專利名稱：：用于診斷和治療的新的靶向組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及新的靶向組合物及其用途。更具體地，本發(fā)明涉及靶向組合物，該組合物能夠被送至身體的組織而用于診斷成像和/或用于服用生物活性劑。
背景技術(shù)：
：各種成像技術(shù)已被用于診斷疾病。這些成像技術(shù)包括X射線成像。在X射線中，所產(chǎn)生的影像能夠反映患者身體中的結(jié)構(gòu)和組織的不同密度。為了提高這種成像技術(shù)的實(shí)用性，造影劑可被用于提高所感興趣的組織相對于周圍組織的密度。例如，這類造影劑的實(shí)例包括鋇的化合物和碘化物，它們可用于胃腸區(qū)域的X射線研究，所述胃腸區(qū)域包括食管、胃、腸和直腸。造影劑也可用于計(jì)算機(jī)化X射線斷層照相術(shù)(CT)和計(jì)算機(jī)輔助X射線斷層照相術(shù)(CAT)研究，從而改善感興趣組織如胃腸道的影像。磁共振成像(MRI)是另一種成像技術(shù)，與X射線不同，MRI不涉及電離輻射。MRI可用于在各種掃描面上產(chǎn)生身體的截面影像，所述掃描面如軸向、冠狀、弧矢或正交。為了進(jìn)行身體的成像，MRI使用磁場、射頻能量和磁場梯度。組織間的對照或信號強(qiáng)度差異主要反映組織的T1(縱向)和T2(橫向)松弛值以及質(zhì)子密度，所述質(zhì)子密度一般與游離水的含量相對應(yīng)。為了利用對照介質(zhì)改變患者區(qū)域內(nèi)的信號強(qiáng)度，可使用幾個可能的方法。例如，對照介質(zhì)可設(shè)計(jì)成能夠改變T1、T2或質(zhì)子密度。一般地講，MRI需要使用造影劑。如果在進(jìn)行MRI時(shí)不使用造影劑，那么在成像結(jié)果中將感興趣的組織與周圍組織區(qū)分開來是非常困難的。在過去，人們將注意力主要集中在用于MRI的順磁造影劑上，順磁造影劑涉及含有不成對電子的材料。不成對電子在主磁場中起著小磁鐵的作用，從而增加了縱向(T1)和橫向(T2)的松弛速率。順磁造影劑典型地含有金屬離子，如過渡金屬離子，該離子提供了不成對電子源。然而這些金屬離子也通常具有很高的毒性。為了降低毒性，金屬離子典型地與配位體螯合。金屬氧化物(以氧化鐵最著名)已經(jīng)被用作MRI造影劑。盡管小顆粒氧化鐵(如具有直徑小于大約20nm的顆粒)可具有所需的順磁松弛性能，但其主要作用在于體積磁化率。硝基氧化物(nitroxide)是另一類MRI造影劑，這類氧化物也是順磁的，它們具有相對低的松弛性，而且一般較順磁鐵的效果要差?，F(xiàn)有的MRI造影劑均受到大量的限制。例如，成像噪聲增加可能于某些造影劑有關(guān)，包括含螫合金屬的造影劑。這種噪聲一般會使固有的蠕動性運(yùn)動及由呼吸或血管動作引起的運(yùn)動加強(qiáng)。另外，造影劑的強(qiáng)度通常取決于所使用的造影劑的濃度及脈沖序列。造影劑的吸入會使圖像的解釋復(fù)雜，特別是在小腸的末梢部分，除非使用足夠高濃度的順磁物質(zhì)。參見Kommesser等人“磁共振成像”(MagneticResonanceImaging)6124(1988)。其它造影劑對脈沖順序變化的敏感性可能是低的，并且可產(chǎn)生更一致的對比作用。然而，高濃度的顆粒(如鐵酸鹽)可引起特別明顯的磁敏感的人為現(xiàn)象，例如在腸液吸收且可使超磁材料濃縮在結(jié)腸中。毒性是另一個常與目前可獲得的造影劑(包括MRI的造影劑)相關(guān)的問題。例如，鐵酸鹽在口服后常常引起惡心癥狀，以及胃腸脹氣和暫時(shí)的血清鐵升高。游離形式的釓離子(被復(fù)合成Gd-DTPA)具有高的毒性。胃腸道的各種環(huán)境(包括酸性增高(低的pH)的胃和堿性增高(高的pH)的腸中)可增加復(fù)合物脫偶合和分離游離離子的可能性。超聲是另一個研究身體各個部分的有價(jià)值的診斷成像技術(shù)，包括，例如脈管系統(tǒng)，如組織的微細(xì)脈管。超聲比其它診斷技術(shù)具有某些優(yōu)點(diǎn)。例如，包括核醫(yī)學(xué)和X射線的診斷技術(shù)通常包括將病人暴露于離子化的電子射線之下。此射線可引起亞細(xì)胞材料損傷，包括脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)和蛋白質(zhì)。超聲不包括這種潛在有傷害作用的射線。另外，超聲比其它診斷技術(shù)較為便宜，包括CT和MRI的診斷技術(shù)都需要復(fù)雜和昂貴的設(shè)備。超聲包括將病人暴露于聲波下。通常，聲波因身體組織的吸收而驅(qū)散，滲透通過組織或被組織反射。組織對聲波的反射通常是指反向散射或反射性，這形成了開發(fā)超聲成像的基礎(chǔ)。在這種情況下，不同的組織對聲波產(chǎn)生不同的反射。這種不同的反射由各種因素產(chǎn)生，包括被觀察的特定組織的構(gòu)成和密度。超聲包括對不同反射波的檢測，通常使用可檢測具有頻率為1兆赫茲到10兆赫茲(MHZ)的聲波的換能器。檢測的波可被結(jié)合形成測定的圖象，并且將測定的聲波轉(zhuǎn)化成被研究組織的圖象。如同在上文診斷技術(shù)中所述的那樣，超聲通常也使用造影劑。例如造影劑包括，如固體顆粒的懸浮劑、乳化的液滴和充氣泡。參見Hilmann等，美國專利4,466,442及公開的國際專利申請WO92/17212和WO92/21382。Widder等(公開的專利申請EP-A-0324938)公開了穩(wěn)定的泡囊型超聲成像劑，它由加熱變性的生物相容性蛋白質(zhì)，如白蛋白、血紅蛋白和膠原蛋白產(chǎn)生。由超聲產(chǎn)生的圖象的質(zhì)量有明顯改進(jìn)。然而，需要更進(jìn)一步提高，特別是對灌注有血液的脈管組織成像時(shí)。因此，需要改進(jìn)超聲技術(shù)，包括改進(jìn)造影劑，它能夠?qū)γ}管系統(tǒng)和與血管相關(guān)的器官產(chǎn)生醫(yī)學(xué)上有用的圖象。液-氣界面對聲波的反射極為有效。因此，泡囊(包括充氣泡)作為造影劑是有用的。本文使用的“泡囊”是指微泡，它通常是以存在有一種或多種圍繞著內(nèi)腔的膜或壁為特征，內(nèi)腔中填充有氣體或氣體前體。泡囊的例子包括，例如脂質(zhì)體、膠粒等。如下文更進(jìn)一步討論的那樣，泡囊作為造影劑的有效性取決于各種因素，包括如泡囊的尺寸和/或彈性。關(guān)于泡囊尺寸的作用，進(jìn)行如下討論。本領(lǐng)域技術(shù)人員已經(jīng)知道，泡囊反射的信號是泡囊半徑(r6)的函數(shù)(瑞利散射)。因此，在診斷超聲的頻率范圍內(nèi)，直徑為4微米(μm)的泡囊的散射能力大約為直徑2微米泡囊的64倍。因此，通常說，泡囊越大，反射的信號越強(qiáng)。然而，泡囊的尺寸受到泡囊必須通過毛細(xì)管的直徑的限制。通常，含有直徑大于10微米泡囊的造影劑是危險(xiǎn)的，因?yàn)槲⒀芸杀婚]塞。因此，需要造影劑中有超過99％的泡囊的直徑小于10微米。泡囊的平均直徑也是重要的，應(yīng)當(dāng)大于1微米，優(yōu)選大于2微米。泡囊的體積稱重平均直徑應(yīng)當(dāng)約為7-10微米。泡囊的彈性也是重要的。這是因?yàn)楦邚椥缘呐菽铱梢宰冃?，如果需要，從而“壓縮”通過毛細(xì)管和/或泡囊周圍允許血液流過，這可減少閉塞的可能性。含有泡囊的造影劑的有效性也取決于泡囊的濃度。一般地，泡囊濃度越高，造影劑的反射性越大。另一個與泡囊造影劑有效性相關(guān)的重要特性是泡囊的穩(wěn)定性。如本文所述，特別是充氣泡，“泡囊的穩(wěn)定性”是指在暴露于高于大氣壓的壓力下之后泡囊保留所包裹的氣體的能力。作為有效的造影劑，泡囊通常需要在暴露于300毫米(mm)汞柱(Hg)壓力下約1分鐘保留大于50％的包裹氣體。特別有效的泡囊是在暴露于300mmHg壓力下1分鐘后保留75％的包裹氣體，包裹90％氣體的泡囊是特別有效的造影劑。除去壓力之后，泡囊恢復(fù)其原有尺寸也是非常需要的。這通常稱作“泡囊的彈性”。缺乏所需穩(wěn)定性的泡囊是不良的造影劑。例如，如果泡囊在體內(nèi)釋放其包裹的氣體，反射性就會減弱。類似地，具有差的彈性的泡囊的尺寸在體內(nèi)會減小，也導(dǎo)致反射性減弱。現(xiàn)有技術(shù)中公開的泡囊的穩(wěn)定性通常對于用作造影劑來說是不足的。例如，現(xiàn)有技術(shù)公開了泡囊(包括充氣脂質(zhì)體)，它含有含類脂的壁或膜。參見Ryan等的美國專利4,900,540和4,544,545；Tickner等的美國專利4,276,885；Klaveness等的WO93/13809和Schneider等EP0554213和WO91/15244。Lanza等在WO93/20802中公開了聲學(xué)反射寡層脂質(zhì)體，它是可增加兩層之間水的空間的多層脂質(zhì)體或是以非濃縮形式套入兩層內(nèi)的脂質(zhì)體，并因此包含內(nèi)部分離的雙層；該文獻(xiàn)也描述了將其用作超聲造影劑以增強(qiáng)超聲成像及檢測給予病人的脂質(zhì)體中藥物的釋放情況。D′Arrigo在美國專利4,684,479和5,215,680中分別描述了氣/液乳劑和類脂包裹的泡囊。公開在現(xiàn)有技術(shù)中的許多泡囊具有不理想的穩(wěn)定性，因此現(xiàn)有技術(shù)的泡囊在體內(nèi)很可能導(dǎo)致破裂，例如過早地釋放包含在其中的治療劑和/或診斷劑。人們進(jìn)行了各種研究，試圖改進(jìn)泡囊的穩(wěn)定性。這些研究包括，例如，制備膜或壁中含有蛋白質(zhì)(如白蛋白)或通過交聯(lián)明顯增加強(qiáng)度的材料的泡囊。如，參見Klaveness等WO92/17212，其中公開了含有用生物可降解的交聯(lián)劑交聯(lián)的蛋白質(zhì)的泡囊。Moseley等在1991年于Napa，CaliforniameetingoftheSocietyforMagneticResonanceinMedicine上進(jìn)行了介紹，其摘要的題目是“泡囊一種新的MR敏感性造影劑”。Moseley等描述的泡囊含有用人白蛋白殼包裹的空氣。另外，泡囊膜可含有不是蛋白質(zhì)但用生物相容的交聯(lián)劑交聯(lián)的化合物。參見Klavenss等的WO92/17436、WO93/17718和WO92/21382。穩(wěn)定泡囊的現(xiàn)有技術(shù)(包括外膜中使用蛋白質(zhì)或使用膜組分)具有各種缺點(diǎn)。例如，上文所述的交聯(lián)通常包括新材料的使用，包括交聯(lián)的蛋白質(zhì)或其它化合物，其代謝結(jié)果是未知的。另外，交聯(lián)需要另外的化學(xué)步驟，包括分離和純化交聯(lián)的化合物。而且，使用蛋白質(zhì)(如白蛋白)泡囊膜和交聯(lián)的泡囊膜成分賦予了泡囊壁剛性。這會導(dǎo)致泡囊的彈性降低，從而降低了變形和通過毛細(xì)管的能力。因此，現(xiàn)有技術(shù)含有蛋白質(zhì)和/或交聯(lián)材料的造影劑極有可能閉塞血管。因此，需要探索新的和/或更好穩(wěn)定性的造影劑及其制備方法。本發(fā)明涉及此項(xiàng)研究以及達(dá)到其它重要的目的。發(fā)明概要本發(fā)明部分涉及用于診斷成像的造影劑。具體地，在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種用于診斷成像的造影劑，該造影劑含有與靶向配位體結(jié)合的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物和氣體，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。本發(fā)明的另一實(shí)施方案涉及靶向組合物，該組合物含有與靶向配位體結(jié)合的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物和氣體，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。本發(fā)明的再一實(shí)施方案涉及泡囊組合物，該組合物在含水載體中包含含有與靶向配位體結(jié)合的類脂、聚合物或蛋白質(zhì)和氣體的泡囊，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。本發(fā)明的另一實(shí)施方案涉及靶向泡囊組合物，該組合物包含含有與靶向配位體結(jié)合的氟化氣體的泡囊，其中所述的靶向配位體靶向組織或受體。本發(fā)明還有一個實(shí)施方案涉及用于治療或診斷的制劑，與生物活性劑結(jié)合的該制劑含有與靶向配位體結(jié)合的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物和氣體，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。本發(fā)明的再一實(shí)施方案涉及制備靶向組合物的方法，該方法包括將類脂、蛋白質(zhì)或聚合物、氣體和靶向配位體結(jié)合在一起，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。本發(fā)明的另一實(shí)施方案涉及制備用于診斷或治療的制劑的方法，該方法包括將生物活性劑和一組合物結(jié)合在一起，該組合物包含與靶向配位體結(jié)合的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物和氣體，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。本發(fā)明還有一個實(shí)施方案涉及一種靶向組合物，該組合物是通過將類脂、蛋白質(zhì)或聚合物、氣體和靶向配位體結(jié)合在一起制備的，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。本發(fā)明的再一實(shí)施方案涉及用于制得或治療的靶向制劑，該制劑是通過將生物活性劑和一組合物結(jié)合在一起制備的，該組合物包含與靶向配位體結(jié)合的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物和氣體，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。本發(fā)明還有一個實(shí)施方案涉及提供患者內(nèi)部區(qū)域成像的方法，該方法包括(I)給患者服用靶向組合物，該組合物包含與靶向配位體結(jié)合的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物和氣體，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體，以及(II)利用超聲掃描患者以獲得可見的區(qū)域影像。本發(fā)明的另一實(shí)施方案涉及提供患者內(nèi)部區(qū)域影像的方法，該方法包括(I)給患者服用泡囊組合物，該組合物在含水載體中包含含有與靶向配位體結(jié)合的類脂、聚合物或蛋白質(zhì)和氣體的泡囊、其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體，以及(II)利用超聲掃描患者以獲得可見的區(qū)域影像。本發(fā)明的再一實(shí)施方案涉及診斷患者疾病組織存在的方法，該方法包括(I)給患者服用靶向組合物，該組合物包含與靶向配位體結(jié)合的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物和氣體，其中所述的靶向配立體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體，以及(II)利用超聲掃描患者以獲得患者任何疾病組織的可見影像。本發(fā)明還有一個實(shí)施方案涉及診斷患者疾病組織存在的方法，該方法包括(I)給患者服用泡囊組合物，該組合物在含水載體中包含含有與靶向配位體結(jié)合的類脂、聚合物或蛋白質(zhì)和氣體的泡囊，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體，以及(II)利用超聲掃描患者以獲得患者任何疾病組織的可見影像。本發(fā)明的另一實(shí)施方案涉及體內(nèi)治療性傳遞生物活性劑的方法，該方法包括給患者服用治療有效量的制劑，與生物活性劑結(jié)合的該制劑含有靶向組合物，該組合物含有與靶向配位體結(jié)合的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物和氣體，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。本發(fā)明的另一實(shí)施方案提供了下式化合物其中各X1獨(dú)立地為-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-NR4-、-X4-C(＝X5)-、-C(＝X5)-X4-或-C(＝X5)-；各X2和X3獨(dú)立地為直接的鍵、-R5-X4-C(＝X5)-、-R5-C(＝X5)-X4、-X4-C(＝X5)-R5-、-C(＝X5)-X4-R5-、-X4-R5-C(＝X5)-X4-、-R5-X4-C(＝X5)-R5-C(＝X5)-X4-或-R5-C(＝X5)-X4-R5-X4-C(＝X5)-；各X4獨(dú)立地為-O-、-NR4-或-S-；各X5獨(dú)立地為O或S；M為-R5-X4-C(＝X5)-、-R5-C(＝X5)-X4-、-R5-X4-(YX5)P(＝X5)-X4-或-X4-(YX5)P(＝X5)-X4-R5-；Y為氫或可藥用抗衡離子；Z為親水聚合物；Q為靶向配位體或另外的前體；各R1獨(dú)立地為含1至約50碳的烷基；各R2獨(dú)立地為含1至約30碳的亞烷基；各R3和R4獨(dú)立地為氫或含1至約10碳的烷基；各R5獨(dú)立地為直接的鍵或含1至約30碳的亞烷基。本發(fā)明還有一個實(shí)施方案涉及下式化合物L(fēng)-P-T其中L為類脂、蛋白質(zhì)或聚合物；P為親水聚合物；和T為靶向配位體。通過下文詳細(xì)的說明，本發(fā)明的這些方面及其它方面會變得更加清楚。發(fā)明詳述正如上文及整個公開文本中所使用的，除非另有指明，下列術(shù)語將被理解為具有下列含義?！邦愔笔侵竿ǔ閮尚院蜕锵嗳莸暮铣苫蛱烊淮嬖诘幕衔铩ｎ愔湫偷睾杏H水成分和疏水成分。類脂的實(shí)例包括脂肪酸、中性脂肪、磷脂、糖脂、表面活性劑、脂肪醇、石蠟、萜烯和類固醇。“類脂組合物”是指典型地在含水介質(zhì)中含有類脂化合物的組合物。類脂組合物的實(shí)例包括懸浮液、乳劑和泡囊組合物?！邦愔苿笔侵高€含有生物活性劑的類脂組合物?！芭菽摇笔侵竿ǔＬ卣髟谟诖嬖谀軌蛐纬梢粋€或多個內(nèi)部空隙的一個或多個壁或膜的球體。例如，泡囊可由類脂(包括這里描述的各種類脂)、蛋白質(zhì)材料或聚合物材料(包括中性、合成和半合成的聚合物)形成。優(yōu)選的泡囊是指那些含有由類脂形成的壁或膜的泡囊。在這些優(yōu)選的泡囊中，類脂可以是單層或雙層形式，單層或雙層類脂可用于形成單層或雙層泡囊。在一個以上單層或雙層的情況下，單層或雙層通常是同軸的。因此，類脂可用于形成單一疊層泡囊(包含一個單層或雙層)、低聚疊層泡囊(包含大約兩個或大約三個單層或雙層)或多個疊層泡囊(包含大于大約三個單層或雙層)。類似地，由蛋白質(zhì)或聚合物制得的泡囊可包含一個或多個同軸壁或膜。由蛋白質(zhì)或聚合物制得的壁或膜基本上可以是固體(均質(zhì))，它們或者是多孔或半多孔。這里描述的泡囊通常是指如脂質(zhì)體，膠束，水泡，微泡，泡囊，類脂、聚合物和/或蛋白質(zhì)涂層的水泡、微泡和/或泡囊，泡囊，氣溶膠，籠形結(jié)合泡囊等等。根據(jù)需要，泡囊內(nèi)部的空隙可由液體(如包括含水液體)、氣體、氣體前體和/或固體或溶質(zhì)材料填充，例如包括靶向配位體和/或生物活性劑。“脂質(zhì)體”通常是指兩性化合物的球形簇束或聚集體，包括類脂化合物，所述化合物典型地為一層或多層同軸層，如雙層。它們在這里也可指類脂泡囊。由非離子類脂形成的脂質(zhì)體也可以是指“niosomes”?！澳z束”是指由類脂形成的膠體。在有些優(yōu)選的方案中，膠束包含單層或六方形H2相構(gòu)型。在其它優(yōu)選的方案中，膠束可包含雙層構(gòu)型?！皻馊苣z”通常是指以具有許多小的內(nèi)部空隙為特征的球體。氣溶膠可由合成材料(如由間苯二酚和甲醛制得的泡沫塑料)形成，也可由天然材料如多糖或蛋白質(zhì)形成?！盎\形物”是指與泡囊有關(guān)的固體、半多孔或多孔顆粒。在優(yōu)選的方案中，籠形物可以形成含由泡囊組成的空洞的籠形結(jié)構(gòu)。如果需要的話，可將穩(wěn)定劑與籠形物相結(jié)合，從而促進(jìn)泡囊與籠形物的結(jié)合。例如，可形成籠形物的適宜材料包括多孔磷灰石如羥基磷灰石鈣，以及聚合物和金屬離子的沉淀物如與鈣鹽沉淀的藻酸。本發(fā)明的泡囊優(yōu)選含有氣體或氣體前體。“充填氣體的泡囊”是指包封氣體的泡囊，而“充填氣體前體的泡囊”是指包封氣體前體的泡囊。泡囊可最小地、部分地或基本上完全地被氣體和/或氣體前體填充。在有些優(yōu)選的實(shí)施方案中，泡囊基本上完全被氣體和/或氣體前體填充。在氣體和/或氣體前體填充的泡囊中所使用的術(shù)語“基本上”是指泡囊內(nèi)部空隙體積中大于大約50％是由氣體組成。優(yōu)選泡囊內(nèi)部空隙體積中大于大約60％基本上是由氣體組成，大于大約70％更優(yōu)選；甚至更優(yōu)選泡囊內(nèi)部空隙體積中大于大約80％基本上是由氣體組成，大于大約90％還要更優(yōu)選；在一個特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，泡囊內(nèi)部空隙體積中大于大約95％是由氣體組成，大約為100％尤其優(yōu)選。盡管不在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案考慮之列，但如果需要的話，泡囊可不含有或基本上不含有氣體或氣體前體?！芭菽医M合物”是指典型地在含水介質(zhì)中包含泡囊的組合物。“包囊制劑”是指還含有生物活性劑的泡囊組合物。例如，用于泡囊制劑的適宜泡囊或泡囊類包括充填氣體的泡囊和充填氣體前體的泡囊。乳劑”是指兩種或多種液體的類脂混合物，而且通常以膠體形式存在。類脂可非均勻地分散在乳劑中。另外，類脂可以如簇束或?qū)?包括單層或雙層)形式存在?！皯腋∫骸笔侵革h浮在液體中的細(xì)分液體或固體顆粒的混合物，該混合物可在延長的時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定。“六方形HII相結(jié)構(gòu)”一般是指液體介質(zhì)(如含水介質(zhì))中的管形聚集體，其中類脂的親水部分通常與管內(nèi)的液體環(huán)境具有內(nèi)在的關(guān)系。類脂的疏水部分一般向外發(fā)射，配合物呈現(xiàn)六方管的形狀。在六方相結(jié)構(gòu)中，一般將許多管包裝在一起。“患者”是指動物，包括哺乳動物，特別是入。短語“患者的內(nèi)部區(qū)域”和“感興趣的區(qū)域”是指整個患者或患者的特別區(qū)域或部位?；颊叩膬?nèi)部區(qū)域及感興趣區(qū)域可包括如利用診斷成像造影的區(qū)域和/或利用生物活性劑處理的區(qū)域。這類區(qū)域的實(shí)例包括如心臟區(qū)域(包括心肌組織)以及其它身體組織(包括脈管系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)以及腫瘤組織)。這里使用的短語“脈管系統(tǒng)”是指身體中或器官中或部分身體中的血管。“生物活性劑”是指可用作治療劑和診斷劑的物質(zhì)，例如在診斷病人是否存在某種疾病的方法中和/或在治療病人疾病的方法中應(yīng)用的物質(zhì)。本文所使用的“生物活性劑”也指能夠在體外和/或體內(nèi)發(fā)揮生物作用的物質(zhì)。生物活性劑可以是中性的或帶正電荷的或帶負(fù)電荷的。適宜的生物活性劑的實(shí)例包括診斷劑、藥物、合成的有機(jī)分子、蛋白質(zhì)、肽、維生素、載體化合物和遺傳物質(zhì)，該遺傳物質(zhì)包括核苷、核苷酸和多核苷酸?！霸\斷劑”是指可在使病人內(nèi)臟器官成像和/或診斷病人是否存在某種疾病的方法中使用的任何試劑。例如，診斷劑的實(shí)例包括在超聲、核磁共振或計(jì)算機(jī)化斷層X射線照相法中應(yīng)用的造影劑，例如，它包括脂本文所描述的類脂和/或泡囊組合物。本文所使用的“聚合物”是指由一個或多個重復(fù)單位化合形成的分子。因此，例如，術(shù)語“聚合物”可以為二聚物、三聚物和低聚物。聚合物可以為合成的、天然存在的或半合成的。在優(yōu)選的形式中，術(shù)語“聚合物”指包含10個或多個重復(fù)單位的分子。“增稠劑”是指各種通常為親水性的物質(zhì)，當(dāng)將其與本文所描述的類脂和/或泡囊組合物混合時(shí)，該物質(zhì)可發(fā)揮粘度調(diào)節(jié)劑、乳化劑和/或助溶劑、懸浮劑和張力增加劑的作用。我們希望由于該特性，增稠劑能夠有助于維持組合物的穩(wěn)定性。“分散劑”是指表面活性劑，當(dāng)將其加到膠體微粒(例如包括本文所描述的某些類脂和/或泡囊組合物)的懸浮介質(zhì)中時(shí)，該物質(zhì)可促進(jìn)微粒的均勻分離。在某些優(yōu)選實(shí)例中，分散劑可包含極好的硅氧烷化合物。“遺傳物質(zhì)”通常是指核苷酸和多核苷酸，包括脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。遺傳物質(zhì)可通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的合成化學(xué)方法，或通過重組技術(shù)，或通過聯(lián)合使用兩種方法來制備。NDA和RNA可包含或不包含非天然核苷酸并且可以為單鏈的或雙鏈的?！斑z傳物質(zhì)”也指有意義和反意義DNA和RNA，即，與DNA和/或RNA的特定核苷酸序列互補(bǔ)的核苷酸序列?！八幬铩笔侵缚捎糜谥委?包括預(yù)防、診斷、減輕或治愈)病人疾病的任何治療劑或預(yù)防劑。在治療上有用的肽、多肽和多核苷酸可包括在術(shù)語藥物的含義內(nèi)?！胺€(wěn)定劑”是指生物相容性的并且能夠促進(jìn)泡囊在類脂組合物中形成的物質(zhì)。本文所使用的“穩(wěn)定劑”也指生物相容性的并且能夠改善泡囊穩(wěn)定性的物質(zhì)。在某些優(yōu)選實(shí)例中，穩(wěn)定劑包含聚合物。本文所使用的“聚合物”是指由兩個或多個重復(fù)單位化合形成的分子。因此，例如，術(shù)語“聚合物”包括二聚物、三聚物和低聚物。在其它某些優(yōu)選的實(shí)例中，穩(wěn)定劑包含非聚合物質(zhì)，例如包含單體物質(zhì)?！胺€(wěn)定劑”也包括某些本發(fā)明生物活性劑。穩(wěn)定劑可以是中性的或帶正電荷的或帶負(fù)電荷的。優(yōu)選的中性穩(wěn)定劑為極性物質(zhì)。在涉及類脂的優(yōu)選實(shí)例中，穩(wěn)定劑可以通過共價(jià)鍵和/或非共價(jià)鍵與類脂化合物連接?！芭菽曳€(wěn)定性”是指填充氣體的泡囊在大約300mmHg下暴露大約1分鐘后，保留其中所包封氣體的能力。測定泡囊穩(wěn)定性并用百分?jǐn)?shù)(％)表示，它是最初包封在泡囊中并且在解除壓力后所保留的那部分氣體量。泡囊穩(wěn)定性也與“泡囊彈性”有關(guān)，它是指在解除壓力后泡囊恢復(fù)到其原來尺寸的能力?！肮矁r(jià)結(jié)合”是指分子間結(jié)合，它涉及在兩個原子的結(jié)合軌道上共用電子?！胺枪矁r(jià)結(jié)合”是指在兩個或多個獨(dú)立的分子間發(fā)生的分子間相互作用，它不涉及共價(jià)鍵。分子間相互作用依賴于各種因素，例如包括所涉及分子的極性(如果有的話)和所涉及分子的電荷(正電荷或負(fù)電荷)等等。優(yōu)選地，非共價(jià)鍵結(jié)合選自離子相互作用，偶極-偶極相互作用和范德華力及其混合作用。“離子相互作用”或“靜電相互作用”是指在兩個或多個分子間的分子間相互作用，其中，各分子是帶正電荷的或帶負(fù)電荷的。因此，例如“離子間相互作用”或“靜電相互作用”是指在第一個帶正電荷的分子和第二個帶負(fù)電荷的分子之間的引力。例如，離子或靜電相互作用包括在帶負(fù)電荷的穩(wěn)定劑，例如遺傳物質(zhì)，以及帶正電荷的類質(zhì)，例如，陽離子類脂如月桂?；谆寤@。“偶極-偶極相互作用”通常是指發(fā)生在兩個或多個極性分子間的引力。因此，“偶極-偶極相互作用”是指不帶電荷的，局部帶正電荷的第一個極性分子(通常稱作δ+)和不帶電荷的，局部帶負(fù)電荷的第二個極性分子(通常稱作δ-)之間的引力。例如偶極-偶極相互作用的實(shí)例為磷脂酰膽堿帶正電荷的首基，例如，膽堿首基和帶負(fù)電荷的原子，例如雜原子，如，在穩(wěn)定劑如多糖中存在的氧，氮或硫之間的引力?！芭紭O-偶極相互作用”也指分子間的氫鍵，其中，氫原子作為帶負(fù)電荷原子間的橋?qū)Κ?dú)立的分子發(fā)揮作用并且其中氫原子通過共價(jià)鍵占據(jù)第一個分子和通過靜電力占據(jù)第二個分子?！胺兜氯A力”是指非極性分子間的引力，它通過量子力學(xué)計(jì)算。范德華力通常與相鄰分子誘導(dǎo)的瞬間偶極有關(guān)并且涉及電子分布的改變?！皻滏I”是指引力或電橋，它可發(fā)生在通過共價(jià)鍵結(jié)合到帶負(fù)電荷原子(例如氧，硫，氮等等)上的氫原子和另一帶負(fù)電荷的原子之間。氫鍵可以發(fā)生在第一個分子的氫原子和第二個分子的帶負(fù)電荷原子之間(分子間氫鍵)。氫鍵也可以發(fā)生在一個分子所包含的氧原子和帶負(fù)電荷的原子之間(分子內(nèi)氫鍵)?！坝H水性相互作用”是指可基本上結(jié)合，吸收和/或溶解在水中的分子或部分分子。“生物相容”是指通常對生物功能無損害并且不產(chǎn)生任何程度不適宜的毒性，包括過敏反應(yīng)和疾病狀態(tài)的物質(zhì)。在某些實(shí)例中，“與……結(jié)合”是指在本發(fā)明組合物，包括在類脂組合物和泡囊組合物中合并靶向配位體?！芭c……結(jié)合”也指在本發(fā)明組合物，包括在類脂組合物和泡囊組合物中合并生物活性劑。生物活性劑和/或靶向配位體可以與本發(fā)明組合物以任何方式結(jié)合。例如，在類脂組合物中，生物活性劑和/或靶向配位體可以通過共價(jià)鍵和/或非共價(jià)鍵與類脂化合物或穩(wěn)定劑，也可以不與穩(wěn)定劑結(jié)合。在泡囊組合物中，生物活性劑和/或靶向配位體可以包封在泡囊的內(nèi)部空間。例如，生物活性劑和/或靶向配位體也可以通過在泡囊壁內(nèi)所包含的類脂之間散布而結(jié)合在泡囊壁內(nèi)。另外，希望將生物活性劑和/或靶向配位體設(shè)置在泡囊的表面。在任何情況下，生物活性劑和/或靶向配位體可通過化學(xué)方法與泡囊壁，例如包括泡囊的內(nèi)壁和/或外壁相互作用并且可基本上保留在泡囊壁上。例如，該相互作用可采取共價(jià)鍵結(jié)合和/或非共價(jià)鍵結(jié)合的形式。在某些實(shí)例中，相互作用可使泡囊穩(wěn)定。“靶向配位體”是指可以促進(jìn)本發(fā)明組合物與體內(nèi)組織和/或受體靶向結(jié)合的物質(zhì)。靶向配位體可以是合成的、半合成的或天然存在的。例如，可作為靶向配位體的物質(zhì)包括蛋白質(zhì)包括抗體，糖蛋白和外源凝集素，肽，多肽，糖類包括單糖和多糖，維生素，甾體化合物，甾體化合物類似物，激素，輔助因子，生物活性劑和延長物質(zhì)，包括核苷，核苷酸和多核苷酸。靶向配位體的“前體”是指可轉(zhuǎn)化為靶向配位體的物質(zhì)。例如，該轉(zhuǎn)化可能涉及將前體與靶向配位體結(jié)合。靶向前體部分的實(shí)例包括馬來酰亞胺基、二硫基如鄰吡啶基二硫基、乙烯砜基、疊氮基和α-吲哚乙?；?。“肽”是指可包含大約20-100個氨基酸基的含氮化合物。“蛋白質(zhì)”是指可包含大約100個以上氨基酸基含氮化合物。“包衣”或“涂層”是指穩(wěn)定劑與類脂和/或泡囊的相互作用并且可涉及共價(jià)鍵和/或非共價(jià)鍵結(jié)合。“組織”通常指可完成特定功能的專有細(xì)胞。已知，本文所使用的術(shù)語“組織”可以指各個細(xì)胞或大量細(xì)胞或細(xì)胞的聚集體，例如，膜或器官。術(shù)語“組織”也包括某個異常細(xì)胞或大量異常細(xì)胞。例如，組織的實(shí)例包括心肌組織(也指心臟組織或心肌)，包括心肌細(xì)胞和心肌細(xì)胞；膜組織，包括內(nèi)皮和上皮；層狀體；結(jié)締組織，包括間質(zhì)組織；以及腫瘤?！笆荏w”指在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞表面上的分子結(jié)構(gòu)，一般地，其特點(diǎn)為選擇性地與特定物質(zhì)結(jié)合。例如，受體的實(shí)例包括供肽激素，神經(jīng)遞質(zhì)，抗原，補(bǔ)體碎片和免疫球蛋白結(jié)合的細(xì)胞表面受體和供甾體激素結(jié)合的細(xì)胞質(zhì)受體。本發(fā)明范圍內(nèi)的受體實(shí)例為糖蛋白GPIIbIIIa，它是血小板整聯(lián)蛋白?！皟?nèi)皮細(xì)胞”或“內(nèi)皮”中細(xì)胞和/或組織的聚集體，所述組織可以是正常的和/或生病的并且可以包含單層扁平透明的內(nèi)皮細(xì)胞，該層細(xì)胞可以以邊對邊的方式或以重疊的方式連接形成膜?？梢姡瑑?nèi)皮細(xì)胞在漿膜的表面，作為心臟內(nèi)膜、血管和淋巴管的一部分，在腦和脊髓的表面和在眼的前房中。內(nèi)皮起源于胚胎的中胚層并且包括心臟組織，包括梗塞的心臟組織，心血管系統(tǒng)，外周血管系統(tǒng)，如動脈、靜脈和毛細(xì)血管(血管的位置處于心臟的外周)，血凝塊和動脈粥樣硬化斑周圍的區(qū)域?！吧掀ぜ?xì)胞”或“上皮”中細(xì)胞和/或組織的聚集體，所述組織可以是正常的和/或生病的并且可以包含一層或多層細(xì)胞，所述細(xì)胞可以通過支撐在基膜上的游離膠質(zhì)物質(zhì)連接在一起。內(nèi)皮可以分成各種類型、例如包括單層細(xì)胞(簡單的內(nèi)皮)；大于一層的細(xì)胞(分層內(nèi)皮)；和基本上固定在一起，不顯示分層現(xiàn)象的3-4層細(xì)胞。不同形式的簡單內(nèi)皮通常指鱗狀的、鋪壁的、圓柱形的、含腺的、球狀的和/或有纖毛的。內(nèi)皮起源于胚胎的中胚層或下胚層。內(nèi)皮包括心臟組織，包括梗塞的心臟組織，心血管系統(tǒng)，外周血管系統(tǒng)，如動脈、靜脈和毛細(xì)血管、血凝塊和動脈粥樣硬化般周圍的區(qū)域?！靶募　蓖ǔＶ感呐K組織，包括心肌細(xì)胞，心肌，內(nèi)皮和上皮細(xì)胞。術(shù)語“心肌”包括梗塞的心臟組織，心血管系統(tǒng)，外周血管系統(tǒng)，如動脈、靜脈和毛細(xì)血管(血管的位置在心臟的外周)，血凝塊，血栓和動脈粥樣硬化斑周圍的區(qū)域?！澳[瘤細(xì)胞”或“腫瘤”指異常細(xì)胞和/或組織的聚集體，所述組織可能與疾病狀態(tài)有關(guān)，其特點(diǎn)是不受控制的細(xì)胞增殖。疾病狀態(tài)可涉及各種細(xì)胞類型，例如包括扁平，上皮和心肌細(xì)胞。疾病狀態(tài)包括腫瘤，癌癥，白血病和再狹窄損傷?！巴榛敝钢辨?，支鏈或環(huán)狀烴基。優(yōu)選地，烷基為直鏈或支鏈烴基，更優(yōu)選直鏈烴基。例如，支鏈或直鏈烴基的實(shí)例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、正戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基。環(huán)狀烴基(即環(huán)烷基)的實(shí)例包括環(huán)戊基、環(huán)己基和環(huán)庚基?！版溝┗敝钢辽俸粋€碳-碳雙鍵的烷基。例如鏈烯基的實(shí)例包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、癸烯基和十二碳烯基?！巴檠趸敝竿榛?O-基，其中烷基如上所述。例如烷氧基的實(shí)例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基和庚氧基。在某種程度上，本發(fā)明的目的是提供類脂和/或泡囊組合物。所述組合物的實(shí)例包括類脂組合物，它包含類脂、靶向配位體和氣體或氣體的前體，其中所述靶向配位體可以是體內(nèi)的靶組織、細(xì)胞和/或受體并且可以通過連接基連接到類脂上。所述組合物的實(shí)例也包括泡囊組合物，它在含水載體中包含有類脂，蛋白質(zhì)或聚合物組成的泡囊，靶向配位體和氣體或氣體前體，其中，所述靶向配位體可以是體內(nèi)的靶組織、細(xì)胞和/或受體在后面的實(shí)例中，靶向配位體可以通過連接基連接到泡囊上，包括構(gòu)成泡囊的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物。就類脂組合物，并且特別是泡囊形式的類脂組合物而言，在低于所涉及類脂的凝膠-液晶相轉(zhuǎn)變溫度下制備類脂組合物是有利的。該相轉(zhuǎn)變溫度是指類脂雙層將由凝膠狀態(tài)轉(zhuǎn)化為液晶狀態(tài)的溫度。例如，見Chapnan等，J.Biol.Chem.1974249，2512-2521。通常認(rèn)為，由凝膠狀態(tài)-液晶狀態(tài)相轉(zhuǎn)變溫度高的類脂制備的泡囊在任何特定溫度下的不透性增強(qiáng)。見DerekMarsh，CRCHandbookofLipidBilayers(CRCPress，BocaRaton，F(xiàn)L1990)，139頁，關(guān)于飽和的二?；?sn-甘油基-3-膽堿磷酸的主鏈解鏈轉(zhuǎn)變。本領(lǐng)域技術(shù)人員將很容易獲得各種類脂的凝膠狀態(tài)-液晶狀態(tài)相轉(zhuǎn)變溫度并且例如在LiposomeTechnology，Vol.I，1-18(CRCPress，1984)中描述。下表列出了某些有代表性的類脂及其相轉(zhuǎn)變溫度。表1飽和的二?；?sn-甘油基-3-膽堿磷酸主鏈解鏈轉(zhuǎn)變溫度</tables>例如，見DerekMarsh.CRCHandbookofLipidBilayers.139頁(CRCPress.BocaRaton，F(xiàn)L1990)。通過將至少少量，例如大約為所使用類脂總量1-10摩爾％的負(fù)電荷類脂混合到本發(fā)明類脂和/或泡囊組合物中，可以提高泡囊的穩(wěn)定性。例如適宜的負(fù)電荷類脂包括磷脂酰絲氨酸、磷脂酸和脂肪酸。不受任何工作理論的約束的條件下，該負(fù)電荷類脂可通過抑制泡囊因融合在一起引起破裂的趨勢來提高泡囊的穩(wěn)定性。因此，負(fù)電荷類脂通過在泡囊的外表面建立均勻的負(fù)電荷層發(fā)揮作用，其中，所述負(fù)電荷層將受到在其它類似泡囊上的、類似的負(fù)電荷層的排斥。在該方法中，泡囊彼此接近的機(jī)會減少，泡囊彼此接近可導(dǎo)致膜或各泡囊皮的破裂和將所接觸的泡囊合并成一個大泡囊。當(dāng)然，該合并方法的繼續(xù)將導(dǎo)致明顯的泡囊降解。特別是就泡囊組合物而言，所使用的類脂物質(zhì)也優(yōu)選為柔韌的。這在本發(fā)明范圍內(nèi)就意味著，泡囊可通過改變其形狀而通過直徑小于泡囊直徑的孔。據(jù)信，多種類脂適宜于混合到類脂組合物中。特別就泡囊組合物而言，可使用膠束和/或脂質(zhì)體，以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知可適用于泡囊制備的任何物質(zhì)及其組合物。所使用的類脂可以是天然的、合成的或半合成的類脂。如上所述，例如適宜的類脂通常包括脂肪酸、天然脂肪、磷脂、糖脂、脂族醇和蠟、萜烯和甾體化合物。例如，可用于制備本發(fā)明類脂組合物的類脂實(shí)例包括脂肪酸、溶血類脂、膽堿磷酸、如與血小板激活因子(PAF)有關(guān)的物質(zhì)(AvantiPolarLipids，Alabaster.AL)，包括1-烷基-2-乙?；?sn-甘油基3-膽堿磷酸和1-烷基-2-羥基-sn-甘油基3-膽堿磷酸，它們以血凝塊作為靶；含飽和和不飽和類脂的磷脂酰膽堿，包括二油酰磷脂酰膽堿、二十四酰磷脂酰膽堿、二十五酰磷脂酰膽堿、二十二酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰膽堿(DPPC)、二硬脂酰膽堿(DSPC)和二花生四烯酰基磷脂酰膽堿(DAPC)、磷脂酰乙醇胺(如二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕櫚酰乙醇胺(DPPE)和二硬脂酰乙醇胺(DSPE))、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油(包括二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG))、磷脂酰肌醇、鞘類磷脂(如鞘磷脂)、糖酯(如神經(jīng)節(jié)甙酯GM1和GM2)、葡萄糖酯、硫脂類、糖鞘類磷脂、磷脂酸(如二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)和二硬脂酰磷脂酸(DSPA))、棕櫚酸、花生四烯酸、油酸、載有多聚體的類脂(如甲殼質(zhì)、透明質(zhì)酸、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇(PEG))，本文中作為“聚乙二醇化類脂”也指優(yōu)選的載有多聚體的類脂，它包括二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DPPE-PEG)，是指具有與其連接的PEG聚合物的類脂DPPE，包括，如DPPE-PEG5000，是指連接平均分子量約5000的PEG聚合物的二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺聚合物、載有磺化的單-、雙、寡或多糖的類脂，膽固醇、硫酸膽固醇酯和半琥珀酸膽固醇酯，半琥珀酸生育酚，具有連接脂肪酸的醚和酯的類脂，聚合的類脂(現(xiàn)有技術(shù)中各種各樣已知的)，磷酸二乙酰酯，磷酸雙二十六醇酯，硬脂酰胺，心磷胺，具有6-8個碳原子長度的短鏈脂肪酸的磷脂，具有不對稱?；?如一個為6個碳原子的酰基鏈而另一個為12個碳原子的?；?的合成磷脂，神經(jīng)酰胺，包括niosome的非離子脂質(zhì)體如，聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯化的脫水山梨糖醇脂肪酸酯、羥基硬脂酸甘油聚乙二醇酯、蓖麻醇酸甘油聚乙二醇酯、乙氧化大豆甾醇、乙氧化蓖麻油聚氧乙烯-聚氧丙烯聚合物和硬脂酸聚氧乙烯脂肪酸酯，甾醇脂肪酸酯包括硫酸膽甾醇酯、丁酸膽甾醇酯、異丁酸膽甾醇酯、棕櫚酸膽甾醇酯、硬脂酸膽甾醇酯、乙酸羊毛甾醇酯、棕櫚酸麥角甾醇酯和正丁酸值物甾醇酯，糖酸甾醇酯包括葡糖苷酸膽甾醇酯、葡糖苷酸羊毛甾醇酯、匍糖苷酸7-去氫膽甾醇酯、匍糖苷酸麥角甾醇酯、葡糖酸膽甾醇酯、葡糖酸羊毛甾醇酯和匍糖酸麥角甾醇酯，糖酸和醇的酯包括匍糖苷酸十二酯、匍糖苷酸十八酯、葡糖苷酸十四酯、葡糖酸十二酯、匍糖酸十四酯和葡糖酸十八酯，糖和脂肪酸的酯包括十二酸蔗糖酯、十二酸果糖酯、棕櫚酸蔗糖酯、硬脂酸蔗糖酯、匍糖苷酸、匍糖酸、和多糖醛酸，皂草苷包括菝葜皂苷配基、異菝葜皂苷配基常春配基齊墩果酮酸和洋地黃毒苷配基，二月桂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、二棕櫚酸甘油酯、甘油和甘油酯包括三棕櫚酸甘油酯二硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、二肉豆蔻酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯，長鏈醇包括正癸醇、十二醇、十四醇、十六醇和正十八醇，6-(5-膽甾烷-3β-基氧基)-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖甙，二半乳糖二甘油酯，6-(5-膽甾烷-3β-基氧基)己基-6-氨基-6-脫氧-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖甙，6-(5-膽甾烷-3β-基氧基)己基-6-氨基-6-脫氧-1-硫代-α-D-吡喃甘露糖甙，12-(((7′-二乙基氨基香豆素-3-基)羰基)甲基氨基)十八酸，N-〔12-(((7′-二乙基氨基香豆素-3-基)羰基)甲基氨基)十八?