專利名稱：抑制與神經(jīng)肽y有關(guān)的病癥的方法
神經(jīng)肽Y(neuropeptide Y)是存在于中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)中的肽。在許多神經(jīng)元中，該肽與去甲腎上腺素共存，并作為神經(jīng)遞質(zhì)本身或與去甲腎上腺素協(xié)同作用。含神經(jīng)肽Y的纖維在心臟動(dòng)脈周圍有許多，但也可在呼吸道、消化道、泌尿生殖道周圍找到。神經(jīng)肽Y也存在于大腦，對血壓、攝食和不同激素的釋放有影響。中樞神經(jīng)中神經(jīng)肽Y濃度的改變與精神病的病因有關(guān)。
神經(jīng)肽Y是在10年以前，作為發(fā)現(xiàn)羧基末端酰胺化肽的一般篩選方案的一部分，從豬腦中發(fā)現(xiàn)、分離和測序的，由于它是從神經(jīng)組織中分離的，并且在氨基和羧基末端都有酪氨酸，因此被命名為神經(jīng)肽Y。神經(jīng)肽Y是胰多肽家族的一員，與胰多肽和肽YY有明顯的序列同源性。
神經(jīng)肽Y和它的肽家族的其他成員的共同特征是有一個(gè)四級結(jié)構(gòu)，該四級結(jié)構(gòu)中含有N末端多聚脯氨酸螺旋和兩親的α螺旋，二者以β折疊相連，形成一個(gè)發(fā)夾樣的環(huán)，有時(shí)被稱為胰多肽(PP)折疊。螺旋以疏水相互作用維系在一起。酰胺化的C末端從發(fā)夾環(huán)伸出。
在發(fā)現(xiàn)神經(jīng)肽之后，它被確定為中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最豐富的肽，并且分布很廣，包括皮層、腦干、海馬、下丘腦、扁桃體和丘腦，也存在于外周神經(jīng)系統(tǒng)的交感神經(jīng)元和腎上腺嗜鉻細(xì)胞中。
由于神經(jīng)肽Y貯存于突觸顆粒，由電神經(jīng)興奮釋放，并作用于特異性受體，因此看來它滿足神經(jīng)遞質(zhì)的主要標(biāo)準(zhǔn)。據(jù)信神經(jīng)肽Y依其自身是一種重要的信使，它可能是在腦中作為信使存在，在腦中，神經(jīng)肽Y強(qiáng)烈地抑制腺苷酸環(huán)化酶的活性并誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)鈣水平的增加。中樞內(nèi)注射神經(jīng)肽Y會(huì)導(dǎo)致血壓改變，增加攝食，增加脂肪蓄積，升高血糖和胰島素，降低運(yùn)動(dòng)器(locomotor)活性，降低體溫，以及強(qiáng)直性昏厥。
神經(jīng)肽Y(及其化學(xué)相關(guān)物)作用于膜受體，這些膜受體依賴于鳥嘌呤核苷，被稱為G蛋白受體。G蛋白是膜蛋白的一個(gè)家族，其只在結(jié)合了三磷酸鳥苷之后才被激活。激活的G蛋白隨后激活膜內(nèi)側(cè)上的放大(amplifier)酶；該酶將前體分子轉(zhuǎn)化為第二信使。
神經(jīng)肽Y看來與緊密相關(guān)的受體家族相互作用?；诓煌M織和受體結(jié)合神經(jīng)肽Y和緊密相關(guān)的肽YY的不同片段的能力，這些受體一般被分成幾個(gè)亞型(subtype)。Y1受體亞型看來是主要的血管神經(jīng)肽Y受體。Y2受體亞型也可存在于血管平滑肌的接點(diǎn)后。尚未被分離的Y3受體亞型看來是神經(jīng)肽Y特異性的，它不結(jié)合肽YY。這些受體可能存在于腎上腺組織、髓質(zhì)、心和腦干，以及其他地方。(神經(jīng)肽Y和神經(jīng)肽Y受體的綜述見，例如，C.Wahlestedt和D.Reis，藥理學(xué)和毒理學(xué)年鑒，33309-352(1993))。
從大量的與神經(jīng)肽Y過量有關(guān)的臨床病癥的角度來看，開發(fā)神經(jīng)肽Y受體的拮抗劑有助于控制這些臨床病癥。最早的這樣的受體拮抗劑是肽衍生物。這些拮抗劑因其代謝不穩(wěn)定性而只有有限的藥用價(jià)值。
