專利名稱：穩(wěn)定的α干擾素水溶液制劑的制作方法
背景技術：
本發(fā)明涉及穩(wěn)定的水溶液制劑，該制劑不含由人體血清得到的產物，該制劑保持了延長時效的α-型干擾素的高生物學活性和高化學和高物理穩(wěn)定性。
US4496537公開了含有α干擾素、人體血清白蛋白和丙氨酸或甘氨酸、水、和保持pH在6.5-8.0的緩沖體系的生物學穩(wěn)定的α干擾素水溶液制劑。人體血清白蛋白(“HSA”)用作α干擾素的穩(wěn)定劑，它避免α干擾素在配方器皿、工藝設備和貯藏容器的不銹鋼和玻璃表面上由于涂覆和/或吸附引起的α干擾素在溶液中的損失。含有α干擾素和HSA的溶液制劑，在2-8℃下被長期貯藏，即，貯藏超過2年之后，仍然保持著α干擾素的化學和生物學穩(wěn)定性。
近年來，世界范圍的AIDS流行病已經(jīng)導致了健康注冊機構要求生產商對產品，如含有從人體血液如HSA得到的產品的α干擾素提出警告。
因此人們需要重新配制α-型干擾素溶液產品以得到不含從人體血液得到的產品如HSA的溶液制劑，同時保持α干擾素在水溶液制劑中具有延長時效的高化學、高物理穩(wěn)定性和高生物學α-型干擾素活性。
發(fā)明概述本發(fā)明提供保持高生物學α-型干擾素活性和不含人體血液衍生產物的穩(wěn)定的水溶液制劑，該制劑包含a.0.1×106-100×106IU/毫升α-型干擾素；b.保持pH在4.5-7.1范圍的緩沖體系；c.有效量的螯合劑；d.足以穩(wěn)定α-型干擾素對付α-型干擾素損失的一定數(shù)量的脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸聚(氧-1，2-乙二基)酯衍生物；e.有效量的張力劑；f.有效量的抗菌防腐劑；和g.足以制備上述列出組分的溶液的一定數(shù)量的注射用水。
本發(fā)明提供具有高α-型干擾素生物學活性和不含人體血液衍生產物的穩(wěn)定的水溶液制劑，該制劑包含a.0.1×106-100×106IU/mlα-型干擾素；b.足以保持溶液的pH在4.5-7.1范圍的緩沖體系；c.約0.01-1毫克/毫升的乙二胺四乙酸二氫二鈉；d.約0.01-1毫克/毫升的脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸聚(氧-1，2-乙二基)酯衍生物；e.約1-9毫克/毫升的氯化鈉；f.選自間-甲酚，苯酚，羥苯甲酸甲酯，對羥苯甲酸丙酯或它們的混合物的有效量的抗菌防腐劑；和g.適量注射用水加至1毫升。
優(yōu)選地，本發(fā)明提供一種具有高生物學α-型干擾素活性和不含人體血液衍生產物的穩(wěn)定的水溶液制劑，該制劑包含毫克/毫升a.α-2干擾素 5×106-50×106IUb.無水磷酸氫二鈉 1.8c.磷酸二氫鈉單水合物 1.3d.乙二胺四乙酸二氫二鈉 0.1e.多乙氧基醚80 0.1f.羥苯甲酸甲酯 1.2g.羥苯甲酸丙酯 0.12h.氯化鈉 7.5i.注射用水 適量加至1毫升優(yōu)選地，本發(fā)明另外還提供一種具有高生物學α-型干擾素活性和不含人體血液衍生產物的穩(wěn)定的水溶液制劑，該制劑包含毫克/毫升a.α-2干擾素5×106-50×106IUb.無水磷酸氫二鈉 1.8c.磷酸二氫鈉單水合物 1.3d.乙二胺四乙酸二氫二鈉 0.1
e.多乙氧基醚800.1f.間-甲酚 1.5g.氯化鈉 7.5h.注射用水 適量加至1毫升本發(fā)明還提供了一種制備具有高生物學α-型干擾素活性和不含人體血液衍生產物的穩(wěn)定的水溶液制劑的方法，該方法包括將有效量的α-型干擾素與能夠保持pH在4.5-7.1范圍的緩沖體系，螯合劑，脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸聚(氧-1，2-乙二基)酯衍生物，張力劑，抗菌防腐劑和足夠的水混合形成溶液。在本發(fā)明的優(yōu)選方案中，制備本發(fā)明的溶液并且讓其基本上保持不含溶解的氧氣，該溶液上面的惰性氣體空間保持的氧氣低于約4％(體積)。