；?2-氨基棕櫚酸，(4′-三甲基氨基)丁酸膽甾烷酯，N-琥珀?；王Ａ字Ｒ掖及?，1，2-二油酰-sn-甘油，1，2-二棕櫚酰-sn-3-琥珀酰甘油，1，3-二棕櫚酰-2-琥珀酰甘油，1-十六烷基-2-棕櫚酰甘油二氧磷基乙醇胺和棕櫚酰高半胱氨酸和/或它們的組合物。如果需要，可以使用陽離子類脂，例如，N-〔1-(2，3-二油酰氧基)丙基〕-N，N，N-三甲基銨氯化物(DOTMA)、1，2-二油酰氧基-3-(三甲基氨基)丙烷(DOTAP)和1，2-二油酰-3-(4′-三甲基氨基)-丁酰-sn-甘油(DOTB)。如果在類脂組合物中使用陽離子類脂，陽離子類脂與非陽離子類脂的摩爾比約為1∶1000-1∶100。優(yōu)選地，陽離子類脂與非陽離子類脂的摩爾比約為1∶2-1∶10，約為1∶1-1∶2.5是優(yōu)選的。甚至更優(yōu)選陽離子類脂與非陽離子類脂的摩爾比約為1∶1。在同時(shí)含有陽離子和非陽離子類脂的類脂組合物的情況下，各種類脂可用作非陽離子類脂。優(yōu)選地，該非陽離子類脂包括一種或多種DPPC、DPPE和二油酰磷脂酰乙醇胺。作為上文所列陽離子類脂的替代物，在本發(fā)明的類脂組合物中也可以使用載有陽離子聚合物的類脂，如聚賴氨酸或聚精氨酸以及烷基磷酸酯、烷基次磷酸酯和烷基亞磷酸酯。在本發(fā)明的某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，類脂組合物可包括下式的一種或多種陽離子類脂其中，處x，y和z獨(dú)立地為0-約100的整數(shù)；各X1獨(dú)立地為-O-、-S-、NR5-、-C(＝X2)-、-C(＝X2)-N(R5)-、-N(R5)-C(＝X2)-、-C(＝X2)-O-、-O-C(＝X2)-或-X2-(R5X2)P(＝X2)-X2-；各X2獨(dú)立地為O或S；各Y1獨(dú)立地為磷酸根、N(R6)a-、S(R6)a-、P(R6)a-或-CO2R6，其中a為1-3的整數(shù)；各Y2獨(dú)立地為-N(R6)b-、-S(R6)b-或-P(R6)b-，其中b為0-2的整數(shù)；各Y3獨(dú)立地為磷酸根、N(R6)a-、S(R6)a-、P(R6)a-或-CO2R6，其中a為1-3的整數(shù)；各R1、R2、R3和R4獨(dú)立地為1到大約20個碳的亞烷基；各R5獨(dú)立地為氫或1到大約10個碳的烷基；并且各R6獨(dú)立地為-[R7-X3]c-R8或-R9-[X4-R10]d-Q，其中各c和d獨(dú)立地為0-約100的整數(shù)；各Q獨(dú)立地為磷酸根、-N(R11)q、-S(R11)q、-P(R11)q或-CO2R6，其中q為1-3的整數(shù)；各X3和X4獨(dú)立地為-O-、-S-、NR5-、-C(＝X2)-、-C(＝X2)-N(R5)-、-N(R5)-C(＝X2)-、-C(＝X2)-O-、-O-C(＝X2)-或-X2-(R5X2)P(＝X2)-X2-；各R7獨(dú)立地為1到大約20個碳的亞烷基；各R8獨(dú)立地為氫或1到大約60個碳的烷基；各R9和R10獨(dú)立地為1到大約20個碳的亞烷基；并且各R11獨(dú)立地為-[R7-X3]c-R8或-R9-[X4-R10]d-W，其中各W獨(dú)立地為磷酸根、-N(R12)w、-S(R12)w、-P(R12)w或-CO2R6，其中w為1-3的整數(shù)；并且R12為-[R7-X3]c-R8，條件是式(I)化合物至少含一個并且優(yōu)選至少含兩個季銨鹽?？刹⑷氡景l(fā)明組合物中的另一陽離子類脂化合物為下式化合物其中各Y1獨(dú)立地為磷酸根、N(R2)a-、S(R2)a-、P(R2)a-或-CO2R6，其中a為1-3的整數(shù)；R1為1到大約60個碳的亞烷基，它包含0到大約30個-O-，-S-、NR3-或-X2-(R3X2)P(＝X2)-X2-雜原子或雜原子基；R2為-R4-[(X1-R5)x-Y2]y-R6，其中各x和y獨(dú)立地為0到大約100的整數(shù)；各X1獨(dú)立地為直接的鍵、-O-、-S-、NR3-、-C(＝X2)-、-C(＝X2)-N(R3)-、-N(R3)-C(＝X2)-、-C(＝X2)-O-、-O-C(＝X2)-或-X2-(R3X2)P(＝X2)-X2-；各X2獨(dú)立地為O或S；各Y2獨(dú)立地為-S(R2)b-、-N(R2)b-或-P(R2)b-，其中b為0-2的整數(shù)；各R3獨(dú)立地為氫或1到大約10個碳的烷基；各R4和R5獨(dú)立地為直接的鍵或1到大約30個碳的亞烷基，它包含0到大約15個-O-、-S-、NR3-或-X2-(R3X2)P(＝X2)-X2-雜原子或雜原子基；并且各R6獨(dú)立地為氫或1到大約60個碳的烷基，它包含0到大約30個-O-、-S-、NR3-或-X2-(R3X2)P(＝X2)-X2-雜原子或雜原子基；條件是式(II)化合物至少含一個并且優(yōu)選至少含兩個季銨鹽。在另一實(shí)例中，本發(fā)明類脂組合物可包含下式陽離子類脂化合物其中各x、y和z獨(dú)立地為0到大約100的整數(shù)；各X1獨(dú)立地為-O-、-S-、NR5-、-C(＝X2)-、-C(＝X2)-N(R5)-、-N(R5)-C(＝X2)-、-C(＝X2)-O-、-O-C(＝X2)-或-X2-(R5X2)P(＝X2)-X2-；各X2獨(dú)立地為O或S；各Y1獨(dú)立地為-O-、-N(R6)a-、-S(R6)a-或-P(R6)a-，其中a為0-2的整數(shù)；各Y2獨(dú)立地為-N(R6)a-、-S(R6)a-或-P(R6)a-，其中a為0-2的整數(shù)；各Y3獨(dú)立地為磷酸根、N(R6)b-、S(R6)b-、P(R6)b-或-CO2R6，其中b為1-3的整數(shù)；各R1、R2、R3和R4獨(dú)立地為1到大約20個碳的亞烷基；各R5獨(dú)立地為氫或1到大約10個碳的烷基；并且各R6獨(dú)立地為-[R7-X3]c-R8或-R9-[X4-R10]d-Q，其中各c和d獨(dú)立地為0到大約100的整數(shù)；各Q獨(dú)立地為磷酸根、-N(R11)q、-S(R11)q、-P(R11)q或-CO2R11，其中q為1-3的整數(shù)；各X3和X4獨(dú)立地為-O-、-S-、NR5-、-C(＝X2)-、-C(＝X2)-N(R5)-、-N(R5)-C(＝X2)-、-C(＝X2)-O-、-O-C(＝X2)-或-X2-(R5X2)P(＝X2)-X2-；各R7獨(dú)立地為1到大約20個碳的亞烷基；各R8獨(dú)立地為氫或1到大約60個碳的烷基；各R9和R10獨(dú)立地為1到大約20個碳的亞烷基；并且各R11獨(dú)立地為-[R7-X3]c-R8或-R9-[X4-R10]d-W，其中各W獨(dú)立地為磷酸根、-N(R12)w、-S(R12)w、-P(R12)w或-CO2R12，其中w為1-3的整數(shù)；并且R12為-[R7-X3]c-R8；條件是式(III)化合物至少含一個并且優(yōu)選至少含兩個季銨鹽。在未決美國申請No.08/391，938中闡述了上述陽離子類脂化合物，將該公開全文引入本文供參考。在某些優(yōu)選實(shí)例中，類脂組合物包含磷脂，特別是DPPC、DPPE、DPPA、DSPC、DSPE、DSPG和DAPC(20個碳)中的一個或多個。另外，飽和的和不飽和的脂肪酸可用于本發(fā)明類脂組合物中并且所述脂肪酸可包括直鏈或支鏈形式的、優(yōu)選含大約12個碳到大約22個碳的分子。也可以使用包含類異戊二烯單位和/或異戊二烯基的烴基。例如，適宜的飽和脂肪酸的實(shí)例包括月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸和硬脂酸。例如，可使用的適宜的不飽和脂肪酸包括樟烯酸、抹香鯨酸、肉豆蔻腦酸、棕櫚油酸、巖酸和油酸。例如，可使用的支鏈脂肪酸包括異月桂酸、異肉豆蔻酸、異棕櫚酸和異硬脂酸。除了由類脂制備的類脂組合物和/或泡囊組合物外，本發(fā)明實(shí)例也包括由蛋白質(zhì)或其衍生物制備的泡囊。例如，F(xiàn)einstein在美國專利4,572,203、4,718,433和4,774,958中和Cerny等在美國專利4,957,656中描述了由蛋白質(zhì)制備的泡囊，它可用于制備本發(fā)明靶向泡囊。除了在上述專利中描述的泡囊外，根據(jù)本公開，其它蛋白質(zhì)泡囊是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員顯而易見的。除了由類脂和/或蛋白質(zhì)制備的類脂組合物和/或泡囊組合物外，本發(fā)明實(shí)例也可以包括由聚合物制備的泡囊，所述聚合物可以是天然的、半合成的(改進(jìn)的天然聚合物)或合成的聚合物。本文所使用的術(shù)語聚合物是指飽和兩個或多個重復(fù)單體單元，并且優(yōu)選含10個或多個重復(fù)單體單元的化合物。本文所使用的術(shù)語半合成的聚合物是指以某種方式通過化學(xué)方法改進(jìn)的天然聚合物。適用于本發(fā)明的天然聚合物的實(shí)例包括天然存在的聚糖。例如，該聚糖包括阿拉伯聚糖、果聚糖、巖藻聚糖、半乳聚糖、半乳糖醛喃、葡聚糖、甘露聚糖、木聚糖(例如菊粉)、果聚糖、巖藻依聚糖、交叉菜聚糖、galatocarolose、果膠酸、果膠，包括直鏈淀粉、支鏈淀粉、糖原、支鏈淀粉、纖維素。右旋糖酐、糊精、葡萄糖、聚葡萄糖、石臍素、聚乙酰氨基葡糖、瓊脂糖、膠質(zhì)素、軟骨素、皮膚素、透明質(zhì)酸、藻酸、黃原膠、淀粉和各種其它天然均聚物或雜聚物，如那些含一個或多個下列醛糖、酮糖、酸或胺的糖赤鮮糖、蘇糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、來蘇糖、阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖、古洛糖、艾杜糖、半乳糖、塔羅糖、赤鮮酮糖、核酮糖、木酮糖、阿洛酮糖、果糖、山梨糖、塔格糖、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、蔗糖、海藻糖、麥芽糖、纖維素二糖、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、葡糖醛酸葡糖酸、葡糖二酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸、葡糖胺、半乳糖胺和神經(jīng)氨糖酸及其天然存在的衍生物。例如，適宜的聚合物包括蛋白質(zhì)如白蛋白。半合成聚合物的實(shí)例包括羧甲基纖維素鈉、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素和甲氧基纖維素。適用于本發(fā)明的合成聚合物的實(shí)例包括聚乙烯(如聚乙二醇、聚氧乙烯和聚對苯二甲酸乙二醇酯)、聚丙烯(如聚丙二醇)、聚氨基甲酸乙酯(如聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯氯和聚乙烯吡咯烷酮)、聚酰胺，包括尼龍、聚苯乙烯、聚乳酸、氟化烴、氟化碳(如聚四氟乙烯)和聚甲基丙烯酸甲酯及其衍生物。優(yōu)選的是由單體制備的生物相容性合成聚合物或共聚物，所述單體包括丙烯酸、異丁烯酸、哌嗪、巴豆酸、丙烯酰胺、丙烯酸乙酯、異丁烯酸甲酯、異丁烯酸2-羥基乙酯(HEMA)、乳酸、乙醇酸、ε-己內(nèi)酯、丙烯醛、氰基丙烯酸酯、雙酚A、表氯醇、羥基烷基丙烯酸酯、硅氧烷、二甲基硅氧烷、環(huán)氧乙烷、乙二醇、羥基烷基異丁烯酸酯、N-取代的內(nèi)烯酰胺、N-取代的異丁烯酰胺、N-乙烯基-2-吡咯烷酮、2，4-戊二醇、乙烯基乙酸酯、丙烯氰、苯乙烯、對-氨基苯乙烯、對-氨基-苯基-苯乙烯、苯乙烯磺酸鈉、2-砜基乙基異丁烯酸鈉、乙烯基吡啶、異丁烯酸氨基乙酯、異丁烯酰氧三甲基氯化銨和聚亞乙烯基，乙基多官能團(tuán)交聯(lián)的單體如N，N′-亞甲基二丙烯酰胺、乙二醇二異丁烯酸酯、2，2′-(對-苯二氧基)二乙基二異丁烯酸酯、二乙烯基苯、三烯丙胺和亞甲基二-(4-苯基異氰酸酯)，包括其混合物。優(yōu)選的聚合物包括聚丙烯酸、聚乙烯亞胺、聚異丁烯酸、聚硅氧烷、聚二甲基硅氧烷、聚乳酸、聚(ε-己內(nèi)酯)、環(huán)氧樹脂、聚環(huán)氧乙烷、聚乙二醇和聚酰胺(尼龍)聚合物。優(yōu)選的共聚物包括聚亞乙烯-聚丙烯氰、聚亞乙烯-聚丙烯氰-聚異丁烯酸甲酯、聚苯乙烯-聚丙烯氰和聚d-1，丙交酯-乙交酯聚合物。優(yōu)選的共聚物為聚亞乙烯-聚丙烯氰。根據(jù)本公開，其它適宜的生物相容性單體和聚合物是本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的。如上所述，本發(fā)明優(yōu)選的類脂組合物也包括飽和氣體，如惰性氣體。氣體使類脂組合物的反射性增強(qiáng)，特別是對于將氣體包裹在泡囊中的泡囊組合物來說更是這樣。這可以增加其作為造影劑的功效。優(yōu)選的氣體為惰性并且是生物相容的氣體，即對生物功能無損害的氣體。優(yōu)選的氣體選自空氣、稀有氣體如氦、銣、超極化的氙、超極化的氬、超極化的氦、氖、氬和氙、二氧化碳、氮、氟、氧，含硫的氣體如六氟化硫和四氟化硫，氟化氣體如包括部分氟化的氣體或完全氟化的氣體。氟化氣體的實(shí)例包括碳氟化合物氣體如全氟化碳?xì)怏w及其化合物。順磁氣體如17O2可在類脂組合物中使用。在優(yōu)選的實(shí)例中，氣體包括氟化的氣體。該氟化的氣體包括含一個或多個氟原子的物質(zhì)。優(yōu)選的氣體含一個以上的氟原子，全氟化碳(即完全氟化的碳氟化合物)是更優(yōu)選的。優(yōu)選地，全氟化碳?xì)怏w選自全氟甲烷、全氟乙烷、全氟丙烷、全氟丁烷、全氟戊烷、全氟環(huán)丁烷及其混合物。更優(yōu)選地，全氟化碳?xì)怏w為全氟丙烷或全氟丁烷，全氟丙烷是特別優(yōu)選的。另一優(yōu)選的氣體是六氟化硫。再另一優(yōu)選的氣體是七氟丙烷，包括1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷及其異構(gòu)體、1，1，2，2，3，3，3-七氟丙烷。在本發(fā)明組合物中也可以使用不同類型氣體的混合物如全氟化碳?xì)怏w和另一類型氣體如空氣的混合物。根據(jù)本公開，其它氣體，包括上述舉例說明的氣體是本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的。在某些優(yōu)選實(shí)例中，將氣體如空氣或全氟化碳?xì)怏w與液體全氟化碳如全氟戊烷、全氟己烷、全氟庚烷、全氟辛基溴(PFOB)、全氟萘烷、過氟十二烷靈、全氟辛基碘、全氟三丙基胺和全氟三丁基胺混合。也可以將氣體物質(zhì)的前體加入類脂組合物中。該前體包括能夠在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為氣體的物質(zhì)。優(yōu)選的該氣體前體是生物相容性的并且在體內(nèi)產(chǎn)生的氣體也是生物相容性的。適于在本文所描述的組合物中使用的氣體前體是對pH敏感的試劑。這些試劑包括，例如當(dāng)暴露在中性或酸性pH條件下時(shí)，能夠放出氣體的物質(zhì)。該pH敏感劑的實(shí)例包括下列酸的鹽，所述酸選自無機(jī)酸、有機(jī)酸及其混合物。碳酸(H2CO3)是適宜的無機(jī)酸實(shí)例，而氨基丙二酸是適宜的有機(jī)酸的實(shí)例。根據(jù)本公開，其它酸包括無機(jī)酸和有機(jī)酸是本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的。由鹽衍生的優(yōu)選地氣體前體選自堿金屬鹽、銨鹽及其混合物。更優(yōu)選的所述鹽選自碳酸鹽、碳酸氫鹽、倍半碳酸鹽、氨基丙二酸鹽及其混合物。例如，由鹽衍生的適宜的氣體前體物質(zhì)的實(shí)例包括碳酸鋰、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鋰、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、碳酸鎂、碳酸鈣、碳酸氫鎂、碳酸銨、碳酸氫銨、倍半碳酸銨、倍半碳酸鈉、氨基丙二酸鈉和氨基丙二酸銨。氨基丙二酸鹽是本領(lǐng)域公知的，例如Thanassi在“生物化學(xué)”(Biochemistry)，Vol.19，no.3pp.525-532(1970)中Fitzpatrick等人在“無機(jī)化學(xué)”(InorganicChemistry)Vol.13，no.3pp.568-574(1974)以及Stelmashok等在KoordinatsionnayaKhimiya，Vol.3，no.4；pp.524-527(1977)中描述了氨基丙二酸鹽的制劑。將這些公開引入本文供參考。除了對改變pH敏感的物質(zhì)之外，或者替代對改變pH敏感的物質(zhì)，氣體前體物質(zhì)也可以包含對改變溫度敏感的物質(zhì)。對改變溫度敏感的適宜的氣體前體物質(zhì)的實(shí)例為全氟化碳。如技術(shù)人員已知的那樣，當(dāng)首先制備類脂組合物時(shí)，特定的全氟化碳可以以液體狀態(tài)存在并因此用作氣體前體?；蛘撸?dāng)制備類脂組合物時(shí)，全氟化碳可以以氣體狀態(tài)存在，并因此可直接作為氣體使用。全氟化碳以液體或氣體狀態(tài)使用通常依賴于其液體/氣體相轉(zhuǎn)變溫度或沸點(diǎn)。例如，優(yōu)選的全氟化碳如全氟戊烷的液體/氣體相轉(zhuǎn)變溫度(沸點(diǎn))為29.5℃。這意味著，全氟戊烷在室溫(大約25℃)下通常為液體，但是在人體內(nèi)轉(zhuǎn)化為氣體，人體正常的溫度大約為37℃，它高于全氟戊烷的相轉(zhuǎn)變溫度。因此，在正常情況下，可確定戊烷是氣體前體。作為另一個實(shí)例，全氟戊烷具有同系物，即全氟丁烷和全氟己烷。全氟丁烷的液體/氣體相轉(zhuǎn)變溫度為4℃并且全氟己烷的液體/氣體相轉(zhuǎn)變溫度為57℃。因此，盡管它更適合作為氣體，全氟丁烷可用作氣體前體；同時(shí)，全氟己烷因其具有相對高的沸點(diǎn)，可用作氣體前體。如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的那樣，物質(zhì)有效的沸點(diǎn)可能與該物質(zhì)所承受的壓力有關(guān)。該關(guān)系可通過理想氣體定律PV＝nRT說明，其中P為壓力，V為體積，n為物質(zhì)的摩爾數(shù)，R為氣體常數(shù)，T為溫度。理想氣體定律表明，壓力增加，有效沸點(diǎn)也增加；相反，壓力減少，有效沸點(diǎn)也降低。多種物質(zhì)可用作本發(fā)明組合物的氣體前體。僅僅要求該物質(zhì)在適宜的溫度下能夠進(jìn)行相轉(zhuǎn)變成為氣相即可。例如，適宜的氣體前體包括六氟丙酮、異丙基乙炔、丙二烯、四氟丙二烯、三氟化硼、1，2-丁二烯、2，3-丁二烯、1，3-丁二烯、1，2，3-三氯-2-氟-1，3-丁二烯、2-甲基-1，3-丁二烯、六氟-1，3-丁二烯、丁二炔、1-氟丁烷、2-甲基丁烷、全氟丁烷、1-丁烯、2-丁烯、2-甲基-1-丁烯、3-甲基-1-丁烯、全氟-1-丁烯、全氟-2-丁烯、4-苯基-3-丁烯-2-酮、2-甲基-1-丁烯-3-炔、硝酸丁酯、1-丁炔、2-丁炔、2-氯-1，1，1，4，4，4-六氟丁炔、3-甲基1-丁炔、全氟-2-丁炔、2-溴-丁醛、硫化碳、丁烯腈、環(huán)丁烷、甲基環(huán)丁烷、八氟環(huán)丁烷、全氟環(huán)丁烷、3-氯環(huán)戊烯、全氟環(huán)戊烷、八氟環(huán)戊烯、環(huán)丙烷、全氟環(huán)丙烷、1，2-二甲基-環(huán)丙烷、1，1-二甲基環(huán)丙烷、1，2-二甲基環(huán)丙烷、乙基環(huán)丙烷、甲基環(huán)丙烷、丁二炔、3-乙基-3甲基二氮丙啶、1，1，1-三氟二乙基偶氮、二甲基胺、六氟二甲基胺、二甲基乙胺、雙(二甲基膦)-胺、全氟己烷、全氟庚烷、全氟辛烷、2，3-二甲基-2-降冰片烷、全氟二甲基胺、氯化二甲基氧、1，3-二氧戊環(huán)-2-酮、4-甲基-1，1，1，2-四氟乙烷、1，1，1-三氟乙烷、1，1，2，2-四氟乙烷、1，1，2-三氯-1，2，2-三氟乙烷、1，1-二氯乙烷、1，1-二氯-1，2，2，2-四氟乙烷、1，2-二氟乙烷、1-氯-1，1，2，2，2-五氟乙烷、2-氯-1，1-二氟乙烷、1，1-二氟-2-氟乙烷、1-氯-1，1，2，2-四氟乙烷、2-氯-1，1-二氟乙烷、氯乙烷、氯五氟乙烷、二氯三氟乙烷、氟乙烷、全氟乙烷、硝基五氟乙烷、亞硝基五氟乙烷、全氟乙基胺，乙基乙烯基醚、1，1-二氯乙烷、1，1-二氯-1，2-二氟乙烷、1，2-二氟乙烷、甲烷、三氟甲磺酰氯、溴二氟亞硝基甲烷、溴氟甲烷、溴氯氟甲烷、溴三氟甲烷、氯二氟硝基甲烷、氯二硝基甲烷、氯氟甲烷、氯三氟甲烷、氯二氟甲烷、二溴二氟甲烷、二氯二氟甲烷、二氯氟甲烷、二氟甲烷、二氟碘甲烷、二硅烷基甲烷、氟甲烷、碘甲烷、碘三氟甲烷、硝基三氟甲烷、亞硝基三氟甲烷、四氟甲烷、三氯氟甲烷、三氟甲烷、2-甲基丁烷、甲醚、甲基異丙基醚、乳酸甲酯、亞硝酸甲酯、甲基硫、甲基乙烯基醚、季戊烷、一氧化二氮、1，2，3-十九烷-三羧酸-2-羥基三甲基酯、1-壬烯-3-炔、1，4-戊二烯、正戊烷、全氟戊烷、4-氨基-4-甲基戊烷-2-酮、1-戊烯、2-戊烯(順式和反式)、3-溴戊-1-烯、全氟戊-1-烯、四氯苯二甲酸、2，3，6-三甲基哌啶、丙烷、1，1，1，2，2，3-六氟丙烷、1，2-環(huán)氧丙烷、2，2-二氟丙烷、2-氨基丙烷、2-氯丙烷、七氟-1-硝基丙烷、七氟-1-亞硝基丙烷、全氟丙烷、丙烯、六氟丙烷、1，1，1，2，3，3-六氟-2，3-二氯丙烷、1-氯丙烷、氯丙烷-(反式)、2-氯丙烷、3-氟丙烷、丙炔、3，3，3-三氟丙炔、3-氟苯乙烯、十氟化二硫(S2F10)、2，4-二氨基甲苯、三氟乙腈、三氟甲基過氧化物、三氟甲基硫化物、六氟化鎢、乙烯基乙炔和乙烯醚。全氟化碳被優(yōu)選用作由本發(fā)明方法制備的組合物的氣體和氣體前體。其中所述全氟化碳包括飽和的全氟化碳、不飽和的全氟化碳和環(huán)狀全氟化碳。通常優(yōu)選的飽和全氟化碳具有式CnF2n+2，其中n為約1-約12，優(yōu)選為約2-約10，更優(yōu)選為約3-約8，并且甚至更優(yōu)選為約3-約6。合適的全氟化碳例如包括全氟甲基、全氟乙烷、全氟丙烷、全氟丁烷、全氟環(huán)丁烷、全氟戊烷、全氟己烷、全氟庚烷、全氟辛烷和全氟壬烷。優(yōu)選地，全氟化碳選自全氟丙烷、全氟丁烷、全氟環(huán)丁烷、全氟戊烷、全氟己烷和全氟辛烷，全氟丙烷是特別優(yōu)選的。環(huán)狀全氟化碳也是優(yōu)選的，它具有式CnF2n，其中n為3-約8，優(yōu)選3-約6，包括如六氟環(huán)丙烷、八氟環(huán)丁烷和十氟環(huán)戊烷。除了全氟化碳之外，使用穩(wěn)定的未完全氟化的氟化烴可能是合適的。此氟化烴包括七氟丙烷，例如1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷及其異構(gòu)體、1，1，2，2，3，3，3-七氟丙烷。氣體前體材料也可以是光活化的材料，如重氮化合物和氨基丙二酸。如下文更充分討論的那樣，可以配制某些類脂和/或泡囊組合物，特別是泡囊組合物，使得在靶組織位置或通過聲波在類脂組合物上的作用形成氣體。例如在美國專利5,088,499和5,149,319中描述的氣體前體的例子，其公開的全部內(nèi)容都引入本文供參考。除了上述那些例子之外，基于本發(fā)明，其它氣體前體對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。優(yōu)選地，將氣體物質(zhì)和/或氣體前體混合在類脂和/或泡囊組合物中，不考慮組合物的物理特性。因此，期望可將氣體物質(zhì)和/或氣體前體例如混合在類脂隨機(jī)凝聚的類脂組合物以及泡囊組合物中，包括由類脂配制的泡囊組合物，如膠束和脂質(zhì)體?？梢允褂酶鞣N方法來將氣體物質(zhì)和/或氣體前體混合到類脂和/或泡囊組合物中。例如，在基于類脂的泡囊時(shí)，可通過振搖或攪拌含有氣體或氣體前體和一種或多種類脂的水性混合物來形成氣體填充的泡囊。這促進(jìn)形成內(nèi)部包囊有氣體或氣體前體的穩(wěn)定的泡囊。另外，可將氣體直接吹入類脂和/或形成泡囊的化合物的含水混合物中。而且，可使用例如，美國專利5,352,435和5,228,446公開的氣體灌注法，其中所公開的全部內(nèi)容都引入本文供參考。將氣體或氣體前體混合在陽離子類脂組合物中的合適的方法也在美國專利4,865,836中公開，其公開的內(nèi)容引入本文供參考?；诒景l(fā)明，其它方法對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。優(yōu)選地，在加入穩(wěn)定材料之后或期間和/或形成泡囊期間，可將氣體注入類脂和/或泡囊組合物中。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將氣體物質(zhì)和/氣體前體材料混合到泡囊組合物中，優(yōu)選膠束和脂質(zhì)體。如下文詳細(xì)討論的那樣，泡囊有氣體或氣體前體或其混合物的泡囊在其體內(nèi)提供改進(jìn)的反射性上是有益的。如下文更詳細(xì)討論的那樣，優(yōu)選由兩種和任意的穩(wěn)定化合物配制類脂組合物，特別是泡囊組合物，來促進(jìn)形成穩(wěn)定的泡囊。另外，類脂和/或泡囊組合物優(yōu)選地含有高穩(wěn)定性氣體。短語“高穩(wěn)定性氣體”是指在水介質(zhì)中具有局限的溶解性和擴(kuò)散性的氣體。例如，高穩(wěn)定性的氣體包括全氟化碳，因?yàn)樗鼈兺ǔ：苌贁U(kuò)散并且在水介質(zhì)難溶。因此，使用它們可以促進(jìn)形成高穩(wěn)定性的泡囊。在某些實(shí)施方案中，使用氟化的化合物，全氟化碳化合物是特別合適的，它在類脂和/或泡囊組合物的使用溫度，包括例如在人體的體內(nèi)溫度下可為液體狀態(tài)，有助于或增強(qiáng)類脂和/或泡囊組合物，特別是氣體填充的泡囊的穩(wěn)定性。合適的氟化化合物包括如氟化的表面活性劑，如以ZONYL為名稱購得的氟化表面活性劑(theDuPontCompany，Wilmington，DE)，以及液體全氟化碳，如全氟辛基溴化物(PFOB)、全氟萘烷、全氟十二氫化萘、全氟辛基碘化物、全氟三丙基胺和全氟-丁基胺?？傊?，大約含有6或更多個碳原子的全氟化碳在正常的人體溫度下是液體。在這些全氟化碳中，優(yōu)選室溫下為液體的全氟辛基溴化物和全氟己烷。存在的氣體例如可以是氮?dú)饣蛉?，或者可由氣體前體衍生，也可以是全氟化碳，例如全氟戊烷。在后者的情況下，可由全氟化碳的混合物制備類脂和/或泡囊組合物，所給出的例子是全氟丙烷(氣體)或全氟戊烷(氣體前體)和全氟辛基溴化物(液體)。盡管不打算與任何理論或操作理論相結(jié)合，但相信，在泡囊組合物的情況下，液體氟化化合物可位于氣體和泡囊膜或壁表面之間的界面處。因此，可以在穩(wěn)定化合物(例如使用生物相容的類脂形成的泡囊)的內(nèi)表面上形成進(jìn)一步的穩(wěn)定層，并且該全氟化碳層也可以防止氣體從泡囊膜擴(kuò)散。本發(fā)明的氣體前體在制備和/或貯存穩(wěn)定下為液體，但至少在使用時(shí)或使用期間變?yōu)闅怏w。因此，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)液體氟化化合物與通常用于制備本文所述的類脂和/或泡囊組合物的氣體或氣體前體結(jié)合時(shí)，可以產(chǎn)生單獨(dú)由氣體或氣體前體不能產(chǎn)生的附加的穩(wěn)定性。因此，在本發(fā)明的范圍中，使用氣體或氣體前體(如全氟化碳?xì)怏w前體，例如全氟戊烷)和在給予患者后保持液態(tài)的全氟化碳(即，其液態(tài)到氣態(tài)的轉(zhuǎn)化溫度在患者的體溫之上，例如全氟辛基溴化物)?？梢允褂萌谋砻婊钚詣?如ZONYL氟化表面活性劑)來穩(wěn)定類脂和/或泡囊組合物，并且起例如泡囊的包衣作用。優(yōu)選的氟化表面活性劑是部分氟化的膽堿磷酸表面活性劑。在這些優(yōu)選的氟化表面活性劑中，二元烷基化合物可在末端烷基鏈上氟化并且近端的碳原子可被氫化。這些氟化的膽堿磷酸表面活性劑可用于制備本發(fā)明的靶向類脂和/或泡囊組合物。關(guān)于包含泡囊組合物的實(shí)施方案，可按照特定的最終打算使用的目的(例如診斷和/或治療使用)來調(diào)節(jié)泡囊的尺寸。泡囊的尺寸可優(yōu)選在大約30納米(nm)到100微米(μm)直徑范圍之內(nèi)，并且所有的組合物和亞組合物的范圍也是如此。更優(yōu)選地，泡囊直徑大約在100nm到10μm，甚至更優(yōu)選直徑大約為200納米到7微米。對于特定的用途，例如血管內(nèi)使用，包括血管系統(tǒng)的磁共振成像，可優(yōu)選泡囊的直徑不大于約30微米，優(yōu)選更小的泡囊，例如，泡囊直徑不大于12微米。在某些優(yōu)選的實(shí)例中，泡囊的直徑可以大約為7微米或更小，平均直徑大約為5微米或更小的泡囊是更優(yōu)選的，并且平均直徑大約為3微米或更小的泡囊是進(jìn)一步優(yōu)選的。期望這些小泡囊可以灌注到小血管系統(tǒng)中，如微血管系統(tǒng)，同時(shí)提供足夠的空間以便使紅細(xì)胞滑過泡囊。如果需要，可以通過各種方法調(diào)節(jié)泡囊中填充的氣體尺寸，例如，所述方法包括搖動、微乳化、渦流、擠壓、過濾、聲處理、均化、重復(fù)的冷凍和融化循環(huán)、在通過一定尺寸的孔加壓下擠壓和類似的方法。如上所述，就其制劑來說，本文所使用的組合物也包括制備和使用通過溫度、pH、光和能(如超聲)激活后，從液態(tài)或固態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)闅怏w的氣體前體。通過將前體在減壓下貯存可以將氣體前體制成氣體。例如，在減壓下貯存的小瓶可以產(chǎn)生全氟戊烷或全氟己烷氣體的液面上空間，用于在注射前產(chǎn)生預(yù)氣體。優(yōu)選地，可以通過溫度激活氣體前體。下表列出了一系列在較為接近或低于正常體溫(37℃)的溫度下，經(jīng)歷液態(tài)到氣態(tài)相轉(zhuǎn)變的氣體前體及要求形成最大10微米泡囊時(shí)乳化滴的尺寸。表2氣體前體的物理特性和形成10微米泡囊時(shí)乳化滴的直徑*</tables>*，來源ChemicalRubberCompanyHandbookofChemistryandPhysics，RobertC.WeastandDavidR.Lide，eds.，CRCPress，Inc.BocaRaton，F(xiàn)lorida(1989-1990)。如上所述，全氟化碳優(yōu)選用作氣體或氣體前體，并用作附加的穩(wěn)定成分。如上所述，通過使用有限溶解度的前體，使類脂和/或泡囊組合物，特別是由類脂形成的泡囊組合物的利用最佳。術(shù)語“有限溶解度”是指氣體憑借其在周圍水性介質(zhì)中的溶解度擴(kuò)散出泡囊的能力。在水性介質(zhì)中溶解度較大則增加泡囊中氣體的梯度，這樣使得氣體可具有擴(kuò)散出泡囊的趨向。另一方面，在水性介質(zhì)中溶解度較小可減少或消除泡囊和界面之間的梯度，使得氣體擴(kuò)散出泡囊可被阻止。優(yōu)選地，包裹在泡囊中的氣體的溶解度低于氧的溶解度，也就是說，大約一份氣體溶于32份水。參見MathesonGasDataBook，1966，MathesonCompanyInc.。更優(yōu)選包裹在泡囊中的氣體在水中的溶解度低于空氣的溶解度；甚至更優(yōu)選包裹在泡囊中的氣體在水中的溶解度低于氮?dú)獾娜芙舛?。在某些?shí)施方案中，可能由基本上不可滲透的聚合材料制備泡囊是理想的。在這些實(shí)施方案中，通常不需要使用高度不溶的氣體。例如，含有基本上不可滲透的聚合材料的穩(wěn)定組合物可以使用具有較高溶解度的氣體(如空氣或氮?dú)?來配制。除了上文討論的類脂、蛋白質(zhì)和/或聚合化合物之外，本文所述的組合物可含有一種或多種穩(wěn)定材料。此穩(wěn)定材料的例子如生物相容的聚合物?？墒褂眠@些穩(wěn)定材料來合乎需要地幫助形成泡囊和/或保證基本上包囊氣體或氣體前體。甚至對于較難溶的、不擴(kuò)散的氣體(如全氟丙烷或六氟化硫)來說，在形成填充有該氣體或氣體前體的泡囊時(shí)使用一種或多種穩(wěn)定材料可獲得改進(jìn)的泡囊組合物。這些化合物有助于改善泡囊在其尺寸、形狀和/或其它方面的穩(wěn)定性和完整性。本文所使用的術(shù)語“穩(wěn)定”或“穩(wěn)定的”意思是指泡囊基本上可阻止在使用期間降解，包括如泡囊結(jié)構(gòu)損壞或包裹的氣體或氣體前體的損失。通常，本發(fā)明所使用的泡囊具有理想的貯存期，在正常的室溫下，經(jīng)常在至少2到3周的期限內(nèi)至少保持原結(jié)構(gòu)體積的90％。在優(yōu)選的形式中，泡囊至少在大約1個月的期限內(nèi)具有理想的穩(wěn)定性，更優(yōu)選至少大約2個月，甚至更優(yōu)選至少大約6個月，更優(yōu)選大約18個月，最優(yōu)選長達(dá)大約3年。本文所述的泡囊(包括填充氣體或氣體前體的泡囊)甚至在惡劣條件下也是穩(wěn)定的，如在那些正常環(huán)境條件之上和之下的溫度和壓力之下。本文所述的泡囊的穩(wěn)定性至少部分歸功于制備泡囊的材料，包括例如，上文所述的類脂、聚合物和/或蛋白質(zhì)，盡管是可有可無的并且是優(yōu)選的，但經(jīng)常不需要使用另外的穩(wěn)定材料。在下文中更詳細(xì)地描述這些附加的穩(wěn)定材料及其特點(diǎn)。構(gòu)成泡囊的材料優(yōu)選生物相容的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物材料，并且其中生物相容的類脂是優(yōu)選的。另外，由于易于配制，包括在給藥之前制備泡囊的可能性，這些泡囊可就地方便地進(jìn)行制備?？勺鳛橹苽涮畛錃怏w和氣體前體的泡囊的穩(wěn)定材料的生物相容的聚合物可以是來源于天然、半合成(改良天然的)和合成的。本文所使用的術(shù)語聚合物是指包含兩個或多個重復(fù)單體單元，并且優(yōu)選含10個或多個重復(fù)單體單元的化合物。本文所使用的術(shù)語半合成的聚合物(或改良的天然聚合物)是指以某種方式通過化學(xué)方法改進(jìn)的天然聚合物。適用于本發(fā)明的天然聚合物的實(shí)例包括天然存在的聚糖。例如，該聚糖包括阿拉伯聚糖、果聚糖、巖藻聚糖、半乳聚糖、半乳糖醛喃、葡聚糖、甘露聚糖、木聚糖(例如菊粉)、果聚糖、巖藻依聚糖、交叉菜聚糖、galatocarolose、果膠酸、果膠，包括直鏈淀粉、支鏈淀粉、糖原、支鏈淀粉、纖維素、右旋糖酐、糊精、匍萄糖、聚葡萄糖、石臍素、聚乙酰氨基葡糖、瓊脂糖、膠質(zhì)素、軟骨素、皮膚素、透明質(zhì)酸、藻酸、黃原膠、淀粉和各種其它天然均聚物或雜聚物如那些含一個或多個下列醛糖、酮糖、酸或胺的糖赤鮮糖、蘇糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、來蘇糖、阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖、古洛糖、艾杜糖、半乳糖、塔羅糖、赤鮮酮糖、核酮糖、木酮糖、阿洛酮糖、果糖、山梨糖、塔格糖、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、蔗糖、海藻糖、麥芽糖、纖維素二糖、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、葡糖醛酸、葡糖酸、葡糖二酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸、葡糖胺、半乳糖胺和神經(jīng)氨糖酸及其天然存在的衍生物。因此，例如，適宜的聚合物包括蛋白質(zhì)如白蛋白。半合成聚合物的實(shí)例包括羧甲基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素和甲氧基纖維素。適用于本發(fā)明的合成聚合物的實(shí)例包括聚乙烯(如聚乙二醇、聚氧乙烯和聚對苯二甲酸乙二醇酯)、聚丙烯(如聚丙二醇)、聚氨基甲酸乙酯(如聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯氯和聚乙烯吡咯烷酮)、聚酰胺包括尼龍、聚苯乙烯、聚乳酸、氟化烴、氟化碳(如聚四氟乙烯)和聚甲基丙烯酸甲酯及其衍生物。一旦有了本發(fā)明公開的內(nèi)容，并將本
發(fā)明內(nèi)容與本領(lǐng)域已知的技術(shù)(例如Unger的美國專利5,205,290所描述和涉及的，其內(nèi)容全部引入本文供參考)結(jié)合，使用聚合物作為穩(wěn)定化合物制備泡囊的方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案可包括含有三種組分的泡囊(1)天然類脂、非離子的或兩性離子類脂，(2)陰離子類脂和(3)載有穩(wěn)定材料(例如親水聚合物)的類脂。優(yōu)選的陰離子類脂的量將大于所存在總類脂量的大約1％摩爾，并且載有親水聚合物的類脂的量將大于所存在總類脂量的1％摩爾。列舉的和優(yōu)選的陰離子類脂包括磷脂酸。理想的載有親水聚合物的類脂是與聚合物共價(jià)連接的類脂，并且聚合物的平均分子量優(yōu)選約為400到約100,000。合適的親水聚合物優(yōu)選選自聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮及其共聚物，PEG聚合物是優(yōu)選的。優(yōu)選地，PEG聚合物的分子量為約1000到約7500，更優(yōu)選的分子量為約2000到約5000。PEG或其它聚合物可結(jié)合到類脂上，例如通過共價(jià)鍵(如酰胺、氨基甲酸酯或胺鍵)連接的DPPE。另外，PEG或其它聚合物以共價(jià)鍵可與靶向配位體或其它磷脂相連接，例如包括酰胺、酯、醚、硫酯、硫代酰胺或二硫化物鍵。親水聚合物為PEG時(shí)，載有該聚合物的類脂將被稱為“聚乙二醇化類脂”。在優(yōu)選的形式中，載有親水聚合物的類脂可以是DPPE-PEG，例如包括，DPPE-PEG5000，它指具有與其相連的平均分子量約為5000的聚乙二醇的DPPE(DPPE-PEG5000)。另一合適的聚乙二醇化類脂為二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇5000(DSPE-PEG5000)。在本發(fā)明某些優(yōu)選的實(shí)施方胺中，類脂組合物可包括大約77.5摩爾％的DPPC、12.5摩爾％的DPPA和10摩爾％的DPPE-PEG5000。也優(yōu)選組合物含有約80-約90摩爾％的DPPC、約5-約15摩爾％的DPPA和約5-約15摩爾％的DPPE-PEG5000。特別優(yōu)選的組合物含有分別以82∶10∶8摩爾％比的DPPC、DPPA和DPPE-PEG5000。DPPE基本上是中性的，因?yàn)榱字２糠謳в胸?fù)電荷而膽堿部分帶有正電荷。因此，根據(jù)上文所述的機(jī)制，可加入帶有負(fù)電荷的DPPA來增加穩(wěn)定性。DPPE-PEG通過DPPE部分提供與泡囊的類脂膜或外層結(jié)合的聚乙二醇化類脂材料，而PEG部分游離到泡囊膜周圍，因此形成體內(nèi)具有降解此外來材料功能的各種酶和其它內(nèi)源性試劑的物理屏障。與其它類脂(如DPPC和DPPA)按所給比例結(jié)合時(shí)，DPPE-PEG可產(chǎn)生更小尺寸的泡囊，它是安全的并且對壓力穩(wěn)定。理論上，由于聚乙二醇化類脂材料的結(jié)構(gòu)類似于水，它能夠破壞人免疫系統(tǒng)中巨噬細(xì)胞的作用，否則它將包圍并除去外來物質(zhì)。其結(jié)果是增加了在此期間穩(wěn)定的泡囊可作為診斷成像造影劑的功能。除了上文所述的材料之外，可由其它材料制備泡囊組合物，其條件是所制備的泡囊符合本文所述的穩(wěn)定性和其它標(biāo)準(zhǔn)。這些材料可以是基本和重要的，構(gòu)成產(chǎn)生或建立穩(wěn)定的填充氣體和氣體前體的泡囊的主要材料。另一方面，它們可以是輔助性的，作為次要或補(bǔ)充性的試劑起作用，可以提高基本穩(wěn)定材料或材料的功能，或產(chǎn)生由基本穩(wěn)定材料所賦予的之外的某些需要的特性。然而，不是總有可能確定所給出的材料是不是基本的或是輔助的材料，因?yàn)樗霾牧系墓δ苁抢缤ㄟ^對所制備穩(wěn)定泡囊產(chǎn)生的結(jié)果來經(jīng)驗(yàn)性地確定的。作為這些基本的和輔助的材料如何起作用的實(shí)例，已經(jīng)觀察了振搖時(shí)生物相容的類脂和水或鹽水簡單組合經(jīng)常會獲得混濁的溶液，然后壓熱器處理滅菌。這種混濁的溶液可以起造影劑的作用，但外觀不美并且以末溶解或未分散的類脂顆粒形式可隱含不穩(wěn)定性。混濁溶液因其未溶解的顆粒物質(zhì)的直徑大于約7微米特別是大于約10微米也是不理想的。制備步驟(如滅菌過濾)也可對含有未溶解的顆粒物質(zhì)產(chǎn)生問題。因此，可加入丙二醇來通過促進(jìn)類脂顆粒的分散或溶解而消除混濁。丙二醇也可起濕潤劑的作用，它可通過增加泡囊膜或外層上的表面張力來改善泡囊的形成和穩(wěn)定性。丙二醇也可能以附加層起作用，它可以包裹在泡囊膜或外層E，因此產(chǎn)生附加的穩(wěn)定作用。作為更進(jìn)一步的基本或輔助穩(wěn)定材料的例子，有經(jīng)常使用的表面活性劑參見D′Arrigo的美國專利4,684,479和5,215,680。其它輔助的和基本的穩(wěn)定材料例如包括花生油、canola油、橄欖油、紅花油、玉米油或其它任何可被列入根據(jù)本文所述適于用作穩(wěn)定化合物的油。公開了各種輔助和基本的穩(wěn)定材料，例如在美國專利申請?zhí)?8/444,574，申請日為1995年5月19日中，其全部內(nèi)容都引入本文供參考。另外，用于制備混合的膠囊系統(tǒng)的化合物可適用于用作基本的或輔助的穩(wěn)定材料，例如包括溴化月桂基三甲基銨(十二烷基)、溴化十六烷基三甲基銨(十六烷基)、溴化十四烷基三甲基銨(十四烷基)、氯化烷基二甲基芐基銨(其中烷基為C12、C14或C16)、溴化/氯化芐基二甲基十六烷基銨、溴化/氯化芐基二甲基十六烷基銨、溴化/氯化芐基二甲基十四烷基銨、溴化/氯化十六烷基二甲基乙基銨或溴化/氯化十六烷基吡啶鎓。也已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明中使用的填充有氣體和氣體前體的泡囊可根據(jù)尺寸、溶解度和熱穩(wěn)定性通過從本文所述的各種附加的或輔助的穩(wěn)定材料中進(jìn)行選擇來控制。這些材料可影響泡囊特別是由類脂配制的泡囊的這些參數(shù)，這不僅通過它們與膜表面的物理性的相互作用來產(chǎn)生，也通過其改進(jìn)粘度和填充有氣體和氣體前體的泡囊表面的表面張力的能力來產(chǎn)生。