專利名稱：一種二氫聚異戊二烯醇的油劑組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種腸道外給藥的新型組合物，更具體而言，本發(fā)明涉及一種用于增強動物免疫系統(tǒng)的二氫聚異戊二烯醇的油劑組合物。
背景技術：
二氫聚異戊二烯醇是一類已知的聚異戊二烯醇?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，該類化合物能增強非特異性宿主對各種病原菌的抵御。這類宿主包括嚙齒類動物、奶牛、牛犢、仔豬和豬。該類化合物因其提高宿主的抵抗力而用作治療或控制動物和人類傳染的藥劑。
然而日益明顯的是，藥物的開發(fā)遠遠超出僅找出高生物活性化合物的范圍，在高效活性化合物制成藥品前必須考慮到許多其它方面，其中最重要的是該活性劑的穩(wěn)定性、從給藥部位被吸收的性能，活性劑的物理狀態(tài)以及許多其它有關問題、諸如大量藥物的成本之類的經(jīng)濟因素則是除上述活性劑本身性能以外的問題。
考慮到這些問題，本發(fā)明提供一種意想不到的二氫聚異戊二烯醇油劑組合物，它是藥物上一流的而且避免了上述所有問題。這種油劑組合物將組分限定為僅有賦形劑(即油)和有效的二氫聚異戊二烯醇。由于能與二氫聚異戊二烯醇發(fā)生有害反應的組分很少，因此能有較長的保藏期。已知“氧化”是聚異戊二烯醇發(fā)生降解的主要途徑，而油劑組合物卻保護二氫聚異戊二烯醇免于氧化，因為，氧必須借助擴散通過油賦形劑才能到達二氫聚異戊二烯醇，更有利的是一些油中含有內源性抗氧劑。此外，油劑組合物的物理穩(wěn)定性是不成問題的，因為它屬于單相溶液。另一方面，諸如相關領域中公開的乳劑之類的其它有關配方是兩相的，有可能隨著時間的推移而相互反應。
本發(fā)明的油劑組合物是易于給藥的，因為它能比乳劑調制得更濃，從而使給動物的注射體積更少。例如，乳劑通常按10mg/ml的濃度制備，而本發(fā)明的油基制劑的濃度可至少為150mg/ml，其體積僅為乳劑的1/15。這種油劑組合物也是易于注射的，因為其粘度低到足以流經(jīng)常規(guī)的注射器和針頭，而例如一種含二氫聚異戊二烯醇的可植入片丸劑則難對動物給藥。
最后，獲得了一種大規(guī)模地生產(chǎn)二氫聚異戊二烯醇油劑組合物的簡單方法，而制備其他劑型的方法則往往更加復雜且費用較高。
信息公開US4,624,966公開了用作抵抗人體和動物傳染病的免疫物質的β,γ一二氫聚異戊二烯醇衍生物及其使用方法。
US4,839,389公開了含有聚異戊二烯醇的注射劑，其主要成分是聚異戊二烯醇和卵磷脂。
US5,139,740公開了一種軟膠囊組合物，它含有聚異戊二烯醇化合物、表面活性劑和/或不飽和脂族酸。
US5,280,048公開了一種用聚異戊二烯醇化合物抵抗傳染的方法。
其它具有普遍意義的參考材料有H.Nagahata,G.J.Kociba,H.Noda,M.Koiwa，和M.Kimura，“二氫七聚異戊二烯醇對分娩后奶牛嗜中性白細胞機能的作用”，《獸醫(yī)免疫學和免疫病理學(Veterinary Immunology and Immunopathology)》,29,PP.163-169(1991)。
O.Yoneyama,S.Osame,S.Ichijo,M.Kimura,S.Araki,M.Suzukiand E.Imamura，“二氫七聚異戊二烯醇對牛犢嗜中性白細胞機能的作用”，《英國獸醫(yī)雜志(British Veterinary Kournal,145,pp.531-537(1989)。
