專利名稱：用于治療t細胞介導(dǎo)疾病的制劑與方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及T細胞介導(dǎo)疾病的疫苗治療，具體地說涉及含有與T細胞介導(dǎo)疾病(如自身免疫病)發(fā)病相關(guān)的T細胞所識別的抗原和作為生物活性載體的可代謝脂質(zhì)乳濁液的醫(yī)療制劑。
自身免疫失調(diào)，如胰島素依賴性糖尿病(IDDM或I型糖尿病)，腦脊髓多發(fā)性硬化，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和甲狀腺炎，其特點是免疫系統(tǒng)對內(nèi)源抗原有反應(yīng)性，結(jié)果導(dǎo)致組織損傷。這些對自身抗原的免疫反應(yīng)是通過對自身反應(yīng)性T淋巴細胞的持續(xù)激活而得以維持的。
CD4“輔助”型T細胞依其受刺激后分泌的特征性細胞因子的不同可分為二組(Mosmann and Coffman，1989)。TH1細胞分泌的IL-2可誘導(dǎo)T細胞增殖，而其分泌的IFN等細胞因子則介導(dǎo)組織炎癥。TH2細胞則不同，它分泌IL-4和IL-10。IL-4輔助T細胞分泌一定類型的IgG同種型抗體，并且抑制TH1炎癥性細胞因子的產(chǎn)生(Banchereau等，1994)。IL-10通過影響巨噬細胞抗原呈作用和炎癥因子的產(chǎn)生而間接抑制TH1的活化(Moore等，1993)。正是TH1細胞導(dǎo)致器官特異的自身免疫疾病的發(fā)生。TH1型反應(yīng)亦見于其他T細胞介導(dǎo)疾病如接觸性皮炎(Romagnani，1994)。
適于作為自身免疫的特異性免疫治療的肽正是那些被自身免疫性疾病相關(guān)的T細胞所識別的肽。每一種自身免疫病有其理想的肽適于治療。如多發(fā)性硬化涉及與髓鞘質(zhì)堿性蛋白(MBP)等自身抗原反應(yīng)的T細胞(Allegrefa等，1990)，它就需要MBP肽來治療，如Ota等(1990)對此就有過敘述。
本發(fā)明人證實，自身免疫疾病，如I型糖尿病，可使用置于油性載體上的合適的肽而得到治療。NOD小鼠因自身免疫T細胞攻擊胰島中產(chǎn)生胰島素的β細胞而自然誘發(fā)糖尿病。這種自身免疫攻擊涉及到對許多自身抗原，包括60K D熱激蛋白(hsp60)以及谷氨酸脫羧酶(GAD)，有反應(yīng)性的T細胞。因此，如在NOD/Lt品系自發(fā)產(chǎn)生的糖尿病，就可以用相當于人hsp60序列位點437-460的被稱為p277的肽進行治療(PCT專利公布號WO90/10449；D.ELias和I.R.Co hen，NOD小鼠糖尿病的肽治療，The Lancet 343704-706，1994)；或采用p277的變體(位點6和/或11的Cys殘基被Val殘基取代，和/或位點16的Thr殘基被Lys取代，見PCT公布號WO96/19236)進行治療；或采用稱為p12和p32的肽(分別相當于人hsp60序列位點166-185，466-485)進行治療。見本申請申請人的以色列專利申請?zhí)?14,407，于1995年6月30日申請。亦見PCT申請?zhí)朠CT/US96...，申請于1996年7月1日(要求上述以色列申請?zhí)?14,407的優(yōu)先權(quán))，其全部內(nèi)容引入本文作為參考。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，將p12，p32和p277或其變體，置于如不完全弗氏佐劑(IFA)的礦物油乳濁液這樣的油性載體之上皮下施用，這種治療IDDM的肽療法是有效的。然而，IFA以及完全弗氏佐劑(CFA，含有各種數(shù)量的滅活的分枝桿菌菌體的礦物油制劑)不允許用于人體，因為礦物油是不可代謝的，在體內(nèi)不被降解。因而，人們希望發(fā)現(xiàn)用于肽治療的可代謝的有效載體。
某些脂肪乳濁液作為人靜脈營養(yǎng)補給已使用了多年。已商品化的2種脂肪乳濁液。稱為Intralipid(Intralipid乃是瑞典KabiPharmacia公司用于靜脈營養(yǎng)補給的一種脂肪乳濁液的注冊商標，US專利號3,169,094中有描述)和Lipofundin(德國B，Braun Melsungen公司的注冊商標)，均以大豆油作為脂肪(1000ml蒸餾水含有100或200g分別為10％或20％)。Intralipid中以卵黃磷脂作為乳化劑(12g/L蒸餾水)，而Lipofundin則使用卵黃卵磷脂。在Intralipid和Lipofundin中均添加甘油(25g/l)以達等滲態(tài)。這些脂肪乳濁液十分穩(wěn)定，已用于胃腸道或中樞紊亂病人的靜脈營養(yǎng)補給，因為這些病人不能通過正常飲食獲取營養(yǎng)，只能靠這些能量維持生命。正常劑量每天為1升。
1978年2月14日頒發(fā)給Wretlind等的US專利4073943，以及1990年5月29日對1979年9月18日頒發(fā)給Wretlind等的專利4,168,308重新頒發(fā)的專利Re,32,393，二者均闡述了這樣的一個載體系統(tǒng)；它能促進胃腸外，特別是靜脈，使用具有藥理活性的脂溶性制劑；它是一個穩(wěn)定的油/水乳濁液，包含分散于親水相的呈藥理惰性的類脂疏水相；該乳濁液中的脂質(zhì)均勻分散，平均粒徑小于1微米，從而獲得滿意的治療效應(yīng)的迅速啟動；該載體系統(tǒng)是與有效劑量的所說的以疏水相中的一定比率溶于類脂之中的藥理活性脂溶性制劑一起使用的，而治療效果來自上述活性制劑的有效劑量。據(jù)稱，此載體系統(tǒng)適用于水不溶制劑，或者水溶脂溶性藥理活性制劑，但該制劑主要溶于脂相。這樣的藥理活性劑有抑制劑、麻醉劑、止痛劑、刺激劑、解痙劑、肌肉松馳劑、血管松馳劑以及診斷試劑(如x-射線襯劑)等。據(jù)說該系統(tǒng)在促進制劑的診斷或治療效應(yīng)的快速啟動的同時，伴隨有對體組織損傷的減少。