從本質(zhì)上說，本發(fā)明提供了一類強(qiáng)力的，非肽類的神經(jīng)肽Y受體拮抗劑。由于其非肽類的特性，本發(fā)明的化合物不具有肽類神經(jīng)肽Y受體拮抗劑的代謝不穩(wěn)定性的缺點(diǎn)。
本發(fā)明涉及治療和預(yù)防與神經(jīng)肽Y過量有關(guān)的生理失調(diào)方法，該方法包括向需要治療的哺乳動(dòng)物施用有效量的式I化合物，
其中R1和R3獨(dú)立地是氫、-CH3、
或
其中Ar是被任意取代的苯基；R2選自吡咯烷子基(pyrrolidino)、六亞甲基亞氨基(hexamethyleneimino)和哌啶子基(piperidino)，及其藥用鹽和溶劑化物。
本發(fā)明涉及這樣的發(fā)現(xiàn)，即特定的化合物2-苯基-3-芳?；讲⑧绶?苯并噻吩)，也就是式I的那些化合物，有助于抑制與神經(jīng)肽Y過量有關(guān)的生理失調(diào)。
本發(fā)明提供的治療和預(yù)防處理可如下進(jìn)行向需要治療和預(yù)防處理的人施用式I化合物或其藥用鹽或溶劑化物，其劑量可以有效地抑制與神經(jīng)肽Y過量有關(guān)的生理失調(diào)及其癥狀。
術(shù)語“抑制”包括其通常被接受的含義，包括阻止、防止、限制以及減緩、終止或回復(fù)進(jìn)行性的、嚴(yán)重的或具后果的癥狀。對于這些，本方法包括適當(dāng)?shù)闹委熜院?或預(yù)防性給藥。
雷洛昔芬(raloxifene)是本發(fā)明的優(yōu)選的化合物，它是一種式I化合物的鹽酸鹽，其中R1和R3是氫，R2是1-哌啶基。
一般地，至少一種式I化合物與通常的賦形劑、稀釋劑或載體一起配制并壓制成藥片，或被配制成酏劑或適于口服或肌肉內(nèi)或靜脈內(nèi)施用的溶液。該化合物可以透皮施用，可被制成持續(xù)釋放的劑型等。
本發(fā)明方法所用的化合物可根據(jù)已建立的方法制備，比如詳述于美國專利4,133,814號、4,418,068號和4,380,635號中的，在此引入作為參考。一般地，該方法始自具有6-羥基基團(tuán)的苯并[b]噻吩和2-(4-羥基苯基)基團(tuán)。起始化合物被保護(hù)、乙?；?、去保護(hù)，生成式I化合物。這些化合物的制備實(shí)施例由上述美國專利提供。術(shù)語“被任意取代的苯基”包括苯基和被C1-C6烷基、C1-C4烷氧基、羥基、硝基、氯、氟或三(氯或氟)甲基一次或二次取代的苯基。
本發(fā)明方法所用的化合物與多種有機(jī)和無機(jī)酸和堿形成藥用酸和堿加成鹽，包括藥物化學(xué)領(lǐng)域經(jīng)常使用的生理可接受鹽。這些鹽也是本發(fā)明的一部分。形成這些鹽的的典型無機(jī)酸包括氫氯酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、連二磷酸等。也可使用由有機(jī)酸，比如脂肪一和二羧酸，苯基取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸以及羥基鏈烷二元酸、芳香酸、脂肪族和芳香族磺酸得到的鹽。藥用鹽包括乙酸鹽、苯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙烯酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、鄰乙氧基苯甲酸鹽、萘基-2-苯甲酸鹽、溴化物、異丁酸鹽、苯基丁酸鹽、β-羥基丁酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、己炔-1，4-二酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、鹽酸鹽、肉桂酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、延