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      包含能模擬視黃酸對(duì)皮膚之作用的化合物結(jié)合物的護(hù)膚組合物的制作方法

      文檔序號(hào):840450閱讀:456來(lái)源:國(guó)知局
      專利名稱:包含能模擬視黃酸對(duì)皮膚之作用的化合物結(jié)合物的護(hù)膚組合物的制作方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      本發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及護(hù)膚組合物,它包含某些化合物與視黃醇和/或視黃酯相結(jié)合并涉及將該組合物應(yīng)用于皮膚的美容方法。
      本發(fā)明背景視黃醇(維生素A)是人體中天然存在的內(nèi)源性化合物,并且是正常內(nèi)皮細(xì)胞分化所必需的。天然的和合成的維生素A衍生物已廣泛地用于治療各種皮膚病,和用作皮膚修復(fù)或更新劑。視黃酸已用于治療各種皮膚病,例如痤瘡、皺紋、牛皮癬、老年斑和變色。例如見Vahlquist,A等“皮膚病學(xué)研究”(J.Invest.Dermatol.),Vol.94,HollandD.B.and Cunliffe,W.J.(1990),pp.496-498;Ellis,C.N.等“視黃醇的皮膚藥理學(xué)”(“Pharmacology of Retinols in Skin”),Vasel,Karger,Vol.3,(1989),pp.249-252;Lowe,N.J.等“視黃醇的皮膚藥理學(xué)”(“Pharmacology of Retinols in Skin”),Vol.3,(1989),pp.240-248;PCT專利申請(qǐng)?zhí)朩O93/19743。
      已確信,使用視黃醇或視黃醇的酯優(yōu)于視黃酸。視黃醇天然存在于人體中并且認(rèn)為比視黃酸安全得多。視黃醇的酯在體內(nèi)水解產(chǎn)生視黃醇。已確信,在皮膚中,視黃醇酯和視黃醇按照下列機(jī)理通過(guò)代謝轉(zhuǎn)化為視黃酸視黃醇酯視黃醇↓視黃酸然而,在表皮細(xì)胞(角化細(xì)胞)中,大多數(shù)內(nèi)源性應(yīng)用的視黃醇迅速轉(zhuǎn)化為非活性脂肪族酯貯存起來(lái)。在細(xì)胞中,通過(guò)?;鵆oA視黃醇轉(zhuǎn)移酶(ARAT)催化下,將酰基CoA的脂肪族?;D(zhuǎn)移,或者通過(guò)卵磷脂視黃醇?;D(zhuǎn)移酶(LRAT)催化下,將磷脂酰膽堿的?;D(zhuǎn)移,而將視黃醇酯化成為非活性視黃酯。這些酯化作用在角化細(xì)胞中效率非常高-大多數(shù)(95%)細(xì)胞內(nèi)視網(wǎng)膜樣物質(zhì)是以視黃醇脂肪族酯形式存在的。不幸的是,盡管視黃醇和視黃酯使用起來(lái)比視黃酸更安全,但它們?cè)谔峁┢つw護(hù)理方面不如視黃酸有效。
      本發(fā)明部分基于下列發(fā)現(xiàn),即某些化合物能抑制這些酯化反應(yīng),并因此通過(guò)增加有效地轉(zhuǎn)化為視黃酸的視黃醇之量來(lái)加強(qiáng)視黃醇的作用。因此,這些化合物與視黃醇或視黃酯的混合物類似視黃酸,使用起來(lái)仍然比視黃酸安全。
      本發(fā)明概要本發(fā)明部分包括護(hù)膚組合物,該組合物包含(a)、組合物重量0.001%-10%的視黃醇或視黃酯;(b)、組合物重量0.0001%-50%的一種化合物,由體外微粒體測(cè)定所示,該化合物在100μM濃度下能抑制至少20%LRAT或ARAT催化的視黃醇酯化作用;其中,所述化合物不是脂肪酸酰胺或二甲基咪唑啉酮;和(c)、在美容上適宜的賦形劑。
      本發(fā)明所使用的優(yōu)選的化合物為環(huán)狀脂肪族不飽和烴、二萜、二氫黃酮、黃酮醇、脂肪族羥乙基咪唑啉表面活性劑及其混合物。本發(fā)明與視黃醇和/或視黃酯結(jié)合的該化合物的挑選,基于該組合物能模擬視黃酸對(duì)皮膚作用的能力。如果所述化合物通過(guò)了本文所描述的體外微粒體測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn),那么它應(yīng)包括在本發(fā)明內(nèi),即使本文沒(méi)有詳細(xì)描述。換言之,如體外微粒體測(cè)定所示,如果某化合物足以抑制LRAT或ARAT催化的視黃醇酯化作用,那么它便能與視黃醇或視黃酯一起模擬視黃酸對(duì)角化細(xì)胞(皮膚細(xì)胞)的作用。
      本發(fā)明進(jìn)一步提供一種調(diào)理皮膚的美容方法,它包括將本發(fā)明組合物局部敷于皮膚。本發(fā)明也提供一種模擬視黃酸對(duì)皮膚之作用的美容方法,它包括將本發(fā)明組合物局部敷于皮膚。
      本文所使用的術(shù)語(yǔ)“調(diào)理”是指預(yù)防和治療一種或多種下列情況皮膚干燥、皮膚光損傷、皺紋的出現(xiàn)、老年斑、老化皮膚。該組合物也用于增加角質(zhì)層的彈性、減淡皮膚的顏色、控制皮脂分泌并且總的提高皮膚的質(zhì)量。該組合物可用于改善皮膚的脫落和表皮的分化。
      在本發(fā)明組合物中加入所選擇的化合物基本上改善了視黃醇或視黃酯的性能。
      按照本發(fā)明,由于在包含視黃醇或視黃酯的組合物中加有有效量的化合物,所述化合物如體外微粒體測(cè)定所示,在100μM濃度下能抑制至少20%LRAT或ARAT催化的視黃醇酯化作用,基本上改善了組合物的性能。優(yōu)選實(shí)施例的描述本發(fā)明組合物包含作為第一必需組分的、選自視黃醇和視黃酯的化合物。術(shù)語(yǔ)“視黃醇”包括視黃醇的下列異構(gòu)體全反式-視黃醇、13-順式-視黃醇、11-順式-視黃醇、9-順式-視黃醇、3,4-二氫-視黃醇。優(yōu)選的異構(gòu)體為全反式-視黃醇、13-順式-視黃醇、3,4-二氫-視黃醇、9-順式-視黃醇。最優(yōu)選的是全反式-視黃醇,這是由于其廣泛的商業(yè)來(lái)源。
