專利名稱：1h－1,2,4－三唑衍生物用于抑制癌癥生長的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在哺乳動物，特別是人和溫血動物中，抑制癌癥、白血病和腫瘤生長的藥物組合物。該組合物包含1H-1，2，4-三唑類衍生物和化療劑。
背景技術(shù)：
癌癥是動物和人的主要死因。癌癥的確切病因不明，但是很多研究者已證明，某些活動如吸煙或暴露于致癌劑與某些類型癌癥和腫瘤的發(fā)病率之間存在聯(lián)系。
很多類型化療劑已證明對癌癥和腫瘤細(xì)胞有效，但并非所有類型的癌癥和腫瘤對這些化療劑產(chǎn)生反應(yīng)。不幸的是這些藥物很多也損傷正常細(xì)胞。這些化療劑的確切作用機制并非總是明了的。
盡管癌癥治療領(lǐng)域有所進(jìn)展，但迄今領(lǐng)先的治療是手術(shù)、放射和化學(xué)治療?；瘜W(xué)治療被用于對付已轉(zhuǎn)移的癌癥或特別是有侵襲性的癌癥。這樣的殺細(xì)胞劑或細(xì)胞抑制劑對生長指數(shù)高的癌癥(即其細(xì)胞迅速分裂的癌癥)的作用最好。迄今，激素(特別是雌激素、孕酮和睪酮)、各種微生物產(chǎn)生的一些抗生素、烷化劑和抗代謝劑，構(gòu)成了腫瘤學(xué)家可利用的藥物的主體。對癌癥和腫瘤細(xì)胞有特異性而又不影響正常細(xì)胞的理想的細(xì)胞毒劑，將是特別令人滿意的。不幸的是，并未發(fā)現(xiàn)這樣的細(xì)胞毒劑，取而代之的是，使用針對分裂特別快的細(xì)胞(腫瘤和正常細(xì)胞)的藥物。
顯然，因?qū)δ[瘤細(xì)胞有獨特的特異性而針對腫瘤細(xì)胞的物質(zhì)的開發(fā)將是一個突破點?；蛘撸瑢δ[瘤細(xì)胞有細(xì)胞毒性而對正常細(xì)胞顯示較弱效應(yīng)的物質(zhì)將是令人滿意的。據(jù)信，當(dāng)1H-1，2，4-三唑與化療劑一起使用時，可以降低和抑制癌癥、腫瘤和白血病的生長。因此，本發(fā)明的目的是，提供有效地遏制和抑制哺乳動物中腫瘤和癌生長而對正常細(xì)胞作用小或無作用的藥物組合物。
已發(fā)現(xiàn)，1H-1，2，4-三唑衍生物對于抑制癌癥、腫瘤、病毒或細(xì)菌的生長特別有效。將這些1H-1，2，4-三唑衍生物與其他可摧毀腫瘤的化療劑一起使用，是一種新的治療癌癥和腫瘤的方法。
更具體地說，本發(fā)明的目的是提供一種抗癌組合物，該組合物包含藥物載體和1H-1，2，4-三唑衍生物以及化療劑，還提供了治療這些癌癥的方法。其中使用增效劑可提高組合物的效力。
從下面的本發(fā)明詳細(xì)描述中，這些目的和其它目的會變得明顯起來。
發(fā)明概述一種治療哺乳動物特別是溫血動物和人的藥物組合物，它包含藥物載體和有效量的化療劑以及安全有效量的選自下組的抗癌化合物

式中，Z是選自下組的亞烷基CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH(CH3)-和-CH2-CH(烷基)，其中該烷基有1至約10個碳原子；而Ar是選自下組的基團苯基、取代苯基、噻吩基、鹵代噻吩基、萘基和芴基，其中“取代苯基”的定義是具有1-3個取代基的苯基，這些取代基各自獨立地選自鹵原子、低級烷基、低級烷氧基、氰基和硝基。上述化合物(I)的治療上有活性的酸加成鹽也被包括在本發(fā)明范圍之內(nèi)。
如上面Z的定義中所用，術(shù)語“烷基”指包括具有1至約10個碳原子的直鏈或支鏈烴基，如甲基、乙基、1-甲基乙基、丙基、1，1-二甲基乙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、癸基等；如本文所用，“低級烷基”指包括具有1至6個碳原子的直鏈或支鏈的飽和烴基，如甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、丁基、1，1-二甲基乙基、戊基、己基等；而術(shù)語“鹵原子”指原子量小于127的鹵素原子，即氟、氯、溴和碘。