發(fā)明詳述我們已經(jīng)選擇了具體種類和具體數(shù)量的組分，并且開發(fā)研制了α-型干擾素水溶液制劑，該制劑不含人體血清白蛋白，并且在2-8℃下貯藏至少24個月時間之后仍然保持著α-型干擾素的高化學、生物學和物理學穩(wěn)定性。
本文在說明本發(fā)明制劑中使用的術語“不含人體血液衍生產物”指在本發(fā)明溶液制劑的制備過程中沒有使用人體血液衍生產物如HSA。
本文在說明用于本發(fā)明制劑中的α-型干擾素時使用的術語“高化學穩(wěn)定性”指制劑在2-8℃下貯藏至少24個月時間之后保持至少85％，優(yōu)選85％-100％化學完整性。參見表1和表2?；瘜W完整性通過在HPLC檢測中測定蛋白含量確定，如由T.L.Nagabhushan，等在《干擾素臨床研究應用和管理研究》(Interferon Research Clinical Application.andRegulatory Consideration，Zoon，等，eds.，Elsevier科學出版有限公司，1984)的第79-88頁中以標題論文“遺傳工程ALFA-2干擾素的特征”所公開的那樣。(參見表1-4的結果)。
本文在說明用于本發(fā)明制劑中的α-型干擾素時使用的術語“高生物學穩(wěn)定性”指本發(fā)明制劑中的α-型干擾素在2-8℃下貯藏至少24個月時間之后保持至少75％，優(yōu)選至少85％，更優(yōu)選90％-100％的生物學活性(參見表1-4結果)，該生物學活性根據(jù)病毒的細胞病變效應(CPE)抑制的標準方法測定，如由W.P.Protzman，等，在《臨床微生物學雜志》，(1985)，22，596-599中披露的方法。
本文在說明用于本發(fā)明制劑中的α-型干擾素時使用的術語“高物理穩(wěn)定性”指本發(fā)明的制劑在2-8℃下貯藏至少24個月時間之后保持澄清，即，沒有混濁或沒有可見顆粒物質(可見顆粒直徑大于約60-70微米)。參見表1、2和3。令人吃驚的是列于表1、2和3的結果中大部分含有蛋白產物的溶液制劑象α-型干擾素在2-8℃持續(xù)貯藏后往往會產生肉眼可以觀察到的顆粒物質(即，直徑大于60-70微米的顆粒)。用于測定本發(fā)明溶液制劑的顆粒物質(參見表1-4)的試驗方法描述于《美國藥典》/《美國國家藥品集》USP 23/NF 18，(由美國藥典委員會出版，(1995)，Rockville，Maryland)；參見在第1813-1816頁的物理試驗(788)。用于測定本發(fā)明溶液制劑的直觀描述的方法也在USP 23的第1650-1652頁中作為“一般要求試驗和檢測(1)注射劑”中被描述。
我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在本發(fā)明制劑中加入螯合劑可以避免產生微粒物質。典型和適當?shù)尿蟿┌ㄒ叶匪囊宜岫涠c(EDTA或edetatedisodium)或檸檬酸。優(yōu)選使用乙二胺四乙酸二鈉鹽。我們并不希望受到任何理論的束縛，人們認為乙二胺四乙酸二鈉鹽有效地與微量的金屬陽離子，如Zn2+，F(xiàn)e2+，Cu2+或Al3+配合，這些離子可以存在于賦形劑和包裝組分中，例如，橡皮塞或墊圈中。由于乙二胺四乙酸二鈉鹽比α-型干擾素對這些金屬陽離子具有更高的親和力，因此避免了導致形成不溶性配合物(例如，以可見微粒物質形式)的金屬陽離子與α-型干擾素之間的相互作用和活性損失。基于0.1×106-100×106國際單位(“IU”)的α-型干擾素/毫升的螯合劑的有效量范圍是0.01-1毫克/毫升。對5×106-50×106IU的α-2干擾素優(yōu)選使用0.1毫克乙二胺四乙酸二氫二鈉。
