專(zhuān)利名稱(chēng)：蛋白激酶c抑制劑的制作方法
蛋白激酶C(PKC)由一族具有絲氨酸/蘇氨酸激酶作用的密切相關(guān)的酶組成。蛋白激酶C在細(xì)胞間信號(hào)傳遞、基因表達(dá)以及細(xì)胞分化和生長(zhǎng)的控制中起重要作用。目前，已知至少有10種其組織分布、酶特異性和調(diào)節(jié)作用不同的PKC異構(gòu)酶。Nishizuka Y.生物化學(xué)年報(bào)綜述(Annu.Rev.Biochem.)5831-44(1989)；Nishizuka Y.科學(xué)258607-614(1992)。
蛋白激酶C異構(gòu)酶是長(zhǎng)度為592-737個(gè)氨基酸的單鏈多肽。該異構(gòu)酶含有由一接頭肽相連的一個(gè)調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域和一個(gè)催化結(jié)構(gòu)域。調(diào)節(jié)和催化結(jié)構(gòu)域又進(jìn)一步分成恒定區(qū)和可變區(qū)。蛋白激酶C的催化結(jié)構(gòu)域與在其它蛋白激酶中所見(jiàn)到的很相似，而調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域是PKC異構(gòu)酶所特有的。PKC異構(gòu)酶在這一類(lèi)酶中氨基酸的同源性為40-80％。但是不同種之間單異構(gòu)酶的同源性通常大于97％。
蛋白激酶C是一種膜相關(guān)酶，由許多因素進(jìn)行變象調(diào)節(jié)，所述因素包括膜磷脂、鈣和特定的膜脂類(lèi)，例如在應(yīng)答磷脂酶活性中所釋放的二?；视?。Bell，R.M.和Burns，D.J.，生物化學(xué)雜志2664661-4664(1991)；Nishizuka，Y.科學(xué)258607-614(1992)。蛋白激酶C異構(gòu)酶α、β-1、β-2和γ的完全激活需要膜磷脂、鈣和二?；视?佛波酯。PKC的δ、ε、η和θ形式在其激活模式中是不依賴(lài)鈣的。PKC的ζ和λ形式不依賴(lài)于鈣和二?；视?，據(jù)信其激活只需要膜磷脂。
可能只有一種或兩種蛋白激酶C異構(gòu)酶與某些疾病有關(guān)。例如，糖尿病患者體中所發(fā)現(xiàn)的血糖水平升高會(huì)導(dǎo)致血管組織中β-2異構(gòu)酶的異構(gòu)酶特異性升高。Inoguchi等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院報(bào)8911059-11065(1992)。在人血小板中糖尿病相關(guān)的β異構(gòu)酶升高與血小板對(duì)激動(dòng)劑反應(yīng)的改變有關(guān)。Bastyr III，E.J.和Lu，J.糖尿病42(Suppl.1)97A(1993)。已經(jīng)表明人維生素D受體由蛋白激酶Cβ選擇性磷酸化。這種磷酸化作用與該受體功能的改變有關(guān)。Hsieh等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院報(bào)889315-9319(1991)；Hsieh等，生物化學(xué)雜志26815118-15126(1993)。此外，最近的研究工作表明β-2異構(gòu)酶與紅白血病細(xì)胞的增殖有關(guān)，而α異構(gòu)酶與這些細(xì)胞中的巨核細(xì)胞分化有關(guān)。Murray等，生物化學(xué)雜志，26815847-15853(1993)。
蛋白激酶異構(gòu)酶無(wú)所不在的性質(zhì)及其在生理學(xué)中的重要作用為生產(chǎn)高選擇性的PKC抑制劑提供了動(dòng)力。由于有證據(jù)表明特定的異構(gòu)酶與疾病有關(guān)，因此可以設(shè)想，相對(duì)于其它PKC異構(gòu)酶及其它蛋白激酶而言，對(duì)一種或兩種蛋白激酶C異構(gòu)酶有選擇性的抑制劑化合物是優(yōu)秀的治療劑。這些化合物由于其特異性而具有更高的效力和更低的毒性。
在Heath等的EP 0657458(U.S.S.N.08/413，735)中公開(kāi)了一類(lèi)N，N’-橋接的雙吲哚基馬來(lái)酰亞胺化合物，該專(zhuān)利公開(kāi)于1995年6月14日，公開(kāi)號(hào)為0657458。在該N，N’-橋接的系列化合物中，優(yōu)選的化合物包括式I的化合物
本發(fā)明提供了式I化合物的新的、有效的鹽形式。意想不到的是，所要求的鹽形式的溶解度得到提高，并顯著改善了在患者體內(nèi)的生物利用度。此外，所述鹽很容易以結(jié)晶的形式制備和純化。因此，所要求的鹽是更好的藥物和具有很大改進(jìn)的治療劑。所要求的鹽可用于治療與糖尿病有關(guān)的疾病及其并發(fā)癥、局部缺血、炎癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心血管疾病、皮膚病和癌癥。
本發(fā)明提供了式I化合物的甲磺酸鹽。因此本發(fā)明提供了式Ia的化合物及其溶劑化物
本發(fā)明的另一方面涉及抑制蛋白激酶C的方法，該方法包括向需要所述治療的哺乳動(dòng)物施用藥物有效量的式Ia化合物。本發(fā)明還提供了治療蛋白激酶C在病理學(xué)上起作用的疾病(如局部缺血、炎癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心血管疾病、皮膚病和癌癥)的方法，該方法包括向需要治療的哺乳動(dòng)物施用藥物有效量的式Ia化合物。
本發(fā)明特別適于用作藥物，尤其是用于治療微血管糖尿病并發(fā)癥，特別是糖尿病性視網(wǎng)膜病、腎病和神經(jīng)病。因此，本發(fā)明還提供了治療糖尿病及其并發(fā)癥的方法，該方法包括向需要所述治療的哺乳動(dòng)物施用藥物有效量的式Ia化合物。
本發(fā)明的最后一個(gè)方面是含有式Ia化合物和一種或多種可藥用賦形劑、載體或稀釋劑的藥物制劑。
就文中所公開(kāi)和要求的本發(fā)明的目的而言，下列術(shù)語(yǔ)和縮寫(xiě)的定義如下文中所用的術(shù)語(yǔ)“藥物有效量”表示能夠在哺乳動(dòng)物中抑制PKC活性的化合物的量。當(dāng)然，按照本發(fā)明施用的所述化合物的具體劑量應(yīng)根據(jù)病例所處的具體環(huán)境來(lái)確定，包括施用的化合物、給藥途徑、所治療的具體疾病等。可將所述化合物通過(guò)包括口服、直腸、經(jīng)皮、皮下、局部、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或鼻內(nèi)的各種途徑進(jìn)行給藥。優(yōu)選將化合物口服給藥。對(duì)于所有適應(yīng)癥，一般的每日劑量含有約0.01mg/kg-約20mg/kg的本發(fā)明活性化合物。優(yōu)選的每日劑量為約0.01-約10mg/kg，更優(yōu)選在1mg/kg以下，最佳為約0.05-約0.5mg/kg。
文中所用術(shù)語(yǔ)“治療”描述了為了抵御疾病而對(duì)患者進(jìn)行的管理和看護(hù)，并包括施用本發(fā)明的化合物以預(yù)防癥狀或并發(fā)癥的發(fā)作，緩解癥狀或并發(fā)癥，或者消除疾病。
