專(zhuān)利名稱(chēng)：用2,6－二烷基－4－甲硅烷基－苯酚誘導(dǎo)血管細(xì)胞粘著分子－1和治療慢性炎癥疾病的方法
背景技術(shù)：
血管細(xì)胞粘著分子-1(VCAM-1)和胞間粘著分子-1(ICAM-1)是在免疫球蛋白超家族中的粘著分子，該家族分子在血管內(nèi)壁和平滑肌細(xì)胞中受到如下細(xì)胞因子的向上調(diào)節(jié)，例如，白細(xì)胞介素-1(IL-1)，白細(xì)胞介素-4(IL-4)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)。通過(guò)和整聯(lián)蛋白反受體的相互作用，在炎癥反應(yīng)中VCAM-1和ICAM-1介導(dǎo)白細(xì)胞的粘著和跨內(nèi)壁遷移。VCAM-I和/或ICAM-1抑制劑可應(yīng)用于許多類(lèi)型的慢性炎癥紊亂治療，包括氣喘、類(lèi)風(fēng)溫性關(guān)節(jié)炎和自身免疫性糖尿病。例如，氣喘病患者的VCAM-1和ICAM-1的表達(dá)增加是眾所周知的。Pilewski,J.M.等，美國(guó)呼吸細(xì)胞分子生物學(xué)，12,1-3(1995)；Ohkawara,Y.等，美國(guó)呼吸細(xì)胞分子生物學(xué)，12,4-12(1995)。另外，阻斷VCAM-1和ICAM-1的整聯(lián)蛋白受體(分別為VLA-4和LFA-1)可同時(shí)抑制在一只卵清蛋白致敏大鼠模型的變態(tài)性呼吸道反應(yīng)中的早期和晚期反應(yīng)。Rabb,H.A.等，美國(guó)呼吸護(hù)理醫(yī)學(xué)，149,1186-1191(1994)。
此外，VCAM-1作為介體也與其它的慢性炎癥紊亂有關(guān)，其中包括如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和自身免疫性糖尿病。例如，在類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人的微血管中，發(fā)現(xiàn)內(nèi)壁粘著分子(包括VCAM-1)表達(dá)的增加。Koch,A.E.等，實(shí)驗(yàn)研究64,313-322(1991)；Morales-Ducret,J.等，免疫學(xué)149,1421-1431(1992)?？筕CAM-1或其反受體，VLA-4的中和抗體在自然發(fā)病的小鼠模型(NOD小鼠)中能延緩糖尿病的發(fā)作。Yang,X.D.等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院報(bào)90,10494-10498(1993)；Burkly,L.C.等，糖尿病43,523-534(1994)；Raron,J.L.等，臨床研究雜志93,1700-1708(1994)。VCAM-1的單克隆抗體在動(dòng)物模型同源異基因移殖的排斥反應(yīng)中也有一種有益影響，這表明VCAM-1表達(dá)的抑制劑能在防止移植排斥中有用。Orocz,C.G.等，免疫學(xué)通訊32,7-12(1992)。
VCAM-1是由細(xì)胞以膜結(jié)合方式和可溶性形式表達(dá)的。已經(jīng)顯示VCAM-1的可溶性形式可以誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞體內(nèi)的趨化性，以及刺激在大鼠角膜中的生血管效應(yīng)。Koch,A.E.等，自然376,517-519(1995)?？扇苄訴CAM-1表達(dá)的抑制劑在治療帶有較強(qiáng)生血管組分的疾病(包括腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移)時(shí)具有潛在的治療價(jià)值。Folkman,J.和Shing,Y.,生物化學(xué)雜志10931-10934(1992)。
已經(jīng)克隆和鑒定VCAM-1和ICAM-1的啟動(dòng)子。例如，兩個(gè)啟動(dòng)子都含有多種可結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子NF-kB的DNA序列元件。Iademarco,M.F.等，生物化學(xué)雜志267,16323-16329(1992)；Voraberger等，免疫學(xué)雜志147,2777-2786(1991)。轉(zhuǎn)錄因子的NF-kB家族在對(duì)發(fā)炎部位中向上調(diào)節(jié)的幾個(gè)基因的調(diào)控中起主要作用。作為轉(zhuǎn)錄因子的NF-kB的活性與在胞質(zhì)中從抑制性亞單位IkB的解離有關(guān)。NF-kB亞單位轉(zhuǎn)移至核，與特異性DNA序列元件結(jié)合，再活化若干基因(包括VCAM-1和ICAM-1)的轉(zhuǎn)錄。Collins T.等，實(shí)驗(yàn)研究68,499-508(1993)。
已假定VCAM-1基因的表達(dá)調(diào)控可以通過(guò)特異性的對(duì)減弱-氧化(氧化還原)敏感的轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄后的調(diào)控因子而與氧化脅迫偶聯(lián)?？寡鮿﹑yrollidine二硫代氨基甲酸鹽和N-乙酰半胱氨酸能抑制誘導(dǎo)的細(xì)胞因子VCAM-1的表達(dá)，但不抑制ICAM-1在血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)。Mauri,N.等，臨床研究雜志92,1866-1874(1993)。這表明通過(guò)包括某些附加因子的抗氧化劑能抑制VCAM-1的表達(dá)而不調(diào)節(jié)ICAM-1的表達(dá)。
Parker等(在美國(guó)專(zhuān)利5,155,250,一九九二年十月十三日頒發(fā))公開(kāi)了2,6-二烷基-4-甲硅烷基-苯酚可用作抗動(dòng)脈粥樣硬化劑。此外，在PCT國(guó)際出版物(WO95/15760，一九九五年六月十五日出版)中公開(kāi)了2,6-二烷基-4-甲硅烷基-苯酚可作為血清膽固醇降低劑。
控制VCAM-1的釋放和治療VCAM-1介導(dǎo)的影響會(huì)是有益的?？刂苹蛑委烿CAM-1炎癥，而不會(huì)像已知的使用抗炎癥類(lèi)固醇劑和抗炎癥非類(lèi)固醇劑那樣伴隨產(chǎn)生副作用也會(huì)是有益的。
發(fā)明概述現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)了與式(1)對(duì)應(yīng)的化合物
其中R1,R2,R3和R4基團(tuán)各自分別是C1-C6烷基；Z為硫，氧或亞甲基；A為C1-C4亞烷基；R5為C1-C6烷基或-(CH2)n-(Ar)基團(tuán)，其中n代表整數(shù)0,1,2或3；而Ar代表未被取代基取代的苯基或萘基，或被下列組內(nèi)基團(tuán)中的一到三個(gè)基團(tuán)取代的苯基或萘基羥基、甲氧基、乙氧基、氯、氟或C1-C6烷基，它們可用于抑制細(xì)胞因子-誘導(dǎo)的VCAM-1表達(dá)。此類(lèi)化合物可給病人服用而抑制VCAM-1；抑制或治療VCAM-1介導(dǎo)的影響；及抑制或治療VCAM-1介導(dǎo)的炎癥。該化合物可以施用來(lái)抑制或治療VCAM-1介導(dǎo)的在下列情況下的影響，如慢性炎癥，氣喘，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和自身免疫性糖尿病。
附圖簡(jiǎn)述

圖1說(shuō)明了2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚(MDL29,353)對(duì)在脂多糖誘導(dǎo)的兔大動(dòng)脈中的VCAM-1表達(dá)的體內(nèi)影響。數(shù)據(jù)由大動(dòng)脈表面內(nèi)皮表達(dá)VCAM-1的百分?jǐn)?shù)表示，用抗兔VCAM-1抗體的免疫染色進(jìn)行測(cè)量。
發(fā)明詳述如在本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“C1-C6烷基”指的是由一至六個(gè)碳原子組成的直鏈，支鏈和環(huán)狀構(gòu)型的飽和烴基。本術(shù)語(yǔ)范圍包括的基團(tuán)有甲基，乙基，正-丙基，異丙基，正-丁基，異丁基，仲丁基，叔丁基，正-戊基，正-己基，環(huán)己基及其類(lèi)似物。
同樣地，術(shù)語(yǔ)“C1-C4亞烷基”指的是由一至四個(gè)碳原子組成的直鏈，支鏈和環(huán)狀構(gòu)型的飽和烴基。本術(shù)語(yǔ)范圍包括的基團(tuán)有亞甲基，1,2-乙烷-二基，1,1-乙烷-二基，1,3-丙烷-二基，1,2-丙烷-二基，1,3-丁烷-二基，1,4-丁烷-二基及其類(lèi)似物。
