專利名稱：鈣通道的調(diào)整的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及如下的發(fā)現(xiàn)某類2-芳基-3-芳?；讲b]噻吩能有效地調(diào)整鈣通道，提高血管及心臟組織內(nèi)鈣通道的密度而不引起變力或增壓反應(yīng)方面的改變。
雌性激素恢復(fù)療法被普遍公認(rèn)對(duì)經(jīng)絕后婦女心血管系統(tǒng)能產(chǎn)生有利的效應(yīng)?？蓞⒁?jiàn)Knopt，《婦產(chǎn)科學(xué)》(Obstet.Gynecd.)，第72期，23～30頁(yè)(1988)。在接受了雌性激素治療的經(jīng)絕后婦女中，心血管死亡率降低約30％～約50％，腦血管死亡率則降低約50％。參見(jiàn)Stampfer等人，《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》，第325期，756～762頁(yè)(1991)。盡管這類有利的心血管效應(yīng)可能涉及脂類斷面(lipidprofile)分布的改變，但最近的數(shù)據(jù)又顯示，雌性激素還可能對(duì)粥樣硬化冠狀動(dòng)脈的血管反應(yīng)具有有利的效應(yīng)?？蓞⒁?jiàn)Gisclard等人，《藥理學(xué)及實(shí)驗(yàn)治療學(xué)雜志》，第244期，19～22頁(yè)(1988)；Williams等人，《循環(huán)系統(tǒng)》，第81期，1680～1687頁(yè)(1990)；Gangar等人，《Lancet》，第388期，839～842頁(yè)(1991)；以及Williams等人，《JACC》，第20期，452～457頁(yè)(1992)。有人發(fā)表雌性激素在血管組織內(nèi)產(chǎn)生的皮內(nèi)無(wú)關(guān)的和皮內(nèi)有關(guān)的各種效應(yīng)?？蓞⒁?jiàn)Jiang等人(英國(guó)藥理學(xué)雜志》，第104期，1033～1037頁(yè)(1991)；Jiang等人(美國(guó)生理學(xué)雜志》，第32期，H271～H275頁(yè)(1992)；Cheng及Gruetter，《歐洲藥理學(xué)雜志》，第215期，171～176頁(yè)(1992)；Mugge等人，《心血管研究》，第27期，1939～1942頁(yè)(1993)；Salas等人，《歐洲藥理學(xué)雜志》，第258期，47～55頁(yè)(1994)；Williams等人，《循環(huán)系統(tǒng)》，第81期，1680～1687頁(yè)(1990)；Cheng等人，《生命科學(xué)》，第10期，187～191頁(yè)(1994)；Gilligan等人，《循環(huán)系統(tǒng)》，第89期，2545～2551頁(yè)(1994)；以及Reis等人《循環(huán)系統(tǒng)》，第89期，52～60頁(yè)(1994)。若干報(bào)道也指出，雌二醇的血管舒張效應(yīng)和/或其減少收縮反應(yīng)的能力可通過(guò)經(jīng)由電壓依賴的鈣通道輸入鈣產(chǎn)生抑制作用進(jìn)行調(diào)節(jié)?？蓞⒁?jiàn)Jiang等人《英國(guó)藥理學(xué)雜志》，第104期，1033～1037頁(yè)(1991)；Jiang等人《美國(guó)生理學(xué)雜志》，第32期，H271～H275頁(yè)(1992)；Collins等人，《Lancet》，第341期，1264頁(yè)(1993)；Muck等人，《醫(yī)學(xué)科學(xué)研究》，第22期，19頁(yè)(1994)；以及Salas等人，《歐洲藥理學(xué)雜志》，第258期，47～55頁(yè)(1994)。其他人曾推測(cè)，雌二醇可提高環(huán)狀A(yù)MP(環(huán)腺苷酸)及環(huán)狀GMP(一磷酸烏苷)含量，或者增加ATP(三磷酸腺苷)敏感的鉀通路?？蓞⒁?jiàn)Mügge等人，《心血管研究》，第27期，1939～1942頁(yè)(1993)；Sudhir等人，《美國(guó)心臟雜志》，第129期，726～732頁(yè)。