文中所用術(shù)語(yǔ)“總相關(guān)物質(zhì)”指在最終產(chǎn)物中雜質(zhì)的相對(duì)量。雜質(zhì)包括(但不限于)，混在最終產(chǎn)物中的上游反應(yīng)中間體或不需要的反應(yīng)副產(chǎn)物?？傁嚓P(guān)物質(zhì)是純度的衡量標(biāo)準(zhǔn)。
如上所述，本發(fā)明提供了可選擇性抑制蛋白激酶C的式Ia化合物及其溶劑化物
式Ia化合物可作為溶劑化物存在，例如與水(水合物)、甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺、乙酸乙酯等形成的溶劑化物。還可以制備所述水合物和溶劑化物的混合物。所述水合物和/或溶劑化物中的水和溶劑可以來(lái)自重結(jié)晶的溶劑，它們可以是制備或重結(jié)晶用的溶劑本身，或是所述溶劑中所包含的外來(lái)成分。這些水合物和溶劑化物也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。優(yōu)選將式Ia化合物制備成一水合物或三水合物。
已發(fā)現(xiàn)式Ia化合物可以存在各種立體異構(gòu)體的形式。優(yōu)選的本發(fā)明化合物是式Ib和Ic的化合物
然而，外消旋體、單獨(dú)的對(duì)映體及其混合物構(gòu)成了本發(fā)明的一部分。
式I游離堿的制備記載于Heath等的EP 0657458，該專(zhuān)利公開(kāi)于1995年6月14日，公開(kāi)號(hào)為0657458，該專(zhuān)利引入本文作為參考。優(yōu)選通過(guò)以下方法制備該化合物
R1是OMesyl或溴。P1是羥基保護(hù)基，優(yōu)選叔丁基二苯基甲硅烷氧基(TBDPS)、叔丁基二甲基甲硅烷氧基(TBDMS)、三苯甲基(三苯甲游基)、一或二甲氧基三苯甲基或烷基或芳基酯。L是良好的離去基，例如氯、溴、碘、甲磺?；?、甲苯磺?；取?yōu)選L是O-甲磺?；蜾?。
形成化合物IV的反應(yīng)可通過(guò)制備N(xiāo)-取代的吲哚的任何已知方法來(lái)完成。該反應(yīng)通常使用約等摩爾量的反應(yīng)試劑II和III，但也可以使用其它比例量，尤其是烷基化試劑過(guò)量的比例量。反應(yīng)最好是在極性非質(zhì)子溶劑中并使用堿金屬鹽的條件下進(jìn)行，或在本領(lǐng)域熟知的其它烷基化條件下進(jìn)行。反應(yīng)條件包括六甲基二硅烷基氨基鉀的二甲基甲酰胺溶液或四氫呋喃溶液、氫化鈉的二甲基甲酰胺溶液。反應(yīng)優(yōu)選在緩慢逆流添加碳酸銫的乙腈溶液或二甲基甲酰胺(DMF)溶液的條件下進(jìn)行。反應(yīng)溫度優(yōu)選約環(huán)境溫度至約反應(yīng)混合物的回流溫度。
通過(guò)本領(lǐng)域熟知的對(duì)羥基脫保護(hù)的技術(shù)將化合物IV轉(zhuǎn)變成化合物V。通過(guò)將化合物V與甲磺酸酐和吡啶在THF或二氯甲烷中于氮?dú)庀路磻?yīng)，或?qū)⒋寂c溴在三苯膦或亞磷酸三苯酯和吡啶的存在下在二氯甲烷、THF、乙腈或其它適宜的溶劑中反應(yīng)，可以很方便地將化合物V轉(zhuǎn)變成化合物VI。通過(guò)將化合物VI與二甲胺在極性溶劑如DMF、THF/水、二甲基乙酰胺或本領(lǐng)域熟知的其它條件下反應(yīng)將化合物VI轉(zhuǎn)變成二甲胺，即化合物I。
通過(guò)將式I化合物與甲磺酸在非反應(yīng)性有機(jī)溶劑中反應(yīng)來(lái)制備所要求的甲磺酸鹽，所述溶劑優(yōu)選有機(jī)溶劑/水的化合物，最優(yōu)選水-丙酮。也可以使用其它溶劑如甲醇、丙酮、乙酸乙酯以及這些溶劑的混合物。溶劑與水的比例并不重要，通常根據(jù)試劑的溶解度來(lái)確定。優(yōu)選的溶劑與水的比例通常為0.1∶1至100∶1(溶劑∶水，體積/體積)。優(yōu)選該比例為1∶1至20∶1，最優(yōu)選5∶1至10∶1。最佳的比例取決于所選的溶劑，當(dāng)選用丙酮時(shí)優(yōu)選溶劑與水的比例為9∶1。反應(yīng)通常使用約等摩爾量的兩種反應(yīng)試劑，但也可以使用其它比例，尤其是甲磺酸過(guò)量的比例。加入甲磺酸的速率對(duì)反應(yīng)并不重要，可以迅速加入(＜5分鐘)或在6小時(shí)或更長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)緩慢加入。反應(yīng)在0℃至回流的溫度下進(jìn)行。通過(guò)X-射線粉末衍射進(jìn)行確定，將反應(yīng)液攪拌至成鹽結(jié)束，反應(yīng)需5分鐘至12小時(shí)。本發(fā)明的鹽優(yōu)選并可以方便地以結(jié)晶的形式進(jìn)行制備。在干燥或暴露于20-60％的相對(duì)濕度下時(shí)，鹽的三水合物很容易轉(zhuǎn)變成一水合物。該鹽基本上是晶體，表現(xiàn)為確定的熔點(diǎn)、雙折射和X-射線衍射圖。通常，晶體中含有低于10％的非晶形固體，優(yōu)選低于5％并最優(yōu)選低于1％的非晶形固體。
通過(guò)過(guò)濾或本領(lǐng)域熟知的其它分離方法將甲磺酸鹽直接同反應(yīng)混合物分離，收率為50％至100％。如需要，可用重結(jié)晶或本領(lǐng)域熟知的其它純化方法將該鹽進(jìn)一步純化。
提供以下實(shí)施例和制備例僅僅是為了進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。不應(yīng)解釋為本發(fā)明的范圍僅由以下實(shí)施例構(gòu)成。在以下實(shí)施例和制備例中，將熔點(diǎn)、核磁共振譜、質(zhì)譜、高壓液相硅膠色譜、N，N-二甲基甲酰胺、鈀炭、四氫呋喃和乙酸乙酯分別縮寫(xiě)為M.Pt、NMR、MS、HPLC、DMF、Pd/C、THF和EtOAc。術(shù)語(yǔ)“NMR”和“MS”表明該光譜與所需的結(jié)構(gòu)一致。
制備例13-(2-[(甲磺酰)氧基]乙氧基]-4-(三苯甲氧基)-1-丁醇甲磺酸酯將三苯甲基氯(175.2g，0.616mol)在氮?dú)庀氯苡?00mL二氯甲烷。依次加入三乙胺(71.9g，100mL，0.710mol)和R，S-縮水甘油(50.0g，0.648mol)，然后將反應(yīng)溶液加熱至輕微回流(42℃)4小時(shí)。將反應(yīng)液冷卻至室溫，依次用250mL飽和氯化銨水溶液和250mL鹽水萃取兩次。將含水層用100mL二氯甲烷反萃取，將有機(jī)層干燥(硫酸鎂)并真空蒸發(fā)得到油狀三苯甲基-縮水甘油，將其用乙醇重結(jié)晶得到104.4g(54％)固體狀三苯甲基-縮水甘油。
