和p分別為1或2；A＝直鏈或環(huán)狀的低級(jí)烷基、芳基、雜環(huán)基、它們的組合或取代的衍生物；V＝H或-CO-特異性結(jié)合化合物；X＝特異性結(jié)合的化合物；和其中當(dāng)V＝H時(shí)，R6＝特異性結(jié)合化合物，當(dāng)R6＝H時(shí)，V＝-CO-特異性結(jié)合化合物。
6.權(quán)利要求5的試劑，其中通式I的放射性標(biāo)記配合部分中保護(hù)的半胱氨酸具有下面通式的保護(hù)基-CH2-NH-CO-R其中R是具有1至6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基，2-、3-、4-吡啶基、苯基、或有低級(jí)烷基、羥基、低級(jí)烷氧基、羧基或低級(jí)烷氧基羰基取代的苯基。
7.權(quán)利要求5的試劑，其中通式為Cp(aa)Cp的放射性標(biāo)記配合部分具有下面的通式
8.包含權(quán)利要求5試劑的閃爍照相成象試劑，其中放射性標(biāo)記配合部分與放射性標(biāo)記相結(jié)合。
9.權(quán)利要求8的試劑，其中放射性標(biāo)記是锝-99m、銦-111、或鎵-68。
10.權(quán)利要求1的試劑，其中放射性標(biāo)記配合部分包含下面通式的含單一硫羥基的部分IIA-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X其中，A是H、HOOC、H2NOC、(氨基酸或肽)-NHOC、(氨基酸或肽)-OOC或R4；B是H、SH、-NHR3、-N(R2)-(氨基酸或肽)、或R4；X是H、SH、-NHR3、-N(R3)-(氨基酸或肽)或R4；Z是H或R4；R1、R2、R3和R4分別為H或直鏈或支鏈低級(jí)烷基或低級(jí)環(huán)烷基；n是0、1或2；(肽)是2至約10個(gè)氨基酸的肽；和當(dāng)B為-NHR3或-N(R3)-(氨基酸或肽)時(shí)，X是SH，和n是1或2；當(dāng)X為-NHR3或-N(R3)-(氨基酸或肽)時(shí)，B是SH，和n是1或2；當(dāng)B為H或R4時(shí)，A是HOOC、H2NOC、(氨基酸或肽)-NHOC、(氨基酸或氨)-OOC，X是SH，和n是0或1；當(dāng)A為H或R4，而其中的B為SH時(shí)，X是-NHR3或-N(R3)-(氨基酸或肽)和當(dāng)X是SH時(shí)，B是-NHR3或-N(R3)-(氨基酸或肽)；當(dāng)X為H或R4時(shí)，A是HOOC、H2NOC、(氨基酸或肽)-NHOC、(氨基酸或氨)-OOC和B是SH；當(dāng)Z為甲基時(shí)，X是甲基，A是HOOC、H2NOC、(氨基酸或肽)-NHOC、(氨基酸或肽)-OOC，B是SH和n是0；當(dāng)B為SH和X為SH時(shí)，n不為0；和其中硫羥基部分為還原形式和其中(氨基酸)是任何不含硫羥基的初級(jí)α-或β-氨基酸。
11.權(quán)利要求10的試劑，其中放射性標(biāo)記配合部分是選自具有下面通式的放射性標(biāo)記部分IIa.-(氨基酸)1-(氨基酸)2-{A-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X}IIb.-{A-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X}-(氨基酸)1-(氨基酸)2IIc.-(伯α，ω-或β，ω-二氨基酸)-(氨基酸)1-{A-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X}或IId.-{A-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X}-(氨基酸)1-(初級(jí)α，β-或β，γ-二氨基酸)其中(氨基酸)1和(氨基酸)2分別為任何天然生成的、修飾的、取代的或改變的不含硫羥基的α-或β-氨基酸；A是H、HOOC、H2NOC、(氨基酸或肽)-NHOC、(氨基酸或肽)-OOC或R4；B是H、SH或-NHR3、-N(R3)-(氨基酸或肽)或R4；X是SH或-NHR3、-N(R3)-(氨基酸或肽)或R4；Z是H或R4；R1、R2、R3和R4分別為H或直鏈或支鏈低級(jí)烷基或低級(jí)環(huán)烷基；(肽)是2至約10個(gè)氨基酸的肽；n是0、1或2的整數(shù)；和當(dāng)B為-NHR3或-N(R3)-(氨基酸或肽)時(shí)，X是SH和n是1或2；當(dāng)X為-NHR3或-N(R3)-(氨基酸或肽)時(shí)，B是SH和n是1或2；當(dāng)B為H或R4時(shí)，A是HOOC、H2NOC、(氨基酸或肽)-NHOC、(氨基酸或肽)-OOC，X是SH和n是0或1；當(dāng)A為H或R4，而其中的B為SH時(shí)，X是-NHR3、-N(R3)-(氨基酸或肽)和當(dāng)X是SH時(shí)，B是-NHR3或-N(R3)-(氨基酸或肽)；當(dāng)X為H或R4時(shí)，A是HOOC、H2NOC、(氨基酸或肽)-NHOC、(氨基酸或肽)-OOC和B是SH；當(dāng)Z為甲基時(shí)，X是甲基，A是HOOC、H2NOC、(氨基酸或肽)-NHOC、(氨基酸或肽)-OOC和B是SH和n是0；當(dāng)B為SH和X為SH時(shí)，n不為0；和其中硫羥基部分為還原形式。