因此，本發(fā)明中使用的填充有氣體和氣體前體的泡囊可以得到有利的改進(jìn)和進(jìn)一步穩(wěn)定，例如通過加入一種或多種各種各樣的(a)粘度調(diào)節(jié)劑，例如包括碳水化合物及其磷酸化的或磺化的衍生物；聚醚(優(yōu)選地分子量范圍為400到100,000)和二和三羥基烷烴及其聚合物(優(yōu)選其分子量范圍為200到50,000)；(b)乳化劑和/或增溶劑，例如包括，阿拉伯膠、膽固醇、二乙醇胺、單硬脂酸甘油酯、羊毛脂醇、卵磷脂、單和二甘油酯、乙醇胺、油酸、油醇、泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188、泊洛沙姆184和泊洛沙姆181)、硬脂酸50聚氧乙烯、聚羥氧基35蓖麻油、聚羥氧基10油醚、聚羥氧基20鯨蠟醇硬脂酰醚、聚羥氧基40硬脂酸酯、多乙氧基醚20、多乙氧基醚40、多乙氧基醚60、多乙氧基醚80、1，2-丙二醇二乙酸酯、1，2-丙二醇一硬脂酸酯、十二烷基硫酸鈉、硬脂酸鈉、單月桂酸脫水山梨糖醇酯、單油酸脫水山梨糖醇酯、單棕櫚酸脫水山梨糖醇酯、單硬脂酸脫水山梨糖醇酯、硬脂酸、三乙醇胺和乳化蠟；(c)懸浮和/或粘度增強(qiáng)劑，包括，例如，阿拉伯膠、瓊脂、藻酸、一硬脂酸鋁、皂土、糖糊、卡波姆934P羧甲基纖維素、鈣和鈉和鈉12、角叉菜膠、纖維素、葡聚糖、明膠、胍耳膠、刺槐豆膠、鋁硅酸鎂鹽、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、硅酸鎂鋁、沸石、甲基纖維素、果膠、聚環(huán)氧乙烷、聚烯吡酮、藻酸-1，2-丙二醇酯、二氧化硅、藻酸鈉、四黃耆膠、黃原膠、α-d-葡萄糖酸內(nèi)酯，甘油和甘露糖醇；(d)合成的懸浮劑，如聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙烯醇(PVA)、聚丙二醇(PPG)和多乙氧基醚；和(e)張力增加劑，它能夠穩(wěn)定并增加張力，例如包括山梨糖醇、甘露糖醇、海藻糖、蔗糖、丙二醇和甘油。如上所述，本發(fā)明組合物進(jìn)一步包含靶向配位體。優(yōu)選地，靶向配位體通過共價(jià)鍵或非共價(jià)鍵與類脂化合物，蛋白質(zhì)，聚合物和/或泡囊連接。因此，例如，在類脂組合物狀態(tài)下，靶向配位體通過共價(jià)鍵或非共價(jià)鍵與組合物中至少一個類脂結(jié)合。在由類脂以外的其它物質(zhì)形成的泡囊(如籠形物、氣凝膠和白蛋白泡囊)狀態(tài)下，優(yōu)選地，靶向配位體通過共價(jià)鍵或非共價(jià)鍵與泡囊壁中的一種或多種物質(zhì)結(jié)合。通常優(yōu)選地，靶向配位體通過共價(jià)鍵與類脂和/或泡囊結(jié)合。優(yōu)選地，在含膽固醇的類脂組合物狀態(tài)下，靶向配位體基本上僅通過非共價(jià)鍵與膽固醇結(jié)合，和/或靶向配位體通過共價(jià)鍵與組合物的組分結(jié)合，所述組分包括另一種非膽固醇類脂如磷脂。如果需要，靶向配位體也可以與組合物中所存在的其它穩(wěn)定物質(zhì)，如生物相容性聚合物結(jié)合。優(yōu)選地，本發(fā)明組合物中所混合的靶向配位體是能夠在體內(nèi)與受體和/或組織靶向結(jié)合的物質(zhì)。如上所述，就靶組織而言，要求靶向配位體能夠與心臟組織，包括心肌細(xì)胞以及膜組織，包括內(nèi)皮和上皮細(xì)胞靶向結(jié)合。在受體狀態(tài)下，要求靶向配位體能夠與GPIIbIIIa受體靶向結(jié)合。期望在靶組織和/或受體，包括上述舉例說明的組織和受體中使用的優(yōu)選的靶向配位體選自蛋白質(zhì)、肽、多糖、甾體化合物、甾體類似物、生物活性劑和遺傳物質(zhì)，例如包括抗體、糖蛋白和凝集素，瓊脂、肽是優(yōu)選的?？蓛?yōu)選用作靶向配位體的蛋白質(zhì)的實(shí)例為蛋白質(zhì)A，它是由大部分金黃色葡萄球菌菌株產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)A可購得，例如從SigmaChemicalCo.(St.Louis，MO)購得。然后可使用蛋白質(zhì)A結(jié)合各種IgG抗體。一般來說，作為靶向配位體特別有用的肽包括天然的、天然改良的或合成的肽，混合有其它對血管系統(tǒng)環(huán)境的酯酶、酰胺酶或肽酶的降解耐受的物質(zhì)。穩(wěn)定肽部分的一種非常有用的方法是結(jié)合使用環(huán)化技術(shù)。作為一個實(shí)例，可以使用由羧基末端和胺末端通過酰胺鍵共價(jià)連接的尾-尾環(huán)化來抑制肽降解并增加環(huán)境貯存時(shí)間。另外、在誘導(dǎo)穩(wěn)定性中，側(cè)鏈-側(cè)鏈環(huán)化也是特別有用的。另外，末端-側(cè)鏈環(huán)化也是一種有用的改進(jìn)。另外，在肽的關(guān)鍵區(qū)域，用L-氨基酸代替D-氨基酸可以產(chǎn)生對生物降解的耐受。一經(jīng)本文描述，合適的靶向配位體及其制備方法對本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員來說會是顯而易見的。要靶向于內(nèi)皮細(xì)胞，合適的靶向配位體例如包括一種或多種下列物質(zhì)生長因子(如堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、酸性成纖維細(xì)胞生長因子(aFGF)、轉(zhuǎn)化生長因子-α(TGF-α)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)、血小板衍生內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(PD-ECGF)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和人生長因子(HGF))；血管配基；腫瘤壞死因子(包括腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和腫瘤壞死因子-β(TNF-β))；分子量約為4500的含銅多核苷酸血管營養(yǎng)素以及低分子量非肽血管生成素(如1-丁酰甘油)；前列腺素(例如，包括前列腺素E1(PGE1)和前列腺素E2(PGE2))；煙酰胺；腺苷；潘生?。欢喟头佣“?；透明質(zhì)酸降解產(chǎn)物(例如由β鏈水解所導(dǎo)致的降解產(chǎn)物，包括透明生物糖醛酸)；血管生成抑制劑(例如包括，膠原酶抑制劑)；二甲胺四環(huán)素；6α-甲-17-羥孕酮；用6-O-硫酸酯和6-O-羧甲基基團(tuán)化學(xué)修飾的殼多糖；血管抑制劑類固醇化合物(例如四氫皮質(zhì)甾醇)；和肝素(包括肝素片斷，例如具有大約6000分子量的與類固醇化合物混合的片斷，如可的松或氫化可的松)；血管生成抑制劑(包括血管抑制素(AGM-1470-一種血管抑制劑抗生素))；血小板因子4；魚精蛋白；由節(jié)細(xì)菌的細(xì)菌壁衍生的硫酸化的多糖肽聚糖復(fù)合物；真菌衍生的血管生成抑制劑(如由煙曲霉衍生的煙曲霉素)；D-青霉素胺；硫代蘋果酸金；凝血栓蛋白；維生素D3類似物(例如包括1-α，25-二羥基維生素D3和合成的類似物22-氧雜-1-α，25-二羥基維生素D3)；α-干擾素；細(xì)胞激活素(如白細(xì)胞介素，例如包括白細(xì)胞介素-1(IL-1)、白細(xì)胞介素-2(IL-2)和白細(xì)胞介素-8(IL-8))；粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMCSF)；肝素(包括肝素低分子量的片斷或肝素類似物)；簡單硫酸化的多糖(如環(huán)糊精，包括α-，β-和γ-環(huán)糊精)；硫酸十四烷基酯；鐵傳遞蛋白；鐵蛋白；血小板因子4；魚精蛋白；與銅復(fù)合的Gly-His-Lys；銅藍(lán)蛋白；(12R)-羥基二十碳三烯酸；okadaikacid；植物凝集素；抗體；CD11a/CD18和VeryLateactivation整聯(lián)蛋白-4(VLA-4)。內(nèi)皮性白細(xì)胞粘合分子(ELAM)是在緊張條件下由內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的抗原，然后促進(jìn)白細(xì)胞穿過血管系統(tǒng)的內(nèi)膜進(jìn)入周圍組織。也驚奇地發(fā)現(xiàn)，這些內(nèi)皮性白細(xì)胞粘合分子用作靶向內(nèi)皮的受體是有利的。這些內(nèi)皮細(xì)胞粘合分子屬于選擇蛋白族，其中已知的成員如GMP-140，都參與內(nèi)皮白細(xì)胞粘合并包括ELAM-1、LAM-1和顆粒膜蛋白140(GMP-140)，也稱作起血小板激活作用的-依賴于顆粒的-外膜蛋白(PADGEM)，VCAM-1/INCAM-110(VascularAdhesionMolecular/InducibleAdhesionMolecule)和ICAM-1(IntercelluarAdhesionMolecule)。細(xì)胞粘合分子的鈣粘著蛋白也可用作靶向配位體，例如包括E-、N-、和P-鈣粘著蛋白、鈣粘著蛋白-4、鈣粘著蛋白-5、鈣粘著蛋白-6、鈣粘著蛋白-7、鈣粘著蛋白-8、鈣粘著蛋白-9、鈣粘著蛋白-10和鈣粘著蛋白-11；并且最優(yōu)選鈣粘著蛋白C-5。而且，涉及鈣粘著蛋白的抗體(例如單克隆抗體Ec6C10)可用來識別由特異的內(nèi)皮細(xì)胞局部表達(dá)的鈣粘著蛋白?？蛇x擇各種各樣不同的靶向配位體與ELAM分子的胞質(zhì)區(qū)結(jié)合。關(guān)于靶向配位體可包括植物凝集素、各種碳水化合物或糖部分、抗體、抗體片斷、Fab片斷(如Fab′2)和合成的肽(例如包括精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(R-G-D)，它對傷口愈合有作用)。盡管這些材料許多都是由天然物質(zhì)衍生的，但其中某些可由分子生物重組技術(shù)來合成并且其它物質(zhì)的來源可以是合成的?？赏ㄟ^本領(lǐng)域已知的各種不同組合的化學(xué)技術(shù)制備肽。由人白細(xì)胞衍生的靶向配位體(如CD11a/CD18和白細(xì)胞表面糖蛋白(LFA-1))也是已知的，可用來與內(nèi)皮細(xì)胞受體ICAM-1結(jié)合。免疫球蛋白總科的細(xì)胞激活素可誘導(dǎo)成員，VCAM-1(它是單核白細(xì)胞選擇性的)也可用作靶向配位體。由人單核細(xì)胞衍生的VLA-4可用作靶向VCAM-1?？贵w和其它靶向配位體可用于靶向endoglin，它是一種內(nèi)皮細(xì)胞增殖標(biāo)記物。Endoglin在各種固體腫瘤的內(nèi)皮細(xì)胞中被上調(diào)?？捎糜诎邢蚺cedoglin的靶向配位體是抗體TEC-11。參見R.E.Thorpe和F.J.Burrows，BreastCancerResearchandTreatment，Vol.36，pp.237-51(1995)。在本發(fā)明中使用患有動脈粥樣硬化中的內(nèi)皮細(xì)胞激活作用來使組合物靶向于動脈粥樣硬化的區(qū)域，例如包括動脈粥樣硬化斑。可用于此目的的靶是作為ATHERO-ELAM通過Rb1/9識別的可誘導(dǎo)單核白細(xì)胞內(nèi)皮粘合分子?？墒褂脝慰寺】贵w(H4/18和H18/7)來靶向由細(xì)胞激活素介質(zhì)誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞表面抗原。作為本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案，填充氣體的泡囊靶向于動脈粥樣硬化斑來在嚴(yán)重?fù)p傷發(fā)生之前(例如在中風(fēng)或心肌梗塞之前)非傷害性地檢測有病的血管，這樣的話可以進(jìn)行合適的藥物或外科手術(shù)治療。ATHERO-ELAM是優(yōu)選的目的物和配位體，如抗體、肽或植物凝集素或其組合物可用于靶向該細(xì)胞表面的抗原決定部位，它表達(dá)在動脈粥樣硬化的內(nèi)皮細(xì)胞上。另外，由低或高密度脂蛋白蛋白質(zhì)衍生的脂蛋白或脂蛋白片斷可用作靶向配位體。還有，可使用膽固醇靶向內(nèi)皮細(xì)胞并將類脂、泡囊等定位在動脈粥樣硬化斑的區(qū)域。在包括使用膽固醇作為靶向配位體的實(shí)施方案中，優(yōu)選的膽固醇是未用其它化學(xué)基團(tuán)、部分、配位體等修飾的(非衍生的)。直接趨向斑中血栓形成材料的靶向配位體可用于區(qū)別動脈粥樣硬化斑的活性和非活性區(qū)域。當(dāng)這些斑最終閉合血管或?qū)е卵〞r(shí)，產(chǎn)生血栓的活性斑更危險(xiǎn)。在這一點(diǎn)上，除了低分子量的肝素片斷之外，其它靶向配位體(如涉及血小板激活部分的，例如抗纖維蛋白抗體、組織血纖維蛋白溶酶原激活劑(t-PA)、抗-血栓抗體和纖維蛋白抗體)可用于靶向釋放血凝塊的活性斑。最優(yōu)選的靶向配位體是靶向激活血小板時(shí)除靶向P-選擇蛋白之外的與GPIIbIIIa相關(guān)的血漿膜和涉及GPIIbIIIa的抗體或相關(guān)抗體的那些。本發(fā)明也用于檢測急性心肌梗塞的區(qū)域。一般來說，通過在類脂、聚合物或穩(wěn)定材料上結(jié)合抗肌漿球蛋白(特別是心肌漿球蛋白)抗體或抗肌動蛋白抗體，梗塞的心肌可通過本發(fā)明的方法來檢測。對于靶向顆粒組織(傷口愈合)來說，許多上述靶向配位體都可使用。傷口愈合三肽(精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸(RGD))也可用作這種靶向配位體。如上文討論的內(nèi)皮細(xì)胞那樣，各種各樣的肽、蛋白質(zhì)和抗體都可用作靶向于內(nèi)皮細(xì)胞的靶向配位體。優(yōu)選地，可選擇肽，包括對內(nèi)皮細(xì)胞靶受體具有高親和性的合成的、半合成的或天然產(chǎn)生的肽，合成的肽是更優(yōu)選的。在這些優(yōu)選的實(shí)施方案中，具有大約5-15個氨基酸殘基的肽是優(yōu)選的?？贵w可作為整個抗體或抗體片斷來使用，例如，F(xiàn)ab或Fab′2，或者是天然的或者是重組的。天然抗體可來源于動物或人，或可以是嵌合的(小鼠/人)。人重組的或嵌合的抗體是優(yōu)選的而對于整個抗體來說，片斷是優(yōu)選的。本發(fā)明組合物中可用作靶向配位體的單克隆抗體的例子包括CALAM27，它是通過用整個人舌鱗狀細(xì)胞癌使BALB/c小鼠免疫并且通過用NS1同源骨髓瘤細(xì)胞系交叉提取脾細(xì)胞形成雜交瘤而形成的。參見Gioanni，J等的“癌癥研究”(CancerResearch)，Vol.47，pp.4417-4424(1987)。CALAM27涉及正常的和有害的內(nèi)皮細(xì)胞的表面抗原決定部位。正常的淋巴結(jié)通常不含有表達(dá)這些抗原決定部位的細(xì)胞。參見“癌癥研究”(CancerResearch)，Vol.47，pp.4417-4424(1987)。因此，含有這些抗體的類脂和/或內(nèi)皮組合物可用于靶向淋巴結(jié)中的轉(zhuǎn)移瘤。單克隆抗體3C2可被用作靶向配位體，它靶向于嚴(yán)重的卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌的有害內(nèi)皮細(xì)胞。另一個靶向配位體的例子是Mab4C7(參見“癌癥研究”Vol.45，2358-2362，1985)，它可用于靶向粘膜癌、子宮內(nèi)膜癌和中腎癌。對于靶向頭和頸癌中的鱗狀細(xì)胞癌來說，MabE48(“生物學(xué)文獻(xiàn)”(BiologicalAbstract)，Vol.099Issue.066Ref.082748)可用作靶向配位體。對于靶向有害的黑素瘤來說，可使用單克隆抗體225.28s(Pathol.Biol.，Vol.38(8)，pp.866-869，1990)?？蛇x擇靶向于抗原的靶向配位體，所述抗原包括與乳腺癌相關(guān)的抗原(如表皮生長因子受體(EGFR)、纖維細(xì)胞生長因子受體、erbB2/HER-2)和與碳水化合物抗原有關(guān)的腫瘤的抗原(Cancer，Vol.74(3)pp.1006-12，1994)。CTA16.88，類似于細(xì)胞角蛋白8、18和19，是通過大多數(shù)上皮衍生的腫瘤(包括結(jié)腸、胰腺、乳腺、卵巢和肺癌)表達(dá)的。因此，涉及這些細(xì)胞角蛋白(如16.88(IgM)和88BV59(IgG3k)，它識別CTA16.88上的不同的抗原決定部位(Semin.Nucl.Med.，Vol.23(2)，pp.165-79，1993)的抗體可用作靶向配位體。為靶向結(jié)腸癌，抗-CEAIgGFab′片斷可用作靶向配位體。化學(xué)結(jié)合的二特異的抗-細(xì)胞表面抗原、抗-半抗原Fab′-Fab抗體也可用作靶向配位體。MG系列的單克隆抗體可被選擇用于靶向例如胃癌(Chin.Med.Sci.J.，Vol.6(1)，pp.56-59，1991)。有各種可選擇靶向于表皮細(xì)胞上細(xì)胞表面抗原決定部位的靶向配位體。例如，與皮膚和粘膜的良性和惡性表皮增殖相關(guān)的蛋白質(zhì)人乳頭瘤病毒(HPV)兩種HPV致瘤蛋白質(zhì)(E6和E7)可作為在某些上皮衍生的癌(如頸癌)中可表達(dá)的靶。參見Curr.Opin.Immunol.Vol.6(5)，pp.746-54(1994)。肽生長因子(PGF-R)(它包含在癌細(xì)胞增殖中的膜受體也可用作腫瘤抗原(AnticancerDrugs，Vol.5(4)，pp.379-93(1994))。而且，表皮生長因子(EGF)和白細(xì)胞介素-2可作為合適靶向配位體的靶，所述配位體包括肽，它與這些受體結(jié)合。某些與黑素瘤有關(guān)的抗原(MAA)(如表皮生長因子(EGFR)和粘合分子(TumorBiol.，Vol.15(4)，pp.188-202，1994)，它通過惡性黑素瘤細(xì)胞表達(dá))可作為本文提供的組合物的靶。在癌細(xì)胞表面的與腫瘤相關(guān)的抗原FAB-72也可以作為靶被選擇?？蛇x擇各種各樣的靶向配位體靶向于心肌細(xì)胞。靶向配位體的例子包括抗心肌漿球蛋白抗體，它可含有多克隆抗體，F(xiàn)ab′2片斷，或來源于人、動物(例如，來源于小鼠)，或來源于嵌合體。其它靶向配位體包括潘生丁、洋地黃、硝苯吡啶、阿樸脂蛋白、低密度脂蛋白(LDL)(包括α-LDL、ν-LDL和甲基LDL)、ryanodine、內(nèi)皮肽、I型補(bǔ)體受體、IgGFc、β-1-類腎上腺素能藥、二氫吡啶、腺苷、鹽皮質(zhì)激素、煙酸乙酰膽堿和毒蠅堿性乙酰膽堿、人α1A-腎上腺素受體的抗體、生物活性劑(如藥物，包括α1-拮抗劑哌唑嗪)、抗β受體的抗體、與抗β受體結(jié)合的藥物、抗-心RyR抗體、內(nèi)皮肽(它是一種內(nèi)皮細(xì)胞衍生的血管收縮肽，對心組織產(chǎn)生強(qiáng)的增強(qiáng)收縮力的作用，內(nèi)皮肽-1結(jié)合在心肌纖維膜上的泡囊上)、單克隆抗體(它可產(chǎn)生T細(xì)胞受體αβ受體，從而用于產(chǎn)生靶向配位體)、補(bǔ)體抑制劑sCR1、產(chǎn)生二氫吡啶受體的藥物、肽或抗體、趨向于抗白細(xì)胞介素2受體的單克隆抗體(該受體可被用作靶向配位體來使本發(fā)明的組合物到達(dá)心肌組織區(qū)域，該組織表達(dá)該受體并在發(fā)炎情況下可被上調(diào))、類似使組合物到達(dá)發(fā)炎心肌組織區(qū)域的環(huán)孢子菌素、甲基異丁基異腈、結(jié)合心肌細(xì)胞和心內(nèi)皮細(xì)胞上特異糖的植物凝集素、腎上腺髓質(zhì)激素(ADM，是一種內(nèi)源性降壓和血管松弛的肽)、前房尿鈉排泄肽(ANP)、C-型尿鈉排泄肽(CNP，它是一種來源于內(nèi)皮細(xì)胞的22個氨基酸的肽并且結(jié)構(gòu)與前房尿鈉排泄肽相關(guān)但在遺傳學(xué)上有區(qū)別，并降壓作用于血管的和抗有絲分裂發(fā)生活性)、vasonatrin肽(VNP，它是前房尿鈉排泄肽(ANP)和C-型尿鈉排泄肽(CNP)的嵌合體并含有27個氨基酸)、凝血酶、內(nèi)皮衍生的松弛因子(EDRF)、中性肽鏈內(nèi)切酶1(NEP-1)、EDRF競爭抑制劑(例如，包括NG-單甲基-L-精氨酸(L-NMMA))、鉀通道拮抗劑(如卡律蝎毒素和優(yōu)降糖)、抗心臟抗體(它可用特發(fā)的擴(kuò)張心肌病病人來鑒定但優(yōu)選不引起心肌的細(xì)胞溶解)、抗腺嘌呤核苷易位劑、支鏈酮酸脫氫酶或肌球蛋白的抗體、內(nèi)皮肽-A-受體的特異性拮抗劑(可被稱作BQ-123)和血管緊張素II受體的抗體。心肌纖膜的兩種主要的抗原是結(jié)合鈣的糖蛋白，它與二氫吡啶受體一起純化。抗血清可被提出，包括多克隆或單克隆抗體，抗純化的肌纖膜。這些抗體也可用作靶向配位體?？蓮募±w膜的血漿膜中分離結(jié)合鈣的糖蛋白的純化部分，然后用于產(chǎn)生抗體。上文所述的可用作靶向配位體的ANP可提供培養(yǎng)人主動脈內(nèi)皮細(xì)胞來獲得。ANP通常位于內(nèi)皮，但也可位于內(nèi)皮或心肌組織。ANP可被制備，例如使用重組技術(shù)，以及通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的肽合成技術(shù)合成該肽。使用趨向于ANP的抗體(多克隆的或單克隆抗體)是可能的。類似地，趨向ANP的肽可被用于靶向內(nèi)皮和/或心肌細(xì)胞。α和β形式的前房尿鈉排泄因子可被用作使本組合物到達(dá)心肌組織的強(qiáng)的靶向配位體。各種各樣的靶向配位體可被使用來使得本類脂組合物(特別是泡囊組合物)到達(dá)GPIIbIIIa受體。到達(dá)GPIIbIIIa受體的組合物對于靶向血管血栓的形成和血凝塊是非常有用的，可用于診斷以及治療此血凝塊。包括在其中的這些配位體有、例如，肽，如Arg-Gly-Asp-Ser(RGDS)，Gly-Arg-Gly-Asp-Ser-Pro(GRGDSP)和Gly-Pro-Arg-Pro(GPRP)。含有Arg-Gly-Asp(RGD)序列的五肽也可以使用，例如包括G4120(它是含有Arg-Gly-Asp(RGD)氨基酸序列的環(huán)狀肽)。由人凝血因子XIIIA衍生的肽也是有用的，例如包括下列片斷NKLIVRRGQSFYVQIDFSRPYDPRRDLFRVEYVIGRYPQENKGTYIPVPIVSELQSGKWGAKIVMREDRSVRLSIQSSPKCIVGKFRMYVAVWTPYGVLRTSRNPETDTYILFNPWCEDDAVYLDNEKEREEYVLNDIGVIFYGEVNDIKTRSWSYGQF-R′其中R′為-CONH2或-NH2。另外，含有因子XIIIA片斷的肽也是有用的，它包括下列序列NKLIVRRGOSFYVQIDFSRPYDPRRD或DDAVYLDNEKEREEYVLNDIGVIFYGEVNDIKTRSWSYGQF.其它可用作靶向于GPIIbIIIa受體的靶向配位體的肽例如包括含有精氨酸-酪氨酸-天門冬氨酸(Arg-Tyr-Asp，也縮寫為RGD)三肽序列的肽，它的氨基端與羧基端相連并且可結(jié)合到活化的血小板上的GPIIbIIIa結(jié)合區(qū)。此肽的例子包括通式為R1-(X1)n-Arg-Tyr-Asp-(Y)o(X2)m-R2，的肽，其中X1、X2和Y可獨(dú)立地為一個或多個氨基酸殘基，盡管在某些情況下Y優(yōu)選不是絲氨酸或丙氨酸殘基，m、n和o為0或1，在某些情況下的條件是m為1時(shí)o為0，并且R1為保護(hù)或未保護(hù)的末端氨基而R2為保護(hù)或未保護(hù)的末端羧基。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，X1為肽Ala-Arg-Arg-Ser-Ser-Pro-Ser-Tyr-Tyr且X2為肽Gly-Ala-Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ala-Met-Asp-Tyr。有用的肽包括Arg-Ser-Pro-Ser-Tyr-Tyr-Arg-Tyr-Asp-Gly-Ala-Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ala-Met-Asp-TyrandAla-Arg-Arg-Ser-Pro-Ser-Tyr-Tyr-Arg-Tyr-Asp-Gly-Ala-Gly-Pro-Tyr-Tyr-Ala-Met-Asp-Tyr.將天然氨基酸序列與合成氨基酸結(jié)合的合成化合物也可以用作靶向配位體，如纖維蛋白原受體拮抗劑化合物，它包含序列XX-Gly-Asp，其中XX為合成的α-氨基酸，它包含一直鏈側(cè)鏈，如其中n+n′為3；AA為單鍵；并且R為苯基或芐基；或-(CH2)n-AA-(CH2)n-NHR，其中n為1-4的整數(shù)；n′為2-4的整數(shù)；A為氧、硫或單鍵；并且R為H、C1-6烷基、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的芳基甲基或者取代的或未取代的環(huán)烷基，假設(shè)，在某些情況下，當(dāng)AA為單鍵并且R為H，n+n′不為3或4。另一個該化合物包含下式纖維蛋白原受體拮抗劑其中XX為合成的α-氨基酸，它包含一直鏈側(cè)鏈，該側(cè)鏈的結(jié)構(gòu)式為其中n+n′為3；AA為單鍵；并且R為苯基或芐基；或者-(CH2)n-AA-(CH2)n-NHR，其中n為1-4的整數(shù)；n′為2-4的整數(shù)；A為氧、硫或單鍵；并且R為H、C1-6烷基、取代的或未取代的環(huán)烷基，假設(shè)，在某些情況下，當(dāng)AA為單鍵并且R為H，n+n′不為3或4，并且ZZ為1-4個取代或未取代的氨基酸序列。例如，氣體可用作靶向配位體的肽包括“Elegantin”它具有下列序列Gly-Glu-Glu-Cys-Asp-Cys-Gly-Ser-Pro-Glu-Asn-Pro-Cys-Cys-Asp-Ala-Ala-Thr-Cys-Lys-Leu-Arg-Pro-Gly-Ala-Gln-Cys-Ala-Asp-Gly-Leu-Cys-Cys-Asp-Gln-Cys-Arg-Phe-Lys-R-R′-Arg-Thr-Ile-Cys-Arg-Arg-Ala-Arg-Gly-Asp-Asn-Pro-Asp-Asp-Arg-Cys-Thr-Gly-Gln-Ser-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Asn-Gly-Tyr，其中，各R和R′獨(dú)立地為任何氨基酸；“Albolabrin”，它具有下列序列Glu-Ala-Gly-Glu-Asp-Cys-Ays-Cys-Gly-Ser-Pro-Ala-Asn-pro-Cys-Cys-Asp-Ala-Ala-Thr-Cys-Lys-Leu-Leu-Pro-Gly-Ala-Gln-Cys-Gly-Glu-Gly-Leu-Cys-Cys-Asp-Gln-Cys-Ser-Phe-Met-Lys-Lys-Gly-Thr-Ile-Cys-Arg-Arg-Ala-Arg-Gly-Asp-Asp-Leu-Asp-Asp-Tyr-Cys-Asn-Gly-Ile-Ser-Ala-Gly-Cys-Pro-Arg-Asn-Pro-Leu-His-Ala；“Batroxosatin”，它具有下列序列Glu-Ala-Gly-Glu-Glu-Cys-Asp-Cys-Gly-Thr-Pro-Glu-Asn-Pro-Cys-Cys-Asp-Ala-Ala-Thr-Cys-Lys-Leu-Arg-Pro-Gly-Ala-Gln-Cys-Ala-GluGly-Leu-Cys-Cys-Asp-Gln-Cys-Arg-Phe-Lys-Gly-Ala-Gly-Lys-Ile-Cys-Arg-Arg-Ala-Arg-Gly-Asp-Asn-Pro-Asp-Asp-Cys-Thr-Gly-Gln-Ser-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-Phe；和“Flavoridin”，Gly-Gly-Glu-Cys-Asp-Cys-Gly-Ser-Pro-Glu-Asn-Pro-Cys-Cys-Asp-Ala-Ala-Thr-Cys-Lys-Leu-Arg-Pro-Gly-Ala-Gln-Cys-Ala-Asp-Gly-Leu-Cys-Cys-Asp-Gln-Cys-Arg-Phe-Lys-R-R′-Arg-Thr-Ile-Cys-Arg-Ile-Ala-Arg-Gly-Asp-Phe-Pro-Asp-Asp-Arg-Cys-Thr-Gly-Leu-Ser-Ala-Asp-Cys-Pro-Arg-R-Asn-Asp-Leu，其中，各R和R′獨(dú)立地為任何氨基酸。其它用于將GPIIbIIIa受體作為靶的配位體包括合成的化合物，如Ac-(D)Phe-Pro-boroArg和環(huán)狀擬肽的環(huán)(D-2-氨基丁酸-N-甲基-L-精氨酸-甘氨酸-L-天冬氨酰-3-氨基-甲基-苯甲酸)甲磺酸鹽。也可以使用的肽包括下列庫以半胱氨酸基(能夠形成環(huán)狀二硫鍵)作為側(cè)鏈的六肽和具有Arg-Gly-Asp或Lys-Gly-Asp序列的壞狀、二硫鍵形式的肽以及羧基端衍生的肽，REYVVMWK。某些母體糖蛋白如Tbrombospondin也可以在恢用途中使用。其它可使用的配位體為絲氨酸蛋白酶抑制劑的serpin族，如1型纖維蛋白溶酶原激活劑抑制劑(PAI-1)。一般來講，用作GPIIbIIIa受體靶向配位體的肽優(yōu)選具有約3-約20個氨基酸，具有約4-約15個氨基酸的肽是更優(yōu)選的。甚至更優(yōu)選地，GPIIbIIIa受體的靶向配位體可以包含具有約4-約8個氨基酸的肽，具有約4-約6個或大約5個氨基酸的肽是進(jìn)一步優(yōu)選的。如果需要，可以將肽環(huán)化，例如通過(1)側(cè)鏈-側(cè)鏈共價(jià)鍵，例如包括，通過將含氨基酸或其類似物，例如包括半胱氨酸或青霉胺的硫醇氧化形成的二硫鍵；(2)末端-側(cè)鏈共價(jià)鍵，例如包括，通過使用氨基酸序列的氨基端和側(cè)鏈的羧酸根基，如非關(guān)鍵性的谷氨酸或天冬氨酸基形成的共價(jià)鍵?；蛘撸┒?側(cè)鏈共價(jià)鍵可以包括氨基酸序列的羧酸根端和側(cè)鏈氨基、脒、胍或其它基團(tuán)形成的共價(jià)鍵，其中，所述其它基團(tuán)的側(cè)鏈包含親核的氮原子，例如該側(cè)鏈基包括賴氨酸、精氨酸、高精氨酸、高賴氨酸等；(3)末端-末端共價(jià)鍵，該共價(jià)鍵為高精酰胺鍵等。該方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。另外，也可以使用“假環(huán)化”，其中通過非共價(jià)鍵的相互作用，如靜電的相互作用產(chǎn)生環(huán)化，所述非共價(jià)鍵相互作用包括將二級結(jié)構(gòu)折疊形成一環(huán)狀部分。期望金屬離子有助于誘導(dǎo)“假環(huán)”形成。該假環(huán)的形成可能類似于“鋅指”。如本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的那樣，鋅指由于在鋅離子(Zn2+)和半胱氨酸、青霉胺和/或高半胱氨酸之間的靜電相互作用，形成一襻(手指)狀區(qū)域。在存在高半胱氨酸的情況下，RGD將存在于手指尖。當(dāng)然，已知在本發(fā)明中，任何種穩(wěn)定環(huán)化都是適宜的，只要能夠識別和連接肽配位體，如RGD保持適宜的構(gòu)型和/或受體圖象以便連接到凝塊中適宜的受體上，同時(shí)具有適宜的米氏常數(shù)(Km)或結(jié)合常數(shù)。本文所使用的術(shù)語“構(gòu)型”是指肽、類肽或假肽骨架的三維結(jié)構(gòu)，術(shù)語“受體圖象”是指是指肽、類肽或假肽側(cè)鏈的三維結(jié)構(gòu)。其它適宜的靶向配位體包括下列化合物Ac-Cys-Arg-Gly-Asp-Met-Pbe-Gly-Cys-CONH2；Ac-Cys-Arg-Gly-Asp-Met-Leu-Arg-Cys-CONH2；Ac-Cys-Arg-Gly-Asp-Phe-Leu-Asn-Cys-CONH2；Ac-Cys-Asn-Thr-Leu-Lys-Gly-Asp-Cys-CONH2；Ac-Cys-Asn-Trp-Lys-Arg-Gly-Asp-Cys-CONH2；以及Ac-Cys-N-甲基-Arg-Gly-Asp-Pen-CONH2，其中“Pen”指青霉胺(β-β-二甲基半胱氨酸)?？捎米靼邢蚺湮惑w的其它化合物包括由下式表示的肽或其衍生物A-B-Arg-Gly-Asp-C-D其中A為脯氨酸、巰基脯氨酸、羥基脯氨酸、脫氫脯氨酸、2-氧-4-噻唑烷羧酸、N-烷基甘氨酸或具有下式結(jié)構(gòu)的氨基酸衍生物色氨酸，或具有下式結(jié)構(gòu)的色氨酸衍生物焦谷氨酸或2-氮雜環(huán)丁烷二酮-4-羧酸；B為絲氨酸、甘氨酸、纈氨酸、丙氨酸、蘇氨酸或β-丙氨酸；C為具有疏水性官能團(tuán)的氨基酸基；并且D為羥基或氨基；其中R1為氫、-(CH2)pCH3或-CO-(CH2)pCH3，R2為氫或烷基；R3為氫或烷氧基；R4為氫或烷基；R5為氫，氨基或?；被?；m為2-5的整數(shù)；n為0-2的整數(shù)；p為0-5的整數(shù)；以及q為0-3的整數(shù)?？蛇m用于本發(fā)明組合物的另一靶向配位體為具有下式結(jié)構(gòu)的肽，肽衍生物，或其鹽A-B-Arg-Gly-Asp-C-D其中A為乳清酸或乳清氫酸；B為氨基酸；C為具有疏水性官能團(tuán)的氨基酸；以及D為羥基或氨基。在上述化合物中，在“C”的定義中具有疏水性官能團(tuán)的氨基酸的實(shí)例為色氨酸或苯丙氨酸。例如，Sato等在美國專利5,498,601中和在下列公開的歐洲專利申請EP0368486A2、EP0382451A2和EP0422938B1中公開了能夠在本發(fā)明組合物中用作靶向配位體的各種肽，特別是GPIIbIIIa，將該公開全文引入本文供參考。除了上述舉例說明的那些外，根據(jù)本公開，其它可在本發(fā)明組合物中使用的靶向配位體是本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的。例如其它適宜的靶向配位體包括共軛肽如糖共軛肽和外源凝集素，它們是與糖連接的肽。組合物中可以包含一個靶向配位體，以及兩個或多個不同的靶向配位體。本發(fā)明也通過具有下式結(jié)構(gòu)的化合物其中各X1獨(dú)立地為-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-NR4-、-X4-C(＝X5)-、-C(＝X5)-X4-或-C(＝X5)-；各X2和X3獨(dú)立地為直接的鍵、-R5-X4-C(＝X5)-、-R5-C(＝X5)-X4-、-X4-C(＝X5)-R5-、-C(＝X5)-X4-R5-、-X4-R5-C(＝X5)-X4-、-R5-X4-C(＝X5)-R5-C(＝X5)-X4-或-R5-C(＝X5)-X4-R5-X4-C(＝X5)-；各X4獨(dú)立地為-O-、-NR4-或-S-；各X5獨(dú)立地為O或S；M為-R5-X4-C(＝X5)-、-R5-C(＝X5)-X4-、-R5-X4-(YX5)P-(＝X5)-X4-或-X4-(YX5)P(＝X5)-X4-R5-；Y為氫或可藥用抗衡離子；Z為親水性聚合物；Q為靶向配位體或其前體；各R1獨(dú)立地為1到約50個碳的烷基；各R2獨(dú)立地為1到約30個碳的亞烷基；各R3和R4獨(dú)立地為氫或1到約10個碳的烷基；并且各R5獨(dú)立地為直接的鍵或1到約30個碳的亞烷基。在上式中，當(dāng)任何符號在某特定結(jié)構(gòu)式或取代基中出現(xiàn)一次以上時(shí)其在各實(shí)施例中的含義是彼此獨(dú)立地。在上式中，當(dāng)兩個或多個相鄰的符號定義為“直接的鍵”用來提供多個相鄰的直接的鍵時(shí)，該多個并且相鄰的直接的鍵合并為一個直接的鍵。在上式中，各X1獨(dú)立地為-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-NR4-、-X4-C(＝X5)-、-C(＝X5)-X4-或-C(＝X5)-；在優(yōu)選的實(shí)例中，各X1獨(dú)立地為-X4-C(＝X5)-、-C(＝X5)-X4-或-C(＝X5)-。更優(yōu)選地，各X1獨(dú)立地為-X4-C(＝X5)-或-C(＝X5)-X4-。進(jìn)一步優(yōu)選的，各X1獨(dú)立地為-C(＝X5)-X4-，例如，-C(＝O)-O-。在上式中，各X2和X3獨(dú)立地為直接的鍵，-R5-X4-C(＝X5)-，-R5-C(＝X5)-X4-、-X4-C(＝X5)-R5-、-C(＝X5)-X4-R5-、-X4-R5-C(＝X5)-X4-、-R5-X4-C(＝X5)-R5-C(＝X5)-X4-，或-R5-C(＝X5)-X4-R5-X4-C(＝X5)-。在優(yōu)選的實(shí)例中，各X2和X3獨(dú)立地為直接的鍵、-R5-X4-C(＝X5)-、-R5-C(＝X5)-X4-、-X4-C(＝X5)-R5-、-C(＝X5)-X4-R5-、-X4-R5-C(＝X5)-X4-或-R5-X4-C(＝X5)-R5-C(＝X5)-X4-。更優(yōu)選地，X2為-CH2CH2-C(＝O)-NH-或-CH2CH2NH-C(＝O)-CH2CH2-C(＝O)-NH-并且X3為直接的鍵、-C(＝O)-NH-、-NH-C(＝O)-、-NH-C(＝O)-CH2、-NHCH2-C(＝O)-NH-或-NH-C(＝O)-CH2CH2。在上式中，各X4獨(dú)立地為-O-、-NR4-或-S-。優(yōu)選地，各X4獨(dú)立地為-O-、-NR4-。在上式中，M為-R5-X4-C(＝X5)-、-R5-C(＝X5)-X4-、-R5-X4-(YX5)P(＝X5)-X4-或-X4-(YX5)P(＝X5)-X4-R5-。在某優(yōu)選實(shí)例中，M為-R5-X4-C(＝X5)-或-R5-X4-(YX5)P(＝X5)-X4-，更優(yōu)選地，M為-CH2O-C(＝O)-或-CH2O-(HO)P(＝O)-O-。在某些其它優(yōu)選的實(shí)例中，M為-R5-X4-C(＝X5)-或-R5-C(＝X5)-X4-。在其它進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)例中，M為-R5-X4-(YX5)P(＝X5)-X4-或-X4-(YX5)P(＝X5)-X4-R5-。其中，至少X4或X5中的一個為S。在上式中，Z為親水性共聚物。優(yōu)選地，Z選自聚烯化氧、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚噻吩嗪、聚(羥基烷基羧酸)和聚噁唑烷。更優(yōu)選地，Z含有聚氧化亞烴。甚至更優(yōu)選地，Z是選自聚乙二醇和聚丙二醇的聚氧化亞烴，聚乙二醇是更優(yōu)選的。在某些其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，Z是親水聚合物而不是包括聚乙二醇和聚丙二醇的聚氧化亞烴。Z的分子量可以變化，例如，取決于化合物的最終特定用途。優(yōu)選地，Z為具有約100-約10,000分子量范圍的聚合物，并且該范圍的所有聚合物都可以進(jìn)行組合和亞組合。更優(yōu)選地，Z為具有約1000-約5,000分子量的聚合物。也優(yōu)選顯示范圍約大于1到約3的多分散性的聚合物并包括所有在該范圍的組合和亞組合。更優(yōu)選地，Z是具有約大于1到約2的多分散性的聚合物，約大于1到約1.5的多分散性聚合物甚至是更優(yōu)選的，約大于1到約1.2的多分散性聚合物是最優(yōu)選的。在上式中，Q是靶向配位體或其前體。在Q為靶向配位體的實(shí)施方案中，Q優(yōu)選靶向于選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。另外，在Q為靶向配位體的實(shí)施方案中，Q優(yōu)選選自蛋白質(zhì)、肽、糖、甾體化合物、甾體類似物、生物活性劑和遺傳物質(zhì)。在后者實(shí)施方案中，Q優(yōu)選選自蛋白質(zhì)、肽和糖。在Q含有肽的實(shí)施方案中，Q優(yōu)選肽-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val或環(huán)狀肽，如DMP728(如參見Mousa等，ThrombosisResearch，Vol.76(2)，pp.109-119，1994)，其公開的全部內(nèi)容都引入本文供參考)。在Q為含有蛋白質(zhì)的實(shí)施方案中，Q優(yōu)選蛋白質(zhì)A。在Q為含有糖的實(shí)施方案中，Q優(yōu)選糖，甘露糖和葡萄糖是更選的。在Q為靶向配位體前體的實(shí)施方案中，Q優(yōu)選含有部分未飽和的或芳香的5-7元的含有1或2個N、O或S原子的單環(huán)，更優(yōu)選含有馬來酰亞胺部分或吡啶基部分。在上式中，R1獨(dú)立地為1-約50個碳原子范圍內(nèi)的烷基和在此范圍中的所有組合和亞組合，或者約2到約50個碳原子的亞烷基和在此范圍中的所有組合和亞組合。優(yōu)選地，R1獨(dú)立地為約1-約40個碳原子的烷基。更優(yōu)選R1獨(dú)立地為約5-約30個碳原子的烷基。甚至更優(yōu)選的R1獨(dú)立地為約10-約20個碳原子的烷基，約15個碳原子的烷基是最優(yōu)選的。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1為1到約20個碳原子的短鏈烷基。在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是約20-約50，或者約30-約50個碳原子的長鏈烷基。在上式中，R2獨(dú)立地為1-約30個碳原子范圍的亞烷基和在此范圍中的所有組合和亞組合。優(yōu)選地，R2獨(dú)立地為1-約20個碳原子的亞烷基。更優(yōu)選R2獨(dú)立地為1-約10個碳原子的亞烷基，最好R2獨(dú)立地為1-約5個碳原子的亞烷基，亞甲基是特別優(yōu)選的。在上式中，R3和R4獨(dú)立地為氫或1到約10個碳原子范圍的烷基和在此范圍中的所有組合和亞組合。優(yōu)選地，R3和R4各為氫或1-約5個碳原子的烷基。更優(yōu)選地，R3和R4都為氫。在上式中，R5獨(dú)立地為直接的鍵或1到約30個碳原子范圍的亞烷基和在此范圍中的所有組合和亞組合。優(yōu)選地，R5獨(dú)立地為直接的鍵或1-約20個碳原子的亞烷基。更優(yōu)選地，R5獨(dú)立地為直接的鍵或1-10個碳原子的亞烷基。甚至更優(yōu)選地，R5獨(dú)立地為直接的鍵或1-約5個碳原子的亞烷基。最優(yōu)選地，R5均為直接的鍵或-(CH2)x-，x為1或2。本文也提供下式化合物L(fēng)-P-T其中L為類脂、蛋白質(zhì)或聚合物；P為親水聚合物；和T為靶向配位體。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，L為選自下列物質(zhì)的類脂卵磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、心磷脂、膽固醇、膽固醇胺、溶血磷脂、赤型-鞘氨醇、鞘磷脂、神經(jīng)酰胺、腦苷脂類、飽和的磷脂、不飽和的磷脂和磷蝦磷脂。更優(yōu)選地，L是選自下列物質(zhì)的類脂卵磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰肌醇。在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，L為選自下列物質(zhì)的類脂1，2-二?；?sn-甘油基-3-膽堿磷酸、1，2-二?；?sn-甘油基-3-二氧磷基乙醇胺、1，2-二?；?sn-甘油基-3-〔二氧磷基-rac-(1-甘油)〕、1，2-二酰基-sn-甘油基-3-磷酸酯、1，2-二?；?sn-甘油基-3-〔磷酸絲氨酸〕、溶血磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰甘油、1，2-二?；?sn-甘油、1，2-二酰基-亞乙基-甘油基、N-(正己酰胺)-1，2-二?