氮?dú)庀?，?M乙烯基溴化鎂的THF溶液(50mL，50mmol，2.0當(dāng)量)冷卻至-20℃并加入催化量的碘化銅(0.24g，1.26mmol，0.05當(dāng)量)。將得到的混合物在-20℃下攪拌5分鐘，然后在-20℃下于15分鐘內(nèi)滴加三苯甲基-縮水甘油(7.91g，25.0mmol)的40mL無(wú)水THF溶液。將反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌3小時(shí)，然后將其升至室溫并攪拌15分鐘。將反應(yīng)混合物冷卻至-30℃終止反應(yīng)并緩慢加入125mL飽和氯化銨水溶液。將得到的混合物用200mL乙酸乙酯萃取。然后將有機(jī)層用0.93g(2.50mmol，0.1當(dāng)量)乙二胺四乙酸二鈉鹽二水合物(EDTA)的125mL去離子水溶液萃取以除去所有的金屬。將含水層用50mL乙酸乙酯反萃取，將合并的有機(jī)層用100mL鹽水洗滌、干燥(硫酸鎂)并真空蒸發(fā)得到油狀物，將其通過(guò)硅膠(76g)過(guò)濾，使用1.2L 3/1的己烷/乙酸乙酯洗脫。將濾液真空蒸發(fā)得到9.07g(100％)淡黃色油狀的1-O-(三苯甲基)-2-羥基-戊醇。
在室溫下加入60％氫化鈉的礦物油懸浮液(6.13g，0.153mol，1.5當(dāng)量)在175mL無(wú)水THF中的懸浮液。將得到的混合物在室溫下攪拌1.5小時(shí)，然后通過(guò)注射器加入17.7mL(0.204mmol，2.0當(dāng)量)新蒸的烯丙基溴。將反應(yīng)液加熱至45℃1小時(shí)?？赏ㄟ^(guò)TLC或HPLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃并緩慢加入400mL飽和氯化銨水溶液破壞過(guò)量的堿。將得到的混合物用800mL乙酸乙酯萃取并將有機(jī)層用500mL水洗滌。將含水層用100mL乙酸乙酯反萃取，將合并的有機(jī)層用200mL鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空蒸發(fā)得到41.5g(＞100％)黃色油狀1，1′，1″-[[[2-(2-丙烯氧基)-4-戊烯基]氧基]次甲基]三[苯]。
將1，1′，1″-[[[2-(2-丙烯氧基)-4-戊烯基]氧基]次甲基]三[苯](39.3g，0.102mol)溶于390mL無(wú)水甲醇和60mL二氯甲烷形成的溶液并冷卻至-50℃至-40℃，同時(shí)向該粘稠的反應(yīng)溶液中通入氮?dú)?。然后?50℃至-40℃下向反應(yīng)混合物中通入80分鐘臭氧，直至反應(yīng)液變?yōu)榈{(lán)色。將得到的反應(yīng)混合物在氮?dú)庀律郎刂?℃，然后緩慢加入硼氫化鈉(23.15g，0.612mol，6當(dāng)量)在85mL乙醇/85mL水中的溶液終止反應(yīng)，同時(shí)將反應(yīng)液的溫度保持在10℃以下。將反應(yīng)液在冰浴中攪拌30分鐘，然后升至室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。加熱下使溫度升至31℃。將反應(yīng)混合物用400mL飽和氯化銨水溶液稀釋并用800mL乙酸乙酯萃取。將有機(jī)層用400mL水洗滌并將含水層用150mL乙酸乙酯反萃取。將合并的有機(jī)層用200mL鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空蒸發(fā)得到混濁油狀物。將該油狀物分三批用2/1己烷/乙酸乙酯重結(jié)晶得到28.9g(72％)3-(2-羥基乙氧基)-4-(三苯甲氧基)-1-丁醇。
將3-(2-羥基乙氧基)-4-(三苯甲氧基)-1-丁醇(14.0g，35.7mmol)溶于140mL二氯甲烷，在氮?dú)庀吕鋮s至0℃，加入三乙胺(10.8g，14.9mL，0.107mol，3.0當(dāng)量)。然后在＜5℃下滴加甲磺酰氯(11.0g，7.46mL，96.4mmol，2.7當(dāng)量)。將得到的反應(yīng)混合物用二氯甲烷(300mL)稀釋并用200mL水和200mL飽和氯化銨水溶液洗滌。將含水層用50mL二氯甲烷反萃取，將合并的有機(jī)層用100mL鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)并真空蒸發(fā)得到18.4g(94％)白色固體狀3-(2-[(甲磺酰)氧基]乙氧基]-4-(三苯甲氧基)-1-丁醇甲磺酸酯。
制備例2(S)三苯甲基縮水甘油將三苯甲基氯(2866g，10.3mol)在氮?dú)庀氯苡?L二氯甲烷。加入三乙胺(1189g，1638mL，11.8mol)，然后用1L二氯甲烷沖洗下加入(R)-(+)-縮水甘油(795.0g，10.6mol)。將反應(yīng)溶液加熱至輕微回流(42℃)3-4小時(shí)。將反應(yīng)液冷卻至室溫，然后加入3L鹽水。將有機(jī)層干燥(600g硫酸鈉)并真空蒸發(fā)得到油狀標(biāo)題化合物，將其用乙醇重結(jié)晶得到2354g(70％)固體狀標(biāo)題化合物。
制備例3(S)-3-(2-[(甲磺酰)氧基]乙氧基]-4-(三苯甲氧基)-1-丁醇甲磺酸酯氮?dú)庀拢瑢?M乙烯基溴化鎂的THF溶液(5.76L，5.76mol，1.96當(dāng)量)冷卻至-20℃并加入催化量的碘化銅(28.2g，0.148mol，0.05當(dāng)量)。將得到的混合物在-20℃下攪拌5分鐘，然后在-20℃下于1.5小時(shí)內(nèi)滴加(S)-三苯甲基-縮水甘油(929.0g，2.94mol)的3.2L無(wú)水THF溶液。將反應(yīng)混合物在-20℃下攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至-30℃終止反應(yīng)并緩慢加入5L飽和氯化銨水溶液。然后將有機(jī)層用1L10％(重量/體積)乙二胺四乙酸二鈉鹽二水合物(EDTA)溶液萃取兩次以除去所有的金屬。將有機(jī)層用2L鹽水洗滌、干燥(硫酸鎂)并真空蒸發(fā)得到1061g(96％)油狀(S)-1-O-三苯甲基-4-羥基戊醇。
將60％氫化鈉的礦物油懸浮液(268.9g，6.72mol，1.5當(dāng)量)在氮?dú)庀聭腋∮?.8L無(wú)水THF中，然后在室溫下加入(S)-1-O-三苯甲基-4-羥基戊醇(1543g，4.48mol)的5.6L無(wú)水THF溶液。將得到的混合物在室溫下攪拌1.5小時(shí)，然后在20分鐘內(nèi)加入770mL(8.89mol，2.0當(dāng)量)新蒸的烯丙基溴。將反應(yīng)液加熱至45℃1-2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至15-20℃并緩慢加入2L飽和氯化銨水溶液分解過(guò)量的堿。將得到的混合物用1L乙酸乙酯和1L水稀釋并分出有機(jī)層。將含水層用500mL乙酸乙酯反萃取，將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)并真空蒸發(fā)得到1867g(98％)黃色油狀(S)-1，1′，1″-[[[2-(2-丙烯氧基)-4-戊烯基]氧基]次甲基]三[苯]。