適用于本發(fā)明制劑的緩沖體系是那些保持水溶液制劑的pH范圍在4.5-7.1，優(yōu)選6.5-7.1和最優(yōu)選6.8的緩沖體系。優(yōu)選使用磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉的緩沖體系。對于每毫升含有0.1×106-100×106IU的α-型干擾素的制劑一般使用0.005-0.1摩爾優(yōu)選的單堿價/二堿價磷酸鈉緩沖體系的緩沖劑。保持pH在4.5-7.1所需范圍的其他適當?shù)木彌_體系包括檸檬酸鈉/檸檬酸和乙酸鈉/乙酸。
用于本發(fā)明的張力劑是能夠使本發(fā)明制劑與人體血清等滲的任何試劑。典型和適當?shù)膹埩┌然c，甘露糖醇，甘氨酸，葡萄糖和山梨醇。優(yōu)選使用氯化鈉作為張力劑。
當每毫升本發(fā)明制劑含有0.1×106-100×106IU的α-型干擾素時，張力劑的用量范圍是1-10毫克/毫升。對每毫升含有5×106-50×106IU的α-型干擾素的本發(fā)明制劑，優(yōu)選使用7.5毫克/毫升氯化鈉。
脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸聚(氧-1，2-乙二基)酯衍生物如多乙氧基醚80或多乙氧基醚20是用作穩(wěn)定劑，以避免α-型干擾素蛋白如α-2b干擾素在用于制備含有α-型干擾素的所需制劑的設備的不銹鋼和玻璃表面上的吸附。本發(fā)明制劑中的多乙氧基醚20或80的有效量范圍是對于每毫升含有0.1×106-100×106IU的α-型干擾素的制劑為每毫升0.01-1.0毫克。優(yōu)選使用多乙氧基醚80。在所有本發(fā)明的溶液制劑中更優(yōu)選使用0.1毫克/毫升的多乙氧基醚80。當α-型干擾素如α-2干擾素的濃度低于約15×106IU/毫升，例如，6×106IU/毫升時，在缺乏多乙氧基醚80的情況下由于α干擾素被吸附引起的活性損失明顯地降低了制劑的生物學活性。令人吃驚的是，我們發(fā)現(xiàn)多乙氧基醚80避免了α-2b干擾素的損失并容許α-2b干擾素全身傳送而沒有生物學活性損失。在研制開發(fā)本發(fā)明制劑的過程中，我們驚奇地發(fā)現(xiàn)，與其他非離子表面活性劑，例如，Pluronic F127和Pluronic F-68相比，多乙氧基醚80為α-2b干擾素提供了優(yōu)越的化學和生物學穩(wěn)定性。
用于本發(fā)明制劑中的α-型干擾素的數(shù)量范圍是0.1×106-100×106IU/毫升，優(yōu)選5×106-50×106IU/毫升。
本文中使用的術語“α-型干擾素”指抑制病毒復制和細胞增生和調節(jié)免疫應答的高度類似的種特異性蛋白家族。典型和適當?shù)摩?型干擾素包括干擾素α-2a如可以從Hoffmann-La Roche，Nutley，N.J.得到的ROFERON A干擾素α-2a，干擾素α-2b如可以從scheringCorporation，Kenilworth，N.J.得到的INTRON A干擾素α-2b，干擾素α-2c如可以從BoehringerIngelheim Pharmaceutical，Inc.，Ridgefield，CT.得到的BEROFOR干擾素α-2c，干擾素α-n1，它是天然α干擾素的一種經(jīng)提純的摻合物，所述的天然α干擾素是如可以從Sumitomo，Japan得到的SUMIFERON或者是可以從Wellcome Foundation Ltd.，London，Great Britain得到的WELLFERON干擾素α-n1，或者可以從Amgen，Inc.，Newbury Park，California得到的交感α干擾素，或者干擾素α-n3，它是天然α干擾素的混合物，由Interferon Sciences制備和可以從Purdue Frederick Co.，Norwalk，CT.，根據(jù)商品名ALFERON得到。優(yōu)選使用干擾素α-2a或α-2b。更優(yōu)選使用干擾素α-2b。