；?sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、N-十二烷酰基胺-1，2-二?；?sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、N-琥珀酰-1，2-二?；?sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、N-戊二酰基-1，2-二?；?sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺和N-十二烷酰基-1，2-二酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺。更優(yōu)選地，L為選自下列物質(zhì)的類脂1，2-二?；?sn-甘油基-3-膽堿磷酸、1，2-二酰基-sn-甘油基-3-二氧磷基乙醇胺、1，2-二?；?sn-甘油基-3-〔二氧磷基-rac-(1-甘油)〕、1，2-二?；?sn-甘油基-3-磷酸酯、1，2-二?；?sn-甘油基-3-〔磷酸絲氨酸〕、溶血磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰甘油和1，2-二?；?sn-甘油。在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，L為蛋白質(zhì)，它包含白蛋白。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，L為聚合物，它包含合成的聚合物或由單體制備的聚合物，所述單體選自丙烯酸、異丁烯酸、哌嗪、巴豆酸、丙烯酰胺、丙烯酸乙酯、異丁烯酸甲酯、異丁烯酸2-羥基乙酯、乳酸、羥基乙酸、ε-己內(nèi)酯、丙烯醛、腈基丙烯酸酯、雙酚A、表氯醇、羥基烷基丙烯酸酯、硅氧烷、二甲基硅氧烷、環(huán)氧乙烷、環(huán)氧丙烷、乙二醇、羥基烷基異丁烯酸酯、N-取代的丙烯酰胺、N-取代的異丁烯酰胺、N-乙烯基-2-吡咯烷酮、2，4-戊二烯-1-醇、乙烯基乙酸酯、丙烯腈、苯乙烯、對-氨基-苯乙烯、對-氨基芐基苯乙烯、苯乙烯磺酸鈉、2-次硫基乙基異丁烯酸鈉、乙烯基吡啶、異丁烯酸氨基乙酯和2-異丁烯酰氧基三腈基氯化銨。也優(yōu)選下列化合物，物質(zhì)L為聚合物，它包含合成的聚合物或共聚物，所述聚合物或共聚物選自聚丙烯酸、聚乙烯亞胺、聚異丁烯酸、聚異丁烯酸甲酯、聚硅氧烷、聚二甲基硅氧烷、聚乳酸、聚(ε-己內(nèi)酯)、環(huán)氧樹脂、聚(環(huán)氧乙烷)、聚(環(huán)氧丙烷)、聚(乙二醇)、聚酰胺、聚亞乙烯-聚丙烯腈、聚亞乙烯-聚丙烯腈-聚異丁烯酸甲酯和聚苯乙烯-聚丙烯腈。這些聚合物中優(yōu)選的是聚亞乙烯-聚丙烯腈共聚物。在上述化合物中，P為親水聚合物，優(yōu)選P為選自下面的親水聚合物聚烯化氧、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚磷氮雜烯、聚羥烷基羧酸和聚噁唑烷。更優(yōu)選P為聚烯化氧，尤其優(yōu)選聚乙二醇和聚丙二醇且最優(yōu)選聚乙二醇。在上述結(jié)構(gòu)式中，T為靶向配位體。優(yōu)選T為靶向選自下述細(xì)胞或受體的靶向配位體心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體。同樣在優(yōu)選的實(shí)施方案中，T為選自蛋白質(zhì)、肽類、糖類、類固醇、類固醇類似物、生物活性物質(zhì)和遺傳物質(zhì)的靶向配位體，其中較優(yōu)選蛋白質(zhì)、肽類和糖類。還優(yōu)選靶向動脈粥樣硬化區(qū)，尤其是動脈粥樣硬化斑的靶向配位體。在包括糖基的靶向配位體情況下，合適的糖部分包括，例如，單糖、二糖和多糖。典型的單糖可含有六個碳原子，且這些糖類包括阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖、古羅糖、艾杜糖、半乳糖、塔羅糖、果糖、阿洛酮糖、verbose和塔格糖。五碳糖包括核糖、阿拉伯糖、木糖、來蘇糖、核酮糖和木酮糖。四碳糖包括赤蘚糖、蘇阿糖和赤蘚酮糖。二糖類包括蔗糖、乳糖、麥芽糖、異麥芽糖和纖維素二糖。載有糖類的靶向配位體可通過多步有機(jī)合成途徑合成，參見下文更詳盡的說明。例如，載有靶向性葡萄糖部分的類脂可通過四芐基-α-吡喃葡糖基溴與ω-三氟乙酰氨基聚乙二醇反應(yīng)，得到四芐基-ω-吡喃葡糖基-ω′-三氟乙酰氨基聚乙二醇。然后可以將此產(chǎn)物在碳酸鈉或碳酸鉀溶液中水解，爾后氫化，得到ω-吡喃葡糖基-ω′-氨基聚乙二醇。氨基吡喃葡糖基終止的聚乙二醇隨后可與N-DPGS-琥珀酰亞胺反應(yīng)形成載有類脂的糖DPGS-NH-PEG-葡萄糖。也優(yōu)選靶向梗塞心肌的靶向配位體。在一些實(shí)施方案中，靶向配位體靶向癌細(xì)胞。本發(fā)明化合物的上述優(yōu)選實(shí)施方案對各種情況都優(yōu)選，這些包括合成的容易性、診斷效力、增強(qiáng)的生物相容性和/或改進(jìn)的靶向性效力。靶向配位體可通過各種方式結(jié)合到本發(fā)明組合物中。一般說來，通過與組合物中所包含的一種或多種物質(zhì)共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合，可以將靶向配位體結(jié)合到本發(fā)明組合物中，這些物質(zhì)例如包括類脂、蛋白質(zhì)、聚合物和/輔助穩(wěn)定物質(zhì)。優(yōu)選靶向配位體通過共價(jià)鍵與本發(fā)明組合物中所包含的一種或多種上述物質(zhì)結(jié)合。如上所述，本發(fā)明的優(yōu)選組合物包括類脂、蛋白質(zhì)或聚合物化合物。在這些組合物中，靶向配位體優(yōu)選與類脂、蛋白質(zhì)或靶向配位體與類脂、蛋白質(zhì)、聚合物和/或賦形劑結(jié)合的典型共價(jià)鍵包括酰胺(-CONH-)；硫代酰胺(-CSNH-)；醚(ROR′，其中R和R′可以相同或不同，且不為氫)；酯(-COO-)；硫酯(-COS-)；-O-；-S-；-Sn-，其中n大于1，優(yōu)選約2至約8，更優(yōu)選約2；氨基甲酸酯；-NH-；-NR-，其中R為烷基，例如，含1至約4個碳原子的烷基；尿烷和取代亞胺酸酯；以及兩種或多種上述這些共價(jià)鍵的組合。介于靶向配位體和例如類脂之間的共價(jià)鍵可通過利用可用作間隔基的分子完成，以增加配位體的構(gòu)象和地形的撓性。這類間隔基的實(shí)例包括琥珀酸、1，6己二酸、1，8辛二酸等，以及改性氨基酸如6氨基己酸、4氨基丁酸等。另外，在包括肽部分的靶向配位體情況下，側(cè)鏈-側(cè)鏈交聯(lián)可以用側(cè)鏈-端基交聯(lián)和/或端基-端基交聯(lián)補(bǔ)充。同樣，小分子間隔基如辛二亞胺酸二甲酯可用于實(shí)現(xiàn)類似目的。還可以采用包括在席夫堿型反應(yīng)中使用的反應(yīng)物。席夫堿鍵(可能為可逆鍵)通過利用還原性氨基化步驟可以形成較牢固的共價(jià)連鍵。此步驟涉及化學(xué)還原劑，如氫化鋁鋰還原劑或其溫和類似物，包括二異丁基氫化鋁鋰(DIBAL)，硼氫化鈉(NaBH4)或氰基硼氫化鈉(NaBH3CN)。靶向配位體與本發(fā)明組合物中的物質(zhì)(包括類脂、蛋白質(zhì)和/或聚合物)間的共價(jià)鍵可采用基于本發(fā)明公開內(nèi)容對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言為顯而易見的有機(jī)合成技術(shù)完成。例如，利用公知的偶合劑或活化劑，可以將靶向配位體連接到包括類脂的物質(zhì)上。正如專業(yè)人員所知道的那樣，活化劑一般為親電性的。使用這種親電性物質(zhì)有助于共價(jià)鍵的形成?？墒褂玫牡湫突罨瘎┌?，例如，羰基二咪唑(CDI)、二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)、二異丙基碳化二亞胺(DIC)、甲基磺酰氯、切除試劑和二苯基磷酰氯。共價(jià)鍵可包括交聯(lián)和/或聚合。交聯(lián)優(yōu)選是指聚合物的兩條鏈通過由元素，基團(tuán)或化合物組成的橋連接情況，這種橋通過共價(jià)化學(xué)鍵連接鏈中的某些碳原子。例如，交聯(lián)可以發(fā)生在由半胱氨酸殘基的二硫鍵連接的聚肽中。交聯(lián)可按下所述完成(1)加入化學(xué)物質(zhì)(交聯(lián)劑)并加熱混合物，或(2)高能輻射聚合物。例如R.L.Lunbland在“蛋白質(zhì)修飾技術(shù)”(TechniquesinProteinModification)，CRC出版社，Inc.，AnnArbor，MI，pp.249-68(1995)中描述了各種不同長度和/或官能度的交聯(lián)劑，或“系鏈”，此文獻(xiàn)所公開的內(nèi)容在此全部并入本文作為參考。典型的交聯(lián)劑包括，例如，3，3′-二硫代雙(琥珀酰并入本文作為參考。典型的交聯(lián)劑包括，例如，3、3′-二硫代雙(琥珀酰亞胺基丙酸酯)、辛二亞胺酸二甲酯及其變型(基于烴長度)，以及雙-N-馬來酰亞胺基-1，8-辛烷。根據(jù)優(yōu)選的實(shí)施方案，靶向配位體可通過連接基連接到類脂、蛋白質(zhì)或聚合物上。各種連接基是已知的，并且對本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員而言，一旦了解掌握了本
發(fā)明內(nèi)容，這些是顯而易見的。優(yōu)選連接基包括親水聚合物。合適的親水連接基聚合物包括，例如，聚烯化氧，如聚乙二醇(PEG)和聚丙二醇(PPG)，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯基甲基醚，聚丙烯酰胺，如聚甲基丙烯酰胺，聚二甲基丙烯酰胺和聚羥丙基丙烯酰胺，聚丙烯酸羥乙酯，聚甲基丙烯酸羥丙酯，聚甲基噁唑啉，聚乙基噁唑啉，聚羥乙基噁唑啉，聚羥丙基惡唑啉，聚乙烯醇，聚磷氮雜烯，聚羥烷基羧酸，聚噁唑烷和聚天冬酰胺。親水聚合物優(yōu)選選自PEG、PPG、聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮及它們的共聚物、其中較優(yōu)選PEG和PPG聚合物，更優(yōu)選PEG聚合物。因此，在涉及類脂組合物的實(shí)施方案中，其中類脂組合物包括載有如包括DPPE-PEG的聚合物的類脂，靶向配位體可與類脂連接的聚合物直接連接，以提供DPPE-PEG-TL共軛物，此處，TL為靶向配位體。因此，使用DPPE-PEG實(shí)例，如DPPE-PEG5000時(shí)，上述共軛物可以表示為DPPE-PEG5000-TL。用作連接基的親水聚合物優(yōu)選為雙官能聚合物，例如，雙官能PEG，如二氨基-PEG。在這種情況下，PEG基團(tuán)的一端與類脂化合物連接，并且其游離末端通過酰胺鍵與靶向配位體鍵合。還可使用其中一端被端羧基取代，而另一端被端氨基取代的親水聚合物，例如PEG。優(yōu)選后一類雙官能親水聚合物，因?yàn)樗鼈兙哂懈鞣N類似氨基酸的性質(zhì)。當(dāng)采用具有兩個單一端官能團(tuán)的連接基時(shí)，可使用標(biāo)準(zhǔn)肽方法學(xué)連接靶向配位體與類脂。雙官能親水聚合物，特別是雙官能PEGs，可采用標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)合成方法學(xué)合成。此外，許多這些物質(zhì)可以從市場上購得。例如，α-氨基ω-羧基PEG可從ShearwaterPolymers(Huntsville，AL)購得。使用PEG物質(zhì)作為連接基的優(yōu)點(diǎn)在于PEG的尺寸可以變化，從而使得乙二醇單體亞基數(shù)量可少至約5，或多至約500或更多。因此，如果需要，“系鏈”或鍵長可以變化。依據(jù)所用的特定靶向配位體，這可能是非常重要的。例如，包括大分子蛋白質(zhì)的靶向配位體可能需要短系鏈，以便模擬膜結(jié)合蛋白。短系鏈還容許泡囊保持對細(xì)胞的緊密鄰近。這樣有利于與還包括生物活性劑的泡囊結(jié)合使用，這是因?yàn)榭杀粋魉偷郊?xì)胞中的生物活性劑的濃度可大大增高。其它可以提供短系鏈的適宜的連接基為甘油醛。甘油醛可以通過席夫堿反應(yīng)與DPPE結(jié)合。其后的Amadori重排可以提供牢固的短連接基。席夫堿的β羰基然后可以與靶向性蛋白或肽的賴氨酸或精氨酸反應(yīng)，形成定向類脂。更準(zhǔn)確地講，本發(fā)明組合物中所用的化合物、包括類脂、蛋白質(zhì)和/或聚合物，可以含有各種官能團(tuán)，如羥基、硫基和氨基，利用合適的偶合條件，這些官能團(tuán)可以與親水聚合物連接基的羧酸或羧酸衍生物反應(yīng)，對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，一旦掌握了本發(fā)明的公開內(nèi)容，這些偶合條件是顯而易見的。羧基(或其衍生物)與官能團(tuán)如羥基、硫基或氨基反應(yīng)形成酯，硫酯或酰胺基之后，任何被護(hù)的官能團(tuán)可以利用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法脫保護(hù)。這里所用的術(shù)語“保護(hù)基”是指可用于阻止官能團(tuán)反應(yīng)并且根據(jù)需要可以被除去以得到未保護(hù)官能團(tuán)的任何基團(tuán)?？墒褂萌魏胃鞣N不同的保護(hù)基，不過這些基團(tuán)將根據(jù)受保護(hù)的基團(tuán)是氨基、羥基還是羧基而變化。倘如官能團(tuán)為羥基，適宜的保護(hù)基包括，例如，一些醚、酯和碳酸酯。這類保護(hù)基見例如Greene，TW和Wuts，PGM“有機(jī)合成中的保護(hù)基(ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis)”，JohnWiley，NewYork，2ndEdition(1991)中所述。此文獻(xiàn)的公開內(nèi)容在此全部并入本文作為參考。例如，典型的氨基保護(hù)基包括叔丁氧基羰基(Boc)、芐氧基羰基(Cbz)、鄰-硝基芐氧基羰基和三氟乙酰基(TFA)。包含在泡囊中的聚合物的主鏈上可能存在的氨基通過利用偶合劑(如戊二醛)形成席夫堿而與親水連接聚合物上的氨基偶聯(lián)。這種偶聯(lián)作用的實(shí)例見Allcock等人在“大分子”(Macromolecules)，Vol.19(6)，pp.1502-1508(1986)中所述，此文獻(xiàn)內(nèi)容在此全部并入本文作為參考。例如，如果泡囊由聚賴氨酸制成，游離氨基可以曝露在泡囊的表面，并且這些游離氨基可如上所述活化。隨后可使用活化氨基偶聯(lián)官能化親水聚合物，如α-氨基-ω-羥基-PEG，其中ω-羥基已用碳酸酯保護(hù)。在反應(yīng)完成之后，裂解碳酸酯，從而能活化端羥基與合適的靶向配位體反應(yīng)。。在某些實(shí)施方案中，泡囊的表面可通過置換含氯磷氮雜烯殘基如聚二氯磷氮雜烯中的氯原子活化。隨后與靶向配位體加成并用水或含水甲醇終止剩余的氯化物基團(tuán)，產(chǎn)生偶聯(lián)產(chǎn)物。此外，可以合成聚(二苯氧基磷氮雜烯)(Allcock等人“大分子”(Macromolecules)，Vol.(1986)19(6)，pp.1502-1508)并固定在DPPE上，隨后加入硝酸和乙酸酐混合物硝化苯氧基基團(tuán)。然后按下述活化產(chǎn)生的硝基例如，(1)用溶在0.1M磷酸緩沖液(pH11)中的溴化氰處理，接著加入含有游離氨基的靶向配位體產(chǎn)生偶聯(lián)的脲衍生物，(2)利用亞硝酸鈉/HCl，形成重氮鹽，接著加入靶向配位體形成偶聯(lián)配位體，和/或(3)利用二醛如上述戊二醛，形成席夫堿。在DPPE連接到親水聚合物和靶向配位體上之后，可以用本文所述方法配制泡囊。聚合物上的醛基可通過形成席夫堿與如上所述的胺偶聯(lián)。這種偶聯(lián)方法的實(shí)例見Allcock和Austin在“大分子”(Macromolecules)，Vol.14，p.1616(1981)中所述，此文獻(xiàn)內(nèi)容在此全部并入本文作為參考。上述方法中，聚合物或類脂如磷脂酰甘油或磷脂酰乙醇胺的末端優(yōu)選被活化，并與親水聚合物連接基偶合，類脂的末端用適宜方法封閉。作為此策略的實(shí)例，是在羥基苯并三唑存在下，在N-甲基吡咯烷酮中用1，1′-羰基二咪唑活化具有t-Boc保護(hù)的端氨基和游離羧基端基的α-氨基ω-羧基-PEG-4000。在加入磷脂酰乙醇胺之后，使用三氟乙酸(TFA)除去t-Boc基團(tuán)，給出游離胺。然后將胺與可包括有如類脂、蛋白質(zhì)、生物堿或其它物質(zhì)的靶向配位體通過類似的活化配位體來反應(yīng)，得到類脂-連接基-靶向配位體共軛物。可使用除上面所舉例說明之外的其它策略制備類脂-連接基-靶向配位體共軛物。一般說來，這些方法可使用合成有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域人員普遍公知的合成策略。正如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知道的那樣，免疫球蛋白一般包含有被證明為“鉸鏈”區(qū)的柔性區(qū)。例如參見“ConciseEncyclopediaofBiochemistry”，第二版，WalterdeGruyter&amp;Co.，pp.282-283(1988)。利用鉸鏈區(qū)中完整的硫醇部位，可將Fab′片斷連接到類脂、聚合物、蛋白質(zhì)和/或泡囊上。該區(qū)為偶合Fab′片斷的優(yōu)選區(qū)域，而這種Fab′片斷為遠(yuǎn)離抗原識別部位的潛在結(jié)合部位。一般說來，使用鉸鏈基團(tuán)的硫醇可能比較困難，除非它們能容易制得。更具體講，正如Shahinian和Salbias(“生物化學(xué)和生物物理學(xué)報(bào)”(BiochimicaetBiophysicaActa)，Vol1239(1995)157-167)所概述的那樣，重要的是還原硫醇以便它們能有效地偶合到馬來酰亞胺衍生物連接基。通常使用的還原劑的實(shí)例為乙二硫醇、巰基乙醇、巰基乙胺，且更常用二硫蘇糖醇(通常稱作Cleland試劑)。但是，應(yīng)當(dāng)注意的是，當(dāng)使用某些還原劑如二硫蘇糖醇時(shí)，應(yīng)小心操作，因?yàn)榭赡軙l(fā)生過還原。對于蛋白質(zhì)，甄別使用還原劑可能是必需的，因?yàn)檫^還原和其后的變形或構(gòu)型變化，可能會影響蛋白質(zhì)的活性或結(jié)合能力。例如，參見Shahinian，S.和Salvias，J.R.(1995)“生物化學(xué)和生物物理學(xué)報(bào)”(Biochim.Biophys.Acta)1239，157-167。F(ab′)2抗體片斷可通過在37℃下用胃蛋白酶(60μg/ml)/0.1M乙酸鈉(pH4.2)溫育抗體4小時(shí)制得。加入2MTris(pH8.8)終止消化，Tris的最終濃度為80mM。然后通過離心(10,000xg，30min，4℃)得到F(ab′)2片斷。隨后將上清液在150mMNaCl、20mM磷酸鹽(pH7.0)環(huán)境下于4℃透析。爾后將它們裝入A蛋白-SepharoseCL-4B柱中進(jìn)行層析，除去任何未消化的IgG。F(ab′)2片斷然后可在使用之前通過用氮?dú)饷摎鉀_洗溶液制備。可以得到5mg/ml濃度的F(ab′)2片斷，它們可以在30mM半胱氨酸中于氬氣氛下被還原。另一方面，也可使用半胱胺?？墒褂?00mMTris、pH7.6作為緩沖液，在37℃下溫育15分鐘。然后用等體積量合適的試驗(yàn)緩沖液將溶液稀釋2倍，并將它們旋轉(zhuǎn)通過0.4ml生物膠P-6DG自旋柱。所得F(ab′)2片斷在與馬來酰亞胺連接基偶合時(shí)效力更高。還應(yīng)注意，使用相同方法，也可以將含有半胱氨酸殘基的其它大分子物偶合到馬來酰亞胺間隔基上。同樣，也可以使用肽，條件是它們含有半胱氨酸殘基。如果肽不是新近制備的，肽結(jié)構(gòu)中的半胱氨酸殘基可能會被氧化，這樣可能需要用上述方法再生硫醇基。另外的連接基包括可用于偶合到雙官能間隔基上的類脂的其它衍生物。例如，磷脂酰乙醇胺(PE)可以偶合到雙官能物上。其中可使用例如4-(對-馬來酰胺基苯基)丁酸N-琥珀酰亞胺酯(SMPB)和3-(2-吡啶基二硫醇)丙酸N-琥珀酰亞胺酯(SPDP)、反-4-(N-馬來酰亞氨基甲基)環(huán)己烷-1-羧酸酯N-琥珀酰亞胺酯(SMCC)和3-馬來酰亞氨基苯甲酸N-琥珀酰亞胺酯(SMB)來產(chǎn)生雙官能化類脂MPB-PE和PDP-PE。親水間隔基如聚乙二醇乙胺(它們含有活性基團(tuán)，如胺或羥基)的游離端可用于結(jié)合輔因子或其它靶向配位體。例如，聚乙二醇乙胺可與N-琥珀酰亞氨基生物素或?qū)?硝基苯基生物素反應(yīng)，在間隔基上引入有用的偶合基。例如，生物素可偶合到間隔基上并且此間隔基很容易非共價(jià)結(jié)合蛋白質(zhì)。例如，MPB-PEG-DPPE可按下述合成。在PEG末端具有游離氨基的DPPE-PEG如前所述形成。然后在氯仿中利用1當(dāng)量三乙胺使SMPB和DPPE-PEG以1∶5摩爾比反應(yīng)合成SMPBPEG-DPPE。3小時(shí)后，在氬氣氣氛下蒸發(fā)反應(yīng)混合物至干。利用制備薄層色譜除去過量未反應(yīng)的SMPB和主要副產(chǎn)物(TLC，硅膠，用50％丙酮/氯仿展開)。利用20-30％甲醇/氯仿(V∶V)從硅膠上提取上部分類脂帶，結(jié)果分離到純凈完整的MPB-Peg-DPPE。然后可將鏈親和素偶合到蛋白質(zhì)上，以便蛋白質(zhì)本身隨后又被偶合到MPB-PEG-DPPE上。迅速將SPDP用鏈親和素在室溫下溫育30分鐘并使用色譜除去未反應(yīng)的SPDP。向反應(yīng)混合物中加入二硫蘇糖醇，10分鐘后，2-硫代吡啶酮的濃度為343nM。用DTT(25mM)還原反應(yīng)混合物的剩余物10分鐘。凝膠排阻沖洗分離硫醇鹽產(chǎn)物。所產(chǎn)生的鏈親和素標(biāo)記蛋白然后可用于結(jié)合與類脂部分固定的生物素化間隔基。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，靶向化合物，即靶向類脂、蛋白和聚合物被摻入到用于形成靶向泡囊的組合物中，這些靶向泡囊包括例如靶向微膠粒、靶向脂質(zhì)體、靶向白蛋白涂布泡囊和/或靶向聚合物涂布泡囊。連接到制備泡囊的化合物上的靶向配位體朝外定向離開泡囊表面。這樣提供了可用于靶向受體和組織的靶向泡囊。在某些實(shí)施方案中，靶向配位體可通過非共價(jià)締合方式摻入到本發(fā)明組合物中。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的那樣，非共價(jià)締合通常指各種因素的作用，包括，例如，所涉及分子的極性、所涉及分子的電荷(正電荷或負(fù)電荷)(如果有的話)、通過分子網(wǎng)絡(luò)的氫鍵的程度等。非共價(jià)鍵優(yōu)選選自離子相互作用、偶極-偶極相互作用、氫鍵、親水相互作用、范得瓦耳斯力以及它們的任何組合。非共價(jià)相互作用可被用于將靶向配位體鍵合到類脂上。或直接鍵合到泡囊的表面上。例如，氨基酸序列Gly-Gly-His可通過連接基如PEG鍵合到泡囊的表面，然后加入銅，鐵或釩離子。蛋白質(zhì)，如含有組氨酸殘基的抗體，隨后可通過含有銅離子的離子橋被鍵合到泡囊上，如美國專利5,466,467中所述，此文獻(xiàn)的公開內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。氫鍵的實(shí)例包括可被摻合到類脂組合物中的心磷脂類脂。在本發(fā)明涉及泡囊組合物的優(yōu)選方案中，例如，pH和/或體內(nèi)溫度的變化可以引起靶向配位體的位置變化，如從泡囊內(nèi)的位置變化到泡囊外壁的外部位置。這可以促進(jìn)靶向配位體與定向部位的結(jié)合，定向部位包括受體如GPIIbIIIa受體和組織，包括心肌，內(nèi)皮和上皮細(xì)胞，這是由于靶向配位體具有更大的暴露于這類定向部位的可能性。此外，高能超聲波可被用于促進(jìn)泡囊的破裂。這樣可以將靶向配位體暴露在需要的結(jié)合部位。如上所述，本發(fā)明的類脂和/或泡囊組合物最好在含水環(huán)境中配制。這種環(huán)境可誘導(dǎo)類脂(基于其疏水/親水性質(zhì))形成泡囊，它們是在這種環(huán)境中產(chǎn)生的最穩(wěn)定的構(gòu)型?？捎糜诋a(chǎn)生這種含水環(huán)境的稀釋劑包括，例如，水，包括去離子水或含有一種或多種溶解溶質(zhì)如鹽的水，優(yōu)選這些不干擾泡囊的形成和/或穩(wěn)定性或它們作為診斷劑如超聲波造影劑、MRI造影劑或“CT”造影劑用途的溶質(zhì)；以及普通鹽水和生理鹽水。本發(fā)明的類脂和/或泡囊組合物還可包括其它造影劑，包括常規(guī)造影劑，它們起著增強(qiáng)其作為診斷成像用造影劑效力的作用。因此，本發(fā)明提供了泡囊組合物，其中包括柔性泡囊，例如，由類脂配制形成的泡囊或非柔性泡囊，例如由聚甲基丙烯酸甲酯制備的泡囊。預(yù)期本發(fā)明組合物特別適用于超聲波儀，包括診斷和治療超聲波儀。本發(fā)明組合物在超聲波儀中的應(yīng)用遍及本發(fā)明說明書。如上所述，本發(fā)明組合物還用于計(jì)算機(jī)化X射線斷層攝影術(shù)(CT)成像。CT具有各種缺點(diǎn)，并且與上述診斷技術(shù)相比，常常是低效的。然而，如果有足夠高濃度的本發(fā)明造影劑，尤其是氣體填充的泡囊組合物，被傳送到感興趣的區(qū)域，如血塊，通過降低血塊的總密度，血塊可以在CT影像上被檢測到。通常，需要向感興趣的CT檢測區(qū)，包括前述血塊，傳送約1/10濃度或更高濃度(按體積計(jì))的1％氣體填充泡囊。適合本發(fā)明組合物使用的典型的順磁性造影劑包括，例如，穩(wěn)定自由基，如穩(wěn)定硝基氧化物，以及包括過渡元素，鑭系和錒系元素的化合物；如果需要，它們可以為鹽形式或可以共價(jià)鍵或非共價(jià)鍵方式與配位劑，包括其親脂衍生物結(jié)合，或與大分子蛋白質(zhì)結(jié)合。優(yōu)選的過渡元素，鑭系和錒系元素包括，例如，Gd(III)、Mn(II)、Cu(II)、Cr(III)、Fe(II)、Fe(III)、Co(II)、Er(II)、Ni(II)、Eu(III)和Dy(III)。更優(yōu)選的元素可以為Gd(III)、Mn(II)、Cu(II)、Fe(II)、Fe(III)、Eu(III)和Dy(III)，尤其是Mn(II)和Gd(III)。如果需要，上述元素可以為鹽形式，包括無機(jī)鹽，如錳鹽，如氯化錳、碳酸錳、乙酸錳；以及有機(jī)鹽，如葡糖酸錳和羥基磷灰石錳。其它代表性鹽包括鐵鹽，如硫化鐵和三價(jià)鐵鹽如氯化鐵(III)。如果需要，這些元素還可通過共價(jià)或非共價(jià)締合與配位劑包括其親脂衍生物或蛋白質(zhì)大分子結(jié)合。優(yōu)選的配位劑包括，如二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-N，N′，N′，N-四乙酸(DOTA)、1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷-N，N′，N″-三乙酸(DOTA)、3，6，9-三氮雜-12-氧雜-3，6，9-三羧基亞甲基-10-羧基-13-苯基-三癸酸(B-19036)、羥基芐基亞乙基二胺二乙酸(HBED)、N，N′-雙(吡啶氧基-5-磷酸鹽)亞乙基二胺、N，N′-二乙酸鹽(DPDP)、1，4，7-三氮雜環(huán)壬烷-N，N′，N″-三乙酸(NOTA)、1，4，8，11-四氮雜環(huán)十四烷-N，N′，N″，N-四乙酸(TETA)、kryptands(大環(huán)配合物)和去鐵胺。較優(yōu)選的配位劑為EDTA、DTPA、DOTA、DO3A和kryptands，最優(yōu)選DTPA。優(yōu)選的親脂配合物包括配位劑EDTA、DOTA的烷基化衍生物，例如，N，N′-雙(羧基癸酰胺基甲基-N-2，3-二羥基丙基)-亞乙基二胺-N，N′-二乙酸鹽(EDTA-DDP)；N，N′-雙(羧基十八烷酰氨基-甲基)-N-2，3-二羥基丙基)亞乙基二胺-N，N′-二乙酸鹽(EDTA-ODP)；N，N′-雙(羧基-月桂酰氨基甲基-N-2，3-二羥基丙基)亞乙基二胺-N，N′-二乙酸鹽(EDTA-LDP)等等，包括美國專利5,312,617中所描述的那些，此文獻(xiàn)的內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。優(yōu)選的蛋白質(zhì)大分子包括，如β-球蛋白，在更優(yōu)選白蛋白、聚精氨酸、聚賴氨酸和聚組氨酸。因此，合適的配合物包括Mn(II)-DTPA、Mn(II)-EDTA、Mn(II)-DOTA、Mn(II)DO3A、Mn(II)-kryptands、Gd(II)-DTPA、Gd(III)-DO3A、Gd(III)-krytands、Cr(III)-EDTA、Cu(II)-EDTA或鐵-去鐵胺，尤其是Mn(II)-EDTA或Gd(III)-DTPA。硝基氧化物為順磁性造影劑，由于硝基氧化物分子中存在未成對電子，它們能增加MRI的T1和T2松弛速率。正如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知道的那樣，用作MRI造影劑的特定化合物的順磁效應(yīng)可能(至少部分)與順磁性分子中的未成對電子的數(shù)量有關(guān)，特別是與未成對電子數(shù)量的平方有關(guān)。例如，釓具有七個未成對電子，而硝基氧化物分子含有一個未成對電子。因此，與硝基氧化物相比，釓常常是更強(qiáng)的MRI造影劑。然而，效應(yīng)相關(guān)時(shí)間(評估造影劑效力的另一重要參數(shù))使得硝基氧化物具有增強(qiáng)的弛豫能力。當(dāng)通過連接順磁性造影劑到大分子上來減慢轉(zhuǎn)動速率時(shí)，轉(zhuǎn)動將變得更慢，從而能更有效地轉(zhuǎn)移能量加速水質(zhì)子的弛豫。然而，在釓中，電子自旋弛豫非常迅速，限制了緩慢旋轉(zhuǎn)相關(guān)時(shí)間能增加弛豫性的程度。但是，對于硝基氧化物，電子自旋相關(guān)時(shí)間比較適宜，弛豫性的極大增加可通過減慢這些分子的旋轉(zhuǎn)相關(guān)時(shí)間而達(dá)到。本發(fā)明的氣體填充泡囊特別適于達(dá)到減慢旋轉(zhuǎn)相關(guān)時(shí)間和弛豫性總改進(jìn)的目的。盡管不擬囿于任何特定的操作理論，但可以預(yù)料，由于硝基氧化物可以被設(shè)計(jì)能通過制備其烷基衍生物來涂布泡囊的四周，所得到的相關(guān)時(shí)間能被優(yōu)化。此外，所產(chǎn)生的本發(fā)明造影劑可視為磁性球，一種能使弛豫性達(dá)到最大限度的幾何構(gòu)型。如果需要，硝基氧化物可被烷基化或用其它方式衍生化，如硝基氧化物2，2，5，5-四甲基-1-吡咯烷氧基自由基和2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基自由基(TMPO)。適合本發(fā)明組合物中使用的典型的超順磁性造影劑包括受到磁疇的金屬氧化物和硫化物，亞鐵-或鐵磁性化合物，如純鐵、磁性氧化鐵如磁鐵礦、γ-Fe2O3、Fe3O4、錳鐵、鈷鐵和鎳鐵。順磁性氣體也可以用于本發(fā)明組合物中，如氧17氣體(17O2)。此外，還可以使用超極化氙、氡或氦氣。然后可使用MR全身成像術(shù)迅速掃描身體來確定血栓形成；并且如果需要的話，可施加超聲波幫助血栓溶解。造影劑(如上面所述的順磁性和超順磁性造影劑)可用作類脂和/或泡囊組合物的組分。對于泡囊組合物，上述造影劑可被包裹在其內(nèi)腔內(nèi)，以含有泡囊的溶液形式施用，它們可與任何其它穩(wěn)定物摻合，或涂布在泡囊的表面或膜上。如果需要，順磁和超順磁劑可以其烷基化衍生物或其它衍生物的形式摻合在組合物中，尤其是摻合到泡囊的類脂壁內(nèi)被傳遞。特別是硝基氧化物2，2，5，5-四甲基-1-吡咯烷氧基自由基和2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基自由基，可以與長鏈脂肪酸在甲基未占居的環(huán)位置上通過各種連鍵，包括如乙酰氧基連鍵形成加合物。這種加合物非常適合摻入到本發(fā)明的類脂和/或泡囊組合物內(nèi)。任一種或多種順磁劑和/或超順磁劑的混合物可用于本發(fā)明組合物中。如果需要，順磁性劑和超順磁性劑還可獨(dú)立地共同施用。本發(fā)明的類脂和/或泡囊組合物，尤其是泡囊組合物，不僅用作上述超順磁劑的有效載體，而且還可改進(jìn)造影劑的磁化效應(yīng)。超順磁性造影劑包括金屬氧化物，特別是氧化鐵，但也包括氧化錳，如含有不同量的經(jīng)受磁疇的錳、鈷和鎳的氧化鐵。這些物質(zhì)為毫微或微顆粒，并具有很高的體積敏感性和橫向弛豫速率。較大顆粒，如直徑約100nm的顆粒，具有大大高于R1弛豫性的R2弛豫性。較小顆粒，例如直徑約10至約15nm的顆粒，則具有稍低的R2弛豫性，但仍大大高于R1和R2的平衡值。對于更小的顆粒，例如直徑約3至約5nm的單晶氧化鐵顆粒，則具有較低的R2弛豫性，但可能具有最大的R1和R2平衡值。也可配制鐵蛋白來包裹具有非常高弛豫速率的超順磁性鐵的核。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，類脂和/或泡囊組合物，尤其是泡囊組合物，包括氣體填充的泡囊，可以增加這些常規(guī)氧化鐵基MRI造影劑的效力和安全性。氧化鐵可簡單地?fù)饺氲筋愔?或泡囊組合物內(nèi)。優(yōu)選地，在類脂配制的泡囊情況下，氧化鐵可通過吸附在泡囊的表面摻入到泡囊的壁上，或者按美國專利5,088,499所述的方法包裹在泡囊的內(nèi)部，此文獻(xiàn)的公開內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。不要擬囿于任何特殊操作理論，據(jù)信本發(fā)明的泡囊可通過多種機(jī)理增高超順磁性造影劑的效力。首先，認(rèn)為泡囊起著增高氧化鐵顆粒的表觀磁濃度作用。同樣還認(rèn)為泡囊可增加MRI造影劑(包括順磁和超順磁劑)的表觀旋轉(zhuǎn)相關(guān)時(shí)間，從而增大弛豫速率。此外，泡囊似乎能根據(jù)下述方式增加造影劑的表觀磁疇。本發(fā)明的一些泡囊，尤其是由類脂制成的泡囊，可被看作是根據(jù)懸浮介質(zhì)具有不同磁化率的柔性球磁疇，懸浮介質(zhì)如造影劑的懸浮液或血或其它體液，例如，在肌內(nèi)注射或注射到體內(nèi)其它部位的情況下就如此。對于純粒鐵或氧化鐵顆粒，應(yīng)當(dāng)注意，由這些物質(zhì)提供的對比度依賴于顆粒尺寸。這種現(xiàn)象十分普遍并常常稱作水分子的“長期”弛豫。用更科學(xué)的術(shù)語講，這種弛豫機(jī)理依賴于分子配合物的有效尺寸，其中配合物中存在有順磁原子，或順磁分子或多分子。一種科學(xué)解釋可用下述Solomon-Bloembergen方程闡述，該方程將順磁作用定義為自旋1/2核的T1和T2弛豫時(shí)間與受順磁離子微擾的磁旋比g的函數(shù)1/T1M＝(2/15)S(S+1)γ2g2β2/r6[3τc/(1+ω12τc2)+7τc/(1+ωs2τc2)]+(2/3)S(S+1)A2/h2[τc/(1+ωs2τc2)]和1/T2M＝(1/15)S(S+1)γ2g2β2/r6[4τc+3τc/(1+ω12τc2)+13τc/(1+ws2τc2)]+(1/3)S(S+1)A2/h2[τc/(1+ωs2τc2)]其中S為電子自旋量子數(shù)；g為電子g因子；β為波爾磁子；ωI和ω5(657wI)為核自旋和電子自旋的拉莫爾角進(jìn)動頻率；r為離子-核距離；A為超精細(xì)偶合常數(shù)；τc和τe分別為偶極和與標(biāo)量相互作用的相關(guān)時(shí)間；和h為Planck常數(shù)。參見如Solomon，I.，“物理評論”(Phys.Rev.)Vol.99，p.559(1955)和Bloembergen，N.，“化學(xué)物理雜志”(J.chem.Phys.)Vol.27，pp.572，595(1957)。少量大顆?？赡芫哂斜却罅勘容^小的顆粒更大的作用，這主要?dú)w因于其具有較大相關(guān)時(shí)間。如果制得的氧化鐵顆粒非常大，則可能導(dǎo)致增加的毒性，并栓塞肺或可能激活補(bǔ)體串聯(lián)系統(tǒng)。此外，據(jù)信顆粒的總尺寸并不象顆粒直徑那樣對其邊或外表面十分重要。磁疇或敏感效應(yīng)隨顆粒表面增大呈指數(shù)下降。一般說來，對于偶極(通過空間)弛豫機(jī)理，這種指數(shù)下降顯示了r6與順磁性偶極-偶極相互作用之間的相互關(guān)系。從字面上講，距離順磁表面4埃的水分子比距離相同順磁表面2埃的水分子受到的影響小64倍。得到最大對比效果的理想情況使氧化鐵顆粒中空、具有撓性并盡可能大。迄今還不可能實(shí)現(xiàn)這種情況，據(jù)信這些優(yōu)點(diǎn)至今也未被認(rèn)識到。通過用造影劑涂布泡囊的內(nèi)或外表面，即使個體造影劑如氧化鐵毫微顆?；蝽槾烹x子具有相對較小的結(jié)構(gòu)，造影劑的效力也能大大提高。在這種情況下，造影劑可起非常有效的較大泡囊的作用，其中有效磁疇由泡囊的直徑?jīng)Q定并且在泡囊的表面上最大。這些造影劑提高了撓性，即可塑性。雖然剛性泡囊可能在肺部或其它器官中積聚并引起毒性反應(yīng)，但這些撓性泡囊能非常容易地滑過毛細(xì)管。與上述撓性泡囊相反，在某些情況下，最好用基本上不透性聚合材料制備泡囊，這些材料包括，例如，聚甲基丙烯酸甲酯。這樣往往導(dǎo)致形成這種泡囊，它們基本上為不透性的且為相對非彈性和脆性的。在涉及診斷成像例如超聲波成像的實(shí)施方案中，包含這種脆性泡囊的造影劑常常不能提供撓性泡囊所能提供的所需反射性。但是，通過增加超聲波的輸出功率，脆性泡囊可被破裂，從而產(chǎn)生能被超聲波傳感器檢測到的聲波發(fā)射。核醫(yī)學(xué)成像(NMI)也可與本發(fā)明的診斷和治療方法結(jié)合使用。例如，NMI可用于檢測放射性氣體，如Xe133，除上述氣體外它們可另外摻入到，或代替上述氣體摻入到本發(fā)明的組合物中。這種放射性氣體可包裹在泡囊內(nèi)用于檢測血栓形成。優(yōu)選地，雙官能螯合劑衍生物可摻入到泡囊的壁中，這樣產(chǎn)生的泡囊可用于NMI和超聲波。在這種情況下，高能、高質(zhì)量核醫(yī)學(xué)成像同位素如锝99m或銦111可被摻入到泡囊的壁中。然后可使用全身γ射線掃描照相機(jī)來迅速確定體內(nèi)吸收的泡囊所在的區(qū)域。如果需要，也可以使用超聲波來確定血管中血塊的存在，這是因?yàn)榕c核醫(yī)學(xué)成像相比，超聲波往往能提供改進(jìn)的分辨能力。NMI還可用于篩選患者整體以檢測血管血栓形成的面積，而超聲波則可施加到這些局部區(qū)域來促進(jìn)泡囊的破裂并治療血塊。對于光學(xué)成像，則可將光活性氣體如氬氣或氖氣摻入到本發(fā)明組合物中。此外，還可使用光活性材料，如熒光材料包括卟啉衍生物。彈性攝影術(shù)是一種成像技術(shù)，較之使用頻率大于1MHz的超聲波，這種成像方法往往使用較低頻率聲波，例如約60KHz。在彈性攝影術(shù)情況下，一般施加聲能到組織上，然后測定組織的彈性。在本發(fā)明優(yōu)選的涉及高彈性泡囊的實(shí)施方案中，這種泡囊在血塊上的聚焦增加了組織和/或血塊周圍空間的局部彈性。然后可用彈性攝影術(shù)測定這種增加的彈性。如果需要，彈性攝影術(shù)可與其它成像技術(shù)如MRI和超聲波結(jié)合使用。除上述診斷成像技術(shù)和血塊血栓溶解外，本發(fā)明組合物可用于各種診斷治療方式中。例如，生物活性劑如藥物可被摻入到本發(fā)明組合物內(nèi)。有用的藥物包括，例如，硫酸肝素、組織纖溶酶原激活物、鏈激酶和水蛭素。對于治療應(yīng)用，還可使用包括如二氫麥角胺的互補(bǔ)劑，它們可以與硫酸肝素一同使用以降低靜脈郁滯。此外，芐丙酮香豆素可用作抗凝血治療的輔劑。遺傳物質(zhì)也可被摻入到本發(fā)明組合物內(nèi)。在泡囊組合物情況下，遺傳物質(zhì)可摻入到泡囊的壁中，或摻入到泡囊的中央氣體填充的空腔中。當(dāng)泡囊壁使用陽離子類脂時(shí)，這種情況可很方便地完成。也可使用基因如血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，或定向堿性成纖維細(xì)胞生長因子的反義基因片斷。本發(fā)明可用于治療潛在的動脈粥樣硬化或用于降低細(xì)微內(nèi)膜增生趨勢。本發(fā)明的類脂和/或泡囊組合物可使用各種適宜的方法制備。這些分別見下面涉及類脂組合物和氣體，包括氣體填充的泡囊的實(shí)施方案和涉及類脂組合物和氣體前體，包括氣體前體填充的泡囊的實(shí)施方案中所述，不過既包括氣體又包括氣體前體的組合物也構(gòu)成了本發(fā)明的一部分。通過與組合物中所用的一種或多種物質(zhì)(組合物由它們制成)鍵合，靶向普通可連接到氣體或氣體前體填充的泡囊上，這些物質(zhì)包括如上所述的類脂、蛋白質(zhì)、聚合物和/或輔助穩(wěn)定物質(zhì)?？梢允褂酶鞣N方法制備本發(fā)明的組合物，包括泡囊組合物，如泡囊和/或脂質(zhì)體。這些方法包括如振蕩、干燥、氣體滴注、噴霧干燥等等。制備泡囊組合物的合適方法見美國專利5,469,854中所述，此文獻(xiàn)的內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。如上所述，泡囊優(yōu)選由保持凝膠態(tài)的類脂制備。關(guān)于泡囊組合物的制備，下面將給予討論。泡囊可使用對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的任何常規(guī)制備泡囊的方法制備。這些方法一般包括在有機(jī)溶劑中懸浮類脂化合物，蒸除溶劑，在含水介質(zhì)中再懸浮，超聲波處理和濃縮。上述方法以及其它方法見下述文獻(xiàn)中描述例如，Canfield等人MethodsinEnzymology，Vol.189，pp.418-422(1990)；EI-Gorab等人，Biochem.Biophys.Acta，Vol.306，pp.58-66(1973)；ColloidalSurfactant，Shinoda，K.，Nakagana，Tamamushi和Isejura，AcademicPress，NY(1963)(尤其是“TheFormationofMicelles”，Shinoda，Chapterl，pp.1-88)；CatalysisinMicellarandMacromolecularSystems，F(xiàn)endler和Fendler，AcademicPress，NY(1975)。上述各篇文獻(xiàn)的內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。如上所述，泡囊組合物可包括脂質(zhì)體。對于任何特定脂質(zhì)體，類脂化合物可以是單層或雙層形式。并且這種單層或雙層類脂可用于形成一個或多個單層或雙層。在多于一個單層或雙層情況下，單層或雙層一般是向心的。因此，類脂可用于形成單層脂質(zhì)體(由一個單層或雙層組成)，寡層脂質(zhì)體(由兩個或多個多層或雙層組成)或多層脂質(zhì)體(由多于三個多層或雙層組成)?？梢允褂酶鞣N方法制備脂質(zhì)體組合物，因此，脂質(zhì)體可使用對本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的任何一種常規(guī)脂質(zhì)體制備技術(shù)制備。