專利名稱：：用于γ-氨基丁酸受體的變構(gòu)調(diào)節(jié)的雄甾烷和孕甾烷組系的制作方法
背景技術(shù)：
：本發(fā)明涉及通過γ-氨基丁酸A(GABAA)受體-氯離子載體復(fù)合物(GRC)來調(diào)節(jié)動物腦應(yīng)激性的方法，組合物，和化合物。具體地說，本發(fā)明涉及通過與GRC上的神經(jīng)類固醇受體位點結(jié)合來調(diào)節(jié)腦應(yīng)激性的方法，組合物，和化合物。腦應(yīng)激性是指動物的喚起水平，從昏迷到驚厥的連續(xù)區(qū)，它由各種神經(jīng)遞質(zhì)來調(diào)節(jié)。一般來說，神經(jīng)遞質(zhì)可調(diào)節(jié)離子穿過神經(jīng)元膜的傳導(dǎo)率。靜息狀態(tài)時，神經(jīng)元膜具有大約-80mV的電勢(或膜電壓)，相對于細(xì)胞外部來說，細(xì)胞內(nèi)是負(fù)電的。該電位(電壓)是離子(K+，Na+，Cl-，有機陰離子)在神經(jīng)元半透膜兩側(cè)達(dá)到平衡的結(jié)果。神經(jīng)遞質(zhì)聚集于突觸前小泡中并在神經(jīng)元動態(tài)電位的影響下釋放。當(dāng)釋放到突觸間隙中時，象乙酰膽堿這樣的化學(xué)遞質(zhì)將引起膜去極化(電位由-80mV變?yōu)?50mV)。這一效應(yīng)通過突觸后的由乙酰膽堿興奮的煙堿受體傳遞從而增加了膜對Na+離子的通透性。降低了的膜電位以突觸后動態(tài)電位的形式或促進神經(jīng)元的興奮性。就GRC來說，其對腦應(yīng)激性的效應(yīng)由GABA，一種神經(jīng)遞質(zhì)來傳遞。GABA對所有腦應(yīng)激性都有深刻的影響，因為在大腦中利用GABA作為神經(jīng)遞質(zhì)的神經(jīng)元達(dá)到40％。GABA通過調(diào)節(jié)氯離子穿過神經(jīng)元膜的傳導(dǎo)率來調(diào)節(jié)單個神經(jīng)元的應(yīng)激性。GABA與GRC上的識別部位結(jié)合從而促進氯離子沿著GRC的電化學(xué)梯度流到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)陰離子濃度升高導(dǎo)致跨膜電位的超極化，使得神經(jīng)元對興奮的輸入不敏感(即降低了神經(jīng)元的應(yīng)激性)。換句話說，神經(jīng)元中氯離子濃度越高，腦應(yīng)激性(喚起水平)就越低。有許多資料證明，GRC是引起焦慮，癲癇發(fā)作活性，和鎮(zhèn)靜的媒介，因此，GABA和作用類似于GABA或能促進GABA的效應(yīng)的藥物(例如有治療作用的巴比妥類和苯并二氮卓類(BZs)，如安定)通過與GRC上的特異性的調(diào)節(jié)部位相互作用而產(chǎn)生它們的治療作用。同時也觀察到，一系列的類固醇代謝物與GRC相互作用而改變了腦應(yīng)激性(Majownlcn，M.D.等人，科學(xué)2321004-1007(1986)；Harrison，N.L.等人，藥理學(xué)與實驗治療雜志241346-353(1987))。在本發(fā)明之前，這些類固醇代謝物的治療作用沒有被本領(lǐng)域中的工作人員認(rèn)識到，因為對它們的效力和作用部位還不完全清楚。申請人的發(fā)明部分涉及已知的一些藥物應(yīng)用，這些知識是通過對某些類固醇化合物的作用部位和效力的進一步了解而得到的。實驗證明卵巢激素黃體酮及其代謝物對腦應(yīng)激性有深刻影響(Backstrom，T.等人，ActaObstet.Gynecd，Scand，Suppl，13019-24(1985)；Pfaff，D.W.和McEwen，B.S.，科學(xué)219808-814(1983)；Gyermek等人，藥物化學(xué)雜志11117(1968)；和Lambert，J.等人，藥理學(xué)發(fā)展8224-227(1987))。黃體酮及其代謝物的水平隨著月經(jīng)周期而變化。許多資料已證明黃體酮及其代謝物在月經(jīng)開始前下降。還有許多資料證明在每個月的月經(jīng)開始前總會出現(xiàn)某些體征。這些癥狀與經(jīng)前期綜合征(PMS)有關(guān)，包括緊張不安，焦慮，和偏頭痛(Dalton，K.，經(jīng)前期綜合征與黃體酮療法，第二版，ChicagoChicagoyearbook1984)。PMS病人的這些癥狀在每個月的月經(jīng)前出現(xiàn)，月經(jīng)后則消失。用相似的方法證明，降低黃體酮水平與女性癲癇患者癲癇發(fā)作頻率升高有時間相關(guān)性(即月經(jīng)性癲癇；Laidlaw，J.，“月經(jīng)性癲癇”，Lancet，1235-1237(1956))。同時觀察到其與黃體酮代謝物的降低有更直接的關(guān)系(Rosciszewska等人，神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科與精神病學(xué)雜志4947-51(1986))。此外，對于初期擴散的癲癇小發(fā)作病人來說，其發(fā)病的時間與經(jīng)前期綜合征的癥狀的出現(xiàn)有關(guān)(Backstrom，T.等人，J.Psychosom.Obstet.Gynaecol.28-20(1983))?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)類固醇脫氧皮質(zhì)酮對與月經(jīng)周期相關(guān)的癲癇病人有治療作用(Aird.R.B.和Godan，G.，J.Amer.Med.Soc.145715-719(1951))。同樣與低黃體酮水平有關(guān)的綜合征是產(chǎn)后抑郁癥(PND)。生產(chǎn)后黃體酮水平立即顯著下降導(dǎo)致PND的發(fā)生。PND的癥狀包括從輕度抑郁到需住院治療的精神??；PND伴隨產(chǎn)生嚴(yán)重焦慮和易怒。與PND有關(guān)的抑郁癥不適合用經(jīng)典的抗抑郁藥來治療，且患有PND的婦女顯示出PMS發(fā)病率升高(Dalton，K，1984)。總起來說，這些觀察結(jié)果表明了黃體酮和脫氧皮質(zhì)甾酮，更準(zhǔn)確地說是它們的代謝物在腦應(yīng)激性的自動調(diào)節(jié)中的關(guān)鍵性作用，這表現(xiàn)為癲癇發(fā)作活性的升高或與月經(jīng)性癲癇，PMS，和PND相關(guān)的癥狀增強。黃體酮水平降低和出現(xiàn)與PMS，PND，和月經(jīng)性癲癇相關(guān)的癥狀二者之間的聯(lián)系(Backstrom等人，1983；Dalton，K.，1984)已促使了將黃體酮用于治療這些疾病(Mattson等人，inAdvancesinepilopsologyxEpilopsyInternationalSymposium，RnvenPress，NewYork，279-282，1984，和Dalton，K.，1984)。然而，黃體酮在治療上述綜合征時不是始終有效的。例如用黃體酮治療PMS時沒有劑量應(yīng)答關(guān)系存在(Maddocks，等人，婦產(chǎn)科學(xué)154573-581(1986)；Dennerstein等人，英國醫(yī)學(xué)雜志29016-17(1986))。在此將上述出版物和文獻(xiàn)引入本說明書中作為參考。發(fā)明概述本發(fā)明涉及調(diào)節(jié)腦應(yīng)激性的方法，組合物和化合物。更具體地說，本發(fā)明涉及3α羥基化的類固醇衍生物的應(yīng)用，其作用于GR復(fù)合物上的新的識別部位，可調(diào)節(jié)腦應(yīng)激性從而減輕不安，焦慮，失眠，可由GR-活性劑控制的情緒失控(如抑郁癥)，和癲癇發(fā)作活性。用于這些治療的有效的組合物和化合物也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。用于本發(fā)明且構(gòu)成本發(fā)明一部分的化合物是中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性的調(diào)節(jié)劑，它們對興奮性的傳導(dǎo)是通過其調(diào)節(jié)與GABA受體復(fù)合物相關(guān)聯(lián)的氯離子通道的能力來完成的。申請人的實驗已確認(rèn)用于本發(fā)明且構(gòu)成本發(fā)明一部分的化合物具有類似于已知的抗焦慮劑，如BZs的作用的抗驚厥和抗焦慮活性，但作用于GR復(fù)合物上截然不同的部位。黃體酮的內(nèi)源性代謝物與和生殖相關(guān)的過程(動情周期和妊娠)的相互關(guān)系已完全確認(rèn)(Marker，R.E.，Kamm，O.，和McGrew，R.V.，“人妊娠尿中表孕烷醇-3-酮-20的分離”，美國化學(xué)學(xué)會會志59616-618(1937))。然而在本發(fā)明之前，沒有認(rèn)識到怎樣通過黃體酮代謝物的使用來調(diào)節(jié)腦應(yīng)激性從而治療疾病。因此，本發(fā)明與利用本發(fā)明的化合物來調(diào)節(jié)腦應(yīng)激性從而治療疾病的方法，組合物，和化合物有關(guān)。在本發(fā)明中治療的典型的疾病是癲癇，焦慮，經(jīng)前期綜合征(PMS)，產(chǎn)后抑郁癥(PND)，可用GR-活化劑控制的情緒失控(如抑郁癥)，和失眠。本發(fā)明的化合物也可用于產(chǎn)生麻醉。優(yōu)選技術(shù)方案的詳細(xì)說明用于本發(fā)明且構(gòu)成本發(fā)明一部分的化合物是各種3α羥基化的-孕甾烷-酮；3α-21-孕甾二醇-20-酮，3α-20-孕甾二醇；和3α-羥基化的-雄甾烷的衍生物，以及它們的酯，醚，磺酸鹽，硫酸鹽，膦酸鹽，磷酸鹽，肟(亞氨基)，和噻唑烷衍生物，這些衍生物被用作藥物前體。所謂“藥物前體”是指已知直接作用的藥物的衍生物，這些衍生物與該藥物相比，釋放性能和治療作用都增強了，且通過酶或化學(xué)方法轉(zhuǎn)變?yōu)橛行У乃幬?；參見Notari，R.E.，“藥物前體動力學(xué)的理論和實踐”，酶學(xué)方法112309-323(1985)；Bodor，N.，“藥物前體設(shè)計的最新研究”，未來的藥物6(3)165-182(1981)；和Bundgaard，H.，“藥物前體的設(shè)計各種官能團和化學(xué)物質(zhì)的生物可逆性的衍生物”，藥物前體的設(shè)計(H.Bundgaard，ed.)，Elserier，NewYork(1985)。應(yīng)該注意到構(gòu)成本發(fā)明一部分的一些合成衍生物可以不是真正的藥物前體，因為除了上述特征外，它們還具有自己本身的活性。不過，為了本申請的目的它們將歸作藥物前體。我們的研究(Gee，K.W等人，歐洲藥理學(xué)雜志136419-423(1987))已證明用于本發(fā)明的3α-羥基化的類固醇比已報道(Ma-jewska，M.D.等人(1986)和Harrison，N.I.等人(1987))的作為GR復(fù)合物的調(diào)節(jié)劑的那些要有效得多得多。Majewska等人和Harrison等人指出，3α-羥基化的-5-還原的類固醇僅有很低的有效水平。我們的體內(nèi)和體外實驗數(shù)據(jù)均證明這些類固醇的高效力使得它們在經(jīng)GR復(fù)合物來調(diào)節(jié)腦應(yīng)激性中是有治療作用的。用于本發(fā)明的最有效的類固醇包括黃體酮和脫氧皮質(zhì)甾酮的主要代謝物的衍生物。這些類固醇可以有助于治療的方式分別用來調(diào)節(jié)不安，焦慮，失眠，可由GR-活化劑控制的情諸失控(如抑郁)，和癲癇發(fā)作失控中的腦應(yīng)激性。進一步說，我們已證明這些與GR復(fù)合物上的特定部位相結(jié)合的類固醇，其結(jié)合部位與其他已知的作用部位(即巴比妥類，BZ，和GABA)截然不同，且在該部位對不安，焦慮，睡眠，情緒紊亂和癲癇發(fā)作失控有益的治療效應(yīng)已預(yù)先激發(fā)誘出(Gee，K.W.和Yamamura，H.I.，中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂，123-147頁，D.C.Horvell，ed.，1985；Lloyd，K.G.和Morselli，P.L.，精神藥理學(xué)第三代進展，183-195頁，H.Y.Meltter，ed.，RavenPress，N.Y.，1987)。這些化合物的耐久性，效力和口服活性(以及其他給藥方式)是合乎需要的。本發(fā)明的類固醇衍生物是具有下述結(jié)構(gòu)式之一的物質(zhì)結(jié)構(gòu)式1結(jié)構(gòu)式2結(jié)構(gòu)式3結(jié)構(gòu)式4結(jié)構(gòu)式5結(jié)構(gòu)式6本發(fā)明還包括式1-6化合物的藥學(xué)上可接受的酯和鹽，包括酸加成鹽。應(yīng)相信的是，由于酯在藥物前體轉(zhuǎn)變?yōu)樗幬镄问綍r將會裂解，因此3α-羥基也可被掩蔽為藥學(xué)上可接受的酯。此文中這些物質(zhì)用可裂解的酯來表示。定義解釋按照本發(fā)明及在此文中的應(yīng)用，除非另有清楚的說明，否則下列術(shù)語定義為下述含義。術(shù)語“烷基”是指飽和的脂族基，包括直鏈的支鏈的，和環(huán)狀基，它們都可被任意取代。合適的烷基包括甲基，乙基等，可被任意取代。術(shù)語“鏈烯基”是指至少含有一個碳-碳雙鍵的不飽和基團，包括直鏈的，支鏈的和環(huán)狀基，它們都可被任意取代。術(shù)語“炔基”是指至少含有一個碳-碳三鍵的不飽和烴基，包括直鏈的，支鏈的，和環(huán)狀基，它們也可含有其他的不飽和基。當(dāng)炔基在3β-位時，它也可被下列基團取代鹵代的或未鹵代的C1基，C2-C6飽和的或不飽和的，鹵代的或未鹵代的直鏈基，C3-C6環(huán)(環(huán)烷)基，或者C5-C6芳香基或含有l(wèi)，2或3個雜原子的4，5或6元環(huán)的C-或N-相連的雜環(huán)基，雜原子選自氧，氮，和硫，但不包括帶有2個或多個相鄰的O或S原子的雜環(huán)基。優(yōu)選的炔基帶有2-4個碳原子。術(shù)語“烷氧基”是指醚-OR，其中R為烷基。術(shù)語“芳氧基”是指酯-OR，其中R為芳基。術(shù)語“芳基”是指至少帶有-個具有共軛π電子系統(tǒng)的環(huán)的芳族基，包括碳環(huán)的芳基和聯(lián)芳基，二者都可被任意取代。術(shù)語“碳環(huán)芳基”是指芳香環(huán)上的環(huán)原子是碳原子的基團。碳環(huán)芳基包括任意取代的苯基和萘基。取代的苯基優(yōu)選帶有1-3個取代基，合適的取代基是低級烷基，氨基，羥基，低級烷氧基，鹵素，低級?；?，和硝基。術(shù)語“芳烷基”是指被芳基取代的烷基。合適的芳烷基包括可被任意取代的芐基等。術(shù)語“二烷基氨基”是指-NRR″，其中R和R″各自獨立地為低級烷基或一起形成嗎啉代基的剩余部分。合適的二烷基氨基包括二甲氨基，二乙氨基，和嗎啉代。術(shù)語“?；笔侵告溚榇蓟?C(O)R，其中R為烷基，鏈烯基，炔基，芳基，或芳烷基。術(shù)語“任意取代的”或“取代的”是指被1-3個取代基取代的基團，取代基獨立地選自低級烷基，芳基，鏈烯基，炔基，烷氧基，氨基，硫代，鹵代，鹵代烷基，三鹵代烷基，酰基，硝基，羥基，和酮基。術(shù)語“低級”是指和1-4個碳原子的有機基有關(guān)的。這樣的基團可以是直鏈的，支鏈的，或環(huán)狀的。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的酯或鹽”是指本發(fā)明的化合物與有機或無機酸化合而衍生出的式1-6的酯或鹽?？捎糜谑?化合物的取代基的實例為R是H，或低級烷基，低級鏈烯基，或低級炔基；R1是亞甲基，β-羥甲基，或β-氰基；以及它們的生理上可接受的3-酯，20-酯，和3，20-二酯；但是當(dāng)R1為β-氰基時，R不為H。然而，在方法權(quán)利要求中，R為H時R1可以是氰基。優(yōu)選的一組式1化合物是R為H的化合物。優(yōu)選的另一組化合物是R1為氰基的式1化合物。