本發(fā)明中使用的抗菌防腐劑包括間-甲酚，苯酚和羥苯甲酸甲酯和羥苯甲酸丙酯和上面列出的防腐劑的混合物，例如，苯酚-羥苯甲酸甲酯混合物。對于含有0.1×106-100×106IU/毫升的α-型干擾素的制劑，本發(fā)明中使用的間-甲酚的有效量范圍是0.5-2毫克/毫升。對于含有5×106-50×106IU/毫升的干擾素α-2b的制劑，優(yōu)選使用1.5毫克/毫升的間-甲酚。
對于含有0.1×106-100×106IU/毫升的α-型干擾素的溶液制劑，本發(fā)明中使用的苯酚的有效量范圍是0.5-5毫克/毫升。
當本發(fā)明的制劑含有0.1×106-100×106IU/毫升的α-型干擾素時，羥苯甲酸甲酯的有效量范圍是0.6-1.8毫克/毫升和羥苯甲酸丙酯的有效量范圍是0.06-0.18毫克/毫升。
當本發(fā)明的制劑含有0.1×106-100×106IU/毫升的α-2b干擾素時，優(yōu)選使用1.2毫克/毫升羥苯甲酸甲酯和與之相結合的0.12毫克/毫升羥苯甲酸丙酯。
使用間-甲酚作為抗菌防腐劑是更優(yōu)選的。
用于制備本發(fā)明制劑的水優(yōu)選是注射用水。
在延長了貯藏時間并且保持了α-型干擾素的高生物學活性以及高化學和高物理穩(wěn)定性而不使用HSA作為穩(wěn)定劑的本發(fā)明水溶液制劑的研制開發(fā)過程中，我們發(fā)現(xiàn)，需要用作α-型干擾素穩(wěn)定劑的脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸聚(氧-1，2-乙二基)酯衍生物如多乙氧基醚80的數(shù)量，對要達到下述目的所需加入的抗菌防腐劑的有效量具有直接影響，即其中抗菌防腐劑加入到水溶液制劑中以便對所述的制劑提供適當?shù)目咕Ｗo，以滿足全世界各種健康注冊機構的要求，在溶液中不會導致形成不需要的混濁。
因此，當本發(fā)明制劑中存在優(yōu)選的穩(wěn)定劑多乙氧基醚80，其優(yōu)選的有效量是0.1毫克/毫升時，可以加入而不會導致所述的制劑混濁的優(yōu)選的抗菌防腐劑，例如，間-甲酚的有效量被發(fā)現(xiàn)是關鍵性的。例如，向含有0.1毫克/毫升的多乙氧基醚80的制劑中加入間-甲酚的數(shù)量增加至大于1.75毫克/毫升，如在實施例3中所示，則觀察到混濁。當在得到的制劑中的多乙氧基醚80的數(shù)量從0.01毫克/毫升變至1毫克/毫升時觀察到相似的混濁問題。當1.75毫克/毫升或更少，優(yōu)選約1.5毫克/毫升的間-甲酚被加入到根據(jù)實施例3的方法制備的含有0.1毫克/毫升多乙氧基醚80的制劑中時，沒有觀察到混濁。當羥苯甲酸酯和苯酚被用作抗菌防腐劑時這種臨界狀態(tài)也可以被觀察到。對于含有0.01-1毫克/毫升多乙氧基醚80的本發(fā)明制劑，當與0.12毫克/毫升羥苯甲酸丙酯一起使用以避免混濁時，羥苯甲酸甲酯的有效量應該不超過約1.2毫克/毫升，苯酚(當使用它代替羥苯甲酸酯時)的有效量范圍應該是0.5毫克/毫升至小于約4毫克/毫升以避免混濁。
α-型干擾素制劑用于治療各種疾病如腎細胞癌，與愛滋病有關的卡波濟肉瘤，慢性和急性肝炎B，慢性和急性非-A、非-B/C肝炎。本發(fā)明制劑優(yōu)選作為可注射用水溶液用于治療這些疾病癥狀。
實施例下面的非限定性實施例說明α-型干擾素水溶液的制備。
列于實施例5之后的方法被用于制備實施例1-5的本發(fā)明制劑。