這些技術(shù)包括，如溶劑滲析、弗氏壓碎法、擠壓(含有或不含冰凍-熔化過程)、反相蒸發(fā)、簡單冰凍-熔化、超聲波處理、螯合滲析、均化、溶劑滴注、微乳化、自然形成、溶劑蒸發(fā)、溶劑滲析、弗氏細(xì)胞壓碎技術(shù)、受控洗滌劑滲析等，各種這些技術(shù)都涉及制備不同形式的泡囊。例如，參見Madden等人ChemistryandPhysicsofLipids，199053，37-46，此文獻(xiàn)內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。例如，合適的冷凍-熔化技術(shù)見1989年11月8日遞交的國際專利申請PCT/US89/05040中描述的方法，此文獻(xiàn)內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。關(guān)于脂質(zhì)體的制備，優(yōu)選包括冷凍-熔化技術(shù)。脂質(zhì)體的制備可在溶液如鹽水溶液，磷酸緩沖液或無菌水中進(jìn)行。脂質(zhì)體也可以通過各種包括振蕩或渦旋的方法制備。這可通過利用機(jī)械搖動裝置完成，如Wig-L-BugTM(CrescentDental，Lyons，IL)，Mixomat，DegussaAG銷售(Fuankfurt，Germany)，Capmix，EspeFabrikPharmazeutischerPraeparateGMBH&amp;Co.銷售，Seefeld，OberayGermany，SilamatPlus，Vivadent，Lechtenstein銷售，Vibios，QuayleDental銷售(Sussex，England)。也可以使用常規(guī)微乳化裝置，如MicrofluidizerTM(Microfluidics，Woburn，MA)。也可以使用噴霧干燥法來制備氣體填充的泡囊。利用此方法，可將類脂在含水環(huán)境中預(yù)混合，然后噴霧干燥，得到氣體填充泡囊。這種泡囊可在所希望的氣氛下貯藏。下述文獻(xiàn)中已討論了眾多適合用于制備泡囊組合物的脂質(zhì)體制備技術(shù)美國專利4,728,578；英國專利申請GB2193095A；美國專利4,728,575；美國專利4,737,323；國際專利申請PCT/US85/01161；Mayer等人，BiochimicaetBiophysicaActa.Vol.858，pp.161-168(1986)；Hope等人，BiochimicaetBiophysicaActa，Vol.812，pp.55-65(1985)；美國專利4,533,254；Mayhew等人，MethodsinEnzymology，Vol.149，pp.64-77(1987)；Mayhew等人，BiochimicaetBiophysicaActa，Vol.755，pp.169-74(1984)；Cheng等人，InvestigativeRadiology，Vol.22.，pp.47-55(1987)；國際專利申請PCT/US89/05040；美國專利4,162,282；美國專利4,310,505；美國專利4,921,706；以及LiposomeTechnology，Gregoriadis，G.，ed.，Vol.I，pp.29-31.51-67和79-108(CRCPressInc.，BocaRaton，F(xiàn)L1984)，上述各篇文獻(xiàn)的內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。包含氣體的類脂組合物，可以通過在氣體存在下，攪動含有(如果需要的話)穩(wěn)定劑的水溶液來制備。這里所用術(shù)語“攪動”是指搖動水溶液使氣體從局部周圍環(huán)境中導(dǎo)入水溶液中的任何運(yùn)動。這種攪動優(yōu)選在低于類脂從膠體相轉(zhuǎn)移成液晶的溫度下進(jìn)行。攪拌溶液時(shí)所涉及到的搖動優(yōu)選具有足以使包括泡囊組合物，特別是包括充氣泡囊的泡囊組合物的類脂組合物形成的力度。搖動可以通過旋轉(zhuǎn)，如渦旋，左右或上下運(yùn)動進(jìn)行。不同類型的運(yùn)動可以結(jié)合所用。搖動也可以通過搖動容有類脂水溶液的容器，或通過攪動容器內(nèi)的水溶液而不搖動容器本身來進(jìn)行。搖動可以手工或通過機(jī)械方式發(fā)生?？捎玫臋C(jī)械搖動器包括搖動臺，如VWRScientific(Cerritos，CA)搖動臺，以及任一前面所述的搖動裝置，其中優(yōu)選Capmix(EspeFabrikPharmazeutischerPraeparateGMBH&amp;Co.，Seefeld，OberayGermany)?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，一些搖動或渦動種類可用于制備其尺寸落在優(yōu)選尺寸范圍內(nèi)的泡囊。優(yōu)選搖動，并優(yōu)選用EspeCapmix機(jī)械振蕩器進(jìn)行的搖動。根據(jù)此優(yōu)選方法，優(yōu)選利用往復(fù)運(yùn)動產(chǎn)生類脂組合物。特別是泡囊組合物。更優(yōu)選弧形往復(fù)運(yùn)動，預(yù)期往復(fù)運(yùn)動的速度和其弧形尺寸對泡囊的形成特別重要。優(yōu)選往復(fù)或完全循環(huán)擺動次數(shù)為約1000至約20,000/分。較優(yōu)選往復(fù)或擺動次數(shù)為2500至約8000，更優(yōu)選往復(fù)或擺動次數(shù)為約3300至約5000。當(dāng)然，擺動次數(shù)取決于被攪動的內(nèi)容物的量。一般說來，量越大擺動的次數(shù)就越少。產(chǎn)生振蕩的另一方式包括在高速或高壓下逸出氣體的作用。同樣不難理解，對于較大體積量的水溶液，優(yōu)選總力度將相應(yīng)增加。劇烈搖動被定義為每分鐘至少振蕩運(yùn)動60轉(zhuǎn)。較優(yōu)選約60至約300轉(zhuǎn)/分的渦旋。更優(yōu)選約300-1800轉(zhuǎn)/分的渦旋。除上述的簡單搖動方法之外，也能使用較復(fù)雜的方法。這類復(fù)雜方法包括如液晶振蕩氣體注入法和真空干燥氣體注入法，如1993年6月11日登記的與此有關(guān)的美國申請，申請?zhí)枮?8/076,250中所述的方法。此文獻(xiàn)的內(nèi)容在此全部并入本文作為參考。盡管可使用任何不同的各種技術(shù)，但本發(fā)明中所用的泡囊組合物優(yōu)選用振蕩技術(shù)制備。振蕩技術(shù)優(yōu)選包括用機(jī)械振蕩裝置，如EspeCapmix(Seefeld，OberayGerman)，使用如1993年11月30日登記的與此有關(guān)的美國申請，申請?zhí)枮?60,232中所述的技術(shù)攪拌。此文獻(xiàn)的內(nèi)容在此全部并入本文作為參考。如果需要，氣體填充的泡囊的尺寸可通過各種方法調(diào)節(jié)，如包括微乳化、渦旋、擠壓、過濾、聲化、均化、重復(fù)冷凍和解凍循環(huán)、加壓擠過固定尺寸的孔以及類似方法。按照這里所述方法制得的氣體填充泡囊的尺寸可以從低于1μm至大于約100μm。此外，在下文洋細(xì)描述的擠壓和滅菌步驟之后，攪動或搖動產(chǎn)生泡囊組合物中，其中溶液殘余物中基本上沒有或殘留有極少量無水類脂相(Bangham，A.D.，Standish，M.M.&amp;Watkins，J.C.，J.Mol.Biol.Vol.13，pp.238-252(1965))。如果需要的話，本發(fā)明泡囊可以以所形成的形式直接使用，而不作進(jìn)一步修飾其尺寸的任何打算。對于血管內(nèi)使用，泡囊優(yōu)選具有小于約30μm的直徑，更優(yōu)選小于約12μm。對于定向血管內(nèi)使用，例如，包括結(jié)合到某些組織上，所述組織如癌組織，泡囊的直徑可以大大減小，如低于約100nm。對于小腸或胃腸使用，泡囊的直徑可以大大增大，如大至毫米級。優(yōu)選地，泡囊被篩分具有約2μm至約100μm直徑尺寸。氣體填充的泡囊可以通過擠出過濾的簡單方法精壓加工，濾器的孔徑尺寸控制所產(chǎn)生的氣體填充泡囊的尺寸分布。通過使用兩個或更多個串聯(lián)或迭加的濾器，例如，10μm濾器后接一8μm濾器，選擇氣體填充的泡囊具有集中在7-9μm的非常窄的尺寸分布。過濾后，這些氣體填充的泡囊可以保持超過24小時(shí)的穩(wěn)定性。在使用之前，當(dāng)將組合物從無菌管瓶中移去時(shí)，篩分或過濾步驟可以利用過濾裝置完成，或者更優(yōu)選的是，在使用期間將過濾裝置摻入到注射器中。篩分泡囊的方法包括使用包含針筒、至少一個濾器和針頭的注射器，并通過下述抽提步驟進(jìn)行包括將泡囊通過固定在注射器的針筒和針頭之間的濾器，從針筒中擠出，隨后在泡囊施用給患者之前進(jìn)行篩分。抽提步驟還可以包括將泡囊抽入注射器中，濾器將以相同方式將進(jìn)入到注射器內(nèi)的泡囊篩分。另一種方法是用早已通過一些其它方法篩分過的泡囊填充到注射器中，在這種情況下，濾器所起的作用只是確保泡囊具有所需要的尺寸范圍，或具有所希望的最大尺寸，繼之通過注射器擠出而施用。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，泡囊組合物可以被加熱滅菌，或過濾滅菌并在搖動之前通過濾器擠出。一般說來，包含氣體的泡囊組合物可被加熱滅菌，而包括氣體前體的泡囊組合物可被過濾滅菌。一旦氣體填充泡囊形成，它們便可以如上所述過濾篩分。在氣體或氣體前體填充的泡囊形成之前進(jìn)行這些步驟能提供隨時(shí)可以施用于患者的無菌氣體填充的泡囊。例如，用已過濾類脂組合物填充混合容器如管瓶或注射器，然后通過如高壓釜滅菌方式滅菌混合容器內(nèi)的組合物。將氣體注入組合物中，通過搖動無菌容器形成氣體填充的泡囊。優(yōu)選無菌容器裝配有定位濾器，以便氣體填充泡囊在接觸患者之前先通過濾器。擠壓類脂化合物溶液通過濾器的步驟，通過粉碎任何干燥物質(zhì)和曝露更大表面進(jìn)行水合，能夠減少未水合物質(zhì)的量。優(yōu)選濾器具有約0.1至約5μm孔徑，較優(yōu)選約0.1至約4μm孔徑，更優(yōu)選約0.1至約2μm孔徑，且進(jìn)一步較優(yōu)選約1μm孔徑。未水合化合物一般是不需要的，且表現(xiàn)為非均一尺寸的無定形塊。滅菌步驟提供了易施用于患者進(jìn)行診斷成像如包括超聲波或CT用的組合物。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，滅菌可通過加熱完成，優(yōu)選通過在至少100℃下高壓滅菌溶液完成，較優(yōu)選在約100℃至約130℃下高壓滅菌，更優(yōu)選在約110℃至約130℃下高壓滅菌，進(jìn)一步優(yōu)選在約120℃至約130℃下高壓滅菌，且更優(yōu)選在約130℃下滅菌。優(yōu)選加熱至少1分鐘，較優(yōu)選加熱約1至約30分鐘，更優(yōu)選約10至約20分鐘，進(jìn)一步優(yōu)選約15分鐘。如果需要的話，可以顛倒使用如上所述的擠壓和加熱步驟，或僅使用這兩步中的一步?？捎玫钠渌鼫缇绞桨ㄈ缙芈对讦蒙渚€中。除前述實(shí)施方案外，泡囊中所包含的氣體前體可通過活化形成，例如通過置于高溫下，改變pH或光照，進(jìn)行從液體，包括泡囊中包封的液體至氣體的相轉(zhuǎn)變等方式，從而膨脹產(chǎn)生這里所述的氣體填充的泡囊。這種技術(shù)的詳細(xì)描述見我們1993年11月30日遞交的與此有關(guān)的專利申請，申請?zhí)柗謩e為08/160,232和08/159,687，它們各自的公開內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。活化氣體前體的優(yōu)選方法是將其曝露在高溫下。活化或轉(zhuǎn)變溫度等術(shù)語是指氣體前體的沸點(diǎn)，并且是氣體前體發(fā)生液-氣相轉(zhuǎn)變的溫度。有用的氣體前體為沸點(diǎn)落在約-100℃至約70℃范圍內(nèi)的物質(zhì)?；罨瘻囟葘γ糠N氣體前體是特定的。在本發(fā)明中，優(yōu)選氣體前體的活化溫度為約37℃，或約為人體體溫。因此，在優(yōu)選情形下，液相氣體前體在約37℃或低于此溫度下活化成氣體。本發(fā)明方法中使用的氣體前體可用為液相或?yàn)闅庀唷怏w前體填充的泡囊的制備方法可以在低于氣體前體的沸點(diǎn)下進(jìn)行，以使液體摻入到泡囊內(nèi)。此外，所述方法可以在氣體前體的沸點(diǎn)下進(jìn)行，以使氣體摻入到泡囊內(nèi)。對于具有低沸點(diǎn)溫度的氣體前體，可以使用冷卻到低溫的微流化裝置乳化液體前體。為使用液態(tài)形式前體，也可以用溶劑/液體介質(zhì)降低沸點(diǎn)。進(jìn)一步地，所述方法也可以在方法過程中溫度逐漸增高的溫度下進(jìn)行，從而此方法始于液體形式氣體前體并以氣體形式終止。在使用之前，貯藏期間或制備期間，如此選擇氣體前體，以便它們進(jìn)入患者或動物體內(nèi)后能在靶組織或液體中就地形成氣體。產(chǎn)生溫度活化的氣體前體填充的泡囊的方法可以在低于氣體前體沸點(diǎn)的溫度下進(jìn)行。在此實(shí)施方案中，氣體前體被包封在泡囊內(nèi)，以便在制造期間不發(fā)生相轉(zhuǎn)變。而氣體前體填充的泡囊在氣體前體為液相情況下制造。相轉(zhuǎn)變活化可以在溫度被容許超過前體的沸點(diǎn)情況下的任何時(shí)候進(jìn)行。而且，在知道了液相氣體的體的液滴中液體的量，可以測定達(dá)到氣態(tài)的泡囊的尺寸。另一方面，可以使用氣體前體產(chǎn)生使用前預(yù)形成的穩(wěn)定的氣體填充泡囊。在此方案中，在低于氣體前體各自的液-氣相轉(zhuǎn)變溫度下，將氣體前體加到容有類脂組合物的容器內(nèi)。隨著溫度升高，氣體前體與液體溶液之間形成乳液，氣體前體進(jìn)行液態(tài)至氣態(tài)的轉(zhuǎn)變。這種加熱和氣體形成的結(jié)果是氣體置換了上述液體混合物上方空間的空氣，從而形成包封有氣體前體氣體、環(huán)境氣體(如空氣)或共同包裹氣態(tài)氣體前體和環(huán)境氣體的的氣體填充的泡囊。這種相轉(zhuǎn)變可用于造影劑的最佳混合和形成。例如，氣體前體全氟丁烷可包封在類脂泡囊內(nèi)，并隨著溫度增高超出全氟丁烷的沸點(diǎn)(4℃)，全氟丁烷前體就被包裹在泡囊內(nèi)。因此，選擇氣體前體在體內(nèi)形成氣體填充的泡囊，或者將氣體前體設(shè)計(jì)成在生產(chǎn)過程中，貯藏期間，或在使用前的某些時(shí)候能就地產(chǎn)生前體填充的泡囊。在靜脈注射之前，可以使用水浴，超聲波儀或相對于密閉管塞向后抽拉注射器的活塞的液動活化方式活化溫度敏感的氣體前體來激活定向氣體填充泡囊。作為本發(fā)明的進(jìn)一步實(shí)施方案，通過預(yù)形成液態(tài)形式的氣體前體成水乳液，一旦完成向氣態(tài)的轉(zhuǎn)變，可使用理想氣體定律測定泡囊的最大尺寸。為從氣體前體制備氣體填充的泡囊，假設(shè)氣相被瞬間形成，并且由于擴(kuò)散到液體(事實(shí)上一般為水性)中，新形成的泡囊內(nèi)的氣體基本上不被消耗。因此，根據(jù)乳液中已知液體的體積，就能夠預(yù)測氣體填充泡囊體積尺寸的上限。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，配制含有確定尺寸液滴的類脂化合物和氣體前體的混合物，以便當(dāng)達(dá)到特定溫度如氣體前體的沸點(diǎn)時(shí)，液滴將膨脹成確定尺寸的氣體填充泡囊。確定尺寸代表實(shí)際尺寸的上限，因?yàn)橹T如氣體擴(kuò)散到溶液內(nèi)，氣體逸到大氣中的損失以及增加壓力的影響等因素是理想氣體定律所不能解釋的。可用于計(jì)算從液態(tài)到氣態(tài)轉(zhuǎn)變時(shí)氣泡體積增加的理想氣體定律如下PV＝nRT其中P為以大氣壓為單位的壓力(atm)；V為以升為單位的體積(L)；n為氣體摩爾數(shù)；T為開氏溫度(K)；和R為理想氣體常數(shù)(22.4L-atm/K-mole)根據(jù)液體混合物液體的體積、密度和溫度等資料，可以計(jì)算液體氣體前體的量(摩爾)和體積；當(dāng)它們轉(zhuǎn)化成氣體時(shí)，將膨脹到已知體積的泡囊內(nèi)。計(jì)算體積將反映氣體填充的泡囊的尺寸的上限，假定瞬間膨脹成氣體填充的泡囊并且在膨脹時(shí)間期間忽略氣體的擴(kuò)散。這樣，對于其中氣體前體微滴為球形的混合物中的液體氣體前體的穩(wěn)定化，氣體前體的微滴的體積可用下述方程計(jì)算體積(球形泡囊)＝4/3πr3其中r為球體半徑。這樣，一且體積被預(yù)定，并知道液體在需要溫度下的密度，可以計(jì)算微滴中液體氣體前體的量。更詳細(xì)講，可以使用下述方程V氣體＝4/3π(r氣體)3用理想氣體定律，PV＝nRT代入得到V氣體＝nRT/P氣體或者，(A)n＝4/3[πr氣體3]P/RT量n＝4/3[πr氣體3P/RT]·MWn轉(zhuǎn)換回液體體積(B)V液＝[4/3[πr氣體3]P/RT]·MWn/D1/3其中D為前體密度。計(jì)算液滴直徑，(C)直徑/2＝[3/4π[4/3[πr氣體3]P/RT]MWn/D]1/3簡化為直徑＝2[[r氣體3]P/RT][Mwn/D]]1/3.作為制備本發(fā)明方法中使用的所需尺寸的泡囊的另外方法，利用液滴的體積，特別是半徑資料，人們可用適當(dāng)尺寸的濾器篩分氣體前體微滴成適當(dāng)直徑的泡囊。代表性的氣體前體可被用于形成確定尺寸如10μm直徑的泡囊。在此實(shí)例中，泡囊在人體血流中形成，因此，典型的溫度應(yīng)是37℃或?yàn)?10K。在1大氣壓下使用(A)中的方程計(jì)算，需要7.54×10-17摩爾量氣體前體填充10μm直徑的泡囊。使用上述計(jì)算量氣體前體和1-氟丁烷分子量為76.11，沸點(diǎn)32.5℃，20℃時(shí)的密度為0.7789g/mL)，對于10μm泡囊，進(jìn)一步計(jì)算預(yù)計(jì)需要5.74×10-15g這種前體。進(jìn)一步推斷，并利用密度資料，方程(B)進(jìn)一步預(yù)計(jì)需要8.47×10-16mL液體前體來形成具有最后，利用方程(C)，形成例如含有半徑為0.0272μm或相應(yīng)直徑為0.0544μm微滴的乳液的混合物，以制備具有10μm上限泡囊的氣體前體填充的泡囊。這種特定尺寸的乳液很容易通過使用適當(dāng)尺寸的濾器得到。此外，正如由需要形成確定尺寸的氣體前體微滴的濾器的尺寸所看到的那樣，濾器的尺寸也應(yīng)能夠除去任何可能的細(xì)菌污染物，并因此也能被用作無菌過濾。該制備前體填充泡囊的實(shí)施方案適用于所有由溫度激活的氣體前體。事實(shí)上，降低溶劑體系的凝固點(diǎn)容許使用能在低于0℃下進(jìn)行液-氣相變的氣體前體。選擇溶劑體系以提供懸浮氣體前體的介質(zhì)。例如，混溶在緩沖鹽水中的20％丙二醇顯示出明顯低于純水凝固點(diǎn)的凝固點(diǎn)降低。通過增加丙二醇的量或加入象氯化鈉等物質(zhì)，凝固點(diǎn)甚至能進(jìn)一步降低。合適溶劑體系的選擇可通過已知的物理方法確定。當(dāng)物質(zhì)(固體或液體，這里稱作溶質(zhì))溶于溶劑如水基緩沖液中時(shí)，凝固點(diǎn)通過依靠溶液組成的量來降低。因此，正如Wall所定義的，可以由下述方程表達(dá)溶劑的凝固點(diǎn)降低Inxa＝In(1-xb)≈ΔH液/R(1/To-1/T)其中xa為溶劑的摩爾分?jǐn)?shù)；xb為溶質(zhì)的摩爾分?jǐn)?shù)；ΔH為溶劑的熔化熱；和To為溶劑的正常凝固點(diǎn)。溶劑的正常凝固點(diǎn)可通過求解方程得到。如果xb小于xa，則上述方程可變?yōu)閤b＝ΔH液/R[T-To/ToT]≈ΔH熔ΔT/RTo2上述方程假定溫度變化ΔT小于T2。此方程可通過表示成溶質(zhì)的重量摩爾濃度m(每千克溶劑中溶質(zhì)的摩爾數(shù))進(jìn)一步簡化。這樣，方程可變?yōu)閄b＝m/[m+1000/ma]≈mMa/1000其中Ma為溶劑的分子量。從而，取代分?jǐn)?shù)xbΔT＝[MaRTo2/1000ΔH熔]m或ΔT＝Kfm，具中Kf＝MaRTo2/1000ΔH液Kf為摩爾凝固點(diǎn)，并且對于水在1大氣壓下等于1.86度/單位摩爾濃度。上述方程可用于精確測量氣體前體填充的泡囊的溶質(zhì)的摩爾凝固點(diǎn)。因此，上述方程適用于估算凝固點(diǎn)降低并測定將溶劑的凝固溫度降低到適當(dāng)值所必需的液體或固體溶質(zhì)的濃度。制備溫度激活的氣體前體填充的泡囊的方法包括(a)渦旋和/或振蕩氣體前體和附加物質(zhì)(如果需要的話，這些物質(zhì)例如包括穩(wěn)定物質(zhì)、增稠劑和/或分散劑)的含水混合物。此方法的任選步驟包括在渦旋或振蕩之前高壓滅菌；加熱氣體前體的含水混合物；渦旋含有混合物/懸浮液的容器；振蕩或容許氣體前體填充的泡囊自發(fā)形成并冷卻氣體前體填充的泡囊懸浮液；并擠壓氣體前體的水懸浮液通過約0.22μm的濾器。另一方面，過濾可在體內(nèi)給用泡囊期間進(jìn)行，這樣可使用約0.22μm濾器。(b)微乳化，其中氣體前體的含水混合物是在施用于患者之前通過攪動和加熱乳化，以形成泡囊。(c)在攪動或不攪動條件下加熱混合物中的氣體前體，其中低密度氣體前體填充的泡囊通過膨脹和置換容器中的其它泡囊而漂浮到溶液的頂部，并放空容器釋放空氣；和(d)在上述任一方法中使用密封容器盛納氣體前體的水懸浮液并保持懸浮液低于氣體前體的相變溫度，繼之高壓蒸煮至高于相變溫度，任選地振蕩，或容許氣體前體泡囊自發(fā)形成，其中密封容器中的膨脹氣體前體增加容器的壓力，并冷卻氣體填充的泡囊懸浮液，隨后還可以進(jìn)行振蕩。在振蕩氣體注入法進(jìn)行之前，可使用冷凍干燥除水和除有機(jī)物質(zhì)。干燥注入法可以用于除去泡囊中的水。通過在溫?zé)岷箢A(yù)包封干燥泡囊(即在于燥前)中的氣體前體，氣體前體可膨脹填充泡囊。氣體前體也可在進(jìn)行抽真空后用于填充干燥泡囊。由于干燥泡囊被保持在低于其凝膠態(tài)至液晶抽真空后用于填充干燥泡囊。由于干燥泡囊被保持在低于其凝膠態(tài)至液晶溫度的溫度下，干燥空腔可用氣態(tài)氣體前體緩慢填充。例如，在高于4℃(全氟丁烷的沸點(diǎn))的溫度下可使用全氟丁烷填充干燥泡囊。制備溫度激活的氣體前體填充的泡囊的優(yōu)選方法包括在低于氣體前體的液-氣相變溫度下，在氣體前體存在下，振蕩含有類脂化合物的水溶液。此方法優(yōu)選在低于類脂的凝膠態(tài)-液晶態(tài)相變溫度下進(jìn)行。然后加熱混合物至高于氣體前體的液態(tài)-氣態(tài)相變的溫度，使前體揮發(fā)和膨脹。然后終止加熱，隨后使混合物的溫度降低至低于氣體前體的液態(tài)-氣態(tài)相變溫度?；旌衔锏恼袷幙梢栽诩訜岵襟E期間，或在使混合物冷卻之后來進(jìn)行。制備氣體前體填充的泡囊的其它方法包括振蕩類脂和氣體前體的水溶液，并分離所得的氣體前體填充的泡囊。通常，現(xiàn)有技術(shù)中的充水脂質(zhì)體常常是在高于用于制備它們的類脂的相變溫度下形成，由于它們的的柔韌性較高，因而可以液晶態(tài)用于生物體系。例如，參見Szoka和Papahadjopoulos，Proc.Natl.Acad.Sci.1978，75，4194-4198。相反，根據(jù)本文描述的一些優(yōu)選實(shí)施方案所制備的泡囊為氣體前體填充的，具有較大韌性，由于氣體形成后氣體前體比水溶液更具有壓縮性和順從性。本發(fā)明所研究的方法提供了在溫度活化的氣體前體存在下振蕩包括類脂的水溶液的方法。優(yōu)選的是振蕩具有能在短時(shí)間內(nèi)，如約30分鐘，優(yōu)選在約20分鐘內(nèi)，更優(yōu)選在約10分鐘短時(shí)間內(nèi)形成泡沫的充足力量。振蕩可包括微乳化、微流化、旋轉(zhuǎn)(如渦旋)、左右或上下運(yùn)動。在加有液態(tài)氣體前體的情況下，除上述振蕩法外，還可以使用聲化方法。此外，可以組合不同類型的運(yùn)動。同樣，振蕩也可以通過搖動盛納有類脂水溶液的容器，或搖動容器內(nèi)的水溶液而不振蕩容器本身的方式進(jìn)行。進(jìn)一步地，振蕩可以為手動或機(jī)械振蕩兩種方式?？墒褂玫臋C(jī)械搖動器包括例如前面所述的機(jī)械搖動器，其中優(yōu)選EspeCapmix(Seefeld，OberayGermany)。產(chǎn)生振蕩的另一種方式包括在高速或高壓下釋放氣體前體。按照本文所述方法，氣體如空氣也可以由局部環(huán)境氣氛提供。局部環(huán)境氣氛可包括密封容器內(nèi)的大氣，以及外部環(huán)境大氣壓。另一方面，例如，氣體可注射到或用其它方法加到含有類脂水溶液的容器內(nèi)或加到類脂水溶液內(nèi)以提供非空氣的氣體。比空氣輕的氣體通常加到密封容器內(nèi)，而比空氣重的氣體可以加到密封或未密封的容器內(nèi)。因此，本發(fā)明包括氣體前體與空氣和/或其它氣體的共包封物。因此，氣體前體填充的泡囊可以以與本發(fā)明所述的氣體填充的泡囊基本相同的方式使用，一旦通過應(yīng)用到宿主組織上進(jìn)行活化，可以利用諸如溫度或pH等因素使氣體發(fā)生。優(yōu)選氣體前體在接近宿主的正常體溫的溫度下發(fā)生從液相到氣相的相轉(zhuǎn)變，由此可通過宿主的體內(nèi)溫度活化以發(fā)生向氣相的轉(zhuǎn)變。另一方面，靜脈注射前的活化可通過例如熱、機(jī)械或光學(xué)方式發(fā)生。當(dāng)例如宿主組織是具有約37℃正常體溫人體組織且氣體前體從液相到氣相發(fā)生相變的溫度接近37℃情況下，這種活化即能發(fā)生。如上所述，如果這些方法在注入步驟之前或先于溫度介導(dǎo)的組合物內(nèi)的溫度敏感氣體前體的轉(zhuǎn)化，本發(fā)明的類脂和/或泡囊組合物可通過高壓滅菌或無菌過濾滅菌。另一方面，組合物組成中可包括一種或多種抗菌劑和/或防腐劑如苯甲酸鈉、季銨鹽、疊氮化鈉、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、山梨酸、抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基化羥基茴香醛、丁基化羥基甲苯、氯丁醇、脫氫乙酸、乙二胺、單硫代甘油、苯甲酸鉀、焦亞硫酸鉀、山梨酸鉀、亞硫酸氫鈉、二氧化硫和有機(jī)汞鹽。當(dāng)穩(wěn)定泡囊用于進(jìn)入環(huán)境中如血管內(nèi)或腹膜內(nèi)成像時(shí)，這類滅菌是必需的，當(dāng)然，這類滅菌也可由其它常規(guī)方式如輻射實(shí)現(xiàn)。根據(jù)本發(fā)明的公開內(nèi)容，合適的滅菌方法對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。包括由蛋白質(zhì)配制而成的泡囊(也稱作蛋白質(zhì)包裹泡囊)如白蛋白泡囊的泡囊組合物可由各種方法制備，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，一旦掌握了本發(fā)明的公開內(nèi)容，這些方法將是顯而易見的。適宜的方法包括例如Feinstein在美國專利4,572,203、4,718,433和4,774,958以及Cerny等人在美國專利4,957,656中所述的方法，其中這些專利的內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。上述專利中所述的蛋白質(zhì)基泡囊的制備方法是用聲化處理蛋白質(zhì)溶液的方法。在優(yōu)選的方法中，起始原料可以是熱變性、水溶性的生物相容蛋白質(zhì)的水溶液。包裹蛋白質(zhì)優(yōu)選為熱敏性，以便在聲化處理期間通過加熱能夠部分不溶解。合適的熱敏蛋白質(zhì)包括例如白蛋白、血紅蛋白、膠原等。優(yōu)選蛋白質(zhì)為人蛋白，更優(yōu)選人血清白蛋白(HSA)。HSA可以以5％的滅菌水溶液從市場上購得，它們適于制備蛋白質(zhì)基泡囊。當(dāng)然，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員明白，其它濃度白蛋白以及其它熱變性蛋白質(zhì)也可用于制備泡囊。一般說來，HSA的濃度是可以變化的，并可以在約0.1至約25wt％范圍以及其中的所有組合和小組合范圍內(nèi)變化。對于蛋白質(zhì)基泡囊的某些制備方法，優(yōu)選使用稀水溶液形式蛋白質(zhì)。對于白蛋白而言，優(yōu)選使用含有約0.5至約7.5wt％白蛋白的水溶液，其中優(yōu)選濃度小于約5wt％的水溶液，例如約0.5至約3wt％濃度。蛋白質(zhì)基泡囊可以用市場上可購得的儀器制備。例如，對于如Cerny等人在美國專利4,957,656中所公開的進(jìn)料制備操作，可以使用購自WalkerStainlessEquipmenCo，(NewLisbon，WI)的不銹鋼罐和購自Millipore(Bedford，MA)的工業(yè)濾器。聲化處理操作可以連續(xù)使用熱交換器和通過聲化處理容器的流量器。此類型的熱交換器可從ITTStandard(Buffalo.NY)購得。熱交換器保持聲化處理過程中的操作溫度，溫度控制在約65℃至約80℃范圍內(nèi)，這取決于介質(zhì)的組成。聲化裝置的振蕩頻率可以在較寬范圍內(nèi)變化，例如，從約5至約40千赫(kHz)，大部分市購超聲波破碎器在約10或20kHz下操作。適宜的聲化裝置包括例如配備有平端超聲波破碎器發(fā)聲器的Sonics&amp;MaterialsVibra-Cell，購自Sonics&amp;Materials，Inc.(Danbury，CT)。適用于超聲波破碎器發(fā)聲期望的功率可以在由制造商定標(biāo)的1至10規(guī)格的動力設(shè)置間變化，如使用Sonics&amp;MaterialsVibra-CellVL1500型。可以使用中間功率設(shè)置，例如5至9。優(yōu)選振動頻率和施加的功率應(yīng)足以在欲被活化的液體只能夠產(chǎn)生氣蝕。進(jìn)料流速可以在約50mL/分鐘至約1000mL/分鐘范圍以及其中的所有組合和小組合范圍內(nèi)變化。在聲化處理容器中的殘留時(shí)間可以從約1秒至約4分鐘，并且氣態(tài)流體的加入速率可以從約10立方厘米(cc)/分鐘至約100cc/分鐘，或進(jìn)料流速的5％至25％以及其中的所有組合和小組合范圍內(nèi)變化。優(yōu)選聲化處理以能使溶液起泡，尤其是廣泛起泡的方式進(jìn)行。一般說來，廣泛起泡和霧化對得到具有高濃度和穩(wěn)定性的造影劑是比較重要的。為加速起泡，可以提高輸入到超聲波破碎器發(fā)聲器的功率，且方法可在中等壓力如約1至約5psi壓力下操作。起泡很容易由溶液的混濁外觀和所產(chǎn)生的泡沫來檢測。制備蛋白質(zhì)基泡囊的合適方法還可以包括以物理或化學(xué)方式改變水溶液中的蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)衍生物以變性或固定所述物質(zhì)。例如，蛋白質(zhì)基泡囊可以由5％HSA水溶液通過在聲化處理形成造影劑之后或形成造影劑期間加熱而制備。化學(xué)蝕變作用可包括化學(xué)變性或通過將蛋白質(zhì)與雙官能醛如戊二醛結(jié)合而發(fā)生的固定。例如，可以將泡囊在pH4.5下與0.25克50％戊二醛水溶液/蛋白質(zhì)(克)反應(yīng)6小時(shí)。然后從蛋白質(zhì)中洗去未反應(yīng)的戊二醛。在任一上面所述的蛋白質(zhì)基泡囊的制備方法中，靶向配位體可以在泡囊形成之前、之間或之后與蛋白質(zhì)結(jié)合，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，一旦掌握了本發(fā)明的公開內(nèi)容，這些將是顯而易見的。包括由聚合物配制的泡囊的泡囊組合物可以用各種不同的方法制備，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，一旦掌握了本發(fā)明的公開內(nèi)容，這些方法將是顯而易見的。典型的方法包括例如界面聚合、相分離和凝聚、多孔板離心制備和溶劑蒸發(fā)?？墒褂玫幕蚋男偷挠删酆衔镏苽渑菽业谋景l(fā)明方法的合適方法包括下述文獻(xiàn)中所述的方法Garner等人，美國專利4,179,546、Garner，美國專利3,945,956、Cohrs等人，美國專利4,108,806、日本專利公開62286534、GB1,044,680、Kenaga等人，美國專利3,293,114、Morehouse等人，美國專利3,401,475、Walters，美國專利3,479,811、Walters等人，美國專利3,488,714、Morehouse等人，美國專利3,615,972、Baker等人，美國專利4,549,892、Sands等人，美國專利4,540,629、Sands等人，美國專利4,421,562、Sands，美國專利4,420,442、Mathiowitz等人，美國專利4,898,734、Lencki等人，美國專利4,822,534、Herbig等人，美國專利3,732,172、Himmel等人，3,594,326、Sommerbille等人，美國專利3,015,128、Deasy，MicroencapsulationandRelatedDrugProcesses，Vol.20，Chs.9和10，pp.195-240(MarcelDekker，Inc.，N.Y.，1984)，Chang等人，CanadianJ.ofPhysiologyandPharmacology，Vol.44，pp.115-129(1966)，以及Chang，Science，Vol.146，pp.524-525(1964)，上述各篇文獻(xiàn)的公開內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。根據(jù)優(yōu)選的合成方案，泡囊可用熱膨脹法制備，如Garner等人，美國專利4,179,546、Garner，美國專利3,945,956、Cohrs等人，美國專利4,108,806、GB1,044,680和日本專利公開62286534中所描述的方法。一般地說，熱膨脹法可通過制備可膨脹聚合物或共聚物泡囊進(jìn)行，這種泡囊在其空隙(空腔)中包含揮發(fā)性液體(氣體前體)。然后加熱泡囊、增塑泡囊并轉(zhuǎn)化揮發(fā)性液體成氣體，使泡囊膨脹至其原始體積的數(shù)倍。當(dāng)移去熱源，熱塑性聚合物仍保持至少一定程度的其膨脹形狀。由此方法產(chǎn)生的泡囊往往具有特別低的密度，因此是優(yōu)選的。前述方法是本領(lǐng)域中熟知的方法，并可稱作制備低密度泡囊的熱膨脹法。熱膨脹法中有用的聚合物對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的，包括熱塑性聚合物或共聚物，這包括許多上述單體的聚合物或共聚物。所述聚合物和共聚物優(yōu)選包括下述共聚物聚亞乙烯-聚丙烯腈、聚亞乙烯-聚丙烯腈-聚甲基丙烯酸甲酯和聚苯乙烯-聚丙烯腈。最優(yōu)選的共聚物為聚亞乙烯基-聚丙烯腈。熱膨脹法中有用的揮發(fā)性液體對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的，包括脂族烴，如乙烷、乙烯、丙烷、丙烯、丁烷、異丁烷、新戊烷、乙炔、己烷、庚烷；氯氟烴，如CCl3F、CCl2F2、ClF3、CClF2-CCl2F2、一氯七氟環(huán)丁烷和1，2-二氯六氟環(huán)丁烷；四烷基硅烷，如四甲基硅硅烷、三甲基乙基硅烷、三甲基異丙基硅烷和三甲基正丙基硅烷；以及全氟烴，包括前面所述的全氟烴。一般來說，重要的是揮發(fā)性液體不能溶解所用的聚合物或共聚物。同樣還優(yōu)選揮發(fā)性液體的沸點(diǎn)低于所涉及到的聚合物或共聚物的軟化點(diǎn)。對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，各種揮發(fā)性液體的沸點(diǎn)和各種聚合物的軟化點(diǎn)是很容易確定的，聚合物或共聚物與揮發(fā)性液體的合適組合對專業(yè)技術(shù)人員而言是十分顯然的。作為引導(dǎo)，并且正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所認(rèn)識到那樣，通常隨著揮發(fā)性液體的碳鏈長度的增加，液體的沸點(diǎn)也隨之增加。同樣，在最后正式加熱和膨脹之前，在過氧化氫存在下，緩緩預(yù)加熱處于水中的泡囊可以預(yù)軟化泡囊，從而使得膨脹更易發(fā)生。例如，為了用合成聚合物制備泡囊，利用一種或多種前面所述的改進(jìn)或未改進(jìn)的文獻(xiàn)方法，將亞乙烯和丙烯腈可以在異丁烷液體介質(zhì)中共聚合，從而使異丁烷包封在泡囊內(nèi)部。當(dāng)這種泡囊隨后從約80℃加熱至約120℃時(shí)，異丁烷氣體膨脹，隨后再膨脹泡囊。移去熱源后，膨脹的聚亞乙烯和丙烯腈共聚物泡囊仍基本上保持固定在它們膨脹的位置。所形成的低密度泡囊無論是干態(tài)還是懸浮在水介質(zhì)中都非常穩(wěn)定。這里所用的異丁烷僅僅是作為說明性的液體，應(yīng)當(dāng)理解，異丁烷可以被能夠在用于合成這些泡囊和當(dāng)加熱時(shí)能形成極低密度泡囊的溫度下進(jìn)行液/氣轉(zhuǎn)變的其它液體替代。類似地，可使用除亞乙烯和丙烯腈之外的單體制備泡囊。在一些優(yōu)選實(shí)施方案中，可用于本發(fā)明方法中的由合成聚合物配制成的泡囊可從Expancel，NobelIndustries(Sundsvall，Sweden)購得，包括EXPANCEL551DETM泡囊。EXPANCEL551DETM泡囊由亞乙烯和丙烯腈的共聚物組成，其中包裹有異丁烷液體。這種泡囊以于態(tài)組合物形式出售，其尺寸為大約50微米。EXPANCEL551DETM泡囊的比重僅為0.02-0.05，這介于水密度的1/50和1/20之間。在任一上面所述的聚合物基泡囊的制備方法中，靶向配位體可以在泡囊形成之前，期間或之后與聚合物結(jié)合，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，一旦掌握了本發(fā)明的公開內(nèi)容，這些將是顯而易見的。如同制備類脂和/或泡囊組合物的情況一樣，可以使用多種方法制備類脂制劑。例如，類脂和/或泡囊制劑可以由類脂化合物、生物活性劑和氣體或氣體前體混合物制備。在這種情況下，類脂組合物如上所述制備，其中組合物還包括生物活性劑。這樣，例如，泡囊能夠在生物活性劑存在下制備。對于其中包括氣體的類脂組合物，其制備可包括，例如，直接將氣體鼓入類脂化合物和一種或多種附加物質(zhì)的混合物中。另一方面，類脂組合物可以用類脂化合物和氣體或氣體前體預(yù)形成。在后一種情況下，隨后在使用之前將生物活性劑加到類脂組合物內(nèi)。例如，制備脂質(zhì)體和氣體的含水混合物，向其中加入生物活性劑并攪動，形成脂質(zhì)體制劑。脂質(zhì)體制劑容易分離，這是因?yàn)闅怏w和/或生物活性劑填充的脂質(zhì)體泡囊一般漂浮在水溶液的上部。可以從剩余的水溶液中回收過量的生物活性劑。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到的那樣，任何類脂和/或泡囊組合物和/或類脂和/或泡囊制劑可以凍干貯藏，并可以通過劇烈攪拌用含水介質(zhì)(如無菌水、磷酸緩沖液或鹽水溶液)重構(gòu)。為了預(yù)防類脂和/或泡囊因凍干引起的凝集或融合，其中包含能防止這類融合或凝集的添加劑是有用的?？捎玫奶砑觿┌ㄉ嚼嫣谴肌⒏事短谴?、氯化鈉、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇(PEG)如PEG400。這些及其它添加劑在文獻(xiàn)中已有描述，如美國藥典，美國專利XXII，NFXVII，TheUnitedStatesPharmacopeialConbertionInc.，12601TwinbrookParkway，Rockbille，MD20852，由此這些公開內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。凍干制品常常具有更長貯臧期限的優(yōu)點(diǎn)。如上所述，本發(fā)明組合物，包括氣體和/或氣體前體填充的泡囊，可用作診斷成像包括例如超聲波成像(US)的造影劑、計(jì)算機(jī)化X射線斷層攝影術(shù)(CT)成像(包括CT血管造影術(shù)(CTA))成像的造影劑、磁共振(MR)成像造影劑、磁共振血管造影術(shù)(MRA)、核醫(yī)學(xué)及光學(xué)成像和彈性記錄法用的造影劑。本發(fā)明提供了對一個或多個病灶成像的方法。本發(fā)明還提供了診斷患者體內(nèi)存在或不存在的疾病組織的方法。本發(fā)明方法包括對患者施用類脂和/或泡囊組合物形式的造影劑。利用診斷成像包括超聲波成像掃描患者，以得到患者內(nèi)部區(qū)域的可視成像。所述方法特別適用于提供心臟區(qū)，胃腸道區(qū)或淋巴系統(tǒng)的成像，但還可以更廣泛地用于患者其它內(nèi)部區(qū)域包括如脈管系統(tǒng)的成像。這里所用的術(shù)語“胃腸道區(qū)域”或“胃腸道”包括由食管，胃，小及大腸和直腸限定的患者區(qū)域。本發(fā)明方法還能用于傳送生物活性劑到患者的內(nèi)部區(qū)域。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所認(rèn)識到的那樣，本發(fā)明的類脂和/或泡囊組合物的施用可以以各種方式完成，即腸胃外給用、口服施用或腹膜內(nèi)施用。腸胃外施用是優(yōu)選的并包括經(jīng)下述途徑的施用靜脈內(nèi)；肌內(nèi)；間隙間；動脈內(nèi)；皮下；眼內(nèi)；滑膜內(nèi)；經(jīng)上皮的，包括經(jīng)皮給用；經(jīng)肺吸入；經(jīng)眼；舌下和經(jīng)頰；局部給用，包括眼；皮膚；眼內(nèi)；直腸；和經(jīng)吹入鼻內(nèi)吸入給藥。胃腸外給藥途徑中優(yōu)選靜脈內(nèi)給藥。給用的有用劑量和給藥的特定方式將依據(jù)年齡、體重和特定的哺乳動物以及掃描的區(qū)域和所用的特殊造影劑等因素而變化。典型地，最初劑量較低并隨所要達(dá)到的需要對比的增加而加大。可使用類脂組合物的各種混合物來改變所需的性能，包括粘度、滲透性和可口性。在實(shí)施本發(fā)明的成像方法時(shí)，造影劑可以單獨(dú)使用，或與診斷劑、治療劑或其它物質(zhì)結(jié)合使用。這類其它物質(zhì)包括賦形劑如香味劑或著色劑。使用的CT成像技術(shù)是常規(guī)的，并描述在如下所述的文獻(xiàn)中ComputedBodyTomography，Lee，J.K.T.，Sagel，S.S.，和Stanley，R.J.編輯，RavensPress，NewYork，N.Y.，尤其是Aronberg，D.J.撰寫的標(biāo)題為“PhysicalPrinciplesandInstrumentation”，Ter-Pogossian.M.M.，和“Techniques”的前兩章，此文獻(xiàn)的公開內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。在診斷應(yīng)用如超聲波和CT情況下，為成像靶組織，需向患者的最低限度區(qū)域施加能量，如超聲波能。爾后得到患者內(nèi)部區(qū)域的可視影像，從而可以確定疾病組織的存在或不存在。關(guān)于超聲波、超聲波成像技術(shù)，包括二次諧波成像和柵控成像是本領(lǐng)域中公知的，并可見下述文獻(xiàn)中所述Uhlendorf，“PhysicsofUltrasoundContrastImagingScatteringintheLinearRange”，IEEETransactionsonUltrasonics，F(xiàn)erroelectrics，andFrequencyControl，Vol.14(1)，pp.70-79(1994)和Sutherland等人“ColorDopplerMyocardialImagingANewTechniquefortheAssessmentofMyocardialFunction”，JournaloftheAmericanSocietyofEchocardiography，Vol.7(5)，pp.441-458(1994)，上述文獻(xiàn)的公開內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。