專利名稱：基因制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，特別是基因治療領(lǐng)域。更具體地講，本發(fā)明涉及一種含有基因的制劑。在施用于活體以后，該制劑可穩(wěn)定地保持基因載體或基因，將其逐漸釋出并在長時期內(nèi)維持治療效果。該制劑可以在有利時間內(nèi)中止治療。
背景技術(shù)：
基因治療是一個活躍的研究領(lǐng)域，而且對成功治療方法的期望極高。在基因本身作為藥品的基因療法中，對疾病的治療是通過將選定的酶、細(xì)胞因子之類的基因轉(zhuǎn)移到患者的細(xì)胞內(nèi)而進(jìn)行的。然后所導(dǎo)入的基因在患者體內(nèi)產(chǎn)生特定物質(zhì)。這種基因療法可分成兩類。第一類的用意是通過將特定基因整合到患者的基因組內(nèi)而對該基因進(jìn)行半永久性表達(dá)。另一類的用意是瞬時表達(dá)一種基因而不期望該基因整合到基因組中。在后一種類型的基因療法中，通常將利用腺病毒之類的方法，來將編碼能增強(qiáng)抗癌細(xì)胞的抗癌免疫力的細(xì)胞因子之類的基因轉(zhuǎn)移到患者體內(nèi)(Cardiovascular Research，28,445(1994)；Science，256，808(1992)；Gastroenterology，106，1076(1994)；TIBTECH，11，182(1993)；J.Biol.Chem.，266，3361(1991)；Nature Medicine，1，583(1995)；并將其收作參考文獻(xiàn))。
在利用病毒載體的情況下，盡管基因轉(zhuǎn)移的效率通常很高，但由于免疫反應(yīng)而使反復(fù)施藥變得很困難(J.Biol.Chem，269，13695(1994)，Am.J.Respir.Cell Mol.，10,369(1994))。
在J.Controlled Release 33.,307-315(1995)等文獻(xiàn)中披露了一種用膠原來逐步釋放含有有機(jī)化合物或蛋白制劑的藥物之制劑。不過，當(dāng)所披露的和常見的藥物(例如，蛋白類藥物、化學(xué)合成的藥物等)保持在膠原凝膠等物質(zhì)中時，它會在大約1-2天內(nèi)溶解。
在一種目前被用于基因治療的方法中，包括施用一種基因載體(插入了基因的載體)或直接用基因，該基因載體或基因在施用后馬上接觸細(xì)胞，并在基因轉(zhuǎn)移開始和結(jié)束后馬上開始。另外，轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞中的基因隨著細(xì)胞分裂而被稀釋(即其拷貝數(shù)減少)，或是通過在細(xì)胞中降解而減少。因此，轉(zhuǎn)移基因的表達(dá)僅能維持幾周時間，這段時間對于實施充分治療來說太短了，這是該方法的缺陷之一。因此，必需反復(fù)施用一種基因載體或基因。因而本發(fā)明的一個目的是克服上述缺陷，并提供一種能逐步釋放一種基因載體或基因，并可以將治療效果維持很長時間的制劑。
另外，希望一種能夠反復(fù)施用的方法，因為這類方法在利用病毒載體之類的基因治療中是難于實施的。因此，本發(fā)明的第二個目的是提供一種能夠在利用病毒載體之類的基因治療中反復(fù)施用的基因制劑。
另外，希望基因在體內(nèi)的表達(dá)能被隨時中止，以確保安全，因為基因能表達(dá)幾周時間這長于蛋白制劑的有效期。因此，本發(fā)明的第三個目的是提供一種基因制劑，當(dāng)希望中止治療時，該制劑能夠迅速中止基因轉(zhuǎn)移。