通過口服、直腸內(nèi)、局部或胃腸外、靜脈內(nèi)或注射在腫瘤之內(nèi)，而施用有效量的組合物，可將這些組合物用于抑制人體或動物體內(nèi)癌癥和其它腫瘤的生長。與對健康細(xì)胞有危害的阿霉素相比，這些組合物對健康細(xì)胞沒有明顯的作用。在該組合物中還可包含增效劑。
1H-1，2，4-三唑衍生物和增效劑的組合物還可用于治療病毒。與其他殺真菌劑的組合也是有效的。
發(fā)明的詳述A.定義
本文中，術(shù)語“含有”表示各種成分可一起應(yīng)用于本發(fā)明的藥物組合物。因此，術(shù)語“主要由…組成”和“由…組成”包含在術(shù)語“含有”中。
本文中，“藥學(xué)上可接受的”成分是適用于人和/或動物而無過度不良副反應(yīng)(如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng))即有合理的效益/風(fēng)險比的物質(zhì)。
本文中，術(shù)語“安全有效量”指按本發(fā)明的方式使用時足以獲得需要的治療反應(yīng)而無過度不良副反應(yīng)(如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng))即有合理的效益/風(fēng)險比的成分的量。顯然，具體的“安全有效量”因各種因素而異，如受治療的特殊病情、患者的身體條件、受治療的哺乳動物的種類、療程、同時進(jìn)行的治療的種類(如果有的話)、所應(yīng)用的具體制劑和化合物或其衍生物的結(jié)構(gòu)。
本文中，“藥物加成鹽”是抗癌化合物與有機酸或無機酸形成的鹽。優(yōu)選的酸加成鹽選自鹽酸鹽、溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、磺酸鹽、甲酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽、水楊酸鹽、抗壞血酸鹽等。
本文中，“藥物載體”是用于將抗癌劑傳送給動物或人的藥學(xué)上可接受的溶劑、懸浮劑或賦形劑。載體可以是液體或固體或脂質(zhì)體，是根據(jù)腦中計劃的給藥方式而選擇的。
本文中，“癌癥”指哺乳動物出現(xiàn)的所有類型的癌或贅生物或惡性腫瘤以及包括白血病在內(nèi)的所有類型的癌癥。
本文中，“抗癌化合物”是1H-1，2，4-三唑類和它們的鹽。確切的1H-1，2，4-三唑在下面有詳細(xì)描述。優(yōu)選的材料是Janssen Pharmaceutical NV(比利時)以品名“propiconazole(丙環(huán)唑)”出售的產(chǎn)品。
本文中，“病毒”包括在人和其他溫血動物中引起疾病(病毒感染)的病毒，如HIV病毒、皰疹病毒、流感病毒和鼻病毒。
本文中，“化療劑”包括DNA交互劑(相互作用的藥物)(DNA-interactive agent)、抗代謝劑、微管蛋白交互劑(tubulin-interactive agent)、激素類藥和其它藥劑如天冬酰胺酶或羥基脲。
本文中，“增強劑”為諸如曲普利啶及其順式異構(gòu)體以及丙考達(dá)唑(procodazole)之類的物質(zhì)，它們與化療劑和1H-1，2，4-三唑衍生物合并使用。
B.抗癌化合物抗癌化合物是因其抗真菌活性而為人所知的1H-1，2，4-三唑衍生物。它們是用于防止和根除真菌的內(nèi)吸性(systemic)物質(zhì)。該化合物具有如下結(jié)構(gòu)

式中，Z是選自下組的亞烷基CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH(CH3)-和-CH2-CH(烷基)，其中該烷基有1至約10個碳原子；而Ar是選自下組的基團苯基、取代苯基、噻吩基、鹵代噻吩基、萘基和芴基，其中“取代苯基”的定義是具有1-3個取代基的苯基，這些取代基各自獨立地選自鹵原子、低級烷基、低級烷氧基、氰基和硝基。上述化合物(I)的治療上有活性的酸加成鹽也被包括在本發(fā)明范圍之內(nèi)。
