專利名稱：芪類化合物及其衍生物在制備內(nèi)皮素拮抗劑中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有中草藥植物紅背絲綢有效成分的藥物制劑以及紅背絲綢有效成分的提取方法；本發(fā)明還涉及茋類化合物及其衍生物的藥物新用途，具體講是茋類化合物及其衍生物在制備內(nèi)皮素拮抗劑中的應(yīng)用，特別是3，4’，5-三羥基反式茋在制備內(nèi)皮素拮抗劑中的應(yīng)用，屬于藥物領(lǐng)域。
紅背絲綢[Cissus assamica(Laws.)Craib]為葡萄科(Vitaceae)白粉藤屬(Cissus L.)植物，民間用于治療跌打損傷、扭傷、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎痛、骨折及癰瘡腫毒。廣西一帶用于治療毒蛇咬傷具有良好的效果。有關(guān)該植物有效部位的提取及化學(xué)成分的研究至今尚未見(jiàn)報(bào)道。
內(nèi)皮素是國(guó)際上最新報(bào)道的一種生物活性物質(zhì)，許多心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展與內(nèi)皮素有著密切的關(guān)系，如高血壓、冠心病、腦血管意外、心力衰竭等，內(nèi)皮素參與這些疾病的病理、生理過(guò)程，許多國(guó)家已經(jīng)把內(nèi)皮素作為高血壓、冠心病、腦血管意外、心力衰竭等疾病的一項(xiàng)病理指標(biāo)，并通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)皮素的生物作用來(lái)治療上述疾病。因此，篩選一種能夠拮抗內(nèi)皮素生物活性的藥物是目前非常重要而有意義的事情。
茋類化合物是結(jié)構(gòu)式母核為1，2-二苯乙烯的一類化合物。其結(jié)構(gòu)式為下述通式I
其中兩個(gè)苯環(huán)上的3，4，5，2’，3’，4’，5’，6’不同位置、不同基團(tuán)的取代構(gòu)成了眾多的茋類化合物。這類化合物能夠作為藥物已經(jīng)是已知的，但是，到目前為止，尚未見(jiàn)有關(guān)這類化合物用于制備內(nèi)皮素拮抗劑應(yīng)用的報(bào)道。
本發(fā)明目的之一是提供一種藥物制劑，它含有中草藥植物紅背絲綢的有效成分提取物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供中草藥植物紅背絲綢有效成分的提取方法。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供茋類化合物及其衍生物在制備內(nèi)皮素拮抗劑中的應(yīng)用。
進(jìn)一步說(shuō)，本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供3，4’，5-三羥基反式茋在制備內(nèi)皮素拮抗劑中的應(yīng)用。
我們?cè)鴮?duì)紅背絲綢植物進(jìn)行了拮抗內(nèi)皮素(ET)的藥理研究，發(fā)現(xiàn)它能拮抗由ET導(dǎo)致的離體主動(dòng)脈條的收縮，并且對(duì)所致的整體動(dòng)物死亡具有保護(hù)作用，進(jìn)而對(duì)其進(jìn)行了化學(xué)成分的提取和分離工作，以期發(fā)現(xiàn)拮抗ET的有效成分，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明藥物制劑含有治療有效量的紅背絲綢植物有效提取部位。
本發(fā)明藥物優(yōu)選含有0.1-99.9％重量份的紅背絲綢植物的有效提取部位。
本發(fā)明藥物更優(yōu)選含有10-90％重量份的紅背絲綢植物的有效提取部位。
本發(fā)明藥物進(jìn)一步優(yōu)選含有15-80％重量份的紅背絲綢植物的有效提取部位。