發(fā)明概述本發(fā)明人且已檢驗了各種制劑逐步釋放基因載體或基因的能力，并且已發(fā)現(xiàn)，當(dāng)這樣一種制劑-其中，一種基因或插入了基因的載體被混入一種由生物相容性材料制成的載體中-被用于活體內(nèi)時，該基因出乎預(yù)料的可表達(dá)很多個月的時間。本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，該制劑可以反復(fù)用于活體內(nèi)，并由此完成了本發(fā)明。
因此，本發(fā)明具有以下特征。
(1)一種含有基因的基因制劑，其中，將所述基因或插入了該基因的載體混入一種由生物相容性材料制成的載體中。
(2)如(1)所述的基因制劑，其中，所述生物相容性材料選自膠原、明膠、血纖蛋白、白蛋白、透明質(zhì)酸、肝素、硫酸軟骨素、殼多糖、乙酰殼多糖、藻酸、果膠、瓊脂糖、羥基磷灰石、聚丙烯、聚乙烯、聚二甲基硅氧烷，乙醇酸、乳酸或氨基酸的聚合物或共聚物，上述生物相容性材料中至少兩種的混合物。
(3)一種含有基因的基因制劑，其中，所述基因或插入了該基因的載體被混入由含有膠原的生物相容性材料制成的載體中。
(4)一種含有基因的基因制劑，其中，所述基因或插入了該基因的載體被混入由膠原制成的載體中。
(5)如上述(1)的基因制劑，其中，當(dāng)用于活體內(nèi)時，所述基因制劑中生物相容性材料的含量為0.01-30w/w％。
(6)如上述(1)的基因制劑，其為溶液、懸浮液、含水凝膠、薄膜、海綿狀物、棒狀或球狀形式。
(7)如上述(1)的基因制劑，其中，所述載體選自病毒載體、脂質(zhì)體載體和融合脂質(zhì)體載體，該融合脂質(zhì)體載體融合了一種病毒和一種脂質(zhì)體。
(8)如上述(1)的基因制劑，其中，所述載體是病毒載體。
(9)如上述(1)的基因制劑，其中，所述載體是一種腺病毒載體。
(10)一種含有基因的基因制劑，其中，將所述基因或插入了該基因的載體混入由生物相容性材料制成的載體中，此載體材料裝在容器中，所述基因載體或基因可透過該容器。
附圖簡介

圖1表示試驗例1和比較例1中血小板數(shù)的時程曲線。
圖2表示試驗例1和比較例1的外周血中的HST-1時程曲線。
圖3表示試驗例4和比較例1中血小板數(shù)的時程曲線。
圖4是試驗例5中血小板數(shù)的時程曲線。
圖5表示試驗例6中膠原對外周血中HST-1數(shù)的劑量依賴性。
圖6表示試驗例7和比較例2中血小板數(shù)的時程曲線。
發(fā)明詳述下面將對本發(fā)明做更詳細(xì)地說明。
“用于基因插入的載體”可以是任何可將基因轉(zhuǎn)移到細(xì)胞中的任何載體，例如，可包括病毒載體、脂質(zhì)體載體、融合脂質(zhì)體等，該融合脂質(zhì)體中融合了一種病毒和脂質(zhì)體(Cardiovascular Research，28，445(1994)；Science，256，808(1992)；Gastroenterology，106，1076(1994)；TIBTECH，11，182(1993)；J.Biol Chem.，266，3361(1991)；Nature Medicine，1，583(1995)；這些文獻(xiàn)被收作本文參考資料)。
病毒載體可以是任何能在基因治療中作為普通載體使用的載體，例如，包括腺病毒、腺共生病毒、牛痘病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、HIV病毒或皰疹病毒等?？梢杂贸Ｒ?guī)方法，例如，披露于上述參考文獻(xiàn)中的方法，直接將用于轉(zhuǎn)移的基因插入病毒載體中而獲得所述基因載體。
