專利名稱：用淀粉樣肽激動(dòng)劑治療ii型糖尿病的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)，特別是涉及淀粉樣肽激動(dòng)劑，以及服用淀粉樣肽(Amylin)激動(dòng)劑治療II型糖尿病的方法。
背景技術(shù)：
用來說明本說明書的出版物和包括專利及專利申請(qǐng)書的其它材料，在這里引入作為參考。淀粉樣肽淀粉樣肽是一種含37個(gè)氨基酸的蛋白激素。它是作為沉積于II型糖尿病患者胰島上的淀粉狀物質(zhì)中的主要成分，被分離，純化和測(cè)定其化學(xué)特性的(Cooper等，Proc Natl Acad Sci USA 848628-8632，1987)。淀粉樣肽分子具有兩個(gè)重要的易位后限制其C端是酰胺化的，以及在2位和7位上的半胱氨酸交聯(lián)形成N端環(huán)。淀粉樣肽是英國(guó)專利申請(qǐng)序號(hào)8709871的主題，于1987年4月27日提交的，以及相應(yīng)的美國(guó)專利號(hào)5,367,052的主題，于1994年11月22日發(fā)布。
淀粉樣肽是一類包括CGRP和降鈣素相關(guān)肽家族中的成員(Rink等，Trends Pharmacol Sci 14113-118，1993)。為應(yīng)答營(yíng)養(yǎng)刺激素如葡萄糖和精氨酸，淀粉樣肽主要從胰腺β細(xì)胞合成并分泌。Moore等，Biochem Biophys Res Commun 1791-9，1991；Kanatsuka等，F(xiàn)EBSLett 259199-201，1989；Ogawa等，J Clin Invest 85973976，1990；Gedulin等，Biochem Biophys Res Commun 180782-789，1991。
對(duì)正常人，禁食時(shí)淀粉樣肽水平為從1至10pM，膳食后水平為5至20pM已有報(bào)道。(例如Hamer等，Diabetologia 3452-54，1991)；(Sanke等，Diabetologia 34129-132，1991；Koda等，The Lancet 3391179-1180，1992)。但對(duì)肥胖人和抗胰島素個(gè)體，膳食后淀粉樣肽水平可上升很高，例如可達(dá)約50pM。為比較起見，健康人禁食及膳食后胰島素水平分別為20至50pM和100至300pM，可能比抗胰島素人高3至4倍。在I型糖尿病人上，其β細(xì)胞被破壞了，淀粉樣肽水平等于或低于測(cè)定的水平，為應(yīng)答葡萄糖刺激，其水平并不上升(Koda等，The Lancet 3391179-1180，1992)。對(duì)正常大鼠和小鼠，據(jù)報(bào)道其基礎(chǔ)水平為30至100pM，而在某些抗胰島素的糖尿病嚙齒動(dòng)物系上，已測(cè)到高達(dá)600pM的值(例如Huang等，Hypertension 19I-101～I(xiàn)-109，1991；Gill等，Life Sciences 48703-710，1991)。
首先在大鼠骨骼肌上發(fā)現(xiàn)淀粉樣肽具有減少因刺激胰島素而將葡萄糖結(jié)合成糖元的作用。(Leighton等，Nature 335632-635，1988)；該肌肉具“抗胰島素”性。以后的工作用大鼠比目魚肌進(jìn)行體外和試管內(nèi)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，淀粉樣肽具有降低糖元合成酶的活性，促進(jìn)糖元磷酸化酶從非活性的b形轉(zhuǎn)變成活性的a形，促進(jìn)糖元的凈喪失(在有或無胰島素存在下)，增加葡萄糖-6-磷酸酯的水平，以及增加乳酸酯的生成(見Deems等，Biochem Biophys Res Commun 181116-120，1991；Young等，F(xiàn)EBS Letters 281149-151，1991)。
據(jù)認(rèn)為，淀粉樣肽是通過存在于血漿膜上的受體而作用的。Beaumont等，Mol Pharmacol 44493-497，1993。在1993年11月23日出版的美國(guó)專利5,264,372號(hào)中，描述了淀粉樣肽及其應(yīng)用于篩選與測(cè)試淀粉樣肽拮抗劑與激動(dòng)劑化合物的各種方法。
涉及淀粉樣肽能量代謝的生物學(xué)作用，見Young等，J Cell Biochem55512-18，1994中描述。而淀粉樣肽在體內(nèi)肝能量代謝，具有顯著的作用，而在離體肝細(xì)胞或灌流肝臟上該肽的作用是怎樣，尚無一致意見。已有的數(shù)據(jù)并不支持該肽能促進(jìn)肝糖元分解作用這一設(shè)想，即它的作用不會(huì)類似血糖素(例如Stephens等，Diabetes 40395-400，1991；Gomez-Foix等，Biochem J 276607-610，1991)。據(jù)認(rèn)為，淀粉樣肽可能作用于肝臟，促進(jìn)乳酸酯轉(zhuǎn)化成葡萄糖，以及增強(qiáng)血糖素釋放葡萄糖的量(見Roden等，Diabetologia 35116-120，1992)。這樣，淀粉樣肽可能是作用為肝臟中胰島素的同化配體，這與其在肌肉中作為降解代謝作用是相反的。
在脂肪細(xì)胞中，與其在肌肉中的作用相反，淀粉樣肽對(duì)于促胰島素葡萄糖攝取，將葡萄糖結(jié)合至甘油三酯，以及二氧化碳的生成，未測(cè)出有作用(Cooper等，Proc Natl Acad Sci 857763-7766，1988)，對(duì)促腎上腺素脂肪分解，或抑制胰島素的脂肪分解也無作用(Lupien和Young，Diabetes Nutrition and Metabolism-Clinical andExperimental，Vol6(1)，13-18頁(yè)，1993)。因此該肽具有組織特異性作用，直接作用于骨骼肌，顯著的間接作用(通過供應(yīng)底物)以及可能亦為直接作用于肝臟，而脂肪細(xì)胞看來對(duì)于該肽的存在與否是“看不見”的。該肽對(duì)于腎組織的直接作用尚未見報(bào)道。
淀粉樣肽對(duì)胰島素的分泌具有顯著的作用，這已有報(bào)道。在離體胰島上(Ohsawa等，Biochem Biophys Res Commun 160961-967，1989)，在灌流胰腺(Silvestre等，Reg Dept 3123-31，1991)，以及在整體大鼠動(dòng)物上(Young等，Mol Cell Endocrinol 84R1-R5，1992)，各種實(shí)驗(yàn)表明，淀粉樣肽能下調(diào)胰島素的分泌。灌流胰腺實(shí)驗(yàn)表明，能選擇性地下調(diào)為應(yīng)答葡萄糖響應(yīng)而致的分泌，而缺乏對(duì)精氨酸的應(yīng)答。但另有作者未能測(cè)出該肽對(duì)于離體β細(xì)胞，對(duì)離體胰島，以及在整體動(dòng)物上有作用(見Broderick等，Biochem Biophys Res Commun177932-938，1991及其所引參考文獻(xiàn))。