優(yōu)選的式1化合物包括但不限于3α-羥基-17-亞甲基-5α-雄甾烷；3α-羥基-17β-羥甲基-5α-雄甾烷；或3α-羥基-17(20)(Z)-甲氧基亞甲基-5α-雄甾烷。可用于式2化合物的取代基的實例為R是H，鹵素，或低級烷氧基；R1是鏈烯基，炔基，烷氧基烷基，鹵代烷氧基烷基，三氟甲基，疊氮烷基，氰基烷基，或一鹵代甲基；R2是H，酮基，或11α-二烷基氨基；R3是β-乙?；?烴基乙?；目s酮，β-三氟乙?；?，β-(羥基乙酰)基，β-羥乙?；?17β-羥基，β-甲氧甲基乙?；?(乙氧基)-甲基-2′-亞甲基乙?；?(1′-羥乙基)基，β-(1′-羥丙基)基，β-(2′-羥基異兩基)基，β-琥珀酰氧基乙酰基，β-羥基乙酰基琥珀酸鈉，β-乙酰氧基乙酰基，β-次硫酸基乙?；?，β-甲基乙?；?，β-鹵代乙酰基，如β-氯乙酰基，β-乙炔基，或β-乙基，它與17-碳原子一起形成17(20)環(huán)氧基，且該乙基與一個O原子相鄰；及它們的生理上可接受的3-酯，20-酯，21-酯，3，20-二酯，和3，21-二酯；條件是當(dāng)R2為11α-N，N-二烷基氨基時，R不為H。優(yōu)選的一組化合物是R為H或低級烷氧基的式2化合物。更優(yōu)選的是R為H的化合物。另一組優(yōu)選的化合物的基團是R1為低級鏈烯基，低級炔基，三氟甲基，烷氧基甲基，和一鹵代甲基的式2化合物。更優(yōu)選的是R1為C2-C4鏈烯基，C2-C4炔基或三氟甲基的化合物，最優(yōu)選的是R1為炔基或三氟甲基的化合物。優(yōu)選的又一組化合物是R3為乙酰基，羥烷基，羥基乙?；?，或它們的與生理上可接受的酸形成的酯的式2化合物。更優(yōu)選的是R3為乙酰基或β-琥珀酰氧基乙?；幕衔?。尤為優(yōu)選的是R3為乙酰基的化合物。優(yōu)選的化合物包括但不限于3α-羥基-17β-乙炔基-5α-雄甾烷；3β-乙烯基-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮；3α-羥基-3β-(2′-丙烯基)-5β-孕烷-20-酮；3β-乙烯基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮；3β-(氯乙炔基)-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮；3β-乙炔基-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮；3α-羥基-3β-乙炔基-5α-孕烷-20-酮；3α，20α-二羥基-3β-乙炔基-5α-孕甾烷；3α，21-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕烷-20-酮；3α-(3′-溴-1-丙炔基)-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮；3α，21-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕烷-20-酮，21-乙酸酯；3β-乙炔基-3α-羥基-5β-孕烷-11，20-二酮，3α，21-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕烷-20-酮21-半琥珀酸酯；3α，20α-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕甾烷；3α，20β-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕甾烷；3α，20β-二羥基-3β-乙炔基-5α-孕甾烷；3α-羥基-3β-(2′-丙炔基)-5α-孕烷-20-酮；3β-乙炔基-3α-羥基-21-甲氧基-5β-孕烷-20-酮；3α-羥基-3β-氯甲基-5α-孕烷-20-酮；3α-羥基-3β-氟甲基-5α-孕烷-20-酮；3β-溴甲基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮；3α-羥基-3β-碘甲基-5α-孕烷-20-酮；3α-羥基-3β-三氟甲基-5α-孕烷-20-酮；3α-羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮；3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮，21-醋酸酯，3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮；3α-羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-11，20-二酮；3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮，21-半琥珀酸鈉鹽，3α-羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-17(20)-烯；3α，20α-二羥基-21-乙基-5α-孕甾烷；3α，20α-二羥基-21-甲基-5α-孕甾烷，3α，20α-二羥基-2β-異丙氧基-5α-孕甾烷，3α，20α-二羥基-2β-乙氧基-5α-孕甾烷，3α，20α-二羥基-2β-正丙氧基-5α-孕甾烷，3α，20α-二羥基-3β-甲基-5α-孕甾烷，3α，20α-二羥基-3β-乙炔基-5α-孕甾烷，3α，20β-二羥基-3β-甲基-5β-孕甾烷，3α，20-二羥基-3β，20-二甲基-5β-孕甾烷，3α，20α-二羥基-3β，21-二甲基-5α-孕甾烷，3α，20α-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕甾烷，3α，20β-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕甾烷，3α，20β-二羥基-3β-甲基-5α-孕甾烷，3α，20β-二羥基-3β-乙炔基-5α-孕甾烷，3α-羥基-3β-甲氧甲基-5α-孕烷-20-酮，3β-(乙氧甲基)-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮，3β-(1′-己炔基)-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮，3β-疊氮甲基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮，3α-羥基-3β-(2′，2′，2′-三氟乙氧甲基)-5α-孕烷-20-酮，3α-羥基-3β-丙氧甲基-5α-孕烷-20-酮，3β-氰基甲基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮，3β-(3-甲基丁-2-烯-1-炔基)-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮，3β-(1′-庚炔基)-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮，3β-環(huán)丙基乙炔基-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮，3β-(1′-辛炔基)-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮，3β-環(huán)丙基乙炔基-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮，和3β-環(huán)丙基乙炔基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮?？捎糜谑?化合物的取代基的實例為R是H或低級烷基，低級鏈烯基，或低級炔基；R1是β-乙?；?，β-羥基乙?；目s酮，β-三氟乙?；?，β-(羥乙酰基)基，β-羥乙酰基-17α-羥基，β-甲氧甲基乙酰基，β-(乙氧基)-甲基-2′-亞甲基乙?；?，β-(1′-羥乙基)基，β-(1′-羥丙基)基，β-(2′-羥基異丙基)基，β-琥珀酰氧基乙?；?，β-羥基乙酰基琥珀酸鈉，β-乙酰氧基乙酰基，β-次硫酸在乙酰基，β-甲基乙酰基，β-氯乙?；?，β-乙炔基，或與17-碳原子一起形成17(20)環(huán)氧基的β-乙基，該乙基與O原子相連；以及它們的生理上可接受的3-酯，20-酯，21-酯，3，20-二酯，和3，21-二酯；條件是所述化合物不是3α-羥基-5α-孕甾-9(11)-烯-20-酮，3α，21-二羥基-5α-孕甾-9(11)-烯-20-酮，或21-乙酰氧基-3α-羥基-5α-孕-9(11)-烯-20-酮或它們的酯衍生物。優(yōu)選的一組化合物是R為H或炔基的式3化合物。更優(yōu)選R為H的化合物。另外一組優(yōu)選的化合物是R1為乙?；?，羥烷基，羥乙?；蛩鼈兣c生理上可接受的酸形成的酯的式3化合物。更優(yōu)選R1為乙?；颚?琥珀酰氧基乙酰基的化合物。尤為優(yōu)選的是R1為乙酰基的化合物。優(yōu)選的化合物包括但不限于3α-羥基-3β-三氟甲基-5β-孕甾-9(11)-烯-20-酮；和3α-羥基-3β-甲基-5α-孕-9-烯-20-酮?？捎糜谑?化合物的取代基的實例為R是H，低級烷基，低級鏈烯基，或低級炔基；R1是如式3中定義的；以及它們的生理上可接受的3-酯，20-酯，21-酯，3，20-二酯，和3，21-二酯；條件是所述化合物不是3α-羥基-5β-孕甾-11-烯-20-酮或它的3-酯衍生物。優(yōu)選的一組化合物是R為H，三氟甲基，或低級炔基的式4化合物。更優(yōu)選的是R為H的化合物。另外一組優(yōu)選的化合物是R1為乙酰基，羥基烷基，羥基乙?；?，或它們與生理上可接受的酸形成的酯的式4化合物。更優(yōu)選的是R1為乙?；颚?琥珀酰氧基乙?；幕衔?。尤為優(yōu)選的是R1為乙?；幕衔?。優(yōu)選的化合物包括但不限于3β-羥基-3β-二氟甲基-5β-孕-11-烯-20-酮；3α，20β-二羥基-5β-孕-11-烯；3α-羥基-3β-甲基-5α-孕-11-烯-20-酮，和3α，20β-二羥基-5β-孕-11-烯，3β-乙炔基-3α-羥基-5β-孕-11-烯-20-酮。可用于式5化合物的取代基的實例為R是H，或低級烷基，低級鏈烯基，或低級炔基；R1是β-甲酰，亞甲基，β-羥甲基，甲氧亞甲基，或β-氰基；以及它們的生理上可接受的3-酯，20-酯，和3，20-二酯。優(yōu)選的化合物包括但不限于3α-羥基-17β-甲酰-5α-19-去甲雄甾烷和3α-羥基-17(20)(Z)-甲氧亞甲基-5α-19-去甲雄甾烷?？捎糜谑?化合物的取代基的實例為R是H或低級烷基，低級鏈烯基，或低級炔基；R1是如式3中定義的；以及它們的生理上可接受的3-酯，20-酯，21-酯，3，20-二酯，和3，21-二酯。優(yōu)選的一組化合物是R為低級鏈烯基，低級炔基或三氟甲基的式6化合物。更優(yōu)選的是R為低級炔基和三氟甲基的化合物。另外一組優(yōu)選的化合物是R1為乙酰基，羥基烷基，羥乙?；?，或它們與生理上可接受的酸形成的酯的式6化合物。更優(yōu)選的是R1為乙?；颚?琥珀酰氧基乙酰基的化合物。尤為優(yōu)選的是R1為乙?；幕衔?。進一步優(yōu)選的化合物是式1-6化合物中的3和/或20位羥基的酯。優(yōu)選的酯用它們的對應(yīng)酸來描述，為乙酸，丙酸，馬來酸，富馬酸，抗壞血酸，庚二酸，琥珀酸，戊二酸，雙亞甲基-水楊酸，甲磺酸，乙烷二磺酸，草酸，酒石酸，水楊酸，檸檬酸，葡糖酸，衣康酸，乙醇酸，對氨基苯甲酸，天冬氨酸，谷氨酸，γ-氨基丁酸，α-(2-羥乙氨基)-丙酸，甘氨酸和其他的α-氨基酸，磷酸，硫酸，葡糖醛酸，和1-甲基-1，4-二氫煙酸。另一組更優(yōu)選的化合物包括式1-6化合物中3β取代基為炔基或三氟甲基的，且與類固醇的17-位相連的是β-乙?；?，β-(1′-羥乙基)，或17(20)(Z)-烯中的一種。優(yōu)選的化合物包括，但不限于3α-羥基-3β-甲基-5β-19-去甲孕甾-17(20)(Z)-烯，3α-羥基-19-去甲-5α-孕烷-順式-17(20)(Z)-烯，3α-羥基-5β-19-去甲孕甾-17(20)(Z)-烯，3α-羥基-3β-甲基-5α-19-去甲孕甾-17(20)(Z)-烯，3β-乙炔基-3α-羥基-5β-19-去甲孕甾-17(20)(Z)-烯，和3α-羥基-3β-三氟甲基-5β-19-去甲孕甾-17(20)(Z)-烯。優(yōu)選的還有下列化合物3α-羥基-3β-三氟甲基-19-去甲-5β-孕烷-20-酮，3α-羥基-3β-三氟甲基-19-去甲-5α-孕烷--20-酮，3α-羥基-3β-三氟甲基-5β-19-去甲孕甾-17(20)(Z)-烯，3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-19-去甲-5β-孕烷-20-酮，和3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-19-去甲-5β-孕烷-20-酮21-半琥珀酸酯和它的鈉鹽。優(yōu)選的還有下列化合物3α，20α-二羥基-19-去甲-5α-孕甾烷；3α-羥基-3β-三氟甲基-19-去甲-5β-孕烷-20-酮；3α-羥基-3β-甲基-5α-19-去甲孕烷-20-酮；3β-乙炔基-3α-羥基-19-去甲-5β-孕烷-20-酮，3β-乙炔基-3α-羥基-5β-19-去甲孕甾-17(20)(Z)-烯，3α-羥基-3β-甲基-5β-19-去甲孕甾-17(20)(Z)-烯；3α-羥基-3β-甲基-5β-19-去甲孕甾-17(20)(Z)-烯，3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-19-去甲-5β-孕烷-20-酮21-半琥珀酸酯及其鈉鹽。本發(fā)明中最優(yōu)選的化合物是3α-羥基-3β-(3′-甲基-丁-3′-烯-1′-炔基)5β-孕烷-20-酮；3α-羥基-3β-(3′-甲基-丁-3′-烯-1′-炔基)-5α-孕烷-20-酮；3α-羥基-3β-三氟甲基-5α-孕烷-20-酮；3α-羥基-3β-三氟甲基-5β-孕甾-11-烯-20-酮；3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-19-去甲-5β-孕烷-20-酮；3β-(環(huán)丙基)乙炔基-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮；3α，20α-二羥基-3β-乙炔基-5α-孕甾烷；3α，21-二羥基-3β-乙烯基-5α-孕烷-20-酮；和3α，21-二羥基-3β-氟甲基-5α-孕烷-20-酮；或它們的生理上可接受的3-酯，20-酯，21-酯，3，20-二酯或3，21-二酯。在本發(fā)明的范圍內(nèi)尤為優(yōu)選的還有下列酯3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-19-去甲-5β-孕烷-20-酮，21-半琥珀酸酯，鈉鹽；3α，20α-二羥基-21-甲基-5α-孕甾烷，雙半琥珀酸酯；3α，21-二羥基-3β-乙烯基-5α-孕烷-20-酮，21-半琥珀酸酯；3α，21-二羥基-3β-甲基-5α-孕烷-20-酮21-乙酸酯；3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮，21-半富馬酸酯鈉鹽；3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮，21-琥珀酸甲酯；3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮，21-丙酸酯；雙(3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮)21-半琥珀酸酯；雙(3α，21-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕烷-20-酮)21-半琥珀酸酯；和N-(3α-羥基-3β-甲基-5α-孕烷-20-烷)乙醇胺。下述合成方法和實施例涉及用于本發(fā)明且構(gòu)成本發(fā)明一部分的化合物的制備。合成方法按照本發(fā)明的化合物可用任何適宜的方法進行制備，例如利用“類固醇反應(yīng)”，Djerassi，1963年由Holden-Day，Inc.出版，San-francisco或“類固醇化學(xué)中的有機反應(yīng)”，F(xiàn)ried和Edwards，1972年由VanNostrand-ReinholdCo.