將(S)-1，1′，1″-[[[2-(2-丙烯氧基)-4-戊烯基]氧基]次甲基]三[苯](1281g，3.33mol)溶于4L無(wú)水甲醇和3.6L二氯甲烷形成的溶液中并冷卻至-50℃至-40℃，同時(shí)向該粘稠的反應(yīng)溶液中通入氮?dú)狻Ｏ蚍磻?yīng)液中加入蘇丹III指示劑，然后在-50℃至-35℃下向反應(yīng)混合物中通入13小時(shí)臭氧，直至反應(yīng)液從桃色變?yōu)榈G/黃色。將得到的反應(yīng)混合物在氮?dú)庀律郎刂?℃，然后在40分鐘內(nèi)緩慢加入硼氫化鈉(754g，19.9mol，6當(dāng)量)在2.5L乙醇/2.5L水中的溶液，同時(shí)保持反應(yīng)液的溫度在30℃以下。然后將反應(yīng)液在室溫下攪拌過(guò)夜?？赏ㄟ^(guò)HPLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)。將反應(yīng)混合物冷卻至10-15℃，在＜20℃下緩慢加入4L飽和氯化銨水溶液。將終止反應(yīng)的反應(yīng)混合物過(guò)濾并將固體用3L二氯甲烷洗滌。分出有機(jī)層并用3L飽和氯化銨水溶液洗滌，將水層用1L二氯甲烷反萃取。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)并真空蒸發(fā)得到1361g(＞100％)油狀(S)-3-(2-羥基乙氧基)-4-(三苯甲氧基)-1-丁醇。
將(S)-3-(2-羥基乙氧基)-4-(三苯甲氧基)-1-丁醇(500g，1.27mol)溶于4.8L二氯甲烷，在氮?dú)庀吕鋮s至0℃，然后加入三乙胺(386.4g，532mL，3.81mol，3.0當(dāng)量)。然后在＜5℃下于30分鐘內(nèi)滴加甲磺酰氯(396.3g，268mL，3.46mol，2.7當(dāng)量)。將得到的反應(yīng)混合物在0-5℃下攪拌1-2小時(shí)，通過(guò)HPLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)。將反應(yīng)混合物用二氯甲烷稀釋并用2L水和2L飽和氯化銨水溶液洗滌兩次。將含水層用1L二氯甲烷反萃取，將合并的有機(jī)層用干燥(硫酸鎂)并真空蒸發(fā)得到固體粗品，將其用1/1庚烷/乙酸乙酯重結(jié)晶，分3批得到615g(88％)固體狀(S)-3-[2-[(甲磺酰)氧基]乙氧基]-4-(三苯甲氧基)-1-丁醇甲磺酸酯。NMR.MS.
制備例43-[2-碘乙氧基]-4-(三苯甲氧基)-1-碘丁烷將3-(2-[(甲磺酰)氧基]乙氧基]4-(三苯甲氧基)-1-丁醇甲磺酸酯(5.0g，9.10mmol)在500mL試劑級(jí)丙酮中的溶液用碳酸氫鈉(0.0770g，0.910mmol，0.1當(dāng)量)和碘化鈉(34.2g，0.228mol，25當(dāng)量)處理。將得到的混合物在50℃及氮?dú)庀聰嚢杓s16小時(shí)。可通過(guò)HPLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)。真空蒸除反應(yīng)混合物中的丙酮，將得到的固體提取到300mL乙酸乙酯/200mL水的混合物中。將有機(jī)層再用200mL水洗滌，將合并的含水層用100mL乙酸乙酯反萃取。將合并的有機(jī)層用200mL10％亞硫酸鈉水溶液(該洗滌液可除去黃色)和100mL鹽水洗滌，干燥(硫酸鎂)，真空蒸發(fā)得到5.45g(98％)透明油狀3-[2-碘乙氧基]-4-(三苯甲氧基)-1-碘丁烷。MS.NMR.
制備例5(S)-10，11，14，15-四氫-13-[甲磺酰氧基(甲基)]-4，916，21-二甲烯橋(dimetheno)-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H]，[3，4，13]-
氧雜二氮雜十六碳因-1，3-二酮將3，4-(雙)-(1H-吲哚-3-基)-N-甲基馬來(lái)酰亞胺(10.04g，29.4mmol)和(S)-3-(2-碘乙氧基)-4-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)-1-碘丁烷(17.9g，29.4mmol)混合并溶于無(wú)水DMF(80mL)。將該溶液通過(guò)注射器泵加樣器在50℃及氮?dú)庀掠?2小時(shí)內(nèi)加入到碳酸銫(38.3g，118mmol)的無(wú)水DMF(1.7L)懸浮液中。真空蒸除DMF。將殘余物在氯仿/1N鹽酸之間進(jìn)行分配。將酸性層用氯仿和乙酸乙酯反萃取。將合并的有機(jī)層用1N鹽酸(1次)、水(2次)和鹽水(2次)洗滌，硫酸鈉干燥，蒸除溶劑得到洋紅色固體。該反應(yīng)混合物粗品不經(jīng)純化直接使用。
將反應(yīng)混合物粗品懸浮在乙醇(700mL)中并用5N氫氧化鉀(800mL)處理。反應(yīng)溫度上升至80℃。72小時(shí)后真空蒸除乙醇；將含水懸浮液冷卻至0℃，用5N鹽酸酸化。收集紫色沉淀并將其通過(guò)一硅膠短柱，用乙酸乙酯洗脫。將洗脫液濃縮得到8.7g洋紅色固體狀部分甲硅烷基化的馬來(lái)酰亞胺，該產(chǎn)物不經(jīng)純化直接用于下一步反應(yīng)。
氮?dú)饧碍h(huán)境溫度下，向上述酸酐(8.7g，19.7mmol)的DMF(1L)溶液中加入1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷(41.6mL，197mmol)和甲醇(4mL，98.5mmol)。40小時(shí)后，將反應(yīng)液真空濃縮，加入2∶1(v/v)MeCN/1N鹽酸溶液(100mL)。將該殘余物攪拌1小時(shí)。蒸除有機(jī)溶劑，將含水懸浮液用乙酸乙酯萃取。蒸除溶劑得到8.9g馬來(lái)酰亞胺，該產(chǎn)物不經(jīng)純化直接使用。
氮?dú)饧碍h(huán)境溫度下，向上述馬來(lái)酰亞胺(8.9g，20mmol)的二氯甲烷(800mL)懸浮液中加入吡啶(4.85mL，60mmol)和稍微過(guò)量的甲磺酸酐(4.21g，24mmol)。16小時(shí)后，將反應(yīng)混合物用0.1N鹽酸和鹽水洗滌，然后將有機(jī)層濃縮。將殘余物通過(guò)一短的硅膠柱，用慢梯度的0-10％MeCN的二氯甲烷溶液洗脫。將含有所需甲磺酸酯的洗脫液餾分濃縮得到2.8g洋紅色固體狀標(biāo)題化合物。按二碘化物計(jì)總收率為18％。MS。
制備例6(S)-13-[(二甲氨基)甲基]-10，11，14，15-四氫-4，916，21-二甲烯橋-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H]，[1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3(2H)-二酮將2，3-二-(1H-吲哚-3-基)-N-甲基馬來(lái)酰亞胺(114.7g，0.336mol)和(S)-3-(2-[(甲磺酰)氧基]乙氧基]-4-(三苯甲氧基)-1-丁醇甲磺酸酯(220.0g，0.401mol，1.2當(dāng)量)溶于4.3L DMF。將該反應(yīng)試劑溶液于70小時(shí)內(nèi)(以約1mL/分鐘速率)緩慢加入到50℃的碳酸銫(437.8g，1.34mol，4.0當(dāng)量)在7L DMF的漿液中。70-72小時(shí)后，將反應(yīng)液冷卻并過(guò)濾，真空蒸除DMF得到殘余物，將該殘余物溶于4.6L二氯甲烷中。將有機(jī)層用1.15L 1N鹽酸水溶液萃取，然后用4.6L鹽水萃取。將合并的含水層用1.1L二氯甲烷反萃取。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鈉)并過(guò)濾。真空蒸除大部分溶劑，將得到的溶液用2Kg硅膠過(guò)濾，用4-5加侖二氯甲烷除去原料物質(zhì)。真空蒸除溶劑，將得到的紅紫色固體在7體積的乙腈(基于(S)-10，11，14，15-四氫-2-甲基-13-[(三苯甲氧基)甲基]-4，916，21-二甲烯橋-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H]，[1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3(2H)-二酮粗品的重量)中研制，干燥后得到150.2g(57％)(S)-10，11，14，15-四氫-2-甲基-13-[(三苯甲氧基)甲基]-4，916，21-二甲烯橋-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H]，[1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3(2H)-二酮(經(jīng)HPLC與標(biāo)準(zhǔn)比較，純度為89％)。