本發(fā)明方法使用的2-芳基-3-芳?；讲b]噻吩化合物是由Jones和Süarez作為避孕劑首先開(kāi)發(fā)出來(lái)的。參見(jiàn)美國(guó)專利4,133,814(1979年1月9日頒予)。這類化合物通常用于抑制乳房腫瘤的生長(zhǎng)。Jones后來(lái)發(fā)現(xiàn)，這類化合物中有一組用于抗雌性激素及抗雄性激素的治療特別有用，尤其在乳房及前列腺腫瘤的治療方面?？蓞⒁?jiàn)美國(guó)專利4,418,068(1983年11月29日頒予)。針對(duì)這類化合物之一，6-羥基-2-(4-羥苯基)-3-[4-(2-哌啶子基-乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]噻吩在治療乳腺癌方面進(jìn)行了臨床研究。該化合物叫做雷洛昔芬，原名為keoxifene。
本發(fā)明提供用于調(diào)整鈣通道，增加血管及心臟組織中鈣通道密度而不引起變力或增壓反應(yīng)方面改變的方法，該方法包括對(duì)需要給藥的溫血?jiǎng)游锝o予有效量如下結(jié)構(gòu)式的化合物，
其中R1及R3獨(dú)立地是氫、C1～C4烷基、-CO-(C1-C6烷基)、-CH2Ar-或-CO-Ar，其中Ar是苯基或取代苯基；R2選自吡咯烷子基(Pyrrolidino)、六亞甲基亞氨基及哌啶子基；或其藥物可接受的鹽。本發(fā)明還提供將結(jié)構(gòu)式I的化合物或其藥物可接受的鹽用于制造調(diào)整血管及心臟組織中鈣通道的藥物方面的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及如下的發(fā)現(xiàn)2-芳基-3-芳?；讲b]噻吩(苯并[b]噻吩類)中選出的一組，即結(jié)構(gòu)式I的化合物，能有效地調(diào)整鈣通道，提高血管及心臟組織中鈣通道密度而不引起變力或增壓反應(yīng)方面的改變。因此，本發(fā)明提供調(diào)整血管及心臟組織中鈣通道的方法。本發(fā)明的一個(gè)方面是治療各種心臟病的方法，治療的病癥包括但不限于變異絞痛、勞累絞痛、不穩(wěn)定絞痛、心肌局部缺血再灌注損傷及心律不齊。本發(fā)明的另一個(gè)方面是治療腦血管病的方法，包括但不限于由于動(dòng)脈破裂所致腦血管痙攣、中風(fēng)及偏頭痛。本發(fā)明的又一個(gè)方面是通過(guò)加大腎血流量提高腎清除率來(lái)治療各種腎病的方法，該方法適用于延緩腎衰竭。再一個(gè)方面是治療胃腸疾病的方法，包括但不限于腹瀉，例如IBS及IBD、流行腹瀉。本發(fā)明提供的這種治療學(xué)處理方法，是通過(guò)對(duì)需要給藥的溫血?jiǎng)游锝o予藥物有效量的結(jié)構(gòu)式I化合物或其藥物可接受的鹽來(lái)實(shí)施的。
在上式中，術(shù)語(yǔ)“C1～C6烷基”代表含有1～6個(gè)碳原子的直鏈、環(huán)狀或支鏈烷基。典型的C1～C6烷基包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、正己基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。術(shù)語(yǔ)“C1～C4”烷基代表含1～4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基。典型的C1～C4烷基包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基及叔丁基。
術(shù)語(yǔ)“Ar”代表例如苯基及取代的苯基等基團(tuán)。本文使用的術(shù)語(yǔ)“取代的苯基”代表被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、羥基、氰基、硝基、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、乙?；?、甲?；⑷燃谆?、三氟甲基等部分取代了的苯基。