胡索酸鹽、乙醇酸鹽、庚酸鹽、馬尿酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、羥基馬來酸鹽、丙二酸鹽、杏仁酸鹽、甲磺酸鹽、尼克酸鹽、異尼克酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、苯二酸鹽、苯三酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、丙炔酸鹽、丙酸鹽、苯丙酸鹽、水楊酸鹽、癸二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、焦硫酸鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磺酸鹽、苯磺酸鹽、對溴苯磺酸鹽、氯苯磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、甲磺酸鹽、1-萘磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽等。優(yōu)選的鹽是鹽酸鹽。
藥用酸加成鹽典型地由式I化合物與等摩爾或過量的酸反應(yīng)生成。反應(yīng)物一般在相容溶劑，如乙醚或苯中結(jié)合。鹽一般在1小時(shí)至10天內(nèi)從溶液中沉淀出來，并可通過過濾分離，或通過常規(guī)方法除去溶劑。
用于生成鹽的堿一般包括氫氧化銨，堿和堿土金屬氫氧化物，碳酸鹽，以及脂肪和伯、仲、叔胺，脂肪二胺。在制備加成鹽方面特別有用的堿包括氫氧化銨、碳酸鉀、甲胺、二乙胺、次乙基二胺和環(huán)己胺。
與它們所來自的化合物相比，藥用鹽一般具有更強(qiáng)的溶解性，通常更適于制成液體或乳液。
藥物制劑可用本領(lǐng)域已知的方法制備。例如，化合物可以與通常的賦形劑、稀釋劑或載體一起配制，制成片劑、膠囊、懸劑、粉末等。適于這些制劑的賦形劑、稀釋劑和載體的例子包括填充劑和增量劑，如淀粉、糖、甘露醇和硅酸衍生物；結(jié)合劑，如羧甲基纖維素和其他纖維素衍生物，藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮；保濕劑，如甘油；崩解劑，如碳酸鈣和碳酸氫鈉；緩溶劑，如石蠟；吸收促進(jìn)劑，如季銨化合物；表面活性劑，如鯨蠟醇，酯；吸附載體，如高嶺土和皂土；以及潤滑劑，如滑石粉，硬脂酸鈣和硬脂酸鎂，固體聚乙二醇。
該化合物也可被制成酏劑或適于口服的溶液，或適于胃腸外，如肌肉內(nèi)、皮下或靜脈內(nèi)，施用的溶液。此外，該化合物也適于制成緩釋劑型等。這些制劑可如此構(gòu)成，使得它們可能在一段時(shí)間內(nèi)，僅在腸道，或優(yōu)選地在腸道的特定部位，釋放活性成分。包衣、外殼和保護(hù)性基質(zhì)可由例如聚合物或蠟制成。
根據(jù)本發(fā)明，用于抑制與神經(jīng)肽Y過量有關(guān)的生理失調(diào)及其癥狀的式I化合物的具體劑量，應(yīng)依賴于病癥的嚴(yán)重程度，施用途徑，以及由主治醫(yī)師決定的相關(guān)因素。一般地，被接受的和有效的日劑量是大約0.1至1000毫克/天，更典型的是大約50至200毫克/天。該劑量被施用給需要治療的患者每日一次到大約三次，或更多次，以便有效地治療或預(yù)防所述病癥或癥狀。
如同一般是以帶有堿性基團(tuán)(比如吡啶環(huán))的藥物的施用一樣，通常優(yōu)選的是施用式I化合物的酸加成鹽。為此目的，可使用以下口服劑型。
