專利名稱：用于降低神經(jīng)酰胺水平的堿性氨基酸和衍生物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及堿性氨基酸、酰化的堿性氨基酸和它們的藥用鹽的新的治療應(yīng)用，用于疾病的預(yù)防或者治療性處理伴隨有高神經(jīng)酰胺水平的細(xì)胞疾病。具體地說，本發(fā)明涉及L-肉毒堿、L-肉毒堿?；苌锖推渌幱名}的應(yīng)用，用于疾病的預(yù)防或者治療性處理伴隨有高神經(jīng)酰胺水平的細(xì)胞疾病。
神經(jīng)酰胺是神經(jīng)鞘脂類結(jié)構(gòu)和其代謝物的堿性分子。所有的神經(jīng)鞘脂類都含有神經(jīng)酰胺作為主要的親水組分并且是由神經(jīng)酰胺通過生物合成途徑產(chǎn)生的，在該合成中主要修飾了分子結(jié)構(gòu)的1-羥基位置，而神經(jīng)鞘脂類在跨細(xì)胞膜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起著重要的作用。
神經(jīng)酰胺在跨細(xì)胞膜的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起著重要的作用。能夠?qū)Π麅?nèi)受體(如鈣三醇)或跨膜受體[如γ-干擾素(IFN-γ)、白細(xì)胞介素-1(IL-1)和神經(jīng)生長因子(NGF)]起作用的分子將神經(jīng)磷脂水解成為神經(jīng)酰胺。神經(jīng)酰胺活化磷酸酶和蛋白激酶，并且由生物學(xué)的觀點(diǎn)看，能夠誘導(dǎo)細(xì)胞的編程性細(xì)胞死亡、生長和細(xì)胞的分化，調(diào)整環(huán)氧酶和磷脂酶的表達(dá)和kB核因子(NFkB)的活性[Kuno，K.等，J.Leukoc Biol.，56(5)542-7；Cifone，M.G.等，J.Exp.Med.，180(4)1547-52；Kolesnick R.，Mol.Chem.Neuropathol.，21(2-3)287-97；Jarvis，W.D.等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，91(1)73-7；Obeid，L.M.等，Science，259(5102)1769-71]。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)神經(jīng)酰胺濃度或代謝的變化對導(dǎo)致許多疾病起作用或者會(huì)誘導(dǎo)代謝細(xì)胞失調(diào)。不幸地是，到目前為止還沒有辦法降低體內(nèi)的神經(jīng)酰胺水平。
相應(yīng)的，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供堿性氨基酸、?；膲A性氨基酸和其藥用鹽用于降低體內(nèi)神經(jīng)酰胺水平的新用途。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供堿性氨基酸、?；膲A性氨基酸和其藥用鹽在疾病的預(yù)防或者治療性處理伴隨有高神經(jīng)酰胺水平的細(xì)胞疾病方面的新用途。
事實(shí)上，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)施用大劑量的堿性氨基酸、低分子量的堿性化合物或其?；苌锖推渌幱名}可降低神經(jīng)酰胺水平并且這些化合物可被用于治療以高神經(jīng)酰胺水平為特征的疾病。
具體地說，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)堿性氨基酸如精氨酸、賴氨酸、組氨酸、鳥氨酸和肉毒堿，或其?；苌锖推渌幱名}可用于治療以高神經(jīng)酰胺水平為特征的疾病。
按照本發(fā)明，提供了堿性氨基酸、堿性氨基酸?；苌锖推渌幱名}降低體內(nèi)神經(jīng)酰胺水平的新用途。
適當(dāng)?shù)膲A性氨基酸包括帶有堿性電荷的任何氨基酸，例如精氨酸、賴氨酸、組氨酸、鳥氨酸和肉毒堿。這些化合物是可以買到的。優(yōu)選的，是使用L-氨基酸。更優(yōu)選的，是使用肉毒堿。這些化合物可以游離氨基酸或其藥用鹽的形式使用。