取代的苯基的例子包括4-氯苯基、2，6-二氯苯基、2，5-二氯苯基、3，4-二氯苯基、3-氯苯基、3-溴苯基、4-溴苯基、3，4-二溴苯基、3-氯-4-氟苯基、2-氟苯基、4-羥苯基、3-羥苯基、2，4-二羥苯基、3-硝基苯基、4-硝基苯基、4-氰基苯基、4-甲基苯基、4-乙基苯基、4-甲氧基苯基、4-丙基苯基、4-正丁基苯基、4-叔丁基苯基、3-氟2-甲基苯基、2，3-二氟苯基、2，6-二氟苯基、2，6-二甲基苯基、2-氟-5-甲基苯基、2，4，6-三氟苯基、2-三氟甲基苯基、2-氯-5-三氟甲基苯基、3，5-二(三氟甲基)苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、3，5-二甲氧基苯基、4-羥基-3-甲基苯基、3，5-二甲基-4-羥苯基、2-甲基-4-硝基苯基、4-甲氧基-2-硝基苯基、2，4-二硝基苯基等。術(shù)語(yǔ)“C1～C4烷氧基”代表例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基等基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“鹵素”代表氟、氯、溴及碘等。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“藥物有效量”代表能夠提高血管及心臟組織中鈣通道密度的結(jié)構(gòu)式I化合物的量。當(dāng)然，結(jié)構(gòu)式I化合物的具體劑量將根據(jù)該例所處的具體環(huán)境因素，包括給予的化合物、給藥途徑、治療的具體條件以及類似的考慮因素等決定。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“調(diào)整”代表在不引起變力或增壓反應(yīng)方面改變的條件下使血管及心臟組織中鈣通道密度提高。
本文使用的術(shù)語(yǔ)“溫血?jiǎng)游铩卑ㄈ祟?；寵物，例如狗及貓；以及家畜，例如馬、牛、羊、豬、山羊及雞。優(yōu)選的是，溫血?jiǎng)游锸侨嘶驅(qū)櫸铩８鼉?yōu)選的是，該溫血?jiǎng)游锸侨恕?br> 雖然所有結(jié)構(gòu)式I化合物都可用于調(diào)整血管及心臟組織中的鈣通道，但是某些化合物是優(yōu)選的。優(yōu)選的是，R1及R3獨(dú)立地是氫、C1～C4烷基、-CO-(C1-C6烷基)或芐基，且R2是哌啶子基或吡咯烷子基。這些優(yōu)選組中有代表性的化合物包括6-羥基-2-[4-羥苯基]-3-[4-(2-吡咯烷子基乙氧基)苯甲?；鵠苯并[b]-噻吩、6-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(2-哌啶子基乙氧基)苯甲?；鵠苯并[b]-噻吩、6-乙酰氧基-2-(4-乙酰氧基苯基)-3-[4-(2-吡咯烷子基乙氧基)苯甲?；鵠苯并[b]-噻吩以及6-芐基氧基-2-(4-芐基氧基苯基)-3-[4-(2-哌啶子基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]-噻吩。
更優(yōu)選的是，R1及R3獨(dú)立地是氫或C1～C4烷基，且R2是哌啶子基或吡咯烷子基。這些更優(yōu)選的組中有代表性的化合物包括6-羥基-2-[4-羥苯基]-3-[4-(2-吡咯烷子基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]-噻吩、6-羥基-2-[4-羥苯基]-3-[4-(2-哌啶子基乙氧基)苯甲酰基]苯并[b]-噻吩、6-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(2-吡咯烷子基乙氧基)苯甲?；鵠苯并[b]-噻吩以及6-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-3-[4-(2哌啶子基乙氧基)苯甲?；鵠苯并[b]-噻吩。最優(yōu)選的是，R1及R3是氫，且R2是哌啶子基。該最優(yōu)選的化合物是6-羥基-2-(4-羥苯基)-3-[4-(2-哌啶子基乙氧基)苯甲?；鵠苯并[b]-噻吩。
本發(fā)明方法使用的結(jié)構(gòu)式I化合物可按照已知的程序制備，例如美國(guó)專利4,133,814、4,418,068以及4,380,635中所描述的程序，這些文獻(xiàn)均收作本文的參考。大致地說(shuō)，該方法從6-羥基-2-(4-羥苯基)苯并[b]-噻吩開(kāi)始。將該起始化合物保護(hù)起來(lái)，用4-(2-氨基乙氧基)苯甲?；鶊F(tuán)在C-3位置?；缓笕芜x地脫保護(hù)，生成結(jié)構(gòu)式I化合物。這種化合物的制備例子可參見(jiàn)上面討論過(guò)的美國(guó)專利。