O.Yoneyama,S.Osame,M.Kimura,S.Araki and S.Ichijo，“用二氫七聚異戊二烯醇來增強成年奶牛的嗜中性白細胞機能，”《日本獸醫(yī)學雜志(Japan Journal of Veterinary Science)》,51(6),PP.1283-1286(1989)。
T.Watari,R.Goitsuka,H.Koyama,T.Sako,T.Uchino,S.Araki,A.Hasegawa and S.Motoyoshi，“二氫七聚異戊二烯醇對豬塵細胞還原氮藍四唑(NBT)的作用”，《日本獸醫(yī)學雜志(Japan Journal ofVeterinary Science)》,51(3),pp.630-631(1989)。
S.Araki,M.Suzuki,K.Ogura,M.Kimura,E.Imamura,C.Kuniyasu,K.Kagaya and Y.Fukazawa，“用二氫七聚異戊二烯醇來增強小豬嗜中性白細胞的噬菌和殺菌活性，一種合成的聚異戊二烯醇衍生物”，《微生物學與免疫學(Microbiology,Immunol.),33(10),pp.877-882(1989)。
S.Araki,K.Kagaya,K.Kitoh,M.Kimura and Y.Fukazawa，“用二氫七聚異戊二烯醇來增強老鼠抵抗大腸桿菌傳染，一種合成的聚異戊二烯醇衍生物”，《傳染與免疫(Infection and Immunity)》,55(9),pp.2164-2170(1987)。
M.Kimura,S,Araki,T.Nakai and K.Kume，“與疫苗并用的二氫七聚異戊二烯醇對用大葉性肺炎放線桿菌感染的豚鼠和小豬實驗的保護作用”，《日本獸醫(yī)學雜志(Japan Journal of Veterinary Science)》,55(4),pp.627-630(1993)。
E.J.Robb,D.D.Kratzer,C.H.Ho and K.J.Dame，“誘發(fā)型牛肺炎巴斯德桿菌病期間二氫七聚異戊二烯醇的劑量表征和劑型評價”，《動物科學雜志(Journal of Animal Science,71(Supp1.1),p.203(1993)。
本發(fā)明概述本發(fā)明的目的是提供一種含有二氫聚異戊二烯醇和油質賦形劑的藥物組合物，它增強動物內在的抗感染力并刺激免疫系統(tǒng)，而且對動物是生物相容性的。
本發(fā)明的另一目的是提供一種含高濃度的二氫聚異戊二烯醇的油劑組合物以使其一次注射體積便于給藥。
本發(fā)明的又一目的是提供一種具有理化穩(wěn)定性的油劑組合物，當組合物被裝在經(jīng)濟的“即用”容器里時能保持合適的貯藏期。
本發(fā)明的再一個目的是提供一種低粘性油劑組合物以便該組合物易于注射。
本發(fā)明還有一個目的是提供一種制法簡易的油劑組合物以使產(chǎn)品的最后成本降至最低限度。
通過下列技術方案，本發(fā)明的目的已經(jīng)達到。本發(fā)明提供了一種非經(jīng)腸給藥的油劑組合物，該組合物主要包含式Ⅰ的二氫聚異戊二烯醇和一種藥物上可接受的油，式中n是一個5-7的整數(shù)。