將(S)-10，11，14，15-四氫-2-甲基-13-[(三苯甲氧基)甲基]-4，916，21-二甲烯橋-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H]，[1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3(2H)-二酮(32.7g，46.9mmol)懸浮在1.6L乙醇和1.6L 10N氫氧化鉀水溶液中。將得到的混合物加熱至輕微回流(78℃)19小時(shí)。大部分固體在開(kāi)始回流后溶解。將反應(yīng)溶液冷卻至10-15℃，然后在＜15℃下緩慢加入10N鹽酸水溶液(1.2L)將酸度調(diào)至pH＝1。在酸化時(shí)形成紅色漿液。將反應(yīng)混合物用500mL二氯甲烷稀釋?zhuān)瑪嚢?0分鐘后過(guò)濾以除去大部分的鹽。將鹽用二氯甲烷(1.5L)洗滌，將濾液用1L水萃取兩次。將合并的含水層用1L二氯甲烷反萃取，然后將有機(jī)層干燥(硫酸鎂)。真空蒸除溶劑得到36.0(＞100％)紅紫色固體狀(S)-10，11，14，15-四氫-13-[(三苯甲氧基)甲基]-4，916，21-二甲烯橋-13H-二苯并[E，K]呋喃并[3，4-H][1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3-二酮(經(jīng)HPLC面積確定，純度為80％)。
將(S)-10，11，14，15-四氫-13-[(三苯甲氧基)甲基]-4，916，21-二甲烯橋-13H-二苯并[E，K]呋喃并[3，4-H][1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3-二酮(36.0g，估計(jì)為46.9mmol)在氮?dú)庀氯苡?20mL無(wú)水DMF，然后用預(yù)混合的1，1，1，3，3，3-六甲基二硅氮烷(99mL，75.7g，0.469mol，10當(dāng)量)和甲醇(9.5mL，7.51g，0.235mol，5當(dāng)量)的溶液處理。將得到的溶液加熱至45℃7小時(shí)?？赏ㄟ^(guò)HPLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)。真空蒸除大部分DMF，將得到的殘余物萃取到200mL乙酸乙酯中，用200mL水洗滌，然后用100mL5％氯化鋰水溶液洗滌兩次。將含水層用100mL乙酸乙酯反萃取。將合并的有機(jī)層用200mL飽和氯化銨水溶液洗滌。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)并真空蒸發(fā)得到35.9g(＞100％)紅紫色固體狀(S)-10，11，14，15-四氫-13-[(三苯甲氧基)甲基]-4，916，21-二甲烯橋-1H；13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H][1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3(2H)-二酮粗品。
將(S)-10，11，14，15-四氫-13-[(三苯甲氧基)甲基]-4，916，21-二甲烯橋-1H；13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H][1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3(2H)-二酮(34.0，估計(jì)為46.8mmol)溶于350mL二氯甲烷并在氮?dú)庀吕鋮s至-25℃。在＜0℃下向反應(yīng)溶液中通入無(wú)水氯化氫氣體約1-2分鐘。將得到的漿液升至室溫并攪拌1小時(shí)?？赏ㄟ^(guò)HPLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)。將漿液過(guò)濾并將固體用200mL二氯甲烷洗滌。將固體在真空烘箱內(nèi)于50℃下干燥，得到18.6g(90％)紅紫色固體狀(S)-10，11，14，15-四氫-13-(羥甲基)-4，916，21-二甲烯橋-1H；13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H][1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3(2H)-二酮(經(jīng)HPLC面積確定，純度為93％)粗品。
將(S)-10，11，14，15-四氫-13-(羥甲基)-4，916，21-二甲烯橋-1H；13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H][1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3(2H)-二酮(18.2g，41.2mmol)的900mLTHF懸浮液用吡啶(9.78g，10.0mL，0.124mmol，3當(dāng)量)和甲磺酸酐(14.3g，80.4mmol，2當(dāng)量)處理并在氮?dú)庀录訜嶂粱亓?67℃)16小時(shí)?？赏ㄟ^(guò)HPLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)。將反應(yīng)液冷卻并用600mL乙酸乙酯稀釋?zhuān)?00mL1N鹽水萃取兩次并用600mL水萃取一次。將含水層用300mL乙酸乙酯反萃取并將有機(jī)層干燥(硫酸鎂)。真空蒸除溶劑得到19.0g(S)-10，11，14，15-四氫-13-[[(甲磺酰)氧基]甲基]-4，916，21-二甲烯橋-1H；13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H][1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3(2H)-二酮，將其在190mL熱(40℃)二氯甲烷中研制，熱過(guò)濾并用100mL室溫下的二氯甲烷洗滌，得到17.3g(81％)紅紫色固體狀(S)-10，11，14，15-四氫-13-[[(甲磺酰)氧基]甲基]-4，916，21-二甲烯橋-1H；13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H][1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3(2H)-二酮(經(jīng)HPLC面積確定，純度為96％)。