Intralipid被提議用作疫苗的幾種佐劑的非刺激性載體，比如6-O-(2-十四烷基-十六烷酰基)-和6-O-(3-羥基-2-二十二烷基二十六烷酰)-N-乙酰胞壁酰-L-丙氮酰-D-異谷氨酰胺(Tsujimoto等，1986和1989)，avridine(Woodard and Jasman，1985)，N，N-2-二十八烷基-N’，N’-雙(2-羥乙基)丙二胺(CP-20，961)(德國專利申請DE2945788；Anderson and Reynolds，1979；Niblack等，1979)。Kristiansen and Sparrman 1983揭示血凝素和神經(jīng)氨酸苷酶在吸附到含有Intralipid的脂質(zhì)顆粒上后對小鼠的免疫原性大大提高。
所有上述出版物都沒有闡述Intralipid作為肽載體用于自身免疫病的治療，也沒有揭示Intralipid可以介導(dǎo)免疫反應(yīng)從TH1型反應(yīng)向TH2型反應(yīng)的轉(zhuǎn)換。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，可代謝的脂質(zhì)乳濁液，如Intralipid和Lipofundin，可以作為對自身免疫病和其它TH1 T細胞介導(dǎo)的疾病進行肽治療的載體。進一步發(fā)現(xiàn)，該活性與TH1向TH2細胞因子轉(zhuǎn)換有關(guān)。
因而本發(fā)明涉及一種用于治療自身免疫疾患或其它T細胞介導(dǎo)疾病的醫(yī)用制劑，包括一種肽或其它抗原以及一種生物活性脂質(zhì)載體，其中該肽或其它抗原是一種與該疾患發(fā)病機理相關(guān)的炎癥T細胞識別的肽或抗原，而該生物活性脂質(zhì)載體是一種脂肪乳濁液，包含10-20％植物和/或動物來源的甘油三酯，1.2-2.4％植物和/或動物來源的磷酯，2.25-4.5％滲透壓調(diào)節(jié)劑，0-0.05％防氧化劑，加無菌水至100％。
植物或動物來源的甘油三酯和磷脂可取自任何適宜的植物油，比如大豆油，棉籽油，可可油或橄欖油，或取自卵黃或牛血清。優(yōu)選該三酰甘油來自大豆油，磷脂則來自大豆油或卵黃。三酰甘油/磷脂重量比最好是8∶1。
任何合適的滲透壓調(diào)節(jié)劑都可以加入該脂質(zhì)乳濁液，但最好是甘油，木糖醇或山梨醇。該脂肪乳濁液可任選地含有一種抗氧化劑，此如0.05％生育酚。
作為本發(fā)明的一個具體方案，前面定義的脂肪浮濁液可經(jīng)離心處理，如10,000g或更高，這樣形成較小的富含甘油三酯(約95％甘油三酯)的上層，下層水分散相則富含磷脂，其甘油三酯/磷酯之比約為1∶1。下層水分散相被用作本發(fā)明制劑的脂質(zhì)載體。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，上述制備劑是用于治療胰島素依賴性糖尿病(IDDM)的，它包含一種衍生于與IDDM發(fā)病機理相關(guān)的炎癥T細胞所識別的人熱激蛋白60(hsp60)的肽，其中該肽為選自下表的一組肽表1肽 SEQ ID NO 氨基酸序列(單字母代碼)P3 1(31-50) KFGADARALMLQGVDLLADAp101(136-155) NPVEIRRGVMLAVDAVIAELp111(151-170) VIAELKKQSKPVTTPEEIAQp121(166-185) EEIAQVATISANGDKEIGNIp141(195-214) RKGVITVKDGKTLNDELEIIp181(255-274) QSIVPALEIANAHRKPLVIIAp201(286-305) LVLNRLKVGLQVVAVKAPGFp241(346-365) GEVIVTKDDAMLLKGKGDKAp291(421-440) VTDALNATRAAVEEGIVLGGp301(436-455) IVLGGGCALLRCIPALDSLTp321(466-485) EIIKRTLKIPAMTIAKNAGVp351(511-530) VNMVEKGIIDPTKVVRTALLp391(343-366) GKVGEVIVTKDDAMp277 1(437-460) VLGGGCALLRCIPALDSLTPANEDp277(Val6) * 2VLGGGVALLRCIPALDSLTPANEDp277(Val11) ** 3VLGGGCALLRVIPALDSLTPANEDp277(Val6-Val11)***4VLGGGVALLRVIPALDSLTPANED* SEQ ID NO1的437-460，其中C-442變?yōu)閂** SEQ ID NO1的437-460，其中C-447變?yōu)閂***SEQ ID NO1的437-460，其中C-442，C-447變?yōu)閂。
本發(fā)明還涉及對患有自身免疫疾病或其它TH1介導(dǎo)的疾病的病人的治療方法，包括給該病人施用有效量的本發(fā)明所述的醫(yī)療制劑。
附圖簡要說明

圖1顯示，用存在于(I)Intralipid或(II)磷酸鹽緩沖液(PBS)中的肽p277(Val6-Val11)處理NOD小鼠后，抗體的產(chǎn)生情況。敘述見實施例2。
圖2顯示，用Intralipid中的肽p277(Val6-Val11)處理NOD小鼠，誘導(dǎo)TH2依賴性抗體同種型產(chǎn)生。敘述見實施例3。
圖3A-B顯示，p277(Val6-Val11)/Intralipid治療導(dǎo)致NOD小鼠對p277(Val6-Val11)肽反應(yīng)的T細胞所產(chǎn)生的細胞因子模式的特異性轉(zhuǎn)換。敘述見實施例4。圖3A顯示，用存在于Intralipid中的p277(Val6-Val11)肽處理小鼠和用p277(Val6-Val11)肽溫育脾細胞后，觀察到TH1細胞因子(IL-2，IFN-γ)的減少，以及TH2細胞因子(IL-4，IL-10)的增加。圖3 B顯示，用Inhalipid中的p277(Val6-Val11)肽處理小鼠，和用ConA溫育脾細胞后，沒有任何細胞因子的改變。