在那些R5是-(CH2)n-(Ar)基團(tuán)的情況下，“-(CH2)n-”部分代表一個(gè)飽和的直鏈構(gòu)型的烴基。術(shù)語(yǔ)“n”定義為整數(shù)0,1,2或3。因此，“-(CH2)n-”部分代表一個(gè)鍵，亞甲基，1,2-乙烷二基或1,3-丙烷二基。而“-(Ar)”部分代表由已被取代或未被取代的苯基或萘基所定義的芳香基。在那些-(Ar)基團(tuán)是已被取代的芳香基的情況下，其苯基或萘基的任何位置能帶有1至3個(gè)取代基，除非其位置被氫原子取代。取代基選自以下基團(tuán)羥基，甲氧基，乙氧基，氯，氟和C1-C6烷基。在術(shù)語(yǔ)“-(CH2)n-(Ar)”范圍內(nèi)具體包括苯基；萘基；苯甲基；苯乙基；3,4,5-三羥基苯基；3,4,5-三甲氧基苯基；3,4,5-三乙氧基苯基；4-氯苯基；4-甲基苯基；3,5-二叔丁基-4-羥基苯基；4-氟苯基；4-氯代-1-萘基；2-甲基-1-萘甲基；2-萘甲基；4-氯代苯甲基；4-叔丁基苯基；4-叔丁基苯甲基及其類(lèi)似物。
式(1)的化合物可以通過(guò)運(yùn)用已知的方法和技術(shù)制備，并且是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員清楚的。制備式(1)化合物的一般合成方案已在方案A中給出，其中Z代表硫或氧；且除非特別指出，所有取代基都是前面已定義的。
方案A
2 3 1aZ＇=S或Ox=氯、溴、或碘、一般來(lái)說(shuō)，結(jié)構(gòu)1a的酚可以通過(guò)將結(jié)構(gòu)2的適當(dāng)?shù)?,6-二烷基-4-巰基苯酚或2,6-二烷基氫醌(或合適的攜保護(hù)基的衍生物)與非親核堿如氫化鈉，碳酸鉀或者碳酸銫，以及結(jié)構(gòu)3的適當(dāng)?shù)柠u代亞烷基硅烷(如適當(dāng)?shù)穆却鷣喭榛柰?反應(yīng)而制備，該制備反應(yīng)在適當(dāng)?shù)姆琴|(zhì)子傳遞溶劑中進(jìn)行，這種溶劑有乙腈，N,N-二甲基甲酰胺或N,N-二甲基乙酰胺，或在水溶液如水/2-丁酮中進(jìn)行。
方案A中概括的一般合成方法中運(yùn)用的起始物質(zhì)就本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言是較容易獲得的。例如，式(1)多種化合物的某些酚起始物(其中Z是硫，如2,6-二叔丁基-4-巰基苯酚)在美國(guó)第3,576,883號(hào)專(zhuān)利，第3,952,064號(hào)專(zhuān)利，第3,479,407號(hào)專(zhuān)利和日本專(zhuān)利申請(qǐng)73-28425中都已描述。還有，式(1)多種化合物的甲硅烷基起始物質(zhì)如(三甲基甲硅烷基)-甲基碘，(三甲基甲硅烷基)甲基溴，(三甲基甲硅烷基)氯代甲烷，(1-氯丙基)三甲基硅烷，則在合成4,318-19(1988)和美國(guó)化學(xué)會(huì)雜志105,5665-75(1983)中描述。用于制備合適的硅烷的其它方法包括格利雅反應(yīng)，例如4-溴代茴香醚與金屬鎂進(jìn)行反應(yīng)形成格利雅試劑，再用該試劑與氯代二甲基氯甲基硅烷進(jìn)行反應(yīng)而得到氯甲基二甲基-4-甲氧苯基硅烷。
此外，茴香醚可以通過(guò)與Δ-丁基鋰的反應(yīng)鋰化，所形成的鋰化合物再與氯代二甲基硅烷進(jìn)行反應(yīng)，得到氯甲基二甲基-2-甲氧苯基硅烷。
在那些實(shí)例中，即結(jié)構(gòu)2化合物的1-酚功能基可以在該反應(yīng)的特定條件下與結(jié)構(gòu)3化合物進(jìn)行反應(yīng)，可以用在本領(lǐng)域內(nèi)眾所周知和普遍采用的標(biāo)準(zhǔn)酚保護(hù)劑保護(hù)結(jié)構(gòu)2化合物的1-酚功能基。選擇和利用特殊的保護(hù)基團(tuán)是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的。一般來(lái)說(shuō)，所選擇的保護(hù)基團(tuán)在后續(xù)的合成步驟中應(yīng)能充分地保護(hù)所提及的酚，并且在不會(huì)造成目的產(chǎn)物降解的條件下被容易地去除。
合適的酚保護(hù)基的例子是醚類(lèi)，如甲氧基甲基，2-甲氧基乙氧基甲基，四氫吡喃基，叔-丁基以及芐基；甲硅烷基醚，如三甲基甲硅烷基和叔-丁基二甲基甲硅烷基；酯類(lèi)，如乙酸酯和苯甲酸酯；碳酸鹽，如甲基碳酸鹽和芐基碳酸鹽；以及磺酸鹽，如甲基磺酸鹽和甲苯磺酸鹽。
在那些其中R1,R2彼此都是叔-丁基的實(shí)例中，方案A的反應(yīng)可以方便地進(jìn)行而無(wú)需保護(hù)其1-酚功能基。
下列實(shí)施例代表在方案A中所描述的典型合成。這些例子被理解為僅用作說(shuō)明，而不旨在以任何方式限制本發(fā)明的范圍。如在本文所用，下列術(shù)語(yǔ)有明確的意義“g”指克；“mmol”指的是毫摩爾；“mL”指的是毫升；“bp”指的是沸點(diǎn)；“℃”指的是攝氏度；“mmHg”指的是毫米汞柱；“mp”指的是熔點(diǎn)；“mg”指的是毫克；“μM”指的是微摩爾；“μg”指的是微克。
實(shí)施例12,6-二-叔-丁基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚(MDL29,353)
混合2,6-二-叔-丁基-4-巰基苯酚(2.4克，10毫摩爾)，碳酸鉀(1.4克，10毫摩爾)和氯甲基二甲苯基硅烷(1.9克，10毫摩爾)和N,N-二甲基甲酰胺(50毫升)，并在氬氣中室溫下攪拌過(guò)夜。用冰-水稀釋并用乙醚抽提混合物。先用水再用鹽水洗滌醚層，通過(guò)flourosil-硫酸鈉過(guò)濾，接著，蒸發(fā)成為橙色油狀物(3.5克)。通過(guò)第一次蒸餾純化產(chǎn)物(沸點(diǎn)160-170攝氏度＠0.1毫米汞柱)，然后，進(jìn)行硅膠色譜(CCl4∶CHCl3/1∶1)而獲得標(biāo)題化合物，一種淺黃色的油狀物，其會(huì)慢慢地結(jié)晶形成一種白色蠟狀固體(2.3克，59％)C23H34OSSi分析計(jì)算值C,71.44；H,8.86；S,8.29；實(shí)測(cè)值C,71.14；H,8.86；S,7.98。
實(shí)施例22,6-二-叔-丁基-4-[(三甲基甲硅烷基)甲硫基]苯酚(MDL28,235)
混合2,6-二-叔-丁基-4-巰基苯酚(2.4克，10毫摩爾)，碳酸鉀(1.4克，10毫摩爾)，以及N,N-二甲基乙酰胺(50毫升)，并在氬氣中室溫下攪拌。加入氯甲基三甲基硅烷(1.3克，10毫摩爾)后攪拌過(guò)夜。在蒸汽浴上加熱2小時(shí)，冷卻后用水稀釋。再用乙醚抽提，干燥后，蒸發(fā)成為一種淺黃色的固體(2.8克)，最后重結(jié)晶(CH3CN)而得到1.1克(34％)的標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)為100-101攝氏度。
C18H32OSSi分析計(jì)算值C,66.60；H,9.88；S,9.88；實(shí)測(cè)值C,66.83；H,10.05；S:9.91。
實(shí)施例32,6-二甲基-4-[(三甲基甲硅烷基)甲氧基]苯酚
混合2,6-二甲基氫醌(1.4克，10毫摩爾)，碳酸鉀(1.4克，10毫摩爾)，氯甲基三甲基硅烷(1.9克，10毫摩爾)和N,N-二甲基甲酰胺(50毫升)。在惰性氣體中室溫下攪拌直到反應(yīng)完全。用冰-水稀釋并用乙醚抽提混合物。先用水再用鹽水洗滌醚層，通過(guò)flourosil-硫酸鈉過(guò)濾。然后，蒸發(fā)以得到標(biāo)題化合物，再用硅膠色譜純化。
實(shí)施例42,6-二-叔-丁基-4-[(4-氯代苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基]苯酚(MDL104,280)
在乙腈(200毫升)中氮?dú)庀禄亓?,6-二-叔-丁基苯并氫醌(13.7克，61.6毫摩爾)，碳酸鉀(9.4克，68毫摩爾)，氯甲基(4-氯苯基)二甲基硅烷(14.9克，68毫摩爾)和催化量的碘化鉀三天。過(guò)濾固體并蒸發(fā)。再溶解于乙酸乙酯中，并用水再用鹽水洗滌，然后在無(wú)水硫酸鎂中干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)。通過(guò)蒸餾至135℃＠0.1毫米汞柱去除低沸點(diǎn)雜質(zhì)，接著蒸餾產(chǎn)物(沸點(diǎn)℃＠0.1毫米汞柱)純化所得的橙色油狀物。經(jīng)靜置而結(jié)晶的產(chǎn)物可從己烷重結(jié)晶以得到細(xì)小的白色針晶(7.4克，27％的產(chǎn)率)。熔點(diǎn)102-105攝氏度。
C23H33ClO2Si分析計(jì)算值C,68.20；H,8.21實(shí)測(cè)值C,68.39；H,8.13NMR(CDCl3):7.53(d,2H,J8.3),7.34(d,2H,J8.3)6.79(s,2H),4.73(s,1H),3.71(s,2H),1.42(s,18H),0.41(s,6H)。