脂質(zhì)體載體可以是任何能在基因治療中作為普通脂質(zhì)體載體使用的載體，例如，包括通過混合DOTMA、DOPE、DOGS等而獲得的脂質(zhì)體載體。當(dāng)采用陽離子型脂質(zhì)體載體時，向細(xì)胞中轉(zhuǎn)移的效率很高。其中融合了病毒和脂質(zhì)體的融合脂質(zhì)體載體的例子，包括融合了仙臺病毒(HVJ日本血凝病毒)和脂質(zhì)體的融合脂質(zhì)體病毒等。可以用常規(guī)方法，例如，披露于上述文獻(xiàn)中的方法，將用于轉(zhuǎn)移的基因包裝于脂質(zhì)體載體或融合脂質(zhì)體中而獲得基因載體。被包裝的基因可以是任何能在活體內(nèi)表達(dá)該基因的形式，優(yōu)選在活體內(nèi)穩(wěn)定的形式，如質(zhì)粒等。
可將基因本身保持在本發(fā)明的基因制劑中，而不必插入能將基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞的“用于基因插入的載體”中。在這種情況下，基因的形式可以是能在活體內(nèi)表達(dá)該基因的任何形式。例如，可將基因插入被稱作表達(dá)載體之類的物質(zhì)中?；虻男问絻?yōu)選在活體內(nèi)穩(wěn)定的形式，如質(zhì)粒等。
用于轉(zhuǎn)移的“基因”可以是能用于基因治療的任何基因，例如，包括腺苷脫氨酶基因、GM-CSF基因、胸苷激酶基因等。
“生物相容性材料”優(yōu)選具有高生物相容性并可將基因或基因載體穩(wěn)定保持在活體內(nèi)的材料。生物相容性材料的例子包括膠原、明膠、血纖蛋白、白蛋白、透明質(zhì)酸、肝素、硫酸軟骨素、殼多糖、乙酰殼多糖、藻酸、果膠、瓊脂糖、羥基磷灰石、聚丙烯、聚乙烯、聚二甲基硅氧烷，乙醇酸、乳酸或氨基酸的聚合物或共聚物，兩種或兩種以上上述材料的混合物等。特別優(yōu)選的生物相容性材料是膠原。也優(yōu)選將膠原與上述其它生物相容性材料混合。膠原可以是任何膠原，例如，包括可溶于酸的膠原、可由酶溶解的膠原[如發(fā)育不全膠原(atelocollagen)等]、可由堿溶解的膠原、具有修飾的氨基酸側(cè)鏈的膠原、橋連膠原、通過遺傳工程產(chǎn)生的膠原等。而具有修飾的氨基酸側(cè)鏈的膠原例如包括，丁二?；蚣谆z原等。橋連膠原例如包括用戊二醛、1，6-己二異氰酸酯或聚環(huán)氧化合物等處理過的膠原(Fragrance J.，1989-12，104-109，日本專利(審查過的公開號No.7(1995)-59522))。
可視需要將“添加劑”加入本發(fā)明的制劑中，以穩(wěn)定基因載體等，加速基因向細(xì)胞或細(xì)胞核中的轉(zhuǎn)移或調(diào)節(jié)基因載體等的釋出。添加劑可以是能實現(xiàn)上述目的的任何添加劑，例如，包括蔗糖、甘氨酸、硫酸軟骨素、明膠、白蛋白、細(xì)胞因子、高遷移率族蛋白HMG-1和HMG-2的混合物(High Mobility Group-1，-2 Mixture；ExperimentalMedicine，12，184(1994)，BIOTHERAPY，8，1265(1994))、氯喹、聚賴氨酸(Hepatology，22,847(1995))、Transfectam(商標(biāo)，Wako Pure Chemical Industries，Ltd.)等。
在膠原與其它生物相容性材料或添加劑混合的情況下，膠原含量可以至少為10w/w％，優(yōu)選至少30w/w％、至少約50w/w％更好，至少70w/w％最好。
所述基因制劑中生物相容性材料的含量因基因載體或基因的大小和種類等，以及生物相容性材料的種類等而異。
在基因制劑被用于活體的條件下，該基因制劑中生物相容性材料的優(yōu)選含量為0.01-30w/w％，0.05-10w/w％更好，0.05-5w/w％最好。