本發(fā)明方法中使用的化合物可與各種各樣有機(jī)及無(wú)機(jī)酸和堿生成藥物可接受的酸或堿加成鹽，其中R1和/或R3是氫，包括藥物化學(xué)中經(jīng)常使用的那類生理可接受的鹽。用以生成此類鹽的典型無(wú)機(jī)酸包括，例如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、連二磷酸等。也可使用由例如脂族一元或二元羧酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸，以及羥基鏈烷二元酸(hydroxyalkandioic acid)、芳香酸、脂族或芳香磺酸等有機(jī)酸轉(zhuǎn)化而來(lái)的鹽。因此，這類藥物可接受的鹽包括乙酸鹽、苯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙烯酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、氯代苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、鄰-乙酰氧基苯甲酸鹽、萘-2-苯甲酸鹽、溴化物、異丁酸鹽、苯基丁酸鹽及β羥基丁酸鹽、丁炔-1，4-二油酸鹽(其中dioate譯為″二油酸鹽)、己炔-1，6-二油酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、氯化物、肉桂酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、甘醇酸鹽、庚酸鹽、癸酸鹽、馬尿酸鹽、乳酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、羥基馬來(lái)酸鹽、丙二酸鹽、偏桃酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、異煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、對(duì)苯二甲酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、丙炔酸鹽、丙酸鹽、苯基丙酸鹽、水楊酸鹽、癸二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、焦硫酸鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磺酸鹽、苯磺酸鹽、對(duì)溴苯基磺酸鹽、氯苯磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、甲磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽等。最優(yōu)選的鹽是鹽酸鹽。
藥物可接受的酸加成鹽典型地通過(guò)結(jié)構(gòu)式I化合物與等摩爾或過(guò)量的酸起反應(yīng)生成。反應(yīng)物料通常在有機(jī)溶劑，例如甲醇、乙醚或苯中合在一起。鹽通常在約1小時(shí)～10天之內(nèi)從溶液中沉淀出來(lái)，或者可借助傳統(tǒng)的手段將溶劑蒸出。
通常用于生成鹽的堿包括氫氧化銨以及堿及堿土金屬氫氧化物、碳酸鹽，以及脂族伯、仲及叔胺，以及脂族二胺。對(duì)制備該加成鹽特別有用的堿包括氫氧化銨、碳酸鉀、甲胺、二乙胺、乙二胺及環(huán)己胺。這些鹽通常是通過(guò)其中R1和/或R3是氫的結(jié)構(gòu)式I化合物與上述堿之一在例如甲醇、乙醚或苯的有機(jī)溶劑中進(jìn)行反應(yīng)來(lái)制備的。鹽的分離按照上面一段所述進(jìn)行。
這些藥物可接受的鹽通常具有比其前體更高的溶解特性，因此對(duì)制成液體或乳劑等制劑配制過(guò)程的適應(yīng)性更好。