將(S)-10，11，14，15-四氫-13-[[(甲磺酰)氧基]甲基]-4，916，21-二甲烯橋-1H；13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H][1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3(2H)-二酮(9.50g，18.3mmol)溶于475mLTHF，然后加入172mL40％二甲胺(0.173mol，75當(dāng)量)水溶液，將得到的溶液在密封的反應(yīng)器(8-10磅/平方英寸)中于65℃加熱19小時(shí)。將反應(yīng)液冷卻并用900mL乙酸乙酯稀釋?zhuān)瑢⒂袡C(jī)層用450mL水萃取兩次并用200mL鹽水萃取一次。將含水層用250mL乙酸乙酯反萃取，將有機(jī)層干燥(硫酸鎂)，真空蒸除溶劑得到7.82g(91％)(S)-13-[(二甲氨基)甲基]-10，11，14，15-四氫-4，916，21-二甲烯橋-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H][1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3(2H)-二酮。
實(shí)施例1甲磺酸鹽將(S)-13-[(二甲氨基)甲基]-10，11，14，15-四氫-4，916，21-二甲烯橋-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H][1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3(2H)-二酮(3.0g，6.4mmol)懸浮在90mL試劑級(jí)的丙酮中。向該堿/丙酮漿液中加入甲磺酸(0.62g，1當(dāng)量)在10mL去離子水中的溶液。將得到的淡紅色-橙色漿液攪拌并過(guò)濾，用25mL丙酮沖洗，干燥后得到2.92g(81％)甲磺酸鹽。所有操作，包括沖洗，均在室溫下進(jìn)行。
實(shí)施例2一鹽酸鹽通過(guò)將堿(3.0g，6.4mmol)懸浮在120mL(1當(dāng)量)甲醇中來(lái)制備(S)-13-[(二甲氨基)甲基]-10，11，14，15-四氫-4，916，21-二甲烯橋-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H][1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3(2H)-二酮的一鹽酸鹽。加入1N鹽酸水溶液。將得到的混合物攪拌約16小時(shí)，過(guò)濾并用25mL甲醇沖洗。將得到的鹽在真空烘箱中于50℃下干燥過(guò)夜得到2.65g(82％)鹽酸鹽。所有操作，包括沖洗，均在室溫下進(jìn)行。
實(shí)施例3-8
鹽酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、乙酸鹽和磷酸鹽通過(guò)本領(lǐng)域熟知的方法，用甲醇/水溶劑混合物來(lái)制備鹽酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、乙酸鹽和磷酸鹽。各種鹽均是通過(guò)將酸的水溶液加入到(S)-13-[(二甲氨基)甲基]-10，11，14，15-四氫-4，916，21-二甲烯橋-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H][1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3(2H)-二酮的甲醇懸浮液中制備的。
意想不到的是，所要求的鹽形式的溶解度得到了提高，并顯著改善了在患者體內(nèi)的生物利用度。該鹽很容易以單一晶形進(jìn)行制備，從而使雜質(zhì)大大減少。以下實(shí)施例對(duì)于說(shuō)明所要求鹽的意想不到的優(yōu)越特性提供了比較分析。
實(shí)施例9收率、總相關(guān)物質(zhì)和殘留溶劑的比較總相關(guān)物質(zhì)是指在最終產(chǎn)物中雜質(zhì)的相對(duì)量，因此是純度的衡量標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于所制備的鹽，在制備硫酸鹽時(shí)得到最高收率，為82％(表I)，制備琥珀酸鹽時(shí)收率最低，為52％。盡管在制備各種鹽時(shí)總相關(guān)物質(zhì)(TRS)均減少，但在制備甲磺酸鹽時(shí)減少得最多，為5.26％。在真空烘箱中于50℃干燥約16小時(shí)后，鹽酸鹽是唯一含有殘留甲醇(0.62重量％)的鹽。GC分析表明，琥珀酸鹽、乙酸鹽和磷酸鹽含有0.18-1.32％的THF，該THF可能是從合成的倒數(shù)第二步(在含水THF中進(jìn)行的)帶入鹽中的。
表I不同鹽形式的收率、％TRS和％殘留溶劑
a用于制備這些鹽的游離堿含有9.98％的總相關(guān)物質(zhì)。b檢測(cè)的分真空烘箱在50℃下干燥約16小時(shí)。c經(jīng)X-射線粉末衍射測(cè)定，琥珀酸鹽和乙酸鹽在制備條件下未完全滴定。d經(jīng)X-射線粉末衍射測(cè)定，磷酸鹽被部分滴定。
實(shí)施例10通過(guò)X-射線衍射進(jìn)行比較還通過(guò)偏光顯微鏡對(duì)鹽進(jìn)行了比較以確定結(jié)晶度(雙折射)。粉末X-射線衍射表明，僅鹽酸鹽、甲磺酸鹽、琥珀酸鹽和乙酸鹽是結(jié)晶狀的，能夠產(chǎn)生唯一的X-射線圖形。琥珀酸鹽和乙酸鹽的X-射線粉末圖形非常相似，并且與游離堿的圖形有關(guān)。硫酸鹽、酒石酸鹽和磷酸鹽的結(jié)晶性很差，具有明顯的非晶形特征。優(yōu)選結(jié)晶狀的鹽，因?yàn)樗鼈円子诩兓吞幚怼?br> 實(shí)施例11溶解度比較通過(guò)UV分析測(cè)定各種鹽在水中的溶解度(表II)并進(jìn)行比較。意想不到的是，甲磺酸鹽在水中的溶解度最大，為1.76mg/mL。甲磺酸鹽的溶解度明顯高于其它的鹽。表II中的數(shù)據(jù)表明，所要求的鹽在水中的溶解度是常用可藥用鹽、即鹽酸鹽(0.268mg/mL)的6倍以上。隨后的研究同樣表明溶解度增加了2-6倍。用琥珀酸鹽和乙酸鹽觀察到的高pH值表明存在未滴定的游離堿。
表II在水中溶解度。
甲磺酸鹽的在水中的溶解度受pH值的影響很大，在pH4.0-5.0觀察到最高溶解度，優(yōu)選pH4.5(2.25mg/mL)。在更高或較低的pH下，溶解度顯著下降。溶解度除了取決于pH值外，甲磺酸鹽在水中的溶解溶解度顯著下降。溶解度除了取決于pH值外，甲磺酸鹽在水中的溶解度還隨著加入氯化鈉形式的氯化物而顯著下降，其原因是形成了鹽酸鹽。