另外，基因制劑中生物相容性材料的含量因具體制劑而異。例如，在膠原被用作生物相容性材料的條件下，其優(yōu)選含量范圍將在下文介紹。
當(dāng)該制劑為凝膠形式時，膠原的優(yōu)選含量為0.01-25w/w％，0 05-10w/w％更好，0.05-5w/w％最好。不過，當(dāng)膠原含量為2％或更高時，優(yōu)選以占膠原5-900w/w％的量加入添加劑。
當(dāng)該制劑為薄膜形式時，膠原的優(yōu)選含量為0.2-30w/w％(為干燥之前的含量)、0.3-5w/w％更好，0.4-2w/w％最好。不過，當(dāng)膠原含量為1％或更高時，優(yōu)選以占膠原5-900w/w％的量加入添加劑。
當(dāng)該制劑為固體棒條形式時，膠原的含量優(yōu)選為10-30w/w％，而且，最好以占膠原5-100w/w％的量加入添加劑。
本發(fā)明的基因制劑并不局限于特定形式。該制劑可以為溶液、懸浮液、含水凝膠、薄膜或海綿狀物。固體形式可以成形為棒條、球形等。不過，優(yōu)選形式一般為溶液、懸浮液或含水凝膠，盡管該制劑的形式因用于基因插入的載體的種類、大小等而異。
基因制劑是通過將上述基因制劑中生物相容性材料的含量，在該基因制劑被用于活體的條件下，在該基因制劑中維持于上述優(yōu)選范圍內(nèi)而獲得。
生產(chǎn)溶液、懸浮液或含水凝膠形式的基因制劑的方法的例子包括(1)將基因載體或基因(以下稱基因載體等)的粉狀物、溶液、懸浮液或凝膠與溶液或凝膠形式的載體混合，視需要向該載體中加入添加劑的方法，(2)使基因載體等的溶液、懸浮液或凝膠，滲入粉末狀的載體中，視需要向該載體中加入添加劑的方法，或(3)使基因載體等的溶液、懸浮液或凝膠滲入海綿狀物的載體中，視需要向其中添加添加劑，并將其捏和在一起的方法。但用于制備本發(fā)明基因制劑的方法并不局限于上述方法。
用于制備固體形式的基因制劑的方法的例子包括(1)將基因載體等的粉狀物、溶液、懸浮液或凝膠與溶液或凝膠形式的載體混合，視需要向其中加入一種添加劑并干燥該混合物的方法，(2)將基因載體等的粉狀物、溶液、懸浮液或凝膠與粉末狀的載體混合，視需要向其中加入一種添加劑并干燥該混合物的方法，(3)使基因載體等的溶液、懸浮液或凝膠滲入海綿狀形式的載體中，視需要向其中加入添加劑并干燥該海綿狀物的方法，(4)使基因載體等的懸浮液或凝膠滲入海綿狀物的載體中，視需要向其中加入添加劑，并在靜止或捏和條件下干燥該海綿狀物，以及視需要加水等之后干燥該海綿狀物的方法，(5)壓碎并加壓模制用(1)至(4)的方法獲得的固體產(chǎn)品的方法，或(6)將基因載體等的粉狀與粉狀載體混合，視需要向其中加入添加劑，并加壓模制該混合物的方法。但本發(fā)明并不限于上述方法。干燥方法；干燥溫度和濕度；混合方法；混合溫度和濕度；加壓模制方法；加壓模制時的濕度和壓力；載體溶液和基因載體溶液的溶解速度；以及載體和基因載體溶液混合物的溶解速度；以及pH值可與常規(guī)方法相同。
可以根據(jù)接受治療的疾病、靶器官等用各種方法施用本發(fā)明的基因制劑。例如，可以通過皮下或靜脈內(nèi)注射施用本發(fā)明的基因制劑，或者直接用于病變的靶位點，如腎、肝、肺、腦等。直接用于病變位點能夠進(jìn)行器官選擇性治療。
根據(jù)本發(fā)明，當(dāng)把可生物降解的材料用作生物相容性材料時，無需在施用后將該生物相容性材料從體內(nèi)取出。另外，還可以反復(fù)給藥。
另一方面，當(dāng)根據(jù)疾病種類或癥狀需要進(jìn)行不連續(xù)基因轉(zhuǎn)移時，可按照實際情況將基因制劑取出，可以中止基因轉(zhuǎn)移。例如，當(dāng)基因制劑是固體時，可通過手術(shù)等將其取出。當(dāng)基因治療使用將基因載體等保持在有孔的容器之類中(病毒可以順利通過該孔)，的基因制劑進(jìn)行時可在治療結(jié)束后將所述容器等取出。例如，可以用披露于日本專利申請?zhí)?(1991)-120115(國際公開號WO92/20400)中的容器(試管)進(jìn)行基因治療。