在嚙齒動(dòng)物上淀粉樣肽于體內(nèi)藥理劑量下的一個(gè)顯著的作用，是促進(jìn)血漿乳酸酯水平的急劇升高，繼而升高血漿葡萄糖的量(Young等，F(xiàn)EBS Letts 281149-151，1991)。有證據(jù)表明，乳酸酯的增加能為葡萄糖的生成提供底物，淀粉樣肽的作用與胰島素或糖元的變化無關(guān)。在“葡萄糖鉗(Clamp)”試驗(yàn)中，該肽的灌流能引起“抗胰島素”，其途徑是既可通過降低外周葡萄糖的供應(yīng)，也可通過限制由于胰島素介導(dǎo)的肝臟葡萄糖生成的抑制作用(例如Frontoni等，Diabetes 40568-573，1991；Koopmans等，Diabetologia 34218-224，1991)。
曾發(fā)現(xiàn)淀粉樣肽激動(dòng)劑，能減緩胃排空作用(Young等，Diabetologia，June 1995，印刷中)，據(jù)認(rèn)為這是因?yàn)樗鼈兡芙档蜕攀澈蟾哐?Moyses及Kolterman，Drugs of the Futcere，May 1995)。服用一種淀粉樣肽激動(dòng)劑(包括淀粉樣肽)來降低胃蠕動(dòng)和減慢胃排空的方法，是于1993年9月7日提交的，美國(guó)專利申請(qǐng)序號(hào)08/118,381的主題(以及1995年3月16日公開的相應(yīng)PCT申請(qǐng)書，其公開號(hào)為WO95/07098)。
淀粉樣肽的非代謝作用，包括擴(kuò)血管作用，該作用可受CGRP血管受體相互作用的調(diào)節(jié)。(Brain等，Eur J Pharmacol 1832221，1990)。據(jù)報(bào)道，在完整大鼠動(dòng)物上，以避免血壓干擾經(jīng)皮下給藥，淀粉樣肽能顯著增加血漿腎素的活性。用淀粉樣肽拮抗劑，治療腎素有關(guān)的疾病，見1994年12月17日發(fā)布的美國(guó)專利5,376,638號(hào)中所述。
將該肽注射入大腦，能抑制食物的攝入。(例如Chance等，Brain Res539352-354，1991)，這一作用由CGRP和降鈣素分擔(dān)。在細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)這一作用的有效濃度尚未知。據(jù)報(bào)道淀粉樣肽還具有對(duì)能引起細(xì)胞休眠期的破骨細(xì)胞具有作用，而且在大鼠，兔和患佩吉特氏病(Paget′sdisease)的病人，它還能降低血漿鈣達(dá)20％的作用(見例如Zaidi等，JBone Miheral Res5，Suppl 2576，1990)。已有的數(shù)據(jù)表明，對(duì)這些作用，淀粉樣肽似乎比人降鈣素弱10至30倍。有趣的是，據(jù)報(bào)道該肽似乎能增加破骨細(xì)胞內(nèi)CAMP的生成，但并不能增加細(xì)胞液鈣離子的濃度，而降鈣素則對(duì)兩者均有作用(Alam等，Biochem Biophys ResCommun 179134-139，1991)。雖未證實(shí)，但據(jù)認(rèn)為降鈣素可能通過兩種類型的受體起作用，而淀粉樣肽可能僅與其中之一種受體作用。糖尿病糖尿病是一種嚴(yán)重的代謝疾病，慢性血糖水平升高是其特征。成人糖尿病的一般癥狀是尿頻，煩渴，酮尿癥，體重迅速下降，并伴隨著血糖水平的升高。正常人禁食時(shí)血糖濃度為小于每分升115毫克。而糖尿病人禁食時(shí)血糖濃度超過每分升140毫克。一般來說，為應(yīng)答胰腺β細(xì)胞的損害，糖尿病逐漸發(fā)展。這種損害發(fā)生于原發(fā)性糖尿病，β細(xì)胞通過自身免疫系統(tǒng)被破壞，或者為應(yīng)答其它的原發(fā)性疾病而作為繼發(fā)的糖尿病，例如胰腺病，非缺乏胰島素作用的激素水平異常疾病，藥物或化學(xué)誘導(dǎo)，胰島素受體功能異常，遺傳性綜合征等。原發(fā)性糖尿病可分為I型糖尿病(亦稱為胰島素依賴性糖尿病或稱IDDM)和II型糖尿病(亦稱為非胰島素依賴型糖尿病或簡(jiǎn)稱NIDDM)。
I型(青少年開始或胰島素依賴型)糖尿病，是熟知的激素缺乏狀態(tài)，其胰腺β細(xì)胞看來已被其自身免疫防御機(jī)制所破壞?；糏型糖尿病的患者無內(nèi)源性胰素分泌能力。這些患者患極度高血糖癥。在引入胰島素取代療法即約70年前，I型糖尿病是致命的。取代療法即首先使用來自于動(dòng)物的胰島素，近來使用利用重組DNA技術(shù)制備的人胰島素。正如上述所討論，現(xiàn)在已清楚，I型糖尿病β細(xì)胞的損害，致使兩種激素均缺乏，即胰島素和淀粉樣肽。當(dāng)胰腺細(xì)胞被破壞時(shí)，分泌胰島素和淀粉樣肽的能力喪失了。據(jù)報(bào)道I型糖尿病患者淀粉樣肽的水平，或檢測(cè)不到，或處于可檢測(cè)的下限，因此不能增加對(duì)葡萄糖需求的應(yīng)答。Koda，The Lancet3391179，1992。
在II型糖尿病中胰腺β細(xì)胞損傷的性質(zhì)，目前尚不清楚。不象I型糖尿病中胰腺β細(xì)胞，在II型糖尿病中β細(xì)胞保留了合成與分泌胰島素和淀粉樣肽的能力。
II型糖尿病的特征是抗胰島素，即外周組織對(duì)胰島素應(yīng)答的正常代謝功能喪失。換句話說，抗胰島素是一種疾病狀況，其體內(nèi)循環(huán)的胰島素產(chǎn)生低于正常的生物學(xué)反應(yīng)。按用臨床術(shù)語，抗胰島素即處于正?；蛏叩囊葝u素水平時(shí)，存在著正?；蛏叩难撬健Ｍㄟ^飲食或降低體重，以恢復(fù)外周組織對(duì)胰島素的敏感性，與II型糖尿病相關(guān)的高血糖有時(shí)能被逆轉(zhuǎn)或得到改善。確實(shí)，II型糖尿病的特征常常是存在高于正常血漿胰島素水平的高血糖癥。II型糖尿病的進(jìn)展，與血糖濃度的升高有關(guān)，并伴隨著葡萄糖誘導(dǎo)的胰島素分泌速率的相對(duì)減少。這樣，在II型糖尿病的晚期，可能存在胰島素缺乏。
治療各種類型糖尿病的首要目的是相同的，即盡可能將血糖濃度降至接近正常，因此減少了短期與長(zhǎng)期的并發(fā)疾病。Tchobroutsky，Diabetologia 15143-152，1978。糖尿病高血糖的程度與接著發(fā)生的長(zhǎng)期并發(fā)癥之間的聯(lián)系，在近來的由國(guó)立衛(wèi)生研究院所開展的完全糖尿病控制與并發(fā)癥試驗(yàn)(DCCT)課題所進(jìn)一步證實(shí)。見DCCT研究小組，N Eng J Med 329977，1993。DCCT課題持續(xù)10年，在美國(guó)和加拿大的29個(gè)臨床中心進(jìn)行，結(jié)果表明，在I型糖尿病上，平均血糖濃度的降低，可減少終末器官的并發(fā)癥。視網(wǎng)膜病的發(fā)生減少了76％，該病的進(jìn)程降低了54％，并且腎病(蛋白尿)也有改善。顯著的神經(jīng)疾病變化的發(fā)生也減少了。
治療I型糖尿病，需經(jīng)腸胃外服用替代量的胰島素。再結(jié)合正確的飲食和自己控制血糖，大部分I型糖尿病可達(dá)到使血糖控制至某一水平。
與I型糖尿病相比，II型糖尿病的治療常不需使用胰島素。治療II型糖尿的準(zhǔn)則通常是在最初的6-12周，試驗(yàn)飲食療法以及改變生活方式。糖尿病患者飲食的特點(diǎn)包括，適量而不是過量地?cái)z入總卡路里，有規(guī)則的膳食，限制飽和脂肪的量，同時(shí)增加多不飽和脂肪酸的量，以及增加食用纖維的攝入。生活方式的改變包括，維持有規(guī)律的鍛煉，以幫助控制體重以及降低抗胰島素的程度。如果經(jīng)適當(dāng)?shù)仫嬍吃囼?yàn)以及改變生活方式，禁食前高血糖仍存在，那么可作出“首先經(jīng)飲食療法失敗”的診斷，那么將需要試驗(yàn)口服降血糖治療或直接用胰島素替代治療，以控制血糖，由此降低了并發(fā)的疾病。飲食療法和減少體重失敗的II型糖尿病患者，可服用例如磺酰脲或雙胍類的口服降血糖藥進(jìn)行治療。但是，胰島素治療被用來治療其它類型的II型糖尿病患者，特別是那些最初飲食療法失敗而又不肥胖的患者，或者那些最初飲食療法失敗，并且其后口服降糖治療又失敗的患者。