實施例1活性物質干擾素α-2b 0.1×106-100×106IU/毫升*緩沖劑 磷酸鈉(單堿價/二堿價) 0.005-0.1M螯合劑 乙二胺四乙酸二鈉鹽 0.01-1毫克/毫升穩(wěn)定劑 多乙氧基醚800.01-1毫克/毫升張力調節(jié)劑 氯化鈉 1-9毫克/毫升抗菌防腐劑 間-甲酚 0.5-1.75毫克/毫升或苯酚 0.5-＜4毫克/毫升或羥苯甲酸甲酯 0.6-1.2毫克/毫升羥苯甲酸丙酯0.06-0.12毫克/毫升溶劑注射用水適量加至1毫升*IU-國際單位實施例2干擾素α-2b 10×106IU/毫升無水磷酸氫二鈉1.8毫克/毫升磷酸二氫鈉單水合物1.3毫克/毫升乙二胺四乙酸二鈉鹽0.1毫克/毫升多乙氧基醚80 0.1毫克/毫升羥苯甲酸甲酯 1.2毫克/毫升羥苯甲酸丙酯 0.12毫克/毫升氯化鈉7.5毫克/毫升注射用水 適量加至1毫升實施例3干擾素α-2b 10×106IU/毫升無水磷酸氫二鈉1.8毫克/毫升磷酸二氫鈉單水合物1.3毫克/毫升乙二胺四乙酸二鈉鹽0.1毫克/毫升多乙氧基醚80 0.1毫克/毫升間-甲酚 1.5毫克/毫升氯化鈉7.5毫克/毫升注射用水 適量加至1毫升實施例2和3的穩(wěn)定數(shù)據(jù)相應地在表1和2中總結。
實施例4根據(jù)本文下面詳細描述的制備方法，使用氮氣鼓泡溶液和保持在溶液的上部空間的氧氣體積不超過約4％，用6×106IU/毫升的α-2b干擾素制備實施例3的制劑。
在30℃，25℃和4℃貯藏含有3毫升溶液體積標記的小瓶。結果在表3中總結。
實施例5除了沒有用氮氣鼓泡溶液或在溶液上沒有氮氣籠罩和溶液的上部空間中氧氣體積如在環(huán)境空氣中那樣為約20％(體積)，在所有細節(jié)上根據(jù)下文詳細描述的制備方法制備實施例4的制劑。
在30℃，25℃和4℃貯藏含有3毫升溶液體積標記的小瓶。結果在表4中總結。
如果用等量的Roferon A，Wellferon或Sumiferon干擾素α代替實施例1-5中干擾素α-2b會得到相似的結果。
表1實施例2中的干擾素α-2b穩(wěn)定性數(shù)據(jù)時間 溫度 抗病毒試驗 蛋白含量 顆粒物質 外觀描述(CPE)(HPLC測定)(微粒/容器)(月) (℃) (×106IU/ml)(％L.S.)(mcg/ml) (初始的％) ≥10微米 ≥25微米≥50微米初始 初始 10.0 100 42.5100 40 3 1 ccs*3 49.0 90 42.4100 16 13 11 ccs6 410.0 100 41.8988 3 1 ccs9 410.0 100 43.3102 52 3 0 ccs12 410.0 100 44.3104 17 4 2 ccs18 49.8 98 41.5986 1 0 ccs24 410.0 100 39.5935 1 0 ccs*ccs-澄清，無色溶液，基本上沒有可見微粒。
表2實施例3中的干擾素α-2b穩(wěn)定性數(shù)據(jù)時間 溫度 抗病毒試驗蛋白含量顆粒物質 外觀描述(CPE) (HPLC測定) (微粒/容器)(月) (℃) (106IU/ml) (％L.S.) (mcg/ml) (初始的％) ≥10微米 ≥25微米 ≥50微米初始 初始 10.3 103 37.9 10068 4 3ccs*1 4 10 100 38.2 10114224 23 ccs3 4 10 100 38.9 10331163 35 ccs6 4 10 100 40.0 10520617 16 ccs9 4 10 100 37.1 97.9 21110950 ccs124 10 100 36.6 96.6 30065 12 ccs154 10 100 36.1 95.3 1238 6ccs*ccs-澄清，無色溶液，基本上沒有可見微粒。
表3實施例4中的干擾素α-2b穩(wěn)定性數(shù)據(jù)時間 溫度 小瓶位置*抗病毒試驗蛋白含量 間-甲酚試(CPE) (HPLC測定)驗(月) (℃) (×106IU/ml)(％L.S.) (mcg/ml)(初始的％)(mg/ml)％LS pH初始 初始 6.48108 25.7 100 1.47 98.06.911 30 UP 6.00100 24.8 96.51.47 98.06.90INV6.00100 24.8 96.51.47 98.06.903 4 UP 6.00100 23.5 91.41.46 97.36.88INV6.00100 24.2 94.21.48 