如上面Z的定義中所用，術(shù)語“烷基”指包括具有1至約10個碳原子的直鏈或支鏈烴基，如甲基、乙基、1-甲基乙基、丙基、1，1-二甲基乙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、癸基等；如本文所用，“低級烷基”指包括具有1至6個碳原子的直鏈或支鏈的飽和烴基，如甲基、乙基、丙基、1-甲基乙基、丁基、1，1-二甲基乙基、戊基、己基等；而術(shù)語“鹵原子”指原子量小于127的鹵素原子，即氟、氯、溴和碘。它們與有機酸和無機酸形成的藥學(xué)上可接受的酸加成鹽也可用于本發(fā)明。
優(yōu)選的衍生物包括1-[2-(2，4-二氯苯基)-1，3-二氧戊環(huán)-2-基甲基]-1H-1，2，4-三唑(丙環(huán)唑)、1-[2-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1，3-二氧戊環(huán)-2-基甲基]-1H-1，2，4-三唑、1-[2-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1，3-二氧戊環(huán)-2-基甲基]-1H-1，2，4-三唑、1-[2-(2，4-二氯苯基)-4-丙基-1，3-二氧戊環(huán)-2-基甲基]-1H-1，2，4-三唑、1-[2-(2，4-二氯苯基)-4-戊基-1，3-二氧戊環(huán)-2-基甲基]-1H-1，2，4-三唑以及它們在治療上有活性的酸加成鹽。
這些化合物按1978年3月14日授予Van Reet等人的美國專利No.4,079,062中描述的方法進(jìn)行制備。
據(jù)信，這些物質(zhì)與化療劑和任選的增效劑一起使用時，能夠顯著地減小腫瘤或降低其生長，因為它們能夠抑制固醇類物質(zhì)的合成。
C.化療劑化療劑一般被分成DNA-交互劑、抗代謝劑、微管蛋白-交互劑、激素類藥和其他藥物如天冬酰胺酶或羥基脲等類別。每類化療劑可根據(jù)化合物或活性的類型而被進(jìn)一步細(xì)分?？膳c本發(fā)明的1H-1，2，4-三唑衍生物組合使用的化療劑包括所有這些類別的成員。對于化療劑及其給藥方法的詳細(xì)論述，參見Dorr等人，《癌癥化療手冊》(Cancer Chemotherapy Handbook)，2版，第15-34頁，Appleton&Lange(Connecticut，1994)，該文獻(xiàn)在此引用作為參考。
DNA-交互劑包括烷化劑，如順鉑、環(huán)磷酰胺、六甲蜜胺；DNA鏈斷裂劑，如博來霉素；嵌入型拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑，如放線菌素D和阿霉素；非嵌入型拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑，如依托泊甙和替尼泊甙；以及DNA小溝結(jié)合劑普卡霉素(Plcamydin)。
烷化劑與細(xì)胞DNA、RNA和蛋白質(zhì)分子，以及與更小的氨基酸、谷胱甘肽及類似化學(xué)物質(zhì)形成共價的化學(xué)加合物。一般，這些烷化劑與細(xì)胞組分中的親核原子反應(yīng)，如在核酸、蛋白質(zhì)、氨基酸或谷胱甘肽中的氨基、羧基、磷酸根、巰基。這些烷化劑在癌癥治療中的機制和作用還不十分了解。典型的烷化劑包括氮芥類，如苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺(Isofamide)、氮芥(Mechlorethamine)、美法侖、烏拉莫司??；氮丙啶類如塞替派；甲磺酸酯類如白消安；亞硝基脲類，如卡莫司汀、洛莫司汀、鏈佐星；鉑復(fù)合物類，如順鉑、卡鉑；生物還原烷化劑(alkylator)，如絲裂霉素和丙卡巴肼、達(dá)卡巴嗪和六甲蜜胺；DNA鏈斷裂劑包括博來霉素；DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑包括下列類型嵌入劑，如安吖啶、放線菌素D、柔紅霉素、阿霉素、伊達(dá)比星和米托蒽醌；非嵌入劑，如依托泊甙和替尼泊甙。