利用淀粉樣肽激動(dòng)劑治療糖尿病，已由美國(guó)專利5,124,314和5,175,145號(hào)所描述。過量淀粉樣肽的作用模擬了II型糖尿病的關(guān)鍵特征，因此已提出阻斷該肽，以作為一種新的治療策略。1993年11月30日發(fā)布的美國(guó)專利第5,266,561號(hào)和1994年1月25日發(fā)布的美國(guó)專利第5,281,581號(hào)，披露了用淀粉樣肽拮抗劑治療II型糖尿病以及抗胰島素的方法。
以前曾報(bào)道，輸注淀粉樣肽激動(dòng)劑25，28，29Pro-h-淀粉樣肽，能降低I型糖尿病患者膳食后葡萄糖濃度。見Moyses及Kolterman，Drugs ofthe Future(1995年5月)。在對(duì)6個(gè)男性I型糖尿病患者進(jìn)行單盲交叉研究，于150μg/hr速率，2小時(shí)輸注拮抗劑25，28，29Pro-h-淀粉樣肽，據(jù)報(bào)道能顯著減少膳食后攝入混合食物的高血糖癥。這一結(jié)果在使用9個(gè)I型糖尿病患者，于50μg/hr速率，5小時(shí)輸注進(jìn)行的研究得到了證實(shí)。所給的營(yíng)養(yǎng)需求量可以是口服的(Sustacal型食物，也可以是靜注葡萄糖300mg/kg負(fù)荷。據(jù)報(bào)道服用25，28，29Pro-h-淀粉樣肽，在口服Sustacal膳食后，而不是在靜注葡萄糖后，可致使膳食后葡萄糖水平產(chǎn)生顯著下降，這與延緩胃排空作用和從胃腸道吸收營(yíng)養(yǎng)作用是一致的。進(jìn)一步雙盲法與安慰劑對(duì)照研究，表明膳食前注射25，28，29Pro-h-淀粉樣肽每日三次，也能降低膳食后葡萄糖水平。病人可繼續(xù)進(jìn)行其通常的胰島素?cái)z入補(bǔ)充。在第三個(gè)研究中，服用30μg劑量的淀粉樣肽激動(dòng)劑，可見到有統(tǒng)計(jì)意義的顯著作用。
本發(fā)明概要我們意外地發(fā)現(xiàn)了通過服用淀粉樣肽激動(dòng)劑，可治療非胰島素依賴的II型糖尿病患者，降低其血糖濃度。我們也發(fā)現(xiàn)，用該肽激動(dòng)劑治療非胰島素依賴的II型糖尿病患者，對(duì)于那些HbAlc值高于正常值的病人也特別有益。
一方面，本發(fā)明包括了一種通過服用治療有效量的淀粉樣肽激動(dòng)劑，治療非胰島素依賴的II型糖尿病患者的方法。非胰島素依賴的II型糖尿病患者，系指其患II型糖尿病，但目前不用胰島素處理，而是通過例如用結(jié)合所有飲食療法，鍛煉，改變生活方式，或利用口服降糖藥，例如雙胍或磺酰脲等方法來處理。II型糖尿病的診斷，是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的知識(shí)與能力達(dá)到的。例如，年齡超過35歲，具有煩渴，尿頻，多食(無或有體重減輕)，且合并有血糖升高，而無酮酸中毒歷史的人，一般認(rèn)為符合II型糖尿病的診斷。存在肥胖，陽(yáng)性II型糖尿病家族史，禁食血漿胰島素及C-肽濃度升高，是大多數(shù)II型糖尿病的另一特征?！爸委熡行Я俊钡暮x系指，劑量不管是單次或多次，對(duì)II型糖尿病患者血糖濃度的降低都是有益的。
在優(yōu)選的實(shí)施中，本發(fā)明指向一種治療非胰島素依賴的II型糖尿病的方法，其中病人HbAlc值高于正常人正常范圍的上限，治療方法包括服用一種治療有效量的淀粉樣肽激動(dòng)劑。HbAlc系指血紅蛋白的轉(zhuǎn)化后變化，即葡萄糖經(jīng)非酶過程與血紅蛋白A結(jié)合，它典型地反映了前120天的平均血糖濃度，和血紅細(xì)胞的平均壽命。正常范圍HbAlc上限，即指無糖尿病正常人范圍的上限，一般約為6.0％至約7.5％。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施中，病人的HbAlc值至少為8％。
另一方面，本發(fā)明涉及降低非依賴胰島素的II型糖尿病人的血糖的方法，包括服用所述的具有降血糖劑量的淀粉樣肽激動(dòng)劑。優(yōu)選的降糖量的淀粉樣肽激動(dòng)劑的范圍，約為0.05μg/kg/天至約10μg/kg/天，較優(yōu)選的為0.05μg/kg/天至約6μg/kg/天，更為優(yōu)選的為1.0μg/kg/天至約4μg/kg/天。例如，降糖有效的25，28，29Pro-h-淀粉樣肽(AC137)，一般為約0.05μg/kg/天至約10μg/kg/天，優(yōu)選0.1μg/kg/天至6.0μg/kg/天。從約1.0μg/kg/天至約4.0μg/kg/天的劑量是優(yōu)選的。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施中，受試者HbAlc值為高于正常范圍值的上限。在本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施中，受試者HbAlc值至少為約8％。
在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施中，淀粉肽激動(dòng)劑選擇25，28，29Pro-h-淀粉樣肽(AC137)，s-降鈣素和h-淀粉樣肽。特別優(yōu)選的是25，28，29Pro-h-淀粉樣肽(AC137)。
可通過各種途徑服用淀粉樣肽激動(dòng)劑，包括皮下，肌肉內(nèi)，經(jīng)鼻或經(jīng)皮給藥。
附圖的簡(jiǎn)要說明通過附圖進(jìn)一步描述本發(fā)明，其中

圖1表明在經(jīng)胰島素處理和不經(jīng)胰島素處理的病人，其AC137誘導(dǎo)的膳食后高血糖的降低與HbAlc狀況之間的關(guān)系。病人的HbAlc水平按序排列。在不經(jīng)胰島素處理的病人上r2相關(guān)為0.56，在經(jīng)胰島素處理的病人上為0.10，在總包括的病人上為0.33。
本發(fā)明的詳細(xì)描述通過下面介紹的受體結(jié)合活性與比目魚肌試驗(yàn)，評(píng)價(jià)淀粉樣肽激動(dòng)劑?；衔锼哂械牡矸蹣与募?dòng)劑的活性，也可通過這里所介紹的誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物高血鈣以及/或高血糖的能力，或降低膳食后血糖的水平來評(píng)價(jià)。
用于本發(fā)明中各種淀粉樣肽激動(dòng)劑化合物，其命名系指肽的序列，以及淀粉樣肽序列的任一肽的變化，例如人淀粉樣肽。氨基酸前面上標(biāo)數(shù)字系指，用所指明的氨基酸取代了處于上標(biāo)位置的原序列的氨基酸。例如“18Arg25，28，Pro-h-amylin”代表，基于“h-amylin”或“人-amylin”序列的肽，具有下列取代Arg取代了18位的His殘基，Pro取代了25位的Ala殘基，Pro取代了28位的Ser殘基?！癲es-1Lys-h-淀粉樣肽”系指基于人的淀粉樣肽的序列，其第一個(gè)或N-端氨基酸缺省。