實(shí)施例12熱重量分析法(TGA)、差示掃描熱量法(DSC)和Mettler溫階顯微鏡測(cè)定法的比較通過(guò)TGA、DSC和Mettler溫階顯微鏡測(cè)定法對(duì)各種鹽進(jìn)行分析和比較(表III)。當(dāng)從20℃加熱至100℃時(shí)，鹽的重量損失為0.73-5.50％。硫酸鹽、酒石酸鹽和磷酸鹽的重量損失最大，均為5.50％。當(dāng)從100℃加熱至200℃時(shí)，僅鹽酸鹽、琥珀酸鹽和乙酸鹽進(jìn)一步表現(xiàn)出重量損失。DSC分析表明，甲磺酸鹽在261.6℃產(chǎn)生明確的吸熱熔融峰。硫酸鹽在267.4℃表現(xiàn)出略寬的吸熱峰。鹽酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、乙酸鹽和磷酸鹽在DSC分析中不表現(xiàn)熔融吸熱。琥珀酸鹽、乙酸鹽和磷酸鹽在約245℃表現(xiàn)出DSC放熱。還使用Mettler溫階顯微鏡通過(guò)溫階顯微鏡測(cè)定法對(duì)樣品進(jìn)行了檢測(cè)。鹽酸鹽在高達(dá)300℃的溫度下不表現(xiàn)出任何真正的熔融。其它檢測(cè)的鹽在215℃至270℃下表現(xiàn)出液化的跡象。
表IIITGA、DSC和Mettler溫階顯微鏡測(cè)定法的結(jié)果。
實(shí)施例13收濕性比較在27％、35％、65％和80％的相對(duì)濕度(RH)下檢測(cè)鹽的收濕性，結(jié)果見(jiàn)表IV。首先對(duì)樣品抽真空以建立RH數(shù)據(jù)的參考點(diǎn)。還通過(guò)Karl-Fisher分析(庫(kù)侖分析)測(cè)定了各種鹽中的含水量。
表IV收濕性和Karl-Fisher分析(K.F.)的結(jié)果。
與暴露于真空中的鹽相比，暴露于80％RH下的鹽重量增加了1.2-8.4％。磷酸鹽是收濕性最強(qiáng)的，其次是酒石酸鹽、甲磺酸鹽、硫酸鹽、乙酸鹽、鹽酸鹽和琥珀酸鹽。Karl-Fisher分析的數(shù)據(jù)與收濕性的數(shù)據(jù)完全吻合，表現(xiàn)為酒石酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽和甲磺酸鹽含的水最多。
實(shí)施例14制備鹽的溶劑分別在甲醇/水、100％丙酮、9∶1丙酮/水、3∶1丙酮/水和1∶1丙酮/水中制備甲磺酸鹽。用于制備這些鹽的游離堿含有9.98％的總相關(guān)物質(zhì)。這些鹽的收率以及其中所含的總相關(guān)物質(zhì)列于表V。為了進(jìn)行比較，還列出了鹽酸鹽的數(shù)據(jù)。表V中的N.A.表示該數(shù)據(jù)未測(cè)定。
表V鹽酸鹽和甲磺酸鹽的收率及％TRS。
a用于制備這些鹽的堿含有9.98％的總相關(guān)物質(zhì)。b用于制備這些鹽的堿含有7.03％的總相關(guān)物質(zhì)。c檢測(cè)的分析極限為0.1％(1000ppm)。
用5∶1丙酮/水制備的甲磺酸鹽含有0.7％的總相關(guān)物質(zhì)，比游離堿的TRS減少了9.3％，但收率很低，僅有39％。如果使用9∶1的丙酮∶水，收率可增加到73％，TRS為2.0％。鹽酸鹽的TRS也下降到了4.7％，減少了5.3％，但出現(xiàn)了2.4％未知的相關(guān)物質(zhì)。這種能夠生產(chǎn)雜質(zhì)(TRS)含量顯著減少的所要求的鹽的能力使得制備的效率更高，同時(shí)避免了昂貴的下一步純化過(guò)程。
因?yàn)辂}酸鹽是最常用的藥物鹽并且已具體公開(kāi)在Heath等的08/413735(1995年6月14日公開(kāi)，公開(kāi)號(hào)為0657458)中(實(shí)施例5)，因此對(duì)甲磺酸鹽和鹽酸鹽進(jìn)行了生物學(xué)比較。意想不到的是，所要求的甲磺酸鹽的生物利用度顯著高于鹽酸鹽。在4只雄性Beagle狗中測(cè)定鹽形式的生物利用度，通過(guò)口服施用單一的20mg/kg劑量的鹽酸鹽和所要求的甲磺酸鹽的10％阿拉伯膠懸浮液。兩次給藥間隔1周的洗凈期。以交叉設(shè)計(jì)進(jìn)行給藥(2只狗/鹽/研究的狗)。測(cè)定活性化合物以及活性代謝物的血漿濃度。在口服給藥所要求的甲磺酸鹽后，從各只狗得到的(S)-13-[(二甲氨基)甲基]-10，11，14，15-四氫-4，916，21-二甲烯橋-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H][1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3(2H)-二酮以及代謝物的血漿濃度高于同等劑量的鹽酸鹽。施用鹽酸鹽后的平均最大血漿濃度(Cmax±誤差)為400±142ng/mL(化合物)和862±255ng/mL(代謝物)。施用所要求的甲磺酸鹽后的平均最大血漿濃度(Cmax±誤差)為896±243ng/mL(化合物)和2455±930ng/mL(代謝物)。這表明化合物和代謝物的血漿濃度增加了約260％。
還將化合物及代謝物的血漿濃度作為研究過(guò)程中時(shí)間的函數(shù)繪制了曲線。濃度曲線下面積(AUC)的比例表示化合物在患者體內(nèi)生物利用度的衡量標(biāo)準(zhǔn)。計(jì)算了鹽酸鹽和所要求的甲磺酸鹽的AUC比并列于表VI中。
表VI一次口服20mg/kg劑量的鹽酸鹽和甲磺酸鹽的AUC比AUC 比例
意想不到的是，表VI中的數(shù)據(jù)表明甲磺酸鹽的生物利用度是鹽酸鹽的2.58倍。這種生物利用度的顯著增加使得可以向患者給予較低的劑量而達(dá)到相同的藥物效果。因此，患者所接受的劑量減至最少。此外，低的單位劑量形式降低了化合物的消耗，從而減少了需要生產(chǎn)的化合物量。因此，預(yù)期本發(fā)明甲磺酸鹽的劑量為0.5mg/kg/劑至0.25mg/kg/劑，優(yōu)選0.1-0.2mg/kg/劑。該劑量明顯低于產(chǎn)生相同血液濃度的鹽酸鹽的劑量。
對(duì)7種鹽物理數(shù)據(jù)的概述表明，甲磺酸鹽的物理性質(zhì)比Heath等在EP 0657458中研究和公開(kāi)的鹽有了顯著改善。最明顯的是，所要求的鹽和鹽酸鹽生物利用度的比較證實(shí)了所要求的甲磺酸鹽是顯著改善了的治療劑。因此，所要求的甲磺酸鹽的優(yōu)點(diǎn)包括(1)高水溶性；(2)HPLC分析中總相關(guān)物質(zhì)的大大減少；
(3)GC分析未發(fā)現(xiàn)殘余的溶劑；(4)X-射線粉末衍射和偏光顯微鏡證實(shí)的結(jié)晶性；(5)DSC所示的明確熔點(diǎn)；以及(6)生物利用度是鹽酸鹽的2.5倍以上。
如上所述，本發(fā)明的化合物是選擇性的蛋白激酶C抑制劑。該化合物的活性公開(kāi)于Heath等的EP 0657458中，該專(zhuān)利公開(kāi)于1995年6月14日。該活性在鈣調(diào)素依賴(lài)型蛋白激酶試驗(yàn)、酪蛋白蛋白激酶II試驗(yàn)、cAMP依賴(lài)型蛋白激酶催化亞單位試驗(yàn)和蛋白-酪氨酸激酶試驗(yàn)中進(jìn)行測(cè)定。這些試驗(yàn)證實(shí)，甲磺酸鹽在低于10μM的IC50值下有活性并且是異構(gòu)酶選擇性的。具有這些藥理學(xué)活性的化合物可用于治療已證實(shí)蛋白激酶C在病理學(xué)上起作用的疾病。本領(lǐng)域已知的疾病包括糖尿病及其并發(fā)癥(包括性視網(wǎng)膜病、神經(jīng)病和腎病)、局部缺血、炎癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心血管疾病、早老性癡呆、皮膚病和癌癥。
優(yōu)選在給藥前將所要求的化合物配成制劑。因此，本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是含有式Ia化合物和一種或多種可藥用載體、稀釋劑或賦性劑的藥物制劑。