發(fā)明詳述令人吃驚和意想不到的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本發(fā)明這類基本上不含水的油劑組合物提高了式Ⅰ的二氫聚異戊二烯醇的利用率。這類組合物提供了一種穩(wěn)定、易于給藥且制法簡易的給藥賦形劑。
二氫聚異戊二烯醇是一類已知化合物。其增強動物免疫系統(tǒng)的活性及制備方法公開在US4,624,966；US4,839,389；US5,139,740；US5,280,048；合并在此以供參考。
制備本發(fā)明油劑組合物的優(yōu)選的式Ⅰ二氫聚異戊二烯醇是二氫七聚異戊二烯醇，一種式Ⅰ的化合物，式中n=6。
動物是指家畜、家禽和陪伴動物，但本發(fā)明也應用于其它脊椎動物，以及包括無脊椎動物在內的其它低等物種。
可把式Ⅰ的二氫聚異戊二烯醇與一種藥物上可接受的油混合來制備本發(fā)明的油劑組合物。制備這種組合物的方法都是常規(guī)的和本領域技術人員熟知的技術。例如將所需重量或體積的油放置在玻璃或不銹鋼容器內。使油經(jīng)一滅菌濾器(0.22微米濾器)過濾到容器里。計算用于制備一定濃度制劑的二氫聚異戊二烯醇的重量或體積，將其傾入上述盛油容器里，經(jīng)攪拌得到均勻混合物。攪拌所需的時間取決于所用容器的大小和混合裝置的類型。通常100ml批料需攪拌5分鐘可得一均勻溶液。而1000升批料則需攪拌約30分鐘。所得均勻溶液經(jīng)滅菌濾器(0.22微米濾器)過濾并裝入藥瓶。
“藥物上可接受”一詞是指那些從藥理學/毒理學觀點來看與受治療者生物相容的性質以及制造藥物的藥劑師從物理/化學觀點來看穩(wěn)定性、溶解性和生物利用率等性質。
藥物上可接受的油是椰子油。
“Miglyol810”、“Miglyol812”和“Miglyol829”是指Huls公司的商標Miglyol，分離與精制的不同等級的椰子油，主要含有中鏈甘油三酯。
本發(fā)明油劑組合物的給藥途徑是不經(jīng)腸給藥。優(yōu)選的家畜給藥途徑是皮下給藥以便不損害可食組織。但也可通過肌內或其它不經(jīng)腸給藥途徑給藥。
本發(fā)明所用式Ⅰ二氫聚異戊二烯醇的用量和油劑組合物的濃度可隨所用特定化合物的藥效、所需劑量、所需濃度，和/或特定的受治療動物在廣泛范圍內變化和調節(jié)。通常，活性組分的用量在0.1mg/kg-1000mg/kg之間，濃度在1mg/ml-500mg/ml之間。當油劑組合物太粘以致難以注射時就達到了濃度上限。例如，用二氫七聚異戊二烯醇預防飼養(yǎng)廠牛呼吸病(BRD)時劑量在1至10mg/kg之間。另外例如，當用2mg/kg劑量的二氫七聚異戊二烯醇預防BRD治療飼養(yǎng)廠的牛時優(yōu)選的溶液濃度為150mg/ml。因而一次注射1.3ml即可提供一般動物治療所需的二氫聚異戊二烯醇。
通過參照下例實施例，將會更好地理解本發(fā)明的油劑組合物。這些實施例是用來作為例證的，不是對本發(fā)明范圍的限制。我們認為本領域的技術人員用不著進一步推敲，只要參照前面說明和下列實施例提供的信息，就能夠充分實施本發(fā)明。
實施例1把0.341g二氫七聚異戊二烯醇加入含有10.997gMiglyol812的20ml玻璃燒杯里。用電磁攪拌棒攪拌溶液30分鐘。然后把溶液加入5ml玻璃藥瓶里，加塞、加蓋和加標簽。所得二氫七聚異戊二烯醇的濃度為30.1mg/g制劑。在老鼠全身保護試驗中用溶血性巴斯德桿菌攻擊劑量(28.2半數(shù)致死量，LD50)來試驗此制劑。