在本發(fā)明中也可以使用堿性氨基酸的?；苌??？梢允褂弥辨溁蛑ф湹腃2-6?；被?。對藥理學(xué)家和藥學(xué)技術(shù)領(lǐng)域的熟練人員而言這些酸是熟知的。特別優(yōu)選的?；鶊F(tuán)是乙酰基、丙酰基、丁?；?、戊酰基和異戊?；?br> 適當(dāng)?shù)乃幱名}可以是由上述堿性氨基酸和任何常規(guī)的陰離子形成的，這些陰離子例如氯、溴、碘、或酸天門冬氨酸如天門冬氨酸根、酸性檸檬酸根如檸檬酸根、酸性酒石酸根如酒石酸根、酸性磷酸根如磷酸根、酸性富馬酸根、糖磷酸根如葡糖磷酸根、酸性乳酸根、酸性馬來酸根、乳清酸、酸性草酸根，特別是草酸，硫酸、特別優(yōu)選硫酸根、三氯乙酸根、三氟乙酸根和甲磺酸根。
以升高的神經(jīng)酰胺水平為特征的疾病或失調(diào)的實(shí)例包括炎性腸疾病、播散性血管內(nèi)凝血、發(fā)燒、蛋白質(zhì)分解代謝和/或脂類消耗、與感染或代謝性肝疾病有關(guān)的肝脾腫大、心肌內(nèi)膜炎、內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞激活、毛細(xì)血管血栓形成、由于傳染物引起的腦膜腦炎、器官移植、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和結(jié)締組織的疾病，以及自身免疫疾病、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、放射和/或化學(xué)治療損傷以及慢性疲勞綜合癥。
由于使用某些藥物也會(huì)產(chǎn)生高水平的神經(jīng)酰胺，因此本發(fā)明也考慮了降低使用這些藥物的患者的神經(jīng)酰胺水平。例如，按照本發(fā)明的堿性氨基酸可以和下述藥品一起用藥以防止神經(jīng)酰胺水平提高皮質(zhì)類甾醇(如地塞米松)、抗炎藥(如吲哚美辛)、抗病毒藥(如干擾素)、免疫抑制劑(如環(huán)孢菌素)、化學(xué)治療劑(如阿霉素(adriamicin))、免疫強(qiáng)化劑(如免疫球蛋白和疫苗)和內(nèi)分泌制劑(如metimazole)。
健康人正常的神經(jīng)酰胺水平取決于個(gè)體的年齡、大小和體重，但是通常在5至50微微摩爾/106細(xì)胞(優(yōu)選的是外周血的淋巴細(xì)胞)的范圍內(nèi)。高于50微微摩爾/106細(xì)胞時(shí)被認(rèn)為是高水平。應(yīng)用本發(fā)明的堿性氨基酸、?；膲A性氨基酸和其藥用鹽至少可使此高水平降低25％。
一般來說，以至少可使神經(jīng)酰胺水平降低25％的濃度給予本發(fā)明的堿性氨基酸。適當(dāng)?shù)模ㄟ^口服或腸胃外給予50mg至大約15g/天堿性氨基酸可得到此結(jié)果。優(yōu)選的，應(yīng)該大劑量的給予這些堿性氨基酸，例如每天的劑量大于1g，或大于2g；特別優(yōu)選每天4-10g。
監(jiān)測神經(jīng)酰胺水平可以通過直接監(jiān)測細(xì)胞中(如淋巴細(xì)胞)的神經(jīng)酰胺水平，或者可以間接地監(jiān)測細(xì)胞中神經(jīng)酰胺代謝物的濃度。優(yōu)選的，為了評價(jià)減少的數(shù)量，在施用堿性氨基酸之前和之后監(jiān)測患者的神經(jīng)酰胺水平。監(jiān)測可在用藥后的任何時(shí)間開始，但是適當(dāng)?shù)氖情_始于用藥后3小時(shí)以得到準(zhǔn)確的結(jié)果。監(jiān)測可無限期的延長。
神經(jīng)酰胺水平可用下述方法直接測定由患者的外周血分離出淋巴細(xì)胞，然后離心細(xì)胞除去清液，并由細(xì)胞沉淀中除去脂類，按照“DAG激酶試驗(yàn)”方法對含有神經(jīng)酰胺的有機(jī)相進(jìn)行試驗(yàn)，以使神經(jīng)酰胺磷?；?，然后用放射性自顯影法進(jìn)行檢測[Cifone，M.G.等，J.Exp.Med.，180(4)1547-52]。
在對本發(fā)明進(jìn)行了一般的描述之后，參考下面提供的一些具體的實(shí)施例可進(jìn)一步地理解本發(fā)明，除非另有說明，這些實(shí)施例僅僅是說明而不限制本發(fā)明。
實(shí)施例1用常規(guī)的方法分離出外周血的淋巴細(xì)胞，該細(xì)胞與L-肉毒堿或異戊?；鵏-肉毒堿(200mcg/ml)于37℃一起孵化30分鐘，然后與抗Fas單克隆抗體一起孵化30分鐘，離心細(xì)胞，除去清液，將細(xì)胞沉淀脫脂。按照“DAG激酶試驗(yàn)”方法對有機(jī)相(含有神經(jīng)酰胺)進(jìn)行試驗(yàn)，使神經(jīng)酰按磷?；?，然后用放射性自顯影法進(jìn)行檢測。