圖4顯示，在用Intralipid中的p277(Val6-Val11)肽處理后，T細胞對p277(Val6-Val11)自發(fā)增殖反應(yīng)減弱，敘述見實施例5。
圖5顯示，用Intralipid中的髓鞘質(zhì)堿性蛋白的肽p71-90處理小鼠降低了實驗性自身免疫腦炎(EAE)的嚴重性。敘述見實施6。
圖6顯示，用IFA中的髓鞘質(zhì)堿性蛋白的肽p71-90處理小鼠降低了實驗性自身免疫腦炎(EAE)的嚴重性，敘述了實施例6。
根據(jù)本發(fā)明，我們發(fā)現(xiàn)用合適載體承載的p277(Val6-Val11)肽處理可以向下調(diào)節(jié)T細胞對hsp60和GAD表位的自發(fā)性增殖反應(yīng)，破壞了針對hsp60、GAD和胰島素的自身抗體的產(chǎn)生。致病過程的扼制與T細胞耐受或麻痹無關(guān)，而是與p277(Val6-Val11)反應(yīng)的自身免疫T細胞產(chǎn)生的細胞因子從TH1樣模式(IL-2，IFN-γ)向TH2樣模式(IL-4，IL-10)的轉(zhuǎn)變有關(guān)。這種調(diào)節(jié)是免疫特異性的處理小鼠對細菌hsp60肽的自發(fā)性T細胞反應(yīng)仍保持TH1模式。因此，針對幾種自身抗原的自身免疫為特征的糖尿病發(fā)生過程可以通過使用這些抗原之一而得到治療，例如使用肽p277(Val6-Val11)。
p277(Val6-Val11)治療與對p277(Val6-Val11)反應(yīng)性從T細胞增殖向抗體的改變之間關(guān)聯(lián)，表明治療效果產(chǎn)生于處理小鼠自身免疫T細胞產(chǎn)生的主要細胞因子的轉(zhuǎn)變。TH1細胞分泌的IL-2誘導(dǎo)T細胞增殖，而分泌的IFN-γ等細胞因子則介導(dǎo)組織炎癥，因而導(dǎo)致疾病發(fā)生；相比之下TH2細胞則分泌IL-4和IL-10。IL-4幫助B細胞分泌某些IgG同種型抗體，而抑制TH1炎癥細胞因子的產(chǎn)生。IL-10通過影響巨噬細胞抗原提呈作用和炎癥細胞因子的產(chǎn)生而間接抑制TH1活化。因此，TH1細胞抑制TH2活性(見Liblau等，1995)。分析p277(Val6-Val11)治療前后所產(chǎn)生的抗體同種型的結(jié)果支持了TH1向TH2樣行為轉(zhuǎn)換的事實。
結(jié)合于脂質(zhì)載體上的肽的療效機理被證明涉及TH1→TH2細胞因子的轉(zhuǎn)換，這一事實提供了利用TH1→TH2轉(zhuǎn)換作為治療的有效性和誘導(dǎo)了有益反應(yīng)的證據(jù)的可能性。換言之，TH1→TH2轉(zhuǎn)換可以作為對治療有反應(yīng)的替代性標志。例如，缺乏轉(zhuǎn)換表示需要進行第二次治療。見以色列專利申請?zhí)?14,459，于1995年7月5日申請。亦可見于同一日期申請的相應(yīng)的PCT申請，其全部內(nèi)容引入本文作為參考。
本發(fā)明的脂質(zhì)乳濁液，當作為疫苗佐劑與被治療的疾病所涉及的T細胞能與之反應(yīng)的抗原物質(zhì)一起使用時，介導(dǎo)了處理前TH1 T細胞反應(yīng)向處理后TH2 T細胞反應(yīng)的轉(zhuǎn)換。這一發(fā)現(xiàn)證實，這樣的脂質(zhì)乳濁液是耐受原性的生物活性載體，可被用在治療任何TH1介導(dǎo)的疾病的疫苗中。在這樣的疫苗中，抗原提供療效的免疫特異性，而本發(fā)明的生物活性載體則提供了生物學(xué)效應(yīng)，即TH1→TH2轉(zhuǎn)換。由于本發(fā)明的上述生物活性載體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)換，一系列自身反應(yīng)性疾病可以通過使用一種可誘導(dǎo)T細胞細胞因子轉(zhuǎn)換的抗原/載體組合加以治療。
本發(fā)明的一個優(yōu)選用途為用于治療由TH1細胞介導(dǎo)的器官特異性的自身免疫病。這樣的疾病包括但不限于諸如IDDM、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化和甲狀腺炎等自身免疫性疾病。用于這種治療的肽是一種自身抗原肽。因此，舉例來講，對IDDM而言，該肽是上面提到的p277肽，或其纈氨酸替代類似物p277(Val6-Val11)；對多發(fā)性硬化而言，該肽衍生于髓鞘質(zhì)堿性蛋白；對甲狀腺炎而言，該肽被認為衍生于甲狀腺球蛋白；對風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎而言，自身抗原原則衍生于分枝桿菌，例如結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculo sis)。
該抗原是否為肽并不重要。因此，舉例而言，對TH1介導(dǎo)的過敏反應(yīng)，其結(jié)果是皮膚過敏和發(fā)炎，如接觸性皮炎，可以使用這樣的疫苗來治療包括刺激性抗原和本發(fā)明的可以引起細胞因子反應(yīng)從TH1型向TH2型轉(zhuǎn)換的生物活性載體。因此，雖然病人繼續(xù)維持針對抗原的高水平的抗體，但造成皮膚發(fā)炎的炎癥性T細胞反應(yīng)則被抑制。
因而，本發(fā)明的耐受原性生物活性載體可以在需要對T細胞攻擊的抗原產(chǎn)生耐受的任何時候使用，即，當疫苗被用以限制T細胞介導(dǎo)疾病，特別是TH1細胞介導(dǎo)疾病的任何時候。如果可以確定在移植物排拆或移植物抗宿主疾病中是何種抗原激活此反應(yīng)，那么使用這樣的抗原和本發(fā)明的載體就可以指望促使從不希望的炎癥性TH1反應(yīng)向更為期望的TH2反應(yīng)轉(zhuǎn)換，不管在這種情況下能與T細胞反應(yīng)的抗原數(shù)目總體上的復(fù)雜性。
為了確定肽激活后T細胞分泌的細胞因子，用體外激活分析法檢測人外周血中的淋巴細胞。從置于ficol-hypaque中的肝素化全血中分離外周血淋巴細胞，與5-50μg/ml濃度的供試肽培養(yǎng)。在不同時間收集培養(yǎng)細胞上清液，按ELISA或生物活性檢測法檢驗不同細胞因子的活性。