優(yōu)選的淀粉樣肽激動(dòng)劑化合物des-1Lys-h-淀粉樣肽，28Pro-h-淀粉樣肽，25，28，29Pro-h-淀粉樣肽，18Arg25，28Pro-h-淀粉樣肽，以及des-1Lys18Arg25，28Pro-h-淀粉樣肽，在所測(cè)試動(dòng)物上均顯示出體內(nèi)具有淀粉樣肽活性，能引起顯著的高血糖后的高血乳酸癥。除具有淀粉樣肽的活性特征外，某些優(yōu)選的化合物比人淀粉樣肽具有更好的溶解度和穩(wěn)定性特點(diǎn)。這些優(yōu)選的化合物包括25Pro26Val28，29Pro-h-淀粉樣肽，25，28，29Pro-h-淀粉樣肽(亦稱為“AC-0137”)和18Arg25，28Pro-h-淀粉樣肽。
本發(fā)明方法中所使用的淀粉樣肽激動(dòng)劑，包括淀粉樣肽及淀粉樣肽激動(dòng)劑類似物，例如淀粉樣肽受體激動(dòng)劑類似物，如18Arg25，28Pro-h-淀粉樣肽，des-1Lys-18Arg25，28Pro-h-淀粉樣肽，18Arg25-28， 29Pro-h-淀粉樣肽，des-1Lys-18Arg25，28，29Pro-h-淀粉樣肽，25，28，29Pro-h-淀粉樣肽，des-1Lys-25，28，29Pro-h-淀粉樣肽，以及25Pro26Val25，28-Pro-h-淀粉樣肽。其它的-些適宜的淀粉樣肽激動(dòng)劑類似物的例子，包括23Leu25Pro26Val28，29Pro-h-淀粉樣肽；23Leu25Pro26Val28Pro-h-淀粉樣肽；des-1Lys23Leu25Pro26Val28Pro-h-淀粉樣肽；18Arg23Leu25Pro26Val28Pro-h-淀粉樣肽；18Arg23Leu25，28，29Pro-h-淀粉樣肽；18Arg22Leu25，28Pro-h-淀粉樣肽；17Ile23Leu25，28，29Pro-h-淀粉樣肽；17Ile25，28，29Pro-h-淀粉樣肽；des-1Lys17Ile23Leu25，28，29Pro-h-淀粉樣肽；17Ile18Arg23Leu-h-淀粉樣肽；17Ile18Arg23Leu26Val29Pro-h-淀粉樣肽；17Ile18Arg23Leu25Pro26Val26，29Pro-h-淀粉樣肽；13Thr21His23Leu26Ala28Leu29Pro31Asp-h-淀粉樣肽；13Thr21His23Leu26Ala29Pro31Asp-h-淀粉樣肽；des-1Lys13Thr21His23Leu26Ala28Pro31Asp-h-淀粉樣肽；13Thr18Arg21His23Leu26Ala29Pro31Asp-h-淀粉樣肽；13Thr18Arg21His23Leu28，29pro31Asp-h-淀粉樣肽；及13Thr18Arg21His23Leu25Pro26Ala28，29Pro31Asp-h-淀粉樣肽。
某些淀粉樣肽激動(dòng)劑，包括淀粉樣肽激動(dòng)劑類似物，已有披露報(bào)道，制備和利用淀粉樣肽激動(dòng)劑的方法，已于美國(guó)專利申請(qǐng)書“新的淀粉樣肽激動(dòng)劑肽及其用途”，其于1995年5月30日提交(文件號(hào)213/080)以及相應(yīng)的于1993年5月27日公開的PCT申請(qǐng)出版物WO93/10146號(hào)中作了詳細(xì)說明，披露的內(nèi)容在此引入作為參考。這些激動(dòng)劑用于降低非胰島素依賴的II型糖尿病患者的血糖濃度。
用這里介紹的一些生物學(xué)試驗(yàn)方法，可評(píng)價(jià)淀粉樣肽激動(dòng)劑的活性。受體結(jié)合試驗(yàn)可用來區(qū)別候選的淀粉樣肽的激動(dòng)劑和拮抗劑，并可用來評(píng)價(jià)結(jié)合試驗(yàn)，而比目魚肌肉試驗(yàn)可用來區(qū)別淀粉樣肽激動(dòng)劑與拮抗劑。在受體結(jié)合試驗(yàn)中，優(yōu)選的激動(dòng)劑化合物的活性低至1到5nM，較優(yōu)選的是低于1nM，更為優(yōu)選的是低于50pM。在比目魚肌肉試驗(yàn)中，這些化合物優(yōu)選地顯示出低至1到10微摩爾的EC50值。
在1993年11月23日發(fā)布的美國(guó)專利第5,264,372號(hào)中描述了受體結(jié)合試驗(yàn)，其中披露的內(nèi)容在此作為參考。受體結(jié)合試驗(yàn)是一種競(jìng)爭(zhēng)性試驗(yàn)，它是測(cè)定化合物特異性地與同膜結(jié)合的淀粉樣肽受體親合力。用于試驗(yàn)中的膜制劑的優(yōu)選的來源是前腦基底，它包括聽神經(jīng)核中的膜及其周圍組織區(qū)域。試驗(yàn)的化合物，系以125I大鼠(Bolton Hunter類)淀粉樣肽，與受體制劑進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合試驗(yàn)。利用四參數(shù)邏輯方程非線性回歸分析法，以計(jì)算機(jī)分析競(jìng)爭(zhēng)性曲線，其中將結(jié)合量(B)作為配基濃度log的函數(shù)作圖(作圖程序Graph PAD軟件，圣迭亞戈，加利福尼亞)?；蚶肈elean等ALLFIT程序(ALLFIT2.7版本(NIH，Bethesda，MD20892))分析競(jìng)爭(zhēng)曲線。見Munson P及Rodbard D.，Anal Biochem 107220-239(1980)。
利用以前描述的方法在比目魚肌上進(jìn)行淀粉樣肽激動(dòng)劑的生物活性試驗(yàn)，包括淀粉樣肽激動(dòng)劑類似物制劑(Leighton B和Cooper GJSNature 335632-635(1988)；Cooper GJS等，Proc Natl Acad Sci，USA 857763-7766(1988))?？傊?，通過測(cè)量比目魚肌上促胰島素糖元合成的抑制作用，評(píng)價(jià)淀粉樣肽激動(dòng)劑的活性。在100nM大鼠淀粉樣肽及淀粉樣肽拮抗劑存在下，測(cè)定促胰島素糖元合成的恢復(fù)，評(píng)價(jià)淀粉樣肽拮抗劑的活性。用描述的定量氨基酸分析法，測(cè)定溶解于無載體緩沖液中的肽的濃度。通過測(cè)量EC50值，來測(cè)定試驗(yàn)中的化合物作用激動(dòng)劑的活性。利用四參數(shù)邏輯方程，通過測(cè)量S形(Sigmoidal)劑量響應(yīng)曲線的吻合程度來測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)差(De Lean，A，Munson PJ，Guardabasso V和Rodbard D.(1988)ALLFIT，2.7版本，國(guó)立兒童衛(wèi)生及人類發(fā)展研究院，NIH，Bethesda，MD，磁帶一盤)。利用這些生物試驗(yàn)，表征了一系列淀粉樣肽激動(dòng)劑。在受體競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)18Arg25，28Pro-h-淀粉樣肽，des1Lys18Arg25，28Pro-h-淀粉樣肽，18Arg25，28，29Pro-h-淀粉樣肽，des1Lys18Arg25，28，29Pro-h-淀粉樣肽，25，28，29Pro-h-淀粉樣肽，des1Lys25，28，29Pro-h-淀粉樣肽，以及25Pro26Val25，28Pro-h-淀粉樣肽，這類化合物均能與淀粉樣肽競(jìng)爭(zhēng)受體。用比目魚肌試驗(yàn)測(cè)定時(shí)，發(fā)現(xiàn)這些化合物的拮抗活性可略不計(jì)，而表現(xiàn)為淀粉樣肽激動(dòng)劑作用。