結(jié)果列于下表1。
表1神經(jīng)酰胺(微微摩爾/106細(xì)胞)對照 20對照+抗Fas抗體 81.6對照+抗Fas抗體+L-肉毒堿(100mcg/ml)7.3對照+抗Fas抗體+異戊酰基L-肉毒堿(50mcg/ml) 8.6對照+抗Fas抗體+異戊?；鵏-肉毒堿(100mcg/ml)7.3已經(jīng)知道適當(dāng)?shù)拇碳ぜ?xì)胞(例如用Fas-L，白細(xì)胞介素-1等)產(chǎn)生神經(jīng)酰胺。用抗Fas抗體可增加神經(jīng)酰胺生成，將基礎(chǔ)數(shù)值(每106細(xì)胞中20微微摩爾)提高到每106細(xì)胞中81.6微微摩爾。
由此看出L-肉毒堿和異戊酰基L-肉毒堿能夠在體外抑制神經(jīng)酰胺的合成。
實(shí)施例2使兩名神經(jīng)肌病(慢性疲勞綜合癥)的患者每天口服3克(g)L-肉毒堿。共服用2個(gè)月以進(jìn)行治療。
在用藥之前和之后測定肌肉中的神經(jīng)酰胺。
結(jié)果列于下表2。
表2
神經(jīng)酰胺神經(jīng)酰胺治療前 治療后(每mg蛋白質(zhì)微微摩爾)(每mg蛋白質(zhì)微微摩爾)患者176 28患者2142 46實(shí)施例3四名甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)的患者，他們已經(jīng)用metimazole(每天口服15mg)治療8個(gè)月以上，這些患者以每天口服8g L-肉毒堿。共服用4周進(jìn)行治療。
在治療之前和之后測定與淋巴細(xì)胞相關(guān)的神經(jīng)酰胺。
結(jié)果列于下表3。
表3神經(jīng)酰胺 神經(jīng)酰胺治療前治療后(微微摩爾/106細(xì)胞) (微微摩爾/106細(xì)胞)患者1 7326患者2 4527患者3 111 36患者4 6918實(shí)施例4對三名由于丙型病毒肝炎引起肝脾腫大的患者通過靜脈用4g L-肉毒堿藥團(tuán)進(jìn)行治療。
在輸注前和輸注后3和48小時(shí)測定與淋巴細(xì)胞相關(guān)的神經(jīng)酰胺。
結(jié)果列于下表4。
表4患者1 患者1 患者3神經(jīng)酰胺神經(jīng)酰胺神經(jīng)酰胺(微微摩爾/106細(xì)胞) (微微摩爾/106細(xì)胞) (微微摩爾/106細(xì)胞)治療前 65 77 793小時(shí)后12 32 2448小時(shí)后 31 21 23很顯然在輸注L-肉毒堿藥團(tuán)3小時(shí)之后就已經(jīng)抑制了神經(jīng)酰胺水平的提高。其作用至少保持了2天。
實(shí)施例5對兩名由于結(jié)核感染造成的蛋白質(zhì)分解代謝和脂類消耗的患者進(jìn)行治療，每天通過腸胃外給予8g L-肉毒堿。共給藥2周。
在用藥之前和之后測定與外周血淋巴細(xì)胞相關(guān)的神經(jīng)酰胺。
結(jié)果列于下表5。
表5神經(jīng)酰胺 神經(jīng)酰胺治療前 治療后(微微摩爾/106細(xì)胞) (微微摩爾/106細(xì)胞)患者1 127 59患者2 265 77患者3 301 152患者4 7854現(xiàn)在，對本發(fā)明已經(jīng)做了清楚的描述，顯然對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言在不脫離如下文要求保護(hù)的本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍的情況下可以對其進(jìn)行很多變化和改進(jìn)。
權(quán)利要求