可以用于本發(fā)明制劑的脂肪乳濁液的例子包括，但不限于供靜脈營養(yǎng)補給的商品化的Intralipid和Lipofundin以及前面提到的US專利N0 3,169,096、4,073,943和4,168,308中描述的脂肪乳濁液，其全部內(nèi)容引入本文作為參考。然而，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)這些以前用于靜脈營養(yǎng)補給的可代謝脂類，可以有效地作為載體用于T細胞介導(dǎo)的疾病的治療，這是完全出乎意料的。類似地，這些制劑為可以介導(dǎo)TH1→TH2轉(zhuǎn)換的耐受原性生物活性載體這一發(fā)現(xiàn)也是完全出乎意料的。
本發(fā)明的脂肪乳濁液最好現(xiàn)配現(xiàn)用，或者貯于與空氣隔絕的容器密封保存后使用。Intralipid暴露于空氣的長期貯存會造成pH降低以及生物活性相應(yīng)降低。
在一具體方案中，本發(fā)明的生物活性載體是這樣的乳濁液含10％大豆油，1.2％卵黃磷脂，2.5％甘油，加滅菌水至100ml(Intralipid 10％)。另一具體方案中，載體是這樣的乳濁液含10％大豆油，2.4％卵黃磷脂，2.5％甘油，加滅菌水至100ml。
還有一方案，該載體是這樣的乳濁液含有5％大豆油，動物來源的5％甘油三酯，例如5％來自黃油的中等鏈長甘油三酯，1.2％卵黃磷脂，2.5％甘油和加滅菌水至100ml(Lipofundin 10％)。
在本發(fā)明的另一具體方案中，該載體為本文限定的原始脂肪濁液經(jīng)離心(如10,000g或更高)得到的加工后的脂質(zhì)乳濁液。其中，富含甘油三酯(約95％)的一薄層形成于上，下層含約1∶1某油三酯/磷脂的富集磷脂的水相分散層。分離兩相，富集磷脂的水分散層即被用作載體。
本發(fā)明的制劑可含有一種或多種肽。例如，對于IDDM的治療來說，該制劑可含有一種或多種肽p12、p32、p277、p277(Val6)、p277(Val11)、p277(Val6-Val11)、或表1的其它肽中的任意一種。在一優(yōu)選實施方案中，用于治療IDDM的制劑包括一種肽p277或p277(Val6-Val11)及一種脂肪乳濁液，該脂肪乳濁液含有10％大豆油，1.2％卵黃磷脂，2.5％甘油，加滅菌水至100ml(Intralipid10％)。
本發(fā)明還涉及將上述本文所限定的脂肪乳濁液，或經(jīng)離心制備的加工后磷脂富集的水分散相用于制備治療自身免疫疾病或其它TH1介導(dǎo)疾病的醫(yī)療制劑，該制劑包括一種或多種肽或其它抗原和所說的作為載體的脂肪乳濁液或加工后的水分散相。
本發(fā)明可由以下非限定性的實施例進一步說明。實施例1使用油中p277(Val6-Val11)進行I型糖尿病的肽治療驗證了各種脂質(zhì)制劑作為載體對NOD小鼠糖尿病肽治療的效果。在這個模型中，胰臟中產(chǎn)生胰島素的β-細胞的自身免疫破壞是由T淋巴細胞介導(dǎo)的。5-8周齡胰島周圍發(fā)生炎癥性浸潤，到14-20周齡導(dǎo)致胰島素缺乏的β-細胞損傷和外顯糖尿病都已顯現(xiàn)出來，到了35-40周齡則100％的雌性NOD小鼠都受到影響。
NOD雌性小鼠每只皮下注射0.1ml含100μg肽p277(Val6-Val11)的(I)磷酸鹽緩沖液或(II)10％脂質(zhì)乳濁液，由10％大豆油，1.2％卵黃磷脂，2.25％甘油組成，(Intralipid，Kab Pharmacia AB，瑞典)。
6月齡時檢查糖尿病發(fā)病率和抗p277(Val6-Val11)的抗體的產(chǎn)生率。糖尿病診斷依據(jù)是持續(xù)高葡萄糖血癥，間隔-周至少二次用Beckman Glucose Analyser II測得葡萄糖水平超過11mmol/l。成功的肽治療如此分析正常血糖濃度(低于11mmol/l)的維持，胰島的島內(nèi)炎癥(胰島炎)的減輕和作為TH2型免疫反應(yīng)指標的針對治療肽的抗體的誘導(dǎo)。結(jié)果見2表26月齡糖尿糖的發(fā)生率治療糖尿病死亡率(％)p277(Val6-Val11)/PBS9080p277(Val6-Val11)/Intralipid 45# 20#無100 90#與非處理NOD小鼠相比P＜0.01如表2所見，在Intralipid中施用的肽治療對降低糖尿病和死亡的發(fā)生是有效的，而在PBS中使用是無效的。實施例2抗p277(Val6-Val11)抗體的產(chǎn)生用p277(Val6-Val11)肽治療對糖尿病的保護依賴于TH2對該肽的免疫反應(yīng)性。因此，用ELISA來測定p277(Val6-Val11)免疫的小鼠中抗體產(chǎn)生情況。取Maxisorp微量滴定板(Nunc)用10μg/mlp277(Val6-Val11)肽包被18小時，用7％奶粉封閉非特異性結(jié)合2小時。小鼠血清以1∶50稀釋后，結(jié)合2小時，特異性結(jié)合通過加入堿性磷酸酶抗小鼠IgG(Serotec)保溫2小時和對-硝基苯磷酸鹽底物(Sigma)保溫30分鐘進行檢測。光密度值由ELISA讀數(shù)儀(Anthos)在OD＝405nm進行測定。
如圖1所示，NOD小鼠用Intralipid中的p277(Val6-Val11)免疫后產(chǎn)生特異性抗體，而當用存在于PBS中的p277(Val6-Val11)免疫后小鼠不表現(xiàn)任何反應(yīng)。實施例3p277(Val6-Val11)治療所誘導(dǎo)的抗體同種型實施例2中所示的p277(Val6-Val11)Intralipid治療與針對p277(Val6-Val11)抗體的關(guān)聯(lián)，提示治療效應(yīng)可能源自自身免疫性T細胞產(chǎn)生的主導(dǎo)性細胞因子的轉(zhuǎn)換。根據(jù)激活時所分泌的特異性細胞因子的不同，CD4“輔助”型T細胞被分成兩組(Mosmann andCoffmann，1989)TH1細胞分泌IL-2，誘導(dǎo)T細胞增殖，而其分泌的諸如IFN-γ等細胞因子則介導(dǎo)組織炎癥；與此不同，TH2細胞分泌IL-4，協(xié)助B細胞產(chǎn)生某些抗體同種型，以及IL-10和其它細胞因子，抑制組織炎癥。從TH1樣向TH2樣行為的轉(zhuǎn)換的可能性得到了p277(Val6-Val11)治療后產(chǎn)生的抗體同種型分析的支持。