實施例2把0.339g二氫七聚異戊二烯醇加入含有10.996gMiglyol812的20ml玻璃燒杯里。用電磁攪拌棒攪拌溶液至少30分鐘。然后把溶液加入5ml玻璃藥瓶里，加塞、加蓋和加標簽。所得二氫七聚異戊二烯醇的濃度為26.5mg/ml制劑。在老鼠全身保護試驗中用溶血性巴斯德桿菌攻擊劑量(12LD50)來試驗此制劑。
實施例3用26.467gMiglyol810來稀釋1.886g實施例2的產(chǎn)品，使兩液在燒杯里混合10分鐘。所得二氫七聚異戊二烯醇的濃度為9.8mg/ml。在老鼠全身保護試驗中用溶血性巴斯德桿菌攻擊劑量(10LD50)來試驗此制劑。
實施例4把0.1g二氫七聚異戊二烯醇加入20ml的玻璃藥瓶里，接著添加9.9gMiglyol810。用Yamato渦旋器全速渦旋藥瓶1分鐘。擱置1小時后再次渦旋藥瓶15秒鐘，加塞、加蓋和加標簽。所得二氫七聚異戊二烯醇的濃度為10mg/g制劑。在老鼠全身保護試驗中用溶血性巴斯德桿菌攻擊劑量(22LD50)來試驗此制劑。
實施例5把0.1g二氫七聚異戊二烯醇加入20ml的玻璃藥瓶里，接著添加9.9gMiglyol812。用Yamato渦旋器全速渦旋藥瓶1分鐘。擱置1小時后再次渦旋藥瓶15秒鐘，加塞、加蓋和加標簽。所得二氫七聚異戊二烯醇的濃度為10mg/g制劑。在老鼠全身保護試驗中用溶血性巴斯德桿菌攻擊劑量(22LD50)來試驗此制劑。
實施例6把0.1g二氫七聚異戊二烯醇加入20ml的玻璃藥瓶里，接著添加9.9gMiglyol829。用Yamato渦旋器全速渦旋藥瓶1分鐘。擱置1小時后再次渦旋藥瓶15秒鐘，加塞、加蓋和加標簽。所得二氫七聚異戊二烯醇的濃度為10mg/g制劑。在老鼠全身保護試驗中用溶血性巴斯德桿菌攻擊劑量(22LD50)來試驗此制劑。
實施例7把0.1g二氫七聚異戊二烯醇加入20ml的玻璃藥瓶里，接著添加9.9g紅花油。用Yamato渦旋器全速渦旋藥瓶1分鐘。擱置1小時后再次渦旋藥瓶15秒鐘，加塞、加蓋和加標簽。所得二氫七聚異戊二烯醇的濃度為10mg/g制劑。在老鼠全身保護試驗中用溶血性巴斯德桿菌攻擊劑量(22LD50)來試驗此制劑。
實施例8把0.1g二氫七聚異戊二烯醇加入20ml的玻璃藥瓶里，接著添加9.9g芝麻油。用Yamato渦旋器全速渦旋藥瓶1分鐘。擱置1小時后再次渦旋藥瓶15秒鐘，加塞、加蓋和加標簽。所得二氫七聚異戊二烯醇的濃度為10mg/g制劑。在老鼠全身保護試驗中用溶血性巴斯德桿菌攻擊劑量(25LD50)來試驗此制劑。
實施例9把0.1g二氫七聚異戊二烯醇加入20ml的玻璃藥瓶里，接著添加9.9g豆油。用Yamato渦旋器全速渦旋藥瓶1分鐘。擱置1小時后再次渦旋藥瓶15秒鐘，加塞、加蓋和加標簽。所得二氫七聚異戊二烯醇的濃度為10mg/g制劑。在老鼠全身保護試驗中用溶血性巴斯德桿菌攻擊劑量(6LD50)來試驗此制劑。
實施例10把0.1g二氫七聚異戊二烯醇加入20ml的玻璃藥瓶里，接著添加9.9g棉子油。用Yamato渦旋器全速渦旋藥瓶1分鐘。擱置1小時后再次渦旋藥瓶15秒鐘，加塞、加蓋和加標簽。所得二氫七聚異戊二烯醇的濃度為10mg/g制劑。在老鼠全身保護試驗中用溶血性巴斯德桿菌攻擊劑量(9LD50)來試驗此制劑。