超聲波可用于診斷和治療目的。在診斷超聲波儀情況下，超聲波波長或一組超聲波脈沖由傳感器施加。超聲波一般為非連續(xù)性脈沖，不過如果需要也可以連續(xù)脈沖。因此，診斷超聲波一般涉及施加回波脈沖，隨后，在收聽周期期間，超聲波傳感器接受反射信號?？梢允褂弥C波、超諧波或次諧波。優(yōu)選使用二次諧波波型，其中接受到2x頻率，這里x為人射頻率。利用本發(fā)明的定向造影劑(它們可定向到需要部位，如血塊)，二次諧波的作用是降低背景物質(zhì)的信號和增強(qiáng)來自傳感器的信號。其它諧波信號，如奇諧波信號，例如3x或5x，可利用此方法同樣接受。次諧波信號例如x/2和x/3也可被接受和加工以形成影像。除脈沖方法外，可使用連續(xù)波超聲波儀，例如，PowerDoppler。當(dāng)使用剛性泡囊，如由聚甲基丙烯酸甲酯制成的泡囊時(shí)，這種方法特別有用。在這種情況下，可以使用相對高能量的PowerDoppler共振泡囊，從而促進(jìn)它們的破裂。這樣可以產(chǎn)生聲發(fā)射，其發(fā)射頻率可以在次諧波或超諧波范圍內(nèi)，或者，在某些情況下，與使用的超聲波的頻率相同?？梢哉J(rèn)識到，在此方法中將釋放出聲圖象光譜并且如此使用的傳感器可接受聲發(fā)射，以檢測例如血塊的存在。此外，可以使用泡囊破裂的方法將動能轉(zhuǎn)移到如血塊的表面，以促進(jìn)血塊溶解。因此，血栓的治療可以在結(jié)合診斷和治療超聲波期間完成。也可以使用多普勒型光譜儀?？偟恼f來，診斷超聲波儀的能量水平不足以促進(jìn)泡囊的破裂和加速生物活性劑的釋放和細(xì)胞吸收。如上所述，診斷超聲波儀可包括施用一種或多種波脈沖。脈沖間的間歇允許接受并分析反射聲信號。診斷超聲波儀中所用脈沖的有限數(shù)量限制了傳遞到所研究組織上的有效能量。高能超聲波，例如由治療超聲波儀產(chǎn)生超聲波，常常能造成泡囊物質(zhì)破裂。一般來說，治療超聲波裝置使用約10至約100％脈沖保持時(shí)間與間歇時(shí)間之比，這取決于用超聲波所處理的組織的面積。對于其特征為大量肌塊，例如背部和股部以及高血管化組織如心臟組織的體面積，可能需要較大的脈沖保持時(shí)間與間歇時(shí)間之比，例如，高至約100％。在治療性超聲波儀中，使用連續(xù)波長超聲波來傳遞較高能級。對于泡囊的破裂，盡管聲能也可被脈沖，但優(yōu)選連續(xù)波長的超聲波。如果使用了脈沖聲能，聲波通常以每次約8至約20或更高脈沖的回波列長度脈沖。優(yōu)選回波列長度每次為約20脈沖。此外，所用聲波的頻率可以從約0.025變化至約100兆赫茲(MHz)。一般來說，治療超聲波儀用的頻率優(yōu)選在約0.75和約3MHz之間，其中較優(yōu)選約1至約2MHz。而且，能級可以在約0.5瓦(W)/平方厘米(cm2)至約5.0W/cm2之間變化，其中優(yōu)選能級為約0.5至約2.5W/cm2。高溫治療用的治療超聲波儀的能級一般從約5W/cm2至約50W/cm2。對于極小泡囊，例如，直徑小于約0.5μm的泡囊，優(yōu)選使用較高頻率的聲波。這是因?yàn)檩^小泡囊能夠更有效地吸收較高頻率聲波的聲波能級。當(dāng)使用極高頻率例如大于約10Mhz時(shí)，聲能一般僅能穿透到液體和組織的有限深度。但是，較深組織一般需要聚焦超聲波能，以便能較優(yōu)選地定向到焦點(diǎn)區(qū)內(nèi)。另一方面，超聲波能可通過探針，肌內(nèi)超聲波導(dǎo)管或內(nèi)腔導(dǎo)管施加。這種探針或?qū)Ч芸稍谑彻苤惺褂靡栽\斷和/或治療食管癌。除上述治療使用外，本發(fā)明組合物可在食管癌方面使用，或用于冠動脈中以治療動脈粥樣硬化，以及用于如美國專利5,149,319所述的治療用途，此文獻(xiàn)的內(nèi)容在此全部并人本文用作參考。可以使用應(yīng)用雙頻率超聲波的治療性超聲波儀。第一頻率可以為x，而第二頻率可以為2x。在優(yōu)選的情形中，如此設(shè)計(jì)超聲波儀，以使第一和第二頻率的焦點(diǎn)區(qū)會聚成單一聚焦區(qū)。然后將儀器的焦點(diǎn)區(qū)指向靶組織內(nèi)的靶向組合物，例如靶向泡囊組合物。這種超聲波儀可同時(shí)施加x和2x頻率超聲波能來提供二次諧波治療。在超聲波涉及泡囊情況下，可以預(yù)料，與涉及單一頻率的超聲波治療相比，這種二次諧波治療可提供改進(jìn)的泡囊破裂能力。同樣，可以預(yù)料，優(yōu)選的頻率范圍落在泡囊的基諧波頻率范圍之內(nèi)。這種儀器也可使用較低能量。在上述二次皆波治療方面使用的超聲波儀在下述文獻(xiàn)中有描述Kawabata.K.等人，UltrasonicsSonochemistry，Vol.3，pp.1-5(1996)，該文獻(xiàn)內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。形成希望的穩(wěn)定泡囊水平所需的類脂的濃度將隨所用類脂的種類而變化，并容易通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法測定。例如，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于形成本發(fā)明方法中的穩(wěn)定泡囊的1，2-二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)的濃度為約0.1mg/ml至約30mg/ml鹽水溶液，更優(yōu)選約0.5mg/ml至約20mg/ml鹽水溶液，且最優(yōu)選約1mg/ml至約10mg/ml鹽水溶液。優(yōu)選實(shí)施方案中所用的二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)的濃度為約0.1mg/ml至約30mg/ml鹽水溶液，更優(yōu)選約0.5mg/ml至約20mg/ml鹽水溶液，且最優(yōu)選約1mg/ml至約10mg/ml鹽水溶液。給患者施用的組合物的量可以變化。典型地，對于70Kg重患者，IV劑量可以小于約10mL，其中優(yōu)選較低劑量。除上述方法外，制備靶向造影劑的另一方案包括混合一種生物相容的類脂和氣體前體；攪拌至前體填充的泡囊形成為止；向所述前體填充泡囊中加入靶向配位體，使靶向配位體與所述前體填充泡囊之間通過共價(jià)鍵或非共價(jià)鍵方式鍵合；并攪拌至包括有前體填充泡囊和靶向配位體的造影劑形成為止。在加入靶向配位體之前，直至形成氣體填充的泡囊，不進(jìn)行攪拌，氣體前體在使用之前仍可保持為氣體前體。也就是說，可使用氣體前體來制備造影劑，其中氣體前體可以在體內(nèi)通過如溫度活化。另一方面，制備定向內(nèi)皮細(xì)胞的造影劑的方法可包括混合至少一種生物相容類脂和靶向配位體，使靶向配位體通過共價(jià)鍵或非共價(jià)鍵方式與所述類脂鍵合，加入氣體前體并攪拌至包括有氣體填充的泡囊和靶向配位體的造影劑形成為止。此外，也可加入氣體前體，并在使用之前仍保持氣體前體狀態(tài)。也就是說，可使用氣體前體來制備含有氣體前體填充的泡囊和靶向配位體的造影劑，它們可供體內(nèi)使用。另一方面，可使用氣體前體來產(chǎn)生穩(wěn)定的含有靶向配位體的前體填充泡囊，它們在使用前預(yù)形成。在此實(shí)施方案中，在低于相應(yīng)氣體前體的液-氣相變溫度的溫度下，將氣體前體和靶向配位體加到容納有懸浮和/或穩(wěn)定介質(zhì)的容器內(nèi)。然后將溫度升高至超出相變溫度，在氣體前體和液體溶液之間形成乳液，氣體前體進(jìn)行從液態(tài)至氣態(tài)的轉(zhuǎn)變。通過加熱和形成氣體，氣體置換液態(tài)懸浮液上部的空氣，結(jié)果形成氣體填充的泡囊，它們包封有氣體前體的氣體、環(huán)境氣體如空氣，或共同包封氣態(tài)氣體前體和環(huán)境氣體。這種相轉(zhuǎn)變可用于最佳混合和穩(wěn)定造影劑。例如，氣體前體全氟丁烷可包封在生物相容類脂或其它穩(wěn)定化合物中，當(dāng)溫度升高大于4℃(全氟丁烷的沸點(diǎn))時(shí)，可產(chǎn)生包封全氟丁烷氣體的穩(wěn)定化合物。作為附加實(shí)例，氣體前體全氟丁烷可以懸浮在含有乳化劑和穩(wěn)定劑如甘油或丙二醇的含水懸浮液中，并用商用渦旋機(jī)渦旋。在足以低至氣體前體為液體的溫度下開始渦旋并當(dāng)樣品溫度升高至大于液-氣態(tài)相變溫度時(shí)繼續(xù)渦旋。經(jīng)過這樣處理，前體在微乳化過程中轉(zhuǎn)化成氣態(tài)。在有合適穩(wěn)定劑存在下，能產(chǎn)生具有驚人穩(wěn)定性的前體填充泡囊和靶向配位體。因此，選擇氣體前體在體內(nèi)形成氣體填充的泡囊，或者將氣體前體設(shè)計(jì)成在生產(chǎn)過程中、貯藏期間或在使用前的某些時(shí)候能就地產(chǎn)生前體填充的泡囊。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，一旦掌握了本發(fā)明的公開內(nèi)容，它們將能理解，用作起始物質(zhì)的類脂、蛋白質(zhì)、聚合物和其它穩(wěn)定化合物或泡囊最終產(chǎn)物，可以在進(jìn)行本發(fā)明所期望的方法之前和其后處理。例如，穩(wěn)定化合物如生物相容類脂可被水合，然后凍干，進(jìn)行冷凍和融化循環(huán)，或簡單水合。在優(yōu)選的方案中，在形成氣體前體填充的泡囊之前，類脂被水合，然后凍干，或先水合，然后進(jìn)行冷凍和融化循環(huán)，隨后再凍干。根據(jù)本發(fā)明所期望的方法，諸如但不限于空氣的氣體的存在，也可由局部環(huán)境氣氛提供。局部環(huán)境氣氛可以是密封容器內(nèi)的氣氛，或在非密封容器內(nèi)，可以是外部環(huán)境氣氛。另一方面，例如，氣體可被注射到或以其它方式加到含有類脂水溶液的容器內(nèi)或類脂水溶液本身中以提供非空氣的氣體。不比空氣重的氣體可被加到密封容器內(nèi)，而重于空氣的氣體可加到密封或非密封容器內(nèi)。因此，本發(fā)明包括空氣和/或其它氣體與氣體前體一道的共包封物。正如上面涉及穩(wěn)定化合物的章節(jié)中早已描述的那樣，本發(fā)明所期望的優(yōu)選方法在低于所用類脂的凝膠態(tài)-液晶態(tài)相轉(zhuǎn)變溫度的溫度下進(jìn)行。術(shù)語“凝膠態(tài)-液晶態(tài)的相變溫度”意指類脂雙層從凝膠態(tài)轉(zhuǎn)化到液晶態(tài)的溫度。例如，參見Chapman等人，J.Biol.Chem.1974，249，2512-2521。因此，上述穩(wěn)定泡囊可以與本發(fā)明中所用的其它穩(wěn)定泡囊相同的方式使用，一旦通過施用到患者組織上被活化，其中的諸如溫度或pH等因素可被用于產(chǎn)生前體。優(yōu)選的是此方案中氣體前體在接近所述宿主的正常體溫下進(jìn)行從液態(tài)至氣態(tài)的相轉(zhuǎn)變，并由此由所述宿主組織的溫度活化，以進(jìn)行向氣相的轉(zhuǎn)變。更優(yōu)選地，此方法中宿主組織為具有約37℃正常溫度的人組織，并且其中的氣體前體在接近37℃下進(jìn)行液-氣態(tài)相變。所有上述涉及轉(zhuǎn)變本發(fā)明中所用的穩(wěn)定的氣體填充的泡囊的實(shí)施方案，如果這些步驟是在氣體注入步驟之前或先于溫度介導(dǎo)的懸浮液中溫度敏感的氣體前體的轉(zhuǎn)化進(jìn)行，則它們可被高壓滅菌或滅菌過濾。另一方面，造影劑形成過程中可包括一種或多種抗菌劑和/或防腐劑，如苯甲酸鈉、所有的季銨鹽、疊氮化鈉、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、山梨酸、抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基化羥基茴香醛、丁基化羥基甲苯、氯丁醇、脫氫乙酸、乙二胺、單硫代甘油、苯甲酸鉀、焦亞硫酸鉀、山梨酸鉀、亞硫酸氫鈉、二氧化硫和有機(jī)汞鹽。這類滅菌也可用其它常規(guī)手段實(shí)現(xiàn)，如輻射方式，當(dāng)穩(wěn)定泡囊用于進(jìn)入環(huán)境中如血管內(nèi)或腹膜內(nèi)成像時(shí)，滅菌是必需的。合適的滅菌方法對于受本發(fā)明關(guān)于穩(wěn)定的氣體填充的泡囊及其用途的描述指導(dǎo)的本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。造影劑一般以水懸浮液形式貯藏，但在干燥泡囊或干燥類脂情況下，造影劑可以以用前再構(gòu)的干燥粉末形式使用。本發(fā)明的新型組合物，尤其是泡囊組合物，可在診斷成像方面用作造影劑，而且適用于使用診斷成像的所有區(qū)域。不過，穩(wěn)定泡囊特別適用于灌注成像。診斷成像是指用肉眼觀測患者體內(nèi)區(qū)域。診斷成像包括，例如，超聲波(US)、磁共振成像(MRI)、核磁共振(NMR)、計(jì)算機(jī)化X射線斷層攝影術(shù)(CT)、電子自旋共振(ESR)，當(dāng)造影劑包括放射性物質(zhì)時(shí)的核醫(yī)學(xué)，以及光學(xué)成像，特別是利用熒光造影劑的光學(xué)成像。診斷成像還包括借助本發(fā)明方法促進(jìn)泡囊破裂。例如，超聲波可用于肉眼檢測泡囊并確定泡囊在確定組織中的位置。此外，一旦泡囊到達(dá)預(yù)定靶包括組織和/或受體目標(biāo)上，可使用超聲波來促進(jìn)泡囊的破裂，從而釋放出生物活性劑和/或診斷劑。本發(fā)明提供了普通患者成像的方法，和/或特別是診斷患者病組織存在的方法。本發(fā)明的成像方法可通過對患者施用本發(fā)明造影劑而進(jìn)行，然后使用如超聲波儀、計(jì)算機(jī)化X射線斷層攝影術(shù)和/或磁共振成像技術(shù)掃描患者，得到肉眼可視的患者內(nèi)部區(qū)域和/或內(nèi)部區(qū)域內(nèi)的任何組織的影像。術(shù)語“患者區(qū)域”是指患者整體或患者的特別部位或部分。造影劑特別用于提供組織如心肌、內(nèi)皮和/或上皮組織，以及胃腸和心血管區(qū)的影像，也可以用于更廣泛的方面，如用于成像脈管系統(tǒng)，或以對對本領(lǐng)域技術(shù)人員十分顯然的其它方法使用。這里所用的術(shù)語“心血管區(qū)”是指由心臟和直接連接和離開心臟的脈管系統(tǒng)所限定的患者區(qū)域。這里所用的術(shù)語“脈管系統(tǒng)”是指體內(nèi)或體內(nèi)器官或部分中的血管(動脈、靜脈等)?；颊呖梢允侨魏畏N類哺乳動物，但最優(yōu)選人。本發(fā)明還提供了診斷疾病組織存在的方法。疾病組織包括，例如，由支持疾病組織的脈管系統(tǒng)產(chǎn)生的內(nèi)皮組織。結(jié)果，定位和成像患者區(qū)域內(nèi)皮組織(在正常情況下與內(nèi)皮組織不相干)提供了疾病組織在區(qū)域內(nèi)的指癥。在進(jìn)行本發(fā)明的磁共振成像方法時(shí)，造影劑可以單獨(dú)使用，或與其它診斷，治療或其它藥劑結(jié)合使用。這些其它藥劑包括賦形劑如調(diào)味劑或著色劑?？墒褂玫拇殴舱癯上窦夹g(shù)是常規(guī)技術(shù)并參見如D.M.Kean和M.A.Smith，MagneticResonanceImagingPrinciplesandAppications，(William和Wilkins，Baltimore1986)中的描述。期待的MRI技術(shù)包括但不限于核磁共振(NMR)和電子自旋共振(ESR)。優(yōu)選的成像方式為NMR成像。本發(fā)明進(jìn)一步用下述實(shí)施例加以說明。實(shí)施例1至8、13至15、20至22、27、28、42、43至45和47及48為實(shí)際實(shí)施例，而實(shí)施例9至12、16至19、23至26、29至41和49至59為預(yù)示實(shí)施例。實(shí)施例46不僅為實(shí)際實(shí)施例(部分)而且還是預(yù)示實(shí)施例(部分)。這些實(shí)施例僅為說明性的，而不限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例實(shí)施例1本實(shí)施例涉及具有下式結(jié)構(gòu)的N，N′-雙(十六烷基氨基羰基亞甲基)-(β-N，N，N-三甲基銨基乙基氨基羰基亞甲基)-N，N′-二甲基-N，N′-乙二胺四碘化物(EDTA-HA-TMA四碘化物)的制備。A.制備N，N′-雙-(十六烷基氨基羰基亞甲基)-乙二胺-N，N′-二乙酸(EDTA-HA)將乙二胺四乙酸二酐(2.56g，0.01mol)的無水甲醇(30ml)溶液和十六烷基胺(4.82g，0.02mol)的無水甲醇(60mL)溶液混合并于50℃攪拌6小時(shí)。過濾分離所產(chǎn)生的白色固體并于室溫下真空干燥，得到3.43g(64％)EDTA-HA。IR3320cm-1(OH)，1670cm-1(C＝O)(羰基)。B.制備N，N′-雙-(十六烷基氨基羰基亞甲基)-N，N′，β-N，N-二甲基氨基-乙基氨基羰基亞甲基)乙二胺(EDTA-HA-DMA)向含有步驟A的EDTA-HA(3.69g，0.005mol)，N，N-二甲基乙二胺(0.88g，0.01mol)和CHCl3(100mL)的冷(5℃)溶液內(nèi)滴加入DCC(2.227g，0.01mol)的氯仿(20ml)溶液。所得乳狀液于室溫下攪拌約24小時(shí)，隨后過濾。用0.5％乙酸(100mL)洗滌濾液以分解過量的DCC。觀察到白色乳狀乳液分離成兩層。干燥(Na2SO4)下層有機(jī)層并真空濃縮，得到3.81gEDTA-HA-DMA，為半固體。IR3280cm-1，2900cm-1，1640cm-1，1530cm-1。C.制備EDTA-HA-TMA四碘化物混合步驟B所得的EDTA-HA-DMA(4.22g，4.77mmol)、碘甲烷(3.41g，24mmol)和乙醇(30mL)并回流2小時(shí)。濃縮反應(yīng)混合物并凍干殘留物過夜，得到4.98g標(biāo)題產(chǎn)物(EDTA-HA-TMA四碘化物)，為黃色固體。IR3260cm-1，1650cm-1。實(shí)施例2本實(shí)施例涉及具有下式結(jié)構(gòu)的N，N′-雙(十六烷氧基羰基亞甲基)-N-(β-N，N，N-三甲基銨基乙基氨基羰基亞甲基)-N-甲基-N′-(羧基亞甲基)乙二胺二碘化物(EDTA-HAL-DMA二碘化物)的制備。A.制備N，N′-雙-(十六烷氧基羰基亞甲基)-乙二胺-N，N′-二乙酸(EDTA-HAL)混合十六烷醇(4.84g，0.02mol)、無水二甲基甲酰胺(20mL)、無水三乙胺(3.3g)和乙二胺四乙酸二酐(2.56g，0.01mol)，于50℃攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)混合物傾入冷水中(200mL)并用HCl酸化所得含水混合物。過濾分離所產(chǎn)生的白色沉淀并水洗濾餅。用乙醇重結(jié)晶白色固體，得到7gEDTA-HAL。m.p.103℃。B.制備N，N′-雙-(十六烷氧基羰基亞甲基)-N-(β-N-二甲基氨基-乙基氨基羰基)-N′-乙酸(EDTA-HAL-DMA)向含有步驟A的EDTA-HAL(3.70g，0.005mol)、N，N-二甲基乙二胺(1.598g，0.0175mol)和CHCl3(100mL)的冷(5℃)溶液內(nèi)滴加入DCC(3.60g，0.0175mol)的氯仿(20ml)溶液。有沉淀形成，并室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物約24小時(shí)，隨后過濾反應(yīng)混合物，并用0.5％乙酸(100mL)洗滌濾液以分解過量的DCC。形成白色乳狀溶液并分離成兩層。干燥底層有機(jī)層并真空濃縮，得到3.85gEDTA-HAL-DMA、為粘性固體。C.制備EDTA-HAL-DMA二碘化物混合步驟B所得的EDTA-HAL-DMA(2.36g.0.0027mol)、碘甲烷(3.81g)和乙醇(50mL)，并回流2小時(shí)。真空濃縮溶液并將所得到的殘留物凍干過夜，得到2.96g標(biāo)題產(chǎn)物(EDTA-HAL-DMA二碘化物)，為淡黃色固體。實(shí)施例3本實(shí)施例涉及具有下述結(jié)構(gòu)的N，N′-雙(十六烷氧基羰基亞甲基)-N-(β-N，N，N-三甲基銨基乙基氨基羰基亞甲基)-N-甲基-N′-(羧基亞甲基)乙二胺二碘化物(EDTA-HA-DMA二碘化物)的制備。A.制備N，N′雙(十六烷基氨基羰基亞甲基)-乙二胺-N，N′-二乙酸(EDTA-HA)將十六烷基胺(4.82g，0.02mol)的無水甲醇(60mL)溶液加到乙二胺四乙酸二酐(2.56g，0.01mol)的無水甲醇(30mL)懸浮液內(nèi)。混合物于50℃攪拌6小時(shí)。過濾分離所形成的白色固體沉淀，并于室溫下真空干燥，得到3.43g(64％)EDTA-HA。m.p.156-158℃。IR3320cm-1(OH)；1670cm-1(-C(C＝O)-)。B.制備N，N′-雙(十六烷基氨基羰基亞甲基)-N，N′-雙(β-N，N-二甲基氨基羰基亞甲基)乙二胺(EDTA-HA-DMA)向含有步驟A所得的EDTA-HA(3.69g，0.005mol)、N，N-二甲基乙二胺(0.88g，0.01mol)和CHCl3(100mL)的冷(5℃)溶液內(nèi)滴加入1.3-二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)(2.227g，0.011mol)的CHCl3(20mL)溶液。觀測到有沉淀形成，室溫下攪拌反應(yīng)混合物約24小時(shí)。過濾反應(yīng)混合物并用0.5％乙酸(100mL)洗滌濾液，以分解過量DCC。形成的白色乳狀溶液分離成兩層。干燥(硫酸鈉)底部有機(jī)層并真空濃縮，得到3.81gEDTA-HA-DMA，為半固體。IR3280cm-1；2900cm-1；1640cm-1；1530cm-1。C.制備EDTA-HA-DMA二碘化物將含步驟B得到的EDTA-HA-DMA(4.2g，4.77mmol)、碘甲烷(3.41g，24mmol)和乙醇(30mL)的溶液回流2小時(shí)。真空濃縮乙醇溶液并凍干所得殘留物過夜，得到3.98g標(biāo)題化合物(EDTA-LA-DMA二碘化物)，為黃色固體。IR3260cm-1；1650cm-1。實(shí)施例4本實(shí)施例涉及具有下述結(jié)構(gòu)的DPGS-PEG-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val的制備。A制備N-(1，2-二棕櫚?；?sn-甘油基-3-琥珀?；?-琥珀酰亞胺(N-DPGS-琥珀酰亞胺)向含DCC(20.6mg)和乙腈(10mL)的冷(0-5℃)溶液內(nèi)滴加入含1，2-二棕櫚酰-sn-甘油基-3-琥珀酸酯(AvantiPolarLipids，Alabaster，AL)(66.8mg)，N-羥基琥珀酰亞胺(11.5mg)，二甲氨基吡啶(DMAP)(2mg)和乙腈(40mL)的溶液。攪拌反應(yīng)混合物5小時(shí)并濾除所形成的固體。真空濃縮濾液，得到78mgN-DPGS-琥珀酰亞胺，為白色產(chǎn)物。B.制備3-ω-羧基聚乙二醇亞氨基琥珀酸1，2-二棕櫚酰-sn-甘油酯(DPGS-ω-羧基-PEG)向ω-氨基-ω′-羧基-聚乙二醇(ShearwaterPolymers，Huntsville，AL)(0.3g)和三乙胺(40mg)在CHCl3(20mL)的溶液內(nèi)滴加入步驟A所得的N-DPGS-琥珀酰亞胺(78mg)的氯仿(10mL)溶液。10℃下攪拌所形成的溶液約5小時(shí)并放置過夜。將反應(yīng)混合物傾入冰水內(nèi)并用10％HCl中和至pH小于3。分離有機(jī)層，水洗并干燥(硫酸鈉)，過濾并真空濃縮，得到0.34gDPGS-ω-羧基-PEG，為白色固體。C.制備3-琥珀酰氧基羰基-聚乙二醇亞氨基琥珀酸-1，2-二棕櫚?；?sn-甘油酯(DPGS-ω-羧基-PEG-琥珀酰亞胺)向DCC(12mg)的乙腈(10mL)冷(0-5℃)溶液內(nèi)加入步驟B所得的DPGS-ω-羧基-PEG(200mg)，N-羥基琥珀酰亞胺(6mg)he二甲氨基吡啶(2mg)的溶液。攪拌所形成的反應(yīng)混合物5小時(shí)。從反應(yīng)混合物中過濾除去所形成的白色固體，并真空濃縮濾液。得到DPGS-ω-羧基-PEG-琥珀酰亞胺(200mg)，為白色固體。D.制備DPGS-PEG-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val共軛物向肽Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val(5mg)在pH8.5的緩沖液(20mL)中的溶液內(nèi)滴加入步驟C的DPGS-ω-羧基-PEG-琥珀酰亞胺(40mg)的乙腈(0.1mL)溶液。室溫?cái)嚢杷纬傻姆磻?yīng)混合物約48小時(shí)。真空濃縮反應(yīng)混合物并通過具有約1,000分子量分級顆粒的膜滲析天然鹽，并在凍干箱中干燥。得到標(biāo)題化合物(DPGS-PEG-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val)(24mg)，為白色固體。實(shí)施例5本實(shí)施例涉及具有下述結(jié)構(gòu)的DPPE-PEG-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val的制備。其中“肽”為-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-valA.制備ω，ω′-二亞甲基羧基-聚乙二醇酐向氯磺?；惽杷狨?14.2mg)的CHCl3(5mL)冷(0-5℃)溶液內(nèi)加入ω，ω′-二亞甲基羧基聚乙二醇(0.34g)和三乙胺(20mg)的CHCl3(20mL)溶液。攪拌反應(yīng)混合物過夜并傾入到冰水中。分離有機(jī)層并干燥(Na2SO4)。過濾并真空濃縮有機(jī)層，得到標(biāo)題酐化合物(0.2g)，為白色固體。B.制備1，2-二棕櫚?；?sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-羰基亞甲基-ω′-羧基-聚乙二醇(DPPE-ω-羧基-PEG)。向步驟A得到的酐化合物(0.3g)的二氯甲烷(10mL)令(0-10℃)溶液內(nèi)加入DPPE(0.07g)和三乙胺(0.05g)的二氯甲烷(15mL)溶液。攪拌所得混合物過夜，傾入冰水中，用10％HCl中和至pH＜3。分離有機(jī)層并干燥(硫酸鈉)，過濾并真空濃縮有機(jī)層，得到0.45gDPPE-ω-羧基-PEG，為灰白色固體。C.制備1，2-二棕櫚?；?sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-羰基亞甲基-聚乙二醇-琥珀酰亞胺(DPPE-ω-羧基-PEG-琥珀酰亞胺)向DCC(3mg)的乙腈(2mL)冷(0-5℃)溶液內(nèi)加入步驟B所得的DPPE-ω-羧基-PEG(60mg)，N-羥基琥珀酰亞胺(1.8mg)和二甲氨基吡啶(0.2mg)在6mL乙腈中的溶液。在0-5℃下，攪拌所形成的混合物3小時(shí)，然后于室溫下攪拌過夜。濾除所形成的固體并真空濃縮濾液，得到60mgDPPE-ω-羧基-PEG-琥珀酰亞胺。D.制備DPPE-PEG-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val共軛物向Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val(5mg)在pH8.5的緩沖液中的溶液內(nèi)滴加入DPPE-ω-羧基-PEG-琥珀酰亞胺(40mg)的乙腈(10mL)溶液。室溫?cái)嚢杷纬傻幕旌衔锛s48小時(shí)。真空除去乙腈，然后通過1000分子量分級顆粒的膜滲析天然鹽。凍干得到35mg標(biāo)題化合物(DPPE-PEG-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val)，為白色固體。實(shí)施例6向鹽水、丙二醇和甘油(8∶1∶1)的溶液內(nèi)加入DPPC、DPPE-PEG5000和DPPA(摩爾比為82∶8∶10)。將所得混合物加熱至約45℃，過濾(0.22μm)。將過濾后的混合物放入到管瓶內(nèi)并使之冷卻至室溫。將管瓶放入真空中排空任何氣體，隨后用PFP加壓管瓶。爾后密封管瓶，置于振蕩器上，于室溫下振蕩，得到PFP填充泡囊的溶液，泡囊的平均直徑約2.5μm。實(shí)施例7本實(shí)施例涉及本發(fā)明范圍內(nèi)的靶向泡囊的制備。利用上面實(shí)施例5中所述方法，將GpIIbIIIa結(jié)合肽(IntegratedBiomoleculeCorporation.Tucson，AZ)與DPPE-PEG3400通過共價(jià)方式結(jié)合。隨后將此肽共軛物與DPPC(82mol％)、DPPE-PEG5000(8mol％)和DPPA(8mol％)的干燥類脂混合物混合。水合此混合物并用LabconcoLyph-Lock12凍干機(jī)(KansasCity.MO)凍干。將凍干物料再懸浮在的生理鹽水∶丙二醇∶甘油＝8∶1∶1混合液中，濃度為1mg/ml。取小份此混合物放入2mLWheaton管瓶(Millville，NJ)內(nèi)，封口并用全氟丁烷氣體(Flura，Newport.TN)替換上部空間的氣體。攪拌管瓶，得到靶向GpIIbIIIa受體的泡囊組合物。實(shí)施例8本實(shí)施例包括利用實(shí)施例6和7制備的泡囊組合物進(jìn)行肽結(jié)合實(shí)驗(yàn)的描述。將未肝素化人血放入Vacutainer管(BectonDickinson，Rutherford，NJ)內(nèi)并使之結(jié)塊。用BeckmanTJ-6型離心儀(PaloAlto，CA)離心收集血塊。然后將血塊放在陽電載片(FisherScientific，Pittsburgh，PA)上。用血塊血涂布九塊載片。還使用六塊未涂布載片作為對照研究。然后通過如下所述將實(shí)施例6及7的泡囊組合物(200μL)施加到前述載片上進(jìn)行結(jié)合研究(A)僅施加血塊(對照)；(B)施加實(shí)施例6的泡囊組合物，但不施加血塊；(C)施加實(shí)施例6的泡囊組合物和血塊；(D)施加實(shí)施例7的泡囊組合物，但不施加血塊；(E)施加實(shí)施例3的泡囊組合物和血塊。溫育載片20分鐘，然后用磷酸緩沖鹽水洗去未結(jié)合的物料。隨后使用NikonDiaphot(Tokyo，Japan)顯微鏡觀測載片。結(jié)果見下表中所示。表3結(jié)合研究結(jié)合(A)無(B)無(C)無(D)無(E)結(jié)合正如從上表中能看到的那樣，僅當(dāng)使用含有GPIIbIIIa靶向肽的實(shí)施例7的泡囊組合物時(shí)，觀測到結(jié)合。實(shí)施例9本實(shí)施例涉及基于人血清白蛋白的載有定向GPIIbIIIa受體的靶向配位體的泡囊的制備。在容器內(nèi)放入5％人血清白蛋白懸浮液。在連續(xù)真空下脫氣此懸浮液，并按公開的國際專利申請WO95/29705所述在其上部空間中導(dǎo)入全氟丙烷，所述文獻(xiàn)在此全部并入本文用作參考。通過用生理鹽水重復(fù)洗滌，所形成的氣體填充的白蛋白泡囊將與任何游離的白蛋白分離開。將氣體填充泡囊再懸浮在生理鹽水∶丙二醇∶甘油(6∶2∶2.v∶v∶v)混合物內(nèi)并緩和混合懸浮液。向此懸浮液內(nèi)加入1％戊二醛和1wt.％肽Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val，產(chǎn)生載有GPIIbIIIa結(jié)合肽的交聯(lián)全氟丙烷泡囊。實(shí)施例10本實(shí)施例涉及被結(jié)合有定向GPIIbIIIa受體的可聚丙烯?；?苯乙烯基類脂類似物穩(wěn)定的泡囊的制備。用甲基丙烯酰氯酯化12-羥基十二烷酸并轉(zhuǎn)化該酯成酐，從而得到12-(甲基丙烯酰氧基)十二烷酸酐。用12-(甲基丙烯酰氧基)十二烷酸酐?；苌月蚜字腖-α-甘油磷酰膽堿，得到雙[12-(甲基丙烯酰基)氧基十二烷?；鵠-L-α-甘油磷酰膽堿(1)。用由粗制響尾蛇毒液(Crotalusadamanteus)得到的磷脂酶酶促水解化合物(1)，接著用棕櫚酰酐?；?，得到1-[2-(甲基丙烯酰氧基)十二烷?；鵠-2-棕櫚酰基-L-α-甘油磷酰膽堿(2)。采用類似方法轉(zhuǎn)化二棕櫚酰基-L-α-甘油磷酰膽堿成1-棕櫚?；?2-[12-(甲基酰氧基)十二烷?；鵠-L-α-甘油磷酰膽堿(3)。向DPPE-PEG5000(1.8mg/mL)和10wt％用GPIIbIIIa結(jié)合肽(Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val)標(biāo)記的DPPE-PEG-5000(采用上面實(shí)施例5的方法制得)的生理鹽水溶液內(nèi)加入上面所制得的化合物(3)。取少量此溶液放入無菌3mL管瓶內(nèi)。將管瓶的液面上空間抽真空并注入氮?dú)夂腿彝闅怏w(20∶80，v/v)混合物到管瓶的液面上空間內(nèi)，加至環(huán)境壓力。室溫下，將管瓶放在ESPECapmix(Seefeld，OberayGerman)振蕩約1分鐘。照射(254nm)泡囊組合物，得到載有GPIIbIIIa結(jié)合肽的聚合氣體填充泡囊。泡囊的平均直徑為約3μm。實(shí)施例11本實(shí)施例涉及定向GpIIbIIIa受體的合成聚雙(羧酸根合苯氧基)吩噻嗪(PCCP)氣體填充的泡囊的制備。采用上面實(shí)施例5中所述方法制備PCPP-PEG2000-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val。然后如美國專利5,487,390所述制備PCPP泡囊，此文獻(xiàn)內(nèi)容在此并入本文用作參考。將PCPP泡囊(100mg)加到1mL碳酸鈉溶液(30mg/mL)內(nèi)并于室溫?cái)嚢柽^夜溶解。溶液用磷酸緩沖鹽水溶液(pH7.4)稀釋，得到25％(w/v)最終聚合物濃度及pH7.4的溶液。如果需要，用1NHCl調(diào)節(jié)pH。在膠體磨中混合含0.2％吐溫20的PCPP溶液(2.5％w/v)和全氟丙烷氣體，產(chǎn)生充氣的PCCP溶液，此溶液能穩(wěn)定數(shù)小時(shí)。此溶液中所用的PCPP的10mol％為PCPP-PEG2000-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val。充氣溶液以150μL/分鐘速率從注射泵中擠壓到處在全氟丙烷氣體氣氛中的空氣霧化裝置中并噴霧到含有250mL7.5％CaCl2溶液(其中含0.5％吐溫20)的盤中。通過與CaCl2溶液接觸，PCPP被兩價(jià)鈣離子交聯(lián)，產(chǎn)生具有比較均勻分布的靶向GPIIbIIIa并填充有全氟丙烷的球形凝膠泡囊。通過利用倒置顯微鏡觀察泡囊，可以證實(shí)所包封的全氟丙烷的存在。實(shí)施例12本實(shí)施例涉及由氟化類脂配制的靶向GPIIbIIIa受體的泡囊的制備。α-氨基ω-羧基-PEG3400(ShearwaterPolymer，Huntsville，AL)的氨基按下所述給予保護(hù)溶解1當(dāng)量α-氨基ω-羧基-PEG3400到水二噁烷(1∶1，v/v)溶液內(nèi)，向此攪拌溶液內(nèi)加入1摩爾當(dāng)量t-BOc-酐(Bachem，Gardena，CA)和三乙胺(AldrichChemical，Milwaukee，WI)。攪拌所形成的溶液過夜并真空濃縮除去揮發(fā)物二噁烷。向濃縮物料中加入10體積當(dāng)量(相對于水)乙酸乙酯并用冰浴冷卻所形成的混合物?；旌衔锏膒H用2N硫酸水溶液調(diào)節(jié)至pH2，利用分液漏斗分離下層水層。乙酸乙酯層用飽和鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾，并真空濃縮，得到漿狀物。結(jié)合t-BOC-α-氨基ω-羧基-PEG3400、一摩爾當(dāng)量二異丙基碳化二亞胺(DIC)(SigmaChemicalCO.，St.Louis，MO)和無水DMF。攪拌此溶液并加入各一當(dāng)量的二異丙基乙胺(DIEA)(SigmaChemicalCo，St.Louis.MO)、羥基苯并三唑(HOBT)和1，2-二(15，16，17，18-九氟代)硬脂基磷脂酰乙醇胺(氟化-DSPE)。攪拌所形成的溶液2小時(shí)并真空濃縮。將氟化-DSPE-t-BOC-α-氨基ω-羧基-PEG3400懸浮在三氟乙酸和二氯甲烷(4∶6)的溶液內(nèi)，接著再攪拌20分鐘。然后用DIEA中和溶液并真空濃縮。產(chǎn)物再懸浮在二氯甲烷內(nèi)，加鹽酸至pH約2。分離水層并用1.0％NaOH再調(diào)節(jié)至pH10。向含水混合物中加入乙酸乙酯，并分離出乙酸乙酯層，用飽和鹽水洗滌，干燥(疏酸鎂)，過濾并真空濃縮，得到氟化-DSPEα-氨基ω-羧基-PEG3400，為黃色油。將上面所得的黃色油與1當(dāng)量N-溴代琥珀酰亞胺(NBS)(SigmaChemical，St.Louis，MO)和DMF混合。攪拌所形成的混合物3小時(shí)并真空濃縮過夜。濃縮物料再懸浮在pH7的磷酸緩沖鹽水溶液內(nèi)，并向懸浮液內(nèi)加入靶向GPIIbIIIa受體的肽Arg-Gly-Asp-Ser(RGDS)。攪拌過夜后，使用Amicon濾器濃縮器(Amicon，Beverly，MA)濃縮反應(yīng)混合物至約300ml體積。通過尺寸排阻層析純化濃縮液，得到氟化-DSPE-α-氨基ω-羧基-PEG3400-Arg-Gly-Asp-Ser。將此產(chǎn)物加到DPPC和DPPA的混合物中，以得到DPPC∶氟化DSPE∶DPPA的比例為40∶54∶6。將該類脂混合物加到包括生理鹽水∶甘油∶丙二醇(8∶1∶1，v∶v∶v)的稀釋劑中，得到1mg/mL稀釋劑類脂最終濃度。取少量此溶液放入到2mL管瓶(WheatonIndustries，Chicago，IL)內(nèi)并用全氟丙烷填充液面上空間。用ESPECapmix(ESPE，Seefeld，Germany)以4300rpm攪拌管瓶1分鐘，產(chǎn)生靶向GPIIbIIIa受體的氟化泡囊。實(shí)施例13本實(shí)施例涉及具有下述結(jié)構(gòu)的N-(1，2-二棕櫚酰基-sn-甘油基-3-琥珀酰)-PEG-A蛋白共軛物的制備。A.制備N-DPGS-琥珀酰亞胺。向容在100mL圓底燒瓶內(nèi)的1，2-二棕櫚?；?sn-甘油基-3-琥珀酸酯(66.8mg)、N-羥基-琥珀酰亞胺(11.5mg)、DMAP(2mg)和乙腈(40mL)冷(0-5℃)溶液中滴加入DCC(20.6mg)的乙腈(10mL)溶液。攪拌所得混合物5小時(shí)。濾除反應(yīng)期間產(chǎn)生的固體物料(二環(huán)己基脲)并真空濃縮濾液，得到78mgN-DPGS-琥珀酰亞胺，為白色產(chǎn)物。B.制備3-ω-羧基-聚乙二醇-亞氨基-琥珀酸1，2-二棕櫚?；?sn-甘油酯(DPGS-ω-羧基-PEG)。向容在100mL圓底燒瓶內(nèi)的步驟A所得的N-DPGS-琥珀酰亞胺(78mg)和CHCl3(10mL)(Mallinckrodt，St.Louis，Mo.)的冷(0-5℃溶液中滴加入ω-氨基-ω′-羧基-聚乙二醇(0.3g)和三乙胺(40mg)的CHCl3(20mL)溶液。10℃下攪拌所得混合物5小時(shí)。攪拌過夜后，將反應(yīng)混合物傾入到冰水中并用10％HCl中和至pH約3或更低。利用分液漏斗分出下面有機(jī)層并水洗三次。收集有機(jī)層并干燥(硫酸鈉)。過濾并真空濃縮，得到0.34gDPGS-ω-羧基-PEG，為白色固體。C.制備3-琥珀酰亞胺酰氧基-羰基-聚乙二醇-亞氨基琥珀酸1，2-二棕櫚酰基-sn-甘油酯(DPGS-ω-羧基-PEG-琥珀酰亞胺)。向置于250mL圓底燒瓶內(nèi)的步驟B的DPGS-ω-羧基-PEG(200mg)、N-羥基琥珀酰亞胺(6mg)、DMAP(2mg)和乙腈(40mL)的冷(0-5℃)溶液中滴加入DCC(12mg)的乙腈(10mL)溶液。攪拌所得混合物5小時(shí)并濾除所形成的白色固體(二環(huán)己基脲)。真空濃縮濾液，得到200mgDPGS-ω-羧基-PEG-琥珀酰亞胺，為白色固體。D.制備DPGS-PEG-A蛋白共軛物向攪拌的蛋白A(SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO)(20mg)在pH8.5的含水緩沖液(20mL)中的冷(5-10℃)溶液內(nèi)滴加入步驟C所得的DPGS-ω-羧基-PEG-琥珀酰亞胺(4mg)和乙腈(10mL)的溶液。將所得混合物的溫度升至室溫并攪拌約48小時(shí)。真空濃縮混合物并利用具有約3500分子量分級顆粒膜的滲析儀滲析去殘留鹽，逆水平衡。冷凍并凍干所得滲析溶液，得到12mg標(biāo)題物料(DPGS-PEG-A蛋白共軛物)，為白色固體。實(shí)施例14本實(shí)施例涉及具有下述結(jié)構(gòu)的DPPE-PEG-A蛋白共軛物的制備，A.制備ω，ω′-二亞甲基羧基-聚乙二醇酸酐向置在100mL圓底燒瓶內(nèi)的ω，ω′-二亞甲基羧基聚乙二醇(0.34g)和CHCl3(20mL)的冷(0-5℃)溶液內(nèi)加入DCC(0.02g)的CHCl3(5mL)溶液。攪拌此溶液過夜并濾除所產(chǎn)生的白色固體沉淀(二環(huán)己基脲)。真空濃縮濾液，得到0.3g酐，為白色固體。B.制備1，2-二棕櫚酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-羰基-亞甲基-ω′-羧基-聚乙二醇(DPPE-ω-羧基-PEG)向置在100mL圓底燒瓶內(nèi)的步驟A所得酸酐(0.3g)的二氯甲烷(10mL)冷(0-10℃)溶液內(nèi)加入DPPE(0.07g)和三乙胺(0.05g)的二氯甲烷(15mL)溶液。攪拌過夜后，將反應(yīng)混合物傾入冰水中并用10％HCl酸化至pH約3或更低。隨后利用250mL分液漏斗分出下面有機(jī)層并干燥(硫酸鈉)。過濾并真空濃縮二氯甲烷溶液，得到0.45gDPPE-ω-羧基-PEG，為灰白色固體。C.制備1，2-二棕櫚?；?sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-羰基乙腈-聚乙二醇-琥珀酰亞胺(DPPE-ω-羧基-PEG-琥珀酰亞胺)向DCC(3mg)的乙腈(2mL)冷(0-5℃)溶液內(nèi)加入DPPE-ω-羧基-PEG(60mg)(由步驟B制得)、N-羥基琥珀酰亞胺(1.8mg)和DMAP(0.2mg)的乙腈(6mL)溶液。在0-5℃攪拌3小時(shí)后，將反應(yīng)混合物的溫度升至室溫。攪拌過夜后，濾除所形成的白色固體沉淀，并真空濃縮濾液，得到60mgDPPE-ω-羧基-PEG-琥珀酰亞胺。D.制備DPPE-PEG-A蛋白共軛物向A蛋白(20mg)在15mlpH8.5的含水緩沖液(15mL)中的冷(5-10℃)溶液內(nèi)滴加步驟C所得的DPPE-ω-羧基-PEG-琥珀酰亞胺(4mg)的乙腈(8mL)溶液。將反應(yīng)混合物的溫度升至室溫并續(xù)攪拌48小時(shí)。真空濃縮混合物，利用具有約3500分子量分級顆粒滲析膜滲析殘余鹽到水中。凍干含水滲析液樣，得到15mg標(biāo)題產(chǎn)物(DPPE-PEG-A蛋白共軛物)，為白色固體。實(shí)施例15本實(shí)施例涉及定向上皮細(xì)胞的靶向泡囊組合物的制備和使用。