98.76.873 25 UP 6.00100 21.7 84.41.43 95.36.88INV6.00100 21.7 84.41.47 98.06.886 4 UP 6.00100 24.6 95.71.46 97.36.84INV6.00100 24.3 94.61.45 96.76.8425 UP 5.5692.3 20.5 79.81.45 96.76.85INV6.00100 20.4 79.41.44 96.06.85124 UP 6.00100 23.4 91.01.47 98.06.84INV6.00100 23.4 91.01.46 97.36.84*UP-向上INV-位置顛倒表3(續(xù))時間 溫度 小瓶位置*顆粒物質 外觀描述(微粒/小瓶的序號)(月) (℃) ≥10微米≥25微米≥50微米初始 初始 23 2 0 ccs*1 30 UP109 61 16 ccsINV 55 11 2 ccs3 4 UP29 2 0 ccsINV 59 23 2 ccs3 25 UP141 76 17 ccsINV 49 16 3 ccs6 4 UP59 21 3 ccsINV 68 20 4 ccs25 UP38 4 0 ccsINV 57 8 0 ccs124 UP21 2 0 ccsINV 18 2 0 ccs*ccs-澄清，無色溶液，基本上沒有可見微粒。
表4實施例5的干擾素α-2b穩(wěn)定性數(shù)據(jù)時間 溫度 小瓶位置 抗病毒試驗 蛋白含量 間-甲酚(CPE)(HPLC測定) 試驗(月) (℃) (×106IU/ml)(％L.S.)(μg/ml) (初始的％) (mg/ml) ％LS pH初始 初始 6.0010025.5100 1.4798.0 6.851 30 UP6.0010019.576.5 1.4999.3 6.82INV 6.0010019.576.5 1.50100 6.833 4 UP6.0010024.094.1 1.4395.3 6.81INV 6.0010024.094.1 1.4395.3 6.823 25 UP6.0010020.279.2 1.3992.7 6.82INV 6.0010019.676.9 1.4194.0 6.826 4 UP6.0010024.696.5 1.4798.0 6.82INV 6.0010024.696.5 1.4798.0 6.8325 UP6.0010017.267.5 1.4798.0 6.83INV 6.0010016.163.1 1.4898.7 6.84124 UP7.5612623.391.4 1.58105 6.88INV 7.0011723.291.0 1.4194.0 6.88
表4(續(xù))時間 溫度 小瓶位置顆粒物質外觀描述微粒/小瓶的序號)(月) (℃) ≥10微米≥25微米 ≥50微米初始 初始 144 4 4 ccs*1 30 UP 89 3 1 ccsINV64 1 0 ccs3 4UP 39 1 0 ccsINV77 19 6 ccs3 25 UP 57 1 0 ccsINV140 24 1 ccs6 4UP 66 1 0 ccsINV220 87 27 ccs25 UP 92 3 0 ccsINV241 5 0 ccs124UP 63 1 0 ccsINV119 6 1 ccs*ccs-澄清，無色溶液，基本上沒有可見微粒。
實施例1-5的制備方法A.配制如實施例2中所示的含有羥苯甲酸酯的水溶液制劑1.向配有攪拌器的適當?shù)膸A套配料容器中加入大約80％的溫度高于70℃的注射用水。
2.在另一適當?shù)娜萜髦袉为毜丶尤氪蠹s30％的注射用水。冷卻并保持水溫在20-25℃。開始用經(jīng)過過濾的氮氣鼓泡并充滿水面，以保持最終體積的物料中溶解氧的含量在或低于0.25ppm。
3.在步驟1中的配料容器中加入并混合溶解羥苯甲酸甲酯和羥苯甲酸丙酯，同時保持溶液的溫度在70-80℃。