1.堿性氨基酸、?；膲A性氨基酸和它們的藥用鹽在制備預(yù)防疾病或治療伴有高神經(jīng)酰胺水平的細(xì)胞疾病的藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中以高水平的神經(jīng)酰胺為特征的疾病或失調(diào)包括炎性腸疾病、播散性血管內(nèi)凝血、發(fā)燒、蛋白質(zhì)分解代謝和/或脂類消耗、與感染或代謝性肝疾病有關(guān)的肝脾腫大、心肌內(nèi)膜炎、內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞激活、毛細(xì)血管血栓形成、由于傳染物引起的腦膜腦炎、器官移植、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和結(jié)締組織的疾病，以及自身免疫疾病、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、放射和/或化學(xué)治療損傷以及慢性疲勞綜合癥。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的用途，其中堿性氨基酸、?；膲A性氨基酸或它們的藥用鹽可與皮質(zhì)類甾醇、抗炎藥、抗病毒藥、免疫抑制劑、細(xì)胞抑制劑、免疫強(qiáng)化劑和內(nèi)分泌制劑一起用藥。
4.根據(jù)前述任意一項(xiàng)權(quán)利要求的用途，其中的堿性氨基酸是精氨酸、賴氨酸、組氨酸、鳥氨酸和肉毒堿。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的用途，其中的堿性氨基酸是L-肉毒堿。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)的用途，其中所述堿性氨基酸的?；鶊F(tuán)選自乙?；?、丙?；?、丁?；?、戊酰基和異戊?；?。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中的所述的?；瘔A性氨基酸是異戊?；鵏-肉毒堿。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)的用途，其中所述藥用鹽的陰離子選自氯、溴、碘、或酸性天門冬氨酸根、酸性檸檬酸根、酸性酒石酸根、酸性磷酸根、酸性富馬酸根、糖磷酸根、酸性乳酸根、酸性馬來酸根、乳清酸根、酸性草酸根和硫酸根。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的用途，其中所述陰離子是硫酸根、三氯乙酸根、三氟乙酸根或甲磺酸根。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中口服或腸胃外給藥的日劑量是50mg至15g。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的用途，其中口服或腸胃外給藥的日劑量是4至10g。
12.用于預(yù)防疾病或治療伴有高神經(jīng)酰胺水平的細(xì)胞疾病的口服或腸胃外給藥的藥物組合物，該組合物包括能有效的降低神經(jīng)酰胺水平的活性組分量的堿性氨基酸、?；膲A性氨基酸或它們的藥用鹽，和至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的口服或腸胃外給藥的藥物組合物，其中以高水平的神經(jīng)酰胺為特征的疾病或失調(diào)包括炎性腸疾病、播散性血管內(nèi)凝血、發(fā)燒、蛋白質(zhì)分解代謝和/或脂類消耗、與感染或代謝性肝疾病有關(guān)的肝脾腫大、心肌內(nèi)膜炎、內(nèi)皮細(xì)胞和白細(xì)胞激活、毛細(xì)血管血栓形成、由于傳染物引起的腦膜腦炎、器官移植、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和結(jié)締組織的疾病，以及自身免疫疾病、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、放射和/或化學(xué)治療損傷和慢性疲勞綜合癥。
14.根據(jù)權(quán)利要求12或13的組合物，適于口服或腸胃外給藥的劑量是50mg至15g/天堿性氨基酸。
15.根據(jù)權(quán)利要求12或13的組合物，適于口服或腸胃外給藥的劑量是4g至10g/天堿性氨基酸。
全文摘要
本發(fā)明公開了堿性氨基酸、?；膲A性氨基酸和它們的藥用鹽的治療應(yīng)用,用于制備預(yù)防疾病或者治療性處理伴隨有高神經(jīng)酰胺水平的細(xì)胞疾病的藥物。
文檔編號(hào)A61K31/205GK1193911SQ96196528
公開日1998年9月23日 申請日期1996年7月19日 優(yōu)先權(quán)日1995年8月3日
發(fā)明者S·莫里逖 申請人:希格馬托制藥工業(yè)公司, 門德斯公司