結(jié)構(gòu)式I化合物在服用前優(yōu)選地調(diào)配到包含結(jié)構(gòu)式I化合物及藥物可接受載體、稀釋劑或賦形劑的制劑中去。這種藥物制劑的制備采用已知的程序和熟知且易得的成分。在制備這類組合物的過(guò)程中，通常是，有效成分與載體混合、用載體稀釋，或者被包在載體之中，后者可以是膠囊、香囊、紙或其他容器形式的。當(dāng)載體作為稀釋劑使用時(shí)，它可以是起有效成分的賦形劑或介質(zhì)作用的固體、半固體或液體。該組合物可以是如下形式的片劑、藥丸、粉末、錠劑、香囊、扁囊劑、酏劑、懸浮液、乳劑、溶液、糖漿、氣溶膠、含有例如最多10％(重量)有效成分的軟膏、軟、硬膠囊、貼劑、栓劑、無(wú)菌可注射溶液以及無(wú)菌包裝的粉末等。
合適的載體、賦形劑以及稀釋劑的某些例子包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、樹(shù)膠、阿拉伯膠、磷酸鈣、海藻酸鹽、黃耆膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮、交聯(lián)的聚乙烯基吡咯烷酮、纖維素或其衍生物、水糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯或丙酯、滑石粉、硬脂酸鎂及礦物油。該制劑可另外包含潤(rùn)滑劑、潤(rùn)濕劑(例如表面活性劑)、乳化及懸浮劑、崩解劑、防腐劑、甜味劑或香料等藥劑。本發(fā)明的組合物可采用技術(shù)上熟知的程序配制成能夠在給患者服用后快速、長(zhǎng)效或延遲釋放出有效成分的制劑。
按照本發(fā)明，調(diào)整血管及心臟組織中鈣通道所要求的結(jié)構(gòu)式I化合物的具體劑量，應(yīng)根據(jù)病情嚴(yán)重程度、給藥途徑以及應(yīng)由處方醫(yī)生決定的各種有關(guān)因素來(lái)確定。一般而言，有效的日劑量為約0.1～約1000毫克/日，更典型地為約10～約100毫克/日。上述劑量將每日給予需要的患者一次到約3次，或者更經(jīng)常的是，根據(jù)有效醫(yī)治病情或癥狀的需要而定。
對(duì)處方人來(lái)說(shuō)通常喜歡采用酸加成鹽形式的結(jié)構(gòu)式I化合物，因?yàn)榱?xí)慣服用的是帶有諸如哌啶子基等堿性基團(tuán)的藥物。為此目的，下面的口服劑量可供參考。
在下面的各配方中，“有效成分”是指結(jié)構(gòu)式I化合物。
配方1膠囊采用下列配方制備了硬膠囊成分 含量(毫克/單個(gè)膠囊)有效成分0.1～1000淀粉，NF0～650可流動(dòng)淀粉粉末 0～650硅流體，350厘沲 0～15將各種成分摻混、通過(guò)45目(美國(guó)篩制)的篩子，然后充填到硬膠囊中。
制備的具體的雷洛昔芬膠囊制劑的例子包括下列配方2雷洛昔芬膠囊成分 含量(毫克/單個(gè)膠囊)雷洛昔芬1淀粉，NF112可流動(dòng)淀粉粉末 225.3硅流體，350厘沲 1.7配方3雷洛昔芬膠囊成分 含量(毫克/單個(gè)膠囊)雷洛昔芬5淀粉，NF108可流動(dòng)淀粉粉末 225.3硅流體，350厘沲 1.7配方4雷洛昔芬膠囊成分 含量(毫克/單個(gè)膠囊)雷洛昔芬10淀粉，NF103可流動(dòng)淀粉粉末 225.3硅流體，350厘沲 1.7配方5雷洛昔芬膠囊成分 含量(毫克/單個(gè)膠囊)
雷洛昔芬 50淀粉，NF 150可流動(dòng)淀粉粉末 397硅流體，350厘沲3.0上述的具體配方可根據(jù)合理的變動(dòng)因素予以改變。
采用如下成分制備了一種片劑制劑配方6片劑成分 含量(毫克/單個(gè)膠囊)活性成分 0.1～1000微晶纖維素0～650煅制二氧化硅(Silicon dioxide，fumed) 0～650硬脂酸0～15將各種成分摻混并壓制成形為片劑。
替代地，按照下表制備了每片含有0.1～1000毫克有效成分的片劑配方7片劑成分含量(毫克/單個(gè)膠囊)有效成分0.1～1000淀粉45微晶纖維素 35聚乙烯基吡咯烷酮(10％水溶液形式)4羧甲基纖維素鈉 4.5硬脂酸鎂0.5滑石粉 1將有效成分、淀粉及纖維素通過(guò)45目(美國(guó)篩制)篩子，然后充分混合。得到的粉末與聚乙烯基吡咯烷酮溶液混合，然后通過(guò)14目(美國(guó)篩制)篩子。如此得到的粒料隨后在50～60℃下干燥并通過(guò)18目(美國(guó)篩制)篩子。然后，將預(yù)先經(jīng)過(guò)60號(hào)(美國(guó)篩制)過(guò)篩的羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂及滑石粉加入到粒料中，經(jīng)過(guò)混合之后，將之在壓片機(jī)上壓制成片劑。
