專利名稱：：膠原蛋白口服制劑及制備方法
技術領域：
：本發(fā)明屬生化藥品。具體涉及一種膠原蛋白口服制劑及制備方法。類風濕關節(jié)炎是以慢性多關節(jié)炎為主的一種全身性自身免疫性疾病?，F有的治療用藥大致分為兩類一類是非特異對癥治療藥，例如阿司匹林、腎上腺皮質激素及非甾體抗炎藥等，但這類藥的副作用主要引起胃炎，甚至胃出血，對有心力衰竭、肝、腎病者慎用；另一類是改善病情的抗風顯藥，例如硫代苯果酸金鈉、青霉胺、雷公藤、氯喹等，但這類制劑除有胃腸反應外，還伴有蛋白尿及降白細胞或血小板減少等癥狀。類風濕關節(jié)炎的病因迄今不明，患者關節(jié)紅腫、疼痛并發(fā)生變形，要病理特征是膠原纖維降解和關節(jié)軟骨壞死。METHOTREXATE(氨甲蝶呤)、CYCLOSPORINA(環(huán)孢菌素A)和AZATHIOPRINE(硫唑螵呤)已被用于治療風濕性關節(jié)炎和再發(fā)性多發(fā)性軟骨炎。但它們是非特異性的免疫抑制藥物，具有細胞毒性，長期服用會降低患者的免疫功能。近些年來，人們致力于運用中國傳統醫(yī)學“以臟治臟”的原理，將動物軟骨應用于治療風濕性關節(jié)炎和再發(fā)性多發(fā)性軟骨炎。但因只采用簡單的煎制方法不能有效地提取軟骨中的主要有效成分，從而影響了療效。軟胃蛋白的主要成分是膠原，膠原蛋白中含有由三條蛋白鏈構成三股螺旋結構。軟骨中的膠原蛋白是主要是II型膠原蛋白及少量IX、XI型膠原蛋白。II型膠原蛋白由三條相同的蛋白鏈組成，而Ⅸ型和XI型膠原蛋白由三條不同的蛋白鏈組成，這三種膠原蛋白一起構成軟骨膠原纖維。膠原纖維除了能維持軟骨的機械強度外，還通過其RGD氨基酸序列和細胞表面的細胞外基質受體結合，所傳遞的信號保證了軟骨細胞的生存、生長和分化。在軟骨中，膠原纖維被透明質酸和硫酸軟骨素所包埋，因此軟骨膠原的可溶性極低。本發(fā)明的目的在于克服上述不足之處，研制一種可溶性的軟骨膠原制劑。本發(fā)明人利用蛋白酶消化使軟骨膠原維轉變?yōu)榭扇苄缘哪z原分子，并將酶化軟骨應用于對風濕性關節(jié)炎及再發(fā)性多發(fā)性軟骨炎的治療。本發(fā)明提供子一種膠原蛋白口服制劑。該制劑是以II型膠原蛋白作為主要活性成分與藥用輔料組成的，它們可以按含作為活性粉的II型膠原蛋白為0.0001％-99.9999％及含藥用輔料為99.9999％-0.0001％的任意配比構成100％的組成。本發(fā)明的另一目的是提供了一種上述II型膠原蛋白口服制劑的制備方法。該方法是取動物軟骨，加入5-10倍量的生理鹽水勻漿，離心收集沉沉，用無水乙醇洗滌，離心。收集沉淀，將沉淀溶于0.01-0.8mol/L的醋酸鈉(PH＜6)的溶液中，重量體積比為1∶10-60，低溫(0-10℃)放置過夜，加入濃度為0.01-4毫克/毫升的胃蛋白酶或濃度為0.01-50毫克/毫升的胰蛋白酶，低溫(0-10℃)放置過夜，離心，取上清液，加入氯化鈉0.5-4mol/L，放置過夜，離心，收集沉淀，溶于20-50倍量PH＜5的醋酸溶液(或加1-5％增量劑)，凍干后即制成II型膠原蛋白原料，然后按常規(guī)方法將該原與藥用輔料配制成口服片劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、水劑、凍干劑等藥物制劑。本發(fā)明應用的藥用輔料為常規(guī)的粘合劑如淀粉、羥丙基淀粉、改良淀粉、預膠化淀粉、糊精、糖粉、微晶纖維素、明膠漿、PVP膠漿；崩解劑為羧甲基淀粉鈉、淀粉、微晶纖維素；潤滑劑為改良淀粉、微晶纖維素、微粉硅膠、氫氧化鋁；增量劑為淀粉及其衍生物、纖維素及衍生物、無機化合物、有機鹽類以及己糖酸類或戊糖醇。