實施例11把0.1g二氫七聚異戊二烯醇加入20ml的玻璃藥瓶里，接著添加9.9g花生油。用Yamato渦旋器全速渦旋藥瓶1分鐘。擱置1小時后再次渦旋藥瓶15秒鐘，加塞、加蓋和加標簽。所得二七氫聚異戊二烯醇的濃度為10mg/g制劑。在老鼠全身保護試驗中用溶血性巴斯德桿菌攻擊劑量(25LD50)來試驗此制劑。
實施例12把0.1g二氫七聚異戊二烯醇加入20ml的玻璃藥瓶里，接著添加9.9g礦物油。用Yamato渦旋器全速渦旋藥瓶1分鐘。擱置1小時后再次渦旋藥瓶15秒鐘，加塞、加蓋和加標簽。所得二氫七聚異戊二烯醇的濃度為10mg/g制劑。在老鼠全身保護試驗中用溶血性巴斯德桿菌攻擊劑量(9LD50)來試驗此制劑。
實施例13在層流罩中用可靠的無菌技術來制備制劑。把已經(jīng)0.22微米濾器過濾的9.02g二氫七聚異戊二烯醇和47.73gMiglyol 810加入100ml的滅菌玻璃燒杯里，用電磁攪拌棒攪拌10分鐘。然后把溶液加入50ml的滅菌玻璃藥瓶里，加塞、加蓋和加標簽。測得的濃度為142.2mg/ml。安慰劑的制備方法是把約50mlMiglyol 810經(jīng)0.22微米濾器過濾到50ml的滅菌玻璃藥瓶里，加塞、加蓋和加標簽。在溶血性巴斯德桿菌牛免疫力試驗中試驗此制劑。
實施例14在層流罩中用可靠的無菌技術來制備制劑。把21.43g二氫七聚異戊二烯醇和110.94g已經(jīng)0.22微米濾器過濾的Miglyol 810加入200ml的滅菌玻璃燒杯里，用電磁攪拌棒攪拌10分鐘。然后把溶液加入50ml的滅菌玻璃藥瓶里，加塞、加蓋和加標簽。測得的濃度為149.8mg/ml。安慰劑的制備方法是把約50mlMiglyol 810經(jīng)0.22微米濾器過濾到50ml的滅菌玻璃藥瓶里，加塞、加蓋和加標簽。在溶血性巴斯德桿菌牛免疫力試驗中試驗此制劑。
實施例15老鼠全身保護試驗實施例1-12的各組合物在溶血性巴斯德桿菌老鼠全身保護試驗中進行評價。在此試驗中對每一老鼠都以一劑量組合物皮下注射給藥。24小時后用溶血性巴斯德桿菌進行攻擊。實施例1中的攻擊劑量是殺死50％老鼠所需劑量(LD50=28.2)的28.2倍。其它實施例的攻擊劑量列于表1中。該劑量從25到400mg/kg/不等。配藥前用測定的油量來稀釋各組合物以便其一次注射容量適用于老鼠。用Miglyol 812注射接受0mg/kg的組作為對照。所用的溶血性巴斯德桿菌菌性是UC6531，起初是從一牛呼吸病例分離出來的。試驗菌株保存在浸于含10％甘油的酪蛋白胰酶水解物大豆培養(yǎng)基(Becton-Dickinson微生物系統(tǒng))中的3mm玻璃珠上并維持-70℃直到復活。記錄下7天后老鼠的存活個數(shù)，從存活數(shù)計算出半數(shù)有效量ED50。表1概括了試驗結果。
實施例16溶血性巴斯德桿菌的牛免疫力試驗實施例13的組合物在溶血性巴斯德桿菌牛免疫力試驗中進行評價。在此試驗中35-50日齡的Holstein公牛犢按體重隨機分到各治療組。15頭動物分派到只接受Miglyol 810賦形劑的安慰劑組或接受4mg/kg油劑劑型的組。對每頭動物都以4mg/kg劑量皮下注射給藥，24小時后進行攻擊試驗。攻擊試驗包括氣管內接種6×106菌落形成單位(CFU)/牛犢的毒性溶血性巴斯德桿菌(A1)〔溶于10ml酸化的(pH4.5)腦心浸劑(BHI)肉湯中〕，4小時后進行攻擊試驗每個牛犢用4×108CFU的溶血性巴斯德桿菌(溶于10ml未酸化的BHI肉湯中)。觀察牛犢10天，稱重，使之無痛死去，進行尸體檢驗。判斷依據(jù)是死亡率、研究期間增重2.27kg的牛犢頭數(shù)及肺部實變的計算得分。把本實驗設計成具有80％檢測出α=0.2、21-23％死亡率和生長率差別的能力。