分組的3月齡NOD小鼠用油中的p277(Val6-Val11)或PBS進行處理，見實施例2中敘述。處理后分析單只小鼠血清針對p277(Val6-Val11)的抗體同種型(每組12-15只小鼠)?？贵w同種型是使用同種型特異的抗體試劑(Southern Biotechnology Associates，Birmingham，AL)進行ELISA分析檢測的。結(jié)果見圖2，其中，對照處理的NOD小鼠中針對p277(Val6-Val11)抗體—空心圈；p277(Val6-Val11)處理的小鼠—實心圈。每個試驗的柱狀圖均顯示同等數(shù)目鼠的實驗結(jié)果小圈數(shù)目的明顯減少是迭加的結(jié)果。
處理后產(chǎn)生的抗p277抗體的抗體同種型分析表明它們無一例外屬IgG1和IgG2b類，它們依賴于產(chǎn)生IL-4(Snapper et al，1993a)可能還有TGF-β(Snapper et al，1993b)的TH2 T細胞。p277(Val6-Val11)治療不誘導(dǎo)TH1型IgG2α抗體。產(chǎn)生針對治療中所用的肽的特異性的抗體是下述過程的信號自身免疫T細胞反應(yīng)已經(jīng)從叫做TH1的破壞性炎癥模式轉(zhuǎn)向產(chǎn)生無害的抗體以及抑制炎癥和組織損傷的TH2 T細胞反應(yīng)(Rabinovitch，1994)。實施例4p277(Val6-Val11)/Intralipid治療誘導(dǎo)細胞因子模式特異性轉(zhuǎn)換為證實細胞因子轉(zhuǎn)換的觀點，分析了p277(Val6-Val11)/Intralipid處理小鼠和對照小鼠中對p277(Val6-Val11)反應(yīng)活性的T細胞所產(chǎn)生的細胞因子。伴刀豆球蛋白(ConA)，一種T細胞分裂原，用以刺激整個脾T細胞以作對照。
3月齡的10只一組的NOD小鼠，用Intralipid中的p277(Val6-Val11)(實心棒)或Intralipid中的PBS(空心棒)處理(見實施2)。5周后，取下各小鼠的脾，將脾細胞混合在一起。將脾細胞與ConA或p277(Val6-Val11)共孵育24小時(分泌IL-2和IL-4)或48小時(以分泌IL-10和IFN-γ)。培養(yǎng)上清中存在的細胞因子按ELISA計量，依照Pharmingen細胞因子ELISA說明書采用Pharmingen成對抗體。Pharmingen重組小鼠細胞因子作為標準制備標準曲線。簡言之，平底96孔微量滴定板用大鼠抗小鼠細胞因子單抗4℃包被18小時，加入培養(yǎng)上清或重組小鼠細胞因子，置4℃18小時。沖洗該板，加入生物素結(jié)合的大鼠抗小鼠細胞因子單抗，室溫45分鐘，然后充分沖洗，加入抗生物素蛋白—堿性磷酸酶。沖冼此板，加入顯色底物(對-硝基苯磷酸鹽)，在ELISA讀數(shù)儀上測定樣品在405nm吸收值，結(jié)果見圖3。細胞因子濃度以O(shè)D值表示，*P＜0.01。
圖3A表明，對照小鼠脾細胞在與p277(Val6-Val11)共孵育后分泌IL-2和IFN-γ。與此不同，p277(Val6-Val11)處理小鼠對與肽p277(Val6-Val11)的反應(yīng)所產(chǎn)生的IL-2和IFN-γ則明顯為低(P＜0.01)這種TH1細胞因子的降低是特異性的；p277(Val6-Val11)處理小鼠保持了對ConA的IL-2和IFN-γ細胞因子反應(yīng)(圖3B)。圖3A和3B顯示了小鼠脾細胞產(chǎn)生的IL-10和IL-4的量。針對p277(Val6-Val11)或ConA的應(yīng)答反應(yīng)，對照鼠產(chǎn)生很少的IL-4或IL-10。而只有在p277(Val6-Val11)/Intralipid處理小鼠中，有明顯IL-10和IL-4的升高(P＜0.01)，以產(chǎn)生對p277(Val6-Val11)的應(yīng)答反應(yīng)。IL-2和IFN-γ的降低與IL-10和IL-4升高的偶聯(lián)，證明了從TH1樣行為向TH2樣行為的轉(zhuǎn)換。這種轉(zhuǎn)換有助于解釋發(fā)明人以前曾揭示的T細胞對p277增殖效應(yīng)的降低(Elias et al.，1991)以及本發(fā)明的針對p277(Val6-Val11)的IgG1和IgG2b抗體的出現(xiàn)。實施例5p277(Val6-Val11)治療降低了針對p277(Val6-Val11)的自發(fā)性T細胞反應(yīng)每組5只3月齡NOD/Lt系小鼠背部皮下注射100μg Intralipid中的p277(Val6-Val11)或與Intralipid混合的PBS。5周后，取下小鼠脾臟，用標準方法體外分析T細胞對T細胞分裂原ConA(1.25μg/ml)或p277(Val6-Val11)(10μg/ml)的T細胞增殖反應(yīng)。結(jié)果見圖4，其中，ConA-黑條柱；p277(Val6-Val11)—灰柱。T細胞反應(yīng)以加入四個平行孔中在3天培養(yǎng)期最后18小時加入的[3H]胸腺嘧啶的摻入量測定。刺激指數(shù)(SI)以含有抗原孔的供試培養(yǎng)物的平均CPM與不含有抗原或ConA孔中的培養(yǎng)物的平均cpm的比率計算，平均cpm的標準差均低于10％。