出版，NewYork.中描述的常規(guī)技術(shù)來制備。本發(fā)明的化合物可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的或今后仍將發(fā)展的任何適宜的設(shè)備進行制備。通用方法20-羥基孕甾烷可用常規(guī)還原劑還原20-酮孕甾烷而制備。21-半琥珀酸酯可從孕烷-20-酮衍生物進行制備，首先用分子態(tài)溴將其溴化得到對應(yīng)的21-溴化孕甾烷。然后將該溴代化合物在胺存在的情況下與各種二酸，如琥珀酸反應(yīng)得到21-羥基酯。然后用常規(guī)方法將這些由二酸得到的酯轉(zhuǎn)變?yōu)樗鼈兊拟c鹽。這些酯也可利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，上述化合物中的羥基與有機酸，酸性鹵化物，酸酐，或酯之間的反應(yīng)而得到，其中有機酸是，例如醋酸，丙酸，馬來酸，富馬酸，抗壞血酸，庚二酸，琥珀酸，戊二酸，雙亞甲基水楊酸，甲磺酸，乙烷二磺酸，草酸，酒石酸，水楊酸，檸檬酸，葡糖酸，衣康酸，乙醇酸，對氨基苯甲酸，天冬氨酸，谷氨酸，D-氨基丁酸，α-(2-羥乙氨基)-丙酸，甘氨酸和其他的α-氨基酸，磷酸，硫酸，葡糖醛酸，和1-甲基-1，4-二氫煙酸。3β-取代基鹵代甲基本發(fā)明的3β-一鹵代甲基化合物可通過3-螺-2′環(huán)氧乙烷類固醇與鹵化物離子源在惰性溶劑中反應(yīng)來制備，例如鹵化四甲銨在甲苯中，且優(yōu)選質(zhì)子源，如乙酸。飽和或不飽和烷基其他的3-取代類固醇可通過將有機金屬試劑加到3-酮甾類中進行制備，若需要可將其他的活性官能團保護起來。因此，3-炔基化合物可利用惰性溶劑中的乙炔化鋰或由1，2-二溴乙烯和丁基鋰就地制得的有機金屬試劑來制備。同樣，R為鏈烯基的式1化合物可利用3-酮甾類與象乙烯基溴化鎂這樣的乙烯基有機金屬試劑反應(yīng)來制備。象烯丙基溴化鎂這樣的反應(yīng)部位的不飽和基離去的化合物也可用來制得含有3-鏈烯基的化合物，類似地，利用象甲基碘化鎂這樣的烷基格利雅試劑可制得3-烷基化合物。三氟甲基三氟甲基可通過3-酮甾類與三甲基三氟甲基硅烷，由氟化物離子催化該反應(yīng)來制得。2l-氧化的化合物21-甲基的乙酸高鉛氧化這一類型的各種化合物可通過下面的一系列反應(yīng)來制備，即用乙酸高鉛氧化孕烷-20-酮得到21-乙酸基衍生物，此乙酸酯水解得到21-乙醇，再與適宜的羧酸衍生物，如酐或?；然蚱渌哪苋〈u基中的H原子的試劑，如甲磺酰氯進行?；磻?yīng)制得。孕烷-17-烯這些基團可通過17-酮甾類與內(nèi)錫鹽這樣的準(zhǔn)梯希試劑反應(yīng)形成，內(nèi)錫鹽可由正丙基三苯基溴化磷與強堿，如叔丁氧化鉀反應(yīng)而得到。3，20-二醇孕烷-3，20-二醇可通過將二甲硼烷這樣的氫化硼加到孕烷-17-烯的雙鍵上，再將這些所形成的有機硼烷與，例如堿性過氧化氫進行氧化反應(yīng)得到20-醇來制得。此外，孕烷-3，20-二醇也可通過將20-酮基還原為20-醇基來制得。適宜的試劑是氫化物試劑，如硼氫化鈉，或熔化的金屬，如正丙醇中的鈉等。實施例實施例1a.3α-羥基-5β-孕烷-20-酮，20-縮酮將3α-羥基-5β-孕烷-20-酮(10.8g，34mmol)，1，2-亞乙基二醇(45ml)和原甲酸三乙酯(30ml)的混和物在室溫下攪拌5分鐘，在后加入對甲苯磺酸(200mg)在室溫下繼續(xù)攪拌1.5小時。將所得的粘稠的膏狀物倒入飽和NaHCO3溶液(250ml)中。沉淀出的固體經(jīng)過濾收集，用冷水洗滌并干燥。將半干的產(chǎn)物溶于CH2Cl2(350ml)中并用無水K2CO3干燥。然后將縮酮溶液過濾，用于下個步驟中。b.5β-孕烷-3，20-二酮，20-縮酮將上述3α-羥基-5β-孕烷-20-酮，20-縮酮的CH2Cl2溶液，和N-甲基嗎啉-N-氧化物(8.8g，75mmol)，以及磨成粉的4A分子篩(58g)在N2氣氛下攪拌15分鐘。然后加入過釕酸四丙基銨(400g)并在室溫下繼續(xù)攪拌2小時。將所得深綠色混合物通過短的硅酸鎂柱并用CH2Cl2洗脫。含有產(chǎn)物的餾分(TLC)合并后蒸發(fā)。然后將粗產(chǎn)品從EtOAcHx(1∶1)的混合物中重結(jié)晶得到長棒條狀的標(biāo)題化合物(10.3g)。c.從1，2-二溴乙烯制備鋰試劑在裝備有一個N2導(dǎo)氣管，一個溫度計和一個滴液漏斗的100ml三頸燒瓶中裝入1，2-二溴乙烯(順/反式混合物，98％，Aldrich，0.164ml，2mmol，mw＝186，d＝2.246)。然后加入干燥的THF(15ml)并將該溶液在干冰一丙酮浴中冷卻到-78℃。在10分鐘內(nèi)滴加正丁基鋰(2.5M的THF溶液，1.6ml，4mmol)。該混合物在此溫度下攪拌1小時并將此試劑立即用于下個步驟中。d.3β-乙炔基-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮將上面得到的試劑的THF溶液維持在-78℃，并滴加5β-孕烷-3，20-二酮，20-縮酮(180mg，0.5mmol)的THF溶液(15ml)進行處理。加入過程中溫度保持低于-70℃，并在此溫度下持續(xù)攪拌15分鐘(用TLC檢測100％轉(zhuǎn)化)。撤去冷卻浴并將所得溶液用2NHCl(pH6)終止反應(yīng)。蒸去溶劑，殘余物溶于丙酮(10ml)中。加入2NHCl(4ml)后，溶液在室溫下攪拌0.5小時，混合物用稀NaH-CO3溶液中和。沉淀出的固體(158mg，93％)經(jīng)過濾收集，用水洗滌，干燥。粗產(chǎn)品通過從EtOAc或從丙酮-乙烷的混合物中重結(jié)晶而純化，從而制得標(biāo)題化合物；mp196-197℃，TLC-Rf0.45(己烷丙酮7∶3)。實施例23α，20β-二羥基-5β-孕甾烷，雙(半琥珀酸二鈉)3α，20β-二羥基-5β-孕甾烷(類固醇；250mg，0.78mmol)在5ml干燥吡啶中的懸浮液用琥珀酐(200mg，2.0mmol)處理?；旌衔镌?00℃加熱10小時。邊加熱邊將6mmol琥珀酐分三次加入。墨色混合物濃縮(0.05mmHg，30℃)除去溶劑，然后在90℃(0。05mmHg)加熱以除去過量的琥珀酐。殘余物從醚/乙烷中重結(jié)晶得到主要由琥珀酸組成的固體。母液濃縮并經(jīng)柱層析(快速硅膠柱，用95/5/0.1CH2Cl2/MeOH/HOAc洗脫)得到從醚/乙烷中重結(jié)晶的白色固體。將雙(半琥珀酸酯)，mp81-90℃處理為雙(鈉鹽)。將雙(半琥珀酸)(100mg，0.192mmol)溶于少量甲醇中。逐滴加入NaHCO3(2eq，33mg，0.393mmol)在0.6ml水中的溶液，3小時后，將該溶液真空濃縮得到白色固體。實施例33α-羥基-3β-三氟甲基-5α-孕烷-20-酮和3β-羥基-3α-三氟甲基-5α-孕烷-20-酮向5α-孕烷-3，20-二酮20-亞乙基縮酮(356mg，0.987mmol)的干燥的THF溶液(5ml)中加入0.5MF3CSi(CH3)3(THF溶液，2.5ml，1.25mmol)。所得無色溶液冷卻到0℃，并加入n-Bu4NF·xH2O(少量晶體)。撤去冷卻浴。觀察到有氣體(Me3SiF)放出，反應(yīng)溶液變?yōu)辄S色。將該混合物在室溫下攪拌30分鐘。TLC(3∶1己烷/丙酮)顯示起始物質(zhì)已完全消耗；新的斑點幾乎遷移到展開劑前沿。隨后，加入1NHCL(～3ml)，并將該兩相混合物在室溫下攪拌過夜，現(xiàn)在TLC(3∶1己烷/丙酮)顯示出一個Rf為0.5的單一的斑點。另一方面，當(dāng)使用CH2Cl2時有兩個接近的斑點，上面那個是次要產(chǎn)物。再加入醚和水。水層用醚反萃取。合并后的有機物用飽和NaHCO3和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾，并減壓蒸發(fā)得到白色晶狀(泡沫狀)固體，并經(jīng)快速層折分離，用CH2Cl2作洗脫液。初餾分蒸發(fā)得到3α-羥基-3β-三氟甲基-5α-孕烷-20-酮(10mg)。進一步洗脫柱子得到3β-羥基-3α-三氟甲基-5α-孕烷-20-酮(200mg)，19FNMR和GC-MS顯示還含有1.5％產(chǎn)物(即3α-羥基-3β-三氟甲基-5α-孕烷-20-酮)。為了除去這些雜質(zhì)，在熱的60∶40己烷/乙酸乙酯中重結(jié)晶，沒有晶體形成。最后，將上面的97.5∶1.5混合物再次經(jīng)快速層折，用CH2Cl2洗脫，可得到高度純凈的3β-羥基-3α-三氟甲基-5α-孕烷-20-酮(145mg)，mp181-3℃。實施例43β-羥基-3α-乙烯基-5β-孕烷-20-酮和3α-羥基-3β-乙烯基-5β-孕烷-20-酮在-70℃下，用乙烯基溴化鎂(1M的THF溶液，3.7mmol，3.7ml)處理5β-孕烷-3，20-二酮，20-縮酮(1.18g，3.3mmol)在干燥THF中的溶液(20ml)。混合物在此溫度下攪拌5分鐘后，再在室溫下攪拌2.5小時，用飽和NH4Cl溶液(10ml)終止反應(yīng)。蒸除溶劑，殘余物用EtOAc提取。有機層用水，稀NaHCO3溶液，水和鹽水洗滌。用無水MgSO4干燥后，將該溶液過濾并蒸發(fā)得到粗產(chǎn)物(1.2g)。然后將粗產(chǎn)物溶于丙酮(20ml)，加入1NHCl(10ml)并在室溫下攪拌15小時。蒸除溶劑，殘余物用CH2Cl2提取。有機層用水，稀NaHCO3溶液，水，和鹽水洗滌。用無水MgSO4干燥后，過濾，蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物(890mg)。再將此粗產(chǎn)物溶于少量CH2Cl2中，并倒在硅膠柱上。用甲苯丙酮混合物(94∶6)洗脫得到初餾分3α-乙烯基-3β-羥基-5β-孕烷-20-酮(126mg)，用相同的溶劑混合物進-步洗脫得到3β-乙烯基-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮(189mg)，m.p.113-116℃。實施例5a.3α-羥基-5α-雄烷-17-酮向3β-羥基-5α-雄烷-17-酮(6g)和偶氮羧酸二乙酯(5.04g)的THF溶液(50ml)中加入三氟乙酸(3.3g)，混合物變?yōu)辄S色。然后加入三苯膦(7.6g)。反應(yīng)物變?yōu)闊o色并加熱放出。再加入苯甲酸鈉，5分鐘后，再加入水(100ml)。將該混合物用二氯甲烷(3×80ml)提取，有機物用硫酸鎂干燥。真空蒸除溶劑，粗產(chǎn)物用KOH(10％10ml)在甲醇(150ml)中水解1小時。然后真空蒸除大部分甲醇，剩余物質(zhì)在二氯甲烷和氯化銨之間分配。產(chǎn)物(4.7g，78％)用色譜法(CH2Cl2丙酮＝9∶1)純化。b.3α-羥基-21-甲基-5α-孕-17(20)(Z)-烯從丙基三苯基溴化磷(13.3g)和叔丁氧化鉀(3.9g)的THF(20ml)溶液制得維悌希試劑，并向其中加入3α-羥基-5α-雄烷-17-酮(2g，6.9mmol)。反應(yīng)物回流12小時，并冷卻到25℃。然后加入氯化銨溶液(60ml)并用分液漏斗分離出有機層。水層用二氯甲烷(2×50ml)萃取。有機溶液用碳酸鉀干燥，真空蒸除溶劑。粗產(chǎn)物用色譜法(丙酮∶二氯甲烷∶己烷＝1∶2∶7)純化，得到0.84g產(chǎn)物(39％)。它是Z型和E型異構(gòu)松的混合物(Z∶E＝13∶1)。c.3α-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-21-甲基-5α-孕-17(20)(Z)-烯將5α-3α-羥基-21-甲基孕-17(20)(Z)-烯(0.84g，2.66mmol)，TBDMSC1(1.2g，8.0mmol)和咪唑(0.91g，13.3mmol)在二氯甲烷(10ml)和DMF(30ml)中的混合物攪拌12小時后，再加入氯化銨。然后用二氯甲烷(3×40m1)萃取，用鹽水(50ml)洗滌。有機溶液用碳酸鉀干燥后蒸除溶劑，但發(fā)現(xiàn)仍留有一些DMF。將其再次溶于醚中并用鹽水(2×50ml)洗滌，然后用碳酸鉀干燥。經(jīng)色譜法純化，用己烷洗脫，得到1.14g純產(chǎn)物(100％)。d.3α-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-20α-羥基-21-甲基-5α-孕烷在0℃下，向3α-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-21-甲基-5α-孕-17(20)(Z)-烯(1.14g，2.66mmol)的THF溶液(30ml)中滴加乙硼烷THF配合物(1M的THF溶液，5.3ml)。反應(yīng)物加熱到25℃保溫1小時。然后在0℃下，非常緩慢地加入氫氧化鈉溶液(20％，10ml)，接著加入過氧化氫(30％，10ml)。然后加入含水氯化銨，用分液漏斗分離THF層。水層用醚(2×40ml)萃取。有機溶液用碳酸鉀干燥，真空蒸除溶劑。經(jīng)柱層折得到純產(chǎn)物(0.52g，44％)。e.3α，20α-二羥基-21-甲基-5α-孕烷將HF(48％，5ml)和CH3CN(30ml)混合和到的溶液加入到含有3α-叔丁基二甲基甲硅烷氧基-20α-羥基-21-甲基-5α-孕烷(0.51g)的燒瓶中，產(chǎn)生白色沉淀。將反應(yīng)物攪拌1小時后過濾。該白色固體用醚洗滌三次，所得產(chǎn)物(0.3g，79％)具有令人滿意的分析結(jié)果，m.p.227-231℃。實施例63α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-19-去甲孕烷-20-酮向3α-羥基-3β-三氟甲基-5β-19-去甲孕烷-20-酮(300mg，0.87mmol)的甲苯溶液(15ml)中加入MeOH(1ml)和BF3OEt2(1.4ml，11.3mmol)，所得混合物冷卻到0℃并加入Pb(OAc)4(0.54g，1.21mmol)。反應(yīng)物加熱到25℃攪拌45分鐘，再加入NaHCO3溶液(飽和的，30ml)，該混合物攪拌1小時。將它倒入含有水(50ml)的分液漏斗中并用醚(3×40ml)萃取。醚溶液用鹽水(50ml)洗滌后用K2CO3干燥。將蒸除溶劑后得到的粗產(chǎn)物溶于MeOH(25ml)中并加入K2CO3溶液(飽和的，8ml)。反應(yīng)物攪拌5小時，然后將該反應(yīng)混合物倒入含有50ml水的分液漏斗中，用CH2Cl2(3×30ml)萃取。合并后的萃取液用K2CO3干燥并將得到的粗物質(zhì)經(jīng)色譜法純化，得到帶有21-甲氧基副產(chǎn)物(40mg)的最終產(chǎn)物(160mg)。該產(chǎn)物進一步通過從10％丙酮的己烷溶液中重結(jié)晶而純化，得到88mg純產(chǎn)物(28％)，為白色固體，m.p.140-142℃。實施例73α-乙炔基-3α，20α-二羥基-5β-孕烷和3β-乙炔基-3α，20β-二羥基-5β-孕烷向3β-乙炔基-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮(0.31g，0.91mmol)的甲醇溶液(20ml)中加入硼氫化鈉(200mg，5.3mmol)，并在25℃下攪拌1小時。然后加入氯化銨溶液(50ml)，該混合物用CH2Cl2(3×30ml)萃取。用色譜法(EtOAc∶Hex＝3∶7)分離得到主產(chǎn)物3β-乙炔基-3α，20β-二羥基-5β-孕烷(200mg，65％)，m.p.221-223℃。次產(chǎn)物——3β-乙炔基-3α，20α-二羥基-5β-孕烷再次通過色譜法(25-30％乙酸乙酯的乙烷溶液，16mg，5％)進一步純化，其m.p.為187-188℃。實施例83α，21-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕烷-20-酮和3α-羥基-3β-乙炔基-21-甲氧基-5β-孕烷-20-酮在0℃下，向3α，21-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕烷-20-酮21-醋酸酯(725mg，1.81mmol)在45ml甲醇中的溶液中加入10％K2CO3水溶液(3.75ml)，在室溫下攪拌30分鐘后，將該混合物冷卻到0℃，并加入2NHOAc水溶液(1.81ml)。將該反應(yīng)物加到E-tOAc/水混合物中。