利用1993年9月7日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)序號(hào)08/118,381和1994年9月7日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)序號(hào)08/302,069中描述的方法，區(qū)別、評(píng)價(jià)或篩選淀粉樣肽或其激動(dòng)劑對(duì)胃蠕動(dòng)的作用(見相應(yīng)的PCT申請(qǐng)，公開號(hào)WO95/07098)，這些專利申請(qǐng)中披露的方法在此作為參考，或用其它已知的技術(shù)或等價(jià)的方法測(cè)定胃蠕動(dòng)作用。在區(qū)別或評(píng)價(jià)化合物減緩胃蠕動(dòng)能力所用的這一方法，包括(a)將測(cè)試的樣品和測(cè)試系統(tǒng)結(jié)合起來。所述的測(cè)試樣品包括一個(gè)或多個(gè)測(cè)試的化合物，所述的測(cè)試系統(tǒng)包括評(píng)選胃蠕動(dòng)的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)其特征在于，例如，為應(yīng)答所引入的葡萄糖或膳食，該系統(tǒng)顯出血漿葡萄糖濃度的升高。以及(b)測(cè)定在所述系統(tǒng)中血漿葡萄糖的存在或升高量。也可以用正和/或負(fù)對(duì)照實(shí)驗(yàn)?；蛘?，也可以將已測(cè)定量的淀粉樣拮抗劑(例如8-32鮭魚降鈣素)，加入至測(cè)試系統(tǒng)中。
利用標(biāo)準(zhǔn)固相肽合成技術(shù)制備上述描述的淀粉樣激動(dòng)劑，優(yōu)選自動(dòng)或半自動(dòng)化肽合成儀。典型的例子為，將連結(jié)于生長(zhǎng)肽鏈樹脂上的氨基酸與α-N-氨甲酸酯保護(hù)的氨基酸偶聯(lián)，條件為室溫，在如二甲基甲酰胺，N-甲基吡咯烷酮或二氯甲烷的惰性溶劑中，在如二環(huán)己基碳二亞胺和1-羥基苯并三唑?yàn)榕己蟿┮约霸谌缍惐野返膲A存在下進(jìn)行。利用如三氟乙酸或哌啶作為試劑，將所得肽樹脂從α-N-氨甲酸酯保護(hù)基團(tuán)中除去，用另一個(gè)所需的N-保護(hù)氨基酸重復(fù)偶聯(lián)反應(yīng)，以增加肽鏈。適宜的N-保護(hù)基是本專業(yè)人員所熟知的，這里優(yōu)選叔丁氧羰基(tBoc)和芴甲基氧基羰基(Fmoc)。
除非另有指明，用于肽合成儀中的溶劑，氨基酸衍生物以及4-甲基二苯甲基胺樹脂系購(gòu)于應(yīng)用生物系統(tǒng)公司(Foster市，CA)。側(cè)鏈保護(hù)氨基酸購(gòu)于應(yīng)用生物系統(tǒng)公司，包括以下Boc-Arg(Mts)，F(xiàn)moc-Arg(Pmc)，Boc-Thr(Bzl)，F(xiàn)moc-Thr(t-Bu)，Boc-Ser(Bzl)，F(xiàn)moc-Ser(t-Bu)，Boc-Tyr(BrZ)，F(xiàn)moc-Tyr(t-Bu)，Boc-Lys(Clz)，F(xiàn)moc-Lys(Boc)，Boc-Glu(Bzl)，F(xiàn)moc-Glu(t-Bu)，F(xiàn)moc-His(Trt)，F(xiàn)moc-Asn(Trt)，以及Fmoc-Gln(Trt)。Boc-His(BOM)購(gòu)于應(yīng)用生物系統(tǒng)公司或Bachem公司(Torrance，CA)。苯甲醚，二甲硫醚，苯酚，乙二硫醇，及硫代苯甲醚購(gòu)自于Aldrich化學(xué)公司(Milwaakee，WI)?？諝猱a(chǎn)品及化學(xué)品公司(Allentown，PA)提供HF，乙醚，乙酸和甲醇購(gòu)自于Fisher科學(xué)公司(Pittsburgh，PA)。
用自動(dòng)肽合成儀(Model 430A，應(yīng)用生物系統(tǒng)公司，F(xiàn)oster市，CA)進(jìn)行固相肽合成，用NMP/HOBt(選擇1)系統(tǒng)和Tboc或Fmoc化學(xué)策略為反應(yīng)條件(見應(yīng)用生物系統(tǒng)公司的ABI430A肽合成儀用戶手冊(cè)，1.3B版本，1988年1月1日，第6部分，49-70頁(yè)，應(yīng)用生物系統(tǒng)公司，F(xiàn)oster市，CA)。用HF裂解Boc-肽樹脂(-5℃至0℃，1小時(shí))。用水和乙酸從樹脂提取肽，將濾液進(jìn)行凍干。按標(biāo)準(zhǔn)方法，將Fmoc肽樹脂進(jìn)行裂解(見“Introduction to Cleawage Techniques”，應(yīng)用生物系統(tǒng)公司，1990，6-12頁(yè))。利用Advanced Chem Tech合成儀(Model MPS 350，Louisville，Kentucky)也可組裝某些肽。用Waters Delta Prep 3000系統(tǒng)經(jīng)RP-HPLC(制備與分析型)純化肽。C4，C8或C18制備柱(10μ，2.2×25cm；Vydac，Hesperia，CA)用來分離肽，純度用C4，C8，或C18分析柱測(cè)定(5μ，0.46×25cm，Vydac)。溶劑(A＝0.1％ TFA/水，B＝0.1％ TFA/CH3CN)流過分析柱的流速為1.0ml/min，流過制備柱的流速為15ml/min。用Waters PicoTag系統(tǒng)進(jìn)行氨基酸分析，用Maxima程序進(jìn)行處理。用氣相酸水解法，水解肽(115℃，20-24小時(shí))。水解產(chǎn)物經(jīng)衍生化后，用標(biāo)準(zhǔn)方法分析(Cohen，SA，Mey M和Tarrin TL。(1989)，“The Pico Tag MethodA Manual of Advanced Techniques forAmino Acid Analysis”PP11-52，Millipore，Comoration，Milford，MA)。用M掃描法進(jìn)行快原子轟擊分析(West Chester，PA)。用碘化銫或碘化銫/甘油法進(jìn)行質(zhì)量測(cè)定。在一臺(tái)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司Bio-Ion 20質(zhì)譜儀上，以飛行時(shí)間測(cè)定法進(jìn)行血漿解吸離子化分析。
也可以用目前本領(lǐng)域已知的重組DNA技術(shù)制備權(quán)利要求方法中有用的肽化合物。見Sambrook等，“Molecular CloningA LaboratoryManual，2d.Ed.Cold Spring Harbor 1989”。