A.制備泡囊組合物將實(shí)施例13所得的DPGS-PEG-蛋白A共軛物(1wt％)與DPPC(82mol％)、DPPA(10mol％)和DPPE(8mol％)的干燥類脂混合物混合。水合此干燥類脂混合物并利用Labconco(KansasCity，MO)Lyph-Lock12型凍干機(jī)凍干。將凍干混合物再懸浮在生理鹽水∶丙二醇∶甘油(8∶1∶1)中，其中類脂濃度為1mg/mL。將混合物等分到2mLWheaton管瓶(Millville，NJ)內(nèi)。封口覆蓋管瓶并用全氟丁烷氣體(Flura，Newport，TN)置換管瓶的液面上空間空氣。然后用EspeCapmix(Seefeld，Germany)搖動管瓶一分鐘，得到氣體填充泡囊。向管瓶液樣中加入兔抗角蛋白抗體(Calbiochem，SanDiego，CA)(100μL)，并顛倒混合抗體和氣體填充泡囊。室溫溫育管瓶約1小時(shí)。分別在用PBS洗滌之前和之后對泡囊組合物進(jìn)行雙辛可寧酸蛋白沉測定(Pierce，Rockford，IL)。該測定表明，抗角蛋白抗體通過A蛋白與泡囊結(jié)合，并且在洗滌過程中仍保持結(jié)合。B.泡囊組合物的靶向?qū)嶒?yàn)將HeLa細(xì)胞(表達(dá)角蛋白的上皮子宮頸癌細(xì)胞系)平板接種到平側(cè)組織培養(yǎng)管(Nunc，Roskilde，Denmark)的EMEM培養(yǎng)基(Cellgro，Washington，DC)內(nèi)。將細(xì)胞生長過夜，并向各管內(nèi)加入等分泡囊組合物。所用泡囊組合物為(i)實(shí)施例6所得的泡囊；(ii)步驟A中所制的且不含兔抗角蛋白抗體的泡囊；和(iii)步驟A所制的且包含兔抗角蛋白抗體的泡囊。僅(iii)中的包含抗體的泡囊與HeLa細(xì)胞結(jié)合。實(shí)施例16利用二硬脂?；字Ｒ掖及?DSPE)，(AvantiPlarLipids，Alabaster，AL)和α-氨基ω-羧基-PEG3400(ShearwaterPolymer，Huntsville，AL)制備聚乙二醇化類脂。通過在水∶二噁烷(1∶1，v∶v)中結(jié)合α-氨基ω-酰氨基PEG和各1摩爾當(dāng)量的t-Boc-酐(Bachem，Gardena，CA)和三乙胺(AldrichChemical，Milwaukee，WI)保護(hù)氨基。攪拌所得溶液過夜并真空除去二噁烷。向水殘留物中加入相對于水1()倍體積量乙酸乙酯(Mallincrodt，St.Louis，MO)，并在冰浴中冷卻此混合物。用含水硫酸(2N)調(diào)節(jié)pH至pH2，利用分液漏斗分離水層。乙酸乙酯層用鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)，并真空濃縮，顛倒此漿狀物。混合黃色油、DSPE-t-Boc-α-氨基ω-酰氨基-PEG3400、一摩爾當(dāng)量二異丙基碳化二亞胺(DIC)(SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO)和無水二甲基甲酰胺(DMF)。攪拌溶液并再各加入一摩爾當(dāng)量二異丙基碳化二亞胺(DIEA)(SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO)和羥基苯并三唑(HOBT)。攪拌溶液2小時(shí)并真空濃縮。將濃縮殘留物DSPE-t-BOC-α-氨基，ω-酰氨基-PEG3400與三氟乙酸和二氯甲烷(4∶6，v∶v)混合，并再攪拌所得混合物20分鐘。溶液用DIEA中和并真空濃縮。堿將此殘留物再懸浮于二氯甲烷中，加入稀鹽酸至達(dá)到pH2為止。分離水層，并用1.0％NaOH調(diào)節(jié)pH至10。向此水混合物中加入乙酸乙酯，并分離乙酸乙酯層，飽和鹽水洗滌，并干燥(硫酸鎂)。真空濃縮乙酸乙酯溶液，得到黃色油。向黃色油、DSPE-α-氨基ω-酰氨基-PEG3400在DMF中的溶液內(nèi)加入一當(dāng)量N-溴琥珀酰亞胺(NBS)(SigmaChemical，St.Louis，MO)。攪拌3小時(shí)后，真空濃縮反應(yīng)混合物過夜。向所得濃殘留物在pH約7的磷酸緩沖鹽水(PBS)的懸浮液中加入抗癌胚抗原(抗-CEA)，即小鼠/人嵌合起點(diǎn)的單克隆抗體。攪拌過夜后，用Amicon過濾濃縮器(Amicon，Bevely，MA)濃縮溶液至約300mL體積。濃溶液通過尺寸排阻層析純化，得到最終產(chǎn)物。實(shí)施例17重復(fù)實(shí)施例6制備泡囊制劑，只是在泡囊形成之前，向類脂組合物中加入約1納摩爾重組人生長激素。實(shí)施例18重復(fù)實(shí)施例17，只是用陽離子類脂二棕櫚?；字Ｄ憠A(Avanti)代替DPPA，以及用中性類脂DPPE代替DPPC。此實(shí)施例提供了可與生物活性劑，特別是遺傳物質(zhì)，如血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)結(jié)合的陽離子泡囊。摻入靶向配位體如抗心肌抗體類脂共軛物，提供了能定向梗塞和/或局部缺血組織的靶向泡囊。施加具有可變脈沖持續(xù)時(shí)間的高能量超聲波脈沖，例如1MHz連續(xù)波200mW，促進(jìn)泡囊破裂。結(jié)果，VEGF基本上能直接傳送到梗塞和/局部缺血組織。實(shí)施例19本實(shí)施例涉及能靶向胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的泡囊組合物的制備。重復(fù)實(shí)施例16，只是用抑生長素肽代替抗-CEA。再向泡囊組合物中摻入治療用抗腫瘤劑鏈左星。靜脈注射所得泡囊組合物到被診斷患有神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的患者體內(nèi)。泡囊優(yōu)先在鄰近腫瘤的胰腺區(qū)域被吸收，由此產(chǎn)生增強(qiáng)的傳送抗腫瘤劑到腫瘤部位的能力。實(shí)施例20重復(fù)實(shí)施例15，只是除HeLa細(xì)胞外，靶向泡囊還被加入到包括小鼠正常肝細(xì)胞的內(nèi)皮細(xì)胞系中。只有含有抗體的泡囊才與肝細(xì)胞結(jié)合。實(shí)施例21本實(shí)施例涉及靶向心肌細(xì)胞的制備和使用。A.制備靶向泡囊重復(fù)實(shí)施例15，只是用兔抗人骨骼肌球蛋白抗體(BiomakorTM，KiryatWeizmann，Rehovot，Israel)(100μL)代替兔抗角蛋白抗體。B.靶向心肌細(xì)胞將大鼠心臟成肌細(xì)胞(美國典型培養(yǎng)物保藏中心，Rockbille，MD)平板接種到平側(cè)組織培養(yǎng)管(Nunc，Roskilde，Denmark)的EMEM培養(yǎng)基(Cellgro，Washington，DC)內(nèi)。將細(xì)胞生長過夜，并向各管內(nèi)加入等份泡囊組合物。所用泡囊組合物為(i)實(shí)施例6的泡囊；(ii)步驟A中所制的且不含兔抗肌球蛋白抗體的泡囊；和(iii)步驟A所制的且包含兔抗肌球蛋白抗體的泡囊。只有(iii)中的包含抗體的泡囊與心肌細(xì)胞結(jié)合。實(shí)施例22本實(shí)施例涉及靶向心肌細(xì)胞的制備和應(yīng)用。A.制備靶向泡囊重復(fù)實(shí)施例15，只是用兔抗肌球蛋白(骨骼)抗體(AccurateChemical，Westbury，NY)(100μL)代替兔抗角蛋白抗體。B.靶向心肌細(xì)胞采用表達(dá)心肌球蛋白的大鼠心肌細(xì)胞系H9C2。(與骨骼肌肌球蛋白和心肌肌球蛋白基本類似)。對照組細(xì)胞系為INT407，即人腸道細(xì)胞系。將這些細(xì)胞平板接種到平側(cè)組織培養(yǎng)管(Nunc，Roskilde，Denmark)的EMEM培養(yǎng)基(Cellgro，Washington，DC)內(nèi)。將細(xì)胞生長過夜，并向各管內(nèi)加入等份泡囊組合物。所用泡囊組合物為(i)實(shí)施例6的泡囊；(ii)步驟A中所制的且不含兔抗肌球蛋白抗體的泡囊；和(iii)步驟A所制的且包含兔抗肌球蛋白抗體的泡囊。所用的三種試驗(yàn)細(xì)胞種類為(a)INT407；(b)H9C2；和(c)經(jīng)過下述處理的H9C2暴露在10％葡萄糖中10分鐘以休克細(xì)胞并開通微孔，以容許抗肌球蛋白結(jié)合到胞質(zhì)肌球蛋白上。在任一細(xì)胞種類(a)、(b)或(c)中均未觀察到它們與泡囊組合物的結(jié)合。泡囊組合物(iii)也未與細(xì)胞種類(a)結(jié)合。觀察到泡囊組合物(iii)與細(xì)胞種類(b)的某些結(jié)合，相反則觀察到泡囊組合物(iii)與細(xì)胞種類(c)的顯著結(jié)合。實(shí)施例23冠脈擴(kuò)張藥潘生丁(例如，參見TheMerckIndex，10thEd.，p.489(1983))是包括在本發(fā)明范圍中的生物活性劑。潘生丁還包括在本發(fā)明范圍內(nèi)的靶向配位體中，因?yàn)樗芘c心臟組織內(nèi)的一種或多種受體結(jié)合，并且還能連接到磷脂上，提供膜相容衍生物。具體地，利用二環(huán)己基碳化二亞胺和作為縮合劑的催化劑，使N-琥珀酰-DPPE與N-雙嘧氨哌醇琥珀酸酯-DPPE結(jié)合。此種結(jié)合有潘生丁衍生物的類脂可用于類脂組合物中，用于制備靶向心臟組織的泡囊，實(shí)施例24將氣囊導(dǎo)管經(jīng)過股動脈經(jīng)皮導(dǎo)入到實(shí)驗(yàn)動物的左彎曲冠狀動脈內(nèi)。充氣氣囊3小時(shí)，防止血液流向前外側(cè)心肌層并引起心肌梗塞。借助5MHz換能器進(jìn)行超聲波心動描記術(shù)并展示持續(xù)壁運(yùn)動異常，以及左室前外側(cè)壁的心肌變細(xì)。放氣氣囊并靜脈注射劑量30μL/Kg的填充有十二氟戊烷氣體的抗心肌球蛋白標(biāo)記的泡囊(類似實(shí)施例22步驟A中所述制備)。注射后，進(jìn)行30分鐘超聲波心動描記術(shù)。影像表明，在前外側(cè)壁中由增強(qiáng)的發(fā)生回波面積，這對應(yīng)于梗塞的面積。梗塞外周(再灌注區(qū)域)最亮，中心強(qiáng)度較低(持續(xù)無血流區(qū)域)。比較發(fā)現(xiàn)，中心室穴相對暗，此時(shí)大多數(shù)泡囊被清楚。實(shí)施例25將胸疼患者送入到醫(yī)院的急救室中，進(jìn)行超聲波研究，研究表明在左室的前壁存在壁運(yùn)動異常。對患者施用劑量5μL/Kg抗心肌球蛋白標(biāo)記的填充有全氟丁烷氣體的泡囊(類似實(shí)施例22步驟A所述制備)。給用10分鐘后，重復(fù)超聲波成像，顯示出在左室動脈壁中有增強(qiáng)的回波發(fā)生區(qū)域。這將進(jìn)一步確定心肌梗塞的診斷，并用組織纖溶酶原激活物治療患者。實(shí)施例26對患者進(jìn)行應(yīng)力超聲波心動描記術(shù)檢查，診斷是否存在冠狀動脈疾病。在最大運(yùn)動期間，對患者施用55μL/Kg如上面實(shí)施例23所述的潘生丁標(biāo)記的全氟丙烷填充泡囊。通過利用(a)雙官能團(tuán)；(b)小跨越分子；(c)還原性氨化或未還原性氨化的席夫堿；或(d)馬來酰亞胺基連接基，結(jié)合潘生丁和泡囊。泡囊結(jié)合到心肌的灌注區(qū)域。隨著背景泡囊變清楚(需要約5分鐘)，標(biāo)記泡囊將繼續(xù)存在心肌內(nèi)。延遲影像表明，冠狀動脈疾病(CAD)影響的局部缺血心肌作為明亮環(huán)繞的低強(qiáng)度區(qū)域，即正常冠狀心肌。心室內(nèi)的任何顯著背景泡囊的缺少消除了屏蔽問題，并有助于進(jìn)行CAD診斷。實(shí)施例27本實(shí)施例說明使用本發(fā)明的泡囊組合物和方法對蛋白質(zhì)的靶向表達(dá)。取三只Sprague-Dawley鼠(這里分別稱作(A)、(B)和(C))，用氯胺酮乙酰丙嗪麻醉。將含有帶有SV40啟動子的β-半乳糖苷酶基因和增強(qiáng)子基因的質(zhì)粒pSVβ-gal與實(shí)施例2中制得的陽離子類脂化合物結(jié)合。室溫培養(yǎng)質(zhì)粒和陽離子類脂化合物的混合物15分鐘。將cGMP和所得的培養(yǎng)物質(zhì)加到分別以82∶10∶8摩爾％共混的DPPC、中的溶液內(nèi)。用WIG-L-BUGTM以3200rpm振蕩所形成的混合物1分鐘，制得泡囊。將所得泡囊組合物分別注射到大鼠(A)、(B)和(C)體內(nèi)。注射劑量如下。大鼠劑量pSVβgal(μg)劑量陽離子類脂(μg)(A)530(B)530(C)25150在注射泡囊組合物期間，將大鼠(B)和(C)暴露在超聲波儀(1.0Mhz，Rich-Mar25型，Rich-MarCorporation.Inola，OK)的超聲波能量中。注射期間超聲波定向到左后頹的內(nèi)部并持續(xù)一分鐘后峰。大鼠(A)不接受超聲波治療。48小時(shí)后，用CO2窒息處死大鼠。從各大鼠上除去左右腿肌肉和皮膚。還除去心臟，肝臟和腎臟。切除組織在2％福爾馬林固定72小時(shí)。固定后，將組織浸入到含有X-gal、亞鐵氰化鉀和鐵氰化鉀的溶液內(nèi)，測定所存在的β-半乳糖苷酶的活性。染色組織，檢查并照相。表達(dá)廣泛分散在大鼠(A)的腿組織，特別是內(nèi)皮細(xì)胞，肌肉和皮膚中。檢查大鼠(B)的切除組織表示出在類似細(xì)胞種類中的表達(dá)，但僅在超聲波施加的部位。大鼠(C)顯示出在靶腿中的點(diǎn)表達(dá)并且分散表達(dá)到未靶向的腿中。實(shí)施例28本實(shí)施例涉及各種類脂組合物的制備。以相應(yīng)的82∶10∶8摩爾比例共混DPPC、DPPA和DPPE-PEG5000，此類脂混合物在此稱作組合物(A)。取部分組合物(A)與實(shí)施例2中制得的陽離子類脂化合物以10∶1(w/w)比例混合在去離子蒸餾水中。這后一種混合物在此稱作組合物(B)。將組合物(A)和(B)導(dǎo)入到1ml血清管瓶內(nèi)。用SargentWelch真空泵(Skokie，IL)抽真空并用全氟丙烷氣體(FluraChemicalCorp.Newport，TN)替換液面上空間氣體。用CrescentDentalWIG-L-BUGTM311B(Lyons，IL)機(jī)械搖動器攪動管瓶。振蕩后，向部分管瓶中加入肝素(ElkinSinnsInc.，CherryHill，NJ)，類脂與肝素的摩爾比大約為5∶1。肝素和組合物(A)的混合物在此稱作組合物(C)。肝素和組合物(B)的混合物在此被稱作組合物(D)。隨后向組合物(A)、(B)、(C)和(D)中分別加入重組人隨后向組合物(A)、(B)、(C)和(D)中分別加入重組人堿性成纖維細(xì)胞生長因子(BFGF)(Sigma，St.Louis，MO)，所得混合物在此分別稱作組合物(E)、(F)、(G)和(H)。以5∶1摩爾比(BFGF肝素)將BFGF加到含有肝素的組合物(組合物(C)和(D))中。采用Accusizer770(ParticleSizingSystems，SantaBarbara，CA)，分級組合物(A)至(H)各至少三組樣品。分級表明，組合物(A)至(G)中的泡囊的尺寸沒有區(qū)別。但是，含有陽離子類脂、肝素和BFGF的組合物(H)的泡囊具有較小的平均尺寸。然后利用天然聚丙烯酰胺凝膠(蛋白質(zhì)凝膠PAGE混合物，BoehringerMannheim，Indianapolis，IN)分析組合物(E)至(H)，鑒定肝素和BFGF的結(jié)合特性。凝膠在HoeferSE400板凝膠裝置(HoeferScientificSanFranciso，CA)中熔化。利用電泳電源(MBP300，IBI，Rochester，NY)，凝膠以恒電流熔化。爾后采用快速考馬斯藍(lán)(EastmanKodak，Rochester，NY)染色方法染色凝膠并目視分析。凝膠電泳確認(rèn)，在組合物(H)中，陽離子類脂的存在增強(qiáng)了肝素以及BFGF的結(jié)合。預(yù)期陰離子性肝素與陽離子類脂結(jié)合，且陽離子性BFGF與肝素結(jié)合。不含肝素和陽離子類脂的組合物中的BFGF在電泳過程中遷移。實(shí)施例29重復(fù)實(shí)施例16，只是用血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)替代抗-CEA抗原。實(shí)施例30以82∶10∶8摩爾％將DPPC、DPPA和DPPE-PEG5000混合到生理鹽水∶丙二醇∶甘油(8∶1∶1，w/w/w)中。溶液中類脂總濃度為1mg/mL。向此混合物中加入重組人生長因子，濃度10wt％(基于類脂的總重量)。取小份(1.5mL)此混合物放入到3mL玻璃管瓶內(nèi)并將管瓶內(nèi)液面上空間氣體用全氟丙烷氣體交換。密封管瓶并搖動，產(chǎn)生結(jié)合有人生長激素的氣體填充泡囊，可用于靶向內(nèi)皮細(xì)胞。泡囊的平均直徑為約3μm。實(shí)施例31以92∶8摩爾比，將二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)和DPPE-PEG5000混合到無菌水中。類脂濃度約1mg/mL。利用酰胺結(jié)合法，用10摩爾％(重量)堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)衍生脫乙酰殼多糖，連接脫乙酰殼多糖的氨基到bFGF的羧基部分上。將衍生脫乙酰殼多糖加到類脂懸浮液中，其加入量應(yīng)能提供基本等濃度脫乙酰殼多糖中的陽離子基團(tuán)和DSPG中的陰離子基團(tuán)。取小份此溶液(1.5mL)放入到3mL管瓶內(nèi)并用全氟丁烷替代液面上空間的氣體。密封管瓶并用ESPECapmix(Seefeld，Germany)振蕩，得到用于靶向內(nèi)皮細(xì)胞的氣體填充泡囊。實(shí)施例32用DSPE和α，ω-雙羧甲基)PEG2000(ShearwaterPolymer，Huntsville，AL)制備聚乙二醇化類脂，從而得到MeO2C-PEG-DSPE。用柱色譜(硅膠)純化該類脂，得到游離酸(HO2C-PEG-DSPE)，然后將VEGF連接到游離羧基上。以82∶10∶6∶2摩爾比將DPPC，DSPA，DSPE-PEG和DSPEPEG-VEGF混合至生理鹽水∶甘油∶丙二醇(8∶1∶1，w/w/w)中，類脂總濃度達(dá)到1.5mg/ml。取小份此混合物(1.5mL)放入到3mL無菌管瓶內(nèi)，并在30℃下將管瓶中液面上空間的氣體用全氟戊烷氣體替換，密封管瓶。利用ESPECapmisx(Seefeld，Germany)，在30℃以3,200rpm振蕩管瓶約90秒，產(chǎn)生全氟戊烷氣體填充的靶向泡囊。實(shí)施例33以65∶27∶8摩爾比將，DSPC、膽固醇和DPPA混合到生理鹽水∶丙二醇∶甘油(8∶1∶1，w/w/w)中，總類脂濃度為5mg/mL。取小份此混合物(1.5mL)放入到無菌管瓶內(nèi)，并在將管瓶中液面上空間的氣體用全氟丁烷氣體替換，密封管瓶并用ESPECapmisx(Seefeld，Germany)振蕩管瓶約5分鐘，得到本發(fā)明的泡囊組合物。對已給用高膽固醇食物的Watanabi兔靜脈給用0.10mL/Kg劑量泡囊組合物。給藥后，進(jìn)行超聲波成像約25分鐘，成像表明泡囊聚焦在粥樣硬化斑侵襲的內(nèi)皮細(xì)胞區(qū)域。這說明本發(fā)明的泡囊組合物可用于檢測內(nèi)皮細(xì)胞的粥樣硬化區(qū)。實(shí)施例34重復(fù)實(shí)施例33，其中除所用類脂外，還包括提供酰胺鍵與DPPE-PEG-羧酸化物共價(jià)連接的膽甾醇胺。這樣類脂混合物包括DPPC、DPPE-PEG5000、DPPE-PEG-膽甾醇胺和DPPA，它們以82∶7∶1∶10摩爾％混合。實(shí)施例35重復(fù)實(shí)施例33，只是類脂濃度增高至約5mg/mL，且懸浮介質(zhì)包括生理鹽水、海藻糖(10mg/mL)和pluronicF-68(10mg/mL)的溶液。此類脂懸浮液用Microfluidizer(Microfluidics，Newton，MA)以16,000psi微乳化，共10個來回。凍干所形成的泡囊組合物，并通過緩慢注入全氟丁烷氣體，在72小時(shí)內(nèi)使凍干室的上部空間逐漸恢復(fù)至環(huán)境壓力。所形成的氣體填充的凍干泡囊在使用之前以干粉形式貯藏。實(shí)施例36重復(fù)實(shí)施例35，只是類脂濃度將增大至約25mg/mL，且懸浮介質(zhì)包括生理鹽水、山梨糖醇(20mg/mL)和pluronicF-68(20mg/mL)的溶液。將類脂懸浮液冷卻至-4℃，并向此混合物中加入全氟戊烷，使全氟戊烷的濃度達(dá)到8μL/mL溶液。將此混合物以16,000psi通過保持在4℃的微硫化器，共20個來回。從而得到全氟戊烷填充的泡囊組合物。靜脈注射該組合物到患者體內(nèi)，在體內(nèi)形成可用于靶向內(nèi)皮細(xì)胞的氣體填充泡囊。氣體填充泡囊也可在靜脈注射之前按下所述制得溫?zé)崤菽医M合物至高于約30℃，利用如ESPEcapmix(Seefeld，Germany)或其它搖動器或攪拌裝置攪動制得，或者通過抽動填充由全氟戊烷填充的泡囊組合物的注射器的活塞，降低壓力并轉(zhuǎn)化全氟戊烷液體成全氟戊烷氣體來制備。實(shí)施例37用異丁烯酰氯酯化12-羥基十二烷酸并轉(zhuǎn)化酯成酸酐，得到12-(異丁烯酰氧基)十二烷酸酐。用12-(異丁烯酰氧基)十二烷酸酐?；苌月蚜字腖-α-甘油膽堿磷酸，產(chǎn)生雙[12-(異丁烯酰)氧基十二烷?；鵠-L-α-磷脂酰膽堿(1)。利用由粗制響尾蛇毒液(Crotalusadamanteus)得到的磷脂酶酶促水解化合物(1)，接著用棕櫚酰酐酰化，得到1-[2-(異丁烯酰氧基)十二烷酰基]-2-棕櫚?；?L-α-甘油磷酰膽堿(2)。將上述產(chǎn)物(2)與生理鹽水混合，其中類脂的濃度為3mg/mL。向此混合物中加入DSPE-PEG-VEGF，其濃度為0.30mg/mL。取少量此溶液(1.5mL)放入無菌3mL管瓶內(nèi)。將管瓶的液面上空間抽真空并全氟丙烷氣體置換，密封管瓶并用光不透性箔紙纏繞。將管瓶放在ESPECapmix(Seefeld，Germany)振蕩約3分鐘，得到氣體ESPECapmix(Seefeld，Germany)振蕩約3分鐘，得到氣體填充泡囊。除去箔紙并用光(254nm)照射泡囊組合物，得到靶向內(nèi)皮細(xì)胞的聚合氣體填充泡囊、該泡囊載有VEGF。實(shí)施例38重復(fù)實(shí)施例37，只是將類脂(2)與DSPE-PEG(參見實(shí)施例8)結(jié)合。在用ESPECapmix(Seefeld.Germany)搖動之前，將VEGF與此混合物混合，而不是共價(jià)連接到DSPE-PEG上。光聚合之后，將VEGF直接嵌入涂布泡囊的聚合類脂膜中。實(shí)施例39本實(shí)施例概括性涉及白蛋白泡囊的制備，該泡囊被內(nèi)部交聯(lián)并包括通過連接聚氧(C1-4)亞烷基鏈修飾的表面，如公開的國際專利WO95/00126所述，此文獻(xiàn)內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。亞烷基鏈修飾物的末端包含活性基團(tuán)，而不是WO95/00126中的亞烷基鏈的末端為醚基?；钚曰鶊F(tuán)包括結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞的靶向配位體的基團(tuán)。實(shí)施例39A以500mL/分鐘速率將5％人牛血清白蛋白(5mL)的水溶液導(dǎo)入到超聲波反應(yīng)器內(nèi)。使用SonifierB-30(Branson，F(xiàn)RG)超聲波處理混合物約15分鐘，能量負(fù)荷為100瓦/cm2。通過冷凍反應(yīng)容器保持溫度為22℃。如果需要的話，此混合物中可包含生物活性劑如藥物。通過加到白蛋白溶液(戊二醛飽和的二氯甲烷(0.2mL)溶液)內(nèi)引發(fā)交聯(lián)。攪拌所得溶液約1小時(shí)。依次用甲醇，丙酮和正己烷洗滌后，得到交聯(lián)的白蛋白泡囊，為棕色粉末，并真空干燥約24小時(shí)。利用Nicomps激光光顆粒散射系統(tǒng)在大約200nm處確定所得泡囊的顆粒尺寸。實(shí)施例39B通過用4葉片高速攪拌機(jī)替代高強(qiáng)度乳化法并使用高濃度白蛋白，例如約10至約25％濃度，可以制得具有大于實(shí)施例39A中所制泡囊直徑的白蛋白泡囊。如上面實(shí)施例39A所述進(jìn)行交聯(lián)。實(shí)施例39C本實(shí)施例涉及氣體填充的泡囊的制備。按下所述制備白蛋白泡囊在無菌管瓶內(nèi)放入5mL5％白蛋白并在液面上空間中充入全氟丁烷氣體。用ESPECapmix(Seefeld，Germany)以3,300rpm搖動管瓶約5分鐘，并按上面實(shí)施例39A所述進(jìn)行交聯(lián)。實(shí)施例39D本實(shí)施例涉及氣體填充的白蛋白泡囊的制備。通過超聲波處理含5％人血清白蛋白溶液的管瓶和液面上空間的全氟丙烷氣體，制備白蛋白泡囊。該超聲處理包括在中等功率設(shè)置下(HeatSystemsProbe，F(xiàn)armingdale，NY)將超聲波發(fā)生器角尖端最低程度浸入到液體內(nèi)界面內(nèi)約5分鐘。如上實(shí)施例39A所述交聯(lián)白蛋白泡囊。實(shí)施例39E本實(shí)施例涉及偶合雜雙官能化PEG到上面制得的白蛋白泡囊上。將α-氨基ω-羧基-PEG5000(ShearwaterPolymers)的ω羧基用合適的酯官能物例如芐基酯保護(hù)。通過用1，1-羰基二咪唑活化蛋白質(zhì)上的合適氨基酸部分如天冬氨酸或谷氨酸部分，使PEG的氨基共價(jià)鍵合到白蛋白泡囊上，使白蛋白與PEG的重量比為10∶1。PEG通過酰胺鍵共價(jià)鍵合到白蛋白上之后，除去芐基酯基團(tuán)，通過用1，1-羰基二咪唑活化PEG的羧酸化物，使aFGF與游離羧基連接。這樣提供了經(jīng)PEG連接基鍵合到白蛋白泡囊上的內(nèi)皮靶向配位體。另一方面，偶合也可通過用羰基二咪唑活化aFGF的適宜氨基酸如天冬氨酸或谷氨酸，接著加入羧基保護(hù)的α-氨基ω-羧基-PEG而完成。被護(hù)羧基將被脫保護(hù)，而未保護(hù)的羧基被羰基二咪唑活化?；旌匣罨腶FGF-PEG并與白蛋白泡囊反應(yīng)。通過在真空下小心脫水泡囊將氣體注入到泡囊內(nèi)，并逐漸用氣體如全氟丁烷恢復(fù)至環(huán)境壓力。在脫水和氣體注入步驟之前可加入一種或多種表面活性劑如pouronicF-68。實(shí)施例40本實(shí)施例涉及氣體填充的籠形物的制備。用適宜的酯官能物如芐基酯保護(hù)α-羥基，ω-羧基-PEG2000的ω羧基。在0-5℃，將被護(hù)化合物與一當(dāng)量POCl3在Et3N和CHCl3中反應(yīng)，轉(zhuǎn)化羥基成氯化磷酯。爾后將此化合物與過量碳酸氫鈉反應(yīng)產(chǎn)生相應(yīng)的磷酸鈉鹽(PEG-PO4Na2)用pH3.0的HCl酸化該鹽，得到相應(yīng)的酸(PEG-PO4H2)。采用約100分子量分級顆粒的膜向純凈水逆向滲析此產(chǎn)物。滲析后，將上述磷酸產(chǎn)物(2g)與焦磷酸二氫二鈉(Na2H2P2O7)(8g)在水(100mL)中化合。將此溶液導(dǎo)入到Buchi噴霧干燥裝置中并噴霧干燥。真空下于120℃烘干所得顆粒，得到空心PEG涂層的焦磷酸鹽泡囊。將這些泡囊再懸浮在水介質(zhì)中，除去芐基保護(hù)基。用1，1-羰基二咪唑活化PEG的脫保護(hù)羧基，并偶合所得化合物到靶向內(nèi)皮細(xì)胞的ELAM的單克隆抗體上。向含靶向泡囊的水介質(zhì)中加入DDPC和pluronicF-68，使其濃度分別達(dá)到1mg/mL和5mg/mL。加熱含泡囊的水介質(zhì)至約45℃，手動緩慢攪動并在保持此溫度下利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器真空干燥。將所得干燥物質(zhì)加到適宜的容器內(nèi)并凍干。在約48小時(shí)內(nèi)向容器的液面上空間內(nèi)逐漸注入全氟丁烷氣體，直至達(dá)到環(huán)境壓力。所得氣體填充的焦磷酸鹽籠形物在使用之前以凍干粉末形式貯藏。實(shí)施例41在100mL蒸餾水中溶解3.68gCaCl2H2O，制備0.25MCa+2溶液。用0.1M氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液的pH至11。通過在10mL蒸餾水中溶解0.75g此鹽制備0.74M磷酸二氫鉀(KH2PO4)溶液。向該溶液內(nèi)加入1.75g雙官能化PEG、α-苯基羧基酯、ω-磷?；?PEG5000。pH再用0.1MNaOH調(diào)節(jié)至pH11。在劇烈攪拌下向CaCL2溶液內(nèi)滴加磷酸二氫鉀/PEG磷酸鹽溶液。所得沉淀經(jīng)單顆粒光學(xué)篩分和光學(xué)顯微鏡分級。顆粒直徑在約1至2μm范圍內(nèi)。過濾顆粒并再懸浮到生理鹽水中，從羧基上除去苯基。將羧基用1，1-羰基二咪唑活化并與對ELAM具有特異性的單克隆抗體反應(yīng)。單克隆抗體可根據(jù)Kohler和Milstein在“自然”(Nature)1975，256495中羧酸的方法用常規(guī)技術(shù)制備，其中此文獻(xiàn)內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。將顆粒懸浮在pluronicF-68(20mg/mL)中，將此懸浮液導(dǎo)入到合適容器中并凍干。容器液面上的空間逐漸用全氟丙烷氣體平衡至環(huán)境壓力，得到羥磷灰石氣體籠形物。實(shí)施例42對大鼠進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)，該試驗(yàn)說明實(shí)施例3的陽離子類脂化合物胞內(nèi)傳遞遺傳物質(zhì)的高效力。此試驗(yàn)還說明超聲波能量用于靶向到體內(nèi)具有含遺傳物質(zhì)的泡囊組合物的特定組織的效力。通過混合質(zhì)粒pSVβ-gal(Promega，Madison，WI)(含有β-半乳糖苷酶基因y和實(shí)施例3中制得的陽離子類脂化合物化合它們。尾靜脈注射所形成的混合物到三組SpragueDawley鼠(鼠組(A)，(B)和(C))的各組中。(A)組大鼠不進(jìn)行超聲波處理。在向(B)組和(C)組大鼠的各組注射過程中，對其后腿內(nèi)部施加超聲波能量。48小時(shí)后，對鼠施行安樂死并去除組織。將組織在2％福爾馬林中固定72小時(shí)，切成薄片并放入到X-gal溶液內(nèi)。在37℃溫育16小時(shí)后，檢查組織。(A)組大鼠的組織顯示為藍(lán)包，這為普通轉(zhuǎn)染的表示。(B)組及(C)組大鼠的組織僅在施加超聲波能量的部位顯示為藍(lán)色。這表明基因表達(dá)的定位可利用本發(fā)明的化合物及方法實(shí)現(xiàn)。實(shí)施例43將新鮮人血施加到紗布條(TillotsonHealthCareBedford，NH)上并使之結(jié)塊。在Tygon管中鑄成1％瓊脂糖(BoehringerMannheimBiochemical，Indianapolis，Indiana)支座板。將載有血塊的紗布條插入到Tygon管內(nèi)。在管內(nèi)還插入線內(nèi)混合元件(Cole-Parmer，Chicago，IL)以產(chǎn)生湍流。采用MasterFlex蠕動泵(Cole-Parmer)泵入磷酸緩沖鹽水(BoehringerMannheimBiochemcial)浸沒整個紗布條。采用帶有7.5MHz的外周血管換能器(Phoenix，AZ)的AcousticImaging5200超聲波儀進(jìn)行超聲波成像。換能器固定在環(huán)架上并從支座板的下面進(jìn)行成像。待未結(jié)合的血塊從紗布條上洗去之后，向大約2mL/分鐘流速的PBS流中注射各1mL的靶向GPIIbIIIa的靶向泡囊組合物和實(shí)施例的泡囊組合物(非靶向)。使泡囊在此速度下結(jié)合2分鐘，然后將流速往上調(diào)到6mL/分鐘，回收未結(jié)合泡囊。在以6mL/分鐘速率洗滌后，靶向泡囊結(jié)合在紗布條上，而非靶向泡囊則被洗去。超聲波影像顯示出結(jié)合有靶向GPIIbIIIa泡囊的血塊具有增強(qiáng)的回波發(fā)生。采用Macintosh660AV計(jì)算機(jī)(AppleComputing，Cupertino，CA)進(jìn)行脫機(jī)電視顯像測密分析。選擇血塊的全部面積并測定電視顯像測密術(shù)單位。利用Image1.55(NationalInstitutesofHealth，Washington，DC)捕獲影像并分析。這種分析包括捕積并疊加造影前基線影像和造影后影像，并從造影后影像中扣除造影前影像。這種捕積、疊加和扣除還可以在洗去未結(jié)合泡囊之前和之后進(jìn)行。這種電視顯像測密分析不僅可使用連續(xù)式超聲波還可以使用間歇式超聲波來進(jìn)行。該分析所得數(shù)據(jù)見下表中所示，其中高數(shù)值表示改善的造影效果。表4靶向泡囊的電視顯像測密分析-超聲波背散射定量觀察上表，顯示出，與非靶向泡囊相比，靶向泡囊的背散射增強(qiáng)。進(jìn)行T-試驗(yàn)，該試驗(yàn)說明在p＜0.01的連續(xù)影像和間歇影像成像中，與非靶向泡囊相比，靶向泡囊的電視光密度信號明顯增強(qiáng)。實(shí)施例44本實(shí)施例涉及具有下式結(jié)構(gòu)的DPGS-NH-PEG-NH-馬米酰亞胺的制備。A.制備二棕櫚酰甘由琥珀酸酯-聚乙二醇-胺(DPGS-NH-PEG-NH2)。向100mL圓底燒瓶內(nèi)加入DPGS(98mg，0.147mmol，leq.)的CH2Cl2溶液。向另一圓底燒瓶(100mL)內(nèi)加入H2N-PEG-NH2(PEG-二胺)(50mg，0.147mmol，leq.)的CH2Cl2溶液。向PEG-二胺溶液內(nèi)立刻加入DCC(31mg，0.15mmol，1.02eq)的CHCl3(5mL)溶液。在約0-約5℃下，將形成的DCC和PEG-二胺混合物滴加到DPGS溶液內(nèi)。將所形成的反應(yīng)混合物加熱至室溫。攪拌24小時(shí)后，向反應(yīng)混合物中加入去離子蒸餾水(50mL)，并濾除所形成的沉淀(二環(huán)己基脲)。利用250mL分離漏斗分離下層有機(jī)層并將其干燥(1硫酸鈉)。過濾干燥過的有機(jī)溶液并向?yàn)V液中加入80mL乙腈。濾除殘余的白色沉淀并真空濃縮濾液，得到0.44gDPGS-NH-PEG-NH2，為固體產(chǎn)物。IR1700cm-1。TLCRf0.65。B.制備DPGS-PEG-NH-馬來酰亞胺在100mL圓底燒瓶內(nèi)加入步驟A所得的DPGS-NH-PEG-NH2(0.44g，0.13mmol，leq.)的CH2Cl2(10mL)溶液。向此溶液內(nèi)加入三乙胺(13mg，0.13mmol，leq.)的CH2Cl2溶液。爾后向此混合物中滴加入34.6mgN-馬來?；?β-氨基丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(34.6mg)的CH2Cl2(10mL)溶液。室溫?cái)嚢柽^夜后，向反應(yīng)混合物中加入去離子蒸餾水(30mL)并再攪拌3小時(shí)。利用分液漏斗分離下層有機(jī)層并干燥(硫酸鈉)。過濾有機(jī)層并真空濃縮濾液，得到360mg標(biāo)題化合物，為蠟狀白色固體。IR1740cm-1，1670cm-1，1100cm-1。TLCRf0.75。實(shí)施例45本實(shí)施例涉及具有下述結(jié)構(gòu)的1，2-二棕櫚?；?sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-羰基亞乙基羰基-亞胺基-聚乙二醇乙基氨基羰基亞乙基馬來酰亞胺的制備。A.制備1，2-二棕櫚酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-羰基亞乙基羰基亞胺基聚乙二醇乙胺(DPPE-NH-PEG-NH2)。向DPPE琥珀酸酯(79mg)和ω，ω′-二氨基聚乙二醇(340mg)的二氯甲烷(20mL)冷(0-5℃)溶液內(nèi)加入DCC(22mg)，的二氯甲烷(10mL)溶液。在0-5℃下攪拌反應(yīng)混合物4小時(shí)，然后于室溫下攪拌過夜。加水(10mL)，并再攪拌反應(yīng)混合物一小時(shí)。分出下層有機(jī)層并利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器真空濃度。將殘留物溶于乙腈中并濾除沉淀。真空濃縮有機(jī)溶液，得到390mgDPPE-NH-PEG-NH2，為白色固體。B.制備DPPE-NH-PEG-NH-馬來酰亞胺向步驟A所得的DPPE-NH-PEG-NH2(210mg)和三乙胺(20mg)的二氯甲烷(20mL)冷(0-5℃)溶液內(nèi)加入馬來酰亞胺基丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(26mg)的二氯甲烷(10mL)溶液。在0-5℃下攪拌所形成的混合物1小時(shí)，爾后室溫?cái)嚢柽^夜。加入10mL水并在攪拌下用稀鹽酸酸化所得混合物至pH3。分離有機(jī)層，水洗(10mL)并干燥(硫酸鈉)。利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器真空濃縮至干，得到210mg標(biāo)題化合物(DPPE-NH-PEG-NH-馬來酰亞胺)，為白色固體。實(shí)施例46將Fab′或F(ab′)2片斷經(jīng)類脂-PEG-馬來酰亞胺類脂與氣體填充的泡囊結(jié)合。Fab′或F(ab′)2片斷通過利用購自Pierce(RockfordIL)的Fab′和/或F(ab′)2試劑盒，由抗骨骼肌球蛋白(SigmaChemical，St.Louis，MO)制得。Fab′片斷通過用木瓜蛋白酶消化抗體制備。這樣從抗體的Fc區(qū)切割下兩個Fab′片斷。然后將Fc片斷結(jié)合到A蛋白柱上并收集Fab′片斷。爾后將Fab′片斷凍干(LabconcoLyph-Lock12，KansasCity.MO)并作好用于結(jié)合到類脂-PEG-馬來酰亞胺類脂上的準(zhǔn)備。以與Fab′的制備類似的方式制備F(ab′)2片斷。不過用胃蛋白酶代替木瓜蛋白酶。胃蛋白酶在Fc區(qū)切割下更多個Fab′片斷，并且每兩個Fab′片斷仍保持連接。然后凍干F(ab′)2片斷，將各種片斷再懸浮在偶聯(lián)緩沖液(150mMNaCl，10mMMOPS，0.1mMEDTA，50μmDTPA，pH6.5)中(所有上述物質(zhì)均購自SigmaChemical，St.Louis，MO)，其中片斷的濃度為1mg/mL。然后加入類脂-PEG-馬來酰亞胺(0.2-10mM)，將混合物在4℃培養(yǎng)16小時(shí)。用聚丙烯酰胺電泳凝膠分析所得產(chǎn)物，確定Fab′和/或F(ab′)2片斷是否已結(jié)合到類脂上。這可以通過觀測分子量的變化來確定。然后采用1wt％Fab′和/或F(ab′)2片斷結(jié)合類脂制備靶向泡囊。實(shí)施例47本實(shí)施例涉及具有下式結(jié)構(gòu)的DPGS-NH-PEG-NH-PDP的制備。采用實(shí)施例44步驟A的方法制備二棕櫚?；视突晁狨?聚乙二醇-胺(DPGS-NH-PEG-NH2)。將DPGS-NH-PEG-NH2(440mg，0.13mmol)和三乙胺(13mg，0.13mmol)溶于10mL二氯甲烷內(nèi)。向此溶液內(nèi)加入3-(2-吡啶基聯(lián)硫基)丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(PDP)(31mg)的二氯甲烷(10mL)溶液。室溫?cái)嚢柽^夜后，向反應(yīng)混合物中加入去離子水(30mL)并繼續(xù)攪拌3小時(shí)。利用分液漏斗分離出下層有機(jī)層并干燥(硫酸鈉)。過濾有機(jī)層并真空濃縮濾液，得到360mg標(biāo)題化合物(DPGS-NH-PEG-NH-PDP)，為蠟狀白色固體。實(shí)施例48本實(shí)施例涉及具有下式結(jié)構(gòu)的DPPE-NH-PEG-NH-PDP的合成。采用實(shí)施例45步驟A所述的方法制備1，2-二棕櫚?；?sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-羰基亞乙基羰基亞氨基聚乙二醇乙胺(DPPE-NH-PEG-NH2)。將210mg此物質(zhì)與20mg-乙胺在20mL二氯甲烷中化合。將此溶液加到3-(2-吡啶基聯(lián)硫基)丙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(PDP)(31mg)的二氯甲烷(10mL)溶液中。在0-5℃下攪拌此混合物1小時(shí)，然后于室溫?cái)嚢柽^夜。加入10mL蒸餾水并在攪拌下用稀鹽酸酸化所得混合物酯pH3。分離有機(jī)層，水(10mL)洗并干燥(硫酸鈉)。過濾有機(jī)層并利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器真空濃縮至干，得到210mg標(biāo)題化合物(DPPE-NH-PEG-NH-PDP)，為白色固體。實(shí)施例49本實(shí)施例涉及具有下式結(jié)構(gòu)的本發(fā)明類脂-親水聚合物-蛋白質(zhì)共軛物的制備。其中“A”代表A蛋白通過DPPE-NH-PEG-NH-PDP中-S-S-二疏鍵的硫原子與蛋白質(zhì)的巰基反應(yīng)，鍵連實(shí)施例48的化合物與A蛋白。所得化合物用于形成載有蛋白質(zhì)的泡囊，如載有蛋白質(zhì)的脂質(zhì)體。實(shí)施例50本實(shí)施例涉及具有下式結(jié)構(gòu)的本發(fā)明類脂-親水聚合物-蛋白質(zhì)共軛物的制備。偶連實(shí)施例47的化合物(DPGS-NH-PEG-NH-PDP)和馬來酰亞胺標(biāo)記的A蛋白，得到上述化合物。實(shí)施例51本實(shí)施例涉及具有下式結(jié)構(gòu)的DPGS-NH-PEG-葡萄糖的制備。A.NH2-PEG-葡萄糖的制備按照C.A.A.vanBroeckel和J.H.vanBoom在“四面體”，41，4545(1985)中所述的方法，制備2，3，4，6-四-O-芐基-α-D-吡喃葡萄糖基溴(0.6g)。使用活化分子篩干燥上述化合物在DMF中與ω-三氟乙?；被垡叶?3.5g)(該化合物由ω-氨基聚乙二醇和三氟乙酸酐制備)以及二異丙基乙胺(DIEA)(1.2mL)的混合物。氮?dú)鈿夥障聰嚢杷纬傻娜芤?天。溶液用氯仿(150mL)稀釋并用10％碳酸氫鈉(50mL)及水洗滌。真空濃縮有機(jī)層，并在室溫下用碳酸鈉甲醇-水溶液處理所得殘留物2天。真空除去溶劑，殘留物用氯仿(100mL)提取兩次。合并氯仿提取液并真空濃縮，將殘留物溶于甲醇中，在10％鈀-碳(0.45g)存在下于4大氣壓壓力下室溫氫化。濾除催化劑并真空濃縮濾液，得到NH2-PEG-葡萄糖(3g)，為白色固體。產(chǎn)物用硅膠柱色譜純化，并用氯仿-甲醇-水為無梯度洗脫劑洗脫。B.制備DPGS-NH-PEG-葡萄糖混合步驟A所得的NH2-PEG-葡萄糖(1g)、三乙胺(0.5g)和乙腈及水(50∶50)的溶液，并加到實(shí)施例13A得到的DPGS-琥珀酰亞胺(0.15g)的乙腈(10mL)冷(0-5℃)溶液中。室溫?cái)嚢杷纬傻幕旌衔飪商觳⒄舫译?。所得殘留物用水稀釋?0mL，通過500MWCO膜滲析，并東干，得到標(biāo)題化合物(DPGS-NH-PEG-葡萄糖)，為白色固體。實(shí)施例52本實(shí)施例涉及具有下式結(jié)構(gòu)的DPGS-NH-PEG-N-甘露糖的制備。A制備α-溴-乙酰氨基-D-甘露糖混合D-甘露糖胺鹽酸鹽(2.1g)、三乙胺(3g)和DMF(50mL)，并在攪拌下將它們加到α-溴乙酰溴(2g)的二氯甲烷冷(0-5℃溶液中。