本發(fā)明的藥物制劑通過(guò)已知的方法用熟知且易得的成分制備。在制備本發(fā)明的組合物時(shí)，通常將活性成分與載體混合，或用載體稀釋?zhuān)蛴幂d體包封，包封用的載體可以是膠囊、香囊、紙囊或其它容器的形式。當(dāng)載體作為稀釋劑時(shí)，該載體可以是固體、半固體或液體物質(zhì)，它們對(duì)活性成分起載體、賦性劑或溶媒的作用。因此，該組合物的形式可以是片劑、丸劑、粉末劑、錠劑、香囊、扁囊劑、酏劑、懸浮液、乳液、溶液劑、糖漿、氣霧劑(固體形式或在液體溶媒中)、軟和硬明膠膠囊、栓劑、無(wú)菌可注射溶液和無(wú)菌包裝的粉末。
適宜載體、賦性劑和稀釋劑的例子包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、藻酸鹽、西黃蓍膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯和羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂和礦物油。制劑中還可以含有潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑、乳化劑和懸浮劑、防腐劑、甜味劑和矯味劑?？蓪⒈景l(fā)明的組合物配制成能夠在向患者給藥后迅速釋放、緩釋或延遲釋放活性成分的形式。優(yōu)選將組合物配制成單位劑量形式，每一劑含有約1-約20mg，通常為約2-約10mg活性成分。然而，應(yīng)當(dāng)理解，所施用的治療劑量可由醫(yī)生根據(jù)有關(guān)情況進(jìn)行確定，包括所治療的疾病、所施用化合物的選擇以及所選擇的給藥途徑，因此，上述劑量范圍并不是想以任何方式限制本發(fā)明的范圍。術(shù)語(yǔ)“單位劑量形式”是指適于作為人類(lèi)對(duì)象和其它哺乳動(dòng)物的單位劑量的、物理上分散的單位，每一單位含有為產(chǎn)生所需治療效果而計(jì)算出的預(yù)定量的活性物質(zhì)和適宜的藥物載體。
以下配方例僅僅是說(shuō)明性的，并不是想以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
配方1使用如下成分制備硬明膠膠囊數(shù)量(mg/膠囊)活性成分 5干燥淀粉 85硬脂酸鎂 10總計(jì) 100mg將以上成分混合并填充到硬明膠膠囊中，重100mg。
配方2使用如下成分制備片劑數(shù)量(mg/膠囊)活性成分7微晶纖維素 78發(fā)煙硅石10硬脂酸 5總計(jì)100mg將以上成分混合并壓成每片重100mg的片劑。
配方3按照如下方法制備每片含10mg活性成分的片劑
數(shù)量(mg/膠囊)活性成分 10mg淀粉 45mg微晶纖維素 35mg聚乙烯吡咯烷酮(10％的水溶液) 4mg羧甲基淀粉鈉 4.5mg硬脂酸鎂 0.5mg滑石 1mg總計(jì) 100mg將活性成分、淀粉和纖維素過(guò)45目(U.S.)篩并充分混合。將聚乙烯吡咯烷酮溶液與得到的粉末混合，然后將其過(guò)14目(U.S.)篩。將制得的顆粒于50℃下干燥，然后過(guò)18目(U.S.)篩。將羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石預(yù)先過(guò)60目(U.S.)篩，然后加入到上述顆粒中，混合后將其用壓片機(jī)壓成每片重100mg的片劑。
配方4按照如下方法制備每粒含8mg藥物的膠囊數(shù)量(mg/膠囊)活性成分 8mg淀粉 95mg微晶纖維素 95mg硬脂酸鎂 2mg總計(jì) 200mg將活性成分、纖維素、淀粉和硬脂酸鎂混合，過(guò)45目(U.S.)篩，然后填充到硬明膠膠囊中，重200mg。
在以上說(shuō)明書(shū)中對(duì)本發(fā)明的原理、優(yōu)選實(shí)施方案和操作方法進(jìn)行了描述。然而，不應(yīng)認(rèn)為所要保護(hù)的本發(fā)明僅限于所公開(kāi)的具體形式，因?yàn)檫@些具體形式應(yīng)當(dāng)理解為僅僅是說(shuō)明性而非限定性的。在不超出本發(fā)明實(shí)質(zhì)的條件下，本領(lǐng)域技術(shù)人員可進(jìn)行修改和改變。
權(quán)利要求
1.下式的鹽及其溶劑化物
2.權(quán)利要求1下式的鹽及其溶劑化物
3.權(quán)利要求1或2的鹽，所述鹽基本是結(jié)晶狀的。
4.權(quán)利要求3的鹽，所述鹽是(S)-13-[(二甲氨基)甲基]-10，11，14，15-四氫-4，916，21-二甲烯橋-1H，13H-二苯并[E，K]吡咯并[3，4-H][1，4，13]-氧雜二氮雜十六碳因-1，3(2H)-二酮甲磺酸鹽一水合物。
5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的鹽，所述鹽中含有低于約5％的總相關(guān)物質(zhì)。
6.治療微血管糖尿病并發(fā)癥的方法，該方法包括向需要所述治療的哺乳動(dòng)物施用藥物有效量的權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的化合物。
7.權(quán)利要求6的方法，其中的藥物有效量是0.05mg/kg/天至0.25mg/kg/天。
8.含有權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的鹽和一種或多種可藥用稀釋劑、賦性劑或載體的藥物制劑。
9.權(quán)利要求8的藥物制劑，其中所述制劑含有約1至約20mg所述鹽。
10.用作藥物的權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的鹽。
11.用于治療微血管糖尿病并發(fā)癥的權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的鹽。
12.權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述鹽的制備方法，該方法包括將下式化合物與甲磺酸在非反應(yīng)性有機(jī)溶劑中反應(yīng)。
13.權(quán)利要求12的方法，其中的溶劑是丙酮-水。
14.權(quán)利要求13的方法，其中的溶劑是體積比為約5∶1至約10∶1的丙酮∶水。
15.權(quán)利要求14的方法，其中的溶劑是體積比為約9∶1的丙酮∶水。
16.根據(jù)權(quán)利要求12至15中任一項(xiàng)所述方法制備的化合物。
17.參照任何實(shí)施例基本如上所述的化合物。
全文摘要
本發(fā)明提供了新的式(Ⅰa)的雙－吲哚基馬來(lái)酰亞胺大環(huán)衍生物及其溶劑化物。本發(fā)明還提供了它們的制備。含有它們的藥物制劑以及用于在哺乳動(dòng)物中抑制蛋白激酶C的方法。
文檔編號(hào)A61K31/44GK1202825SQ96198420
公開(kāi)日1998年12月23日 申請(qǐng)日期1996年11月18日 優(yōu)先權(quán)日1995年11月20日
發(fā)明者G·L·恩格, N·A·法里德, M·M·法爾, M·R·基羅瑟克, L·A·里查德森, 小L·L·溫納羅斯基 申請(qǐng)人:伊萊利利公司