制劑在以下制劑中，“活性成分”指的是式I化合物。制劑1明膠膠囊硬明膠膠囊制備如下成分?jǐn)?shù)量(毫克/膠囊)活性成分0.1-1000淀粉，NF0-650淀粉可流動(dòng)粉末 0-650350厘斯硅流體 0-15將各成分混合，通過45目(mesh)U.S.篩，填入硬明膠膠囊。雷洛昔芬的特定膠囊制劑的實(shí)施例制備如下制劑2雷洛昔芬膠囊成分 數(shù)量(毫克/膠囊)雷洛昔芬 1淀粉，NF112淀粉可流動(dòng)粉末 225.3350厘斯硅流體 1.7制劑3雷洛昔芬膠囊成分 數(shù)量(毫克/膠囊)雷洛昔芬 5淀粉，NF108淀粉可流動(dòng)粉末 225.3350厘斯硅流體 1.7制劑4雷洛昔芬膠囊成分 數(shù)量(毫克/膠囊)雷洛昔芬 10淀粉，NF 103淀粉可流動(dòng)粉末225.3350厘斯硅流體 1.7制劑5雷洛昔芬膠囊成分 數(shù)量(毫克/膠囊)雷洛昔芬 50淀粉，NF 150淀粉可流動(dòng)粉末397350厘斯硅流體 3.0上述特定制劑可依照所提供的合理變化而改變。片劑可由下述成分制備制劑6藥片成分 數(shù)量(毫克/藥片)活性成分 0.1-1000微晶纖維素 0-650鍛制二氧化硅 0-650硬脂酸 0-15將各成分混合，壓成藥片?？蛇x地，含有0.1-1000毫克活性成分的藥片的組成如下制劑7藥片成分?jǐn)?shù)量(毫克/藥片)活性成分0.1-1000淀粉45微晶纖維素 35聚乙烯吡咯烷酮(10％水溶液) 4羧甲基纖維素鈉 4.5硬脂酸鎂0.5滑石1將活性成分、淀粉和纖維素通過45目U.S.篩并充分混合。得到的粉末與聚乙烯吡咯烷酮混合，然后通過14目U.S.篩。制得的顆粒在50-60℃下干燥并通過18目U.S.篩。然后將預(yù)先通過60目U.S.篩的羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石加到顆粒中，混合后，在壓片機(jī)中壓成藥片。
每5毫升劑量含有0.1-1000毫克活性成分的懸液制備如下制劑8懸液成分 數(shù)量(毫克/5毫升)活性成分 0.1-1000毫克羧甲基纖維素鈉 50毫克糖漿 1.25毫克安息香酸溶液 0.10毫克香味劑 q.v.色素 q.v.純水加至 5毫升將活性成分通過45目U.S.篩并與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合形成調(diào)勻的膏體。安息香酸、香味劑和色素是用一些水稀釋的，并通過攪拌加入。隨后加入足量的水以達(dá)到所需的體積。
本發(fā)明的化合物與神經(jīng)肽Y以及緊密相關(guān)的神經(jīng)肽的特異性受體結(jié)合。(神經(jīng)肽Y受體的綜述見D.Genlert，生命科學(xué)，55551-562(1994))。神經(jīng)肽Y和神經(jīng)肽YY的受體有相當(dāng)?shù)囊恢滦?，而胰多肽看來有其?dú)特的受體。用肽YY可以重復(fù)神經(jīng)肽Y的許多但不是全部作用。
采用交感神經(jīng)系統(tǒng)標(biāo)本，基于神經(jīng)肽Y的13-36片段的親和性，人們起先認(rèn)為神經(jīng)肽Y的受體有兩個(gè)亞型。雖然它們是神經(jīng)肽Y的確定的受體，但有證據(jù)表明還有其他的受體亞型。最確定的是Y-3受體，它對神經(jīng)肽Y有應(yīng)答，對肽YY沒有。近來發(fā)現(xiàn)的另一受體被描述為結(jié)合肽YY時(shí)有高親和性，而對神經(jīng)肽Y有低的親和性。雖然神經(jīng)肽Y的攝食(feeding)應(yīng)答的藥理看來與Y-1受體有關(guān)，但認(rèn)為存在單獨(dú)的“攝食受體”。Y-1受體是目前唯一的被成功地克隆的。下文將詳述已知的神經(jīng)肽Y受體的資料和它們潛在的生理作用。
Y-1受體Y-1受體是被最佳地表征的神經(jīng)肽Y受體。該受體一般地被認(rèn)為是突觸后的，在外周神經(jīng)中介導(dǎo)神經(jīng)肽Y的許多已知的作用。開始時(shí)，該受體被描述為對神經(jīng)肽Y的C末端片段，比如13-36片段，有低的親和性，但是以相同的親和性與全長神經(jīng)肽Y和肽YY相互作用。C.Wahlestedt等，調(diào)節(jié)肽(Regulatory Peptides)，13307-318(1986)；C.Wahlestedt等，血管功能中的神經(jīng)信使(Neuronal Messengers in VascularFunction)，231-241(Nobin等編，1987)。