4.冷卻步驟3的溶液至溫度在20-25℃。用經(jīng)過過濾的氮氣鼓泡和充滿溶液液面上空。保持溶解氧的含量在或低于0.25ppm。
5.在步驟4的溶液中加入并混合溶解下列組分，同時保持氮氣鼓泡和充滿氮氣無水磷酸氫二鈉磷酸二氫鈉單水合物乙二胺四乙酸二鈉鹽氯化鈉6.停止用氮氣鼓泡步驟5的溶液。保持氮氣充滿配料容器。
7.在單獨的容器中向大約50毫升注射用水(對1升體積物料)中加入并溶解多乙氧基醚80。將多乙氧基醚80的溶液轉移到步驟6的溶液中。
8.檢測溶液的pH值。pH值應該在6.6-7.0之間。不需要調節(jié)pH值。
9.將干擾素α-2b的大量藥液加入步驟8的溶液中并且同時攪拌。
10.向物料中加入已經(jīng)用氮氣鼓泡過的注射用水(來自步驟2)，達到最終體積。輕輕攪拌直到均勻。
11.通過已經(jīng)被徹底洗滌和檢測的消毒濾器無菌過濾溶液。在已經(jīng)用無菌過濾的氮氣充滿的無菌填充容器中收集無菌溶液。過濾后對濾器進行整體試驗。
12.用無菌過濾的氮氣充滿步驟11中的填充容器并密封。
B.配制如實施例3中所示的含有間-甲酚的水溶液制劑除了步驟3中的溶液溫度保持在20-25℃和在步驟6之后加入間-甲酚之外，用于制備含有作為防腐劑的間-甲酚的水溶液(如在實施例3中列出的)的制備方法與上文描述的完全相同。
C.在環(huán)境空氣下配制不含HSA的α干擾素水溶液制劑除了所有的步驟在環(huán)境空氣下進行，沒有使用氮氣鼓泡溶液或沒有使用氮氣充滿液面和環(huán)境空氣(通常含有約20％(體積)的氧氣)占據(jù)了溶液體積的上部空間之外，用于制備實施例1-4的不含HSA的α干擾素水溶液制劑的制備方法被用于制備如實施例5的制劑。
為了保持高化學、高物理和高生物學穩(wěn)定性，本發(fā)明優(yōu)選的是用于制備α干擾素水溶液的水以及如此形成的α干擾素水溶液基本上是沒有溶解氧的，該溶液在其上部空間是惰性氣體，如氮氣(含有不超過約4％(體積)的氧氣)的氣氛下被制備和貯藏。本文中使用的術語“基本上不含溶解氧”指當水溫為約20-25℃時氧含量不超過約0.25ppm。通過將惰性氣體，例如氮氣吹入用于制備水溶液的水中(保持溫度在約20-25℃)足夠長的時間(例如約30分鐘)以降低溶解氧的含量至不超過約0.25ppm，該優(yōu)選的0.25ppm的溶解氧的含量一般容易達到。整個制備過程中連續(xù)鼓泡以保持溶解氧的含量在0.25ppm。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，與具有優(yōu)選的0.25ppm溶解氧含量和在溶液上部空間的氧氣含量是4％(體積)的在相同條件下貯藏的類似水溶液制劑相比，溶解氧含量為1ppm和在溶液上部空間的氧氣含量是7％(體積)的本發(fā)明水溶液制劑被證明在25℃貯藏3個月之后α干擾素的化學穩(wěn)定性很明顯地降低。
對應地比較列于表3和4中的α-2b干擾素溶液穩(wěn)定性數(shù)據(jù)說明，對于在用于實施例4中的氮氣/低氧氣含量條件下制備的本發(fā)明水溶液制劑和根據(jù)實施例5在環(huán)境空氣下制備的本發(fā)明水溶液制劑，當在4℃貯藏12個月時，它們的穩(wěn)定性沒有明顯的差別。相反，比較在更高溫度，例如，25℃和30℃的實施例4和5的溶液中的α-2b干擾素的穩(wěn)定性說明，通過優(yōu)選(更安全)使用氮氣鼓泡以有效降低在水溶液中的溶解氧的含量，同時保持在溶液上部空間的氧氣含量為不超過4％(體積)，可以達到保護效果。
本發(fā)明的水溶液制劑可以貯藏在任何適當?shù)慕?jīng)過洗滌和消毒的填充器皿或容器中，如用灰白色丁基橡膠塞子塞緊的2毫升或5毫升1型火石玻璃小瓶。本發(fā)明的水溶液制劑也可以貯藏在預先罐裝的多劑量注射器中，如那些用于傳送可標識溶液藥如胰島素的注射器。典型和適當?shù)淖⑸淦靼ê信c筆形注射器相連的預先罐裝小瓶系統(tǒng)如可以從Novo Nordisk得到的Novolet Novo Pen。典型和適當?shù)南到y(tǒng)包括預先罐裝的筆形注射器，它使得使用者可以容易精確地重復劑量刻度自行注射。