DNA小溝結(jié)合劑是普卡霉素。
抗代謝劑通過兩種主要機制中的一種或另一種而干擾核酸的產(chǎn)生。某些藥物可抑制DNA合成的直接前體脫氧核苷三磷酸的產(chǎn)生，從而抑制DNA復(fù)制。某些化合物與嘌呤或嘧啶足夠相象，從而可在核苷酸組成代謝途徑中代替它們。隨后，這些類似物可代替正常的組分而進(jìn)入DNA和RNA?？捎糜诒景l(fā)明的抗代謝劑包括葉酸拮抗劑，如氨甲蝶呤和三甲曲沙；嘧啶拮抗劑，如氟尿嘧啶、氟脫氧尿苷、CB3717、阿扎胞苷、阿糖胞苷和氟尿苷；嘌呤拮抗劑包括巰嘌呤、6-硫鳥嘌呤、氟達(dá)拉濱、噴司他?。惶切揎椀念愃莆锇–yctrabine、氟達(dá)拉濱；核糖核苷酸還原酶抑制劑包括羥基脲。
微管蛋白交互劑通過結(jié)合于微管蛋白(一種可聚合形成細(xì)胞微管的蛋白質(zhì))上的特異性位點而起作用。微管是關(guān)鍵的細(xì)胞結(jié)構(gòu)單元。當(dāng)交互劑結(jié)合于該蛋白質(zhì)時，細(xì)胞不能形成微管。微管蛋白交互劑包括長春新堿和長春堿(兩者都是生物堿)，以及紫杉醇(Paclitaxel)。
激素類藥也可用于治療癌癥和腫瘤。它們可用于激素易感性腫瘤，并且通常是從天然來源衍生的。它們包括雌激素、結(jié)合雌激素和炔雌醇和己烯雌酚、氯烯雌醚和Idenestrol；孕激素類，如己酸羥孕酮、甲羥孕酮和甲地孕酮；雄激素類，如睪酮、丙酸睪酮、氟甲睪酮、甲睪酮；腎上腺皮質(zhì)類甾醇類衍生自天然的腎上腺皮質(zhì)醇或氫化可的松?？梢允褂盟鼈?，因為它們有消炎的優(yōu)點而且某些能夠抑制有絲分裂并抑制DNA合成。這些化合物包括潑尼松、地塞米松、甲潑尼龍、和潑尼松龍。
促黃體生成激素釋放激素類藥或促性腺激素釋放激素拮抗劑，主要被用于治療前列腺癌。其中包括乙酸亮丙瑞林(leuprolide)和乙酸戈舍瑞林。它們阻止睪丸(testes)中生物合成類固醇。
抗激素類藥(antigen)包括抗雌激素類藥如他莫昔芬(Tamosifen)；抗雄激素類藥如氟他胺；和抗腎上腺劑如米托坦和氨魯米特。
羥基脲似乎主要通過抑制核糖核苷酸還原酶而起作用。
天冬酰胺酶是一種將天冬酰胺轉(zhuǎn)變成無功能的天冬氨酸從而阻斷腫瘤中蛋白質(zhì)合成的酶。
D.增效劑“增效劑”可以是任何這樣的物質(zhì)，它能提高或增加藥物組合物的效力。它們包括作用于免疫系統(tǒng)的免疫抑制劑或物質(zhì)。一種這樣的增效劑是曲普利啶及其順式異構(gòu)體，它們可與化療劑以及1H-1，2，4-三唑衍生物組合使用。曲普利啶在US 5,114,951(1992)中有描述。
另一種增效劑是丙考達(dá)唑，1H-苯并咪唑-2-丙酸；[β-(2-苯并咪唑)丙酸；2-(2-羧乙基)苯并咪唑；丙帕唑(propazol)]。丙考達(dá)唑是一種針對病毒和細(xì)菌感染的、非特異的活性免疫保護劑，它可與此處所述的組合物一起使用。它僅與1H-1，2，4-三唑衍生物一起使用時或者還與化療劑組合使用時，在治療癌癥、腫瘤、白血病和病毒感染方面是有效的。
丙酸及其鹽和酯也可與此處所述的藥物組合物一起使用。
還可在這些組合物中加入抗氧化維生素如維生素A、C和E，以及β-胡蘿卜素。
E.劑量本發(fā)明可用任何合適的劑量。疾病類型(癌癥、白血病或病毒)、化合物類型、載體類型以及數(shù)量可以很不相同，這取決于溫血動物或人的種類、體重和待治療的腫瘤等。一般，合適的劑量是約2-400毫克(mg)/千克(kg)體重。較佳地，使用約15-150毫克/千克體重。對于化療劑，較低劑量如0.5-400毫克/千克體重是合適的。一般，給人的劑量低于給小溫血動物如小鼠的劑量。劑量單位包括一種化合物，或者該化合物與其他化合物或其他抑制癌癥的化合物形成的混合物。劑量單位還可含有稀釋劑、填充劑(extender)、載體等。劑量單位可以是固體或凝膠形式，如丸劑、片劑、膠囊等，或者是液體形式，它們適合口服給藥、直腸給藥、局部給藥、靜脈內(nèi)注射或腸胃外給藥、或者注射在腫瘤之中或其周圍。