以脯氨酸(Pro34)替代第34位氨基酸得到對Y-1受體有特異性的蛋白。E.K.Potter等，歐洲藥學(xué)雜志，19315-19(1991)。這個(gè)方法被用來確定在不同功能中Y-1受體的作用。該受體被認(rèn)為在大腦皮層、血管平滑肌細(xì)胞和SK-N-MC中以一種抑制性的方式與腺苷酸環(huán)化酶偶聯(lián)。(綜述見B.J.McDermott等，心血管研究，27893-905(1993))。這個(gè)作用被百日咳毒素抑制，百日咳毒素可以確定G蛋白偶聯(lián)的受體的作用。Y-1受體介導(dǎo)豬血管平滑肌細(xì)胞和人紅白血病細(xì)胞內(nèi)鈣的運(yùn)動(dòng)。
被克隆的人Y-1受體與水解或腺苷酸環(huán)化酶的抑制有關(guān)，其依賴于受體在其中表達(dá)的細(xì)胞的類型。H.Herzog等，美國國家科學(xué)院院刊，895794-5798(1992)。據(jù)報(bào)道，當(dāng)用天然表達(dá)Y-1受體的組織標(biāo)本或細(xì)胞系研究時(shí)，Y-1受體都與第二信使系統(tǒng)有關(guān)。D.Gehlert，引文同上，553頁。Y-1受體因此不能僅根據(jù)其與某一第二信使有關(guān)而被區(qū)別開來。
Y-2受體與Y-1受體一樣，該受體亞型是首先用血管標(biāo)本描述的。從藥理上看，Y-2受體與Y-1受體的不同之處在于它對神經(jīng)肽Y的C末端片段有親和性。通常采用神經(jīng)肽Y(13-36)將該受體區(qū)分開來，盡管神經(jīng)肽Y和肽YY的3-36片段可以提高親和性和選擇性。Y.Dumont等，神經(jīng)科學(xué)協(xié)會(huì)摘要，19726(1993)。象Y-1受體一樣，該受體與腺苷酸環(huán)化酶的抑制有關(guān)，雖然在一些標(biāo)本中它可能不對百日咳毒素敏感。人們發(fā)現(xiàn)Y-2受體通過選擇性地抑制N型鈣通道而降低中鈣的細(xì)胞內(nèi)水平。與Y-1受體一樣，Y-2受體與不同的第二信使有關(guān)。
Y-2受體在大腦的不同區(qū)域中被發(fā)現(xiàn)，包括海馬、黑質(zhì)外側(cè)、丘腦、下丘腦和腦干。在外周中，Y-2在外周神經(jīng)系統(tǒng)中被發(fā)現(xiàn)，包括交感神經(jīng)元、副交感神經(jīng)元和感覺神經(jīng)元。在所有這些組織中，Y-2受體介導(dǎo)神經(jīng)遞質(zhì)釋放的減少。
Y-3受體該受體是最新確定并且被研究得最少的神經(jīng)肽Y受體亞型。雖然神經(jīng)肽Y在這個(gè)受體族群中是充分有效的激動(dòng)劑，但肽YY不太有效。這一藥理學(xué)上的特性被用來確認(rèn)這個(gè)受體。與Y-3受體有相似藥理學(xué)特征的受體已用電生理技術(shù)在海馬的CA3區(qū)被確認(rèn)。該受體可以強(qiáng)化這些神經(jīng)元對N-甲基-D-天門冬氨酸酯(NMDA)的興奮性應(yīng)答。F.P.Monnet等，歐洲藥學(xué)雜志，182207-208(1990)。
該受體的存在是在大鼠的腦干，特別是在孤束核中，被最明確地確認(rèn)的。向這個(gè)區(qū)域施加神經(jīng)肽Y會(huì)導(dǎo)致血壓和心率的劑量依賴性降低。腦中的這個(gè)區(qū)域也明顯地受到Y(jié)-1和Y-2受體的影響。神經(jīng)肽Y，可能通過Y-3受體，也抑制乙酰膽堿誘導(dǎo)的兒茶酚胺由腎上腺髓質(zhì)的釋放。C.Wahlestedt等，生命科學(xué)，50PL7-PL14(1992)。