實(shí)施例52,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-4-氟代苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚(MDL104,389)
在乙腈(1500毫升)中氮?dú)庀禄亓?,6-二-叔-丁基苯并氫醌(10.0克，45毫摩爾)，碳酸鉀(6.2克，45毫摩爾)和二甲基(4-氟苯基)碘代甲基硅烷(13.2克，45毫摩爾)三天。過(guò)濾固體并蒸發(fā)。再溶解于乙酸乙酯中，并用水再用鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)成為十分淺黃色的油狀物，這種油狀物經(jīng)靜置而結(jié)晶。該物質(zhì)能從甲醇中重結(jié)晶而得到一種白色結(jié)晶固體(5.9克，34％產(chǎn)率)。熔點(diǎn)90-93攝氏度。
C23H33FOSi分析計(jì)算值C,71.09；H,8.86實(shí)測(cè)值C,70.96；H,8.58
NMR(CDCl3):7.58(dd,2H,J8.5,6.2),7.10-7.04(m,2H),6.80(s,2H),4.73(s,1H),3.71(si,2H),1.43(s,18H),0.41(s,6H)。
實(shí)施例62,6-二-叔-丁基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚(MDL103,902)
在乙腈(125毫升)中氮?dú)庀禄亓?,6-二-叔-丁基苯并氫醌(5.43克，24.4毫摩爾)，碳酸鉀(3.7克，26.8毫摩爾)和二甲基(碘代甲基)苯基硅烷(7.4克，26.8毫摩爾)過(guò)夜。過(guò)濾固體并蒸發(fā)。再溶解于乙酸乙酯中，并用水再用鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并且蒸發(fā)。通過(guò)蒸餾至135℃＠0.1毫米汞柱去除低沸點(diǎn)雜質(zhì)，接著蒸餾產(chǎn)物(沸點(diǎn)155-165℃＠0.1毫米汞柱)純化所得的橙色油狀物。經(jīng)靜置而結(jié)晶的產(chǎn)物可從甲醇重結(jié)晶以得到白色固體(5.8克，64％的產(chǎn)率)。熔點(diǎn)82-83攝氏度。
C23H34O2Si分析計(jì)算值C,74.54；H,9.25實(shí)測(cè)值C,74.51；H,9.28NMR(CDCl3):7.64-7.58(m,2H),7.42-7.32(m,2H),6.80(s,2H),4.72(s,1H),3.73(s,2H),1.42(s,18H),0.42(s,6H)。
實(shí)施例72,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-4-甲氧基苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚(MDL105,074)
在乙腈(200毫升)中氮?dú)庀禄亓?,6-二-叔-丁基苯并氫醌(13.7克,61.1毫摩爾)，碳酸鉀(9.4克，68毫摩爾)，氯甲基(二甲基)-4-甲氧苯基硅烷(14.6克，68毫摩爾)和催化量的碘化鉀三天。過(guò)濾固體并蒸發(fā)。再溶解于乙酸乙酯中，并先用水再用鹽水洗滌，然后用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)。通過(guò)蒸餾至135℃＠0.1毫米汞柱去除低沸點(diǎn)雜質(zhì)，接著蒸餾產(chǎn)物(沸點(diǎn)155-165℃＠0.1毫米汞柱)純化所得的橙色油狀物。經(jīng)靜置而結(jié)晶的產(chǎn)物可從己烷重結(jié)晶而得到一種白色固體(4.9克，19％的產(chǎn)率)。熔點(diǎn)122-123攝氏度。
C24H36O3Si分析計(jì)算值C,71.95；H,9.06實(shí)測(cè)值C,71.80；H,9.00NMR(CDCl3):7.53(d,2H,J8.6),6.93(d,2H,J8.6),6.80(s,2H),4.71(s,1H),3.81(s,3H),3.70(s,2H),1.42(s,18H),0.39(s,6H)。
實(shí)施例82,6-二甲基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚(MDL103,719)
在乙腈(150毫升)中氬氣下回流2,6-二甲基氫醌(10.0克，72.4毫摩爾)，碳酸鉀(10.0克，72.4毫摩爾)，以及二甲基(氯甲基)苯基硅烷(13.4克，72.4毫摩爾)72小時(shí)。待混合物冷卻后，用水稀釋并用乙醚提取。所得油狀物在145至160攝氏度＠0.1毫米汞柱條件下蒸餾，得到4.9克的淺黃色的油狀物。
C17H22O2Si分析計(jì)算值C,71.28；H,7.74
實(shí)測(cè)值C,71.27；H,7.74。
實(shí)施例92-叔-丁基-6-甲基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚(MDL104,518)
在異丙醇(150毫升)中氬氣下回流2-叔-丁基-6-甲基-4-巰基苯酚(11.8克，60.1毫摩爾)，碳酸氫鉀(6.0克，11.8毫摩爾)和二甲基(氯甲基)苯基硅烷(11.1克，60.1毫摩爾)24小時(shí)。待混合物冷卻后，用水稀釋并用乙醚提取。將醚層蒸發(fā)至干后得到21.9克的油狀物。此油狀物在145-160攝氏度(0.1毫米汞柱)條件下蒸餾得到5.5克的淺黃色油狀物。
C20H28OSSi分析計(jì)算值C,69.71；H,8.19實(shí)測(cè)值C,69.76,H,8.20。
實(shí)施例102,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-2-甲氧基苯基甲硅烷基)-甲氧基]苯酚(MDL104,036)
加熱回流氯甲基二甲基(2-甲氧基)苯基硅烷(27.2克，0.127摩爾)，碘化鈉(19克，0.127摩爾)和乙腈(350毫升)的混合物28小時(shí)。冷卻混合物至環(huán)境溫度并加入2,6-二-叔-丁基-1,4-氫醌(31.5克，0.14摩爾)和碳酸鉀(20.8克，0.15摩爾)。在氮?dú)庵谢亓骰旌衔?天。冷卻混合物，注入水(400毫升)和乙酸乙酯(400毫升)并分離有機(jī)層。蒸發(fā)有機(jī)層并在硅膠(己烷/乙酸乙酯9/1)上層析殘留物。重結(jié)晶(甲醇)層析產(chǎn)物，得到一種白色的固體產(chǎn)物(15.6克，31％)。熔點(diǎn)89-90攝氏度。
C24H36O3Si分析計(jì)算值C,71.95；H,9.06實(shí)測(cè)值C,71.84；H,9.05。
實(shí)施例112,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-2,5-二甲氧基苯基甲硅烷基)-甲氧基]苯酚(MDL103,016)
如制備前面的化合物一樣用氯甲基二甲基-2,5-二甲氧基-苯基硅烷(14克，57毫摩爾)作為硅烷進(jìn)行制備，得到一種白色固體。熔點(diǎn)103-104攝氏度。
C25H38O4Si分析計(jì)算值C,69.72；H,8.89實(shí)測(cè)值C,69.71；H,8.72。
實(shí)施例122,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-2,3-二甲氧基苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚(MDL108,750)
如上用氯甲基(二甲基)-2,3-二甲氧苯基硅烷(11.3克，46毫摩爾)作為硅烷進(jìn)行制備，得到一種白色固體。熔點(diǎn)94.5-96攝氏度。
C25H38O4Si分析計(jì)算值C,69.72；H,8.89實(shí)測(cè)值C,69.84；H,8.91。
實(shí)施例132,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-4-叔-丁基苯基甲硅烷基)-甲氧基]苯酚(MDL106,630)
如上用4-叔-丁基苯基氯甲基二甲基硅烷(6.2克，25.7毫摩爾)作為硅烷進(jìn)行制備，得到一種白色固體。熔點(diǎn)114-115攝氏度。
C27H42O2Si分析計(jì)算值C,76.00；H,9.92實(shí)測(cè)值C,75.94；H,10.13。
實(shí)施例142,6-二-叔-丁基-4-[(芐基二甲基甲硅烷基)甲氧基]苯酚(MDL107,411)
如上用芐基氯甲基二甲基硅烷(7.13克，35.9毫摩爾)作為硅烷進(jìn)行制備，得到一種白色固體。熔點(diǎn)76-77攝氏度。
C24H36O2Si分析計(jì)算值C,74.95；H,9.43實(shí)測(cè)值C,74.94；H,9.36。