化療劑與抗癌化合物之比和范圍，取決于化療劑的類型以及待治療的癌癥類型。
F.釋藥劑型抗癌化合物和化療劑一般與藥學(xué)上可接受的載體混合。載體可以是固態(tài)的或液態(tài)的，一般根據(jù)所用的給藥方式而選擇類型。也可用脂質(zhì)體來釋放該組合物。活性藥物可以以片劑或膠囊形式(作為附聚的粉末)，或者以液體形式一起給藥。固態(tài)載體的例子包括乳糖、蔗糖、明膠和瓊脂。膠囊或片劑可以容易地制備，并且便于吞咽或咀嚼；其他的固體形式包括顆粒和疏松粉末(bulk powder)。片劑可含有適當(dāng)?shù)恼澈蟿?、潤滑劑、稀釋劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑、流動誘導(dǎo)劑(flow-inducing agent)和助融劑(melting agent)。液體劑型的例子包括在水、藥學(xué)上可接受的脂肪或油、醇或其他有機溶劑(包括酯)中的溶液或懸浮液、乳劑、糖漿、酏劑、用非泡騰顆粒再生的溶液和/或懸浮液、以及用泡騰顆粒再生的泡騰制劑。這樣的液體劑型可含有，例如，適當(dāng)?shù)娜軇?、防腐劑、乳化劑、懸浮劑、稀釋劑、甜味劑、增稠劑和助融劑?？诜┬涂珊{(diào)味劑和著色劑。腸胃外和靜脈內(nèi)給藥的劑型還可含有礦物質(zhì)和其他物質(zhì)，以便使它們與注射或所選的釋藥系統(tǒng)類型相配伍。
可用于配制本發(fā)明口服劑型的、具體的藥學(xué)上可接受的載體和賦形劑的例子，在美國專利No.3,903,297(1975年9月2日授予Robert)中有描述。用于制造本發(fā)明的有用劑型的技術(shù)和組合物，在下列文獻(xiàn)中有描述《7種現(xiàn)代制劑》(7Modern Pharmaceutics).第9和10章(Banker&Rhodes編輯，1979)；Lieberman等人，《藥物劑型片劑》(Pharmaceutical Dosage FormsTablets)(1981)；和Ansel，《藥物劑型導(dǎo)論》(Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms)2版(1976)。
G.治療方法治療方法可以是，治療具體的待治療癌癥或腫瘤類型的任何合適的有效方法。治療可以是口服給藥、直腸給藥、局部給藥、腸胃外給藥、或靜脈內(nèi)給藥、或者注射在腫瘤部位之中等等。施用有效量藥物的方法還取決于待治療的腫瘤。據(jù)信，通過與合適的載體、其他抑制癌癥的化合物或方便給藥的稀釋劑一起配制，并通過靜脈內(nèi)、皮下或肌內(nèi)施用1H-1，2，4-三唑化合物的腸胃外治療方法，是將化合物施用于溫血動物的優(yōu)選方法。
治療病毒感染的方法也可以是口服給藥、直腸給藥、局部給藥、腸胃外給藥、或靜脈內(nèi)給藥。一種優(yōu)選的治療病毒感染的方法是施用丙考達(dá)唑和丙環(huán)唑。
可與1H-1，2，4-三唑衍生物合用的其它殺真菌劑包括例如苯并咪唑衍生物，如噻菌靈、苯菌靈、多菌靈；N-膦酰甘氨酸化合物如草甘膦，以及除草劑諸如N-氯苯基甲氨酸化合物和N-氯苯基硫代甲氨酸化合物如氯苯胺靈(chloroprofam)。
它們還可與灰黃霉素一起使用。
用人流感病毒進(jìn)行抗病毒評價使用在收到時為5-7周齡的雌性CD(小鼠，Charles River Breeding Laboratories，Portage，MI)。在試驗開始時，小鼠約6-9周齡而體重約20-28克。在研究中所用的所有小鼠年齡大小相差不超過10天。每6只小鼠被關(guān)在具有墊草的籠中。隨意地給小鼠喂養(yǎng)鼠食譜5002(PMI，St.Louis Missouri)。隨意地將新鮮水供給小鼠。