      視黃酯是視黃醇的酯。術(shù)語(yǔ)“視黃醇”已在上面定義過(guò)了。適用于本發(fā)明的視黃酯為視黃醇的C1-C30酯,優(yōu)選C2-C20酯,并且最優(yōu)選C2、C3和C16酯,因?yàn)樗鼈円话闶亲钊菀撰@得的。視黃酯的實(shí)例包括(但不限于)棕櫚酸視黃酯、甲酸視黃酯、乙酸視黃酯、丙酸視黃酯、丁酸視黃酯、戊酸視黃酯、異戊酸視黃酯、己酸視黃酯、庚酸視黃酯、辛酸視黃酯、壬酸視黃酯、癸酸視黃酯、十一烷酸視黃酯、月桂酸視黃酯、十三烷酸視黃酯、肉豆蔻酸視黃酯、十五烷酸視黃酯、十七烷酸視黃酯、硬脂酸視黃酯、異硬脂酸視黃酯、十九烷酸視黃酯、花生四烯酸視黃酯、二十二烷酸視黃酯、亞油酸視黃酯、油酸視黃酯。
      本發(fā)明中所使用的優(yōu)選的酯選自棕櫚酸視黃酯、乙酸視黃酯和丙酸視黃酯,因?yàn)樗鼈兪亲钊菀淄ㄟ^(guò)商業(yè)渠道獲得的,因此也是最便宜的。亞油酸視黃酯由于其功效也是優(yōu)選的。
      在本發(fā)明中所使用的視黃醇和/或視黃酯的量為0.001%-10%,優(yōu)選0.01%-1%,最優(yōu)選0.01%-0.5%。
      本發(fā)明組合物的第二必需組分是通過(guò)體外微粒體測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)的化合物。如體外微粒體測(cè)定所示,適用于本發(fā)明的化合物在100μM濃度下能抑制至少20%LRAT或ARAT催化的視黃醇酯化作用。采用體外微粒體測(cè)定法測(cè)定包括在本發(fā)明組合物中的化合物適應(yīng)性如下所述在優(yōu)選的本發(fā)明實(shí)施例中,選擇的化合物在100μM濃度下能抑制至少40%,并且最優(yōu)選至少50%LRAT或ARAT催化視黃醇的酯化作用。體外微粒體測(cè)定法如J.C.Saari and D.L.Bredberg“視網(wǎng)膜色素上皮中CoA和非-CoA依賴性視黃醇的酯化作用”(“CoA and Non-CoA Dependent RetinolEsterification in Retinal Pigment Epithelium”)J.Biol.Chem.263,8084-90(1988)中所述得到微粒體。
      將含0.1M PH7磷酸鈉緩沖劑、5mM二硫蘇糖醇、2mg/ml牛血清白蛋白、40微摩爾棕櫚酰CoA、40微摩爾二月桂酰磷脂酰膽堿、10微摩爾視黃醇和試驗(yàn)化合物或溶劑空白的溶液在37℃下保溫1小時(shí),從牛視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中分離到微粒體成分。保溫后,通過(guò)加入等體積的乙醇將反應(yīng)驟冷,并用己烷提取所形成的視黃酯(從LRAT催化反應(yīng)中得到月桂酸視黃酯,從ARAT催化反應(yīng)中得到棕櫚酸視黃酯)。除掉己烷層,在氮?dú)庀抡舭l(fā),并將殘?jiān)ㄟ^(guò)HPLC在3.9×300mmC19反相柱上分析,用80%甲醇/四氫呋喃作為流動(dòng)相,用熒光檢測(cè)(325nm激發(fā),480nm發(fā)射)定量測(cè)定視黃酯的量。在空白溶劑中形成的視黃酯的量記作100%,并用它來(lái)計(jì)算試驗(yàn)化合物抑制酯形成的百分?jǐn)?shù)。作為對(duì)照,將微粒體等分試樣通過(guò)煮沸5分鐘滅活,可使酯的形成至少95%得到抑制。
      環(huán)狀脂肪族不飽和烴、二萜、二氫黃酮、黃酮醇和某些脂肪族羥乙基咪唑啉表面活性劑是所述化合物的實(shí)例,它們符合上述體外微粒體測(cè)定試驗(yàn)。下文中一個(gè)一個(gè)地描述這些化合物。當(dāng)然,本發(fā)明組合物中也包含其它本文未詳細(xì)描述的化合物,只要這些化合物能通過(guò)本文所描述的體外微粒體測(cè)定試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。環(huán)狀脂肪族不飽和化合物按照上述體外微粒體測(cè)定試驗(yàn)來(lái)選擇適宜的環(huán)狀脂肪族不飽和化合物。
      優(yōu)選的環(huán)狀脂肪族不飽和化合物選自環(huán)狀脂肪族不飽和醛、酮、醇和酯。
      優(yōu)選的環(huán)狀脂肪族不飽和醛、酮、醇和酯為α-二氫大馬酮、β-二氫大馬酮、δ-二氫大馬酮、異二氫大馬酮、大馬酮、α-紫羅酮、β-紫羅酮、烯丙基α-紫羅酮、異丁基紫羅酮、α-甲基紫羅酮、γ-甲基紫羅酮、婆羅門醇(brahmanol)、檀香醇(sandanol)、α-松油醇、新鈴蘭醛(lyral)、藏花乙酯(ethyl saffranate)及其混合物。這些化合物的結(jié)構(gòu)如下
      α-二氫大馬酮
      β-二氫大馬酮
      δ-二氫大馬酮
      異二氫大馬酮
      大馬酮
      α-紫羅酮
      β-紫羅酮
      α-甲基紫羅酮
      烯丙基α-紫羅酮
      婆羅門醇
      新鈴蘭酮
      γ-甲基紫羅酮
      藏花乙酯為了以最小的花費(fèi)獲得最大的性能改善,優(yōu)選地,環(huán)狀脂肪族不飽和化合物選自具有上述結(jié)構(gòu)式的二氫大馬酮和紫羅酮。
      最優(yōu)選環(huán)狀脂肪族不飽和化合物為α-二氫大馬酮和/或α-紫羅酮。
      環(huán)狀脂肪族不飽和化合物可以以組合物重量的0.0001%-50%包含在本發(fā)明組合物中,優(yōu)選以0.01%-10%,最優(yōu)選以0.1%-5%的量使用。二萜包含在本發(fā)明中的二萜是通過(guò)上述體外微粒體測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)的化合物。優(yōu)選的二萜化合物為香葉草基香葉醇,它具有下列結(jié)構(gòu)
      二萜可以以組合物重量的0.0001%-50%包含在本發(fā)明組合物中,優(yōu)選以0.01%-10%,最優(yōu)選以0.1%-5%的量使用。二氫黃酮和黃酮醇包含在本發(fā)明中的二氫黃酮和黃酮醇為通過(guò)上述體外微粒體測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)的化合物。優(yōu)選的二氫黃酮和黃酮醇化合物選自4’,5,7-三羥黃烷酮、五羥黃酮及其混合物。4’,5,7-三羥黃烷酮和五羥黃酮具有下列結(jié)構(gòu)4′,5,7-三羥黃烷酮