實(shí)施例152,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-對(duì)-甲氧基芐基甲硅烷基)甲氧基]苯酚(MDL108,816)
步驟a；二甲基-對(duì)-甲氧基芐基-氯甲基硅烷的制備在氮?dú)庵杏谔胤—嚢杵鲀?nèi)攪拌鎂削(9.7克，0.4克原子)過(guò)夜。在干THF(100毫升)中懸浮該＂活化的＂鎂，并且加入碘晶體。再以一定的速率加入對(duì)-甲氧基-芐基溴(80.8克，0.4摩爾)的THF(400毫升)溶液到懸浮液中而使溶液保持和緩的回流。一旦加樣完成，繼續(xù)攪拌(1-2小時(shí))直到幾乎所有的鎂消耗完全。用滴加方式加入二甲基氯甲基氯代硅烷(52.7毫升，0.4摩爾)的THF(200毫升)溶液，并將該混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。用飽和氯化銨水溶液(500毫升)淬滅反應(yīng)混合物，隨即在室溫?cái)嚢?～2小時(shí))。過(guò)濾沉淀的鎂鹽并用乙醚(300毫升)稀釋。分離有機(jī)相，再用水(3×250毫升)，飽和氯化鈉水溶液(3×250毫升)洗滌，然后用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾并且蒸發(fā)。通過(guò)蒸餾純化所得的棕色油狀物而獲得標(biāo)題化合物。產(chǎn)率55％，沸點(diǎn)在5毫米汞柱下為110-115攝氏度。
C10H15ClOSi分析計(jì)算值C,55.93,H7.15。
實(shí)測(cè)值C,55.40,H,7.15。
步驟b；2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-對(duì)-甲氧基芐基-甲硅烷基)甲氧基]苯酚(MDL108,816)的制備在乙腈(250毫升)中回流加熱二甲基-對(duì)-甲氧基芐基-氯甲基硅烷(28克，0.13摩爾)，碘化鈉(0.5克，催化量)和2,6-二-叔-丁基芐基氫醌(23克，0.1摩爾)及碳酸銫(32克，0.1摩爾)的混合物6天。冷卻后注入水和乙酸乙酯(各取400毫升)的混合物。接著分離有機(jī)層，將其干燥，蒸發(fā)并以110攝氏度的溫度(0.1mm)在Kugelrohr裝置上加熱殘留物3小時(shí)，以140-160攝氏度的溫度再加熱2小時(shí)。經(jīng)放置固化該殘留物得到蠟狀固體產(chǎn)物(20.9克，39％)。熔點(diǎn)58-60攝氏度。
C25H38O3Si分析計(jì)算值C,72.41,H,8.87。
實(shí)測(cè)值C,70.29,H,8.96。
下列化合物可通過(guò)上述實(shí)施例1-14中所描述的相似方法制備2,6-二-叔-丁基-4-[(三乙基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(二乙基苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(三丙基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(二丙基苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(三異丙基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(二異丙基苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(三丁基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(二丁基苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(三異丁基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(二異丁基苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(三-叔-丁基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(二-叔-丁基苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-甲基-4-[(三甲基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-甲基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-甲基-4-[(二丁基苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-甲基-4-[(三-叔-丁基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-甲基-4-[(二-叔-丁基苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚
2,6-二-乙基-4-[(三甲基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-乙基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-乙基-4-[(三-叔-丁基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-乙基-4-[(二-叔-丁基苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-丙基-4-[(三甲基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-丙基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-異丙基-4-[(三甲基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-異丙基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-丁基-4-[(三甲基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-丁基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二甲基-4-[(三甲基甲硅烷基)甲氧基]苯酚2,6-二甲基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚2,6-二丁基-4-[(三乙基甲硅烷基)甲氧基]苯酚2,6-二丁基-4-[(二乙基苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(三甲基甲硅烷基)甲氧基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
制備式1化合物(其中Z是亞甲基)的一般合成方案在方案B中列出，其中的所有取代基，除非另外指出均是以前定義的。
方案B
1b一般來(lái)說(shuō)，結(jié)構(gòu)1b的酚可以根據(jù)方案B的兩步過(guò)程來(lái)制備。在步驟a中，適宜的結(jié)構(gòu)3的鹵代亞烷基硅烷與金屬鎂在合適的非質(zhì)子傳遞溶劑(如乙醚)中進(jìn)行反應(yīng)，從而形成鹵化鎂。鹵化鎂(格利雅試劑)接著與適當(dāng)?shù)慕Y(jié)構(gòu)4的3,5-二烷基-4-羥基-苯甲醛(或合適的帶保護(hù)基的衍生物)進(jìn)行反應(yīng)而得到結(jié)構(gòu)5的醇。在步驟b中，通過(guò)一系列在本領(lǐng)域中眾所周知且廣泛采用的還原技術(shù)和方法還原結(jié)構(gòu)5的醇而得到所需的結(jié)構(gòu)1b的酚。例如，結(jié)構(gòu)5的醇可采用Birch還原在液態(tài)氨中使之與鈉反應(yīng)而被還原。
在方案B中所概述的一般合成過(guò)程采用的起始物質(zhì)極易獲得或可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)和過(guò)程容易地制備。為了防止不需要的副反應(yīng)發(fā)生，在方案B中的結(jié)構(gòu)4的3,5-二烷基-4-羥基-苯甲醛的1-酚功能基可以按照前面在方案A中所述的，采用標(biāo)準(zhǔn)的酚保護(hù)劑在格利雅反應(yīng)進(jìn)行前加以保護(hù)。
下面的實(shí)施例代表在方案B中所述的典型的合成。這些例子被理解為僅用作說(shuō)明，而不旨在以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例162,6-二甲基-4-[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]苯酚