本發(fā)明藥物最佳含有20-70％重量份的紅背絲綢植物的有效提取部位。
本發(fā)明所說(shuō)的紅背絲綢植物的有效提取部位是以下述方法提取的有效提取物取紅背絲綢植物的根10公斤(干品)，粉碎后用95％乙醇回流提取3次，合并提取液，減壓回收溶劑得到膏狀物；加入等量蒸餾水充分?jǐn)嚢璺稚?，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯充分萃取，收集乙酸乙酯萃取部分為紅背絲綢的有效提取部位。
上述的紅背絲綢的有效提取部位是一種提取混合物，按照常規(guī)的藥物制劑工藝，可以將其作為有效成分，加入常規(guī)的賦性劑，制備成任何一種適合于臨床上使用的藥物制劑。例如，丸劑、片劑、膠囊劑、口服液體制劑、注射劑、散劑、膏劑、氣霧劑等。制備這些藥物制劑是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的常規(guī)性技術(shù)活動(dòng)。
對(duì)于上述的紅背絲綢植物的有效提取部位，我們進(jìn)行了進(jìn)一步的純化，通過(guò)提取、分離及光譜數(shù)據(jù)分析，得到了單體化合物3，4’，5-三羥基反式茋，該化合物經(jīng)體內(nèi)外藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)，對(duì)ET有具有生物效應(yīng)拮抗作用，是紅背絲綢植物的抗ET的有效成分。
因此，本發(fā)明提供了一種從紅背絲綢植物中提取3，4’，5-三羥基反式芪的方法，該方法是取紅背絲綢植物的根10公斤(干品)，粉碎后用95％乙醇回流提取3次，合并提取液，減壓回收溶劑得到膏狀物；加入等量蒸餾水充分?jǐn)嚢璺稚?，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯充分萃取，收集乙酸乙酯萃取部分為紅背絲綢的活性部位。該部位經(jīng)多次硅膠H柱層析分離，優(yōu)選進(jìn)行三次分離，再以石油醚-乙酸乙酯(9∶1-5∶5)梯度洗脫，得到結(jié)晶。
該結(jié)晶呈白色，熔點(diǎn)。紫外光下呈藍(lán)色熒光。
其光譜數(shù)據(jù)如下EI-MS m/z228(M+)，211，199，181，157，115，91，分子式為C14H12O3，不飽和度Ω＝9。
IR(KBr)cm-13280，1600，1580，1410，1150。
1H-NMR(DMSO-d6)δppm9.50(1H，s)，9.20(2H，s)，7.40(2H，d，J＝8.5Hz)，6.90(1H，d，J＝16Hz)，6.80(1H，d，J＝16Hz)，6.70(2H，d，J＝8.5Hz)，6.40(2H，d，J＝1.8Hz)，6.10(1H，s)。
13C-NMR(DMSO-d6)δppm158.4，157.1，139.1，127.9，127.8，127.7，125.6，115.4，104.2，101.7。
由以上數(shù)據(jù)可以鑒定為3，4’，5-三羥基反式芪，結(jié)構(gòu)式如下
3，4’，5-三羥基反式芪作為芪類化合物的代表，是內(nèi)皮素拮抗劑中的一個(gè)新的結(jié)構(gòu)類型。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)表明，芪類化合物均具有拮抗內(nèi)皮素的作用。
本發(fā)明所說(shuō)的芪類化合物及其衍生物是具有下述通式II的一類化合物
其中，R基團(tuán)是H或-OR’，所述的R’是選自于H，-CH3，或葡糖苷的任何一種或一種以上的基團(tuán)。
本發(fā)明上述通式II按下述表示時(shí)
其中優(yōu)選下列化合物4-羥基茋；3，5-二羥基茋；4，4’-二羥基茋；3，5，4’-三羥基茋；3，5，3’，4’-四羥基茋；3，5，2’，4’-四羥基茋；3，5-二羥基芪一甲基醚；3’-甲氧基-4’-羥基茋；丹葉大黃素；4，3’-二甲氧基-4’-羥基茋；蝶茋；3，3’-二甲氧基-4，4’-二羥基茋；3，4，2’，4’，6’-五甲氧基茋；白藜蘆醇葡糖苷；5，3’，4’-三羥基-3-羥基茋葡糖苷；3，5-二羥基茋一甲基醚葡糖苷；3’-甲氧基-4’-羥基茋葡糖苷；5，3’-二羥基-4’-甲氧基-3-羥基茋葡糖苷；
