專利名稱：一種用于深部腫瘤局部治療的藥物組合物及其在制藥中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及治療腫瘤的藥物，特別是用于惡性腫瘤的局部治療的藥物。
腫瘤發(fā)病率越來越高，其中絕大多數為實體性腫瘤，目前對實體性腫瘤的治療是以手術為主，但手術切除率不高，如肝癌的手術切除率不足20％[湯釗猷 揚秉輝主編《原發(fā)性肝癌的研究與進展》，上海醫(yī)科大學出版社，19901＿9]。對于大量不能手術的深部腫瘤病人，主要是采用化療和放療，但毒副作用嚴重，且很多實體性腫瘤對化療和放療不敏感，療效很低。發(fā)展新的方法使藥物在腫瘤局部濃集或直接在腫瘤局部用藥是提高療效，降低毒副作用的根本途經。目前這方面的技術包括有(1)動脈給藥化療和栓塞；(2)單抗載藥導向治療；(3)脂質體載藥。盡管這些方法的使用有一些報道，有一定的療效，但要達到使腫瘤完全壞死消退并降低復發(fā)率還十分困難。為此，發(fā)展新的更為有效的藥物，是提高醫(yī)治腫瘤療效的重要途經。
本發(fā)明的目的是提供一種用于深部腫瘤治療的藥物組合物，它能直接引起腫瘤組織大塊壞死，迅速而有效地減輕腫瘤負荷，具有能有效消除腫瘤組織并不具毒副作用等特點。
本發(fā)明的實施方案是這種用于深部腫瘤治療的藥物組合物由二硝基氯苯(DNCB)和丙酮組成。
丙酮可以通過細胞脫水，蛋白凝固，血管閉塞等作用直接引起腫瘤壞死，減低腫瘤負荷；DNCB可以在瘤體局部產生劇烈的免疫反應，從而產生繼發(fā)的持久的抗腫瘤作用.二者相輔相成，產生強大的抗腫瘤效果。它可較廣泛地用于多種實體瘤的局部免疫治療。將DNCB和丙酮這兩種不同作用機制的物質按一定比例配制成復方制劑。DNCB作為半抗原與瘤組織中的細胞和蛋白質結合形成完全抗原(事實上改變了瘤組織的抗原性。使其與荷瘤機體的免疫系統不相容)在瘤體局部誘發(fā)劇烈的免疫反應，引起瘤細胞死亡。丙酮具有細胞脫水，蛋白質凝固和血管栓塞作用，可在瘤體局部產生迅速而直接的大塊腫瘤壞死，降低瘤荷，更有利于免疫機制發(fā)揮作用。DNCB是難溶性物質，而丙酮恰好是它的優(yōu)良溶劑。
下面是應用本發(fā)明藥物組合物對小鼠腫瘤進行的治療實驗，即本發(fā)明的具體實施例及其實驗應用。
材料與方法一.動物正常Balb/c小鼠，4—6周齡，雌性，體重18—25g，由同濟醫(yī)科大學動物中心提供。
二.腫瘤細胞株艾氏腹水癌細胞株由中國醫(yī)學科學院藥物研究所引進，同濟醫(yī)科大學藥學院腫瘤研究室傳代。
三.動物腫瘤模型制作將含有5×10個艾氏腹水癌細胞的0.2ml細胞懸液注射液于小鼠右肩岬部皮下，7天時長出可觸及的實體瘤結，成功率100％。
四.試劑為本發(fā)明的DNCB丙銅溶液，臨用時用丙酮溶解DNCB配制成濃度分別為40mg/ml、0.04mg/ml、400mg/ml的溶液。
五.治療作用觀察取50只小鼠先進行DNCB致敏。接種艾氏實體瘤7天后隨機分組，每組10只。
1.400mg/mlDNCB丙酮溶液組2.0.4mg.mlDNCB丙酮溶液組3.40mg/mlDNCB丙酮溶液組分別給予瘤體內注射相應濃度的DNCB丙銅溶液，每只0.25ml，每周2次，共4次。
4.丙酮組，給予瘤體內注射丙酮，方法同上。
5.空白對照組，不作任何處理。
每周用卡尺測量瘤體大小一次，測相互垂直的兩個直徑，記錄平均直徑。并記錄每只動物瘤體表面及質地變化和存活時間。至70天時仍存活的動物在其左肩岬部皮下再次接種5×10個艾氏腹水癌細胞，并取10只正常小鼠同樣接種作為對照，繼續(xù)觀察。所有動物均做系統剖檢，取心肺肝腎脾組織做病理檢查。
六.瘤體病理檢查取小鼠90只，先行DNCB致敏。接種腫瘤7天后隨機分為三組。<1>組瘤體內注射DNCB溶液0.25ml/只，<2>組瘤體內注射丙酮0.25ml，<3>組為空白對照。于瘤體內注射后的5小時，1天，2天，7天，14天和21天，每組各取5只小鼠處死，取瘤體標本作石蠟切片，HE染色組織學觀察。結果如下一.瘤體變化及生存情況 治療組和對照組小鼠瘤體大小的變化見表1，生存情況見表2。1組小鼠接受400mg/mlDNCB丙酮溶液瘤內注射后于3周左右全部死亡。2組小鼠接受0.4mg/mlDNCB丙酮溶液瘤內注射后，短期瘤體生長減緩，3/10的小鼠排斥了腫瘤、長期存活。7/10的小鼠腫瘤進行性生長而死亡。