步驟a在惰性氣體中混合鎂削(240毫克，10毫摩爾)和無(wú)水乙醚。加入氯甲基三甲基硅烷(1.9克，10毫摩爾)的無(wú)水乙醚溶液。攪拌直到金屬鎂溶解。再加入3,5-二甲基-4-羥基苯甲醛(1.5克，10毫摩爾)的無(wú)水乙醚溶液。攪拌直到反應(yīng)完全。將反應(yīng)混合物冷卻到0攝氏度后加入飽和氯化銨溶液。分離醚層，用水洗滌并干燥(MgSO4)。蒸發(fā)后得到4-羥基-3,5-二甲基-α-[(三甲基甲硅烷基)-甲基]苯甲醇，然后，用硅膠層析純化。
步驟b混合鈉金屬(520毫克，22.6毫摩爾)和液態(tài)氨(13毫升)。以滴加的方式，向此溶液中加入4-羥基-3,5-二甲基-α-[(三甲基甲硅烷基)-甲基]苯基甲醇(2.22克，10毫摩爾)的乙醇(0.5克)和乙醚(5毫升)溶液。當(dāng)溶液的藍(lán)色消失之后，小心地加入水(13毫升)，再用乙醚抽提，干燥(MgSO4)，并蒸發(fā)溶劑。通過(guò)硅膠色譜純化殘留物而得到標(biāo)題化合物。
此外，式1化合物(其中Z是亞甲基)可根據(jù)在方案C中列出的方法制備，其中的所有取代基，除非另外指出均是以前定義的。
方案C
一般來(lái)說(shuō)，制備結(jié)構(gòu)1b的酚可以通過(guò)在合適的非質(zhì)子傳遞溶劑如乙醚中用結(jié)構(gòu)3的適當(dāng)?shù)募坠柰橄扰c金屬鎂反應(yīng)，形成鹵化鎂。該鹵化鎂(格利雅試劑)接著與結(jié)構(gòu)6的適當(dāng)?shù)?,5-二烷基-4-羥基-芐基鹵化物(或合適的帶保護(hù)基的衍生物)進(jìn)行反應(yīng)而得到所需的結(jié)構(gòu)1b的酚。
在方案C中所概述的一般合成過(guò)程采用的起始物質(zhì)極易獲得或可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)和過(guò)程容易地制備。例如，3,5-二甲基-4-乙酰氧基-芐基溴的制備在四面體33,3097-103(1977)中已被描述。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)水解過(guò)程可將3,5-二甲基-4-乙酰氧基-芐基溴轉(zhuǎn)變成相應(yīng)的酚起始物。
為了防止不需要的副反應(yīng)發(fā)生，在方案C中的結(jié)構(gòu)6的3,5-二烷基-4-羥基-芐基鹵化物的1-酚功能基可以按照前面在方案A中所述的，采用標(biāo)準(zhǔn)的酚保護(hù)劑在格利雅反應(yīng)進(jìn)行前加以保護(hù)。
下面的實(shí)施例代表在方案C中所述的典型的合成。這些例子被理解為僅用作說(shuō)明，而不旨在以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例172,6-二乙基-4-[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]苯酚
在惰性氣體中混合鎂削(240毫克，10毫摩爾)和無(wú)水乙醚。加入氯甲基三甲基硅烷(1.9克，10毫摩爾)的無(wú)水乙醚溶液。攪拌直到金屬鎂溶解。再加入4-溴代甲基-2,6-二乙基苯酚(2.43克，10毫摩爾)的無(wú)水乙醚溶液，并回流混合物直到反應(yīng)完全。倒入冰/鹽酸的混合物并分離層。洗滌醚層，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物(其通過(guò)硅膠色譜純化)。
下列化合物可通過(guò)在上述的實(shí)施例16中所描述的相似過(guò)程制備2,6-二丙基-4-[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]苯酚2,6-二丙基-4-[2-(二甲苯基甲硅烷基)乙基]苯酚2,6-二異丙基-4-[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]苯酚2,6-二異丙基-4-[2-(二甲苯基甲硅烷基)乙基]苯酚2,6-二異丁基-4-[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]苯酚
2,6-二異丁基-4-[2-(二甲苯基甲硅烷基)乙基]苯酚2,6-二丁基-4-[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]苯酚2,6-二丁基-4-[2-(二甲苯基甲硅烷基)乙基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[2-(二甲苯基甲硅烷基)乙基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[2-(三-叔-丁基甲硅烷基)乙基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[2-(二-叔-丁基苯基甲硅烷基)乙基]苯酚2,6-二甲基-4-[2-(三甲基甲硅烷基)乙基]苯酚2,6-二甲基-4-[2-(二甲苯基甲硅烷基)乙基]苯酚。
可以理解式(1)的化合物可以以各種立體異構(gòu)形式存在。所有與上述結(jié)構(gòu)式一致的立體異構(gòu)形式(根據(jù)表示立體異構(gòu)結(jié)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)約定解釋)都被認(rèn)為包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
式(1)的化合物(例如2,6-二-烷基-4-甲硅烷基酚類(lèi))在本領(lǐng)域中眾所周知。具體地說(shuō)，式(1)的化合物在美國(guó)專(zhuān)利5,155,250中已被描述。優(yōu)選的式(1)的化合物是，那些其R1和R2為C4烷基，R3和R4為C1烷基，A為C1亞烷基，而R5是-(CH2)n-(Ar)基團(tuán)，其中n代表0而Ar代表未被取代基取代的苯基，或被下列組內(nèi)基團(tuán)中的一到三個(gè)基團(tuán)取代的苯基羥基、甲氧基、乙氧基、氯、氟或C1-C6烷基。更優(yōu)選的是化合物2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲苯基-甲硅烷基)甲基]-硫代-苯酚。
如在本文所使用的，術(shù)語(yǔ)＂患者＂指的是患有特別的VCAM-1介導(dǎo)的炎癥性疾病的溫血?jiǎng)游锘虿溉閯?dòng)物?？梢岳斫鉃殡嗍螅?，貓，大鼠，小鼠，倉(cāng)鼠，兔以及靈長(zhǎng)類(lèi)(包括人)都是該術(shù)語(yǔ)范圍之內(nèi)的患者的例子。
術(shù)語(yǔ)“慢性炎癥性疾病”指的是缺乏可鑒定的刺激物或微生物病原體的以持久的發(fā)炎為特征的疾病或狀況。用式(1)化合物治療的炎癥性疾病將特別有用于下列疾病，包括氣喘病，慢性炎癥，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，自身免疫性糖尿病，移植排斥和腫瘤血管發(fā)生。在治療需要這種治療的病人的炎癥性疾病時(shí)特別優(yōu)選的式(1)化合物包括2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚
2,6-二-叔-丁基-4-[(三甲基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(4-氯代苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基]苯酚；2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-4-氟代苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-4-甲氧基苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚；2,6-二甲基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚2-叔-丁基-6-甲基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-2-甲氧基苯基甲硅烷基)-甲氧基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-2,5-二甲氧基苯基甲硅烷基)-甲氧基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-2,3-二甲氧基苯基甲硅烷基)-甲氧基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-4-叔-丁基苯基甲硅烷基)-甲氧基]苯酚2,6-二-叔-丁基-4-[(芐基二甲基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