上述化合物也涉及用各種無機(jī)、有機(jī)酸和堿所制備的鹽的形式，該類鹽包括從有機(jī)和無機(jī)酸制備的鹽，例如HCl，HBr，H2SO4，H3PO4，三氟乙酸，乙酸，甲酸，甲磺酸，甲苯磺酸，馬來酸，富馬酸及樟腦磺酸。用堿制備的鹽包括銨鹽，堿金屬鹽，如鈣和鎂鹽。乙酸鹽，鹽酸鹽和三氟乙酸鹽是優(yōu)選的?？梢杂猛ǔ５姆椒ㄖ苽潲}，即將產(chǎn)物的酸或堿式，與等量或過量堿或酸反應(yīng)制備鹽，所用的溶劑或介質(zhì)是鹽在其中是不溶的，或在如水的溶劑中反應(yīng)，再通過真空或冰冷干燥除去溶劑，或在一個(gè)適宜的交換樹脂上，將一種已有的鹽的離子交換成另一種離子。
用于本發(fā)明的組合物可方便地以適用于非胃腸道的(包括肌內(nèi)和皮下)，或經(jīng)鼻或經(jīng)皮，以及/或適宜的膠囊化的配方形式供應(yīng)，或按其它已知的方法制備供口服用。對(duì)于一個(gè)具體病人，最好由醫(yī)生確定適宜的服用形式。適宜的可作為藥用的載體及其配方，見標(biāo)準(zhǔn)的配方專集中所述，例如“Remington′s Pharmaceutical Sciences”，EW Martin。亦參見Wang YJ和Hanson MA“Darenteral Formulations of Proteins andPeptidesStability and Stabilizers”，Journal of Parenteral Science andTechonlogy，Technical Report No.10，Supp.422S(1988)。
本發(fā)明中的化合物可制成非胃腸道的組合物供注射或輸注用。優(yōu)選的是將它們?nèi)苡谒苄暂d體中，在pH約為4.3至7.4的等滲緩沖溶液中。這些組合物可按常規(guī)消毒技術(shù)消毒，或按過濾消毒。這些組合物可含所需的藥用輔料物質(zhì)，以穩(wěn)定配方，例如pH緩沖劑。有用的緩沖劑，包括如乙酸鈉/乙酸緩沖劑。貯藏或貯存形緩釋制劑也可使用，使得在經(jīng)皮注射或釋放后，治療有效量的制劑于數(shù)小時(shí)或數(shù)天，釋放于血流之中。
利用氯化鈉或其它可作為藥用的試劑，如右旋糖，硼酸，酒石酸鈉，丙二醇，多元醇(如甘露醇和山梨醇)或其它無機(jī)或有機(jī)溶質(zhì)，制成所需的等滲度。特別優(yōu)選氯化鈉，作為含鈉離子的緩沖劑。如需要，上述組合物的溶液可用如甲基纖維素等增稠劑來增稠。
按照一般的步驟，將各種成分混合，以制備本發(fā)明中的組合物。例如，將所選的成分在一個(gè)混合器或其它標(biāo)準(zhǔn)裝置中混合，制備濃縮混合物，再加入水或增稠劑調(diào)整最終濃度和粘度，以及加入緩沖劑以控制pH，或加入等溶質(zhì)以控制張力。
為便于醫(yī)生使用，以劑型提供該組合物，它包含一定量的淀粉樣肽激動(dòng)劑，使用一種或多劑量能有效將血糖控制至所需水平。治療有效量的淀粉樣肽激動(dòng)劑，能使膳食后血糖濃度降低至優(yōu)選的不低于5至6mM或所需水平。在糖尿病或葡萄糖耐受病人個(gè)體上，血糖濃度比正常人高。在這些個(gè)體上，可以獲得膳食后血糖水平的有益或平穩(wěn)降低。正如該領(lǐng)域所知的那樣，在測(cè)量特殊個(gè)體的有效劑量時(shí)，應(yīng)該考慮多種因素，包括不能局限于病人的體重，年齡和一般健康狀況，涉及疾病的嚴(yán)重程度，病人具體的反應(yīng)，所服用的特殊化合物，服用方式，所服用制劑的生物利用度特點(diǎn)，所選的劑量范圍，以及同時(shí)所采用的醫(yī)療措施。
淀粉樣肽激動(dòng)劑的包括18Arg25，28Pro-h-淀粉樣肽，des-1Lys-18Arg25，28Pro-h-淀粉樣肽，18Arg25，28，29Pro-h-淀粉樣肽，des1Lys18Arg25，28，29Pro-h-淀粉樣肽，25，28，29-Pro-h-淀粉樣肽，des1Lys-25，28，29Pro-h-淀粉樣肽和25Pro26Val25，28Pro-h-淀粉樣肽，其有效日劑量典型地在0.05μg/kg/天至約10μg/kg/天，優(yōu)選約0.05μg/kg/天至約6.0μg/kg/天，更為優(yōu)選的是約1.0μg/kg/天至約4.0μg/kg/天，以單劑量或分次服用。服用的精確量由臨床醫(yī)生決定，并依賴于特殊的化合物在上述的哪一范圍的量，以及年齡，體重以及個(gè)人狀況。應(yīng)該在一有癥狀或診斷為糖尿病后就服用。可通過注射給藥，優(yōu)選為皮下或肌內(nèi)給藥。也可以經(jīng)鼻或經(jīng)皮給藥?？诜行У幕衔飸?yīng)當(dāng)經(jīng)口服給藥，但是應(yīng)基于效價(jià)以及生物利用度調(diào)整劑量。
肽類的淀粉樣肽激動(dòng)劑，如25，28，29Pro-h-淀粉樣肽，可單或多劑量給藥，例如每天二次(BID)，三次(TID)，和/或四次(QID)。優(yōu)選的BID劑量范圍為約30μg BID至約150μg BID，更為優(yōu)選的是為約50μg BID至約60μg BID。優(yōu)選的TID劑量為約30μg TID至約150μg TID，更為優(yōu)選的是為約60μg TID。優(yōu)選的QID劑量為約30μg QID至約60μgQID。更為優(yōu)選的是30μg QID。這些優(yōu)選的劑量在各種臨床試驗(yàn)中是有效的，它們經(jīng)皮下給藥。
下面的例子是例示說明性的，但不局限制本發(fā)明的方法。其它經(jīng)改性或采用于權(quán)利要求方法中的適合的淀粉樣激動(dòng)劑化合物，也是適宜的，并且包含在本發(fā)明的構(gòu)思與范圍之內(nèi)。實(shí)例進(jìn)行單盲，安慰劑對(duì)照的，隨機(jī)的，兩期交叉臨床試驗(yàn)，以評(píng)價(jià)II型糖尿病人口服標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試膳食后使用淀粉肽激動(dòng)劑25，28，29Pro-h-淀粉樣肽(AC137)后的微輸注(microinfusion)效果。
滿足篩選要求的病人，隨機(jī)參予由適應(yīng)期(研究天1)和接下來兩個(gè)治療期(研究天2和3)所組成的研究階段。試驗(yàn)中選定14個(gè)男性和10個(gè)女性病人。病人隨機(jī)分為12個(gè)病人以安慰劑/AC137給藥，另12個(gè)病人以AC137/安慰劑給藥。每個(gè)所研究的給藥組均有6個(gè)用胰島素治療的病人和6個(gè)未用胰島素治療的病人。在12個(gè)用胰島素治療的病人中，有10個(gè)單獨(dú)接受胰島素治療，2個(gè)接受口服降血糖藥。在12個(gè)未用胰島素治療的病人中，7個(gè)用口服降糖藥。因此，得含六個(gè)病人一組，共四組。在1組和2組，病人接受胰島素治療。在3組和4組，病人不用胰島素。1組和3組病人，在研究天2經(jīng)5小時(shí)輸注100μg/h AC137治療，再于研究天3經(jīng)15小時(shí)灌注期和5小時(shí)輸注安慰劑處理。2組和4組病人在研究天2經(jīng)5小時(shí)輸注安慰劑，再于研究天3經(jīng)5小時(shí)灌洗期和5小時(shí)輸注100μg/h AC137處理。AC137和安慰劑，均以微輸泵靜注給藥。所有病人在藥物輸注的兩個(gè)治療天，研究開始后60分鐘給予標(biāo)準(zhǔn)的Sustacal試驗(yàn)膳食(7Kcal/Kg)。該Sustacal試驗(yàn)膳食是可市售獲得的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充物，含有1.01Kcal/ml熱量組合物，有24％蛋白質(zhì)，21％脂肪和55％碳水化合物。酪蛋白酸鈉和鈣，以及大豆蛋白，提供蛋白質(zhì)熱量；部分氫化的大豆油提供脂肪熱量；蔗糖和玉米糖漿提供碳水化合物熱量。