3組小鼠接受40mg/mlDNCB丙酮溶液瘤體內注射后，瘤體及其周圍呈現紅腫，3周左右時瘤體生長停止，并出現壞死及表面結痂，7周左右瘤體完全脫落，留下創(chuàng)面很快愈合。本組小鼠在第一，二周各有一只死亡，70天時仍有8只存活，瘤體均已完全脫落。再次接種艾氏腹水癌細胞，均無腫瘤生長，而同時對照接種的10只正常小鼠均在7天時長出可觸及的腫瘤結節(jié)。丙酮對照組在注射后短期內瘤體生長減緩，注射處出現壞死灶，但其周圍的瘤組織仍繼續(xù)生長。并于4周左右瘤體中心出現液化性壞死腔，第二周開始有動物死亡，至70天時僅存活2只荷巨大瘤結節(jié)的小鼠，再次接種腫瘤細胞，7天時長出皮下瘤結節(jié)?？瞻讓φ战M的小鼠腫瘤進行性生長，第一周開始有動物死亡，至5周左右全部小鼠死亡?？瞻讓φ战M的小鼠瘤體切片在早期顯示為生長活躍的腫瘤組織，瘤周有少量淋巴細胞。從第8天開始，由于腫瘤生長過快，血供相對不足，出現中心性壞死。此后的標本中，壞死區(qū)逐步擴大并形成液化腔，瘤體周圍部分的瘤組織則繼續(xù)生長。瘤周組織中的淋巴細胞消失。NCB溶液組在瘤體內注射后5小時的瘤體標本中即可見大片腫瘤組織壞死，瘤周組織中出現較多淋巴細胞浸潤。此后的標本中，壞死區(qū)逐漸擴大，瘤體內和瘤周浸潤的淋巴細胞密集，并見淋巴細胞和纖維細胞組成的反應帶分隔包圍腫瘤細胞團塊。丙酮對照組標本表現為與DNCB組相似的壞死，但程度較輕，壞死區(qū)周圍的組織中無明顯的淋巴細胞浸潤。瘤體中心壞死，而瘤周的腫瘤組織則繼續(xù)生長。
以上實驗結果說明，一定濃度的DNCB丙酮溶液瘤體內注射可有效地消除動物已經長大的瘤結節(jié)，并使動物產生抵抗再次接種同種腫瘤的特異免疫力，以40mg/ml左右濃度療效較好，當濃度低于0.4mg/ml時，因無法激發(fā)免疫反應，療效降低。當濃度高于400mg/ml時，因過量使毒性增加，致動物死亡。
本發(fā)明適合于對體內的實體性腫瘤作瘤內注射局部治療，動物實驗表明應用該制劑進行治療可使腫瘤生長受到抑制，使已經形成結節(jié)的腫瘤逐步消退，直至完全消失，起效迅速，療效確切。本發(fā)明還可用于生產制備用于深部腫瘤局部治療的藥物。
表1各組小鼠瘤體平均瘤徑大小(CM)的變化時間(周) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10①40％DNCB丙酮溶液組 0.65 1.08 1.51 - - - - - - -②0.04％DNCB丙酮溶液組 0.63 1.01 1.14 1.55 1.88 2.09 2.25 2.51 2.54 2.55③4％DNCB丙酮溶液組0.64 1.04 1.05 1.03 1.03 1.03 0.79 0.38 0 0④丙酮組 0.63 0.99 1.15 1.60 1.99 2.20 2.24 2.50 2.53 2.53⑤空白對照組 0.63 1.06 1.85 2.46 2.67 - - - - -t檢驗①⑤P＞0.05②⑤從第三周開始P＜0.05①④P＞0.05③⑤從第三周開始P＜0.01②④P＞0.05④⑤從第三周開始P＜0.01③④從第四周開始P＜0.0權利要求
1.一種用于深部腫瘤局部治療的藥物組合物，其特征在于它由二硝基氯苯和丙酮組成。
2.根據權利要求1所述的用于深部腫瘤局部治療的藥物組和物，其特征在于每毫升丙酮中含二硝基氯苯0.04至400毫克。
3.根據權利要求1所述的用于深部腫瘤局部治療的藥物組和物，其特征在于每毫升丙酮中含二硝基氯苯40毫克。
4.根據權利要求1所述的用于深部腫瘤局部治療的藥物組和物，其特征是該組合物在制備用于深部腫瘤局部制療藥物中的應用。
全文摘要
一種用于深部腫瘤局部治療的藥物組合物及其在制備用于深部腫瘤局部制療藥物中的應用，它由二硝基氯苯和丙酮組成。每毫升丙酮中含二硝基氯苯0.04至400毫克。本發(fā)明適合于對體內的實體性腫瘤作瘤內注射局部治療，動物實驗表明應用該制劑進行治療可使腫瘤生長受到抑制，使已經形成結節(jié)的腫瘤逐步消退，直至完全消失，起效迅速，療效確切。
文檔編號A61P35/00GK1154239SQ9611801
公開日1997年7月16日 申請日期1996年1月12日 優(yōu)先權日1996年1月12日
發(fā)明者杜廣輝, 章詠裳 申請人:同濟醫(yī)科大學