本發(fā)明的II型膠原蛋白口服制劑用于臨床的劑量為每日服用含II型膠原蛋白2-1000μg。采用本發(fā)明的方法，50-90％的軟骨可以被溶解，軟骨膠原蛋白的回收率可達60-80％。本發(fā)明方法中提取的II型膠原蛋白經理化方法鑒定結果見表1，顯示了膠原蛋白在酶化軟骨中保持了它們的三股螺旋結構的完整性。表1、酶化軟骨中的II型膠原蛋白的解旋溫度(Tm)賴氨酸和脯氨酸的羥基化以及羥基賴氨酸的糖化</tables>本發(fā)明的II型膠原蛋白制劑治療類風濕關節(jié)炎典型病例如下1、蘇××，男，54歲，患“類風濕關節(jié)炎”3年余。就診時主訴全身數個關節(jié)中度程度疼痛，夜間休息時有輕度疼痛，晨僵時間30min，查左手握力為200mmHg，右手握力為140mmHg，關節(jié)功能II級，肘關節(jié)、腕關節(jié)、指間關節(jié)、膝關節(jié)等多個關節(jié)有輕度或中度壓痛或腫脹，血沉29mm/h，C-反應蛋白20μg/ml。予II期膠原蛋白100mg口服4周后，自覺疼痛減輕，晨僵5min，左手握力200mmHg，右手握力140mmhg，關節(jié)腫脹全都消失，關節(jié)壓痛減輕。血沉25mm/h，C-反應蛋白10μg/ml。綜合評價改善百分率為44.36％，療效評定為“有效”。試驗過程中無不良反應發(fā)生。2、李××，女，54歲，患“類風濕關節(jié)炎”12年。就診時主訴全身多個關節(jié)疼痛，晨僵時間15min，關節(jié)活動受限，查左手握力55mmHg，右手握力70mmHg，肩、肘、腕、指間、踝等多個關節(jié)有輕度壓痛或腫脹，血沉43mm/h，類風濕因子1∶80。予II型膠原蛋白100μg口服治療4周后，晨僵消失，自覺疼痛明顯減輕，左手握力100mmHg，右手握力110mmHg，關節(jié)中脹消失，關節(jié)壓痛數明顯減少，但血沉、類風濕因子無明顯改變。綜合評價改善百分率為63.71％，療效評定為“有效”。試驗過程中無不良反應發(fā)生。3、許××，女，47歲，患“類風濕關節(jié)炎”7年余。就診時主訴休息時中度程度的疼痛，晨僵時間2400min，自覺全身多個關節(jié)疼痛體檢左手握力105mmHg，右手握力100mmHg，關節(jié)活動明顯受限，肩、肘、腕、指間、膝、趾間等多個關節(jié)有輕度或中度的壓痛或腫脹，血沉18mm/h，類風濕因子(一)。予II型膠原蛋白100μg口服治療4周后，休息疼痛減為輕度，晨僵30min，左手握力145mmHg，右手握力150mmHg，關節(jié)腫脹消失，關節(jié)痛數明顯減少，壓痛程度減輕。綜合評價改善百分率為63.10％，療效評定為“有效”。試驗過程中無不良反應發(fā)生。4、王××，女，42歲，患“類風濕關節(jié)炎”二年。就診時主訴自覺關節(jié)疼痛，晨僵時間300min，左手握力35mmHg，右手握力30mmHg，關節(jié)活動明顯受限，肩、肘、腕、掌指、指間、膝、跖趾等多個關節(jié)有輕度或中度壓痛或腫脹，血沉58mm/h，類風濕因子1∶80。予II型膠原蛋白20μg口服治療4周后，癥狀明顯減輕，左手握力50mmHg，右手握力130mmHg，關節(jié)活動好轉，關節(jié)腫脹和壓痛明顯減輕，血沉40mm/h。綜合評價改善百分率為70.60％，療效評定為“有效”。試驗過程中無不良反應發(fā)生。上述結果表明本發(fā)明的II型膠原蛋白制劑可用于防治風濕性關節(jié)炎和再發(fā)性多發(fā)性軟骨炎，沒有不良反應。