親肽YY受體第四種受體被描述為相對神經(jīng)肽Y而言，更適度地親近于肽YY。該受體最先描述于大鼠的小腸，對肽YY的親和性比對神經(jīng)肽Y高5-10倍。M.Laburthe等，內(nèi)分泌學(xué)，1181910-1917(1986)。隨后，該受體被發(fā)現(xiàn)于脂肪細(xì)胞和腎近曲小管細(xì)胞系中。該受體以抑制性方式同腺苷酸環(huán)化酶有關(guān)并對百日咳毒素敏感。
在腸內(nèi)，該受體對液體和電解質(zhì)的分泌有強(qiáng)烈的抑制作用。該受體位于小囊細(xì)胞(crypt cell)中，腸氯化物的分泌被認(rèn)為是在此處進(jìn)行的。脂肪細(xì)胞中的親肽YY受體通過依賴環(huán)腺苷酸(cAMP)的機(jī)制介導(dǎo)脂解的減少。
“攝食受體”神經(jīng)肽Y對中樞系統(tǒng)的影響的最早發(fā)現(xiàn)之一，是在對大鼠的下丘腦施用該肽后，發(fā)現(xiàn)對食物的攝入顯著增加。當(dāng)該肽被注入下丘腦perifornical區(qū)時(shí)，應(yīng)答最為明顯，B.G.Stanley等，腦研究，604304-317(1993)。雖然該應(yīng)答的病理與Y-1受體類似，但神經(jīng)肽Y的2-36片段比神經(jīng)肽Y作用得更為強(qiáng)烈。此外，腦室內(nèi)的神經(jīng)肽Y(2-36)充分地刺激攝食，但與全長神經(jīng)肽Y不同的是它不降低體溫。F.B.Jolicoeur等，腦研究公報(bào)，26309-311(1991)。
本發(fā)明化合物的生物活性是用初始篩選檢測法測定的，該檢測法可以快速而精確地測定受試化合物與神經(jīng)肽Y受體的已知位點(diǎn)的結(jié)合。用于測定神經(jīng)肽Y受體拮抗劑的檢測法是本領(lǐng)域內(nèi)熟知的。見，例如，美國專利5,284,839，1994年2月8日公開，在此引入作為參考?；蛞奙.W.Walker等，神經(jīng)科學(xué)雜志，82438-2446(1988)。
神經(jīng)肽Y結(jié)合檢測本發(fā)明化合物的性能是以它們結(jié)合神經(jīng)肽Y的能力確定的，所用的方案主要如M.W.Walker等所述，引文同上。該檢測采用了SK-N-MC細(xì)胞系。該細(xì)胞系得自紐約的Sloane-Kettering Memorial醫(yī)院。這些細(xì)胞在T-150燒瓶中培養(yǎng)，使用的是補(bǔ)充了5％的胎牛血清的Dulbecco氏基本培養(yǎng)基(MEME)。這些細(xì)胞通過刮取而被從燒瓶中人工地轉(zhuǎn)移，成球(pelleted)，貯存于-70℃。
用玻璃勻漿器將這些小球重懸于含有2.5mM氯化鈣、1mM氯化鎂和2mg/L桿菌肽的25mM HEPES(pH7.4)緩沖液中。將含有0.1nM125I-神經(jīng)肽YY(2200Ci/mmol)和0.2-0.4毫克蛋白的200微升終體積在室溫下溫育2小時(shí)。
非特異性結(jié)合是由在1μM神經(jīng)肽Y存在的條件下，溫育后的組織中剩余的放射性來確定的。在一些實(shí)驗(yàn)中，溫育混合物中含有不同濃度的化合物。
通過經(jīng)由玻璃纖維濾器的快速過濾將溫育終止，所述濾器預(yù)先用3％聚乙烯亞胺浸濕，使用的是96孔收集器(harvester)。濾器用5毫升50mMTris(pH7.4)在4℃下清洗并在60℃下快速干燥。濾器隨后用melt-onscintillation sheets處理并對留在濾器上的放射性進(jìn)行計(jì)數(shù)。用不同的軟件包分析結(jié)果，用標(biāo)準(zhǔn)的考馬斯蛋白檢測試劑測量蛋白濃度，用牛血清白蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)。取代 IC50(μM)R1R2R3Y1CH31-哌啶子基 H ～12H 1-六亞甲基亞 H ～20氨基H 1-哌啶子基 H ～10H 1-哌啶子基 H ～10*H 1-吡咯烷子基 H ～17H 1-吡咯烷子基 H ～10**-鹽酸鹽由于式I化合物是有效的神經(jīng)肽Y受體拮抗劑，因此這些化合物對于治療多種臨床病癥都是有效的，這些病癥的特征是存在過量的神經(jīng)肽Y。