專(zhuān)利名稱(chēng)：用作抗血小板聚集抑制劑和血管舒張劑的脒衍生物的制作方法
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及具有供給一氧化氮性質(zhì)的新的脒衍生物及其藥物組合物或制劑，以及它們的治療應(yīng)用，尤其是用來(lái)作為血小板聚集、血小板粘連和再狹窄的抑制劑，抗動(dòng)脈粥樣化劑，和用于治療用途的血管舒張劑，包括對(duì)不穩(wěn)定心絞痛，中風(fēng)，心肌梗塞，心肌局部缺血和再灌注損傷，內(nèi)臟局部缺血和再灌注損傷，動(dòng)脈粥樣硬化，充血性心衰，心律失常，血栓形成，高血壓，肺病，轉(zhuǎn)移和骨質(zhì)疏松的治療。相關(guān)技術(shù)纖維蛋白原是作為血漿正常成分存在的糖蛋白。在血液凝固的機(jī)制中，它參與了血小板的聚集和纖維蛋白的形成。
血小板是存在于全血中的細(xì)胞單元，它也參與了血液凝固。與血小板結(jié)合的纖維蛋白原在血液凝固機(jī)制中對(duì)正常的血小板功能至關(guān)重要。一旦血管受到損傷，與纖維蛋白原結(jié)合的血小板立即開(kāi)始聚集并形成血栓。纖維蛋白原與血小板的作用是通過(guò)稱(chēng)作GP IIb/IIIa的膜糖蛋白復(fù)合物進(jìn)行的；這是血小板功能一個(gè)重要特征。該作用的抑制劑對(duì)調(diào)節(jié)血小板的血栓形成有作用。
還已知道，叫做纖連蛋白的另一種大的糖蛋白是主要的胞外基質(zhì)蛋白，它與血小板相互作用。已發(fā)現(xiàn)各種較大的多肽片斷在纖連蛋白的細(xì)胞結(jié)合區(qū)域具有細(xì)胞附著活性。參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利4,517,686；4,589,881和4,661,111。同一分子中某些較小的肽片斷，發(fā)現(xiàn)當(dāng)它固定到底物上時(shí)，增強(qiáng)了細(xì)胞對(duì)底物的附著，當(dāng)它溶解或以懸浮狀態(tài)存在時(shí)，則抑制附著作用。參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利4,578,079和4,614,517。
美國(guó)專(zhuān)利4,683,291中公開(kāi)了所設(shè)計(jì)的對(duì)血小板功能有抑制作用的合成肽，它是纖維蛋白原與血小板結(jié)合的高親合性拮抗劑。美國(guó)專(zhuān)利4,857,508公開(kāi)了具有血小板聚集抑制劑作用的四肽化合物。
其它的合成肽和它們作為纖維蛋白原與血小板結(jié)合的抑制劑的應(yīng)用公開(kāi)于Kozcewiak等《生物化學(xué)》(Biochem.)23，1767-1774(1984)；Plow等《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sci.)，82，8057-8061(1985)；Ruggeri等《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sci.)，83，5708-5712(1986)；Ginsberg等，《生物化學(xué)雜志》(J.Biol.Chem.)260(7)，3931-3936(1985)；Haverstick等，《血液》(Blood)66(4)，946-952(1985)；和Ruoslahti和Piersbacher《科學(xué)》(Science)238，491-497(1987)。在歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)275,748和298,820中公開(kāi)了其它這種抑制性肽。
歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)512,831公開(kāi)了哌啶烷基-氮雜環(huán)烷酮，它抑制纖維蛋白原與血小板的結(jié)合，因而可用于抑制血小板的聚集。歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)503,548公開(kāi)了環(huán)脲衍生物(脒唑啉酮和三唑酮)，它們可用于抑制細(xì)胞間的作用，從而用于治療或預(yù)防血栓，栓塞和轉(zhuǎn)移。歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)496,378公開(kāi)了脒基二苯基化合物，它抑制細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-基質(zhì)間的作用，因此用于治療血栓，腦血管疾病，肺栓塞，心肌梗塞，動(dòng)脈粥樣硬化，骨質(zhì)疏松和腫瘤轉(zhuǎn)移。
歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)445,796公開(kāi)了對(duì)粘連蛋白與血小板結(jié)合及血小板的聚集和細(xì)胞粘連有抑制作用的醋酸衍生物。歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)372,486公開(kāi)了N-?；?氨基酸衍生物和它們的鹽。該公開(kāi)的化合物在治療血栓，中風(fēng)，心肌梗塞，炎癥和動(dòng)脈粥樣硬化中用于抑制血小板的聚集，并抑制轉(zhuǎn)移。歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)381,033公開(kāi)了脒基或胍基芳基取代的鏈烷酸衍生物用于治療血栓卒中，心肌梗塞，炎癥，動(dòng)脈粥樣硬化和腫瘤。
