專利名稱：腫瘤疫苗制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于抗癌免疫技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種利用石蠟包埋癌組織制備腫瘤疫苗的方法。
應(yīng)用腫瘤疫苗主動免疫以激發(fā)機體內(nèi)特異性抗腫瘤免疫力的腫瘤特異性主動免疫治療，為惡性腫瘤的治療開辟了新的途徑。由于腫瘤抗原的復(fù)雜性，異體瘤苗的研究尚未取得明顯進展，而自體腫瘤疫苗則成為當(dāng)前本領(lǐng)域中的研究熱點之一。在現(xiàn)有技術(shù)中，自體瘤苗的制備都是采用新鮮的癌組織和活的癌細胞作為抗原的來源。例如中國專利申請93112060、8號就公開了一種用新鮮癌組織制備瘤苗的方法。但是，由于受到保存條件及保存時間的限制，用新鮮癌組織作為抗原來源的瘤苗無法在對術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移患者的治療中得到廣泛應(yīng)用，因為此時很難得到患者自體的新鮮腫瘤組織。若要長期保存上述瘤苗，必須將其長期置于低溫條件，這會導(dǎo)致醛類聚合，抗原醛基化，從而掩蓋抗原，大大降低瘤苗效用。另外，采用新鮮腫瘤組織制備瘤苗，由于受癌細胞的抗藥性、滅活藥物的有效性以及滅活操作的時間、溫度等條件的影響，有時難以把癌細胞徹底滅活。
本發(fā)明的目的就是要克服上述現(xiàn)有技術(shù)之不足，提供一種抗原來源容易、制備方法簡便、成本低廉、應(yīng)用廣泛、瘤苗滅活徹底、使用安全、療效顯著的瘤苗制備方法。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種腫瘤疫苗制備方法，其特征在于采取下列步驟(1)取石蠟包埋癌組織切片，經(jīng)脫蠟、水化、消化處理，制成單細胞懸液；(2)用緩沖液洗滌；(3)加入胰蛋白酶置3分鐘，或放入微波爐中處理10分鐘；(4)用緩沖液洗滌；(5)加入免疫佐劑；(6)加入醛類固定劑。
本發(fā)明的目的還可以這樣實現(xiàn)一種腫瘤疫苗制備方法，其特征在于采取下列步驟
(1)取石蠟包理癌組織切片，經(jīng)脫蠟、水化、消化處理，制成單細胞懸液；(2)用緩沖液洗滌；(3)用大蒜素或蘆薈提取液孵育20～30分鐘；(4)用緩沖液洗滌；(5)加入免疫佐劑；(6)加入醛類固定劑。
為了更好地實現(xiàn)本發(fā)明的目的，上述各方法所用佐劑為卡介苗或PPD。
本發(fā)明的瘤苗制備方法，抗原來源容易，患者自體石蠟包埋癌組織在其手術(shù)醫(yī)院病理科一般都是長期常規(guī)存檔，且所存癌組織足以滿足制備瘤苗的需用量；制備方法簡便，容易掌握；成本低廉，不需專用設(shè)備，便于基層規(guī)模較小的醫(yī)院應(yīng)用；可用于所有術(shù)后腫瘤患者，隨用隨制，不受時間限制；因為抗原來源是石蠟包埋癌組織，所以滅活絕對徹底，使用安全可靠；制備的瘤苗具有明顯的抗癌和抗轉(zhuǎn)移作用，能激發(fā)機體特異性抗腫瘤細胞免疫和體液免疫，療效特別顯著。
下面詳細說明本發(fā)明的實施例。
例1.
取50μm厚的石蠟包埋癌組織切片，浸入二甲苯中12小時，然后轉(zhuǎn)入無水乙醇中12小時，再依次浸入95％乙醇、75％乙醇、PBS液中各30分鐘(自75％乙醇中取出后按嚴格無菌操作)，然后置于溫度為37℃的0.14％膠原酶中30分鐘，再用100目鎳網(wǎng)過濾，制成單細胞懸液，然后用PBS液洗滌3遍，加入1％的胰蛋白酶置3分鐘或放入微波爐中處理10分鐘，再用PBS液洗滌3遍，加入卡介苗或PPD，再加入0.025％戊的二醛或0.03％的甲醛，最后安瓶分裝。
例2.
取50μm厚的石蠟包埋癌組織切片，浸入二甲苯中12小時，然后轉(zhuǎn)入無水乙醇中12小時，再依次浸入95％乙醇、75％乙醇、PBS液中各30分鐘(自75％乙醇中取出后按嚴格無菌操作)，然后置于溫度為37℃的0.14％膠原酶中30分鐘，再用100目鎳網(wǎng)過濾，制成單細胞懸液，然后用PBS液洗滌3遍，加入1％的胰蛋白酶置3分鐘或放入微波爐中處理10分鐘，再用PBS液洗滌3遍，然后用0.5～3％大蒜素或蘆薈提取液在37℃下孵育20～30分鐘，再用PBS液洗滌3遍，加入卡介苗或PPD，再加入0.025％的戊二醛或0.03％的甲醛，最后安瓶分裝。
下面給出上述實施例制出的瘤苗對荷瘤615小鼠治療的實驗數(shù)據(jù)(瘤株為615小鼠乳腺癌細胞株高肺轉(zhuǎn)移亞株Ca761-FP8/L)。處理方法 動物數(shù) 腫瘤重量(X±SD克) 肺轉(zhuǎn)移數(shù) 存活時間(X±SD天)例1 8 0.2945±0.2993 50.505±11.780例2 8 0.2517±0.3402 51.608±10.975無 8 0.5769±0.2757 36.500±6.950
權(quán)利要求
1.一種腫瘤疫苗制備方法，其特征在于采取下列步驟(1)取石蠟包埋癌組織切片，經(jīng)脫蠟、水化、消化處理，制成單細胞懸液；(2)用緩沖液洗滌；(3)加入胰蛋白酶置3分鐘，或放入微波爐中處理10分鐘；(4)用緩沖液洗滌；(5)加入免疫佐劑；(6)加入醛類固定劑。
2.一種腫瘤疫苗制備方法，其特征在于采取下列步驟(1)取石蠟包理癌組織切片，經(jīng)脫蠟、水化、消化處理，制成單細胞懸液；(2)用緩沖液洗滌；(3)用大蒜素或蘆薈提取液孵育20～30分鐘；(4)用緩沖液洗滌，；(5)加入免疫佐劑；(6)加入醛類固定劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的腫瘤疫苗制備方法，其特征在于所用佐劑為卡介苗或PPD。
全文摘要
本發(fā)明的腫瘤疫苗制備方法,取石蠟包埋癌組織切片,制成單細胞懸液,用緩沖液洗滌后,加入胰蛋白酶置或放入微波爐中處理,也可以用大蒜素或蘆薈提取液處理,再用緩沖液洗滌后,加入免疫佐劑,再加入醛類固定劑?？乖瓉碓慈菀?、制備方法簡便、成本低廉、應(yīng)用廣泛、瘤苗滅活徹底、使用安全、療效顯著。
文檔編號A61K39/385GK1188674SQ9710506
公開日1998年7月29日 申請日期1997年1月24日 優(yōu)先權(quán)日1997年1月24日
發(fā)明者石桂秀 申請人:石桂秀