本發(fā)明的基因制劑可以逐步釋放基因載體等，同時能在持續(xù)釋放期間將插入了基因的載體穩(wěn)定保持在活體內(nèi)。因此，通過延遲細(xì)胞與載體之間接觸的方式控制基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞的時間，從而延遲長一次給藥后的有效基因表達(dá)時間。
本發(fā)明的基因制劑還能夠反復(fù)施用病毒載體之類的基因載體，否則，由于患者體內(nèi)中和抗體的出現(xiàn)，而使反復(fù)給藥變得難于進(jìn)行。
另外，本發(fā)明的基因制劑能夠調(diào)節(jié)基因表達(dá)，因為當(dāng)希望中止治療時可以將該基因制劑取出。
實施例例1將0.9ml含有109pfu(噬斑形成單位)插入了編碼成纖維細(xì)胞生長因子HST-1(FGF4)的基因(按照披露于Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84，2980-2984(1987)中的方法制備)的腺病毒(Adexl HST-1；Proe.Natl.Acad.Sci.USA，Vol.91，12368(1994))的培養(yǎng)基與0.1ml發(fā)育不全膠原的中性溶液(由KOKEN制備的發(fā)育不全膠原植入物2％發(fā)育不全膠原溶液)混合制備一種基因制劑。上述腺病毒(Adex1 HST-1)可以按照披露于J.Virol.，54，711-719(1985)或Proc.Natl.Acad.Sci.USA，93，1320(1996)和Cell，13，181-188(1978)中的方法，通過缺失5型腺病毒(ATCC目錄號VR-5)的EIA、EIB和E3部份，將成纖維細(xì)胞生長因子HST-1基因插入非增殖型腺病毒基因中而獲得。例2將0.1ml 2％發(fā)育不全膠原中性溶液與0.9ml含有109pfu Adex1 HST-1的培養(yǎng)基混合，制備一種凝膠型基因制劑，然后將該混合物保持在37℃。例3通過以下方法制成一種基因制劑冷凍干燥發(fā)育不全膠原中性溶液，獲得海綿狀物；將該海綿狀物切成約5mm的方塊；將該切割過的海綿狀物加入到1ml含109pfu Adex1 HST-1的培養(yǎng)基中，該海綿狀物靜止過夜。例4將例2中制備的凝膠形式的基因進(jìn)行冷凍干燥制備一種基因制劑。例5同樣將例3中獲得的基因制劑進(jìn)行冷凍干燥，并將該凍干的海綿狀物壓制成棒狀，再制備出丸狀(即棒狀物的壓制品)基因制劑。例6將一種質(zhì)粒載體與一種脂質(zhì)體(DMRIE-C(由GIBCO-BRL生產(chǎn)))混合，然后再將含有該脂質(zhì)體的溶液與相同體積的發(fā)育不全膠原的中性溶液混合，制備一種基因制劑。所述質(zhì)粒載體是將成纖維細(xì)胞生長因子HST-1(FGF4)插入具有巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動子的表達(dá)載體(pRc/CMV)中而獲得的。例7以如下方式制備一種顆粒形式的基因制劑將1ml含有109pfu的Adex1 HST-1的培養(yǎng)基與1ml1％藻酸溶液混合；通過一個噴頭，將所述含有載體的藻酸溶液滴加到0.5％的GaCl2溶液中，以獲得直徑為1mm的顆粒；并通過離心收集上述顆粒。例8以如下方式制備一種顆粒形式的基因制劑將1ml含有109pfu的Adex1 HST-1的培養(yǎng)基與1ml被加熱至45℃的5％瓊脂糖凝膠混合；通過一個噴頭將該混合液滴加到溫度為10℃的磷酸鹽緩沖液中；離心收集所述顆粒。