      五羥黃酮
      二氫黃酮和黃酮醇可以以組合物重量的0.0001%-50%包含在本發(fā)明組合物中,優(yōu)選以0.01%-10%,最優(yōu)選以0.1%-5%的量使用。
      可以從Sigma公司得到槲皮黃酮和/或4’,5,7-三氫黃烷酮。含五羥黃酮和/或4′,5,7-三氫黃烷酮的植物提取物也適用于本發(fā)明,例如蘆丁、月見草、洋蔥、柑橘屬類。脂肪族羥乙基咪唑啉表面活性劑包含在本發(fā)明中的脂肪族羥乙基咪唑啉表面活性劑為通過(guò)上述體外微粒體測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)的化合物。優(yōu)選的脂肪族羥乙基咪唑啉具有下列結(jié)構(gòu)
      其中R為含8-20個(gè)碳原子的脂肪族飽和或不飽和的、直鏈或支鏈烴鏈。
      適宜的脂肪族羥乙基咪唑啉的實(shí)例包括(但不限制于)椰子基羥乙基咪唑啉(R來(lái)自椰子油脂肪酸,主要是C12和某些更長(zhǎng)的鏈),十二烷基羥乙基咪唑啉(R=CH3(CH2)10),肉豆蔻基羥乙基咪唑啉(R=CH3(CH2)12),硬脂?;u乙基咪唑啉(R=CH3(CH2)16),和油?;u乙基咪唑啉(R=CH3(CH2)7CH=CH(CH2)7) 。
      優(yōu)選脂肪族羥乙基咪唑啉中的R含8-18個(gè)碳原子,更優(yōu)選11-18個(gè)碳原子。最優(yōu)選肪族羥乙基咪唑啉為油酰基羥乙基咪唑啉,這歸因于油?;u乙基咪唑啉的商業(yè)易得性及其功效。
      脂肪族羥乙基咪唑啉可以以組合物重量的0.0001%-50%包含在本發(fā)明組合物中,優(yōu)選以0.01%-10%,最優(yōu)選以0.1%-5%的量包含在本發(fā)明組合物中。在美容應(yīng)用上適宜的賦形劑本發(fā)明組合物也包含在美容應(yīng)用上適宜的賦形劑作為該組合物中活性組分的稀釋劑、分散劑或載體,以便組合物應(yīng)用于皮膚時(shí)促進(jìn)其分布。
      除了水之外的賦形劑包括液體或固體潤(rùn)膚劑、溶劑、濕潤(rùn)劑、增稠劑和粉劑。特別優(yōu)選的非水性載體為聚二甲基硅氧烷和/或聚二甲基苯基硅氧烷。本發(fā)明聚硅氧烷可以是25℃下粘度為10-10,000,000mm2/s(厘沲)的聚硅氧烷。特別需要的是低粘度和高粘度硅氧烷混合物。這些硅氧烷可從General Electric Company獲得,商標(biāo)為Vicasil,SE和SF,和從Dow Corning Company獲得,商標(biāo)為200和500系列??稍诒景l(fā)明組合物中使用的硅氧烷的量占該組合物重量的5%-95%,優(yōu)選25%-90%范圍。
      美容應(yīng)用上適宜的賦形劑通常構(gòu)成組合物重量的5%-99.9%,優(yōu)選25%-80%,并且在不存在其它美容添加劑的情況下,可填補(bǔ)該組合物余量。優(yōu)選賦形劑重量的至少50wt.%,更優(yōu)選至少80wt.%為水。優(yōu)選水至少構(gòu)成本發(fā)明組合物重量的50wt%,最優(yōu)選為組合物重量的60-80wt%。任選護(hù)膚物質(zhì)和美容添加劑油或油性物質(zhì)可以與乳化劑一起加入以便提高油包水乳劑或水包油乳劑,這主要依賴于所使用乳化劑的平均親水親油平衡值(HLB)。
      優(yōu)選本發(fā)明組合物包含防曬劑。防曬劑包括通常用來(lái)阻擋紫外光的物質(zhì)。該化合物的實(shí)例為PABA、肉桂酸酯和水楊酸酯的衍生物。例如,可使用甲氧基肉桂酸辛酯和2-羥基-4-甲氧基苯酮(也稱之為羥苯甲酮)。甲氧基肉桂酸辛酯和2-羥基-4-甲氧基苯酮是可商購(gòu)的,商標(biāo)分別為parsol MCX和二苯酮-3。乳劑中所使用的防曬劑的準(zhǔn)確量可隨需要避免的太陽(yáng)紫外光照射程度而改變。
      另一種優(yōu)選的可選擇組分選自基本脂肪酸(EFAs),即所有細(xì)胞漿膜形成必需的那些脂肪酸,在角化細(xì)胞中,EFA不足使得細(xì)胞過(guò)度增殖。補(bǔ)充EFA可糾正該現(xiàn)象。EFAs也加強(qiáng)表皮的脂生物合成并為表皮的阻隔層形成提供脂類。優(yōu)選基本脂肪酸選自亞油酸、γ-亞麻酸、高-γ-亞麻酸、耬斗草酸(columbinic acid)、二十烷-(n-6,9,13)-三烯酸、花生四烯酸、α-亞麻酸、二十碳五烯酸、六烯酸(hexaenoic)及其混合物。
      通常,將潤(rùn)膚劑加到本發(fā)明組合物中。該潤(rùn)膚劑的含量可以為組合物總量的0.5%-50%,優(yōu)選在5%-30%之間。按照一般化學(xué)分類方法,潤(rùn)膚劑可分為酯、脂肪酸和醇、多元醇和烴。
      酯可以是一或二酯。適宜的脂肪酸二酯的實(shí)例包括己二酸二丁酯、癸二酸二乙酯、二臘梅酸二異丙酯(diisopropyl dimerate)和丁二酸二辛酯。適宜的支鏈脂肪酸酯包括2-乙基-己基肉豆蔻酸酯,硬脂酸異丙酯和棕櫚酸異硬脂酯。適宜的三元酸酯包括三亞油酸三異丙酯和枸櫞酸三月桂酯。適宜的直鏈脂肪酸酯包括棕櫚酸月桂酯、乳酸肉豆蔻酯、oleyl eurcate和油酸硬脂酯(stearyl oleate)。優(yōu)選的酯包括椰子基-辛酸酯/癸酸酯(椰子基-辛酸酯和椰子基-癸酸酯混合物),丙二醇肉豆蔻基醚乙酸酯,己二酸二異丙酯和辛酸鯨蠟酯。
      適宜的脂肪族醇和酸包括具有10-20個(gè)碳原子的化合物。特別優(yōu)選的化合物如鯨蠟基、肉豆蔻基、棕櫚基和硬脂基的醇和酸。
      可作為潤(rùn)膚劑的多元醇為直鏈和支鏈烷基多羥基化合物。例如,丙二醇、山梨糖醇和甘油是優(yōu)選的。也可以使用聚合的多元醇,如聚丙二醇和聚乙二醇。丁二醇和丙二醇也是特別優(yōu)選的滲透增強(qiáng)劑。
      可作為潤(rùn)膚劑的烴的實(shí)例為具有12-30個(gè)碳原子烴鏈的化合物。具體實(shí)例包括礦物油、凡士林、角鯊烯和異鏈烷烴。