式(1)的化合物的＂治療有效量＂是指對(duì)患者以單劑或多劑施用后，能夠緩解與炎癥疾病有關(guān)的癥狀的量。式(1)的化合物的＂有效血管細(xì)胞粘著分子-1抑制量＂指的是對(duì)患者以單劑或多劑施用后，能夠緩解與由血管細(xì)胞粘著分子-1介導(dǎo)的疾病有關(guān)的癥狀的量。如在本文所使用的，炎癥疾病或由血管細(xì)胞粘著分子-1介導(dǎo)的疾病的＂癥狀的緩解＂指的是癥狀表現(xiàn)比預(yù)期在不治療時(shí)減弱而并不是必須表現(xiàn)出疾病的治愈或癥狀的完全消失。癥狀的緩解還包括預(yù)防。
在確定治療的有效量或劑量時(shí)，一些因素是需要診斷醫(yī)生予以考慮的，包括但不限于哺乳動(dòng)物的物種；其大小，年齡以及一般的健康狀況；所涉及的具體的疾??；疾病范圍或嚴(yán)重程度；個(gè)體患者的反應(yīng)；特殊化合物的施用；施用的方式；所施用的制劑的生物可利用度特征；選擇的治療方案；伴隨的藥療法的運(yùn)用；同時(shí)還有其他相關(guān)的情況。
式(1)的化合物的治療有效量一般按每天每千克體重施用一毫克(毫克/千克/天)到每天每千克體重施用五毫克(毫克/千克/天)之間變化。優(yōu)選的劑量是每天從約1毫克/千克到500毫克/千克之間。同樣地，式(1)的化合物的有效血管細(xì)胞粘著分子-1的抑制量一般地按每天每千克體重施用一毫克(毫克/千克/天)到每天每千克體重施用五毫克(毫克/千克/天)之間變化。優(yōu)選的劑量是每天從約1毫克/千克到500毫克/千克之間。
本發(fā)明的化合物是VCAM-1表達(dá)的抑制劑。我們認(rèn)為本發(fā)明的化合物通過(guò)其細(xì)胞因子對(duì)VCAM-1向上調(diào)節(jié)發(fā)揮抑制作用，從而預(yù)防或緩解炎癥性疾病癥狀，這些疾病包括氣喘，慢性炎癥，類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，自身免疫性糖尿病及其類(lèi)似疾病。然而，可以理解本發(fā)明不受任何特殊理論的限制，也不作為已知的機(jī)理而用于解釋其在最終運(yùn)用中的效能。
在對(duì)患者的治療中，式(1)化合物可以以使化合物以有效量得到生物利用的任何形式或方式施用，包括口服和腸胃外的途徑。例如，化合物可以口服，皮下注射，肌內(nèi)注射，靜脈注射，皮內(nèi)注射，鼻內(nèi)，直腸及類(lèi)似方式給藥?？诜绞揭话闶莾?yōu)選的。制藥領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員根據(jù)所需治療的疾病狀態(tài)，疾病所處的階段和其他相關(guān)的情況易于選擇恰當(dāng)?shù)氖┯梅绞交蛐问?。Remington藥物科學(xué)，第18版，Mack出版公司(1990)。
施用式(1)化合物可以以藥物組合物或藥物的形式進(jìn)行，這些藥物通過(guò)將式(1)化合物與可接受的藥用載體或賦形劑組合制成，其比例和特性由所選施用途徑以及標(biāo)準(zhǔn)的藥物實(shí)踐確定。
以在制藥領(lǐng)域內(nèi)廣為人知的方式制備該藥物組合物或藥物。其載體或賦形劑可以是固體，半-固體或液態(tài)物質(zhì)(其可作為活性成分的載體或介質(zhì))。適合的載體或賦形劑在本領(lǐng)域是眾所周知的。該藥物組合物可以適用于口服或腸胃外使用，并且以片劑，膠囊，栓劑，溶液，懸浮液或其類(lèi)似物的形式給患者服用。
該藥物組合物可以口服，例如，用惰性的稀釋劑或可食用載體口服?？梢詫⑺鼈儼庠诿髂z膠囊中或壓成片劑。為達(dá)到口服治療施用的目的，可以將式(1)的化合物與賦形劑結(jié)合，并以片劑，錠劑，膠囊，酏劑，懸浮液，糖漿，糖片，咀嚼固體膠及其類(lèi)似物的形式運(yùn)用。這些制劑應(yīng)至少包括4％的式(1)的化合物(活性成分)，但其可根據(jù)特定形式變化及可方便地?fù)?jù)每單位體重在4％和大約70％之間變化。在組合物中存在的活性組分的量是這樣的，即可以獲得適合其施用的單位劑量形式。
該片劑，藥丸，膠囊，錠劑及其類(lèi)似物也可以含有下列佐劑中一種或多種粘合劑，如微晶纖維素，黃蓍樹(shù)膠或者明膠；賦形劑，如淀粉或者乳糖；崩解劑諸如藻酸，Primogel，玉米淀粉及類(lèi)似物；潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂或者Sterotex；滑移劑，如膠體二氧化硅；甜味劑，如可以加入蔗糖或者糖精，或者調(diào)味劑，如薄荷，水楊酸甲酯或者橙色調(diào)味劑。如劑量單位形式是膠囊，除上述類(lèi)型的物質(zhì)之外，其可以含有液體載體如聚乙二醇或者脂油。其它劑量單位形式可以含有其它各種物質(zhì)(其可修飾單位劑量的物理形式)，例如作為包衣劑。這樣，片劑或藥丸可涂上一層糖，紫膠，或者其它腸包劑。糖漿可以含有(除活性組分之外)蔗糖作為甜味劑及一定的防腐劑，染料和著色劑及食用香料。用于制備這些各種組合物的物質(zhì)應(yīng)該在所使用的量上達(dá)到藥用純度和非毒性。
為達(dá)到腸胃外施用的目的，式(1)的化合物可以摻入溶液或者懸浮液中。這些制劑應(yīng)該含有至少0.1％的本發(fā)明化合物，但其摻入量可在0.1％至50％之間變動(dòng)。在該組合物中存在的活性組分的量應(yīng)該是適當(dāng)?shù)摹?br> 溶液或懸浮液也應(yīng)包括下列佐劑中的一種或多種(取決于式(1)化合物的溶解性及其它的性質(zhì))無(wú)菌稀釋液如注射用水，鹽水溶液，固定油，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑如芐醇或羥苯甲酸甲酯；抗氧化劑如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑如乙二胺四乙酸；緩沖劑如醋酸鹽，檸檬酸鹽或磷酸鹽以及用于毒性調(diào)節(jié)的試劑諸如氯化鈉或葡萄糖。該腸胃外制劑可以包封在安瓿，一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多劑量藥瓶中。
實(shí)施例18VCAM-1和ICAM-1的細(xì)胞表面酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定在每孔含100μL培養(yǎng)基的96孔平板上以每平方厘米20,000細(xì)胞的密度平板培養(yǎng)增殖人類(lèi)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)或人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HASMC)(Clonetics,圣地亞哥，CA)。該培養(yǎng)物在生長(zhǎng)培養(yǎng)基(EGM或SMGM2,Clonetics，圣地亞哥，CA)上保持兩天，然后加入細(xì)胞因子或藥物。細(xì)胞因子加或減化合物在粘著分子水平的分析前20至24小時(shí)加入。以每毫升500-1000個(gè)單位的濃度向培養(yǎng)物中加入腫瘤壞死因子(Genzyme，劍橋，MA)。以每毫升100-200pg的濃度向培養(yǎng)物中加入白細(xì)胞介素-4(GIBCO-BRL,Gaithersburg,MD)。[添加物質(zhì)是通過(guò)轉(zhuǎn)移100μL在單獨(dú)的96孔的平板上連續(xù)稀釋的細(xì)胞因子加化合物到含有細(xì)胞的平板上進(jìn)行的。加入效應(yīng)子前不更換培養(yǎng)物的培養(yǎng)基]。移去培養(yǎng)基，同時(shí)用Hanks緩沖鹽水溶液(HBSS)在室溫下洗滌單分子層兩次。加入該初級(jí)抗體(來(lái)自Upstate生物技術(shù)公司，LakePlacid,NY的抗人VCAM-1或來(lái)自lmmunotech公司，Westbrook,ME的抗人ICAM-1)到每個(gè)孔中(1μg/ml的HBSS加5％的新生小牛血清，GIBCO-BRL,Gaithersburg,MD)并在37攝氏度溫育一小時(shí)。用HBSS洗滌孔兩次，接著在每個(gè)孔中加入100μL結(jié)合了辣根過(guò)氧化物酶(BioRad,Hercules,CA)的1/1000山羊抗鼠IgG于HBSS及5％新生小牛血清中的稀釋液并在37攝氏度溫育一小時(shí)。用HBSS洗滌孔三次，接著加入100μL TMB底物(BioRad,Hercules,CA)到每個(gè)孔中。加入50μL的1N硫酸顯示藍(lán)色后結(jié)束反應(yīng)。吸光度在450nm處以平板讀數(shù)器測(cè)量。IC50值由連續(xù)稀釋化合物(溶解在二甲亞砜中)所獲得的吸收值曲線來(lái)確定。
該IC50值被定義為藥物濃度，這種濃度50％地抑制細(xì)胞因子誘導(dǎo)的粘著分子的表達(dá)。從培養(yǎng)物中粘著分子表達(dá)的基礎(chǔ)水平扣除在細(xì)胞因子誘導(dǎo)的培養(yǎng)物中的粘著分子表達(dá)的最大值以確定誘導(dǎo)的水平。典型地誘導(dǎo)VCAM-1約5-7倍。典型地誘導(dǎo)ICAM-1約5-10倍。在一式四份檢驗(yàn)孔中檢測(cè)每種藥物的濃度?；衔镌?0μM時(shí)的單點(diǎn)檢測(cè)值按照確定IC50的方法測(cè)定，不同的是數(shù)據(jù)表示未經(jīng)對(duì)基礎(chǔ)表達(dá)進(jìn)行校正的抑制水平。(基礎(chǔ)粘著分子表達(dá)占整個(gè)誘導(dǎo)表達(dá)的10-20％)。