本發(fā)明的水溶液制劑，如實施例中的水溶液制劑也可以被冷凍干燥形成可以重新調制的粉末。當在2-8℃貯藏至少2年后冷凍干燥的α-型干擾素粉末有望保持其化學和生物學穩(wěn)定性。
權利要求
1.一種具有高生物學α-型干擾素活性和不含人體血液衍生產物的穩(wěn)定的水溶液制劑，該制劑包含a.0.1×106-100×106IU/毫升α-型干擾素；b.保持pH在4.5-7.1范圍的緩沖體系；c.有效量的螯合劑；d.足以穩(wěn)定α-型干擾素對付α-型干擾素損失的一定數(shù)量的脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸聚(氧-1，2-乙二基)酯衍生物；e.有效量的張力劑；f.有效量的抗菌防腐劑；和g.足以制備上述列出組分的溶液的一定數(shù)量的注射用水。
2.根據(jù)權利要求1的組合物，其中緩沖體系是磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉。
3.根據(jù)權利要求1的組合物，其中螯合劑是乙二胺四乙酸二鈉鹽或檸檬酸。
4.根據(jù)權利要求1的組合物，其中張力劑是氯化鈉。
5.根據(jù)權利要求1的組合物，其中所述的防腐劑選自間-甲酚，苯酚，羥苯甲酸甲酯，羥苯甲酸丙酯或它們的混合物。
6.根據(jù)權利要求1的組合物，其中α-型干擾素是干擾素α-2。
7.一種具有高生物學干擾素α-2活性和不含人體血清白蛋白的穩(wěn)定的水溶液制劑，該制劑包含毫克/毫升a.干擾素α-25×106-50×106IUb.無水磷酸氫二鈉 1.8c.磷酸二氫鈉單水合物 1.3d.乙二胺四乙酸二氫二鈉0.1e.脫水山梨醇單-9-十 0.1八碳烯酸聚(氧-1，2-乙二基)酯衍生物f.羥苯甲酸甲酯1.2g.羥苯甲酸丙酯0.12h.氯化鈉 7.5i.注射用水適量加至1毫升
8.一種具有高生物學干擾素o-2活性和不含人體血清白蛋白的穩(wěn)定的水溶液制劑，該制劑包含毫克/毫升a.干擾素α-2 5×106-50×106IUb.無水磷酸氫二鈉 1.8c 磷酸二氫鈉單水合物 1.3d.乙二胺四乙酸二氫二鈉 0.1e.脫水山梨醇單-9-十0.1八碳烯酸聚(氧-1，2-乙二基)酯衍生物f.間-甲酚 1.5g.氯化鈉 7.5h.注射用水 適量加至1毫升
9.一種包含包裝材料和任何前述權利要求的制劑的生產產品，其中所述的包裝材料是多劑量玻璃小瓶。
10.一種包含預先罐裝的注射器的生產產品，其中注射器裝有有效量的任何前述權利要求的制劑。
11.一種包含包裝材料和任何前述權利要求的制劑的生產產品，其中所述的包裝材料是單劑量小瓶。
12.一種制備具有高生物學α-型干擾素活性和不含人體血液衍生產物的穩(wěn)定的水溶液制劑的方法，該方法包括將有效量的α-型干擾素與能夠保持pH在4.5-7.1范圍的緩沖體系，螯合劑，脫水山梨醇單-9-十八碳烯酸聚(氧-1，2-乙二基)酯衍生物，張力劑，抗菌防腐劑和足夠的水混合制成溶液。
13.根據(jù)權利要求12的方法，其中水溶液在基本上沒有溶解氧的條件下被制備和保存。
全文摘要
本文公開了含有α-型干擾素，例如，干擾素α-2a和干擾素α-2b，保持pH范圍在4.5-7.1的緩沖劑，作為穩(wěn)定劑的多乙氧基醚80，作為螯合劑的乙二胺四乙酸二鈉鹽，作為張力劑的氯化鈉，和作為抗菌防腐劑的間-甲酚的穩(wěn)定的水溶液制劑，該制劑在至少24個月的長期貯藏時效內保持α-型干擾素的高化學、高物理和高生物學穩(wěn)定性。
文檔編號A61K9/08GK1160355SQ95195600
公開日1997年9月24日 申請日期1995年10月10日 優(yōu)先權日1994年10月11日
發(fā)明者袁佩豪, D·F·克萊恩 申請人:先靈公司