水層用EtOAc萃取兩次，并在一起的有機層用鹽水溶液萃取，用Na2SO4干燥，并濃縮。用快速色譜法(在直徑為4cm的柱中裝20cm硅酸，用2升20％丙酮/己烷洗脫)純化得到582mg(90％)二醇，為白色固體，mp155.5-157℃。在3α，21-二醇的大規(guī)模制備中，離析出少量極性雜質(zhì)，mp176-178.5℃，證實為3α-羥基-3β-乙炔基-21-甲氧基-5β-孕烷-20-酮，可能在21-醋酸酯的制備中形成副產(chǎn)物。實施例93β-乙烯基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮和3α-乙烯基-3β-羥基-5α-孕烷-20-酮在78℃下，用乙烯基溴化鎂(1M的THF溶液，4mmol，4ml)處理5α-孕烷-3，20-二酮，20-縮酮(720mg，2mmol)的干燥THF溶液(20ml)。在此溫度下將該混合物攪拌5小時后，用2NHCl溶液(2ml)終止反應(yīng)。蒸除溶劑后，將殘余物溶于丙酮(25ml)，再加入2NHCl(10ml)，在室溫下攪拌15小時。蒸除溶劑，殘余物用CH2Cl2萃取。有機層用水，稀NaHCO3溶液水，和鹽水洗滌，用無水MgSO4干燥后，過濾，蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物(1g)。將該粗產(chǎn)物溶于少量CH2Cl2，然后倒在硅膠柱上。用甲苯∶丙酮混合物(95∶5)洗脫得到初餾分3β-乙烯基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮(250mg)，m.p.l63-165°用相同溶劑混合物進一步洗脫得到3α-乙烯基-3β-羥基-5α-孕烷-20-酮(150mg)。實施例103α-羥基-3β-三氟甲基-5β-19-去甲孕烷-20-酮在25℃下，向3α-羥基-3β-三氟甲基-5α-19-去甲孕-17(20)(Z)-烯(2.6g，7.3mmol)的干燥THF溶液(80ml)中滴加乙硼烷THF配合物(1M的THF溶液，22ml)，反應(yīng)在1小時內(nèi)完成，然后在0℃下，非常緩慢地加入氫氧化鈉溶液(20％，50ml)，再加入過氧化氫(30％，30ml)。然后再加入水，THF層用分液漏斗分離開。水層用二氯甲烷(2×40ml)萃取。有機溶液用碳酸鉀干燥后，真空蒸除溶劑?？焖僦鶎游?己烷∶丙酮＝1∶1)得到1.8g產(chǎn)物，用PCC將其氧化(PCC，2.1g，9.6mmol；醋酸鈉，0.8g，9.6mmol)。用柱色譜法，乙酸乙酯和丙酮(15∶85)進行洗脫，精制得到純產(chǎn)物(700mg，26％)，m.p.151.5-153.0℃。實施例11a.3(R)-螺-2′-環(huán)氧乙烷-5α-17β-羥基雄烷將碘化三甲基氧化锍(6.82g，31mmol)和叔丁氧化鉀(3.5g，31mmol)在THF(30ml)中的混合物加熱回流1.5小時，然后冷卻到25℃。之后，加入17β-羥基-5α-雄烷-3-酮(3g，10.3mmol)，該反應(yīng)物在25℃下，攪拌2小時。然后加入水，該混合物用醚(3×80ml)萃取。萃取液用碳酸鉀干燥并蒸除溶劑得到3g相當(dāng)純的產(chǎn)物(粗產(chǎn)品96％)，將其用于下個步驟中。b.3β-甲基-3α-羥基-5α-雄烷-17-酮在氬氣氛下，向3(R)-螺-2′-環(huán)氧乙烷-5α-17β-羥基雄烷(3g，9.9mmol)的THF溶液(50ml)中加入氫化鋁鉀(LAH，1M的THF溶液，10ml)，然后將該混合物加熱回流5分鐘后，冷卻到25℃。再加入氯化銨溶液(含水的，飽和的，70ml)，然后用CH2Cl2(3×70ml)萃取。有機溶液用碳酸鉀干燥后，再加入4-甲基嗎啉代-N-氧化物(2.9g，25mmol)和磨碎的分子篩(4A，10g)。將該混合物攪拌20分鐘，然后加入過遼酸四丙基銨(200mg)。反應(yīng)在1.5小時內(nèi)完成，然后將反應(yīng)混合物通過硅酸鎂柱過濾，用CH2Cl2和醚(1∶2)的混合物沖洗，得到的物質(zhì)用色譜法(30％EtoAc的己烷溶液)精制得到產(chǎn)物(2.5g，83％)。c.3β，21-二甲基-3α-羥基-5α-孕-17(20)(Z)-烯將正丙基三苯基溴化磷(2.55g，6.6mmol)和叔丁氧化鉀(0.75g，6.6mmol)在THF(20ml)中的混合物攪拌30分鐘從而制得維悌希試劑，然后向其中加入3β-甲基-3α-羥基-5α-雄烷-17-酮(0.5g，1.65mmol)，將該混合物加熱回流l8小時。加入氯化銨溶液終止反應(yīng)并用CH2Cl2萃取。通過色譜法(20％EtoAc的己烷液)得到純產(chǎn)物(420mg，77％)。d.3α，20α-二羥基-3β，21-二甲基-5α-孕烷在0℃下，向3β，21-二甲基-3α-羥基-5α-孕-17(20)(Z)-烯(0.42g，1.27mmol)的THF溶液(30ml)中滴加乙硼烷THF配合物(1M的THF溶液，2.6ml)，然后將反應(yīng)物加熱到25℃保持2小時。隨后，在0℃下，非常緩慢地加入氫氧化鈉溶液(2N，10ml)，之后再加入過氧化氫(30％，10ml)，反應(yīng)物在25℃下攪拌1小時。然后加入含水氯化銨，并用分液漏斗分離THF層。水層用CH2Cl2(2×40ml)萃取。有機溶液用碳酸鉀于燥后，真空蒸除溶劑。經(jīng)柱色譜法得到產(chǎn)物(0.17g，38％)，再通過重結(jié)晶進一步精制得到110mg產(chǎn)物m.p.200-203℃。實施例123α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮將3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮，21-醋酸酯(1.36g，3.06mmol)的MeOH溶液(75ml)冷卻至0℃，然后滴加K2CO3溶液(含水10％，6.45ml，4.67mmol)，在0℃攪拌1.5小時后，滴加醋酸溶液(2N含水的，2.5ml，5.0mmol)并將該混合物加熱至室溫，然后加入EtOAc，CH2Cl2和水(各100ml)并充分混合。分離出有機相，用NaHCO3和NaCl水溶液洗滌，用MgSO4干燥后，真空蒸發(fā)。殘余物用快速柱色譜法(己烷/EtOAc3∶1)精制得到白色固體(973mg，79％)，mp.148-150℃。實施例133α，21-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕烷-20-酮21-半琥珀酸鈉在0℃下，將3α，21-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕烷-20-酮(535mg，1.49mmol)在2ml干燥吡啶中的溶液用固態(tài)琥珀酐(1.2eq；180mg，1.80mmol)進行處理，該反應(yīng)物加熱到室溫后，攪拌48小時，真空蒸除溶劑，并用己烷(2×10ml)將殘余物進行研制從而得到粘稠的固體，再將其盡可能溶于CH2Cl2，然后加到直徑2cm柱中的13cm快速硅膠上。用5％丙酮/CH2Cl2到100％丙酮進行梯度洗脫，得到667mg所期的酸。為了除去吡啶鎓鹽，將該酸溶于EtOAc，并用冰冷的0.01NHCl水溶液(30ml)萃取。有機層用Na2SO4干燥后，濃縮。將633g，mp62-68℃的殘余物溶于甲醇中，加入116mg(0.253mmol)NaH-CO3的水溶液，攪拌3.5小時后，減壓蒸除溶劑，殘余物用乙醚/己烷混合物進行研制，得以亮黃色固體，重616mg，在水中的溶解度＞20mg/ml。實施例143β-氟甲基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮將n-Bu4NFxH2O(7.873g)和苯(50ml)的混合物用迪安-斯達(dá)克榻分水器回流過夜。該混合物是不澄清的溶液，將其濃縮(常壓)到～10ml并冷卻至室溫。利用兩頭針狀棒，將3(R)-5α-孕烷-3-螺-2′-環(huán)氧乙烷-20-酮亞乙基縮酮(2.55g，6.81mmol)的干燥苯溶涂(15ml+5ml沖洗)加入上述濃縮的溶液中。將所得溶液用短徑蒸餾器濃縮到～10ml并回流15分鐘。由于該濃縮的反應(yīng)溶液很難在TLC板上形成斑點，故而加入干燥苯(5ml)。TLC(100∶1CH2Cl2/丙酮或3∶1己烷/丙酮)顯示除了兩個新的低極性斑點外，還有一些未反應(yīng)的起始物質(zhì)。將該反應(yīng)混合物再次濃縮，然后回流30分鐘；這次TLC(混合物用苯稀釋后)顯示起始的環(huán)氧化物幾乎完全消耗掉了。象前面一樣，將混合物濃縮并回流一會兒。在這兒必須注意這個反應(yīng)只有在混合物被高度濃縮時才發(fā)生。該混合物冷卻到室溫后(得到亮黃色固體)，加入乙醚和水。由于并非所有的固體都能溶解，因此還要加入CH2Cl2。水層用CH2Cl2反萃取。合并的有機萃取液用水(×2)洗滌，用Na2SO4干燥，過濾，并減壓蒸發(fā)，得到白色固體(3.33g)，其1HNMR顯示它為3β-氟甲基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮亞乙基縮酮和3α-氟-3β-羥基甲基-5α-孕烷-20-酮亞乙基縮酮的4∶1混合物。為了水解該縮酮，將丙酮(100ml)，水(5ml)和P-TsOH·H2O(143mg，0.752mmol)加入上面的固體中。加入HCl將PH調(diào)節(jié)到微酸性。然后將該混合物用熱噴槍加熱一會兒以得到澄清溶液，再在室溫下攪拌2小時。當(dāng)混合物變混濁時，加入CH2Cl2以得到澄清溶液。用TLC指示反應(yīng)是否完全。減壓蒸除溶劑，得到白色固體，將其加入CH2Cl2和水中。水層用CH2Cl2反萃取。合并后的有機物用飽和NaHCO3洗滌，MgSO4干燥，過濾，減壓蒸發(fā)，得到白色晶狀固體(2.5g)，其1HNMR顯示它是3α-氟甲基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮和3α-氟-3β-羥基甲基-5α-孕烷-20-酮的4∶1混合物。該混合物用CH2Cl2作為洗脫液經(jīng)快速柱色譜法得到所期的3β-氟甲基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮(1.41g，59％)，mp201-203℃。實施例153β-乙炔基-3α，20α-二羥基-5α-孕烷和3β-乙炔基-3α，20β-二羥基-5α-孕烷向3β-乙炔基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮(0.32g，0.94mmol)的甲醇溶液(20m1)中加入硼氫化鈉(200mg，5.3mmol)并在25℃攪拌1小時。然后加入氯化銨溶液(50ml)，該混合物用CH2Cl2(3×30ml)萃取。經(jīng)色譜法(EtOAc∶Hex＝3∶7)得到主要產(chǎn)物3β-乙炔基-3α，20β-二羥基-5α-孕烷(192mg，60％)，m.p.195.5-197.5℃；和次產(chǎn)物3β-乙炔基-3α，20α-二羥基-5α-孕烷(19mg，6％)，m.p.210-215℃(分解)。實施例163α，20α-二羥基-21-甲基-5α-孕烷雙半琥珀酸酯向含有3α，20α-二羥基-21-甲基-5α-孕烷(350mg，1.05mmol)的干燥燒瓶中加入吡啶(無水的，5ml)后，再加入琥珀酐(1g，10mmol)。該混合物在100℃油浴中加熱20小時，然后冷卻到25℃，再與HCl溶液(1N，70ml)混合，用EtOAc(3×40ml)萃取，萃取液用Na2SO4干燥。通過色譜法(7％MeOH和0.3％HOAC的CH2Cl2溶液)得到產(chǎn)物(0.54g)，并從EtOAc中重結(jié)晶以進一步精制，得到334mg產(chǎn)物(60％)，m.p.159-162.5℃。實施例17a.3，3-亞乙二氧基-5β-孕-17(20)(Z)-烯將乙基三苯基溴化磷(15g)和叔丁氧化鉀(4.5g)加入THF(15ml)中制得維悌希試劑，再向其中加入5β-3-亞乙二氧基-雄烷-17-酮(6g)?；亓鞣磻?yīng)2小時后冷卻到25℃，然后加入二氯甲烷(80ml)和氯化銨溶液(60ml)，用分液漏斗分離有機層。水層用二氯甲烷(2×50ml)萃取。有機溶液用碳酸鉀干燥并真空蒸除溶劑。大部分的氧化磷可用己烷洗滌除去，得到的產(chǎn)物(6g)溶于丙酮(100ml)中，加入鹽酸(2N，10ml)。這些基本步驟完成后用二氯甲烷萃取得到的粗產(chǎn)物(5.5g)再通過色譜法精制得到4.5g產(chǎn)物(83％)。再從己烷中重結(jié)晶得到純立體異構(gòu)體。b.3α-羥基-3β-三氟甲基-5β-孕17(20)(Z)-烯在0℃下，向5β-孕-17(20)(Z)-烯-3-酮(950mg，3.17mmol)的THF溶液(15ml)中加入三氟甲基三甲基硅烷(0.5M的THF溶液，9.5ml)。溶液逐漸變?yōu)樽厣?，反?yīng)在30分鐘內(nèi)完成。然后加入水(30ml)，收集有機層。水層用乙醚(3×50ml)萃取，有機溶液用碳酸鉀干燥。通過柱色譜法，用乙酸乙酯和乙烷(1∶9)洗脫，分離得到純產(chǎn)物(680mg，58％)。實施例18a.3α-羥基-5β-孕-11-烯-20-酮在-78℃下，15分鐘內(nèi)，向5β-孕-11-烯-3，20-二酮(Sig-ma，1.5g，4.77mmol)的THF溶液(40ml)中緩慢加入三叔丁氧基氫化鋁鋰(1M的THF溶液，5.7mmol)。反應(yīng)物加熱到25℃維持12小時。該混合物在氯化銨和乙醚間分配，由此得到的粗物質(zhì)通過柱色譜法精制(10-20％丙酮的乙烷液，1.3g產(chǎn)物，86％)。b.3α-羥基-5β-20，20-亞乙二氧基孕-11-烯向3α-羥基-5β-孕11-烯-20-酮(1.3g)，1.2-亞乙基二醇(8ml)和原甲酸三甲酯(20ml)的混合物中加入對甲苯磺酸(0.1g)，攪拌1小時。常法制備完成(重碳酸鈉和乙醚)后蒸除溶劑，得到的粗產(chǎn)物用色譜法精制(丙酮∶己烷＝1∶4，1.2g，81％)。c.5β-20，20-亞乙二氧基-5β-孕-11-烯-3-酮將3α-羥基-20，20-亞乙二氧基-5β-孕-11-烯(1.2g)，醋酸鈉(0.53g)和PCC(1.4g)的混合物在25℃攪拌1小時，然后通過硅酸鎂柱過濾，用二氯甲烷和乙醚(1∶2)洗脫。用柱色譜法精制得到純產(chǎn)物(丙酮∶己烷＝1∶9，0.71g，60％)。d.3α-羥基-3β-三氟甲基-5β-孕-11-烯-20-酮在0℃下，向5β-20-亞乙二氧基孕-11-烯-3-酮(710mg，1.98mmol)的THF溶液(15ml)中加入三氟甲基三甲基硅烷(0.5M的THF溶液，6ml)和氟化四丁基銨(20mg)。溶液逐漸變?yōu)樽厣磻?yīng)在1小時內(nèi)完成。然后加入水(30ml)，收集有機層。水層用乙醚(3×40ml)萃取，有機溶液用碳酸鉀干燥。蒸除溶劑后得到的粗產(chǎn)物用HCl(2N，5ml)的丙酮(40ml)液水解。然后通過柱色譜法分離，用乙酸乙酯和乙烷(1∶5)洗脫，得到純產(chǎn)物(554mg，73％)，m.p.160-162.5℃。實施例193α，21-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕烷-20-酮21-乙酸酯將3β-乙炔基-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮(1.00g，2.92mmol)在35ml甲苯中的懸浮液用2ml甲醇進行處理。所得溶液在冰/水浴中冷卻并加入凈BF3-Et2O(Aldrich；5.8ml，5.02g，35.4mmol)。再分?jǐn)?shù)次加入固態(tài)乙酸高鉛(Aldrich；1.96g，4.42mmol).最初形成的高紅紫色溶液隨著在0℃持續(xù)攪拌變?yōu)榱磷厣Ｔ摶旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時，然后再冷卻到0℃。將冷的反應(yīng)物加到52ml飽和NaHCO3溶液，水和碎冰的混合物中。所得混合物用EtOAc(2×75ml)萃取。合并后的有機層用飽和NaCl溶液萃取，用Na2SO4干燥，濃縮。粗產(chǎn)物通過柱色譜法精制(5cm直徑的柱中裝25cm快速硅膠，用3升20％丙酮/己烷洗脫)，得到749mg(64％)該醋酸酯，m196-198℃。