國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)WO 95/06038和WO 94/22820公開(kāi)了苯基脒衍生物用作血小板聚集的抑制劑。美國(guó)專(zhuān)利5,220,050，5,239,113，5,254,573，5,272,162，5,378,727，5,314,902，5,344,957，5,344,837和5,354,738公開(kāi)了新的血小板聚集抑制劑。
自80年代初就已知道由乙酰膽堿導(dǎo)致的血管的松弛作用依賴(lài)于內(nèi)皮并將該活性歸因于稱(chēng)作內(nèi)皮細(xì)胞舒血管因子(EDRF)的不穩(wěn)定體液因子。作為血管舒張藥物一氧化氮(NO)的活性為人們熟知已遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)100年，而且NO是亞硝酸戊酯，三硝酸甘油酯和其它硝基血管擴(kuò)張藥物的活性成分。近來(lái)對(duì)EDRF的鑒定如同NO一樣與生物化學(xué)路徑的發(fā)現(xiàn)一致，通過(guò)該途徑在NO合成酶的作用下由L-精氨酸中合成出NO。通過(guò)組成酶進(jìn)行的NO的釋放起著一種轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的作用，構(gòu)成了幾種生理響應(yīng)的基礎(chǔ)。由誘導(dǎo)酶產(chǎn)生的NO是腫瘤細(xì)胞和侵入的微生物的細(xì)胞毒素分子。
NO是可溶性的鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶的內(nèi)源刺激質(zhì)，除了依賴(lài)于內(nèi)皮的松馳作用包括吞噬細(xì)胞的細(xì)胞毒性和中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的細(xì)胞間通訊外，還有許多生物作用(參見(jiàn)Moncada等《生化藥理學(xué)》(BiochemicalPharmacology)38，1709-1715(1989)和Moncada等《藥理學(xué)評(píng)論》(Pharmacological RevieWS)43，109-142(1991))。另外，在動(dòng)物模型中，NO已顯示出具有抗血栓形成的作用(參見(jiàn)Radomski等《英國(guó)藥理學(xué)雜志》(British Journal of Pharmacology)92，639-646(1987)，Moncada等《心血管藥理學(xué)雜志》(Journal ofCardiovascular Pharmacology)17，S25(1991)，Yao等《循環(huán)》(Circulation)86，1302-1309(1992)，Byrne等，世界專(zhuān)利申請(qǐng)WO 9403421-A2和Schonafinger等，德國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)DE 4223800-A1)，支氣管松馳作用(Persson等《歐洲藥理學(xué)雜志》(European Journalof Pharmacology)249，R7-R8(1993)，消炎作用，殺微生物作用(Alspaugh和Granger《感染和免疫》(Infection and Immunity)59，2291-2296(1991)和胃保護(hù)作用(參見(jiàn)Wallace等《歐洲藥理學(xué)雜志》，(European Journal of Pharmacology)257，249-255(1994)。此外，已經(jīng)指出，在骨質(zhì)疏松的體外模型中一氧化氮對(duì)骨損失具有療效(MacIntyre等《美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)88，2936-2940(1991) 。
因此，這些性質(zhì)使得一氧化氮在前述的各種疾病的治療中通過(guò)增加生物作用和減少副作用成為增強(qiáng)血小板聚集抑制劑作用的理想試劑。本發(fā)明涉及新的血小板聚集抑制劑的硝酸酯和亞硝酸酯，它們的制備方法，含有它們的藥物組合物及它們的使用方法。發(fā)明概述按照本發(fā)明提供了新的脒衍生物。這些新的抑制劑化合物或其藥學(xué)上適用的鹽可用下面的化學(xué)式(I)代表
其中；A獨(dú)立地選自下組基團(tuán)
其中虛線(xiàn)代表單鍵或雙鍵并且B選自羰基或亞氨基羰基基團(tuán)；W選自氫，低級(jí)烷基，低級(jí)鏈烯基，低級(jí)炔基，脂環(huán)烴基和芳香烴基，其中所說(shuō)的所有取代基均可任意用羥基，低級(jí)烷基，低級(jí)烷氧基，鹵素，硝基，氨基，酰氧基，以及可用鹵素、硝基、低級(jí)烷氧基和低級(jí)烷基任意取代的苯基和萘基所取代；Z，Z′獨(dú)立地選自氫，鹵素，氰基，磺酰基，羥基，低級(jí)烷氧基，和低級(jí)烷基；X是低級(jí)烷基，低級(jí)鏈烯基，低級(jí)炔基，羰基，脂環(huán)或雜環(huán)基；Y是硝酸酯基(ONO2)，亞硝酸酯基(ONO)，或一氧化氮供給化合物，優(yōu)選為2-氧化呋咱衍生物或有機(jī)硝酸酯/亞硝酸酯化合物，例如S-亞硝基半胱氨酸，S-亞硝基青霉胺和下式