表1總結(jié)了本發(fā)明的各種化合物的抑制VCAM-1的能力[通過(guò)運(yùn)用人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HASMC)]。在這些實(shí)驗(yàn)中，測(cè)定細(xì)胞表面VCAM-1水平之前，先將細(xì)胞與白細(xì)胞介素-4和所列出的化合物共培育大約20小時(shí)。每欄代表一個(gè)單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)。
表1
表2總結(jié)了本發(fā)明的各種化合物的選擇性抑制VCAM-1或同時(shí)抑制VCAM-1和ICAM-1的能力[通過(guò)運(yùn)用增殖人類(lèi)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)]。在這些實(shí)驗(yàn)中，測(cè)定細(xì)胞表面粘著分子表達(dá)之前，先將細(xì)胞與腫瘤壞死因子-α和所說(shuō)明的化合物共同溫育大約20-24個(gè)小時(shí)。
表2
*指三次測(cè)定的平均值＠指二次測(cè)定的平均值表3描述了所選化合物的活性，檢測(cè)了其八份連續(xù)稀釋液在血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞中細(xì)胞因子誘導(dǎo)的VCAM-1表達(dá)?；A(chǔ)的VCAM-1表達(dá)的扣除也用于IC50值的計(jì)算。以相同方式檢測(cè)每種化合物對(duì)ICAM-1的抑制作用。在血管平滑肌細(xì)胞中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何抑制作用(多達(dá)100μM)。在血管內(nèi)皮細(xì)胞中，只有MDL 103,902在50和100μM表現(xiàn)了明顯的對(duì)ICAM-1表達(dá)的抑制作用，其可通過(guò)顯微鏡觀察粘著在組織培養(yǎng)物表面的細(xì)胞數(shù)量的減少來(lái)說(shuō)明。
表3
實(shí)施例19兔主動(dòng)脈中MDL29,353對(duì)VCAM-1向上調(diào)節(jié)的體內(nèi)抑制在用脂多糖(LPS，每只動(dòng)物經(jīng)耳靜脈注射40μg)進(jìn)行攻擊前，先用加入或扣除0.4％的MDL29,353的食譜喂養(yǎng)新西蘭白兔三周。在LPS注射后4小時(shí)從每只動(dòng)物中移出主動(dòng)脈并簡(jiǎn)單地在磷酸鹽緩沖鹽水中沖洗之。對(duì)VCAM-1施行免疫組織化學(xué)，通過(guò)將其組織與RB1/9抗體(鼠抗兔VCAM-1)在4攝氏度共溫育過(guò)夜。用生物素化的山羊抗鼠次級(jí)抗體(60分鐘，RT)檢測(cè)結(jié)合的RB1/9。通過(guò)加入鏈霉抗生物素蛋白-堿性磷酸酶綴合物(30分鐘，RT)完成VCAM-1的染色，接著與BT紅(生物技術(shù)，10,RT)溫育。用圖象分析系統(tǒng)獲取染色組織的圖象，由此測(cè)定顯示與抗VCAM的抗體發(fā)生免疫反應(yīng)的主動(dòng)脈內(nèi)皮的百分比。
這些化合物的體內(nèi)活性也可以在預(yù)計(jì)與提高VCAM-1水平有關(guān)的其他炎癥模型中確定。呼吸疾病的一個(gè)此類(lèi)模型(如氣喘)是卵清蛋白-敏化模型。Kung,T.T.等，Int.Arch.Allergy Immunol.105,83-90(1994)。肺部發(fā)炎的這一模型是IgE介導(dǎo)的并伴隨有嗜曙紅細(xì)胞增多(氣喘病人也有此癥狀)?？梢栽u(píng)估由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物獲得的支氣管肺泡灌洗(BAL)流的一些參數(shù)，包括可溶性粘著分子表達(dá)和白細(xì)胞的積累。確定粘著分子表達(dá)可以在動(dòng)物組織之內(nèi)(尤其是肺臟)通過(guò)免疫組織化學(xué)法進(jìn)行。所需化合物(如MDL29,353)的作用應(yīng)該是抑制VCAM-1表達(dá)的向上調(diào)節(jié)，并阻止嗜酸性粒細(xì)胞在BAL流中的積累。可在患有類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的大鼠模型中檢測(cè)該抑制劑，在以前已顯示了其對(duì)抗ICAM-1的單克隆抗體可作出反應(yīng)。Iigo,Y.等，免疫學(xué)雜志147,4167-4171(1991)。在這一模型中，粘著分子表達(dá)將在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的四肢(關(guān)節(jié))中確定。對(duì)于自身免疫性糖尿病，人們?cè)贜OD小鼠模型中能檢驗(yàn)化合物的延遲發(fā)病或防止疾病的過(guò)繼轉(zhuǎn)移的能力。Heinke,E.W.等，糖尿病42,1721-1730(1993)；Baron,J.L.等，J.Clin.Invest.93,1700-1708(1994)。此外，人們可以監(jiān)測(cè)VCAM-1在組織(例如胰臟)中的表達(dá)水平以及監(jiān)測(cè)糖尿病在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中的發(fā)展變化。通過(guò)監(jiān)控心同種異基因移殖物存活(移植到C3H/He接收者中的Balb/c心臟)評(píng)估移植排斥的治療潛力。Isobe,M.等，免疫學(xué)雜志153,5810-5818(1994)。抗VCAM-1和抗VLA-4單克隆抗體的體內(nèi)施用可誘導(dǎo)對(duì)心同種異基因移殖物和可溶性抗原的免疫抑制?；衔飳?duì)腫瘤轉(zhuǎn)移和血管發(fā)生的效應(yīng)可以在一些模型中得到評(píng)價(jià)。這些模型包括B16(鼠)和M24met(人)黑素瘤的實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)移模型。Fidler,I.J.,癌癥研究35,218-224(1975)；Meuller,B.M.等，癌癥研究51,2193-2198?？梢酝ㄟ^(guò)它們對(duì)發(fā)生肺臟轉(zhuǎn)移的數(shù)量的效應(yīng)以及如對(duì)小鼠呼吸模型所描述的它們對(duì)肺內(nèi)VCAM-1表達(dá)的效應(yīng)評(píng)估該化合物的活性。用于評(píng)價(jià)抗生血管化合物的模型可以用來(lái)檢驗(yàn)這些化合物，其與監(jiān)測(cè)對(duì)基底膜蛋白質(zhì)(在小鼠中皮下注射的)混合的生血管因子混合物的血管反應(yīng)有關(guān)。Passaniti,A.等，實(shí)驗(yàn)研究67,519-528(1992)。血管發(fā)生可用補(bǔ)充到matrigel中的血管數(shù)量和以膠質(zhì)的血紅蛋白含量來(lái)評(píng)價(jià)。白細(xì)胞的粘著分子表達(dá)和積累如同在所有上述例子中那樣用免疫組織化學(xué)方法確定。
結(jié)果所要求的化合物抑制在血管細(xì)胞中的VCAM-1基因體內(nèi)表達(dá)的細(xì)胞因子-誘導(dǎo)的向上調(diào)節(jié)。與另一種細(xì)胞因子-誘導(dǎo)的粘著分子(ICAM-1)相比較，VCAM-1表達(dá)的選擇性抑制已在所要求的化合物的某些成員中顯示出(表3)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)足夠積累時(shí)，MDL29,353可抑制LPS誘導(dǎo)的VCAM-1在兔主動(dòng)脈內(nèi)皮中的表達(dá)水平(圖1)。該實(shí)驗(yàn)也顯示此類(lèi)化合物有口服活性。
權(quán)利要求
1．一種在患者中抑制血管細(xì)胞粘著分子-1的細(xì)胞因子-誘導(dǎo)表達(dá)的方法，所說(shuō)的患者需要這種抑制作用，該方法包括對(duì)所說(shuō)的患者施用有效的血管細(xì)胞粘著分子-1抑制量的下式的化合物
其中R1,R2,R3和R4基團(tuán)各自分別是C1-C6烷基；Z為硫，氧或亞甲基；A為C1-C4亞烷基；R5為C1-C6烷基或-(CH2)n-(Ar)基團(tuán)，其中n代表整數(shù)0,1,2或3；而Ar代表未被取代基取代的苯基或萘基，或被下列組內(nèi)基團(tuán)中的一到三個(gè)基團(tuán)取代的苯基或萘基羥基、甲氧基、乙氧基、氯、氟或C1-C6烷基。