4，3’-二甲氧基-4’-羥基茋葡糖苷。
本發(fā)明通式化合物中最優(yōu)選化合物的是3，4’，5-三羥基反式茋。
實(shí)施例1取紅背絲綢植物的根10公斤(干品)，粉碎后用95％乙醇回流提取3次，合并提取液，減壓回收溶劑得到膏狀物；加入等量蒸餾水充分?jǐn)嚢璺稚ⅲ来斡檬兔?、氯仿、乙酸乙酯充分萃取，收集乙酸乙酯萃取部分為紅背絲綢的有效提取部位。取有效提取部位100克，加入淀粉500克，混合均勻，造粒，整粒，壓片，包糖衣，得片劑。
實(shí)施例2取紅背絲綢植物的根10公斤(干品)，粉碎后用95％乙醇回流提取3次，合并提取液，減壓回收溶劑得到膏狀物；加入等量蒸餾水充分?jǐn)嚢璺稚ⅲ来斡檬兔?、氯仿、乙酸乙酯充分萃取，收集乙酸乙酯萃取部分為紅背絲綢的活性部位。該部位經(jīng)多次硅膠H柱層析分離，優(yōu)選進(jìn)行三次分離，再以石油醚-乙酸乙酯(9∶1-5∶5)梯度洗脫，得到結(jié)晶。
取結(jié)晶10克，加入100克淀粉，入攪拌機(jī)混勻，裝膠囊，每粒裝藥粉1克，制得膠囊劑。
在藥理實(shí)驗(yàn)資料中，為了描述方便，將本發(fā)明的化合物3，4’，5-三羥基反式茋縮寫(xiě)為CA-1201，因此，在下述的實(shí)驗(yàn)例中，該術(shù)語(yǔ)“CA-1201”是指3，4’，5-三羥基反式茋。下述實(shí)驗(yàn)例詳細(xì)地描述了本發(fā)明的化合物3，4’，5-三羥基反式茋拮抗內(nèi)皮素-1生物效應(yīng)的作用。實(shí)驗(yàn)例1 CA-1201對(duì)內(nèi)皮素-1引起小鼠急性死亡的保護(hù)作用♂性昆明種小鼠40只，體重20±2g，禁食供水18小時(shí)后，CA-1201以10mg/kg腹腔注射15分鐘后，尾靜脈注射6nmol/kg的ET-1，以存活時(shí)間超過(guò)15分鐘為存活，記錄動(dòng)物死亡時(shí)間和死亡數(shù)。
CA-1201在腹腔給予10mg/kg劑量后，動(dòng)物死亡時(shí)間明顯延長(zhǎng)，對(duì)照組(靜脈注射ET-1)后，動(dòng)物死亡的時(shí)間為3.22±0.62分鐘，而預(yù)先用CA-1201保護(hù)后，動(dòng)物死亡時(shí)間為11.52±4.50分鐘，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，二者有顯著性差異(p＜0.05)。表1.CA1201對(duì)ET1致小鼠急性死亡保護(hù)作用對(duì)照組 CA-1201組體重 死亡時(shí)間體重 死亡時(shí)間(g) (min) (g) (min)23.04.17 21.0 1521.54.10 22.5 4.8823.03.03 20.5 7.0819.02.13 21.0 6.9721.03.15 21.5 1523.03.00 21.0 4.9522.03.93 18.5 12.9221.03.18 19.0 1519.03.28 20.5 1520.03.33 20.5 153.22±0.6211.52±4.50實(shí)驗(yàn)例2離體動(dòng)脈肌條灌注實(shí)驗(yàn)♂性SD大鼠，體重230±10g，，將大鼠擊昏后快速摘取胸主動(dòng)脈，經(jīng)分離結(jié)締組織后，剪成2-3mm長(zhǎng)的血管環(huán)，分別置于Krebs-Henseleit生理溶液(K-H液，pH7.40±0.05，95％O2+5％CO2，37.0±0.5℃)中，穩(wěn)定、加2g基礎(chǔ)張力、用10-7M去甲腎上腺素預(yù)激二次、平衡后，加入ET-1 10-9M，待達(dá)到最大收縮效應(yīng)后，分別加不同濃度的CA-1201(用2％DMSO為溶媒，實(shí)驗(yàn)用2％DMSO作對(duì)照)，經(jīng)張力換能器連臺(tái)式平衡記錄儀，記錄血管等張收縮與舒張情況。