由此，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防與神經(jīng)肽Y過量有關(guān)的生理失調(diào)的方法，該方法包括對需要治療的哺乳動(dòng)物施用有效量的式I化合物或其藥用鹽，溶劑化物或前藥。術(shù)語“與神經(jīng)肽Y過量有關(guān)的生理失調(diào)”包括與神經(jīng)肽Y受體的不適當(dāng)激活有關(guān)的失調(diào)，不涉及存在于該處中的神經(jīng)肽Y的真實(shí)數(shù)量。
這些生理失調(diào)可以包括與心臟、血管或腎系統(tǒng)有關(guān)的失調(diào)或疾病，如血管痙攣、心力衰竭、休克、心臟肥大、高血壓、心絞痛、心肌梗塞、心跳驟停、心律失常、外周血管疾病，以及腎病，如液體流動(dòng)不暢、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)失?；蚰I衰竭；與交感神經(jīng)活性增加有關(guān)的病癥，如在冠狀動(dòng)脈以及胃腸道手術(shù)之中或之后；
腦部疾病和與中樞神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)的疾病，比如腦血栓、神經(jīng)退變、癲癇、中風(fēng)，以及與中風(fēng)、腦血管痙攣和腦溢血、抑郁、焦慮、精神分裂和癡呆；與痛覺(pain)或痛感(nociception)有關(guān)的的病癥；與胃腸運(yùn)動(dòng)和分泌失常有關(guān)的疾病，比如不同形式的腸梗阻、尿失禁和Crohn氏病；飲食攝入失常導(dǎo)致的失調(diào)，比如肥胖、厭食、食欲過盛和代謝失調(diào)；與性機(jī)能障礙和生殖失調(diào)有關(guān)的疾?。慌c炎癥有關(guān)的病癥或失調(diào)；呼吸疾病，比如氣喘和與氣喘和支氣管縮小有關(guān)的病癥；以及與激素釋放，比如促黃體生成激素、生長激素、胰島素和催乳激素失常有關(guān)的疾病。
權(quán)利要求
1.一種抑制與神經(jīng)肽Y過量有關(guān)的生理失調(diào)的方法，該方法包括對需要治療的人施用有效量的下式化合物或其藥用鹽或溶劑化物，
其中R1和R3獨(dú)立地是氫、-CH3、
或
Ar，其中Ar是被任意取代的苯基；R2選自吡咯烷子基、六亞甲基亞氨基和哌啶子基。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述化合物是其鹽酸鹽。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述施用是預(yù)防性的。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述化合物是
或其鹽酸鹽。
5.權(quán)利要求1的方法，其中與神經(jīng)肽Y過量有關(guān)的病癥是焦慮。
6.權(quán)利要求1的方法，其中與神經(jīng)肽Y過量有關(guān)的病癥是肥胖。
7.權(quán)利要求1的方法，其中與神經(jīng)肽Y過量有關(guān)的病癥是抑郁。
8.權(quán)利要求1的方法，其中與神經(jīng)肽Y過量有關(guān)的病癥是痛覺或痛感。
全文摘要
一種抑制與神經(jīng)肽Y過量有關(guān)的生理失調(diào)或其癥狀的方法，該方法包括對需要治療的人施用有效量的式(I)化合物或其藥用鹽或溶劑化物，其中R
文檔編號A61P43/00GK1160998SQ95195703
公開日1997年10月1日 申請日期1995年10月19日 優(yōu)先權(quán)日1994年10月20日
發(fā)明者小·R·F·布倫斯, D·R·格勒爾特, J·J·豪貝爾特, W·H·W·盧恩 申請人:伊萊利利公司