實施例203α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮，21-醋酸酯在無水氬氣氛下，將3β-羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮(1.94g，5.02mmol)溶于甲苯(86ml)和MeOH(5.2ml)。用注射器加入醚合三氟化硼(10.4ml，84.3mmol)后，再加入乙酸高鉛(2.89g，6.51mmol)。該混合物攪拌70分鐘，倒入水中并用CH2Cl2萃取三次。將有機相合并，用NaHCO3和NaCl水溶液洗滌，用MgSO4干燥，真空蒸發(fā)，得到淺黃色固體(2.18g)。該固體用快速柱色譜法(CH2Cl2/EtOAc150∶1和己烷/EtOAc4∶1)精制得到白色固體(1.54g，69％)，m.p.167-168.5℃。實施例213α-羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮參考文獻(xiàn)Krishnamurti，R；Bellew，D.R；SuryaPrakash，G.K.有機化學(xué)雜志1991，56，984。向5β-孕烷-3，20-二酮20-亞乙基縮酮(60mg，0.166mmol)的干燥THF溶液(3ml)中加入0.5MF3CSi(CH3)3(在THF中的溶液，0.5ml，0.25mmol)。所得無色溶液冷卻到0℃，加入n-Bu4NF·xH2O(少量結(jié)晶)。撤去冷卻浴，將該混合物加熱到室溫。與含有5α-孕烷-3，20-二酮20-亞乙基縮酮的反應(yīng)不同，此反應(yīng)混合物不會變黃，也沒有氣體產(chǎn)生。TLC(3∶1己烷/丙酮)沒有顯示任何產(chǎn)物生成。隨后，加入0.5MF3CSi(CH3)3(溶于THF，0.5ml，0.25mmol)。所得混合物在室溫下攪拌幾分鐘。TLC顯示有新的斑點，其Rf接近1，但仍有一些未反應(yīng)的起始物質(zhì)存在。因此，再加入0.5MF3CSi(CH3)3(溶于THF；0.5ml，0.25mmol)。該混合物再在室溫下攪拌幾分鐘。沒有未反應(yīng)的起始酮了。加入1NHCl(～3ml)，所得兩相混合物在室溫下攪拌過夜。這時由三氟甲基作用形成的斑點已完全消失，出現(xiàn)了兩個新的低極性斑點，下面的那個是主產(chǎn)物。然后將該混合物用醚和水稀釋。分離水層并用乙醚萃取。合并的有機層用飽和NaHCO3和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，過濾，減壓蒸發(fā)，得到白色晶狀(泡沫狀)固體。該固體的1H和19FNMR顯示有兩種差向異構(gòu)體以85∶15的比例存在。用快速色譜法，以15∶1己烷/丙酮洗脫，將這兩種差向異構(gòu)體分開。初餾分蒸發(fā)后得到次要異構(gòu)體，它沒有什么特征，推測為3β-羥基-3α-三氟甲基-3β-孕烷-20-酮。進一步洗脫柱子得到3α-羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮(50mg)。實施例223α-羥基-3β-三氟甲基-5β-19-去甲孕-17(20)(Z)-烯在0℃下，向5β-19-去甲孕-17(20)(Z)-烯-3-酮(823mg，2.88mmol)的THF溶液(30ml)中加入三氟甲基三甲基硅烷(0.5M的THF溶液，8.6ml)。溶液逐漸變?yōu)樽厣?，反?yīng)在30分鐘內(nèi)完成。然后加入水(30ml)，收集有機層。水層用乙醚(3×50ml)萃取，有機溶液用碳酸鉀干燥。通過柱色譜法，用乙酸乙酯和己烷(1∶9)洗脫，分離得到純產(chǎn)物(800mg，78％)。實施例233α，21-羥基-3β-甲基-5α-孕烷-20-酮，21-醋酸酯將3α-羥基-3β-甲基-5α-孕烷-20-酮(3.00g，9.02mmol)在干燥甲苯(110ml)和甲醇(6ml)中的溶液用干冰/丙酮浴冷卻到-75℃。用注射器加入凈BF3·Et2O(Aldrich；18ml，146mmol)，然后分批加入固態(tài)乙酸高鉛(4.39g，9.90mmol).在-75℃反應(yīng)不明顯，將該反應(yīng)物經(jīng)過4小時加熱到-10℃，再經(jīng)過90分鐘加熱到0℃。通過HPLC顯示，存在的主要是起始物質(zhì)。在0℃下1小時后，將反應(yīng)物再次冷卻到-15℃，再加入1.94g乙酸高鉛，然后再加熱到0℃。30分鐘后，HPLC(散射檢測器)給出產(chǎn)物和起始物質(zhì)的未校正的比例為10∶1。繼續(xù)45分鐘后，將反應(yīng)物冷卻到-10℃，再加入到冰冷的，100mlEtOAc，165ml飽和NaHCO3溶液和碎冰的混合物中。分離出水層，用EtOAc(2×150ml)洗滌，然后將合并在一起的有機層用水和飽和NaCl溶液各洗兩次。用Na2SO4干燥后，蒸除溶劑，殘余物從EtOAc中重結(jié)晶得到1g被起始物質(zhì)污染的醋酸酯。將母液真空濃縮，并用兩份100ml己烷進行研制。用己烷洗滌后的殘余物與重結(jié)晶的物質(zhì)合并后再進行第二次重結(jié)晶。所得固體中仍雜有2.8％起始物質(zhì)(HPLC測定)。第三次重結(jié)晶后得到1.087g(產(chǎn)率31％)醋酸酯，其所含起始物質(zhì)＜2％。實施例243α，21-二羥基-5β-孕烷-20-酮21-磷酸二鈉在室溫下，向21-溴-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮(1.0g，2.5mmol)的10mlTHF溶液中邊攪拌邊加入磷酸氫二芐酯(2.1g，7.55mmol)和二乙胺(1.085ml，7.8mmol)。反應(yīng)物加熱回流2.5小時后冷卻到室溫。然后加入二氯甲烷(25ml)，并將該溶液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用1NHCl，飽和NaHCO3水溶液洗滌，用MgSO4干燥，真空濃縮，得到磷酸二芐酯粗油(943mg)。將該油溶于EtOH(50ml)并加入幾滴硫酸。在燒瓶中加入400mg5％Pd/C，然后在室溫下向該攪拌著的溶液中通入1個大氣壓的H2氣直到反應(yīng)完全。過濾除去催化劑后將溶液濃縮得到殘余物。將該殘余物溶于4∶1MeOH∶水(20ml)并用2NNaOH滴定到pH為11。再加入50mlMeOH，在0℃靜置1小時，濾除固態(tài)無機磷酸鹽。將該溶液真空濃縮，殘余物用熱甲苯(～50ml)洗滌后再溶于最少量MeOH中，向該溶液中緩慢加入丙酮直到有固體沉淀出來。將此混合物離心，潷去溶劑，將濕的固體轉(zhuǎn)移到小瓶中并在真空狀態(tài)下干燥得到標(biāo)題化合物，為吸濕性固體。實施例253α，21-二羥基-3β-甲基-5α-孕烷-20-酮21-磷酸二鈉在室溫下，向21-溴-3α-羥基-3β-甲基-5α-孕烷-20-酮(1.0g，2.43mmol)的10mlTHF溶液中邊攪拌邊加入磷酸氫二芐酯(2.1g，7.3mmol)和三乙胺(1.085ml，7.53mmol)。然后將該反應(yīng)物加熱回流4.5小時后，冷卻到室溫。再加入二氯甲烷(25ml)，并將溶液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用1NHCl，飽和NaHCO3水溶液洗滌，用MgSO4干燥，真空濃縮，得到磷酸二芐酯粗油(1.205g)。將該磷酸二芐酯(790mg，1.3mmol)溶于2∶1EtOH∶THF(30ml)并加入幾滴硫酸，再加入5％Pd/C(180mg，20％(重量))并在室溫下通入50psiH2直到反應(yīng)用TLC檢測已完全。濾除催化劑，濃縮濾液。殘余物溶于4∶1MeOH∶水(10ml)并用1MNOH滴定到PH11。該溶液用丙酮處理直到易濾過的固體沉淀出，將其冷卻到0℃后，過濾分離得到粗固體260mg，將該固體溶于20ml水中形成混濁的溶液，再過濾，濃縮得到220mg標(biāo)題化合物，為白色固體。實施例26a.20，20-亞乙二氧基-5α-孕烷-3-酮利用在5β化合物中描述的方法，從3β-羥基-5α-孕烷-20-酮開始制得約90％總產(chǎn)率的標(biāo)題化合物。b.3β-乙炔基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮，20-縮酮和3α-乙炔基-3β-羥基-5α-孕烷-20-酮，20-縮酮在帶有進氣口，溫度計和冷凝器的250ml三頸燒瓶中裝入乙炔化鋰-EDA配合物(2.75g，90％，27.5mmol)。加入干燥苯(60ml)并以中等速率向該混合物中通入乙炔氣體。然后用油浴將該混合物加熱到50-55℃，并分幾部分用5α-孕烷-3，20-二酮，20-縮酮(9g，25mmol)處理。在此溫度下持續(xù)攪拌5小時，再在室溫下攪拌17小時。所得懸浮液冷卻到10℃并用飽和NaCl溶液(5ml)進行處理。蒸除溶劑，殘余物溶于水中。不溶于水的產(chǎn)物經(jīng)過濾收集，用水洗滌，真空干燥。該粗產(chǎn)物從EtOAc中重結(jié)晶得到3α-乙炔基-3β-羥基-5α-孕烷-20-酮，20-縮酮(3.35g)。母液蒸干，殘余物用硅膠柱層析粗制，用甲苯∶丙酮混合物(92∶8)洗脫，得到未反應(yīng)的起始酮(1.3g)，及第二餾分3β-乙炔基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮，20-縮酮(1.3g)。用相同的溶劑混合物進一步洗脫得到極性更強的3α-乙炔基-3β-羥基-5α-孕烷-20-酮，20-縮酮(270mg)。c.3β-乙炔基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮將3β-乙炔基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮，20-縮酮(550mg)溶于丙酮(20ml)和2NHCl(10ml)的混合物中并在室溫下攪拌15小時。蒸除溶劑，殘余物用CH2Cl2萃取。有機層用水，稀NaHCO3溶液，水，和鹽水洗滌。用無水MgSO4干燥后，過濾，蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物(414mg)。然后將該粗產(chǎn)物溶于小量CH2Cl2中，并倒在硅膠柱上，用甲苯丙酮混合物(92∶8)洗脫，得到標(biāo)題化合物(280mg)，mp175-177℃。d.3α-乙炔基-3β-硝基氧基-5α-孕烷-20-酮將3α-乙炔基-3β-羥基-5α-孕烷-20-酮，20-縮酮(2.15g)的CHCl3溶液(45ml)冷卻到-20℃并用乙酸酐(20ml)進行處理。然后加入發(fā)煙硝酸(4ml)，并在此溫度下攪拌45分鐘。加熱到-5℃后，將該黃色溶液倒入2NNaOH(70ml)和水(150ml)的混合物中，得到PH3-4的產(chǎn)物溶液。然后用CHCl3萃取，用水，飽和NaH-CO3溶液，鹽水洗滌，用MgSO4干燥，蒸發(fā)得到標(biāo)題化合物，為粘性物質(zhì)(3g)，以此形態(tài)用于下個步驟中。e.3β-乙炔基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮和3α-乙炔基-3β-羥基-5α-孕烷-20-酮將上步驟中制得的粗產(chǎn)物(3g)加入THF和水的混合物(30ml，1∶1)中并加入AgNO3(516mg)。在室溫下攪拌15小時后，蒸除溶劑，殘余物用CH2Cl2萃取。有機層用水，NaHCO3稀溶液，水，和鹽水洗滌。用無水MgSO4干燥后，過濾，蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物(2g)。再將該粗產(chǎn)物溶于小量CH2C12，并倒在硅膠柱上。用甲苯∶丙酮混合物(93∶7)進行洗脫得到初餾分3β-乙炔基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮(550mg)，用相同溶劑混合物進-步洗脫得到極性更大的3α-乙炔基-3β-羥基-5α-孕烷-20-酮(460mg)。實施例273α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-桐，21-半琥珀酸酯在無水氬氣氛下，將3α，21-二羥基-3β-三氟甲基一5α-孕烷-20-酮(920mg，2.29mmol)，琥珀酐(457mg，4.57mmol)和二甲氨基吡啶(14mg)溶于無水吡啶中。攪拌16小時后，再加入二甲氨基吡啶(7mg)。再攪拌3小時后，真空蒸除溶劑。殘余吡啶從甲苯溶液中蒸發(fā)除去。殘余物用快速柱色譜法精制(CH2Cl2/MeOH∶梯度100∶到50∶1)，得到白色半固體殘余物(1.1g)。將該微有不純的固體溶于CH2Cl2，用水(3×50ml)洗滌，用MgSO4干燥。真空蒸除溶劑得到白色固體(883mg，77％)。3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮，21-半琥珀酸酯，鈉鹽將3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮，21-半琥珀酸酯(859mg，1.71mmol)溶于MeOH(35ml)。然后滴加NaHCO3(143mg，1.70mmol)的水(10ml)溶液。再加入MeOH(10ml)。攪拌2.5小時后，蒸除溶劑。加入甲苯并真空蒸發(fā)。殘余物用醚/己烷研磨后，再用己烷研磨，得到白色固體。加入MeOH后再除去。加入庚烷并真空蒸除。殘余物用己烷研磨并真空干燥，得到白色固體878mg，98％)。實施例283β-乙炔基-3α-羥基-5β-孕-11-烯-20-酮在-78℃下，向順/反式二溴乙烯(236mg，1.27mmol)在5ml干燥THF中的溶液中滴加丁基鋰1.6M的己烷液(1.6ml，2.54mmol)，并將混合物攪拌30分鐘。然后將溫度降至-90℃，在10分鐘內(nèi)用套管加入5β-孕-11-烯-3，20-酮在10mlTHF的溶液，反應(yīng)物在-90℃下再攪拌30分鐘，接著加入3ml飽和NH4Cl水溶液并攪拌到室溫。在真空狀態(tài)下將溶劑水平降低到～3ml，然后在乙酸乙酯和水(各25ml)之間分配，有機層用飽和NaCl水溶液洗滌，用MgSO4干燥，真空濃縮得到粗固體。用快速色譜法，在2cm柱中裝6英寸硅膠，收集10ml餾分，用95∶5甲苯∶丙酮洗脫，得到142mg(65.6％)標(biāo)題化合物。mp147-50℃。實施例293β-三氟甲基-3α-羥基-5α-19-去甲孕烷-20-酮該化合物是從3α-羥基-3β-三氟甲基-5β-19-去甲孕烷-20-酮的制備(見實施例10)中的副產(chǎn)物得到的。將其從適當(dāng)?shù)膶游鲳s分中分離出來；mp.178-179℃。實施例303β-(1-庚炔基)-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮在-78℃，將1-庚炔(0.327ml，2.5mmol)的干燥THF溶液(15ml)用正丁基鋰(2.5M的THF溶液，2.5mmol，1ml)進行處理?；旌衔镌诖藴囟认聰嚢?小時，加入5β-孕烷-3，20-二酮環(huán)20-(1，2-乙二烷基縮醛)(360mg，1mmol)的干燥THF溶液(15ml)，該混合物在-78℃攪拌1小時。然后加入2NHCl溶液(1ml)終止反應(yīng)。蒸除溶劑，殘余物溶于丙酮(10ml)中。加入2NHCl(10ml)后在室溫下攪拌1小時，再加入飽和NaHCO3溶液以中和酸。蒸除溶劑，殘余物用EtOAc萃取。有機層用水，NaHCO3稀溶液，水，和鹽水洗滌。用無水MgSO4干燥后，過濾，蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物(400mg)。將該粗產(chǎn)物溶于小量CH2Cl2中并倒在硅膠柱上。用甲苯∶丙酮混合物(93∶7)洗脫得到3β-(1-庚炔基)-3α-羥基-3β-孕烷-20-酮(260mg)，為無色固體，mp.121-123℃。用類似的方法制備3β-(1-己炔基)-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮，3β-(1-辛炔基)-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮，3β-環(huán)丙基乙炔基-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮，3β-(3-甲基丁-2-烯-1-炔基)-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮，和3β-(3.3-二甲基丁炔基)-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮。實施例313β-環(huán)丙基乙炔基-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮a.3β-(5-氯-1-戊炔基)-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮環(huán)20-(1，2-乙二烷基縮醛)在-60℃，將5-氯戊炔(0.5ml，4.8mmol)的干燥THF溶液(15ml)用正丁基鋰(2.4M的THF溶液，4.8mmol，2ml)進行處理。在-78℃下攪拌0.5小時后，加入5β-孕烷-3，20-二酮，環(huán)20-(1，2-乙二烷基縮醛)(560mg，1.56mmol)的THF溶液(15ml)并在-78℃下攪拌1小時。撤去冷卻浴，用NH4Cl溶液(3ml)終止反應(yīng)。蒸除溶劑，殘余物用EtOAc萃取。有機層用水，NaHCO3稀溶液，水，和鹽水洗滌。用無水MgSO4干燥后，過濾，蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物(660mg)。將該粗產(chǎn)物用于下個步驟中。b.3β-環(huán)丙基乙炔基-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮在-60℃，將二異丙胺(0.4ml，3mmol)的干燥THF溶液(15ml)用正丁基鋰(2.5M的THF溶液，3mmol，1.2ml)進行處理。在-78℃攪拌0.5小時后，加入3β-(5-氯-1-戊炔基)-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮環(huán)20(1，2-乙二烷基縮醛)(100mg，0.22mmol)的THF溶液(15ml)。撤去冷卻溶，該混合物在室溫下攪拌0.5小時。然后用NH4Cl溶液(3ml)終止反應(yīng)。蒸除溶劑，殘余物溶于丙酮(40ml)。加入1NHCl(4ml)并在室溫下攪拌15分鐘。加入飽和NaHCO3溶液以中和酸。蒸除溶劑，殘余物用EtOAc萃取。有機層用水，NaHCO3稀溶液，水，和鹽水洗滌。用無水MgSO4干燥后，過濾，蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物(120mg)。再將該粗產(chǎn)物溶于小量CH2Cl2并倒在硅膠柱上。用甲苯∶丙酮混合物(95∶5)洗脫得到3β-(環(huán)丙基乙炔基)-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮(55mg)，為無色固體，mp123-138℃，TLCRf(己烷∶丙酮7∶3)0.29很顯然，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，上述化合物可以非對映體的混合物形式存在，也可分離為單獨的非對映體。非對映體的分離可通過常規(guī)的氣相或液相色譜法來完成，或從天然原料中分離。本文中除非另有說明，在說明書和權(quán)利要求書中所指的本發(fā)明的化合物，如上面所討論的，將包括所有異構(gòu)體，元論它們是分離的還是混合物。在分離的異構(gòu)體中，預(yù)期的藥理活性經(jīng)常將以非對映體中的一種為優(yōu)。如本文所公開的，這些化合物顯示出高度的立體定向性。特別是，這些化合物中對GABA受體復(fù)合物具有最佳效應(yīng)的是帶有3β-取代-3α-羥基孕烷類固醇骨架的那些。用于本發(fā)明且構(gòu)成本發(fā)明一部分的化合物是無毒的，藥學(xué)上可接受的，天然的和合成的，直接作用的和黃體酮，脫氧皮質(zhì)甾酮以及雄烷代謝物的“藥物前體”形式，具有在大腦中對GABAA受體復(fù)合物迄今未知的活性。本發(fā)明利用了這些以前未知的機理和活性的新發(fā)現(xiàn)。本發(fā)明的藥物組合物是通過加入本發(fā)明的活性化合物或這些化合物的混合物以及無毒的藥物載體，按照通用的技術(shù)步驟以無毒的足夠的量制備成常規(guī)的劑量單位形式，以在實驗中，動物或人身上產(chǎn)生預(yù)期的藥效活性。含有有效但無毒量的活性成分的組合物優(yōu)選從約1mg到約500mg活性成分每劑量單位。這個量根據(jù)預(yù)期的特定生物活性和病人的情況來定。本發(fā)明的組合物和方法的預(yù)期目標(biāo)是用于改善不安，焦慮，PMS，PND，和由癲癇等引起的抽搐，或防止焦慮，肌緊張和抑郁的發(fā)生，這些癥狀常見于中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常的病人。這些組合物和方法的另一個預(yù)期目標(biāo)是治療失眠和產(chǎn)生催眠作用。這些化合物和方法的又一個預(yù)期目的是用于引起麻醉，特別是通過靜脈給藥。藥用載體可以是，例如固體，液體，或定時釋放的(參見)如Remington’s藥物科學(xué)，14版，1970年)。有代表性的固體載體是乳糖，石膏粉，蔗糖，滑石，明膠，瓊脂，果膠，阿拉伯膠，硬脂酸鎂，硬脂酸，微晶纖維素，聚合物水凝膠等。典型的液體載體是丙二醇，生糖醛，環(huán)糊精水溶液，糖漿，花生油，和橄欖油以及類似乳狀液。同樣，載體和稀釋劑可包括任何本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的定時釋放物質(zhì)，如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，單獨或與蠟，微膠囊，微球體，脂質(zhì)體，和/或水凝膠一起使用?？刹捎玫乃幬镄问绞嵌喾N的。因此，當(dāng)使用固體載體時，制備方法可以是簡單地粉碎成微粒，置于油中，制成片劑，以微粉或球粒形式裝于硬明膠或腸溶膠囊中，或制成錠劑形成。用于本發(fā)明且構(gòu)成本發(fā)明一部分的化合物也可制成栓劑用于直腸給藥?；衔锟苫旌嫌诳煽捎秃途垡叶歼@樣的物質(zhì)或其他適宜的無剌激性的物質(zhì)中，這些物質(zhì)在室溫下為固體，但在直腸溫度下為液體。當(dāng)采用液體載體時，可以液體形式制備，如安瓿，或含水或無水的液體懸浮劑。液體劑量形式還需要藥物上可接受的防腐劑等。此外，因為根據(jù)本文所公開的數(shù)據(jù)，只需用低劑量，所以母體給藥，噴霧鼻劑，舌下和頰給藥，以及定時釋放的皮膚補片也是適宜的用于表面給藥的藥物形式。按照本發(fā)明的制備抗焦慮藥，抗驚厥藥，情緒調(diào)節(jié)劑(如抗抑郁劑)或催眠劑的方法包括給需要本發(fā)明的活性化合物的受試者服用此藥，通常與藥物載體一起，以無毒的足夠量制備成上述的組合物從而產(chǎn)生所述的活性。在月經(jīng)期間，分泌的代謝物水平變化接近四倍(Rosciszewska等人，1986)。因此，用于控制癥狀的治療方法包括使PMS病人在經(jīng)前期狀態(tài)時的黃體酮水平高于平常值。檢測這些病人在經(jīng)前期和經(jīng)后期時的有效血漿水平和主要代謝物血漿水平。本發(fā)明的化合物以單獨的或它們的混合物的形式給藥，用量為使其在一般受試者處于經(jīng)前期狀態(tài)時達(dá)到能發(fā)揮GABA-受體活性的水平，其等于或高于黃體酮代謝物的水平。給藥途徑可以是能有效地將活性化合物轉(zhuǎn)運到GABAA受體上以激發(fā)它的任何途經(jīng)。給藥可通過非腸道的，腸道的，直腸的，靜脈的，真皮內(nèi)的，肌內(nèi)的，舌下的，或鼻內(nèi)的途徑，優(yōu)選口服，肌內(nèi)和真皮途徑。例如用于皮膚補片中的一個劑量可在一周內(nèi)向病人提供活性成分。然而，非腸道途徑優(yōu)選用于癲癇持續(xù)狀態(tài)。對GR部位的效力和功效體外和體內(nèi)的實驗數(shù)據(jù)顯示。黃體酮/脫氧皮質(zhì)甾酮和它們的衍生物的自然代謝產(chǎn)物與GR復(fù)合物上新的特異識別部位以高度親和力相互結(jié)合從而促進了氯離子穿過對GABA敏感的神經(jīng)元膜的傳導(dǎo)性(Gee等人，187；Harrison等人，1987)。對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，用對[35S]雙環(huán)硫代磷酸叔丁酯([35S]TBPS)結(jié)合的調(diào)節(jié)來測定藥物對GR復(fù)合物作用的效力和功效是已知的方法，該藥物可以治療不安，焦慮，和癲癇發(fā)作。(Squires，R.F.等人，“[35S]雙環(huán)硫代磷酸叔丁酯對與γ-氨基丁酸-A和離子識別部位相關(guān)的腦-特異部位的高度親和力”，分子藥理學(xué)23326，1983；Lawrence，L.J.等人，“苯并二氮卓類的抗驚厥作用氯離子載體的γ-氨基丁酸依賴型調(diào)節(jié)”，生物化學(xué)與生物物理研究通訊1231130-1137，1984；Wood等人，“苯并二氮卓類受體興奮劑，拮抗劑，反興奮劑，和興奮劑/拮抗劑的體外實驗特性”，Pharmacol，Exp.Ther.，231572-576，(1984))。我們進行了幾項實驗來測定本發(fā)明化合物對[35S]TBPS的自然調(diào)節(jié)的作用。我們發(fā)現(xiàn)這些化合物與GR復(fù)合物上的新的部位相互結(jié)合，它與巴比妥類，苯并二氮卓類或任何其它已知的部位都沒有重疊。進一步說，這些化合物具有對GR復(fù)合物的高效力和功效，這一活性需要精確的結(jié)構(gòu)。進行測定的過程完全公開在(1)Gee等人，1987；和(2)Gee，K.W；L.I.Lawrence，和H.I.Yamamura，分子藥理學(xué)30218(1986)。這一檢測過程如下所述將雄性Sprague-Dawley鼠處死后立即切下腦，并在冰上解剖大腦皮質(zhì)，如前所述(Gee等人，1986)制備P2勻漿。簡言之，即將皮質(zhì)慢慢攪勻在0.32M蔗糖中，然后以1000×g的速度離心10分鐘。收集上清液并以9000×g的速度離心20分鐘。將所得P2粉末懸浮于50mMNa/k磷酸鹽緩沖液(pH7.4)200mMNaCl中制成10％懸浮液(初始濕重/體積)從而形成勻漿。將100微升(ml)P2勻漿(0.5毫克(mg)蛋白質(zhì))的等分試樣在天然產(chǎn)生的類固醇或它們的合成衍生物存在或不存在的情況下，用2納摩爾nM)[35S]TPBS(70-110居里/毫分子；NewEnglandNu-clear，Boston，MA)孵育以進行測試。將該測試化合物溶于二甲亞砜(BakerChem.Co.，Phillipsbury，NJ)并以5μl等分試樣加入到孵育混合物中。用緩沖液將該孵育混合物調(diào)到終體積為1ml。非特異結(jié)合定義為2mMTBPS存在下的結(jié)合。通過進行GABA加(+)比枯枯靈堿(SigmaChem.Co.)存在下的所有測定來評估GABA(Sig-maChem.Co.，St.Louis，MO)的效應(yīng)和特異性。維持25℃孵育90分鐘(穩(wěn)態(tài)條件)后，通過玻璃纖維濾器(No.32，SchleicherandSchuell，Keene，NH)迅速過濾以終止反應(yīng)。通過液體閃爍分光光度測定法測定濾過物的放射性。利用計算機化重復(fù)操作，通過非線性回歸分析動力學(xué)數(shù)據(jù)和化合物/[35S]TBPS劑量應(yīng)答曲線，得到速度常數(shù)和IC50(對基礎(chǔ)[35S]TBPS結(jié)合產(chǎn)生半數(shù)最大抑制時的化合物濃度)值。這個測定所得到的實驗數(shù)據(jù)也公開在Gee等人，1987中。在這份參考文獻(xiàn)中公開的數(shù)據(jù)顯示并描述于PCT申請公開號WO93/03732，1993年3月4日公開。與此相反，通過這項工作證明類固醇結(jié)合部位截然不同于GABA/比枯枯靈堿部位。當(dāng)羥-5α-孕烷二酮引起[35S]TBPS結(jié)合抑制時，由比枯枯靈堿導(dǎo)致的劑量應(yīng)答曲線的移動是不平行的。這顯示GABA和類固醇部位沒有重疊。用第二組實驗來證明類固醇，巴比妥類，和苯并二氮卓類在GABA受體上沒有共同的結(jié)合部位。該測定按照上面概述的方法進行。所得到的動力學(xué)數(shù)據(jù)表明由飽和濃度的3α-羥基-5α-孕烷-20-酮引發(fā)的[35S]TBPS結(jié)合的分離被100μM戊巴比妥鈉加強了。這一效應(yīng)表明3α-OH-5α-孕烷-20-酮(類固醇)和戊巴比妥(巴比妥類)結(jié)合在不同的部位上。第三組實驗檢測3α-羥基-5α-孕烷-20-酮和戊巴比妥納二者在(3H)氟硝西泮(FLU)結(jié)合的勢差現(xiàn)象中的相互作用。這些實驗進一步證明類固醇和苯并二氮卓類，巴比妥類的作用部位不同。在這一系列實驗中，測定各種濃度的3α-羥基-5α-孕烷-20-酮，在最大激發(fā)濃度的戊巴比妥鈉存在或不存在的情況下，對(3H)FLU結(jié)合的影響。由于在加強(3H)FLU結(jié)合時，戊巴比妥鈉比3α-羥基-5α-孕烷-20-酮具有更大的最大效能，因此，如果二者競爭作用于相同部值，則3α-羥基-5α-孕烷-20-酮應(yīng)最大地對抗戊巴比妥鈉的作用。但沒有觀察到這樣的結(jié)果。因此，實驗數(shù)據(jù)進一步證明了我們的結(jié)論，即包括用于本發(fā)明且構(gòu)成本發(fā)明一部分的化合物在內(nèi)的某些類固醇作用于GR復(fù)合體上與巴比妥類或BZ調(diào)節(jié)部位截然不同的新的部位上。由于這些類固醇化合物具有獨立的作用部位，因此可以預(yù)料它們將具有不同于巴比妥類和BZs的治療分布。在體外實驗中對各種化合物進行篩選以測定它們作為[35S]TBPS結(jié)合調(diào)節(jié)劑的潛力。這些測定按照上面論述的方法進行。在這些測定的基礎(chǔ)上，我們已經(jīng)確定了它們對GR復(fù)合體的特異性作用所需要的活性結(jié)構(gòu)以及它們的效力和功效的排列順序。表1列出了包括本申請中所要求的那些例子在內(nèi)的一些化合物的IC50和最大抑制度。IC50定義為空白[35S]TBPS結(jié)合的50％抑制時的化合物濃度。它表明了化合物的體外效力。最大抑制度表明化合物的體外功效。