      本發(fā)明美容組合物中的另一類功能性組分為增稠劑。通常,增稠劑的含量為組合物重量的0.1%-20%,優(yōu)選0.5%-10%。增稠劑的實(shí)例為交聯(lián)的聚丙烯酸酯物質(zhì),購(gòu)于B.F.Goodrich Company,商標(biāo)為Carbopol。可使用樹膠,如黃原膠、角叉菜膠、明膠、卡拉牙膠、果膠和刺槐豆膠。在某些情況下,增稠劑的功能可以由一種發(fā)揮硅氧烷或潤(rùn)膚劑作用的物質(zhì)來(lái)完成。例如,粘度超過(guò)10厘沲的硅橡膠純膠料和酯,如硬脂酸甘油酯,具有雙重功能。
      粉劑可加到本發(fā)明美容組合物中。這些粉劑包括白堊、滑石粉、高嶺土、淀粉、綠土型粘土、化學(xué)改性硅酸鋁鎂、有機(jī)改性蒙脫石粘土、水合硅酸鋁、烘制二氧化硅、淀粉辛烯基琥珀酸鋁及其混合物。
      其它次要的添加劑組分也可以加到所述美容組合物中。這些組分可包括著色劑、遮光劑和香料。其中,所述其它次要的添加劑組分可以為組合物重量的0.001%-20%。組合物的應(yīng)用本發(fā)明組合物主要用作一種局部涂抹到人皮膚上的產(chǎn)品,特別是作為一種調(diào)理皮膚和使皮膚光滑,并預(yù)防或減少皺紋或皮膚老化的試劑。
      在應(yīng)用中,將少量,例如1-100ml的組合物從適宜的容器或涂藥器中取出涂抹到暴露的皮膚表面,并且,如果需要,用手或手指或適宜的裝置將其鋪開和/或摩擦到皮膚上。產(chǎn)品形式和包裝本發(fā)明局部皮膚治療組合物可適宜地配制成洗劑、霜?jiǎng)┗蚰z??蓪⒃摻M合物包裝在與其粘度相適應(yīng)的適宜的容器中提供給消費(fèi)者使用。例如,洗劑和霜?jiǎng)┛砂b在瓶子或可轉(zhuǎn)動(dòng)的球狀涂藥器中,或包裝在推進(jìn)劑驅(qū)動(dòng)的氣霧劑裝置或裝有適于手指操作的帶泵容器中。當(dāng)該組合物為霜?jiǎng)r(shí),它可以簡(jiǎn)單地貯存在不變形的瓶子或可擠壓的容器如軟管或有蓋子的瓶中。
      該組合物也可以包于膠囊中,如美國(guó)專利5,063,057中所描述的那些。
      因此,本發(fā)明也提供一種包含本文所定義的美容上適宜的組合物的封閉容器。
      下列具體實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。材料和方法細(xì)胞培養(yǎng)將通過(guò)胰蛋白酶處理,從新生兒包皮上分離到的人角化細(xì)胞放在Dulbecco改性Eagle(DME)Hams F12(1∶1)培養(yǎng)基/10%胎牛血清中生長(zhǎng),其中存在經(jīng)過(guò)照射的3T3鼠成纖維細(xì)胞,用于分開角化細(xì)胞菌落。讓細(xì)胞在上述條件下生長(zhǎng)直至它們的第二代并保持冷凍以便將來(lái)使用。將冷凍的第二代角化細(xì)胞解凍并鋪板于上述培養(yǎng)基中生長(zhǎng)5天,然后將它們轉(zhuǎn)移到從Clonetics Corporation,San Diego,CA得到的含0.15mM Ca的無(wú)血清MCDB 153為基礎(chǔ)的角化細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基(KGM)中,或從GIBCO得到的含0.09mM Ca的角化細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基(KSFM)中。在第7天,當(dāng)細(xì)胞80-90%融合時(shí),將它們經(jīng)胰蛋白酶作用,并鋪板于無(wú)血清培養(yǎng)基中用于進(jìn)行各種試驗(yàn)。胸苷測(cè)定3H-胸苷的摻入和角化細(xì)胞的增殖將所培養(yǎng)的角化細(xì)胞中摻入3H-胸苷,可用來(lái)測(cè)定角化細(xì)胞的增殖。胸苷是四種脫氧核苷中的一種,所述脫氧核苷是DNA的單體單元,所述DNA是動(dòng)物王國(guó)中遺傳信息的萬(wàn)能文庫(kù)。在體細(xì)胞(如角化細(xì)胞)進(jìn)行細(xì)胞分裂前,進(jìn)行細(xì)胞分裂的全部基因組都進(jìn)行復(fù)制。這涉及細(xì)胞的大規(guī)模DNA合成,并使得兩個(gè)子細(xì)胞得到相同的遺傳材料的拷貝。當(dāng)3H-胸苷包含在角化細(xì)胞的培養(yǎng)基中時(shí),由于角化細(xì)胞正在合成DNA準(zhǔn)備進(jìn)行細(xì)胞分裂,這樣,經(jīng)標(biāo)記的核苷并入新合成的DNA中。細(xì)胞群體中并入3H-胸苷的程度與這些細(xì)胞的DNA合成速度成比例,因此可表明細(xì)胞增殖情況。
      將角化細(xì)胞(如上所述培養(yǎng)的)以每孔1ml培養(yǎng)基中含20,000個(gè)細(xì)胞的密度鋪于24孔測(cè)平板中。將細(xì)胞孵育4天或直至細(xì)胞60-70%融合時(shí),改變培養(yǎng)基。改變培養(yǎng)基 后24小時(shí),加入試驗(yàn)化合物(一式三份)于孔中,4小時(shí)后,每孔中加入50μl培養(yǎng)基質(zhì)中的1μCi3H-胸苷。將細(xì)胞再孵育24小時(shí)。將培養(yǎng)基從細(xì)胞中除掉,加入10%冰冷卻的三氯乙酸(TCA)并將測(cè)定板在冰中孵育30分鐘。將細(xì)胞用5%TCA洗滌5次,并用至少1小時(shí)的時(shí)間(通常過(guò)夜)溶解在500μl0.1M NaOH中。將該制劑用0.1M HCl中和;用50μl該細(xì)胞制劑來(lái)測(cè)定總蛋白含量。通過(guò)液相閃爍計(jì)數(shù)900μl細(xì)胞制劑,來(lái)測(cè)定每分鐘3H標(biāo)記的DNA的蛻變(DPM)。胸腺嘧啶摻入結(jié)果用DPM/μg蛋白質(zhì)來(lái)表示。轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶測(cè)定轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶測(cè)定和角化細(xì)胞的分化在表皮的最終分化過(guò)程中,細(xì)胞邊緣的內(nèi)表面上形成15nm厚的蛋白質(zhì)層,稱為角質(zhì)化膜(CE)。該CE由大量不同的蛋白質(zhì)組成,由于在表皮中表達(dá)的至少兩種不同轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(TG酶)的催化下,形成Nε-(γ-谷酰氨基)賴氨酸異二肽鍵,而使所述蛋白質(zhì)交聯(lián)在一起。在表皮的分化層特別是顆粒層中表達(dá)大量谷氨酰胺酶I(TG酶I),但是在未分化的基礎(chǔ)表皮中不存在。因此,TG酶I是表皮角化細(xì)胞分化的標(biāo)志,TG酶I含量高表明分化程度大。在下列實(shí)施例中,利用TG酶I抗體進(jìn)行ELISA為基礎(chǔ)的TG酶I測(cè)定,可用于評(píng)定所培養(yǎng)的角化細(xì)胞的分化情況。