制成每5毫升含0.1～1000毫克有效成分的如下懸浮液配方8懸浮液成分 含量(毫克/5毫升)有效成分 0.1～1000毫克羧甲基纖維素鈉50毫克糖漿 1.25毫克苯甲酸溶液0.10毫升香料 適量著色劑適量以純水加滿5毫升讓有效成分通過(guò)45號(hào)(美國(guó)篩制)篩子，然后與羧甲基纖維素鈉及糖漿混合，形成細(xì)膩糊狀。將苯甲酸溶液、香料及著色劑以一定量的水稀釋，然后在攪拌下加入上面的物料中。隨后，加入足夠量的水以達(dá)到要求的體積。
可用于本發(fā)明方法的范例化合物一并載于表1。
表1化合物序號(hào)R1及R3R2形式1 對(duì)氟苯甲酰哌啶子基 堿2 對(duì)氟苯甲酰哌啶子基 鹽酸3環(huán)丙甲酰 哌啶子基 堿4環(huán)丙甲酰 哌啶子基 鹽酸5 正丙基甲酰哌啶子基 堿6 正丙基甲酰哌啶子基 鹽酸7 叔丁基甲酰哌啶子基 堿8 叔丁基甲酰哌啶子基 鹽酸9 叔丁基乙酰哌啶子基 堿10 叔丁基乙酰哌啶子基 鹽酸11 對(duì)甲基苯甲酰 哌啶子基 鹽酸12苯甲酰 哌啶子基 堿13 氫哌啶子基 堿14 氫哌啶子基 鹽酸15 氫吡咯烷子基堿16 氫吡咯烷子基鹽酸17 氫 六亞甲基亞胺基 鹽酸18 甲基 哌啶子基 鹽酸采用結(jié)構(gòu)式I化合物所具有的有利效應(yīng)表現(xiàn)在以下描述的實(shí)驗(yàn)的至少一項(xiàng)中。
材料及方法關(guān)于實(shí)驗(yàn)大鼠的選擇及劑量基本上如佐滕等人在《骨與礦物質(zhì)研究雜志》，第9期，715～724頁(yè)(1994)中所描述的那樣。概括地說(shuō)，卵巢切除的(ovex)未配子母鼠(6個(gè)月大)分為3組，每組6只，稱作ovex組；乙炔基雌二醇(EE2，0.1毫克/千克/日口服)；以及雷洛昔芬(化合物14，1.0毫克/千克/日口服)。由假裝做過(guò)手術(shù)(Sham-operated)的雌性構(gòu)成的第四組(Sham)作為第二對(duì)照組。選擇EE2及化合物14組的劑量使其對(duì)骨密度參數(shù)具有可比的效應(yīng)(佐滕等人)；順便指出，它們?cè)诮档涂偰懝檀挤矫娈a(chǎn)生了大致相同的顯著(P，0.05，對(duì)照ovex而言)效應(yīng)(EE2和化合物14組分別為36±2和38±4mg/dl，而ovex和Sham組則分別為85±7和87±7mg/dl)。Sham和ovex大鼠飼喂的是賦形劑(100微克/克體重20％羥丙基-S-環(huán)糊精)。所有的動(dòng)物均按上述劑量飼喂35天，然后用過(guò)量二氧化碳窒息致死。
小心地將心臟和主動(dòng)脈解剖，如果不立即制備成膜則在-70℃下冷凍并貯藏。由取自上述每一組的3～4克切碎的心臟或主動(dòng)脈分離出微粒體膜膀胱。參見(jiàn)Jones等人，《生物化學(xué)雜志》，第254期，530～535頁(yè)(1979)。制備物儲(chǔ)存在-70℃的0.25M蔗糖/30mM組氨酸中。在12×75毫米玻璃試管(全容積500微升)中每管放入100(心臟)或200(主動(dòng)脈)微克蛋白質(zhì)并與23℃遞增濃度的鈣通道配體[3H]PN200-110(0.01～4nM)進(jìn)行反應(yīng)達(dá)2小時(shí)，考察結(jié)合能力。化驗(yàn)物通過(guò)迅速過(guò)濾，收集到Whatman GF/C濾紙上以結(jié)束反應(yīng)。化驗(yàn)物及洗滌)緩沖液為50mM Tris/HCl(pH7.3)、1mM EDTA及12mMMgCl2。非特征性結(jié)合被定義為在1微摩爾硝苯地平的存在下殘留的結(jié)合。
根據(jù)飽和等溫線數(shù)據(jù)利用非線性回歸分析程序LUNDON-1確定了放射性配體結(jié)合親和性及受體密度。參見(jiàn)Lundeen及Gordon，，“藥物研究中的受體結(jié)合”，31～49頁(yè)，1986。