12.包含權(quán)利要求10試劑的閃爍照相成象劑，其中放射性標(biāo)記配合部分與放射性標(biāo)記相結(jié)合。
13.權(quán)利要求12的試劑，其中放射性標(biāo)記是是锝-99m、銦-111、或鎵-68。
14.權(quán)利要求1的試劑，其中特異性結(jié)合的肽是選自具有下述氨基酸序列的肽甲酰基-MLF(VGVAPG)3酰胺(VPGVG)4酰胺RALVDTLKFVTQAEGAK酰胺RALVDTEFKVKQEAGAK酰胺PLARITLPDFRLPELAIP酰胺GQQHHLGGAKAGDVPLYKKIIKKLLESLRALVDTLK酰胺GGGLRALVDTLK酰胺GGGLRALVDTLKFVTQAEGAK酰胺GGGRALVDTLKALVDTL酰胺GHRPLDKKREEAPSLRPAPPPISGGGYRPSPSPHPAHHKRDRRQ酰胺GGGFD.Cpa.YWDKTFT酰胺
{SYNRGDSTC}3-TSEAGGGLRALVDTLK酰胺GCGGGLRALVDTLK酰胺GCYRALVDTLKFVTQAEGAK酰胺GC(VGVAPG)3酰胺
15.權(quán)利要求1的試劑，其中該試劑還進(jìn)一步包括與許多特異性結(jié)合化合物共價(jià)連接并且也與許多放射性標(biāo)記結(jié)合部分共價(jià)連接的多價(jià)連接部分，以制備多體的多價(jià)閃爍照相成象劑，其中多體的多價(jià)閃爍照相成象劑的分子量小于約20,000道爾頓。
16.權(quán)利要求15的試劑，其中多價(jià)連接部分是雙琥珀酰亞氨基甲基醚、4-(2，2-二甲基乙?；?苯甲酸、三(琥珀酰亞氨基乙基)胺、N{2-N’，N’-二(2-琥珀酰亞氨基乙基)氨基乙基〕}-N6，N9-二(2-甲基-2-巰基丙基)-6，9-二氮壬酰胺(BAT-BS)、二-(乙酰亞氨基乙基)醚、三(乙酰亞氨基乙基)胺、二-(乙酰亞氨基乙基)醚、二-(乙酰亞氨基甲基)醚、αε-二乙?；嚢彼?、賴氨酸和1，8-二乙酰亞氨基-3，6-二氧雜辛烷，或其衍生物。
17.由權(quán)利要求1的試劑與锝-99m在還原劑存在下進(jìn)行反應(yīng)而制得的配合物。
18.權(quán)利要求17的配合物，其中還原劑選自連二亞硫酸鹽離子、亞錫離子和亞鐵離子。
19.通過(guò)用锝-99m標(biāo)記權(quán)利要求1的試劑生成的配合物，所說(shuō)的標(biāo)記是通過(guò)預(yù)先制備的锝-99m配合物的配位體交換來(lái)進(jìn)行。
20.用于制備放射性藥物制劑的試劑盒，所說(shuō)的試劑盒包括含有預(yù)定量權(quán)利要求1的試劑和足夠量用于由Tc-99m標(biāo)記肽的還原劑的封閉的小瓶。
21.權(quán)利要求1的試劑用于使哺乳動(dòng)物體內(nèi)各部位成象的用途，其中試劑用锝-99m進(jìn)行標(biāo)記。
22.制備權(quán)利要求1試劑的方法，其中肽是在體外化學(xué)合成。
23.權(quán)利要求22制備肽的方法，其中肽是通過(guò)固相肽合成法來(lái)合成。
24.權(quán)利要求1的試劑，其中特異性結(jié)合肽是環(huán)肽。
全文摘要
本發(fā)明涉及放射性標(biāo)記的肽和這類肽的制備方法。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及肽、肽的制備方法和用于制備這類肽的試劑盒、以及使用這類肽使哺乳動(dòng)物體內(nèi)的各部位成象的方法，所說(shuō)的哺乳動(dòng)物體使用锝-99m(Tc-99m)通過(guò)放射性鍵合基團(tuán)標(biāo)記，所說(shuō)的放射性鍵合基團(tuán)通過(guò)肽的氨基酸側(cè)鏈共價(jià)連接在特異性結(jié)合的肽上。
文檔編號(hào)A61K51/08GK1154072SQ95194335
公開(kāi)日1997年7月9日 申請(qǐng)日期1995年6月1日 優(yōu)先權(quán)日1994年6月3日
發(fā)明者理查德·T·迪安, 斯科特·巴特拉姆, 威廉·麥克布萊德, 約翰·利斯特-詹姆斯, 埃德加·R·西維特羅 申請(qǐng)人:迪亞太德公司