用人流感病毒AT2/臺灣/1/64株來攻擊小鼠。該病毒機體被儲藏在約-70℃下。在感染攻擊之前，將一小瓶冷凍原液融化，并用緩沖鹽溶液稀釋至合適的濃度。小鼠用氟烷進(jìn)行麻醉，然后鼻內(nèi)施用50微升的病毒攻擊劑量。
按下面提供的濃度和體積施用試驗樣品。在第1-14天，10只小鼠/組通過口腔灌洗而接受試驗樣品。與接受試樣的小鼠相比，鹽水對照組動物(10只)接受體積相當(dāng)?shù)柠}水。試樣的給藥間隔約24小時。第0天，在第二次施用試樣或鹽水之后4小時，所有的小鼠都進(jìn)行鼻內(nèi)(病毒)攻擊，使用的劑量是計算出可產(chǎn)生約90％死亡率的感染劑量。在感染攻擊后21天內(nèi)每天觀察動物的死亡或瀕死情況。在給藥之后在第1天觀察測試動物2次，在第0天觀察3次，之后每天觀察2次。在試驗中死去的小鼠將棄去而不解剖。
與鹽水對照組(沒有小鼠存活)相比，在劑量為175毫克/千克丙環(huán)唑時，40％小鼠存活。在350毫克/千克劑量下，57％小鼠存活。
用鼻病毒進(jìn)行抗病毒評價在對鼻病毒A-1型，細(xì)胞系WI-38進(jìn)行的體外篩選中，丙環(huán)唑在32微克/毫升下就有效。陽性對照是Abbot Company的A-36683，(S，S)-1，2-雙(5-甲氧基-2-苯并咪唑基)-1，2-乙二醇。A-36683的治療指數(shù)(therapeutic index)為1000-3200。丙環(huán)唑的治療指數(shù)為1-3。(參見Schleicher等人，《應(yīng)用微生物學(xué)》AppliedMirobiology，23，No.1，113-116(1972))體外人腫瘤集落形成單位試驗將從病人中取出的塊狀腫瘤切成2-5毫米的小塊，并立刻置于添加了10％經(jīng)熱滅活的新生牛血清和1％青霉素/鏈霉素的McCoy氏培養(yǎng)基5A中。在4小時內(nèi)，用剪刀對這些塊狀腫瘤進(jìn)行機械解離，強迫通過No.100的不銹鋼篩網(wǎng)，通過25機號(gauge)的針，然后用上述的McCoy氏培養(yǎng)基進(jìn)行洗滌。用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)獲得腹水、胸膜液、心包液和骨髓。這些體液和骨髓被置于滅菌容器中，容器中含有10單位無防腐劑的肝素/毫升惡性體液或骨髓。在150×g下離心10分鐘之后，收獲細(xì)胞并用添加10％經(jīng)熱滅活的小牛血清的McCoy氏培養(yǎng)基進(jìn)行洗滌。在血細(xì)胞計數(shù)器上用臺盼藍(lán)測得細(xì)胞懸浮液的存活情況。
待克隆的細(xì)胞被懸浮在0.3％瓊脂和補充有15％經(jīng)熱滅活的馬血清、青霉素(100單位/毫升)、鏈霉素(2毫克/毫升)、谷氨酰胺(2mM)、胰島素(3單位/毫升)、天冬酰胺(0.6毫克/毫升)和HEPES緩沖液(2mM)的滋養(yǎng)(enriched)CMRL1066培養(yǎng)基中。為進(jìn)行連續(xù)暴露測試，向上述混合物中加入每種化合物。細(xì)胞被置于35毫米培養(yǎng)皿的瓊脂頂層，位于防止成纖維細(xì)胞生長的瓊脂底層之上。對于每個數(shù)據(jù)點制備3個平板。將平板置于37℃恒溫箱中，在第14天取出，計算每個平板上集落的數(shù)目。將在3個用化合物處理的平板上形成的集落數(shù)目(定義為50個細(xì)胞)，與3個對照平板上形成的集落數(shù)目進(jìn)行比較，估算出在該化合物濃度下集落存活的百分比。3個陽性對照平板被用于確定存活率。將200微克/毫升的原釩酸鈉用作陽性對照。如果與未處理的對照相比時在陽性對照中有＜30％集落，就可對試驗進(jìn)行評價。