在接受4mg/kg的組中沒有一頭牛犢死去而在安慰劑組中有明顯差別，15頭牛犢中的2頭死去(P=0.04，單側)。明顯的是，與陰性對照(15頭中的7頭)相比，在4mg/kg組中更多牛犢(P=0.006，單側)增重2.27kg(15頭中的14頭)。在肺損害得分中沒有明顯的差別。
實施例14的組合物在與實施例13相同的溶血性巴斯德桿菌牛免疫力試驗中進行評價。15頭動物分派到只接受Miglyol 810賦形劑的安慰劑組，接受0.5mg/kg,1mg/kg,2mg/kg或4mg/kg油劑劑型的組。對每頭動物以二氫七聚異戊二烯醇劑量皮下注射給藥，24小時后進行攻擊試驗。觀察牛犢10天，稱重，使之無痛死去，進行尸體檢驗。判斷依據(jù)是死亡率、研究期間增重2.27kg的牛犢頭數(shù)及肺部實變的計算得分。把本實驗設計成具有80％檢測出差別的能力。
死亡率是15頭中的4頭(安慰劑組)，15頭中的2頭(0.5和1mg/kg組)，15頭中的0頭(2mg/kg組)和15頭中的1頭(4mg/kg組，有1頭動物因腸扭轉而死，與免疫力試驗無關)。統(tǒng)計上死亡較少(P≤0.11，單側)的是那些接受二氫七聚異戊二烯醇0.5 mg/kg或更多的組。增重＞2.27kg的牛犢頭數(shù)是15頭中的3頭(安慰劑組)，15頭中的5頭(0.5mg/kg組)，15頭中的9頭(1mg/kg組)，15頭中的12頭(2mg/kg組)和15頭中的13頭(4mg/kg組)。接受二氫七聚異戊二烯醇1mg/kg或更多的治療組在統(tǒng)計上與安慰劑組是有差別的(P≤0.03，單側)。肺損害得分是18.9±8.4％(安慰劑組)。22.7±16.8％(0.5mg/kg組)，15.6±14.1％(1mg/kg組)，17.8±19.9％(2mg/kg組)和9.3±10.2％(4mg/kg組)。給藥4mg/kg的牛犢肺損害得分明顯低(P=0.03，單側)于安慰劑組的牛犢，表1．老鼠全身保護試驗
權利要求
1．一種腸道外給藥的油劑組合物，它基本上包含式Ⅰ的二氫聚異戊二烯醇和一種藥物上可接受的油。
式中n為一個5-7的整數(shù)。
2．按照權利要求1的式Ⅰ的二氫聚異戊二烯醇，式中n=6。
3．按照權利要求1的式Ⅰ的二氫聚異戊二烯醇，它是二氫七聚異戊二烯醇。
4．按照權利要求1的油劑組合物其中所述油是椰子油、紅花油、芝麻油、豆油、棉子油、花生油或礦物油。
5．按照權利要求1的油，它是椰子油。
6．按照權利要求1的油，它是Miglyol。
7．按照權利要求1的油，它是花生油。
8．按照權利要求1的油，它是芝麻油。
9．按照權利要求1的油，它是紅花油。
10．按照權利要求1的油劑組合物，其中式Ⅰ的二氫聚異戊二烯醇是以約1mg/ml-約500mg/ml的濃度存在的。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種腸道外給藥的油劑組合物，它包含式Ⅰ的二氫聚異戊二烯醇和一種藥物上可接受的油，式中n為一個5—7的整數(shù)。
文檔編號A61K31/045GK1238687SQ97180085
公開日1999年12月15日 申請日期1997年12月3日 優(yōu)先權日1996年12月12日
發(fā)明者T·P·福斯特, K·巴蘇恩 申請人:法瑪西雅厄普約翰美國公司