例9將例1中所得到的基因制劑封裝在聚酯制成的袋(由合成血管制成，商標(biāo)為Micron，由INTERVASCULAR生產(chǎn))中而制備一種基因制劑。例10與例1相同，將含有109pfu Adex1 HST-1的培養(yǎng)基與發(fā)育不全膠原中性溶液混合制成1ml基因制劑，使之在發(fā)育不全膠原的終濃度中占0.1、0.2、0.4、1.0或2.0w/w％。例11用以下方法制備一種凝膠形式的基因制劑將5ml含有濃度為73.25μg/ml的質(zhì)粒pOG44(購自Stratagene)的水溶液與5g發(fā)育不全膠原酸性溶液(含有2％發(fā)育不全膠原，PH3.5)混合；將該混合物進(jìn)行冷凍干燥，得到海綿狀物；該海綿狀物中加入蒸餾水，使之在發(fā)育不全膠原的濃度中占0.4、2、5、10或20w/w％。例12用以下方法制備一種凝膠形式的基因制劑將5ml含有濃度為73.25μg/ml的質(zhì)粒pOG44的水溶液與5g或2.5g發(fā)育不全膠原酸性溶液混合；將260μl或640μl人血清白蛋白水溶液(80mg/ml)加入該混合物中并混合；將該混合物進(jìn)行冷凍干燥，以得到海綿狀物；向該海綿狀物中加入蒸餾水，使之在發(fā)育不全膠原和人血清白蛋白的總濃度中占10w/w％。例13將例11中得到的凝膠狀基因制劑展布在玻璃上并使之逐步干燥，制成一種薄膜形式的基因制劑。例14將例11或12中獲得的凝膠形式的基因制劑擠壓模制和逐步干燥以制備一種棒狀形式的基因制劑。比較例1通過腹膜內(nèi)給藥給小鼠施用1ml含有109pfu Adex HST-1的培養(yǎng)基。然后，大約在用藥后第12天，其血小板數(shù)增加約兩倍，而且，這種效果持續(xù)到第20-30天。另外，在用藥后第20天，外周血液中HST-1的濃度達(dá)到最大值，為50ng/ml。不過，與下面例1的制劑不同，HST-1的濃度不能保持在一個固定水平上，而且在用藥后第60天，血液中檢測不到HST-1。上述結(jié)果如圖1和2所示。試驗例1通過腹膜內(nèi)給藥給小鼠施用1ml例1中制成的基因制劑。在用藥后大約12天時，血小板數(shù)增加大約2倍，而且，這一效果持續(xù)到第50天以后。另外，在用藥80天以后外周血液中HST-1的濃度仍維持在20ng/ml。上述結(jié)果如圖1和2所示。試驗例2通過腹膜內(nèi)給藥給小鼠施用1.0ml例2中制備的基因制劑。在用藥后大約第12天，其血小板數(shù)約增加2倍，而且，這一效果持續(xù)到用藥后第60天以后。試驗例3通過腹膜內(nèi)給藥給小鼠施用一種例3中制成的基因制劑。在用藥后約第12天，其血小板數(shù)約增加2倍，而且，這一效果持續(xù)到用藥后第60大以后。試驗例4通過腹膜內(nèi)給藥給小鼠施用例1中制備的基因制劑，并在用藥后第3天將該基因制劑取出。結(jié)果，在用藥后約第12天，其血小板數(shù)達(dá)雙倍，然后，在用藥后約第25天，其血小板數(shù)減少，并恢復(fù)到正常水平。上述結(jié)果如圖3所示。試驗例5通過腹膜內(nèi)給藥給小鼠施用例1制備的基因制劑，然后在用藥后第3天將該基因制劑取出。在用藥后第20天，再次施用例1中制備的基因制劑。結(jié)果，在用藥后大約第12天，其血小板數(shù)約達(dá)雙倍，在用藥后約第20天，其血小板數(shù)減少并恢復(fù)到正常水平。在二次給藥后其血小板數(shù)馬上又增加約2倍，而且，這一效果能持續(xù)到第一次用藥后第40天之后。上述結(jié)果如圖4所示。