每個(gè)病人通常的胰島素和/或口服降糖藥以及熱量的攝入，正如在隨訪中所記錄證明的，在24小時(shí)適應(yīng)期內(nèi)(研究天1)是穩(wěn)定的。病人于上午8點(diǎn)進(jìn)早餐，中午12點(diǎn)進(jìn)午餐，下午6點(diǎn)進(jìn)晚餐。在膳食前30分鐘，病人服用通常量的胰島素和/或降糖藥。按病人的常用量，供給晚間小吃。按需供應(yīng)水。在整個(gè)研究時(shí)期內(nèi)所有的病人均遵從胰島素/口服降糖藥以及膳食規(guī)定。
在Sustacal試驗(yàn)膳食進(jìn)餐后1小時(shí)至5小時(shí)的平均血糖水平，見表1所示。表1 Sustacal試驗(yàn)膳食進(jìn)餐后1至5小時(shí)平均血糖水平亞組平均±SEM(mg/dl)AC137 安慰劑 p值a胰島素處理的病人 183.1±13.4 243.0±16.50.0035(N＝12)非胰島素處理的病 169.8±15.7183.2±19.9 NS人 (N＝12)aP值為二期交叉ANOVA。NS為無統(tǒng)計(jì)意義與用胰島素治療病人接受安慰劑處理相比，用胰島素治療病人接受AC137處理后，給予Sustacal試驗(yàn)膳食，1小時(shí)至5小時(shí)平均血糖水平降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在經(jīng)AC137輸注的用胰島素治療的病人，其血糖水平平均降低23％。
與安慰劑處理的病人相比，輸注AC137的未用胰島素治療的病人，其平均血糖水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差別。
給予Sustacal試驗(yàn)膳食后，用胰島素治療和未用胰島素治療病人，其血糖(最大血糖濃度)的零小時(shí)AUC葡萄糖(1-5)(用斜形規(guī)則(trapezoidal rule)計(jì)算的1至5小時(shí)試驗(yàn)期，高于或低于血糖濃度基質(zhì)的曲線下的面積)與零小時(shí)C最大值，見表2中所總結(jié)。表2 Sustacal試驗(yàn)膳食后零小時(shí)AUC(1-5)至Cmax血糖亞組/參數(shù)AC137 安慰劑 p值a(平均±SEM)(平均±SEM)經(jīng)胰島素處理的病人(N＝12)AUC(1-5)(mg-h/dl) 51.2±52.0 284.4±52.3 0.0012Cmax(mg/dl) 42.0±15.0 118.1±17.1 0.0007未用胰島素處理的病人(N＝12)AUC(1-5)(mg-h/dl) 53.3±27.4 124.3±28.3 NSCmax(mg/dl) 40.1±10.2 66.9±7.7 0.038a二期交叉ANOVA p值。NS無統(tǒng)計(jì)意義經(jīng)Sustacal試驗(yàn)膳食后，經(jīng)胰島素處理的病人與未用胰島素處理的病人，其血糖AUC(1-5)和Cmax，見表3中所總結(jié)。表3 Sustacal試驗(yàn)膳食后AUC(1-5)和Cmax血糖亞組/參數(shù)AC137安慰劑 p值a(平均±SEM)(平均±SEM)經(jīng)胰島素治療的病人(N＝12)AUC(1-5)(mg-h/dl) 736.2±54.1 984.7±67.60,0031Cmax(mg/dl) 213.3±14.9 293.2±21.90.0017未經(jīng)胰島素治療的病人(N＝12)AUC(1-5)(mg-h/d1) 681.3±62.8 738.3±80.0 NSCmax(mg/dl) 197.1±17.1 220.4±20.00.048a為二期交叉ANOVA p值。NS為無統(tǒng)計(jì)意義與經(jīng)胰島素治療病人再接受安慰劑處理相比較，經(jīng)胰島素治療病人接受AC137處理后，葡萄糖零小時(shí)AUC(1-5)，零小時(shí)Cmax，AUC(2-5)和Cmax降低均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。零小時(shí)參數(shù)的作用是非常深遠(yuǎn)的。經(jīng)胰島素治療的病人接受AC137處理后，零小時(shí)AUC(1-5)平均降低93％，而零小時(shí)Cmax平均降低66％。
在未經(jīng)胰島素治療的病人上，雖然其零小時(shí)AUC(1-5)的降低看來是有臨床意義的，但是接受AC137輸注后僅葡萄糖零小時(shí)Cmax和Cmax的降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
將經(jīng)胰島素處理的病人的結(jié)果，與未經(jīng)胰島素處理的病人的結(jié)果，進(jìn)行了比較(ANOVA)。經(jīng)安慰劑輸注后，經(jīng)胰島素處理的病人其葡萄糖零小時(shí)AUC(1-5)，比未經(jīng)胰島素處理的病人高(p=0.013)2.3倍。經(jīng)胰島素處理的病人接受安慰劑后，其葡萄糖零小時(shí)Cmax，比未經(jīng)胰島素處理的病人接受安慰劑后，高(p＝0.012)1.8倍。在經(jīng)胰島素處理的病人接受安慰劑后，其葡萄糖AUC(1-5)和Cmax也升高(p分別為0.028和0.023)。輸注AC137后，將經(jīng)胰島素治療的病人與未經(jīng)胰島素治療的病人結(jié)果進(jìn)行比較，其葡萄糖零小時(shí)AUC(1-5)，零小時(shí)Cmax，AUC(1-5)和Cmax，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。
選擇病人的標(biāo)準(zhǔn)包括系II型糖尿病人，其糖化紅血球(HbAlc)水平升高至13％，并測(cè)定了AC137誘導(dǎo)的膳食后高血糖的降低與起始HbAlc水平之間的相關(guān)關(guān)系。從輸注安慰劑后的葡萄糖零小時(shí)AUC(1-5)值減去輸注AC137后葡萄糖零小時(shí)AUC(1-5)值，可計(jì)算膳食后高血糖的降低。該結(jié)果按病人HbAlc水平的排列順序，列于圖1中。
在未經(jīng)胰島素處理的病人上，其膳食后高血糖的降低，看來是隨HbAlc水平而增加。在亞組病人，其相關(guān)值(r2)為0.56，在經(jīng)胰島素處理的病人為0.10，而對(duì)所有病人為0.33。
為進(jìn)一步評(píng)價(jià)膳食后高血糖的降低與HbAlc水平之間的相關(guān)關(guān)系，在HbAlc水平≥8％和＜8％的經(jīng)胰島素處理和未經(jīng)胰島素處理的病人上，對(duì)其Sustacal試驗(yàn)膳食后的葡萄糖零小時(shí)AUC(1-5)，零小時(shí)Cmax，AUC(1-5)和Cmax進(jìn)行了評(píng)價(jià)。
對(duì)于經(jīng)胰島素和未經(jīng)胰島素處理的病人，其HbAlc水平≥8％時(shí)，Sustacal試驗(yàn)膳食后的血糖零小時(shí)AUC(1-5)和零小時(shí)Cmax，見表4中所總結(jié)。表4 Sustacal試驗(yàn)膳食后零小時(shí)AUC(1-5)和零小時(shí)Cmax病人HbAlc水平≥8％的血糖亞組/參數(shù) AC137 安慰劑 p值a