      就實(shí)施例1而言,使用下列方法將角化細(xì)胞(如上所述培養(yǎng)的)以每孔200μl培養(yǎng)基含3,000個(gè)細(xì)胞的密度鋪于96孔平板中。孵育4天后,將培養(yǎng)基改為含試驗(yàn)化合物的培養(yǎng)基(每個(gè)試驗(yàn)做一式6份)。將培養(yǎng)基吸出后,將細(xì)胞再培養(yǎng)72小時(shí),并將平板在-70℃下貯存。將板從冰箱中撤出,并將細(xì)胞用PBS洗滌。加入100μl無(wú)菌注射用水并通過(guò)在-70℃下冷凍再解凍,而將細(xì)胞冷凍破碎。將該細(xì)胞在室溫(R/T)下用PBS/3% BSA(洗滌緩沖劑,牛血清白蛋白)孵育1小時(shí),然后用新鮮洗滌緩沖劑等分試樣漂洗。將細(xì)胞在37℃下,用50μl從Biomedical Industries獲得的、用洗滌緩沖劑稀釋成1∶2,000的主抗體,單克隆抗人轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶鼠抗體(IgG)孵育1小時(shí),然后用緩沖劑漂洗2次。然后,在37℃下,將細(xì)胞用50μl以洗滌緩沖劑稀釋成1∶4,000的副抗體(Fab片斷,從Amersham獲得的過(guò)氧化物酶結(jié)合的抗-鼠IgG)孵育1小時(shí),然后用洗滌緩沖劑漂洗2次。在R/T下,在黑暗中(以鋁箔蓋上),將細(xì)胞用基底溶液(在10ml 0.1M、PH5.0枸櫞酸緩沖液中的4mg鄰-苯二胺和3.3μl30%H2O2)孵育5分鐘。通過(guò)加入50μl4N H2SO4中止反應(yīng)。在測(cè)定板閱讀器上得出492nm下樣品的吸光度。六份重復(fù)試驗(yàn)樣品中四份用兩種抗體處理,兩份僅僅用副抗體處理(即為了測(cè)定酶結(jié)合Ab的本底結(jié)合值)。通過(guò)從各試驗(yàn)的讀數(shù)中減去本底值而測(cè)出TG酶含量,并測(cè)出暴露于兩種抗體的各重復(fù)試驗(yàn)的平均值±s.d.。
      對(duì)于要測(cè)定其中TG酶I含量的其它實(shí)施例來(lái)說(shuō),使用下列方法將角化細(xì)胞(如上所述培養(yǎng)的)以每孔200μl培養(yǎng)基中含3,000個(gè)細(xì)胞的密度鋪在96孔平板中。孵育4天后,將培養(yǎng)基改為含試驗(yàn)化合物的培養(yǎng)基(每個(gè)試驗(yàn)做一式6份)。將培養(yǎng)基吸出后,細(xì)胞再培養(yǎng)72小時(shí),并將測(cè)定板在-70℃下貯存。將測(cè)定板從冰箱中撤出后,通過(guò)冷凍和解凍將細(xì)胞冷凍破碎并用PBS洗滌3次。將該細(xì)胞在室溫(R/T)下用TBS/3%BSA緩沖劑孵育1小時(shí)。然后在37℃下,將細(xì)胞與100μl從Biomedical Technologies Inc.獲得的、用TBS/1%BSA緩沖劑稀釋成1∶2000的單克隆抗人轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(IgG)鼠抗體(主抗體)孵育2小時(shí),然后用洗滌緩沖劑(TBS/1%BSA/0.05%吐溫-20)洗滌6次。接著,在37℃下,將細(xì)胞用100μl Fab片斷,從Amersham獲得的、用洗滌緩沖劑稀釋成1∶4,000的過(guò)氧化物酶結(jié)合的抗-鼠IgG抗體(副抗體)孵育2小時(shí),然后用洗滌緩沖劑洗滌3次并用PBS洗滌三次。在R/T下,在黑暗中(以鋁箔覆蓋),將細(xì)胞用基底溶液(在10ml0.1M、PH5.0枸櫞酸緩沖液中的4mg鄰-苯二胺和3.3μl 30%H2O2)孵育5分鐘。在測(cè)定板閱讀器上記錄樣品在492nm處的吸光度。在六份重復(fù)試樣中,將其中四份用兩種抗體處理,而其中兩份僅僅用副抗體處理(即為了測(cè)定結(jié)合了Ab的酶的本底結(jié)合值)。通過(guò)從各試驗(yàn)的讀數(shù)中減去本底而得出轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的含量,并測(cè)定暴露到兩種抗體中的重復(fù)試樣的平均值±s.d.。DNA測(cè)定將細(xì)胞處理后檢測(cè)到的TG酶I的含量受細(xì)胞數(shù)量的影響,即細(xì)胞數(shù)越多,所檢測(cè)到的TG酶I的含量越高。將TG酶I的含量校準(zhǔn)為同一孔中細(xì)胞的DNA含量,這樣可消除因細(xì)胞數(shù)不同引起的差異。DNA定量測(cè)量是特別有用的細(xì)胞數(shù)顯示,包括角化細(xì)胞數(shù)的顯示,因?yàn)楦骷?xì)胞具有同一基因組的全部含義和目的,因此具有相同的DNA量。因此,每孔中細(xì)胞總DNA含量是與該孔中細(xì)胞數(shù)成比例的。DNA定量測(cè)定用于針對(duì)細(xì)胞數(shù)對(duì)TG酶數(shù)據(jù)進(jìn)行校準(zhǔn)。。
      將角化細(xì)胞以每孔200μl培養(yǎng)基中含3,000個(gè)細(xì)胞的密度放在96孔測(cè)定板中。孵育4天后,將培養(yǎng)基改為含試驗(yàn)化合物的培養(yǎng)基(每個(gè)試驗(yàn)做6份)。將培養(yǎng)基吸出后,將細(xì)胞再培養(yǎng)72小時(shí),并將平板板在-70℃下貯存1.5小時(shí)。將板從冰箱中撤出并解凍30分鐘。加入100μl/孔Hoechest染料(1μg/ml最終濃度),并將其孵育15分鐘,加蓋,然后在熒光計(jì)(ex.360nm并且em.460nm)中測(cè)定。除掉染料溶液并將該孔用為TG酶測(cè)定而制備的PBS漂洗。實(shí)施例1在改變角化細(xì)胞分化上,視黃酸比視黃醇更有效測(cè)定加入視黃酸(RA)和視黃醇(ROH)后對(duì)校準(zhǔn)為細(xì)胞DNA含量的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶含量的影響,結(jié)果顯示在表1中。