其中R是氧或亞氨基；n為1到約4的整數(shù)。本發(fā)明進(jìn)一步涉及包括式(I)化合物的藥物組合物。該化合物和組合物具有作為血小板聚集、血小板粘連和再狹窄抑制劑的用途，具有抗動(dòng)脈粥樣化劑，和有治療作用的血管舒張劑的用途，包括對(duì)不穩(wěn)定心絞痛，中風(fēng)，心肌梗塞，心肌局部缺血和再灌注損傷，內(nèi)臟局部缺血和再灌注損傷，動(dòng)脈粥樣硬化，充血性心衰，局部缺血性心律失常，血栓形成，高血壓，肺病，轉(zhuǎn)移和骨質(zhì)疏松癥的治療。本發(fā)明還涉及一種在需要這種治療的哺乳動(dòng)物內(nèi)抑制血小板聚集和血小板粘連，預(yù)防再狹窄，預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化和促進(jìn)血管舒張作用的方法。發(fā)明詳述本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案是式I化合物或其藥學(xué)上適用的鹽；
其中；A選自下列基團(tuán)；
其中的虛線(xiàn)指單鍵或雙鍵；B選自羰基或亞氨基羰基；W選自氫，1到約6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基，2到約6個(gè)碳原子的低級(jí)鏈烯基，3到約6個(gè)碳原子的脂環(huán)烴基，和6到約12個(gè)碳原子的芳香烴基，其中所說(shuō)的所有基團(tuán)均可用羥基，低級(jí)烷氧基，低級(jí)烷基，鹵素，硝基，氨基，和酰氧基任意取代；Z，Z′獨(dú)立地選自氫，鹵素，氰基，磺酰基，羥基，低級(jí)烷基和低級(jí)烷氧基；X是低級(jí)烷基，低級(jí)鏈烯基，低級(jí)炔基，羰基，脂環(huán)或雜環(huán)基；Y是硝酸酯基(ONO2)，亞硝酸酯基(ONO)，或一氧化氮供給基團(tuán)，優(yōu)選為2-氧化呋咱衍生物或有機(jī)硝酸酯亞硝酸酯(ONO)化合物，如S-亞硝基半胱氨酸，S-亞硝基青霉胺和下式基團(tuán)，
其中R是氧或亞氨基；n是1到約4的整數(shù)。本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方案是式I化合物或其藥學(xué)上適用的鹽；
其中A選自下列基團(tuán)，
其中虛線(xiàn)是指單鍵或雙鍵；B選自羰基或亞氨基羰基；W選自氫，1到約6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基，3到約6個(gè)碳原子的脂環(huán)烴基，和6到約12個(gè)碳原子的芳香烴基，其中所述的所有基團(tuán)均可任選用羥基，低級(jí)烷氧基，低級(jí)烷基，鹵素，硝基，氨基，和酰氧基取代；Z，Z′獨(dú)立地選自氫，鹵素，烷氧基，和低級(jí)烷基；X是低級(jí)烷基，羰基或脂環(huán)基；Y是硝酸酯基(ONO2)或一氧化氮供給基團(tuán)，優(yōu)選為2-氧化呋咱衍生物或有機(jī)硝酸酯化合物如下式
其中R是氧或亞氨基；n是1到約3的整數(shù)。
本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方案是式I化合物或其藥學(xué)上適用的鹽
其中A是
其中虛線(xiàn)代表單鍵或雙鍵；B選自羰基或亞氨基羰基；W選自氫，甲基，乙基，丙基，環(huán)己基；Z，Z′獨(dú)立地選自氫和羥基；X是羰基或脂環(huán)基；Y是硝酸酯基(ONO2)或一氧化氮供給基，優(yōu)選2-氧化呋咱衍生物或有機(jī)硝酸酯化合物如下
其中R是氧或亞氨基；n是1到約3整數(shù)。本發(fā)明的又一優(yōu)選實(shí)施方案是式I化合物或其藥學(xué)上適用的鹽
其中A是下式基團(tuán)
其中的虛線(xiàn)代表單鍵或雙鍵；B是羰基；W選自氫，乙基和環(huán)己基；Z，Z′是氫；X是羰基；Y是一氧化氮供給基團(tuán)，優(yōu)選是有機(jī)硝酸酯化合物如
其中R是氧；n是1到約2的整數(shù)。
雖然如上述所定義的制劑或化合物可以其未處理的化學(xué)制品形式給藥，但優(yōu)選是以藥物制劑的形式給藥。按另一方面，本發(fā)明提供了一種藥物制劑，它包括如上定義的一種制劑或化合物或藥學(xué)上適用的鹽或其溶劑合物，以及一種或多種藥學(xué)上適用載體和任選的一種或多種其它治療成分。在和其它制劑成分可配伍并對(duì)其接受者無(wú)害的意義上該載體必須是“可接受”的。
制劑中包括適合口服，非腸胃外的(包括皮下，真皮內(nèi)，肌內(nèi)，靜脈內(nèi)和關(guān)節(jié)內(nèi))，直腸和局部(包括經(jīng)皮，經(jīng)頰，舌下和眼內(nèi))給藥的各種形式制劑，但最合適的給藥途徑取決于接受者的狀況和疾病。該制劑可方便地制成單位劑型，并可用藥學(xué)領(lǐng)域熟知的方法制備。所有的方法都包括將上述所定義的制劑或化合物或其藥學(xué)上適用的鹽或溶劑合物(“活性成分”)與構(gòu)成一種或多種輔助成分的載體進(jìn)行組合的步驟。一般地，通過(guò)均勻和充分地將活性成分與液體載體或細(xì)碎的固體載體或這兩種載體進(jìn)行組合制備該制劑，如果必要將產(chǎn)品制成所需劑型。