如圖4所示，PBS/Intralipid處理的對照小鼠對p277(Val6-Val11)和T細胞分裂原ConA均表現(xiàn)T細胞增殖反應(yīng)。與此不同，用Intralipid中的p277(Val6-Val11)處理小鼠，則表現(xiàn)對p277(Val6-Val11)T細胞增殖反應(yīng)的降低，但對ConA反應(yīng)未降低。因此，p277(Val6-Val11)肽治療的積極效應(yīng)并非得自失活自身免疫反應(yīng)，而是源于將自身免疫激活成不同的細胞因子行為模式(Cohen，1995)。破壞性自身免疫的調(diào)節(jié)是在免疫系統(tǒng)內(nèi)部進行的(Cohen，1992)；它只需要有肽和脂質(zhì)載體一起存在的合適信號去激活；肽本身或無肽的脂類均無此效應(yīng)，見表1。這些結(jié)果表明，可代謝的脂質(zhì)乳濁液可被有效地用作自身免疫疾病治療載體。第一種疾病需自身特異的肽，但可代謝的脂質(zhì)乳濁液可被用于多種不同的治療。實施例6Intralipid中肽的使用影響實驗性自身免疫腦炎的發(fā)生實驗性自身免疫腦炎(EAE)是一種動物的實驗性自身免疫病，被認為可以作為多發(fā)性硬化各方面的模型(Zamvil andSteinman，1990)。EAE可以在易感大鼠品系，如Lewis大鼠中誘發(fā)；用髓鞘質(zhì)堿性蛋白(MBP)和弗氏完全佐劑(CFA，一種包含有殺死的分枝桿菌的礦物油乳濁液)免疫。免疫約12天后，發(fā)生疾病。表現(xiàn)為源于中樞系統(tǒng)炎癥的不同程度的癱瘓。癱瘓可持續(xù)6或7天，除非在急性癱瘓高峰期死亡，大鼠通?？苫謴?fù)健康。EAE是由識別MBP分子的一定的決定簇的T細胞引起的。Lewis大鼠中的主要MBP決定簇由肽序列71-90構(gòu)成(Zamvil and Steinman，1990)。
因此，我們進行實驗以檢驗使用IFA中的腦炎性MBP肽p71-90是否也可以抑制EAE的發(fā)生。圖5表明，在誘導(dǎo)EAE前14天使用IFA中的p71-90，與IFA中乳化的PBS對照處理相比，導(dǎo)致癱瘓嚴重程度的明顯降低，后者對疾病的嚴重性沒有明顯效應(yīng)。因此，IFA中加入p71-90影響EAE。
然而，正如前述，IFA不能用于人體，因為它在體內(nèi)不能代謝而造成局部炎癥。我們因此把p71-90加入Intralipid處理Lewsis大鼠。圖6顯示了實驗結(jié)果。接受Intralipid中的p71-90的大鼠較PBS/Intralipid處理的對照小鼠而言，癱瘓的發(fā)生顯著減少。以此，可以得出結(jié)論，在Intralipid中施用的相關(guān)肽如p71-90可以調(diào)節(jié)大鼠EAE。因而，肽/Intralipid處理效應(yīng)不局限于一種肽，一種動物，或僅一種自身免疫性疾病。實施例7新鮮和陳舊的10％Intralipid乳濁液的有效性含有p277(Val6-Val11)的10％Intralipid乳濁液被用于處理12周齡NOD雌性小鼠。乳濁液或者在開瓶的當天使用，或者暴露于空氣中4個月之后使用。在制備治療用肽-乳濁液時檢測乳濁液的pH值。陳舊者以pH值從8.2下降到6.7為標志。每次試驗中，10只小鼠用肽加乳濁液制劑處理，10只小鼠接受乳濁液單獨處理，10只小鼠不經(jīng)處理。結(jié)果見表3表3組別處理乳濁液(PH)糖尿糖(％)死亡率(％)1 肽+乳濁液8.2 20* 10*2 乳濁液 8.2 90703 肽+乳濁液6.7 60404 乳濁液 6.7 80605 未經(jīng)處理 - 9080*P＜0.01可見安慰劑處理小鼠(僅用乳濁液，組2和4)和非處理小鼠(組5)糖尿糖發(fā)生率相近，6月齡時為80-90％。與此形成鮮明的對照，用新啟開的肽處理小鼠保護80％小鼠不得糖尿病。然而，使用“陳舊”乳濁液只保護40％。因此，乳濁液暴露于空氣后在化學(xué)上是不穩(wěn)定的，pH值明顯下降就是證明。這種改變與其生物學(xué)活性是相關(guān)的。為此，Intralipid是一種生物活性載體，其功能依賴于其pH值，而不僅僅依賴于惰性脂質(zhì)的存在。
在詳細介紹本發(fā)明后，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將會認識到，在很大范圍內(nèi)的等同參數(shù)、濃度和條件下可以得到同樣的結(jié)果，而不背離本發(fā)明的精神和范圍，也不需要過多的實驗。
當在結(jié)合具體的方案闡述了本發(fā)明后，應(yīng)該理解，本發(fā)明是可以進一步修改的。本申請意在涵蓋總體上根據(jù)本發(fā)明的原理而對本發(fā)明所作的任何變動，應(yīng)用或修改，也包括本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的已知或習(xí)慣做法范圍內(nèi)的應(yīng)用于本文所述基本特征，并屬于權(quán)利要求范圍內(nèi)的內(nèi)容。
所有這里引用的文獻，包括期刊文章或摘要，公布或未公布的美國或外國專利申請，頒發(fā)的美國或外國專利，或其它文獻，全部引入本文作為參考，包括引用文獻中所有數(shù)據(jù)表格，附圖和文字。此外，在其中引用的文獻中引用文獻的全部內(nèi)容也引入本文作為參考。
對已知方法步驟，常規(guī)方法步驟，已知的或常規(guī)的方法引證并不是承認本發(fā)明的任何方面、描述或具體方案均在相關(guān)文獻中被公開傳授或提示。
前面對特定方案的描述對本發(fā)明的總體特性進行了全面揭示，以致其它人通過應(yīng)用本領(lǐng)域的技能知識(包括這里引用的文獻內(nèi)容)可以很容易地修改或/和改進這些特定方案而進行各種應(yīng)用，而不需要進行大量的實驗，亦不偏離本申請的總體概念。因此，這樣依據(jù)本文提供的教導(dǎo)和指導(dǎo)的修改和改進將屬于被公開的方案的等同方案范圍之內(nèi)。應(yīng)當認為本說明書的術(shù)語應(yīng)由普通技術(shù)人員根據(jù)本文提供的講授和指導(dǎo)并結(jié)合本領(lǐng)域的普通技能知識加以解釋。
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8579-621(1990).