      表1
      與乙醇對(duì)照組相比,所有濃度,即2.5×10-7M、2.5×10-8M和2.5×10-9M的試驗(yàn)用視黃酸都降低角化細(xì)胞的分化,并且與相應(yīng)2.5×10-7M、2.5×10-8M和2.5×10-9M的視黃醇處理相比,視黃酸降低程度明顯大于視黃醇。對(duì)于視黃酸和視黃醇來(lái)說(shuō),轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶水平的降低是劑量依賴性的。這與視黃酸對(duì)表皮分化的抑制作用大于視黃醇是一致的。實(shí)施例2體外微粒體中視黃醇酯化的方法如下列文獻(xiàn)中所述得到微粒體J.C.Saari and D.L.Bredberg,“視網(wǎng)膜色素表皮細(xì)胞中CoA和非CoA依賴性視黃醇酯化作用”(“CoAand Non-CoA Dependent Retinol Esterification in Retinal PigmentEpithelium”J.Biol.Chem.23,8084-90(1988))。
      將含0.1M PH7磷酸鈉緩沖液、5mM二硫蘇糖醇、2mg/ml牛血清白蛋白、40微摩爾棕櫚酰輔酶A、40微摩爾二月桂酰磷脂?;憠A、10微摩爾視黃醇和試驗(yàn)化合物或溶劑空白的溶液在37℃下孵育1小時(shí),微粒體碎片從牛視網(wǎng)膜色素的表皮細(xì)胞中分離出來(lái)。孵育后,通過(guò)加入等體積的乙醇中止反應(yīng),將所形成的視黃酯(從ARAT催化反應(yīng)中形成棕櫚酸視黃酯,從LRAT催化的反應(yīng)中形成月桂酸視黃酯)用己烷提取。將己烷層除掉,在氮?dú)猸h(huán)境下蒸發(fā),并通過(guò)在3.9×300mmC18反相柱上進(jìn)行HPLC來(lái)分析殘?jiān)?,通過(guò)使用80%甲醇/四氫呋喃流動(dòng)相和熒光檢測(cè)(325nm激發(fā),480nm發(fā)射)來(lái)確定視黃酯的量。將在溶劑空白存在下形成的酯量記作100%,并用它來(lái)計(jì)算試驗(yàn)化合物抑制酯形成的百分?jǐn)?shù),通過(guò)煮沸5分鐘,將等分試樣的微粒體滅活作為對(duì)照,它生至少95%酯抑制作用。
      所得到的結(jié)果見表2中。
      表2化合物 濃度(μM)抑制%,ARAT 抑制%,LRAT油?;u乙基咪唑啉 100 9095油酰基羥乙基咪唑啉 101428辛酸基羥乙基咪唑啉 100 - 8Diazolidinyl urea100 0 0硫胺 100 0 0咖啡因 100 0 0腺嘌呤 100 0 0苯基苯并咪唑磺酸 100 0 0尿嘧啶 100 0 0色氨酸 100 0 0椰子基谷氨酸 100 0 0二甲基2-綽昔古柯 100 0 0堿氧化物兩性二乙酸二鈉鹽 100 0 0油酰氨丙基甜菜堿 100 0 0油胺氧化物 100 0 0月桂酰肌氨酸 100 200
      可見,羥乙基咪唑啉表面活性劑是有效的酯化抑制劑,而其它表面活性劑和其它雜環(huán)化合物基本上是非活性的。辛酸基羥乙基咪唑啉(R=CH3(CH3)6)不足以抑制LRAT。實(shí)施例3用各種具有表3所示R基的羥乙基咪唑啉表面活性劑來(lái)重復(fù)實(shí)施例2。所得到的結(jié)果見表3中。
      表3
      表3結(jié)果表明,相對(duì)活性是油酰基>椰子基>月桂基。椰子基是更優(yōu)選的,因?yàn)樗粏渭兪荂12,它還具有某些較長(zhǎng)的鏈烷基。
      表2中關(guān)于辛酸基羥乙基咪唑啉的數(shù)據(jù)表明,在100微摩爾時(shí),它只有8%抑制作用。所得到的數(shù)據(jù)清楚地表明,相對(duì)活性是油?;疽踊驹鹿鸹拘了峄?shí)施例4利用油?;u乙基咪唑啉(OHI)、視黃酸(RA)、視黃醇(ROH)和棕櫚酸視黃酯(RP)測(cè)定轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶。
      所得到的結(jié)果見表4中。
      表4實(shí)驗(yàn)號(hào) 化合物 濃度(微摩爾) 與對(duì)照物相比的%1 RA 0.2535.11 ROH0.2576.21 OHI1 80.71 ROH+OHI0.25+1 45.12 RA 0.2543.42 ROH0.025 91.62 OHI1 78.22 ROH+OHI0.025+1 57.93 RA 0.2545.93 RP 0.2591.63 OHI1 91.13 RP+OHI 0.25+1 71.6從表4結(jié)果可見,視黃酸基本上可降低角化細(xì)胞的分化,而視黃醇、油?;u乙基咪唑啉和棕櫚酸視黃酯在單獨(dú)使用時(shí)不影響角化細(xì)胞分化,或者其影響比視黃酸小得多。
      在試驗(yàn)1和2中,當(dāng)將視黃醇與油?;u乙基咪唑啉合用時(shí),其結(jié)果是協(xié)同地降低角化細(xì)胞的分化,其降低程度接近視黃酸的作用。
      在試驗(yàn)3中,當(dāng)將油?;u乙基咪唑啉與棕櫚酸視黃酯合用時(shí),其結(jié)果不像試驗(yàn)1和2那么明顯,然而還是可以觀察到協(xié)同降低作用。
      該實(shí)施例也表明,當(dāng)通過(guò)本文上述體外微粒體測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)的化合物與視黃醇合用時(shí),實(shí)際上具有對(duì)角化細(xì)胞的作用,其作用程度類似于視黃酸的作用。實(shí)施例5將表5A和5B中所列化合物進(jìn)行體外微粒體測(cè)定試驗(yàn)。
      將表5A中所列出的化合物以100μM濃度進(jìn)行試驗(yàn)。將表5B中所列出的化合物以10μM濃度進(jìn)行試驗(yàn)。
      表5A