適合于口服給藥的本發(fā)明制劑可制成分離的單位如每一單位含有預(yù)定量活性成分的膠囊劑，扁囊劑或片劑；粉劑或顆粒劑；水或非水的溶液或懸浮液；或水包油型的乳狀液或油包水型的乳狀液。該活性成分也可制成濃縮藥團(tuán)、藥糖劑或糊劑。
任選用一種或多種輔助成分，經(jīng)壓制或模壓可制備片劑。壓制片可在適合的機(jī)器上壓制任選與粘合劑，潤(rùn)滑劑，惰性稀釋劑，表面活性劑或分散劑混合的自由流動(dòng)式的(如粉末或顆粒)活性成分制備。模壓片可通過(guò)在合適的機(jī)器上模制用惰性液體稀釋劑濕潤(rùn)的粉狀化合物的混合物制備。該片劑可任選包衣或刻痕并可制成活性成分的緩釋或控釋片。
非腸胃外的給藥的制劑包括水和非水的滅菌注射液，其中可以含有抗氧劑，緩沖劑，抑菌劑和使制劑與接受者血液等滲的溶質(zhì)；還包括水和非水的滅菌的懸浮液，其中可以含有懸浮劑和增稠劑。該制劑可裝在單劑量或多劑量的容器中，如密封于安瓿和小玻璃瓶中，也可在冷凍干燥條件下貯存，使用前只需加入無(wú)菌的液體載體，例如，生理鹽水，注射用水。臨時(shí)的注射液和懸浮液可從上述的這種無(wú)菌粉劑，粒劑和片劑制備。
直腸給藥的制劑可用通常使用的載體如可可脂或聚乙二醇制成栓劑。
口腔中局部給藥(例如通過(guò)頰或舌下給藥)的制劑包括在矯味基料如蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠中含有活性成分的錠劑，和在如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠等基料中含有活性成分的軟錠劑。
優(yōu)選的單位劑型是如下列舉的含有效劑量或其適當(dāng)分?jǐn)?shù)的有效成分的制劑。
理應(yīng)理解，除了上面具體提到的有效成分外，本發(fā)明制劑可從包括在本技術(shù)領(lǐng)域?qū)τ谒紤]的劑型常用的其它試劑，例如適合口服給藥的劑型中可包括矯味劑。
本發(fā)明化合物可按每天0.1-500mg/kg劑量口服或注射給藥。成人的劑量一般為5mg-5g/天。片劑或其它以分離單位存在的劑型中宜含有有效劑量或其倍數(shù)為有效劑量的本發(fā)明化合物，例如，單位制劑含2.5mg-500mg的化合物，通常約含5mg-200mg。
式(I)化合物優(yōu)選通過(guò)口服或注射(靜脈內(nèi)或皮下)給藥。給病人施用的化合物的準(zhǔn)確劑量將由出診醫(yī)生負(fù)責(zé)。然而，所使用的劑量取決于許多因素，包括病人的年齡和性別，所治療的確切病癥和它的嚴(yán)重程度。給藥途徑也依賴(lài)于病情和程度而改變。
在此使用的術(shù)語(yǔ)“低級(jí)烷基”(獨(dú)立或結(jié)合形式)指無(wú)環(huán)烷基，它含有1-約10個(gè)、優(yōu)選1-約8個(gè)碳原子，更優(yōu)選1-約6個(gè)碳原子。這類(lèi)基團(tuán)的實(shí)例包括甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，異戊基，己基，辛基等。
術(shù)語(yǔ)“低級(jí)鏈烯基”指至少含有1個(gè)雙鍵的不飽和的無(wú)環(huán)烴基。該基團(tuán)含約2-約10個(gè)碳原子，優(yōu)選約2-約8個(gè)碳原子而更優(yōu)選2-約6個(gè)碳原子。適合的鏈烯基的實(shí)例包括丙烯基，丁烯-1-基，異丁烯基，戊烯-1-基，2-2-甲基丁烯-1-基，3-甲基丁烯-1-基，己烯-1-基，庚烯-1-基和辛烯-1-基等。
術(shù)語(yǔ)“低級(jí)炔基”指至少含一個(gè)或多個(gè)三鍵的不飽和無(wú)環(huán)烴基，這類(lèi)基團(tuán)含約2-約10個(gè)碳原子，優(yōu)選含約2-約8個(gè)碳原子，更優(yōu)選含2-約6個(gè)碳原子。合適的炔基的實(shí)例包括乙炔基，丙炔基，丁炔-1-基，丁炔-2-基，戊炔-1-基，戊炔-2-基，3-甲基丁炔-1-基，己炔-1-基，己炔-2-基，己炔-3-基，3，3-二甲基-丁炔-1-基等。
術(shù)語(yǔ)“低級(jí)烷氧基”(單獨(dú)或結(jié)合形式)指烷基醚基，其中術(shù)語(yǔ)烷基定義如上且最好含有1到約4個(gè)碳原子。適合的烷基醚基的實(shí)例包括甲氧基，乙氧基，正丙氧基，異丙氧基，正丁氧基，異丁氧基，仲丁氧基，叔丁氧基等。
術(shù)語(yǔ)“脂環(huán)的”或“環(huán)烷基”指3到約10個(gè)碳原子的環(huán)狀脂族基，優(yōu)選為3到約6個(gè)碳原子。合適的脂環(huán)基的實(shí)例包括環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基，環(huán)己烯基等。
術(shù)語(yǔ)“芳香烴”指4到約16個(gè)碳原子的芳香基，優(yōu)選6到約12個(gè)碳原子，更優(yōu)選6到約10個(gè)碳原子。合適的芳烴基的實(shí)例包括苯基，萘基等。