在離體環(huán)境中，CA-1201(10-8M和10-9M)均能拮抗ET-1引起的大鼠胸主動(dòng)脈縮血管效應(yīng)，與對(duì)照組相比，該作用具顯著性意義(p＜0.05)；且CA-1201拮抗ET-1縮血管效應(yīng)具劑量依賴性。
表2.CA-1201對(duì)ET-1縮血管效應(yīng)的拮抗作用組 別 濃度 血管張力ET-110-9M100.00±3.28ET-1+CA-120110-9M55.76±8.93*ET-1+CA-120110-8M32.48±3.19**實(shí)驗(yàn)例3對(duì)血壓的作用♂性SD大鼠，體重230±10g，，空腹供水18h后，CA-1201尾靜脈注射5和10mg/kg后，即刻從尾靜脈再給予ET-16μg/kg，觀察血壓的變化，用阻抗法測(cè)定大鼠尾動(dòng)脈血壓變化，并將變化值與對(duì)照組比較。結(jié)果列于表3-5。
表3對(duì)照組血壓變化情況時(shí)間對(duì)照組(ΔSBPmmHg)1 2345M±SD0 0 0000 053535 35 40 3536±2.24105550 50 60 6055±5.00156055 60 80 8067±12.04204045 40 45 5545±6.12253540 35 45 4539±4.18302025 25 30 3527±5.70451015 15 15 1514±2.2460 0 00531.6±2.30表4 CA-1201大劑量組(10mg/kg)血壓變化情況時(shí)間 ΔSBP(mmHg)1 2 3 4 5M±SD0 0 0 0 0 005 3 151910 811±6.2010 8 2525151718±7.2115 3 2025192318±8.7220 3 2028152017.2±9.2025 7 1525131615.2±6.503013 1727121316.4±6.234518 1325101015.2±6.386013 510 7 510.4±3.25
表5 CA-1 201小劑量組(5mg/kg)血壓變化情況時(shí)間 ΔSBP(mmHg)1 2 3 4 5M±SD0 0 0 0 0 005 302825302026.6±4.2210505045454046.0±4.1815485550554751.0±3.8120505545454548.0±4.4725454837354041.0±5.4330204532323532.8±8.9345251524252522.8±4.3860101010101511.0±2.24從上表可以看出，大劑量CA-1201(10mg/kg)對(duì)ET-1引起的升壓效應(yīng)有明顯的拮抗作用，與對(duì)照組相比該拮抗作用有明顯的劑量依賴性，但小劑量CA-1201(5mg/kg)有鈍化ET-1的升壓作用的趨勢(shì)，但無(wú)顯著性意義。實(shí)驗(yàn)例4 CA-1201對(duì)ET-1致心律失常的拮抗作用SD大鼠，體重250±50g，禁食供水18小時(shí)后，用846動(dòng)物復(fù)合麻醉劑肌肉注射后，背位固定，用標(biāo)準(zhǔn)肢體II導(dǎo)記錄心電圖的變化。待心電圖穩(wěn)定后，靜脈注射ET-1 0.6nmol/kg，記錄給藥后的心電圖，然后給予不同劑量組(靜脈注射10、30、90和肌肉注射10μg/kg)的CA-1201，觀察在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程(60分鐘)中各組心電圖的變化。
CA-1201對(duì)內(nèi)皮素-1引起的各種類型的心律失常有明顯的拮抗作用，對(duì)室性心律失常的作用較為明顯；肌肉注射后，亦能有效地拮抗ET-1引起的心律失常，對(duì)室性及房性心律失常的拮抗作用趨勢(shì)優(yōu)于靜脈注射。