      表5B
      <p>從表5B和5A中可見,某些環(huán)狀脂肪族不飽和化合物是有效的LRAT和ARAT催化的視黃醇酯化作用的抑制劑。比較實(shí)施例6用其它環(huán)狀脂肪族不飽和化合物進(jìn)行體外微粒體測(cè)定試驗(yàn)。所得到的結(jié)果見表6中。
      表6中的化合物以100μM的濃度進(jìn)行試驗(yàn)。
      表6
      從表6的結(jié)果可見,所有的環(huán)狀脂肪族不飽和化合物都抑制或充分抑制LRAT和ARAT催化的視黃醇酯化。實(shí)施例7驗(yàn)證表7中所列出的化合物和組合物對(duì)角化細(xì)胞分化的作用。結(jié)果用與對(duì)照物相比的%表示。轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶含量校正為DNA水平。數(shù)據(jù)來(lái)自兩個(gè)視黃醇濃度不同的試驗(yàn)。所得到的結(jié)果見表7中。
      表7
      表7的結(jié)果表明,盡管單一的α-二氫大馬酮和單一的視黃醇不是非常有效,但它們的組合物通過(guò)模擬視黃酸對(duì)角化細(xì)胞分化的作用,可協(xié)同降低轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶。該實(shí)施例也在微粒體測(cè)定和細(xì)胞培養(yǎng)物的數(shù)據(jù)之間建立起良好的相關(guān)性。實(shí)施例8用二萜化合物、香葉基香葉醇或金合歡醇進(jìn)行體外微粒體測(cè)定試驗(yàn)。
      所得到的結(jié)果見表8。
      表8
      1從TCI美國(guó)(波特蘭,俄勒岡)得到。也可以從Sigma和CTC有機(jī)物公司(Atlanta,喬治亞州)得到。2從Givaudan CO.,Bedoukian CO.,或Dragoco Co.得到。
      從表8的結(jié)果可見,香葉基香葉醇或金合歡醇都抑制視黃醇酯化。實(shí)際上,香葉基香葉醇是比金合歡醇更有效的酯化抑制劑,其結(jié)構(gòu)如下
      實(shí)施例9按照上文材料和方法部分所述的過(guò)程測(cè)量并入的3H-胸苷。所得結(jié)果見表9A和9B。
      表9A
      < /p><p>表9B
      由上表結(jié)果可見,香葉基香葉醇能夠顯著增加視黃醇的增殖增強(qiáng)作用,使之達(dá)到類似于相當(dāng)量的視黃酸的作用。而且證明微粒體測(cè)定試驗(yàn)和化合物對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的影響之間存在良好的相關(guān)性。實(shí)施例10對(duì)表10中的化合物進(jìn)行體外微粒體測(cè)定。所得結(jié)果見表10。以100μM濃度試驗(yàn)表10化合物。
      表10
      實(shí)施例114′,5,7-三羥黃烷酮和視黃醇協(xié)同抑制角化細(xì)胞的分化用試驗(yàn)化合物處理72小時(shí)來(lái)測(cè)試對(duì)校準(zhǔn)為細(xì)胞DNA含量的TG酶I水平的影響。結(jié)果見表11。從Sigma獲得4′,5,7-三羥黃烷酮。
      表11<
      >由表11結(jié)果可見,2.5×10-7M視黃酸對(duì)于抑制角化細(xì)胞TG酶I水平(為對(duì)照物的42%)來(lái)看是非常有效的。2.5×10-9M視黃醇是無(wú)效的(91%),并且單獨(dú)使用時(shí),10-7M 4’,5,7-三羥黃烷酮對(duì)角化細(xì)胞TG酶I水平?jīng)]有抑制作用。然而,2.5×10-9M視黃醇+10-7M 4′,5,7-三羥黃烷酮抑制角化細(xì)胞的TG酶I降到對(duì)照物53%的水平。所以,4’,5,7-三羥黃烷酮和視黃醇以類似于視黃酸的作用方式協(xié)同抑制角化細(xì)胞的分化。實(shí)施例124′,5,7-三羥黃烷酮和棕櫚酸視黃酯協(xié)同抑制角化細(xì)胞的分化用試驗(yàn)化合物處理72小時(shí)來(lái)測(cè)試對(duì)TG酶I水平(校正為細(xì)胞DNA含量)的影響。結(jié)果見表12。
      表12棕櫚酸視黃酯與4′,5,7-三羥黃烷酮對(duì)角化細(xì)胞TG酶/DNA的影響
      由表12結(jié)果可見,2.5×10-7M視黃酸對(duì)于抑制角化細(xì)胞TG酶I水平(為對(duì)照物的32%)是非常有效的。2.5×10-9M棕櫚酸視黃酯是無(wú)效的(93%)并且單獨(dú)使用時(shí),10-8M 4’,5,7-三羥黃烷酮對(duì)角化細(xì)胞TG酶I水平具有很小的抑制作用。然而,2.5×10-8M視黃醇+10-9M 4′,5,7-三羥黃烷酮抑制角化細(xì)胞的TG酶I到對(duì)照物85%的水平。所以,4′,5,7-三羥黃烷酮和棕櫚酸視黃酯以類似于視黃酸的作用方式協(xié)同抑制角化細(xì)胞的分化。實(shí)施例13五羥黃酮和視黃醇協(xié)同抑制角化細(xì)胞的分化用試驗(yàn)化合物處理72小時(shí)來(lái)測(cè)試對(duì)TG酶I水平(校正為細(xì)胞的DNA含量)的影響。結(jié)果見表13。從Sigma購(gòu)得五羥黃酮。
      表13
      由表13結(jié)果可見,2.5×10-7M視黃酸對(duì)于抑制角化細(xì)胞TG酶I水平(為對(duì)照物的52%)是非常有效的。2.5×10-7M視黃醇是無(wú)效的(90%)并且單獨(dú)使用時(shí),10-6M五羥黃酮對(duì)角化細(xì)胞TG酶I水平僅僅具有很小的抑制作用。然而,2.5×10-7M視黃醇+10-6M五羥黃酮抑制角化細(xì)胞的TG酶I到對(duì)照物70%的水平。所以,五羥黃酮和視黃醇以類似于視黃酸的作用方式協(xié)同抑制角化細(xì)胞的分化。
      在這些研究過(guò)程中,視黃酸用作陽(yáng)性對(duì)照和參考化合物,與其它被分析的化合物進(jìn)行比較。視黃酸以劑量依賴的方式降低皮膚角化細(xì)胞中的轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶I的水平。換言之,視黃酸降低角化細(xì)胞分化。視黃醇和棕櫚酸視黃酯抑制角化細(xì)胞分化作用明顯低于視黃酸。