術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”指有4到約10個(gè)碳原子，優(yōu)選約5-約6個(gè)碳原子的飽和或不飽和的環(huán)狀烴基，包括芳香系烴基；其中1到約4個(gè)碳原子由氮、氧或硫所代替。該“雜環(huán)基”可稠合到芳香烴基上。合適的實(shí)例包括吡咯基，吡啶基，吡唑基，三唑基，嘧啶基，噠嗪基，噁唑基，異噁唑基，噻唑基，咪唑基，吲哚基，噻吩基，呋喃基，四唑基，2-吡咯啉基，3-吡咯啉基，吡咯烷基，1，3-二氧戊烷，2-咪唑啉基，咪唑烷基，2-吡唑啉基，吡唑烷基，異噁唑基，異噻唑基，噁二唑基，三唑基，噻二唑基，2H-吡喃基，4H-吡喃基，哌啶基，1，4-二噁烷基，嗎啉基，1，4-二噻烷基，硫代嗎啉基，吡嗪基，哌嗪基，三嗪基，1，3，5-三噻烷基，苯并噻吩基，苯并咪唑基，喹啉基等。
術(shù)語(yǔ)“鹵素”指氟，氯，溴或碘。
術(shù)語(yǔ)“前藥”指在體內(nèi)會(huì)變得更有效的化合物。
在這里所用的涉及病人的“治療”其意也包括預(yù)防。
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用來(lái)實(shí)施本發(fā)明的起始物是可從市場(chǎng)如西格馬(Sigma)公司買(mǎi)到的。
本發(fā)明化合物的兩個(gè)通用合成流程概括在下面。
流程I
流程II
為制備在此公開(kāi)的本發(fā)明化合物而在起始物的選擇和工藝條件方面進(jìn)行改動(dòng)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。
由下述的實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例1
將N-9-芴基甲氧羰基-天冬氨酸(OtBu)-OH(Fmoc-Asp(OtBu)-OH)(5.0g；10毫摩爾)，單硝酸異山梨醇酯(2.0g；10毫摩爾)和4-二甲基氨基吡啶(DMAP，100mg)溶于二氯甲烷(150ml)中。在攪拌下向該溶液加入N，N′-二環(huán)己基碳二亞胺(DCC，2.3g；12毫摩爾)。室溫下將該混合物攪拌一個(gè)周末。取小份樣品送檢質(zhì)譜，結(jié)果表明有所需的中間體(FAB-MS(M+Li)+＝591)的存在。經(jīng)過(guò)濾除去固體脲并用二乙胺(DEA，40ml)處理濾液1小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸去溶劑后不需任何純化直接使用殘留物。FAB-MS(M+Li)+＝369。實(shí)施例2
按照實(shí)施例1所述方法從Fmoc-Asp(OtBu)-OH和2-氨基-1，43，6-二脫水山梨醇-5-硝酸酯制備標(biāo)題化合物。實(shí)施例3
將4-脒基苯基戊酸鹽酸鹽(2.6g；10毫摩爾)，二琥珀酰亞胺基碳酸酯(DSC，2.5g；10毫摩爾)和4-二甲基氨基吡啶(0.5g)于二甲基甲酰胺/吡啶(3∶1；200ml)中攪拌過(guò)夜。向該混合物中緩緩加入天冬氨酰(OtBu)-異山梨醇-5-單硝酸酯(實(shí)施例1)。該混合物室溫下再攪拌一天后過(guò)濾。從濾液中得到的小份樣品所作的質(zhì)譜表明存在所需的中間體(FAB-MS(M+H)+＝565)。將濾液蒸發(fā)至干后殘留物用三氟醋酸(TFA，100ml)處理1小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸去酸后，油狀殘留物經(jīng)制備型反相高效液相層析在Deltapak C18柱上純化，使用5-50％乙腈/水/0.05％三氟醋酸的線(xiàn)性梯度洗脫液。將產(chǎn)物冷凍干燥得到450mg白色固體產(chǎn)物。
FAB-MS(M+H)+＝508.9.1H-NMR(DMSO-d6)1.4-1.6(m，4H，-CH2-CH2-)，2.15(t，2H，CH2-苯基)，4.35 and5.1(d，2H，異山梨醇)，4.5(q，1H，α-CH)，4.92 and 5.5(t，2H，異山梨醇)，7.4 and 7.75(dd，4H，苯基)，8.34(m，1H，NH)，9.05 and 9.2(s，2H，脒)實(shí)施例4
從4-脒基苯基戊酸鹽酸鹽和實(shí)施例2的標(biāo)題產(chǎn)物按實(shí)施例3所述的方法制備本標(biāo)題化合物。實(shí)施例5
將實(shí)施例3產(chǎn)物(100mg)溶于含有10mM半胱氨酸的磷酸鹽緩沖溶液(pH7.4；10ml)中并將該混合物于室溫下攪拌一個(gè)周末。用分析型高效液相層析監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。通過(guò)制備型反相高效液相層析于Deltapak C18柱上用線(xiàn)性梯度的5％到50％乙腈/水/0.05％三氟醋酸洗脫將得到的混合物純化。將該產(chǎn)物冷凍干燥得到5mg白色固體。FAB-MS(M+H)+＝464.4。實(shí)施例6
室溫下將4-[[4-脒基苯基]-氨基]-4-氧代丁酸三氟醋酸鹽(3.5g；10毫摩爾)加到無(wú)水二甲基甲酰胺(100ml)中再加N-甲基嗎啉(NMM，1g；10毫摩爾)和氯甲酸異丁酯(1.37g；10毫摩爾)。向所得混合物中依次加入天冬氨酰(OtBu)-異山梨醇-5-單硝酸酯(實(shí)施例1；～10毫摩爾)和N-甲基嗎啉(1g；10毫摩爾)。將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢?小時(shí)后過(guò)濾。再將濾液蒸發(fā)至干并用三氟醋酸(TFA，50ml)處理殘留物1小時(shí)。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸去該酸后，油狀的殘留物經(jīng)制備型反相高效液相層析，在Deltapak C18柱上純化，用線(xiàn)性梯度的5％到50％乙腈/水/0.05％三氟醋酸洗脫。將產(chǎn)物冷凍干燥后得到700mg的白色固體。F.AB-MS(M+H)+＝524.4.1H-NMR(DMSO-d6)4.35 and 5.05(d，2H，異山梨醇)，4.5(q，1H，α-CH)，4.92 and 5.5(m，2H，異山梨醇)，7.75(s，4H，苯基)，8.44(m，1H，NH)，8.85 and 9.15(s，2H，脒)實(shí)施例7