測(cè)定了取自4個(gè)組(Sham、ovex、EE2及化合物14)中每一組的、刺毀腦脊髓的大鼠體內(nèi)心血管血液動(dòng)力參數(shù)對(duì)BAY k 8644的反應(yīng)，試驗(yàn)方法可參見(jiàn)Hayes及Bowling的文獻(xiàn)描述，這里做了如下修改藥是經(jīng)過(guò)股靜脈注入的；以及將連有壓力傳感器的一段PE 90管直接插入到左心室中，從而直接得到了左心室收縮血壓測(cè)量數(shù)據(jù)。參見(jiàn)Hayes及Bowling，《藥理學(xué)及實(shí)驗(yàn)治療學(xué)》，第241期，861～869頁(yè)(1987)。獲得了如下測(cè)定數(shù)據(jù)平均、收縮及舒張壓、心率、左心室收縮壓及左心室dp/dt。
結(jié)果測(cè)定了EE2及化合物14對(duì)鈣離子在心臟及主動(dòng)脈組織中通道結(jié)合([3H] PN-200-110)能力以及關(guān)于活體內(nèi)血液動(dòng)力學(xué)參數(shù)對(duì)Bay k 8644的反應(yīng)的影響，并且與卵巢切除及Sham對(duì)照組進(jìn)行了比較。雖然在EE2及化合物14處理過(guò)的大鼠的心臟及主動(dòng)脈組織中高親和二氫吡啶結(jié)合位置數(shù)量(Bmax)顯著高于卵巢切除的鼠，但各組中不論心臟或是主動(dòng)脈組織中的結(jié)合親和性(Kd)卻沒(méi)有明顯差別。處理組 膽固醇 心臟[3H]PN200-100主動(dòng)脈 對(duì)比ovex，*p＜0.05mg/dL Bmax(fmol/mg) Kd(pM) Bmax(fmol/mg) Kd(pM)ovex(n＝5-7) 85±7 296±51 200±1961±15 1.0±0.3Sham(n＝4-6) 87±7 385±76 188±3246±14 2.5±0.6EE2(n＝5-7) 36±2*525±65*204±21133±26*2.5±0.6雷洛昔芬 38±4*535±80*171±18124±18*1.3±0.6(n＝4-5)盡管鈣離子通道Bmax提高了，EE2處理組大鼠在活體收縮壓、心率及對(duì)BAY k 8644的增壓反應(yīng)等方面均未見(jiàn)比卵巢切除及Sham對(duì)照組有所增加。因此，提高鈣離子通道密度并未導(dǎo)致對(duì)鈣通道興奮劑的反應(yīng)變得更為敏感。
權(quán)利要求
1.一種調(diào)整血管及心臟組織中鈣通道的方法，它包括給予需給藥的溫血?jiǎng)游锼幬镉行Я康娜缦陆Y(jié)構(gòu)式的化合物
其中R1及R3獨(dú)立地是氫、C1～C4烷基、-CO-(C1-C6烷基)、或-CH2Ar、-CO-Ar，其中Ar是苯基或取代的苯基；R2選自吡咯烷、六亞甲基亞氨基及哌啶子基；或其藥物可接受的鹽。
2.權(quán)利要求1的方法，其中R1及R3獨(dú)立地是氫、C1～C4烷基、-CO-(C1-C6烷基)或芐基，R2是哌啶子基或吡咯烷子基。
3.權(quán)利要求2的方法，其中R1及R3獨(dú)立地是氫或C1～C4烷基，R2是哌啶子基或吡咯烷子基。
4.權(quán)利要求3的方法，其中R1及R3是氫，R2是哌啶子基或吡咯烷子基。
5.權(quán)利要求4的方法，其中R2是哌啶子基。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述藥物可接受的鹽是鹽酸鹽。
7.權(quán)利要求4的方法，其中R2是吡咯烷子基。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述藥物可接受的鹽是鹽酸鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供用于調(diào)整鈣通道,增加血管及心臟組織中鈣通道密度而不引起變力或增壓反應(yīng)改變的方法,該方法包括給予需要給藥的溫血?jiǎng)游锼幬镉行Я康慕Y(jié)構(gòu)式(Ⅰ)的化合物,其中R
文檔編號(hào)A61K31/38GK1192121SQ96195873
公開(kāi)日1998年9月2日 申請(qǐng)日期1996年6月4日 優(yōu)先權(quán)日1995年6月7日
發(fā)明者N·L·寶玲 申請(qǐng)人:伊萊利利公司