試驗例6通過腹膜內(nèi)給藥給小鼠施用例10中制備的各5基因制劑，或1ml含有109pfu Adex HST-1但完全不含膠原的培養(yǎng)基。在用藥后第5天，測外周血液中HST-1蛋白的濃度。上述結(jié)果如圖5所示。上述數(shù)據(jù)表明，HST-1蛋白的血清濃度隨著所述制劑中膠原濃度的增加而減少。試驗例7通過腹膜內(nèi)給藥給小鼠施用1ml含有109pfu Adex HST-1的培養(yǎng)基，結(jié)果在用藥后第12天，其血小板數(shù)達(dá)約2倍，然后，在用藥后第35天左右，其血小板數(shù)減少并恢復(fù)到正常水平。在第一次用藥后第37天，再次施用1ml例1中制備的含有發(fā)育不全膠原的基因制劑。此后，其血小板數(shù)馬上增加約2倍，而且，在該實驗的隨后階段一直保持這一效果。上述結(jié)果如圖6所示。比較例2通過腹膜內(nèi)給藥給小鼠施用1ml含有109pfu Adex HST-1的培養(yǎng)基，并在首次給藥后第37天再次給藥。結(jié)果，在首次給藥后約第12天，其血小板數(shù)約達(dá)2倍，然后在用藥后第35天，血小板數(shù)降低并恢復(fù)到正常水平。在第二次施用Adex HST-1后，其血小板數(shù)不再增加。上述結(jié)果如圖6所示。
試驗例7和比較例2的結(jié)果表明，可以反復(fù)使用例1中制備的基因制劑，這一結(jié)果與反復(fù)使用不按本發(fā)明方法配制的腺病毒載體時所取得的結(jié)果不同，不按本發(fā)明配制之物不能反復(fù)服用的原因是由于中和抗體的出現(xiàn)。
權(quán)利要求
1.一種含有所需基因的基因制劑，其中將所述基因或插入了所述基因的載體混合進(jìn)由生物相容性材料制成的載體中。
2.如權(quán)利要求1的基因制劑，其中所述生物相容性材料選自膠原、明膠、血纖蛋白、白蛋白、透明質(zhì)酸、肝素、硫酸軟骨素、殼多糖、脫乙酰殼多糖、藻酸、果膠、瓊脂糖、羥基磷灰石、聚丙烯、聚乙烯、聚二甲基硅氧烷、乙醇酸、乳酸或氨基酸的聚合物或共聚物，以及至少兩種上述生物相容性材料的混合物。
3.一種含所需基因的基因制劑，其中將所述基因或插入了該基因的載體混入由含有膠原的生物相容性材料制成的載體中。
4.一種含有所需基因的基因制劑，其中將所述基因或插入了該基因的載體混入由膠原制成的載體中。
5.如權(quán)利要求1的基因制劑，其中當(dāng)所述基因制劑被用于活體內(nèi)時，所述生物相容性材料在該基因制劑中的含量為0.01-25w/W％。
6.如權(quán)利要求1的基因制劑，其為溶液、懸浮液、含水凝膠、薄膜，海綿狀物、棒狀物或球形形式。
7.如權(quán)利要求1的基因制劑，其中所述載體選自病毒載體、脂質(zhì)體載體、融合脂質(zhì)體載體，所述融合載體中融合了病毒和脂質(zhì)體。
8.如權(quán)利要求1的基因制劑，其中所述載體是病毒載體。
9.如權(quán)利要求1的基因制劑，其中所述載體是腺病毒載體。
10.一種含有所需基因的基因制劑，其中將所述基因或插入了該基因的載體混入由生物相容性材料制成的載體中，該生物相容性載體被盛在所述基因載體或基因可通過的容器中。
11.一種用基因治療活體的方法，包括施用含有所需基因的基因制劑之步驟，其中，將所述基因或插入了所述基因的載體混入由生物相容性材料制成的載體中。
全文摘要
基因制劑,包含所需基因或含整合于其上的所需基因的載體,并含支撐該基因的載體。
文檔編號A61K48/00GK1193916SQ96196463
公開日1998年9月23日 申請日期1996年7月2日 優(yōu)先權(quán)日1995年7月3日
發(fā)明者寺田雅昭, 落谷孝廣, 宮田暉夫, 伊藤博 申請人:株式會社高研, 住友制藥株式會社