序列表(1)總信息(i)申請人(A)名稱耶達研究與發(fā)展有限公司(B)街道P.0.Box 95(C)城市Rehovot(E)國家Israel(F)郵編76100(G)電話972-8-470739(H)傳真972-8-4706178(A)姓名Irun R.COHEN(B)街道11 Nankin Street(C)城市Rehovot(E)國家Israel(F)郵編76344(A)姓名Dana ELIAS(B)街道57 Derech Yavne(C)城市Rehovot(E)國家Israel(F)郵編76344(A)姓名Meir SHINITZKY(B)街道20 Derech Haganim(C)城市Kfar Shamaryahu(E)國家Israel(F)郵編46910(ii)發(fā)明名稱用于治療T細胞介導(dǎo)疾病的制劑和方法(iii)序列數(shù)目4(iv)計算機可讀形式(A)介質(zhì)類型軟盤(B)計算機IBM PC兼容(C)操作系統(tǒng)PC-DOS/MS-DOS(D)軟件PatentIn Release#1.0，Version#1.30(EPO)(vi)在先申請資料(A)申請?zhí)朓L 114458(B)申請日1995年7月5日(2)SEQ ID NO1的信息(i)序列特征(A)長度573氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型蛋白質(zhì)(xi)序列描述SEQ ID NO1Met Leu Arg Leu Pro Thr Val Phe Arg Gln Met Arg Pro Val Ser Arg1 5 10 15Val Leu Ala Pro His Leu Thr Arg Ala Tyr Ala Lys Asp Val Lys Phe20 25 30Gly Ala Asp Ala Arg Ala Leu Met Leu Gln Gly Val Asp Leu Leu Ala35 40 45Asp Ala Val Ala Val Thr Met Gly Pro Lys Gly Arg Thr Val Ile Ile50 55 60Glu Gln Gly Trp Gly Ser Pro Lys Val Thr Lys Asp Gly Val Thr Val65 70 75 80Ala Lys Ser Ile Asp Leu Lys Asp Lys Tyr Lys Asn Ile Gly Ala Lys85 90 95Leu Val Gln Asp Val Ala Asn Asn Thr Asn Glu Glu Ala Gly Asp Glyl00 l05 110Thr Thr Thr Ala Thr Val Leu Ala Arg Ser Ile Ala Lys Glu Gly Phe115 120 125Glu Lys Ile Ser Lys Gly Ala Asn Pro Val Glu Ile Arg Arg Gly Val130 135 140Met Leu Ala Val Asp Ala Val Ile Ala Glu Leu Lys Lys Gln Ser Lys145 150 155 160Pro Val Thr Thr Pro Glu Glu Ile Ala Gln Val Ala Thr Ile Ser Ala165 170 175Asn Gly Asp Lys Glu Ile Gly Asn Ile Ile Ser Asp Ala Met Lys Lys180 185 190Val Gly Arg Lys Gly Val Ile Thr Val Lys Asp Gly Lys Thr Leu Asn195 200 205Asp Glu Leu Glu Ile Ile Glu Gly Met Lys Phe Asp Arg Gly Tyr Ile210 215 220Ser Pro Tyr Phe Ile Asn Thr Ser Lys Gly Gln Lys Gys Glu Phe Gln225 230 235 240Asp Ala Tyr Val Leu Leu Ser Glu Lys Lys Ile Ser Ser Ile Gln Ser245 250 255Ile Val Pro Ala Leu Glu Ile Ala Asn Ala His Arg Lys Pro Leu Val260 265 270Ile Ile Ala Glu Asp Val Asp Gly Glu Ala Leu Ser Thy Leu Val Leu275 280 285Asn Arg Leu Lys Val Gly Leu Gln Val Val Ala Val Lys Ala Pro Gly290 295 300Phe Gly Asp Asn Arg Lys Asn Gln Leu Lys Asp Met Ala Ile Ala Tha305 310 315 320Gly Gly Ala Val Phe Gly Glu Glu Gly Leu Thr Leu Asn Leu Glu Asp325 330 335Val Gln Pro His Asp Leu Gly Lys Val Gly Glu Val Ile Val Thr Lys340 345 350Asp Asp Ala Met Leu Leu Lys Gly Lys Gly Asp Lys Ala Gln Ile Glu355 360 365Lys Arg Ile Gln Glu Ile Ile Glu Gln Leu Asp Val Thr Thr Ser Glu370 375 360Tyr Glu Lys Glu Lys Leu Asn Glu Arg Leu Ala Lys Leu Ser Asp Gly385 390 395 400Val Ala Val Leu Lys Val Gly Gly Thr Ser Asp Val Glu Val Asn Glu405 410 415Lys Lys Asp Arg Val Thr Asp Ala Leu Asn Ala Thr Arg Ala Ala Val420 425 430Glu Glu Gly Ile Val Leu Gly Gly Gly Cys Ala Leu Leu Arg Cys Ile435 440 445Pro Ala Leu Asp Ser Leu Thr Pro Ala Asn Glu Asp Gln Lys Ile Gly450 455 460Ile Glu Ile Ile Lys Arg Thr Leu Lys Ile Pro Ala Met Thr Ile Ala465 470 475 480Lys Asn Ala Gly Val Glu Gly Ser Leu Ile Val Glu Lys Ile Met Gln485 490 495Ser Ser Ser Glu Val Gly Tyr Asp Ala Met Ala Gly Asp Phe Val Asn500 505 510Met Val Glu Lys Gly Ile Ile Asp Pro Thr Lys Val Val Arg Thr Ala515 520 525Leu Leu Asp Ala Ala Gly Val Ala Ser Leu Leu Thr Thr Ala Glu Val530 535 540Val Val Thr Glu Ile Pro Lys Glu Glu Lys Asp Pro Gly Met Gly Ala545 550 555 560Met Gly Gly Met Gly Gly Gly Met Gly Gly Gly Met Phe565 570(2)SEQ ID NO2的信息(i)序列特征(A)長度24氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO2Val Leu Gly Gly Gly Val Ala Leu Leu Arg Cys Ile Pro Ala Leu Asp1 5 10 15Ser Leu Thr Pro Ala Asn Glu Asp20(2)SEQ ID NO3的信息(i)序列特征(A)長度24氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO3Val Leu Gly Gly Gly Cys Ala Leu Leu Arg Val Ile Pro Asa Leu Asp1 5 10 15Ser Leu Thr Pro Ala Asn Glu Asp20(2)SEQ ID NO4的信息(i)序列特征(A)長度573氨基酸(B)類型氨基酸(C)鏈型單鏈(D)拓樸結(jié)構(gòu)線性(ii)分子類型肽(xi)序列描述SEQ ID NO4Val Leu Gly Gly Gly Val AlaLeu Leu Arg Val Ile Pro Ala Leu Aap1 5 10 15Ser Leu Thr Pro Ala Aan Glu Asp20