表1<><tablesid="table2"num="002"><tablewidth="705">雙(3α，21-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕烷-20-酮)21-半琥珀酸酯68563α，21-二羥基-5α-孕烷-20-酮21-醋酸酯75993α，21-二羥基-5α-孕烷-20-酮(5α-THDOC)761003α-羥基-3P-三氟甲基-19-去甲-5β-孕烷-20-酮761003α-羥基-21-甲基-5β-孕烷-20-酮781003α-羥基-3β-(3′-甲基-丁-3′-烯-1′-炔基)-5α-孕烷-20-酮88953α-羥基-3β，21-二甲基-5α-孕烷-20-酮89853α-羥基-3β-甲基-5α-19-去甲-孕烷-20-酮91803α，20α(S)-二羥基-5α-孕烷9946N-(3α-羥基-3β-甲基-5α-孕烷-20-啶)乙醇胺101933β-乙烯基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮113883α，21-二羥基-5α-孕烷-20-酮21-半琥珀酸酯117913α，21-二羥基-5β-孕烷-20-酮21-醋酸酯119493α，20α-二羥基-5β-甲基-5α-孕烷166523α，20-二羥基-20-甲基-5α-孕烷176403α，21-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕烷-20-酮21-半琥珀酸酯17982雙(3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20酮)21-半琥珀酸酯189233α-羥基-3β-氟甲基-5α-孕烷-20-酮200773α，20α-二羥基-3P-乙炔基-5α-孕烷202563α-羥基-3β-三氟甲基-5β-孕-11-烯-20-酮203993α，21-二羥基-3β-甲基-5α-孕烷-20-酮21-半琥珀酸酯，鈉鹽2111043α-羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮211983α，21-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕烷-20-酮2161043α，21-二羥基-3β-甲基-5α-孕烷-20-酮21-半琥珀酸酯241923α-羥基-3β-甲基-5α-孕-11-烯-20-酮242763α-羥基-3β-三氟甲基-5α-孕烷-20-酮244443α，21-二羥基-3β-三氟甲基-19-去甲-5β-孕烷-20-酮2461003α，21-二羥基-5α-孕烷-20-酮21-半琥珀酸酯，鈉鹽251923α-羥基-3β-三氟甲基-19-去甲-5α-孕烷-20-酮251403α，21-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕烷-20-酮，21-醋酸酯2511013α，21-二羥基-3β-甲基-5α-孕烷-20-酮258963α，21-二羥基-3β-甲基-5α-孕烷-20-酮21-醋酸酯284933α，21-二羥基-3β-乙烯基-5α-孕烷-20酮2881013α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮3541023α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮，21-醋酸酯370883α，21-二羥基-3β-乙烯基-5α-孕烷-20-酮，21-半琥珀酸酯377893α，20β-二羥基-3β-甲基-5β-孕烷4551053α，20α-二羥基-3β，21-二甲基-5α-孕烷50748</table></tables>無效的從表1可看出，用于本發(fā)明且作為本發(fā)明一部分的化合物具有低的IC50，即對[35S]TBPS結(jié)合達(dá)到50％最大抑制所需要的濃度，而象性類固醇(雌二醇和黃體酮)，糖皮質(zhì)激素(皮質(zhì)甾酮)和膽甾醇這樣的化合物則具有高的IC50和基本上無活性。因此，可以預(yù)料，激素類固醇和膽甾醇本身對本文所描述的征侯不會有任何治療價值。為了把這種專門的類固醇與激素類固醇區(qū)分開，現(xiàn)在稱它為神經(jīng)活性類固醇。不過，象黃體酮這樣的性類固醇可在體內(nèi)代謝為類似于3α-羥基-5α-孕燒-20-酮這樣的類固醇。因此，黃體酮可看作是藥物前體。TBPS數(shù)據(jù)與有關(guān)由各種3α-羥基化的類固醇導(dǎo)致的36Cl離子攝取增強的數(shù)據(jù)有密切關(guān)系，這在Purdy.R.H.等人，醫(yī)藥化學(xué)雜志331572-1581(1990)中有所描述，該文獻(xiàn)結(jié)合在此作為參考；這些數(shù)據(jù)也和通過測定注射了人GABA受體的孵母細(xì)胞中類固醇增強GABA引起的電流的活性而得到的電生理學(xué)數(shù)據(jù)有密切關(guān)系。這表明TBPS測定是檢測類因醇變構(gòu)調(diào)節(jié)Cl-通道活性能力的近似檢測方法?；衔锏木植炕钚詫Σ∪藖碚f在達(dá)到預(yù)期的治療活性的同時還期望副作用最小，本發(fā)明的一個顯著方面即是在那些帶有5α-孕烷-3α，20α-羥基，5β-孕烷-3α，20β-羥基基團的化合物中或它們的衍生物以及這些化合物的藥物前體中發(fā)現(xiàn)了帶有局部活性的興奮劑。此外，除了帶有這兩種基團的化合物外，神經(jīng)活性類固醇的附屬物質(zhì)也在TBPS測定中顯示出局部功效(表1)。對于希望改善焦慮或驚厥的病人來說，需要的是催眠。對于希望改善失眠的病人來說，需要的是麻醉。這些化合物用作帶有局部活性的興奮劑時希望它們產(chǎn)生預(yù)期作用時帶有最小的不期望的副作用。此外，在注射了人GABAA受體的非洲蟾蜍卵母細(xì)胞中的實驗中，這些化合物提高GABA傳導(dǎo)致Cl-電流增強的能力與3α-羥基-5α-孕烷-20-酮相比是有限的。當(dāng)用非洲蟾蜍卵母細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)來測試某些神經(jīng)活性類固醇的有限功效比例時，按下述過程進行實驗。向已用膠原酶消化方法[3小時(a)18-23℃2mgml-1]膠原酶A′在巴爾特鹽水中，忽略Ca2+鹽)進行了“去卵泡”(defolliculated)作用的爪蟾卵母細(xì)胞(VI期)中注射入人GABAA受體亞單位復(fù)合物α1，β1和γ1的cRNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。主要的GABAA受體復(fù)合物由αβγ亞單位組成。注射后的卵母細(xì)胞獨自置于96槽板上(每槽中200uL普通巴爾特溶液，添加青霉素50IUml-1，鏈霉素50mgml-1和慶大霉素100mgml-1)在19-20℃保留9天。將非洲蟾蜍卵母細(xì)胞電壓箝在保持電位為-60mV，利用中樞箝(Axacamp)2A(軸索裝置)電位箝擴大器以雙電極電位箝模式記錄興奮劑導(dǎo)致的電流。在傳感電壓和通過電流顯微電極中裝入3MkCl，當(dāng)在標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞外鹽水中測定時電阻為1-3M歐。卵母細(xì)胞在室溫下(17-21℃)用蛙復(fù)方氯化鈉溶液(frogRinger)(120mMNaCl，2mMKCl；1.0mMCaCl2；5mMHEPESpH7.4)使其以5-7m1min-1的速度持續(xù)溢出。所有的藥物經(jīng)灌注系統(tǒng)加入。制備類固醇(10-2M)時是將濃縮的儲備溶液溶于DMSO中或乙醇中，然后用近似濃度的復(fù)方氯化鈉溶液稀釋。最終DMSO和乙醇濃度為0.2％(v/v)，濃度對GABA喚起應(yīng)答沒有影響。所有其他藥物的儲備溶液也用復(fù)方氯化鈉溶液處理。膜感應(yīng)電流在100Hz低通濾過并用FM磁帶記錄器(RacalStore4DS)記錄到磁性帶上，用于之后的分析。比黃體酮更好的效果黃體酮水平下降和與PMS，PND，月經(jīng)性癲癇有關(guān)的癥狀，二者之間的相關(guān)性(Backstrom，等人，1983，Dalton，k.，1984)導(dǎo)致了黃體酮在治療這些疾病中的應(yīng)用(Mattson，等人，1984；和Dalton，1984)。但是，在治療上述綜合征時黃體酮不是始終有效的。例如，黃體酮用于治療PMS時沒有劑量應(yīng)答關(guān)系存在(Maddocks等人，l987)。這些結(jié)果可由我們的實驗推測出。根據(jù)我們的體外研究結(jié)果，證明黃體酮與它的某些代謝物相比，具有非常低的對GR復(fù)合物的效力，如表1中所示。黃體酮的有益效果可能與黃體酮易轉(zhuǎn)變?yōu)橛行У狞S體酮代謝物有關(guān)?；谶@些代射物以及它們的衍生物的高效力和功效，將這些物異的黃體酮代謝物用于治療上面所提到的綜合癥要明顯優(yōu)于用黃體酮(參見Gee等人，1987，和表1)。沒有激素的副作用我們的研究還證明由于對黃體酮和其它激素類固醇受體沒有親和力，因此神經(jīng)活性類固醇沒有激素的副作用。按照以前Gee，等人，1988中所描述的方法進行測定，檢測在鼠子宮中，黃體酮代謝物及其衍生物和孕激素R5020的[3H]R5020對黃體酮受體的結(jié)合效應(yīng)，從而得到實驗數(shù)據(jù)。(Gee等人，1988)。在測試化合物存在的條件下，用鼠子宮胞液孵育3H-黃體酮(0.15nM)。孵育后檢測特異性結(jié)合并以不存在測試化合物時的孵育結(jié)果為對照，二者進行對比。結(jié)果表示為對結(jié)合的百分抑制率。如果化合物以高親和力結(jié)合到黃體酮受體上，則希望以測試濃度對結(jié)合產(chǎn)生100％抑制。神經(jīng)活性類固醇顯示出低于10％抑制率，這表示它們作為擬黃體酮劑(progestenicagents)是沒有活性的。典型的神經(jīng)活性類固醇的各種激素活性可通過檢測它們的潛在的雌激素，腎上腺皮質(zhì)激素和糖皮質(zhì)激素活性來做進一步的研究。這些活性可通過監(jiān)測該化合物對類固醇激素與它們相應(yīng)的激素受體相結(jié)合的抑制能力來進行分析。這些實驗結(jié)果記錄在1993年3月4日公開的PCT申請公開WO93/03732中，該文完全結(jié)合在此作為參考。這些實驗結(jié)果清楚地表明，神經(jīng)活性類固醇對任何上述的類固醇受體都不具有強親和力。因此他們將不具有因這樣的類固醇受體結(jié)合而導(dǎo)致的激素副作用?？贵@厥活性通過評估用于本發(fā)明且構(gòu)成本發(fā)明一部分的化合物防止戊四氮導(dǎo)致的小鼠驚厥的能力，來檢測神經(jīng)活性類固槨和GABA受體相互作用的生理相關(guān)性。給小鼠注射不同劑量的本發(fā)明的測試化合物，10分鐘后再注射戊四氮。測定在30分鐘期間內(nèi)每只小鼠由戊四氮導(dǎo)致肌陣攣發(fā)生的時間(前臂陣攣的出現(xiàn))。在對照小鼠中，戊四氮(85mg/kg)將導(dǎo)致95％的動物產(chǎn)生驚厥。用于本發(fā)明且作為本發(fā)明一部分的各種化合物防止小鼠產(chǎn)生驚厥的能力顯示于表2中。表2在小鼠體內(nèi)神經(jīng)活性類固醇的抗戊四氮活性<><tablesid="table5"num="005"><tablewidth="727">3β-乙炔基-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮IP50％hpbcd101003β-乙炔基-3α-羥基-19-去甲-5β-孕烷-20-酮IP50％hpbcd1087.53β-(1-己炔基)-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮IP50％hpbcd1037.53β-乙烯基-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮IP50％hpbcd1087.53α-羥基-3β-乙炔基-5α-孕烷-20-酮IP50％hpbcd1087.53α-羥基-3β-甲基-5α-孕烷-20-酮IP50％hpbcd10100雙(3α，21-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕烷-20-酮)21-半琥珀酸酯IP50％hpbcd1037.53α，21-二羥基-5α-孕烷-20-酮21-酯酸酯IP50％hpbcd10503α，21-二羥基-5α-孕烷-20-酮(5α-THDOC)IP50％hpbcd1087.53α-羥基-3β-三氟甲基-19-去甲-5β-孕烷-20-酮IP50％hpbcd101003β-乙炔基-3α-羥基-5β-孕-11-烯-20-酮IP50％hpbcd10753α-羥基-3β-(3′-甲基-丁-3′-烯-1′-炔基)-5α-孕烷-20-酮IP50％hpbcd1087.53α-羥基-3β-甲基-5α-19-去甲-孕烷20-酮IP微粉化溶液1037.53α，20α(s)-二羥基-5α-孕烷IP微粉化溶液10303β-乙烯基-3α-羥基-5α-孕烷-20-酮IP50％hpbcd101003α，21-二羥基-5β-孕烷-20-酮21-醋酸酯IP50％hpbcd10253α，20α-二羥基-3β-甲基-5α-孕烷IP微粉化溶液100603α，21-二羥基-3β-乙炔基-5β-孕烷-20-酮21-半琥珀酸酯IP水1050雙(3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮)21-半琥珀酸酯IP50％hpbcd1025</table></tables></tables>神經(jīng)活性類固醇保護動物免受其它化學(xué)驚厥藥傷害的能力可進一步用3α-羥基-5α-孕烷-20-酮，3α，21-二羥基-5α-孕燒-20-酮和3α-羥基-3β-甲基-5β-孕烷-20-酮來證明。抗驚厥測試類似于前面所描述的方法。下述化學(xué)驚厥藥是戊四氮(85mg/kg)；(+比枯枯靈堿(2.7mg/kg)；印防己毒素(3.15mg/kg)；馬錢子堿(1.25mg/kg)；或賦形劑(0.9％鹽水)。小鼠注射了驚厥藥或賦形劑后，立即觀察30-45分鐘，記錄出現(xiàn)強直和/或陣攣性驚厥的小鼠的數(shù)量。在最大電刺激試驗中，通過角膜電極傳遞60Hz，50mA電流200毫秒以產(chǎn)生強直抽搐?；衔锵龔娭背煞值哪芰Χx為終點。注射了化合物后，通過旋轉(zhuǎn)棒實驗測試10分鐘，以檢定普遍中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制潛力，在三次試驗中的一次里，記錄小鼠停留在旋轉(zhuǎn)的(6rpm)棒上達(dá)1分鐘的小鼠的數(shù)量。測定每次篩選時的ED50(產(chǎn)生半數(shù)最大效應(yīng)時的劑量)，結(jié)果見下文中的表3。該結(jié)果顯示與其它的臨床上有用的抗驚厥藥相比，神經(jīng)活性類固醇是高效能的，類似于BZ氯硝西泮的效力。這些觀察結(jié)果證明，這些化合物作為腦應(yīng)激性的調(diào)節(jié)劑是有治療作用的，這和它們在體外實驗中對GR復(fù)合物的高度親和力有關(guān)。表3、某些神經(jīng)活性類固醇和已知的抗驚厥藥對小鼠的抗驚厥活性抗焦慮作用下述實驗證明在人焦慮的四種動物模型中，檢測抗焦慮化合物對行為的影響時，黃體酮代謝物，3α-OH-5α-孕烷-20-酮和3α-OH-5β-孕烷-20-酮是有效的抗焦慮劑。不用說這些化合物可通過舉例列表來闡述本發(fā)明。有關(guān)它們的合成衍生物在這些實驗中的數(shù)據(jù)也列于表4-6中。用于檢測抗焦慮化合物對行為的影響的四種動物模型是1)光亮/黑暗轉(zhuǎn)移試驗，2)抬高的附加迷宮試驗(elevatedplus-maze)，3)Geller-Seifter抵觸試驗(conflicttest)；4)Vogel試驗。a)光亮/黑暗轉(zhuǎn)移試驗嚙齒動物對新環(huán)境有一種天生的探索傾向，但是它厭惡開放的，明亮的場所，且這會抑制它的這種探索行為(ChristmasandMaxwell，神經(jīng)藥理學(xué)917-29，1970；File，J.Neurosci，Meth2219-238，1980)，在此基礎(chǔ)上進行觀察即光亮/黑暗轉(zhuǎn)移試驗(Grawley和Goodwin，Pharmacol.Biochem.Behav.1367-70，1980)。已證實的各神臨床抗焦慮藥包括地西泮，氯硝西泮和苯巴比妥，它們能增加小鼠在亮盒和暗盒間的轉(zhuǎn)移次數(shù)，而非抗焦慮藥則不產(chǎn)生這種行為影響(Crawley等人，神經(jīng)藥理學(xué)23531-537(1984))。將重量為15-20g的雄性N.I.H.Swiss-Webster小鼠(Hor-lan，Harlan，Indianapolis，IN)放置在鋪有木屑的聚乙烯盒中，每盒放4只。這些小鼠所處房間的環(huán)境控制為(22℃)12小時光亮/黑暗循環(huán)(0600-1800小時)。除了測試期間外，它們可隨意得到食物和水。試驗在0700-1500小時間進行。每組小鼠以受天數(shù)影響均衡分開。小鼠僅給予藥物或賦形劑一次。所用方法是對以前方法的改進(Wieland等人，大腦研究565263-268(1991))。所用裝置包括兩個帶有自動化控制的兩個分隔間的測試箱(型號RXYZCM16，OmnitechElectronics，Columbus，OH)。開放間和封閉間以一個7.5×7.5cm通道相連。開放間用一個200W白熾燈泡照亮。進行實驗的房間保持黑暗。每個箱中紅外線的阻斷用連到計算機上的Digiscan分析器(OmnitechElectronics)自動記錄，數(shù)據(jù)用實驗室動物綜合監(jiān)測系統(tǒng)(OmnitechElectronics)進行分析。N.I.H.Swiss-Webster小鼠腹腔注射(IP)賦形劑或測試藥物，10分鐘后將它們置于明亮間的中心。測量它們在10分鐘期間內(nèi)，在亮箱和暗箱間的轉(zhuǎn)移次數(shù)，在亮箱中的總活性和呆在亮箱中的時間。