(平均±SEM) (平均±SEM)經(jīng)胰島素處理的病人(N＝9)AUC(1-5)(mg-h/dl) 63.1±69.4314.8±67.30.0080Cmax(mg/dl)48.8±19.4127.1±21.40.0055未經(jīng)胰島素處理的病人(N＝5)AUC(1-5)(mg-h/dl) -7.9±32.8189.8±41.20.0323Cmax(mg/dl)20.6±12.079.4±11.2 0.0238a為二期交叉ANOVA值。NS無統(tǒng)計(jì)意義對(duì)經(jīng)胰島素和未經(jīng)胰島素處理的病人，其HbAlc水平≥8％時(shí)，Sustacal試驗(yàn)膳食后的血糖AUC(1-5)和Cmax，見表5中所總結(jié)。表5 Sustacal試驗(yàn)膳食后AUC(1-5)和Cmax病人HbAlc水平≥8％的血糖亞組/參數(shù) AC137 安慰劑 p值a(平均±SEM)(平均±SEM)經(jīng)胰島素處理的病人(N＝9)AUC(1-5)(mg-h/dl) 747.9±68.6987.7±75.40.0337Cmax(mg/dl)220.0±18.6295.3±23.60.0153未經(jīng)胰島素處理的病人(N＝5)AUC(1-5)(mg-h/dl) 871.4±49.81033.8±34.3 0.0369Cmax(mg/dl)240.4±16.4290.4±11.40.0362a為二期交叉ANOVA值。NS無統(tǒng)計(jì)意義與接受安慰劑病人相比，HbA1c水平≥8％的經(jīng)胰島素和未經(jīng)胰島素治療病人，當(dāng)接受AC137后，其葡萄糖零小時(shí)AUC(1-5)，零小時(shí)Cmax，AUC(1-5)及Cmax降低，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。未經(jīng)胰島素處理的HbAlc水平≥8％的病人，這些差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且大于所有不考慮其HbAlc水平高低的未經(jīng)胰島素處理的病人的差異。
對(duì)經(jīng)胰島素處理和未經(jīng)胰島素處理的，其HbAlc水平＜8％的那些病人，Sustacal試驗(yàn)膳食后，血糖的零小時(shí)AUC(1-5)和零小時(shí)Cmax值見表6中所總結(jié)。表6 Sustacal試驗(yàn)膳食后零小時(shí)AUC(1-5)和零小時(shí)Cmax病人HbAlc水平＜8％的血糖亞組/參數(shù) AC137安慰劑 p值a(平均±SEM) (平均±SEM)經(jīng)胰島素處理的病人(N＝3)AUC(1-5)(mg-h/dl) 15.5±30.4193.1±14.40.0324Cmax(mg/dl)21.7±10.891.0±20.6NS未經(jīng)胰島素處理的病人(N＝7)AUC(1-5)(mg-h/dl) 96.9±32.877.6±29.0NSCmax(mg/dl)54.0±13.458.0±9.8 NSa二期交叉ANOVA值。NS為無統(tǒng)計(jì)意義對(duì)經(jīng)胰島素處理和未經(jīng)胰島素處理的，其HbAlc水平＜8％的那些病人，Sustacal試驗(yàn)膳食后，血糖AUC(1-5)和Cmax值，見表7中所總結(jié)。表7 Sustacal試驗(yàn)膳食后AUC(1-5)和Cmax病人HbAlc水平＜8％血糖亞組/參數(shù) AC137 安慰劑 p值a(平均±SEM)(平均±SEM)經(jīng)胰島素處理的病人(N＝3)AUC(1-5)(mg-h/dl) 700.8±84.2975.8±179.7 NSCmax(mg/dl)193.0±22.1286.7±61.9 NS未經(jīng)胰島素處理的病人(N＝7)AUC(1-5)(mg-h/dl) 545.5±61.9527.3±41.8 NSCmax(mg/dl) 166.1±20.3170.4±13.9NSa二期交叉ANOVA值。NS為無統(tǒng)計(jì)意義與接受安慰劑的病人相比較，雖然葡萄糖零小時(shí)Cmax，AUC(1-5)和Cmax可能有臨床意義，但是對(duì)HbAlc水平＜8％的經(jīng)胰島素處理的，接受AC137的病人，僅其葡萄糖零小時(shí)AUC(1-5)降低具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)所有經(jīng)胰島素處理的病人，不論其HbAlc水平高低，將其中接受AC137的病人與接受安慰劑的病人相比較，葡萄糖零小時(shí)AUC(1-5)，零小時(shí)Cmax，AUC(1-5)和Cmax降低均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)于未經(jīng)胰島素處理的HbAlc水平＜8％的病人，將其中接受AC137的病人與接受安慰劑的病人相比較，其葡萄糖零小時(shí)AUC(1-5)，零小時(shí)Cmax，AUC(1-5)和Cmax值均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
因此，II型糖尿病人即使未服用過胰島素，也就是說，例如當(dāng)病人首次飲食療法未失敗，特別是那些具有高于HbAlc正常值的II型糖尿病人，當(dāng)服用淀粉樣肽激動(dòng)劑后，能有效地降低其血糖濃度。
權(quán)利要求
1.-種治療非胰島素依賴的II型糖尿病的方法，包括給所述的病人服用治療有效量的淀粉樣肽激動(dòng)劑。
2.一種降低非胰島素依賴的II型糖尿病患者血糖的方法，包括給所述的病人服用治療有效量的淀粉樣肽激動(dòng)劑。
3.權(quán)利要求1的一種方法，其中所述的病人系HbAlc值高于正常人HbAlc值上限。
4.權(quán)利要求2的一種方法，其中所述的病人，其HbAlc值高于正常人HbAlc的上限。
5.權(quán)利要求1的一種方法，其中所述的病人HbAlc值約為8％或更高。
6.權(quán)利要求2的一種方法，其中所述的病人HbAlc值約為8％或更高。
7.權(quán)利要求1至6中的任一方法，其中所述的淀粉樣肽激動(dòng)劑為25，28，29Pro-h-淀粉樣肽。
8.權(quán)利要求1至6中的任一方法，其中所述的淀粉樣肽激動(dòng)劑為s-降鈣素。
9.權(quán)利要求1至6中的任一方法，其中所述的淀粉樣肽激動(dòng)劑為h-淀粉樣肽。
10.權(quán)利要求1的一種方法，其中所述的淀粉樣肽激動(dòng)劑，是經(jīng)肌內(nèi)或經(jīng)皮下給藥。
11.權(quán)利要求2的一種方法，其中所述的淀粉樣肽激動(dòng)劑，是經(jīng)肌內(nèi)或經(jīng)皮下給藥。
12.權(quán)利要求7的一種方法，其中所述的淀粉樣肽激動(dòng)劑，是經(jīng)肌內(nèi)或經(jīng)皮下給藥。
全文摘要
治療非胰島素依賴性II型糖尿病的方法，包括服用治療有效量的淀粉樣肽激動(dòng)劑。
文檔編號(hào)A61K38/23GK1163572SQ96190855
公開日1997年10月29日 申請(qǐng)日期1996年6月7日 優(yōu)先權(quán)日1996年6月7日
發(fā)明者O·G·科特曼, R·G·湯普森, J·F·馬倫 申請(qǐng)人:安米林藥品公司