自4-[[4-脒基苯基]-氨基]-4-氧代丁酸三氟醋酸鹽和實(shí)施例2的標(biāo)題產(chǎn)物按實(shí)施例6所述的方法制備本標(biāo)題化合物。實(shí)施例8
將實(shí)施例6產(chǎn)物(100mg)溶解于含有10mM半胱氨酸的碳酸氫鈉稀溶液(pH7.4；5ml)中并將該混合物于室溫下攪拌過(guò)夜。通過(guò)分析型高效液相層析監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。由制備型反相高效液相層析在DeltapakC18柱上用線(xiàn)性梯度的5％到50％的乙腈/水/0.05％三氟醋酸為洗脫液將所得混合物純化。產(chǎn)品冷凍干燥后得到40mg白色固體。FAB-MS(M+H)+＝479.4。實(shí)施例9
自α-[1-[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]-2-氧-吡咯烷-3-基]醋酸和實(shí)施例1的標(biāo)題產(chǎn)物按實(shí)施例3所述的方法制備該標(biāo)題化合物。實(shí)施例10
自α-[1-[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]-2-氧-吡咯烷-3-基]醋酸和實(shí)施例2的標(biāo)題產(chǎn)物按實(shí)施例3所述的方法制備本標(biāo)題化合物。實(shí)施例11
從α-[1-[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]-2-咪唑啉酮-3-基]醋酸和實(shí)施例1的標(biāo)題產(chǎn)物按實(shí)施例3所述的方法制備該標(biāo)題化合物。實(shí)施例12
從α-[1-[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]-2-咪唑啉酮-3-基]醋酸和實(shí)施例2的標(biāo)題產(chǎn)物按實(shí)施例3所述方法制備該標(biāo)題化合物。實(shí)施例13
從α-[1-[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]-2-巰基-咪唑啉-3-基]醋酸和實(shí)施例1的標(biāo)題產(chǎn)物按實(shí)施例3所述的方法制備本標(biāo)題化合物。實(shí)施例14
從α-[1-[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]-2(3H)-氧-1H-咪唑-3-基]醋酸和實(shí)施例1的標(biāo)題產(chǎn)物按實(shí)施例3所述的方法制備本標(biāo)題化合物。實(shí)施例15
自α-[1-[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]-2(3H)-氧-1H-咪唑-3-基]醋酸和實(shí)施例2的標(biāo)題產(chǎn)物按實(shí)施例3所述的方法制備本標(biāo)題化合物。實(shí)施例16
實(shí)施例3的產(chǎn)物(25mg)用氯化氫(氣體)飽和的乙醇溶液(5ml)處理。將該混合物減壓下蒸發(fā)至干，殘留物通過(guò)反相高效液相層析，在Deltapak C18柱上用5％到50％乙腈/水/0.05％三氟醋酸線(xiàn)性梯度洗脫進(jìn)行純化，所得產(chǎn)物冷凍干燥得到20mg白色固體。FAB-MS(M+H)+＝536.9.1H-NMR(DMSO-d6)1.18(t，3H，CH3)，1.4-1.6(m，4H，-CH2-CH2-)，2.1(t，2H，CH2-苯基)，4.05(m，2H，-OCH2-)，4.35 and 5.1(d，2H，異山梨醇)，4.5(q，1H，α-CH)，4.95 and 5.5 (t，2H，異山梨醇)，7.4and 7.75(dd，4H，苯基)，8.38(m，1H，NH)，8.95 and 9.1(s，2H，脒)實(shí)施例17
按實(shí)施例16的方法將實(shí)施例6的產(chǎn)物(25mg)用氯化氫(氣體)飽和的乙醇溶液處理生成白色固體的本標(biāo)題化合物(20mg)。
FAB-MS(M+H)+＝552.5.1H-NMR(DMSO-d6)1.18(t，3H，CH3)，4.05(m，2H，-OCH2-)，4.35 and 5.05(d，2H，異山梨醇)，4.5(q，1H，α-CH)4.92 and 5.5(m，2H，異山梨醇)，7.75(s，4H，苯基)，8.44(m，1H，NH)，8.75 and 9.15 (s，2H，脒)實(shí)施例18
按實(shí)施例16的方法將實(shí)施例7的產(chǎn)物用氯化氫(氣體)飽和的乙醇溶液處理生成本標(biāo)題化合物。實(shí)施例19