權(quán)利要求
1.一種用于治療T細胞介導(dǎo)疾病的醫(yī)用制劑，包括一種抗原和一種生物活性載體，其中該抗原是與上述疾病發(fā)病機理有關(guān)的炎癥性T細胞識別的抗原，而上述載體為脂質(zhì)乳濁液，該脂質(zhì)浮濁液含10-20％植物和/或動物來源的甘油三酯，1.2-2.4％植物和/或動物來源的磷脂，2.25-4.5％滲透壓調(diào)節(jié)劑，0-0.05％抗氧化劑，加無菌水至100ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中該甘油三酯系植物來源。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中該甘油三酯來源于大豆油。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中該甘油三酯系動物來源。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制劑，其中該甘油三酯來源于卵黃或牛血清。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項所述的制劑，其中該磷酯系植物來源。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制劑，其中該磷酯系大豆來源。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項所述的制劑，其中該磷酯系動物來源。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制劑，其中該磷酯來源于卵黃或牛血清。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項所述的制劑，其中該滲透壓調(diào)節(jié)劑選自甘油、山梨醇或木糖醇。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項所述的制劑，包含0.05％生育酚作為抗氧化劑。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中該生物活性載體是一種脂質(zhì)乳濁液，它包含10％大豆油，1.2％卵黃磷脂，2.5％甘油，和加滅菌水至100ml。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中該生物活性載體是一種脂質(zhì)乳濁液，它包含20％大豆油，2.4％卵黃磷脂，2.5％甘油，和加滅菌水至100ml。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中該生物活性載體是一種脂質(zhì)乳濁液，它包含5％大豆油，5％中等鏈長甘油三酯，1.2％卵黃卵磷酯，2.5％甘油和加滅菌水至100ml。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-5或12-14中任意一項所述的制劑，它造成個體T細胞因子反應(yīng)從TH1向TH2轉(zhuǎn)換。
16.根據(jù)權(quán)利要求1-5或12-14中任意一項所述的制劑，它引起IL-2或INF-γ T-細胞細胞因子反應(yīng)的降低和IL-4或IL-10 T-細胞細胞因子反應(yīng)的升高。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-5或12-14中任意一項所述的制劑，它用于治療胰島素依賴性糖尿病(IDDM)，包括與IDDM發(fā)病機理相關(guān)的炎癥性T細胞識別的人熱激蛋白60(hsp60)衍生的肽，該肽選自表1所列的一組肽。
18.依據(jù)權(quán)利要求17所述的用于治療IDDM的制劑，包括肽p277和這樣的脂肪乳濁液含有10％大豆油，1.2％卵黃磷脂，2.5％甘油和無菌水，至100ml。
19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的用于治療IDDM的制劑，包括肽p277(Val6-Val11)和由一種脂質(zhì)乳濁液構(gòu)成的載體，該脂質(zhì)乳濁液含有10％大豆油，1.2％卵黃磷脂，2.5％甘油和無菌水，至100ml。
20.根據(jù)權(quán)利要求1-5或12-14中任意一項所述的用于治療多發(fā)性硬化的制劑，包含與多發(fā)性硬化發(fā)病機理相關(guān)T細胞識別的衍生于髓鞘質(zhì)堿性蛋白(MBP)的肽。
21.一種包括10-20％植物和/或動物來源甘油三酯，1.2-2.4％植物和/或動物來源的磷酯，2.25-4.5％滲透壓調(diào)節(jié)劑，0-0.05％抗菌氧化劑和無菌水，至100ml的脂質(zhì)乳濁液在制備根據(jù)權(quán)利要求1所進行的醫(yī)療制劑中的應(yīng)用。
22.一種含有10％大豆油，1.2％卵黃磷脂，2.5％甘油和無菌水至100ml的脂質(zhì)乳濁液在制備權(quán)利要求12的醫(yī)療制劑中的應(yīng)用。
23.一種治療患有T細胞介導(dǎo)疾病病人的方法，包括給上述病人施用包含存在于一種生物活性載體中的、與上述疾病發(fā)病機理相關(guān)的炎癥性T細胞識別的抗原，該生物活性載體由脂肪乳濁液組成，它包含10-20％植物和/或動物來源的甘油三酯，1.2-2.4％植物和/或動物來源的磷酯，2.25-4.5％滲透壓調(diào)節(jié)劑，0-0.05％抗氧化劑和無菌水，至100ml。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中該載體由一種脂質(zhì)乳濁液組成，該脂質(zhì)乳濁液含有10％大豆油，1.2％卵黃磷脂，2.5％甘油和無菌水至100ml。
25.根據(jù)權(quán)利要求23或24所述的方法，其中該所說的T細胞介導(dǎo)的疾病為自身免疫疾病，上述抗原為肽類。
26.根據(jù)權(quán)利要求23或24所述的方法，其中該所說的T細胞介導(dǎo)的疾病是TH1介導(dǎo)的疾病。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中上述自身免疫疾病是一種器官特異的自身免疫疾病。
28.一種治療患有IDDM病人的方法，包括給該病人施用一種制劑，該制劑包括一種或多種列于表1中的肽和由包括下述成分的乳濁液構(gòu)成的生物活性載體10％大豆油，1.2％卵黃磷脂，2.5％甘油，和無菌水至100ml。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中該制劑包括肽p277。
30.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中該制劑包括肽p277(Val6-Val11)。
31.根據(jù)權(quán)利要求23或24所述的方法，其中該T細胞介導(dǎo)的疾病是一種T細胞介導(dǎo)的過敏性疾病而該抗原是引起該疾病的變應(yīng)原。
全文摘要
可代謝的脂質(zhì)乳濁液,如Intralipid和Lipofundin,是對自身免疫疾病和其它TH1T細胞介導(dǎo)疾病進行肽治療的理想載體,因為它可以促使從TH1向TH2細胞因子的轉(zhuǎn)換。這樣的乳濁液可以和T細胞介導(dǎo)疾病發(fā)病相關(guān)的炎癥性T細胞識別的抗原一起使用,用以該疾病的治療。
文檔編號A61K9/127GK1193907SQ96196402
公開日1998年9月23日 申請日期1996年7月2日 優(yōu)先權(quán)日1995年7月5日
發(fā)明者伊倫·R·科恩, 戴娜·埃利亞斯, 梅厄·希尼斯基 申請人:耶達研究與發(fā)展有限公司