在明亮/黑暗轉(zhuǎn)移試驗中，給予3α-OH-5α-孕烷-20-酮和3α-OH-5β-孕烷-20-酮的小鼠產(chǎn)生了與暗盒-亮盒間轉(zhuǎn)移次數(shù)有關(guān)的顯著的劑量應(yīng)答曲線。之后進行的對比顯示在劑量測試中，與對照相比，3α-OH-5α-孕烷-20-酮和3α-OH-5β-孕烷-20-酮的劑量對轉(zhuǎn)移的次數(shù)有顯著提高(Dunnett’st-test)。此外，3α-OH-5α-孕烷-20-酮和3α-OH-5β-孕烷-20-酮與對照組相比，以10和20mg/kg，使活性顯著提高(P＜0.01)。這兩種化合物在任何劑量測試中都沒有顯著差別。b)抬高的附加迷宮試驗(ElevatedPlus-Maze)抬高的附加迷宮試驗的理論基礎(chǔ)與光亮/黑暗轉(zhuǎn)移試驗類似。如PellOW等人，J.Neurosci.Meth.14149-167(1985)中所述，抬高的附加迷宮試驗是利用小鼠對開放空間的天生厭惡來設(shè)計的。試驗裝置包括兩個開放支路和兩個封閉支路。抬高的迷宮試驗可用于焦慮的兩種測量小鼠進入開放支路的次數(shù)和花費在開放支路上的時間，二者表示為進入開放支路和封閉支路的總次數(shù)以及花費在開放支路和封閉支路上的總時間的百分?jǐn)?shù)。將重15-20g的雄性N.I.H.Swiss-Webster小鼠(Harlan，Indiaapolis，IN)置于鋪有木屑的聚乙烯盒中，每盒裝4只。小鼠所處房間的環(huán)境控制(22℃)為12小時光亮/黑暗循環(huán)(0600-1800小時)。除測試期間外，可隨意獲得食物和水。試驗在0700-1500小時間進行，每組小鼠以受天數(shù)影響均衡分開。小鼠僅給一次藥物或賦形劑。所用的方法是以前公開的(Lister，精神藥理學(xué)，92180-185(1987))。測試裝置包括垂直于兩個封閉支路的兩個開放支路，它們與底面高出50cm。每個支路長50cm，封閉支路的圍墻高40cm。該迷宮完全由黑色膠質(zhì)玻璃做成。每個開放支路上方有200W白熾燈泡，以使開放支路和封閉支路之間產(chǎn)生強烈對比。注射完10分鐘后，將N.I.H.Swiss-Webster小鼠放在面對開放支路的附加迷宮的中央。在5分鐘測試期間里，測量小鼠進入開放支路和封閉支路的次數(shù)，以及花費在開放支路和封閉支路上的時間。測量時要求小鼠的四個腳爪都在支路里。因此，小鼠呆在迷宮中央的時間不計數(shù)，則它花費在開放支路和封閉支路上的總時間可能不等于5分鐘。在抬高的附加迷宮試驗中，3α-OH-5α-孕烷-20-酮和3α-OH-5β-孕烷-20-酮證明進入開放空間的比例升高與劑量有關(guān)。3α-OH-5α-孕烷-20-酮使進入化例顯著升高的劑量為20mg/kg，(P≤0.05)；而3α-OH-5β-孕烷-20-酮使進入比例顯著升高的劑量為5mg/kg(P≤0.05)，7.5mg/kg(P≤0.01)，和10mg/kg(P≤0.01)。此外，就花在開放支路上的時間來說，3α-OH-5α-孕烷-20-酮和3α-OH-5β-孕烷-20-酮產(chǎn)生了劑量依賴型增加。3α-OH-5α-孕烷-20-酮使花在開放支路的時間顯著增加的劑量為10mg/kg(P≤0.01)，而3α-OH-5β-孕烷-20-酮使花在開放支路上的時間顯著增加的劑量為7.5mg/kg(P≤0.01)和10mg/kg(P≤0.01)。這些實驗的結(jié)果公布在1993年3月4日公開的PCT申請公開WO93/03732中，它們完全結(jié)合在此作為參考。表4列出了在上述相同條件下，用抬高的附加迷宮實驗測得的，用于本發(fā)明且作為本發(fā)明一部分的化合物的抗焦慮活性的概況。表4小鼠附加迷宮試驗中的抗焦慮活性</tables>3α，20二羥基-3β-乙炔基-5β-孕烷IP二甲基亞砜101783α，21-二羥基-3α-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮，21-半琥珀酸酯，鈉鹽IP水20172.8</table></tables>C)Geller-Seifter抵觸試驗這種人焦慮的動物模型是利用處于抵觸狀態(tài)的小鼠來測定藥物的抗焦慮性能。使小鼠在兩種行為進程條件下，處于棒壓迫使強制加強的狀態(tài)(Geller和Seifter，精神藥理學(xué)1482-492(1960))。第一部分包括在沒有傷害的不同比率進程的條件下用棒壓迫。第二部分是固定的比例進程，每次棒壓迫導(dǎo)致強制增強和傷害。傷害部分使動物處于抵觸狀態(tài)。不傷害部分用來觀測藥物可能擁有的任何響應(yīng)鎮(zhèn)靜作用，抗驚厥應(yīng)答將提高傷害應(yīng)答而不影響不傷害應(yīng)答。將重250-300g的雄性白化體Sprague-Dawley鼠(CharlesRiverLabs，Wilmlnglon，MA)用于抵觸試驗并使它們保持有限地進食PurinaLabChow食物丸，任何時候都可得到水，并維持體重是它們的自由喂養(yǎng)的年輕成體水平的85％。在0700-1900小時間，將鼠單獨放在用光照保持12小時明亮-黑暗循環(huán)的房間里。3α-OH-5α-孕烷-20-酮和3α-OH-5β-孕烷-20-酮的搞焦慮(傷害減輕)作用和響應(yīng)鎮(zhèn)靜(responsedepressant)作用用鼠的Geller和Seifter抵觸試驗(1960)來測量。在這個63分鐘試驗中，饑餓的鼠完成一個基本壓迫應(yīng)答(lever-pressresponse)就可得到加糖牛奶作為獎勵。增強進程由傷害和不傷害部分組成，近似每15分鐘變換一次。用于訓(xùn)練鼠的測試容器(Coulbourn結(jié)構(gòu))，其一面墻上裝有一個手柄，一個輸送0.1-ml牛奶獎勵品(1份濃縮Eagle奶2份水)的長柄杓，和金屬格柵底面，通過它可施加足電擊傷害。用一臺運行SKED(StateSystems)的DECPLP11/73微型計算機來進行程序控制和記錄。鼠從最初學(xué)會響應(yīng)持續(xù)增強進程迅速發(fā)展到30秒，1分鐘和2分鐘不同時間間隔(VI)進程。在持續(xù)增強進程中，鼠每完成基本壓迫應(yīng)答，即給予牛奶獎勵。在VI進程中，很少得到牛奶獎勵并采用不同時間間隔，最終達(dá)到平均每2分鐘一次。然后在傷害VI基線上引入4個3分鐘“抵觸”期，VI完成3分鐘后開始第一個，其余2個在VI應(yīng)答的12分鐘期之間變換。在處于抵觸期時，通過光和樂音的存在來發(fā)射信號，再次強制進行持續(xù)增強進程，且每次基本壓迫完成導(dǎo)致牛奶獎勵和短暫的(0.25msec)足電擊傷害。最初電壓強度為0.2mA，每天遞增0.02mA，以逐漸迫使每個抵觸期期間的基本壓迫應(yīng)答達(dá)到5次應(yīng)答或更少。這種訓(xùn)練進行4-6周，之后觀察抵觸期期間穩(wěn)定的低速率應(yīng)答和未傷害期期間的穩(wěn)定的高速度。藥物導(dǎo)致的傷害應(yīng)答速率的提高作為抗焦慮活性的指數(shù)，而未傷害應(yīng)答速度的下降作為應(yīng)答抑制或鎮(zhèn)靜的指數(shù)。本文對在該抵觸試驗中，3α-OH-5α-孕烷-20-酮和3α-OH-5β-孕烷-20-酮的作用進行了總結(jié)。這兩種化合物導(dǎo)致傷害應(yīng)答速率大幅度提高，提示這二者可能是有效的抗焦慮劑。3α-OH-5β-孕烷-20-酮的最大作用是在2mg/kg時觀察到的，而3α-OH-5α-孕烷-20-酮是在4.4mg/kg，給藥方式為皮下注射。(為了進行統(tǒng)計學(xué)分折，且由于每個劑量下進行的試驗次很少，因此將每個化合物的所有試驗結(jié)合在一起與賦形劑對照試驗進行對比，利用t-test進行相關(guān)測定對于3α-OH-5α-孕烷-20-酮，P＜0.02；對于3α-OH-5β-孕烷-20-酮，P＜0.008)。表5是在上述試驗條件下，用Geller-Seifter試驗測定的，用于本發(fā)明且構(gòu)成本發(fā)明一部分的化合物的抗焦慮活性的總結(jié)。表5鼠Geller/Seifter試驗中的抗焦慮活性d)Vogel試驗Vogel試驗是以高度刺激行為和厭惡之間的抵觸的發(fā)展為基礎(chǔ)的。對于這個試驗，希望的是強刺激，動物禁水12-16小時以對飲料產(chǎn)生刺激。在訓(xùn)練期內(nèi)，動物暴露于測試環(huán)境中以使它們習(xí)慣于飲料噴出并使對新環(huán)境的恐懼減至最小。訓(xùn)練完成后，讓動物接觸水2小時。在這段時間內(nèi)，動物將飲用并吃掉它們平常飲用的水量的食物量，以對禁水期進行補償。不過，這一進程仍會在測試期內(nèi)產(chǎn)生對飲料的強刺激。動物禁水12-16小時后，將它放在測試盒中，并允許它自由地飲水5分鐘。這個階段是用來使動物習(xí)慣環(huán)境和飲料噴出的。訓(xùn)練期過后，動物已在它們所處的盒內(nèi)接觸水和食物達(dá)2小時，食物隨時可得到、24小時后，動物以intra-cerebroventricularly方式給藥。從動物經(jīng)注射后起，指示延綬開始后，再次將它放置在測試盒中10分鐘。計算機記下每次動物克服的時間，并在每個第20次克服后通過后和/或足施加輕微電刺激。電刺激包括在100msec內(nèi)通0.6mA電流。這種方法使動物處于抵觸狀態(tài)，這可通過給予臨床用的抗焦慮制(即安定)而產(chǎn)生。對于劑量應(yīng)答曲線，各組動物注射的測試藥物的劑量逐漸升高，并以預(yù)定時間進行測試。利用這些實驗測定的某些有代表性的化合物的數(shù)據(jù)總結(jié)于表6中。表6鼠Vogel試驗中藥物的抗焦慮活性藥物前體用上述相同的方法，測定基礎(chǔ)化合物3α-羥基-5α-孕烷-20-酮和3α，21-二羥基-5α-孕烷-20-酮以及它們的的衍生物的藥物前體的抗驚厥和抗焦慮活性。3α-羥基-5α-孕烷-20-酮的幾種藥物前體在給藥后，將它們對抗戊四氮引起的抽搐的保護百分?jǐn)?shù)對時間繪圖(表7)。同時也對其他幾種藥物前體進行了測試，結(jié)果列于表8中?；A(chǔ)化合物3α-羥基-5α-孕烷-20-酮和3α，21一二羥基-5α-孕烷-20-酮在3α和21-羥基上形成各種酯的變化保持了它們的生理活性，在某些情況下，這種變化增加了化合物產(chǎn)生保護的時間。因此，可對本發(fā)明化合物進行改進變化，以提供能在一段時間內(nèi)起不同程度保護的抗驚厥和抗焦慮活性。表7.3α-羥基-5α-孕烷-20-酮的藥物前體酯(3α-(RCOO)-5α-孕烷-20-酮)的抗戊四氮活性與苯并二氮卓類相比，神經(jīng)活性類固酮也可引起麻醉。它們引起麻醉的能力被認(rèn)為是由它們在沒有GABA的情況下開放氯離子通道的能力產(chǎn)生的，而苯并二氮卓類不具有這種性能。因此，神經(jīng)類固醇可在沒有GABA的情況下直接作用于受體，也可在GABA存在的情況下“間接”作用于受體。這種“間接”作用叫做“調(diào)節(jié)”受體。Lam-bert等人，藥物科學(xué)發(fā)展趨勢8224-227(1987)。用于本發(fā)明且構(gòu)成本發(fā)明一部分的化合物也可以高劑量用于麻醉適應(yīng)癥。不過，引起麻醉的優(yōu)選的給藥途徑是靜脈給藥(iv)。對于動物，藥物的麻醉性能是通過藥物導(dǎo)致右反射喪失的能力來測定的。右反射喪失定義為當(dāng)動物腳向上反放對，它不能在30秒內(nèi)自己向右轉(zhuǎn)。藥物以小鼠側(cè)面尾靜脈注射給藥。給藥后，將小鼠反放，觀察其右反射喪失。結(jié)列于表8中。表8小鼠體內(nèi)神經(jīng)活性類固醇的麻醉活性</tables>雖然闡述并舉例說明了本發(fā)明優(yōu)選的實施方案，但在不背離本發(fā)明保護范圍的情況下可對它們進行各種替代和調(diào)整。因此可以理解，本發(fā)明通過實例進行了闡述，但并不局限于這些實例。權(quán)利要求1.一種由下列基團組成的化合物，選自3α-羥基-3β-(3′-甲基-丁-3′-烯-1′-炔基)-5β-孕烷-20-酮；3α-羥基-3β-(3′-甲基-丁-3′-烯-1′-炔基)-5α-孕烷-20-酮；3α-羥基-3β-三氟甲基-5α-孕烷-20-酮；3α-羥基-3β-三氟甲基-5β-孕-11-烯-20-酮；3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-19-去甲-5β-孕烷-20-酮；3β-(環(huán)丙基)乙炔基-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮；3α，20α-二羥基-3β-乙炔基-5α-孕烷；3α，21-二羥基-3β-乙烯基-5α-孕烷-20-酮；和3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5α-孕烷-20-酮；或它們的生理上可接受的3-酯，20-酯，21-酯，3，20-二酯，或3，21-二酯。2.-種由下列基團組成的化合物，選自3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-19-去甲-5β-孕烷-20-酮，21-半琥珀酸酯，鈉鹽；3α，20α-二羥基-21-甲基-5α-孕烷，雙半琥珀酸酯；3α，21-二羥基-3β-乙烯基-5α-孕烷-20-酮，21-半琥珀酸酯；3α，21-二羥基-3β-甲基-5α-孕烷-20-酮，21-醋酸酯；3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮，21-半富馬酸鈉鹽；3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮，21-琥珀酸甲酯；3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮，21-丙酸酯；雙(3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮)21-半琥珀酸酯；雙(3α，21-二羥基-3β-乙炔基-5β孕烷-20-酮)21-半琥珀酸酯；和N-(3α-羥基-3β-甲基-5α-孕烷-20-烷)乙醇胺。3.權(quán)利要求1的化合物，即3α-羥基-3β-(3′-甲基-丁-3′-烯-1′-炔基)-5β-孕烷-20-酮。4.權(quán)利要求1的化合物，即3α-羥基-3β-三氟甲基-5β-孕烷-20-酮。5.權(quán)利要求1的化合物，即3α-羥基-3β-三氟甲基-5β-孕-11-烯-20-酮。6.權(quán)利要求1的化合物，即3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-19-去甲-5β-孕烷-20-酮，21-半琥珀酸酯，鈉鹽。7.權(quán)利要求1的化合物，即3α，21-二羥基-3β-三氟甲基-19-去甲-5β-孕烷-20-酮。8.權(quán)利要求1的化合物，即3β-(環(huán)丙基)乙炔基-3α-羥基-5β-孕烷-20-酮。9.一種藥物組合物，包括有效量的權(quán)利要求1-8的任一種化合物和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。10.一種治療動物不安或焦慮的方法，包括給予所述動物有效量的權(quán)利要求1-9的任一種化合物。11.一種減輕動物癲癇發(fā)作的方法，包括給所述動物施予有效量的權(quán)利要求1-8的任一種化合物。12.一種降低或減輕動物失眠的方法，包括給予所述動物有效量的權(quán)利要求1-8的任一種化合物。13.一種治療動物情緒失常的方法，包括給予所述動物有效量的權(quán)利要求1-8的任一種化合物。14.權(quán)利要求13的方法，其中所述情緒失常為抑郁。15.一種治療動物PMS或PND的方法，包括給予所述動物有效量的權(quán)利要求1-8的任一種化合物。16.一種使動物產(chǎn)生麻醉的方法，包括給予所述動物有效量的權(quán)利要求1-8的任一種化合物。全文摘要調(diào)節(jié)GABA文檔編號A61P25/12GK1171114SQ95197071公開日1998年1月21日申請日期1995年11月22日優(yōu)先權(quán)日1994年11月23日發(fā)明者N·C·蘭,K·W·吉易,M·B·伯吉爾,H·塔海爾,R·珀迪,R·B·厄普薩尼申請人:科斯賽斯公司