按實(shí)施例16的方法將實(shí)施例11的產(chǎn)物用氯化氫(氣體)飽和的乙醇溶液處理得到本標(biāo)題化合物。實(shí)施例20
按實(shí)施例16的方法將實(shí)施例12的產(chǎn)物用氯化氫(氣體)飽和的乙醇溶液處理得到本標(biāo)題化合物。實(shí)施例21
將實(shí)施例16的方法將實(shí)施例9的產(chǎn)物用氯化氫(氣體)飽和的乙醇溶液處理得到本標(biāo)題化合物。實(shí)施例22
按實(shí)施例16的方法將實(shí)施例14的產(chǎn)物用氯化氫(氣體)飽和的乙醇溶液處理得到本標(biāo)題化合物。生物學(xué)將上述發(fā)明的化合物用在富血小板血漿(PRP)中的體外人血小板聚集試驗(yàn)法和對(duì)純化的人纖維蛋白原及玻連蛋白受體的競(jìng)爭(zhēng)性固相結(jié)合試驗(yàn)法進(jìn)行試驗(yàn)。富血小板血漿中的體外人血小板聚集試驗(yàn)至少兩星期沒(méi)有接受抗血小板藥物的健康男性或女性供血者，抽血前禁食8小時(shí)，然后用蝶形針和含有3ml 0.129M的檸檬酸鈉緩沖液(3.8％)的30ml塑料注射器收集30ml全血。抽血時(shí)小心地轉(zhuǎn)動(dòng)注射器以使與檸檬酸鹽混合。通過(guò)室溫下在250×g下離心12分鐘后不加制動(dòng)使離心機(jī)自然停止的方法制備富含血小板的血漿(PRP)。從血中用塑料吸管吸出富含血小板血漿并將其放入室溫下的50ml康寧錐形無(wú)菌帶塑料蓋的離心試管中。通過(guò)將除去PRP而將余下的血液在室溫下于2000×g離心15分鐘，不加制動(dòng)而使離心機(jī)自然停下，制得貧血小板血漿(PPP)。用PPP將PRP調(diào)至含血小板數(shù)為每ml 2-3×108個(gè)。將450μl的PRP制品和50μl要試驗(yàn)的化合物或鹽水于37°下在Payton集合度計(jì)(Payton科學(xué)公司，布法羅，N.Y(Payton Scientific，Inc.，Buffalo，N.Y.))中預(yù)溫育1分鐘。將50μl的腺苷5′-二磷酸(ADP)(200mM)加到樣品池中并監(jiān)測(cè)聚集過(guò)程1分鐘。所有化合物均進(jìn)行雙份試驗(yàn)。按下式計(jì)算結(jié)果對(duì)照百分?jǐn)?shù)＝[(最大光密度-化合物的起始光密度)/(最大光密度-對(duì)照鹽水的起始光密度)]×100。抑制率(％)＝100-(對(duì)照百分?jǐn)?shù))。所試驗(yàn)化合物及其用半數(shù)抑制濃度(IC50)表示的活性結(jié)果記錄在表1中。
表1對(duì)人的富含血小板血槳中ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的抑制化合物 IC50[μM]實(shí)施例3 2.0實(shí)施例5 2.0實(shí)施例6 0.4實(shí)施例8 0.3固相受體試驗(yàn)這些試驗(yàn)基本上與上述報(bào)道的相同。用含有1.0mM Ca2+，Mg2+和Mn2+的pH7.4的三羥甲基氨基甲烷緩沖鹽水(TBS+++)將純化的人的玻連蛋白受體(αvβ3)或純化的人的纖維蛋白原受體(IIbβ3)從原溶液稀釋為1.0μg/ml的溶液。立刻將稀釋后的受體轉(zhuǎn)移到每孔100μl的Linbro微量滴板中(100ng受體/孔)。將該板密封后在4℃保溫過(guò)夜以便使受體與孔結(jié)合。以后所有步驟都在室溫下進(jìn)行。將試驗(yàn)板騰空并加入200μl的1％放射免疫測(cè)定級(jí)的牛血清白蛋白TBS+++溶液(TBS+++/BSA)以便封閉暴露的塑料表面。溫育2小時(shí)后用TBS+++藉助96孔板洗滌器洗滌試驗(yàn)板。用2nM的生物素化的玻連蛋白在TBS+++/BSA中的溶液為稀釋劑，將起始濃度為2mM的試驗(yàn)化合物和對(duì)照物按對(duì)數(shù)級(jí)稀釋。所標(biāo)記的配體與試驗(yàn)(或?qū)φ?的配體預(yù)先的混合以及隨后將其50μl小份液樣轉(zhuǎn)移到試驗(yàn)板中是用CETUS自動(dòng)加樣器(CETUS Propette robot)進(jìn)行的；最終標(biāo)記的配體濃度是1nM而試驗(yàn)化合物的最高濃度是1.0×10-4M。競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)進(jìn)行2小時(shí)后用板洗器如前一樣洗滌所有的孔。同樣，親合純化的辣根過(guò)氧化物酶所標(biāo)記的山羊抗生物素抗體用TBS+++/BSA稀釋成1∶3000并向每孔中加125μL。30分鐘后，沖洗該板并與鄰苯二胺/H2O2底物在pH5.0 100mM/L的檸檬酸緩沖溶液中溫育。用微量滴定板讀數(shù)器在450nm波長(zhǎng)處讀板并當(dāng)最大結(jié)合的對(duì)照孔達(dá)到約為1的吸光度時(shí)，記錄最終的A450用于分析。使用一個(gè)為了與EXCELTM電子數(shù)據(jù)表程序一起使用而書(shū)寫(xiě)的宏指令對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。測(cè)定雙份濃度樣本的均數(shù)值，標(biāo)準(zhǔn)偏差和百分變異系數(shù)。A450均數(shù)值對(duì)4個(gè)最大結(jié)合的對(duì)照(沒(méi)加競(jìng)爭(zhēng)劑)的平均值進(jìn)行規(guī)一化。該規(guī)一化數(shù)值按半對(duì)數(shù)比例作圖，進(jìn)行四參數(shù)曲線(xiàn)擬合計(jì)算，并報(bào)道算出的IC50值和相應(yīng)的相關(guān)系數(shù)。將纖維蛋白原的肽片斷，GRGDSP裝入每一板中溫育作陽(yáng)性對(duì)照。