      然而,上述實(shí)施例所表明的意想不到的結(jié)果是視黃醇或視黃酯對(duì)培養(yǎng)的角化細(xì)胞的作用可通過(guò)視黃醇或酯與0.0001%到50%的某些化合物組合來(lái)增強(qiáng)到近乎視黃酸的水平,所述化合物通過(guò)體外微粒體測(cè)定以100μM的濃度至少抑制20%的LRAT和ARAT催化的視黃醇酯化。該作用不僅大于視黃醇或酯或所述化合物本身的作用,而且兩種組分相互協(xié)同起作用,以增強(qiáng)其對(duì)角化細(xì)胞的類似視黃酸的反應(yīng)。
      上述結(jié)果表明通過(guò)體外微粒體測(cè)定的所述化合物與視黃醇和視黃酯協(xié)同作用以降低角化細(xì)胞的分化和/或增加角化細(xì)胞的增殖,模擬視黃酸對(duì)角化細(xì)胞的作用。
      實(shí)施例14-19舉例說(shuō)明本發(fā)明的主題組合物。這些組合物可以常規(guī)方法來(lái)制備。它們適于美容使用。具體來(lái)說(shuō),這些組合物適用于出現(xiàn)皺紋、粗糙、干燥、薄而易剝落、老化和/或UV損害的皮膚,以改善其外觀和感覺(jué)并也適用于健康皮膚以預(yù)防或延緩其衰老。實(shí)施例14該實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明組合物中的高內(nèi)相油包水乳劑。
      布里杰92是聚氧乙烯(2)油基醚實(shí)施例15該實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的水包油霜?jiǎng)?
      *布里杰56是鯨蠟醇POE(10)Alfol 16RD為鯨蠟醇實(shí)施例16本實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的醇性洗劑。
      實(shí)施例17該實(shí)施例說(shuō)明含本發(fā)明組合物的另一醇性洗劑。
      實(shí)施例18該實(shí)施例說(shuō)明摻有本發(fā)明組合物的防曬霜
      實(shí)施例19該實(shí)施例說(shuō)明摻有本發(fā)明組合物的非水護(hù)膚組合物
      1二甲基硅氧烷聚合物具有至少50000的分子量和在25℃時(shí)至少10000厘沲的濃度,購(gòu)自GEC2二甲基硅氧烷環(huán)狀五聚物,購(gòu)自Dow Corning公司3二甲基硅氧烷四聚物,購(gòu)自Dow Corning公司。
      如果在實(shí)施例中沒(méi)有描述,本發(fā)明中所使用的材料經(jīng)如下途徑獲得棕櫚酰輔酶A,BSA,二月桂?;字D憠A,視黃醇,視黃酸二硫代蘇醇來(lái)自Sigma。
      環(huán)狀脂肪族化合物二氫大馬酮來(lái)自Firmenich;紫羅蘭酮來(lái)自IFF;其它來(lái)自Allured Pub.Co.出版的“香料和芳香材料”1991中所述的供應(yīng)商。咪唑啉表面活性劑油?;溥蜻莵?lái)自Scher化學(xué)公司的Schercozoline;其它來(lái)自McIntyre,名稱為Mackazoline,辛基、椰子基、月桂基分別為Mackazoline CY,C和L。
      權(quán)利要求
      1.一種護(hù)膚組合物,含有(a)、0.001%-10%選自視黃醇、視黃酯及其混合物的化合物;(b)、0.0001%-50%的一種化合物,按體外微粒體測(cè)定法所示,所述化合物在100μM下抑制至少20%LRAT或ARAT催化的視黃醇酯化作用;其中,所述化合物不是脂肪酸酰胺或二甲基咪唑啉酮;和(c)、從美容上可接受的賦形劑。
      2.權(quán)利要求1的組合物,其中所述化合物(b)選自環(huán)狀脂肪族不飽和烴、二萜、二氫黃酮、黃酮醇、脂肪羥基乙基咪唑啉表面活性劑及其混合物。
      3.權(quán)利要求2的組合物,其中環(huán)狀脂肪族不飽和化合物選自α-二氫大馬酮、β-二氫大馬酮、δ-二氫大馬酮、異二氫大馬酮、大馬酮、α-紫羅酮、β-紫羅酮、烯丙基α-紫羅酮、異丁基紫羅酮、α-甲基紫羅酮、γ-甲基紫羅酮、婆羅門醇(brahmanol)、檀香醇(sandanol)、α-松油醇、新鈴蘭醛、藏花乙酯(ethyl saffranate)及其混合物。
      4.權(quán)利要求2或3的組合物,其中二萜為香葉基香葉醇。
      5.權(quán)利要求2-4的任一組合物,其中二氫黃酮為4′,5,7-三羥黃烷酮。
      6.權(quán)利要求2-5的任一組合物,其中黃酮醇為五羥黃酮。
      7.權(quán)利要求2-6的任一組合物,其中脂肪羥基乙基咪唑啉表面活性劑具有下列結(jié)構(gòu)式
      其中R為含有8-20個(gè)碳原子的脂肪族飽和或不飽和直鏈或支鏈碳?xì)滏湣?br> 8.權(quán)利要求1-7的任一組合物,其中視黃酯選自棕櫚酸視黃酯、乙酸視黃酯、丙酸視黃酯、亞油酸視黃酯及其混合物。
      9.一種調(diào)理皮膚的美容方法,該方法包括將權(quán)利要求1-8的任一組合物局部涂于皮膚上。
      10.一種模擬視黃酸作用皮膚的美容方法,該方法包括將權(quán)利要求1-8的任一組合物涂在皮膚上。
      全文摘要
      充分抑制LRAT或ARAT催化視黃醇酯化為失活視黃酯的化合物,具有與視黃酸相同的對(duì)角化細(xì)胞的作用。因此,視黃醇或視黃酯與這些化合物組合后的作用類似于用視黃酸處理。
      文檔編號(hào)A61K8/35GK1253493SQ97180116
      公開日2000年5月17日 申請(qǐng)日期1997年9月18日 優(yōu)先權(quán)日1996年9月27日
      發(fā)明者S·P·格蘭杰, A·R·布爾格, I·R·斯科特, K·伊瓦達(dá), K·H·張, A·V·羅林斯 申請(qǐng)人:尤尼利弗公司
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