實例1、制備II型膠原蛋白原料取100g軟骨加生理鹽水500ml勻漿，離心收集沉淀，用無水乙醇洗滌，離心收集沉淀，溶于0.05m的NaACPH3的緩沖液中(2000ml)過夜，加胃蛋白酶0.02mg/ml，過夜，離心，收集上清液加Nacl達0.8摩爾濃度，次日離心，收集沉淀，溶于0.5％醋酸中冷凍干燥或加4％甘露醇冷凍干燥即為原料。實例2、制備II型膠原蛋白片劑4％II型膠原蛋白原料25g，淀粉1000g，糖粉500g，硬脂酸鎂200g，淀粉漿(17％)適量。將上述各種原料粉碎混勻，加適量淀粉漿制粒，在100-105℃干燥4小時，取出用100mg的沖模壓制成片，即可。實例3、制備II型膠原蛋白片劑1％粉末狀II型膠原蛋白原料50g，可溶性淀粉900g，滑石粉50g，混勻制成膠囊500粒。實例4、制備II型膠原蛋白散劑或顆粒劑取凍干II型膠原蛋白原料按一定量加入各種藥用輔料，最終使每一劑量實際膠原含量為10-500mg，無菌分裝包裝即可。實例5、制備II型膠原蛋白膠囊劑將散劑干粉制?；蛏┲屑尤胍欢康乃幱幂o料(如滑石粉、硬脂酸鎂等)灌裝膠囊，使每一劑量內含膠原蛋白為10-500μg。實例6、制備II型膠原蛋白溶液劑取凍干II型膠原蛋白原料溶于稀醋酸中(0-1％)分裝包裝瓶中使每一劑量膠原含量為(20-500μg)冷凍保存，服用時用水或果汁沖稀，按臨床用量口服。實例7、制備II型膠原凍干粉劑取II型膠原原原料加水和12％藥用輔料增量劑分裝冷凍干燥，使每一劑量膠原含量為10-500μg。權利要求1.一種II型膠原蛋白制劑，其特征在于該制劑是以II型膠原蛋白作為活性成分與藥用輔料組成的，它們可以按含作為活性成分的II型膠原蛋白為0.0001％-99.9999％及含藥用輔料為99.9999％-0.0001％的任意配比構成100％的組成。2.一種如權利要求1所述的II型膠原蛋白口服制劑的制備方法，其特征在于該方法是取動物軟骨，加入5-10倍量的生理鹽水勻漿，離心收集沉沉，用無水乙醇洗滌，離心。收集、沉淀，將沉淀溶于0.01-0.8mol/L的醋酸鈉PH＜4的溶液中，重量體積比為1∶60，低溫(0-10℃)放置過夜，加入濃度為0.01-4毫克/毫升的胃蛋白酶或濃度為0.01-50毫克/毫升的胰蛋白酶，低溫(0-10℃)放置過夜，離心，取上清液，加入氯化鈉0.5-4摩爾，放置過夜，離心，收集沉淀，溶于20-50倍量PH＜5的醋酸溶液或1-5％增量劑，凍干后即制成II型膠原原料，然后按常規(guī)方法將該原料與藥用輔料配制成口服片劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、水劑、凍干劑等各種制劑。3.根據權利要求1或2所述的II型膠原蛋白口服制劑，其特征在于其中所述的藥用輔料為常規(guī)的粘合劑如淀粉、羥丙基淀粉、改良淀粉、預膠化淀粉、糊精、糖粉、微晶纖維素、明膠漿、PVP膠漿；崩解劑為羧甲基淀粉鈉、淀粉、微晶纖維素；潤滑劑為改良淀粉、微晶纖維素、微粉硅膠、氫氧化鋁；增量劑為淀粉及其衍生物、纖維素及衍生物、無機化合物、有機鹽類以及己糖酸類或戊糖醇。全文摘要本發(fā)明涉及一種生化藥物制劑。本發(fā)明公開了11型膠原蛋白口服制劑及其制備方法。本發(fā)明采用動物軟骨,在低濃度醋酸中溶脹,然后用酶進行消化,并通過鹽析的方法分離純化制得Ⅱ型膠原蛋白,再與藥用輔料一起配制成各種口服制劑。本發(fā)明的制劑可用于治療類風濕關節(jié)炎骨關節(jié)炎和多發(fā)性再發(fā)性軟骨炎。文檔編號A61P19/00GK1185338SQ96116620公開日1998年6月24日申請日期1996年12月18日優(yōu)先權日1996年12月18日發(fā)明者張麗莉,王安民,李伯濤申請人:齊魯制藥廠