表2對(duì)純化的人的纖維蛋白原和玻連蛋白受體的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合試驗(yàn)化合物 IC50[nM]纖維蛋白原受體玻連蛋白受體實(shí)施例3 3.11 ＞100,000實(shí)施例5 1.28 ＞100,000實(shí)施例6 0.25 ＞100,000實(shí)施例8 0.71 ＞100,000根據(jù)上述，本領(lǐng)域的技術(shù)人員很容易明確本發(fā)明的基本特點(diǎn)，在不改變其精神和范圍的情況下，對(duì)本發(fā)明可進(jìn)行各種變化和修改以使其適合各種應(yīng)用和情況。
權(quán)利要求
1.具有式I結(jié)構(gòu)的化合物或藥學(xué)上適用的其鹽
其中；A獨(dú)立地選自以下基團(tuán)
其中虛線(xiàn)代表單鍵或雙鍵和B選自羰基或亞氨基羰基；W選自氫，低級(jí)烷基，低級(jí)鏈烯基，低級(jí)炔基，脂環(huán)烴基和芳香烴基，其中所說(shuō)的所有取代基任選羥基，低級(jí)烷基，低級(jí)烷氧基，鹵素，硝基，氨基，酰氧基，可用鹵素、硝基、低級(jí)烷氧基、和低級(jí)烷基任選取的苯基和萘基所取代；Z，Z′獨(dú)立地選自氫，鹵素，氰基，磺?；u基，低級(jí)烷氧基，和低級(jí)烷基；X是羰基，脂環(huán)或雜環(huán)基；Y是硝酸酯基(ONO2)，亞硝酸酯基(ONO)，S-亞硝基-半胱氨酸，S-亞硝基-青霉胺或下列基團(tuán)之一
其中R是氧或亞氨基；n是1到約4的整數(shù)。
2.權(quán)利要求1中列舉的化合物，其中；A選自
其中虛線(xiàn)代表單鍵或雙鍵；B選自羰基或亞氨基羰基；W選自氫，1到約6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基，2到約6個(gè)碳原子的低級(jí)烯基，3到約6個(gè)碳原子的脂環(huán)烴基，和6到約12個(gè)碳原子的芳香烴基，其中所說(shuō)的所有基團(tuán)均可任選用羥基，低級(jí)烷氧基，低級(jí)烷基，鹵素，硝基，氨基，和酰氧基所取代；Z，Z′獨(dú)立地選自氫，鹵素，氰基，磺?；u基，低級(jí)烷基和低級(jí)烷氧基；X是羰基，脂環(huán)或雜環(huán)基；Y是硝酸酯基(ONO2)，亞硝酸酯基(ONO)，S-亞硝基-半胱氨酸，S-亞硝基-青霉胺或下列基團(tuán)之一
其中R是氧或亞氨基；和n是1到約4的整數(shù)。
3.權(quán)利要求2中列舉的化合物，其中；A選自
其中虛線(xiàn)代表單鍵或雙鍵；B選自羰基或亞氨基羰基；W選自氫，1到約6個(gè)碳原子的低級(jí)烷基，3到約6個(gè)碳原子的脂環(huán)烴基，和6到約12個(gè)碳原子的芳香烴基，其中所說(shuō)的所有基團(tuán)均可任選用羥基，低級(jí)烷氧基，低級(jí)烷基，鹵素，硝基，氨基，和酰氧基所取代；Z，Z′獨(dú)立地選自氫，鹵素，烷氧基，和低級(jí)烷基；X是羰基或脂環(huán)基；Y是硝酸酯基(ONO2)，亞硝酸酯基(ONO)，S-亞硝基-半胱氨酸，S-亞硝基-青霉胺或下列基團(tuán)之一
其中R是氧或亞氨基；和n是1到約3的整數(shù)。
4.權(quán)利要求3中列舉的化合物，其中A是
其中的虛線(xiàn)代表單鍵或雙鍵；B選自羰基或亞氨基羰基；W選自氫，甲基，乙基，丙基，環(huán)己基；Z，Z′選自氫和羥基；X是羰基或脂環(huán)基；Y是硝酸酯基(ONO2)，亞硝酸酯基(ONO)，S-亞硝基-半胱氨酸，S-亞硝基-青霉胺或下列基團(tuán)之一
其中R是氧或亞氨基；和n是1-3的整數(shù)。
5.權(quán)利要求4中列舉的化合物，其中A是
其中虛線(xiàn)代表單鍵或雙鍵和B是羰基；W選自氫，乙基和環(huán)己基；Z，Z′是氫；X是羰基；Y是下列基團(tuán)之一
其中R是氧；和n是1-2的整數(shù)。
6.一種藥物組合物，其中包括權(quán)利要求1，2，3，4，或5的一種化合物和至少一種無(wú)毒的藥學(xué)上適用的載體。
7.一種治療哺乳動(dòng)物的方法，用來(lái)抑制需要該治療的哺乳動(dòng)物的血小板聚集和促進(jìn)血管擴(kuò)張作用，該方法包括給哺乳動(dòng)物有效治療量的至少一種權(quán)利要求1，2，3，4或5的化合物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了具有供給一氧化氮性質(zhì)的新的脒衍生物,其每一化合物都具有抑制血小板聚集和增強(qiáng)血管擴(kuò)張的作用。
文檔編號(hào)A61P7/02GK1189833SQ96195239
公開(kāi)日1998年8月5日 申請(qǐng)日期1996年5月15日 優(yōu)先權(quán)日1995年5月15日
發(fā)明者M·G·庫(kù)爾里, F·S·喬恩, M·E·祖佩克 申請(qǐng)人:G.D.瑟爾公司