室溫?cái)嚢杷没旌衔?小時(shí)然后傾入到冰水(50mL)中。攪拌此含水混合物1小時(shí)，隨后真空濃縮至干。用水和乙醇混合物重結(jié)晶所得殘留物，得到α-溴乙酰氨基-D-甘露糖(2.1g)，為白色固體。B.制備DPGS-NH-PEG-NH-甘露糖將步驟A所得的α-溴乙酰氨基-D-甘露糖(0.3g)、實(shí)施例44A制得的DPGS-NH-PEG-NH2(4g)、碳酸鈉(0.2g)和K1(20mg)在1∶1的水和乙醇混合液中化合。加熱所形成的混合物至40℃反應(yīng)8小時(shí)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸除乙醇，含水殘留物則通過500MWCO膜滲析并凍干，得到4g標(biāo)題化合物(DPGS-NH-PEG-NH-甘露糖)，為白色固體。下述各實(shí)施例涉及靶向泡囊的制備。實(shí)施例53將白蛋白泡囊(或白蛋白涂層氣泡)懸浮在pH大于8的緩沖液中。在0-5℃下，向此懸浮液內(nèi)加入3-(2-吡啶基)聯(lián)硫基丙酸N-羥基-琥珀酰亞胺酯(SPDP)的乙腈溶液。所得混合物在室溫下培養(yǎng)2天并利用500MWCO膜滲析，得到載有吡啶基聯(lián)硫基丙酰基的白蛋白泡囊。然后將馬來酰亞胺基苯基丁酸酯共軛抗體(MPB-AB)用表面修飾的白蛋白泡囊培養(yǎng)，得到與白蛋白泡囊連接的抗體。實(shí)施例54將聚谷氨酸泡囊(或聚谷氨酸涂層氣泡)懸浮到水中。在0-5℃下，向此懸浮液內(nèi)加入乙基-N，N-二甲基氨基丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)的水溶液。緩和攪拌所得混合物4小時(shí)，然后加入肽溶液(溶在pH8-9.5的緩沖液中)。室溫溫育此混合物2天，并通過500MWCO膜滲析，得到肽共軛的聚谷氨酸泡囊。實(shí)施例55重復(fù)實(shí)施例53，只是用由氰基甲基丙烯酸甲酯(2-氰基-2-丙烯酸甲酯)和ω-氨基-四甘醇甲基丙烯酸酯的共聚物配制的泡囊替代白蛋白泡囊。實(shí)施列56本實(shí)施例涉及類脂-聚合物-肽共軛物以及由其制得的靶向泡囊的制備。在圓底燒瓶內(nèi)加入1當(dāng)量帶有叔丁氧基羰基(t-Boc)保護(hù)基的α-氨基ω-羧基PEG-4000。加入溶在N-甲基吡咯烷酮中的羰基二咪唑(CDI)(leq.)和羥基苯并三唑(leq.)活化上述化合物。向此溶液內(nèi)加入氨基末端脫保護(hù)的肽Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val。攪拌所形成的溶液，通過亞甲藍(lán)或茚三酮分析定期檢測游離氨基。當(dāng)不存在進(jìn)步證據(jù)說明存在游離氨基末端后，加入三氟乙酸的二氯甲烷溶液脫保護(hù)所有混合物。然后利用標(biāo)準(zhǔn)方法分離來自PEG的游離胺。在另一燒瓶內(nèi)加入DPPE(leq)的DMF溶液和羰基二咪唑(leq)。在分子篩(4埃)存在下繼續(xù)攪拌一小時(shí)。然后向此混合物中加入PEG-肽配位體混合物，接著繼續(xù)攪拌。然后真空干燥混合物并加到DEAE瓊脂糖凝膠尺寸排阻層析柱內(nèi)，由此分離DPPE-PEG-肽共軛物。隨后采用標(biāo)準(zhǔn)方法由DPPE-PEG-肽制備氣體填充泡囊。實(shí)施例57本實(shí)施例涉及具有下式結(jié)構(gòu)的DPGS-PEG-環(huán)肽的制備。利用標(biāo)準(zhǔn)肽合成法制備環(huán)狀[D-2-氨基丁?；?N-2-甲基-L-精氨酰-甘氨酰-L-天冬氨酰-3-(氨基甲基苯甲酸)]。在0-5℃下，向66mg該環(huán)肽在20mL水中的溶液內(nèi)加入乙基-N，N-二甲基氨基丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)的水(10mL)溶液。在0-5℃下攪拌所得混合物4小時(shí)，接著室溫?cái)嚢?小時(shí)。0-5℃下，向此溶液內(nèi)加入實(shí)施例44A的DPGS-NH-PEG-NH2(400mg)的乙腈(10mL)溶液。室溫?cái)嚢柽^夜后，真空濃縮反應(yīng)混合物，并將含水殘留物通過1000MWCO膜滲析。凍干得到上述化合物(410mg)，為白色固體。實(shí)施例58本實(shí)施例涉及由環(huán)肽靶向的泡囊的制備。0-5℃下，向環(huán)狀[D-2-氨基丁酰基-N-2-甲基-L-精氨酰-甘氨酰-L-天冬氨酰-3-(氨基甲基苯甲酸)](66mg)的水(20mL)溶液中加入乙基-N，N-二甲基氨基丙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)的水(10mL)溶液。在0-5℃下攪拌所得混合物4小時(shí)，接著室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后在0-5℃下，將反應(yīng)混合物加到白蛋白泡囊的懸浮液內(nèi)。室溫溫育所得混合物兩天，過濾并采用具有1000MWCO的膜滲析，得到由卟啉靶向配位體靶向的白蛋白泡囊。實(shí)施例59重復(fù)實(shí)施例58，只是用由氰基甲基丙烯酸甲酯(2-氰基-2-丙烯酸甲酯)和ω-氨基-四甘醇甲基丙烯酸酯的共聚物配制的泡囊替代白蛋白泡囊。本文件中所引用或描述的各件專利、專利申請和其它文獻(xiàn)所公開的內(nèi)容在此全部并入本文用作參考。除本文所描述的之外，對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，根據(jù)前面所述的方法對本發(fā)明進(jìn)行的各種改進(jìn)都是顯而易見的。這些改進(jìn)也將落在本申請所附的權(quán)利要求書的范圍之中。權(quán)利要求1.用于診斷成像的造影劑，該造影劑含有與靶向配位體結(jié)合的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物和氣體，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。2.根據(jù)權(quán)利要求1的造影劑，其中所述的造影劑含有類脂。3.根據(jù)權(quán)利要求2的造影劑，其中所述的類脂含有磷脂。4.根據(jù)權(quán)利要求3的造影劑，其中所述的磷脂選自磷脂酰氯、磷脂酰乙醇胺和磷脂酸。5.根據(jù)權(quán)利要求4的造影劑，其中所述的磷脂酰氯選自二油酰磷脂酰氯、二肉豆蔻酰磷脂酰氯、二棕櫚酰磷脂酰氯和二硬脂酰磷脂酰氯。6.根據(jù)權(quán)利要求5的造影劑，其中所述的磷脂酰氯含有二棕櫚酰磷脂酰氯。7.根據(jù)權(quán)利要求6的造影劑，其中所述的磷脂酰乙醇胺選自二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、N-琥珀酰二油酰磷脂酰乙醇胺和1-十六烷基-2-棕櫚酰磷脂酰乙醇胺。8.根據(jù)權(quán)利要求7的造影劑，其中所述的磷脂酰乙醇胺含有二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺。9.根據(jù)權(quán)利要求4的造影劑，其中所述的磷脂酸含有二棕櫚酰磷脂酸。10.根據(jù)權(quán)利要求2的造影劑，其中所述的類脂進(jìn)一步含有聚合物。11.根據(jù)權(quán)利要求10的造影劑，其中所述的聚合物含有親水聚合物。12.根據(jù)權(quán)利要求11的造影劑，其中所述的聚合物含有聚乙二醇。13.根據(jù)權(quán)利要求1的造影利，其中所述的造影劑含有蛋白質(zhì)。14.根據(jù)權(quán)利要求13的造影劑，其中所述的蛋白質(zhì)含有白蛋白。15.根據(jù)權(quán)利要求1的造影劑，其中所述的造影劑含有聚合物。16.根據(jù)權(quán)利要求15的造影劑，其中所述的聚合物包含合成聚合物或由單體制得的共聚物，所述單體選自丙烯酸、異丁烯酸、哌嗪、丁烯酸、丙烯酰胺、丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸2-羥基乙酯、乳酸、乙醇酸、ε-己內(nèi)酯、丙烯醛、氰基丙烯酸酯、雙酚A、表氯醇、羥基烷基丙烯酸酯、硅氧烷、二甲基硅氧烷、環(huán)氧乙烷、環(huán)氧丙烷、乙二醇、羥基烷基異丁烯酸酯、N-取代的丙烯酰胺、N-取代的異丁烯酰胺、N-乙烯基-2-吡咯烷酮、2，4-戊二-1-醇、乙烯基乙酸酯、丙烯氰、苯乙烯、對-氨基苯乙烯、對-氨基-芐基-苯乙烯、苯乙烯磺酸鈉、2-硫氧基乙基異丁烯酸鈉、乙烯基吡啶、異丁烯酸氨基乙酯和2-異丁烯酰氧基三甲基-氯化銨。17.根據(jù)權(quán)利要求15的造影劑，其中所述的聚合物包含選自下列的合成聚合物或共聚物聚丙烯酸、聚乙烯亞胺、聚異丁烯酸、聚甲基丙烯酸酯、聚硅氧烷、聚二甲基硅氧烷、聚乳酸、聚(ε-己內(nèi)酯)、環(huán)氧樹脂、聚環(huán)氧乙烷、聚環(huán)氧丙烷、聚乙二醇、聚酰胺、聚亞乙烯-聚丙烯氰、聚亞乙烯-聚丙烯氰-聚異丁烯酸甲酯和聚苯乙烯-聚丙烯氰。18.根據(jù)權(quán)利要求17的造影劑，其中所述的聚合物包含聚亞乙烯-聚丙烯腈共聚物。19.根據(jù)權(quán)利要求1的造影劑，其中所述的氣體包含氟化氣體。20.根據(jù)權(quán)利要求19的造影劑，其中所述的氟化氣體選自全氟化碳、六氟化硫和七氟丙烷。21.根據(jù)權(quán)利要求20的造影劑，其中所述的氟化氣體包含全氟化碳。22.根據(jù)權(quán)利要求21的造影劑，其中所述的全氟化碳選自全氟甲烷、全氟乙烷、全氟丙烷和全氟環(huán)丁烷。23.根據(jù)權(quán)利要求1的造影劑，其中所述的氣體至少有部分是由氣體前體衍生的。24.根據(jù)權(quán)利要求23的造影劑，其中所述的氣體前體的沸點(diǎn)大于大約37℃。25.根據(jù)權(quán)利要求23的造影劑，其中所述的氣體前體包含氟化物。26.根據(jù)權(quán)利要求25的造影劑，其中所述的氟化物包含全氟化碳。27.根據(jù)權(quán)利要求25的造影劑，其中所述的全氟化碳選自全氟戊烷和全氟己烷。28.根據(jù)權(quán)利要求1的造影劑，其中所述的靶向配位體選自蛋白質(zhì)、肽、糖、類固醇、類固醇類似物、生物活性劑和遺傳物質(zhì)。29.根據(jù)權(quán)利要求27的造影劑，其中所述的靶向配位體選自蛋白質(zhì)、肽和糖。30.根據(jù)權(quán)利要求29的造影劑，其中所述的靶向配位體選自蛋白質(zhì)和肽。31.根據(jù)權(quán)利要求1的造影劑，其中所述的造影劑包含泡囊。32.根據(jù)權(quán)利要求31的造影劑，其中所述的泡囊選自膠束和脂質(zhì)體。33.一種靶向組合物，該組合物包含與靶向配位體結(jié)合的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物和氣體，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。34.根據(jù)權(quán)利要求33的靶向組合物，該組合物靶向動脈硬化區(qū)域。35.根據(jù)權(quán)利要求34的靶向組合物，其中所述的動脈硬化包括動脈硬化斑。36.根據(jù)權(quán)利要求33的靶向組合物，該組合物靶向梗塞的心肌。37.根據(jù)權(quán)利要求33的靶向組合物，該組合物靶向癌細(xì)胞。38.根據(jù)權(quán)利要求33的靶向組合物，該組合物包含靶向類脂組合物。39.根據(jù)權(quán)利要求38的靶向類脂組合物，其中所述的類脂包含磷脂。40.根據(jù)權(quán)利要求39的靶向類脂組合物，其中所述的磷脂選自磷脂酰氯、磷脂酰乙醇胺和磷脂酸。41.根據(jù)權(quán)利要求40的靶向類脂組合物，其中所述的磷脂酰氯選自二油酰磷脂酰氯、二肉豆蔻酰磷脂酰氯、二棕櫚酰磷脂酰氯和二硬脂酰磷脂酰氯。42.根據(jù)權(quán)利要求41的靶向類脂組合物，其中所述的磷脂酰氯包含二棕櫚酰磷脂酰氯。43.根據(jù)權(quán)利要求40的靶向類脂組合物，其中所述的磷脂酰乙醇胺選自二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、N-琥珀酰二油酰磷脂酰乙醇胺和1-十六烷基-2-棕櫚酰磷脂酰乙醇胺。44.根據(jù)權(quán)利要求43的靶向類脂組合物，其中所述的磷脂酰乙醇胺含有二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺。45.根據(jù)權(quán)利要求40的靶向類脂組合物，其中所述的磷脂酸含有二棕櫚酰磷脂酸。46.根據(jù)權(quán)利要求38的靶向類脂組合物，其中所述的類脂進(jìn)一步含有聚合物。47.根據(jù)權(quán)利要求46的靶向類脂組合物，其中所述的聚合物含有親水聚合物。48.根據(jù)權(quán)利要求47的靶向類脂組合物，其中所述的聚合物含有聚乙二醇。49.根據(jù)權(quán)利要求33的靶向組合物，該組合物含有靶向蛋白質(zhì)組合物。50.根據(jù)權(quán)利要求49的靶向蛋白質(zhì)組合物，其中所述的蛋白質(zhì)含有白蛋白。51.根據(jù)權(quán)利要求33的靶向組合物，該組合物含有靶向聚合物。52.根據(jù)權(quán)利要求51的靶向聚合物組合物，其中所述的聚合物包含合成聚合物或由單體制得的共聚物，所述單體選自丙烯酸、異丁烯酸、哌嗪、丁烯酸、丙烯酰胺、丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸2-羥基乙酯、乳酸、乙醇酸、ε-己內(nèi)酯、丙烯醛、氰基丙烯酸酯、雙酚A、表氯醇、羥基烷基丙烯酸酯、硅氧烷、二甲基硅氧烷、環(huán)氧乙烷、環(huán)氧丙烷、乙二醇、羥基烷基異丁烯酸酯、N-取代的丙烯酰胺、N-取代的異丁烯酰胺、N-乙烯基-2-吡咯烷酮、2，4-戊二-1-醇、乙烯基乙酸酯、丙烯氰、苯乙烯、對-氨基苯乙烯、對-氨基-芐基-苯乙烯、苯乙烯磺酸鈉、2-硫氧基乙基異丁烯酸鈉、乙烯基吡啶、異丁烯酸氨基乙酯和2-異丁烯酰氧基三甲基-氯化銨。53.根據(jù)權(quán)利要求51的靶向聚合物組合物，其中所述的聚合物包含選自下列的合成聚合物或共聚物聚丙烯酸、聚乙烯亞胺、聚異丁烯酸、聚甲基丙烯酸酯、聚硅氧烷、聚二甲基硅氧烷、聚乳酸、聚(ε-己內(nèi)酯)、環(huán)氧樹脂、聚環(huán)氧乙烷、聚環(huán)氧丙烷、聚乙二醇、聚酰胺、聚亞乙烯-聚丙烯氰、聚亞乙烯-聚丙烯氰-聚異丁烯酸甲酯和聚苯乙烯-聚丙烯氰。54.根據(jù)權(quán)利要求53的靶向聚合物組合物，其中所述的聚合物包含聚亞乙烯-聚丙烯腈共聚物。55.根據(jù)權(quán)利要求33的靶向組合物，其中所述的氣體包含氟化氣體。56.根據(jù)權(quán)利要求55的靶向組合物，其中所述的氟化氣體選自全氟化碳、六氟化硫和七氟丙烷。57.根據(jù)權(quán)利要求56的靶向組合物，其中所述的氟化氣體包含全氟化碳。58.根據(jù)權(quán)利要求57的靶向組合物，其中所述的全氟化碳選自全氟甲烷、全氟乙烷、全氟丙烷和全氟環(huán)丁烷。59.根據(jù)權(quán)利要求33的靶向組合物，其中所述靶向配位體選自蛋白質(zhì)、肽、糖、類固醇、類固醇類似物、生物活性劑和遺傳物質(zhì)。60.根據(jù)權(quán)利要求59的靶向組合物，其中所述的靶向配位體選自蛋白質(zhì)、肽和糖。61.根據(jù)權(quán)利要求60的靶向組合物，其中所述的靶向配位體選自蛋白質(zhì)和肽。62.根據(jù)權(quán)利要求33的靶向組合物，其中所述的靶向配位體與類脂、蛋白質(zhì)或聚合物共價(jià)或非共價(jià)相連。63.根據(jù)權(quán)利要求62的靶向組合物，其中所述的靶向配位體與類脂、蛋白質(zhì)或聚合物共價(jià)相連。64.根據(jù)權(quán)利要求63的靶向組合物，其中所述的共價(jià)連接包括選自酰胺；硫代酰胺；醚；酯；硫代酯；-O-；-S-；-Sn-，其中n大于1；氨基甲酸酯；-NH-；-NR，其中R為含1至約4個碳原子的烷基；氨基甲酸乙酯和取代亞胺酸酯鍵的共價(jià)鍵。65.根據(jù)權(quán)利要求63的靶向組合物，其中所述的共價(jià)連接進(jìn)一步包含交聯(lián)。66.根據(jù)權(quán)利要求63的靶向組合物，其中所述的靶向配位體通過連接基團(tuán)與所述類脂、蛋白質(zhì)或聚合物共價(jià)連接。67.根據(jù)權(quán)利要求66的靶向組合物，其中所述的連接基團(tuán)包含親水聚合物。68.根據(jù)權(quán)利要求67的靶向組合物，其中所述的親水聚合物選自聚烯化氧、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、多磷雜環(huán)戊二烯、聚(羥基烷基羧酸)和聚噁唑烷。69.根據(jù)權(quán)利要求68的靶向組合物，其中所述的親水聚合物包含聚烯化氧。70.根據(jù)權(quán)利要求69的靶向組合物，其中所述的聚烯化氧選自聚乙二醇和聚丙二醇。71.根據(jù)權(quán)利要求70的靶向組合物，其中所述的聚烯化氧包含聚乙二醇。72.根據(jù)權(quán)利要求33的靶向組合物，該組合物含有泡囊。73.根據(jù)權(quán)利要求72的靶向組合物，其中所述的泡囊包含類脂泡囊。74.根據(jù)權(quán)利要求73的靶向組合物，其中所述的類脂泡囊選自膠束和脂質(zhì)體。75.一種泡囊組合物，該組合物在含水載體中包含含有與靶向配位體結(jié)合的類脂、聚合物或蛋白質(zhì)和氣體的泡囊，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。76.根據(jù)權(quán)利要求75的泡囊組合物，其中所述的泡囊包含類脂泡囊。77.根據(jù)權(quán)利要求76的泡囊組合物，其中所述的類脂泡囊選自膠束和脂質(zhì)體。78.根據(jù)權(quán)利要求76的泡囊組合物，其中所述的類脂進(jìn)一步包含聚合物。79.根據(jù)權(quán)利要求78的泡囊組合物，其中所述的聚合物含有親水聚合物。80.根據(jù)權(quán)利要求79的泡囊組合物，其中所述的聚合物含有聚乙二醇。81.根據(jù)權(quán)利要求75的泡囊組合物，其中所述的泡囊含有蛋白質(zhì)泡囊。82.根據(jù)權(quán)利要求75的泡囊組合物，其中所述的泡囊含有聚合物泡囊。83.根據(jù)權(quán)利要求75的泡囊組合物，所述泡囊組合物進(jìn)一步含有氣體前體。84.根據(jù)權(quán)利要求83的泡囊組合物，其中所述的氣體前體的沸點(diǎn)大于大約37℃。85.根據(jù)權(quán)利要求83的泡囊組合物，其中所述的氣體前體包含氟化物。86.根據(jù)權(quán)利要求85的泡囊組合物，其中所述的氟化物包含全氟化碳。87.根據(jù)權(quán)利要求86的泡囊組合物，其中所述的全氟化碳選自全氟戊烷和全氟己烷。88.根據(jù)權(quán)利要求75的泡囊組合物，其中所述的泡囊組合物進(jìn)一步含有生物活性劑。89.一種靶向泡囊組合物，該組合物包含與靶向配位體結(jié)合的氟化氣體，其中所述的靶向配位體靶向組織或受體。90.根據(jù)權(quán)利要求89的靶向泡囊組合物，其中所述的組織選自心肌組織、膜組織、層組織、間質(zhì)組織和腫瘤。91.根據(jù)權(quán)利要求90的靶向泡囊組合物，其中所述的膜組織選自內(nèi)皮和上皮。92.根據(jù)權(quán)利要求89的靶向泡囊組合物，其中所述的受體包含糖蛋白GPIIbIIIa受體。93.根據(jù)權(quán)利要求89的靶向泡囊組合物，其中所述的靶向配位體選自蛋白質(zhì)、肽、糖、類固醇、類固醇類似物、生物活性劑和遺傳物質(zhì)。94.根據(jù)權(quán)利要求93的靶向泡囊組合物，其中所述的靶向配位體選自蛋白質(zhì)、肽和糖。95.根據(jù)權(quán)利要求89的靶向泡囊組合物，其中所述的氟化氣體選自全氟化碳、六氟化硫和七氟丙烷。96.根據(jù)權(quán)利要求95的靶向泡囊組合物，其中所述的氟化氣體包含全氟化碳。97.根據(jù)權(quán)利要求96的靶向泡囊組合物，其中所述的全氟化碳選自全氟甲烷、全氟乙烷、全氟丙烷和全氟環(huán)丁烷。98.根據(jù)權(quán)利要求89的靶向泡囊組合物，其中所述的氣體至少有部分是由氣體前體衍生的。99.根據(jù)權(quán)利要求98的靶向泡囊組合物，其中所述的氣體前體的沸點(diǎn)大于約37℃。100.根據(jù)權(quán)利要求98的靶向泡囊組合物，其中所述的氣體前體包含氟化物。101.根據(jù)權(quán)利要求100的靶向泡囊組合物，其中所述的氟化物包含全氟化碳。102.根據(jù)權(quán)利要求101的靶向泡囊組合物，其中所述的全氟化碳選自全氟戊烷和全氟己烷。103.一種用于治療或診斷的制劑，該制劑包含與靶向配位體結(jié)合的生物活性劑、類脂、蛋白質(zhì)或聚合物及氣體，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。104.根據(jù)權(quán)利要求103的制劑，其中所述的制劑包含泡囊。105.根據(jù)權(quán)利要求104的制劑，其中所述的泡囊包含類脂泡囊。106.根據(jù)權(quán)利要求105的制劑，其中所述的泡囊選自膠束和脂質(zhì)體。107.根據(jù)權(quán)利要求103的制劑，其中所述的氣體至少有部分是由氣體前體衍生的。108.一種制備靶向組合物的方法，該方法包括將類脂、蛋白質(zhì)或聚合物、氣體和靶向配位體結(jié)合在一起，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。109.根據(jù)權(quán)利要求108的方法，其中所述的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物與所述的靶向配位體以共價(jià)或非共價(jià)方式結(jié)合在一起。110.根據(jù)權(quán)利要求109的方法，其中所述的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物與所述的靶向配位體以共價(jià)方式結(jié)合在一起。111.根據(jù)權(quán)利要求108的方法，其中所述的所述類脂、蛋白質(zhì)或聚合物與所述的靶向配位體以共價(jià)鍵方式結(jié)合在一起，所述共價(jià)鍵選自酰胺；硫代酰胺；醚；酯；硫代酯；-O-；-S-；-Sn-，其中n大于1；氨基甲酸酯；-NH-；-NR，其中R為含1至約4個碳原子的烷基；氨基甲酸乙酯和取代亞胺酸酯鍵。112.根據(jù)權(quán)利要求108的方法，其中所述的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物與所述的靶向配位體以共價(jià)交聯(lián)方式結(jié)合在一起。113.根據(jù)權(quán)利要求108的方法，其中所述的配位體與所述的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物通過連接基團(tuán)以共價(jià)方式結(jié)合。114.根據(jù)權(quán)利要求113的方法，其中所述的連接基團(tuán)包含親水聚合物。115.根據(jù)權(quán)利要求114的方法，其中所述的親水聚合物包含聚乙二醇。116.一種制備用于治療或診斷的制劑的方法，該方法包括將生物活性劑與含有與靶向配位體結(jié)合的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物及氣體的組合物結(jié)合，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。117.根據(jù)權(quán)利要求116的方法，其中所述的制劑包含泡囊。118.根據(jù)權(quán)利要求117的方法，其中所述的泡囊包含類脂泡囊。119.根據(jù)權(quán)利要求118的方法，其中所述的泡囊選自膠束和脂質(zhì)體。120.一種靶向組合物，該靶向組合物通過將類脂、蛋白質(zhì)或聚合物、氣體和靶向配位體結(jié)合在一起制得，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。121.根據(jù)權(quán)利要求120的靶向組合物，該靶向組合物包含泡囊。122.根據(jù)權(quán)利要求121的靶向組合物，其中所述的泡囊包含類脂泡囊。123.根據(jù)權(quán)利要求122的靶向組合物，其中所述的泡囊選自膠束和脂質(zhì)體。124.根據(jù)權(quán)利要求120的靶向組合物，該組合物靶向動脈硬化區(qū)域。125.根據(jù)權(quán)利要求124的靶向組合物，其中所述的動脈硬化包括動脈硬化斑。126.根據(jù)權(quán)利要求120的靶向組合物，該組合物靶向梗塞的心肌。127.一種用于治療或診斷的靶向制劑，該靶向制劑通過將生物活性劑與含有與靶向配位體結(jié)合的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物及氣體結(jié)合在一起制得，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。128.根據(jù)權(quán)利要求127的靶向制劑，該靶向制劑包含泡囊。129.根據(jù)權(quán)利要求128的靶向制劑，其中所述的泡囊包含類脂泡囊。130.根據(jù)權(quán)利要求129的靶向制劑，其中所述的泡囊選自膠束和脂質(zhì)體。131.一種提供患者內(nèi)部區(qū)域影像的方法，該方法包括(i)給患者服用靶向組合物，該組合物包含與靶向配位體結(jié)合的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物和氣體，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體，以及(ii)利用超聲掃描患者，得到可見的區(qū)域影像。132.一種提供患者內(nèi)部區(qū)域影像的方法，該方法包括(i)給患者服用泡囊組合物，該組合物在含水載體中包含含有與靶向配位體結(jié)合的類脂聚合物或蛋白質(zhì)和氣體的泡囊，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體，以及(ii)利用超聲掃描患者，得到可見的區(qū)域影像。133.一種診斷患者疾病組織存在的方法，該方法包括(i)給患者服用靶向組合物，該組合物在含水載體中包含與靶向配位體結(jié)合的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物和氣體，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體，以及(ii)利用超聲掃描患者、得到患者任何疾病組織的可見影像。134.一種診斷患者疾病組織存在的方法，該方法包括(i)給患者服用泡囊組合物，該組合物在含水載體中包含含有與靶向配位體結(jié)合的類脂、聚合物或蛋白質(zhì)和氣體的泡囊，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體，以及(ii)利用超聲掃描患者，得到患者任何疾病組織的可見影像。135.一種體內(nèi)治療性傳遞生物活性劑的方法，該方法包括給患者服用治療有效量的制劑，與生物活性劑結(jié)合的該制劑含有靶向組合物，該組合物含有與靶向配位體結(jié)合的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物和氣體，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。136.具有下式的化合物，其中各X1獨(dú)立地為-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-NR4-、-X4-C(＝X5)-、-C(＝X5)-X4-或-C(＝X5)-；各X2和X3獨(dú)立地為直接的鍵、-R5-X4-C(＝X5)-、-R5-C(＝X5)-X4、-X4-C(＝X5)-R5-、-C(＝X5)-X4-R5-、-X4-R5-C(＝X5)-X4-、-R5-X4-C(＝X5)-R5-C(＝X5)-X4-或-R5-C(＝X5)-X4-R5-X4-C(＝X5)-；各X4獨(dú)立地為-O-、-NR4-或-S-；各X5獨(dú)立地為O或S；M為-R5-X4-C(＝X5)-、-R5-C(＝X5)-X4-、-R5-X4-(YX5)P(＝X5)-X4-或-X4-(YX5)P(＝X5)-X4-R5-；Y為氫或可藥用抗衡離子；Z為親水聚合物；Q為靶向配位體或其前體；各R1獨(dú)立地為含1至約50碳的烷基；各R2獨(dú)立地為含1至約30碳的亞烷基；各R3和R4獨(dú)立地為氫或含1至約10碳的烷基；以及各R5獨(dú)立地為直接的鍵或含1至約30碳的亞烷基。137.根據(jù)權(quán)利要求136的化合物，其中各X1獨(dú)立地為-X4-C(＝X5)-、-C(＝X5)-X4-或-C(＝X5)-；各X2和X3獨(dú)立地為直接的鍵、-R5-X4-C(＝X5)-、-R5-C(＝X5)-X4-、-X4-C(＝X5)-R5-、-C(＝X5)-X4-R5-、-X4-R5-C(＝X5)-X4-或-R5-X4-C(＝X5)-R5-C(＝X5)-X4-；各X4獨(dú)立地為-O-和-NR4-；X5為O；以及M為-R5-X4-C(＝X5)-或-R5-X4-(YX5)P-(＝X5)-X4-。138.根據(jù)權(quán)利要求137的化合物，其中各X1獨(dú)立地為-X4-C(＝X5)-或-C(＝X5)-X4-。139.根據(jù)權(quán)利要求138的化合物，其中各X1獨(dú)立地為-C(＝X5)-X4-。140.根據(jù)權(quán)利要求139的化合物，其中各R1獨(dú)立地為大于1至約40個碳原子的烷基；各R2獨(dú)立地為1至約20個碳原子的亞烷基；各R3和R4為氫或1至約5個碳原子的烷基；以及各R5獨(dú)立地為直接的鍵或1至約20個碳原子的亞烷基。141.根據(jù)權(quán)利要求140的化合物，其中各R1獨(dú)立地為約5至約30個碳原子的烷基；各R2獨(dú)立地為1至約10個碳原子的亞烷基；各R3和R4為氫；以及各R5獨(dú)立地為直接的鍵或1至約10個碳原子的亞烷基。142.根據(jù)權(quán)利要求141的化合物，其中各R1獨(dú)立地為約10至約20個碳原子的烷基；各R2獨(dú)立地為1至約5個碳原子的亞烷基以及各R5獨(dú)立地為直接的鍵或1至約5個碳原子的亞烷基。143.根據(jù)權(quán)利要求142的化合物，其中各R1獨(dú)立地為約15個碳原子的烷基；各R2為-CH2-；以及各R5為直接的鍵或-(CH2)x-，其中x為1或2。144.根據(jù)權(quán)利要求143的化合物，其中Z選自聚烯化氧、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚噻吩嗪、聚(羥基烷基羧酸)和聚噁唑烷。145.根據(jù)權(quán)利要求144的化合物，其中Z包括聚烯化氧。146.根據(jù)權(quán)利要求145的化合物，其中所述聚烯化氧選自聚乙二醇和聚丙二醇。147.根據(jù)權(quán)利要求146的化合物，其中所述聚烯化氧選自聚乙二醇。148.根據(jù)權(quán)利要求146的化合物，其中X1為-C(＝O)-O-。149.根據(jù)權(quán)利要求148的化合物，其中X2為-CH2CH2-C(＝O)-NH-或-CH2CH2NH-C(＝O)-CH2CH2-C(＝O)-NH-。150.根據(jù)權(quán)利要求149的化合物，其中Q包含靶向配位體。151.根據(jù)權(quán)利要求150的化合物，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。152.根據(jù)權(quán)利要求150的化合物，其中所述的靶向配位體選的自蛋白質(zhì)、肽、糖、類固醇、類固醇類似物、生物活性劑和遺傳物質(zhì)。153.根據(jù)權(quán)利要求152的化合物，其中所述的靶向配位體選自蛋白質(zhì)、肽和糖。154.根據(jù)權(quán)利要求153的化合物，其中X2為-CH2CH2-C(＝O)-NH。155.根據(jù)權(quán)利要求153的化合物，其中M為-CH2O-C(＝O)-。156.根據(jù)權(quán)利要求155的化合物，其中X3為-C(＝O)-NH-。157.根據(jù)權(quán)利要求156的化合物，其中Q包含肽。158.根據(jù)權(quán)利要求157的化合物，其中Q包含-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val。159.根據(jù)權(quán)利要求156的化合物，其中Q包含蛋白質(zhì)。160.根據(jù)權(quán)利要求159的化合物，其中Q包含蛋白質(zhì)A。161.根據(jù)權(quán)利要求155的化合物，其中X3為-NH-C(＝O)-CH2或-NH-C(＝O)-CH2CH2-。162.根據(jù)權(quán)利要求161的化合物，其中Q包含蛋白質(zhì)。163.根據(jù)權(quán)利要求162的化合物，其中Q包含蛋白質(zhì)A。164.根據(jù)權(quán)利要求161的化合物，其中Q包含環(huán)肽。165.根據(jù)權(quán)利要求155的化合物，其中X3為直接的鍵或-NHCH2-C(＝O)-NH-。166.根據(jù)權(quán)利要求165的化合物，其中Q包含糖。167.根據(jù)權(quán)利要求166的化合物，其中Q包含單糖。168.根據(jù)權(quán)利要求167的化合物，其中X3為直接的鍵。169.根據(jù)權(quán)利要求168的化合物，其中Q包含葡萄糖。170.根據(jù)權(quán)利要求167的化合物，其中X3為-NHCH2-C(＝O)-NH-。171.根據(jù)權(quán)利要求170的化合物，其中Q包含甘露糖。172.根據(jù)權(quán)利要求153的化合物，其中M為-CH2O-(HO)P(＝O)-O-。173.根據(jù)權(quán)利要求172的化合物，其中X3為-C(＝O)-NH-。174.根據(jù)權(quán)利要求173的化合物，其中Q包含肽。175.根據(jù)權(quán)利要求174的化合物，其中Q包含-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val。176.根據(jù)權(quán)利要求173的化合物，其中Q包含蛋白質(zhì)。177.根據(jù)權(quán)利要求176的化合物，其中Q包含蛋白質(zhì)A。178.根據(jù)權(quán)利要求153的化合物，其中X2為-CH2CH2NH-C(＝O)-CH2CH2-C(＝O)-NH-。179.根據(jù)權(quán)利要求178的化合物，其中M為-CH2O-(HO)P(＝O)-O-。180.根據(jù)權(quán)利要求179的化合物，其中X3為-NH-C(＝O)-CH2CH2-。181.根據(jù)權(quán)利要求180的化合物，其中Q包含蛋白質(zhì)。182.根據(jù)權(quán)利要求181的化合物，其中Q包含蛋白質(zhì)A。183.根據(jù)權(quán)利要求148的化合物，其中Q包含與靶向配位體結(jié)合的氣體前體。184.根據(jù)權(quán)利要求183的化合物，其中Q包含含有1或2個N、O或S原子的部分不飽和或芳族5至7元單環(huán)。185.根據(jù)權(quán)利要求184的化合物，其中Q為選自順丁烯二酰亞胺部分和吡啶基部分。186.根據(jù)權(quán)利要求185的化合物，其中X3為-NH-C(＝O)-。187.根據(jù)權(quán)利要求186的化合物，其中X2為-CH2CH2-C(＝O)-NH-。188.根據(jù)權(quán)利要求187的化合物，其中M為-CH2O-C(＝O)-。189.根據(jù)權(quán)利要求187的化合物，其中M包含順丁烯二酰亞胺部分。190.根據(jù)權(quán)利要求186的化合物，其中M為-CH2O-(HO)P(＝O)-O-。191.根據(jù)權(quán)利要求190的化合物，其中X2為-CH2CH2NH-C(＝O)-CH2CH2-C(＝O)-NH-。192.根據(jù)權(quán)利要求191的化合物，其中Q包含順丁烯二酰亞胺部分。。193.根據(jù)權(quán)利要求185的化合物，其中X3為-NH-C(＝O)-CH2CH2-。194.根據(jù)權(quán)利要求193的化合物，其中M為-CH2O-C(＝O)-。195.根據(jù)權(quán)利要求194的化合物，其中X2為-CH2CH2-C(＝O)-NH-。196.根據(jù)權(quán)利要求195的化合物，其中Q包含吡啶基部分。197.根據(jù)權(quán)利要求193的化合物，其中M為-CH2O-(HO)P(＝O)-O-。198.根據(jù)權(quán)利要求197的化合物，其中X2為-CH2CH2NH-C(＝O)-CH2CH2-C(＝O)-NH-。199.根據(jù)權(quán)利要求198的化合物，其中Q包含吡啶基部分。200.具有下式的化合物L(fēng)-P-T其中L為類脂、蛋白質(zhì)或聚合物；P為親水聚合物；和T為靶向配位體。201.根據(jù)權(quán)利要求200的化合物，其中L為類脂。202.根據(jù)權(quán)利要求201的化合物，其中所述的類脂選自卵磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、心磷脂、膽固醇、膽固醇胺、溶血磷脂、赤型-鞘氨醇、鞘磷脂、神經(jīng)酰胺、腦苷脂類、飽和的磷脂、不飽和的磷脂和磷蝦磷脂。203.根據(jù)權(quán)利要求202的化合物，其中所述的類脂選自卵磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰肌醇。204.根據(jù)權(quán)利要求201的化合物，其中所述的類脂選自1，2-二?；?sn-甘油基-3-膽堿磷酸、1，2-二?；?sn-甘油基-3-二氧磷基乙醇胺、1，2-二?；?sn-甘油基-3-〔二氧磷基-rac-(1-甘油)〕、1，2-二?；?sn-甘油基-3-磷酸酯、1，2-二?；?sn-甘油基-3-〔磷酸絲氨酸〕、溶血磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰甘油、1，2-二?；?sn-甘油、1，2-二?；?亞乙基-甘油基、N-(正己酰胺)-1，2-二酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、N-十二烷?；?1，2-二?；?sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、N-琥珀酰-1，2-二?；?sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、N-戊二?；?1，2-二?；?sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺和N-十二烷?；?1，2-二?；?sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺。205.根據(jù)權(quán)利要求204的化合物，其中所述的類脂選自1，2-二酰基-sn-甘油基-3-膽堿磷酸、1，2-二?；?sn-甘油基-3-〔二氧磷基-rac-(1-甘油)〕、1，2-二?；?sn-甘油基-3-磷酸酯、1，2-二?；?sn-甘油基-3-〔磷酸絲氨酸〕、溶血磷脂酰膽堿、溶血磷脂酰甘油和1，2-二?；?sn-甘油。206.根據(jù)權(quán)利要求200的化合物，其中L為蛋白質(zhì)。207.根據(jù)權(quán)利要求206的化合物，其中所述的蛋白質(zhì)為白蛋白。208.根據(jù)權(quán)利要求207的化合物，其中L為聚合物。209.根據(jù)權(quán)利要求208的化合物，其中所述的聚合物包含合成聚合物或由單體制得的共聚物，所述單體選自丙烯酸、異丁烯酸、哌嗪、丁烯酸、丙烯酰胺、丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸2-羥基乙酯、乳酸、乙醇酸、ε-己內(nèi)酯、丙烯醛、氰基丙烯酸酯、雙酚A、表氯醇、羥基烷基丙烯酸酯、硅氧烷、二甲基硅氧烷、環(huán)氧乙烷、環(huán)氧丙烷、乙二醇、羥基烷基異丁烯酸酯、N-取代的丙烯酰胺、N-取代的異丁烯酰胺、N-乙烯基-2-吡咯烷酮、2，4-戊二-1-醇、乙烯基乙酸酯、丙烯氰、苯乙烯、對-氨基苯乙烯、對-氨基-芐基-苯乙烯、苯乙烯磺酸鈉、2-硫氧基乙基異丁烯酸鈉、乙烯基吡啶、異丁烯酸氨基乙酯和2-異丁烯酰氧基三甲基-氯化銨。210.根據(jù)權(quán)利要求208的化合物，其中所述的聚合物包含選自下列的合成聚合物或共聚物聚丙烯酸、聚乙烯亞胺、聚異丁烯酸、聚甲基丙烯酸酯、聚硅氧烷、聚二甲基硅氧烷、聚乳酸、聚(ε-己內(nèi)酯)、環(huán)氧樹脂、聚環(huán)氧乙烷、聚環(huán)氧丙烷、聚乙二醇、聚酰胺、聚亞乙烯-聚丙烯氰、聚亞乙烯-聚丙烯氰-聚異丁烯酸甲酯和聚苯乙烯-聚丙烯氰。211.根據(jù)權(quán)利要求210的化合物，其中所述的聚合物包含聚亞乙烯-聚丙烯腈共聚物。212.根據(jù)權(quán)利要求200的化合物，其中所述的親水聚合物選自聚烯化氧、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、多磷雜環(huán)戊二烯、聚(羥基烷基羧酸)和聚噁唑烷。213.根據(jù)權(quán)利要求212的化合物，其中所述的親水聚合物包含聚烯化氧。214.根據(jù)權(quán)利要求213的化合物，其中所述的聚烯化氧選自聚乙二醇和聚丙二醇。215.根據(jù)權(quán)利要求214的化合物，其中所述的聚烯化氧包含聚乙二醇。216.根據(jù)權(quán)利要求200的化合物，其中所述的靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的細(xì)胞或受體。217.根據(jù)權(quán)利要求200的化合物，其中所述的靶向配位體選自蛋白質(zhì)、肽、糖、類固醇、類固醇類似物、生物活性劑和遺傳物質(zhì)。218.根據(jù)權(quán)利要求217的化合物，其中所述的靶向配位體選自蛋白質(zhì)、肽和糖。219.根據(jù)權(quán)利要求217的化合物，其中所述的靶向配位體靶向動脈硬化區(qū)域。220.根據(jù)權(quán)利要求219的化合物，其中所述的動脈硬化包括動脈硬化斑。221.根據(jù)權(quán)利要求217的化合物，其中所述的靶向配位體靶向梗塞的心肌。222.根據(jù)權(quán)利要求217的化合物，其中所述的靶向配位體靶向癌細(xì)胞。全文摘要本發(fā)明涉及新的用于診斷和治療的靶向組合物。該組合物含有與靶向配位體結(jié)合的類脂、蛋白質(zhì)或聚合物及氣體。所述靶向配位體靶向選自心肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和糖蛋白GPIIbIIIa受體的組織、細(xì)胞或受體。造影介質(zhì)可與診斷成像如超聲波以及治療應(yīng)用如治療性超聲波結(jié)合使用。文檔編號A61K49/22GK1187137SQ96194499公開日1998年7月8日申請日期1996年6月6日優(yōu)先權(quán)日1995年6月7日發(fā)明者埃文·C·翁格爾,沈德康,吳觀麗申請人:ImaRx藥物公司