在單一劑量試驗中，在0.5微克/毫升和5.0微克/毫升的濃度下，丙環(huán)唑在該試驗中對腫瘤無效(0/1)。在連續(xù)暴露試驗中，于50.0微克/毫升濃度下，丙環(huán)唑?qū)Y(jié)腸、肺(非小細(xì)胞(non-small cell)黑色素瘤和卵巢癌有效?？傮w上，在8個中的6個有≤50％的存活率。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于，它含有藥學(xué)上可接受的載體、0.5毫克/千克至約400毫克/千克體重的化療劑、以及約2-400毫克/千克體重的下式三唑
式中，Z是選自下組的亞烷基CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH(CH3)-和-CH2-CH(烷基)，其中該烷基有1至約10個碳原子；而Ar是選自下組的基團苯基、取代苯基、噻吩基、鹵代噻吩基、萘基和芴基。
2.如權(quán)利要求l所述的藥物組合物，其特征在于，該1H-1，2，4-三唑選自下組1-[2-(2，4-二氯苯基)-1，3-二氧戊環(huán)-2-基甲基]-1H-1，2，4-三唑、1-[2-(2，4-二氯苯基)-4-甲基-1，3-二氧戊環(huán)-2-基甲基]-1H-1，2，4-三唑、1-[2-(2，4-二氯苯基)-4-乙基-1，3-二氧戊環(huán)-2-基甲基]-1H-1，2，4-三唑、1-[2-(2，4-二氯苯基)-4-丙基-1，3-二氧戊環(huán)-2-基甲基]-1H-1，2，4-三唑、1-[2-(2，4-二氯苯基)-4-戊基-1，3-二氧戊環(huán)-2-基甲基]-1H-1，2，4-三唑以及它們在治療上有活性的酸加成鹽。
3.如權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于，它用于抑制腫瘤生長。
4.如權(quán)利要求1、2或3所述的藥物組合物，其特征在于，該藥學(xué)上可接受的酸加成鹽選自鹽酸鹽、溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、磺酸鹽、甲酸鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、蘋果酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽、水楊酸鹽、抗壞血酸鹽及其混合物。
5.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物，其特征在于，該化療劑選自DNA-交互劑、抗代謝劑、微管蛋白-交互劑、激素類藥、天冬酰胺酶或羥基脲。
6.如權(quán)利要求1、2、3、4或5所述的藥物組合物，其特征在于，該化療劑選自下組天冬酰胺酶、羥基脲、順鉑、環(huán)磷酰胺、六甲蜜胺、博來霉素、放線菌素D、阿霉素、依托泊甙、替尼泊甙和普卡霉素。
7.如權(quán)利要求1、2、3、4或5所述的藥物組合物，其特征在于，該化療劑選自下組氨甲蝶呤、氟尿嘧啶、氟脫氧尿苷、CB3717、阿扎胞苷、阿糖胞苷、氟尿苷、巰嘌呤、6-硫鳥嘌呤、氟達(dá)拉濱、噴司他丁、Cyctrabine和氟達(dá)拉濱。
8.如權(quán)利要求1、2、3、4、5、6或7所述的藥物組合物，其特征在于，還含有增效劑。
9.一種治療溫血哺乳動物的癌癥的方法，其特征在于，它包括施用安全有效量的權(quán)利要求1、2、3、4、5、6、7或8所述的藥物組合物。
10.一種治療病毒感染的方法，其特征在于，它包括施用權(quán)利要求1、2、3、4、5、6、7或8所述的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及在哺乳動物中抑制癌癥和腫瘤生長的藥物組合物。此組合物包含1H－1,2,4－三唑衍生物和安全有效量的化療劑。還可使用增效劑來提高藥效。該三唑類和增效劑化合物還可用于治療病毒感染。
文檔編號A61K31/4178GK1192142SQ96196038
公開日1998年9月2日 申請日期1996年7月30日 優(yōu)先權(quán)日1995年8月3日
發(fā)明者J·B·卡姆登 申請人:普羅克特和甘保爾公司