附

圖1是用于說(shuō)明CA-1201靜脈注射對(duì)ET-1升壓作用的影響(n＝5，x±SD)。
權(quán)利要求
1.一種內(nèi)皮素拮抗劑，其特征在于它含有治療有效量的紅背絲綢植物有效提取部位，所述的有效提取部位是以下述方法提取的提取物取紅背絲綢植物的根，粉碎后用95％乙醇回流提取3次，合并提取液，減壓回收溶劑得到膏狀物；加入等量蒸餾水充分?jǐn)嚢璺稚ⅲ来斡檬兔?、氯仿、乙酸乙酯充分萃取，收集乙酸乙酯萃取部分為紅背絲綢的有效提取部位。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的內(nèi)皮素拮抗劑，其特征在于它含有0.1-99.9％重量份的紅背絲綢植物的有效提取部位。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的內(nèi)皮素拮抗劑，其特征在于它含有10-90％重量份的紅背絲綢植物的有效提取部位。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的內(nèi)皮素拮抗劑，其特征在于它含有15-80％重量份的紅背絲綢植物的有效提取部位。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的內(nèi)皮素拮抗劑，其特征在于它含有20-70％重量份的紅背絲綢植物的有效提取部位。
6.一種內(nèi)皮素拮抗劑的提取方法，其特征在于該方法包括取紅背絲綢植物的干燥根，粉碎后用95％乙醇回流提取3次，合并提取液，減壓回收溶劑得到膏狀物；加入等量蒸餾水充分?jǐn)嚢璺稚ⅲ来斡檬兔?、氯仿、乙酸乙酯充分萃取，收集乙酸乙酯萃取部分為紅背絲綢的活性部位，該部位經(jīng)多次硅膠H柱層析分離，再以石油醚乙酸乙酯(9∶1-5∶5)梯度洗脫，得到結(jié)晶。
7.具有通式II的茋類化合物及其衍生物在制備內(nèi)皮素拮抗劑藥物中的應(yīng)用，
其中，R基團(tuán)是H或-OR’，所述的R’是選自于H，-CH3，或葡糖苷的任何一種或一種以上的基團(tuán)。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的應(yīng)用，其中所述的茋類化合物是選自于下述一組化合物中的任何一種4-羥基茋；3，5-二羥基茋；4，4’-二羥基茋；3，5，4’-三羥基茋；3，5，3’，4’-四羥基茋；3，5，2’，4’-四羥基茋；3，5-二羥基茋一甲基醚；3’-甲氧基-4’-羥基茋；丹葉大黃素；4，3’-二甲氧基-4’-羥基茋；蝶芪；3，3’-二甲氧基-4，4’-二羥基茋；3，4，2’，4’，6’-五甲氧基茋；白藜蘆醇葡糖苷；5，3’，4’-三羥基-3-羥基茋葡糖苷；3，5-二羥基茋一甲基醚葡糖苷；3’-甲氧基-4’-羥基茋葡糖苷；5，3’-二羥基-4’-甲氧基-3-羥基茋葡糖苷；4，3’-二甲氧基-4’-羥基茋葡糖苷。9、3，4’，5-三羥基反式茋在制備內(nèi)皮素拮抗劑藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種含有中草藥植物紅背絲綢有效成分的藥物制劑以及紅背絲綢有效成分的提取方法;本發(fā)明還涉及芪類化合物及其衍生物的藥物新用途,具體講是芪類化合物及其衍生物在制備內(nèi)皮素拮抗劑中的應(yīng)用,特別是3,4’,5－三羥基反式芪在制備內(nèi)皮素拮抗劑中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K31/70GK1196245SQ97103928
公開(kāi)日1998年10月21日 申請(qǐng)日期1997年4月16日 優(yōu)先權(quán)日1997年4月16日
發(fā)明者楊連春, 王峰 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍空軍總醫(yī)院