2．按照權(quán)利要求1的方法，其中R1和R2是叔丁基。
3．按照權(quán)利要求2的方法，其中R3和R4是甲基。
4．按照權(quán)利要求3的方法，其中A是亞甲基。
5．按照權(quán)利要求4的方法，其中Z是硫代基團(tuán)。
6．按照權(quán)利要求4的方法，其中Z是氧。
7．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚。
8．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(三甲基甲硅烷基)甲硫基]苯酚。
9．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(4-氯苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
10．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-4-氟苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
11．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)-甲氧基]苯酚。
12．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-4-甲氧基苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
13．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二甲基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)-甲氧基]苯酚。
14．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的化合物是2-叔-丁基-6-甲基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚。
15．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-2-甲氧基苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
16．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-2,5-二甲氧基苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
17．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-2,3-二甲氧基苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
18．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-4-叔-丁基苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
19．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(芐基二甲基甲硅烷基)-甲氧基]苯酚。
20．按照權(quán)利要求1的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-對(duì)-甲氧基芐基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
21．一種治療患有慢性炎癥性疾病的患者的方法，該方法包括對(duì)所說(shuō)的患者施用治療有效量的下式的化合物
其中R1,R2,R3和R4基團(tuán)各自分別是C1-C6烷基；Z為硫，氧或亞甲基；A為C1-C4亞烷基；R5為C1-C6烷基或-(CH2)n-(Ar)基團(tuán)，其中n代表整數(shù)0,1,2或3；而Ar代表未被取代基取代的苯基或萘基，或被下列組內(nèi)基團(tuán)中的一到三個(gè)基團(tuán)取代的苯基或萘基羥基、甲氧基、乙氧基、氯、氟或C1-C6烷基。
22．按照權(quán)利要求21的方法，其中R1和R2是叔丁基。
23．按照權(quán)利要求22的方法，其中R3和R4是甲基。
24．按照權(quán)利要求23的方法，其中A是亞甲基。
25．按照權(quán)利要求24的方法，其中Z是硫代基團(tuán)。
26．按照權(quán)利要求24的方法，其中Z是氧。
27．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚。
28．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(三甲基甲硅烷基)甲硫基]苯酚。
29．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(4-氯苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
30．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-4-氟苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
31．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)-甲氧基]苯酚。
32．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-4-甲氧基苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
33．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二甲基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)-甲氧基]苯酚。
34．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的化合物是2-叔-丁基-6-甲基-4-[(二甲苯基甲硅烷基)甲硫基]苯酚。
35．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-2-甲氧基苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
36．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-2,5-二甲氧基苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
37．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-2,3-二甲氧基苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
38．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-4-叔-丁基苯基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
39．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(芐基二甲基甲硅烷基)-甲氧基]苯酚。
40．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的化合物是2,6-二-叔-丁基-4-[(二甲基-對(duì)-甲氧基芐基甲硅烷基)甲氧基]苯酚。
41．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的炎癥性疾病是氣喘。
42．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的炎癥性疾病是慢性炎癥。
43．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的炎癥性疾病是類(lèi)風(fēng)溫性關(guān)節(jié)炎。
44．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的炎癥性疾病是自身免疫性糖尿病。
45．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的炎癥性疾病是移植排斥。
46．按照權(quán)利要求21的方法，其中所說(shuō)的炎癥性疾病是腫瘤血管生成。
全文摘要
本文公開(kāi)了抑制VCAM－1和治療需要這種治療的病人的慢性炎癥有用的方法,該方法包括給病人施用有效量的式(1)的化合物,在式1中,R
文檔編號(hào)A61P35/00GK1216921SQ97194268
公開(kāi)日1999年5月19日 申請(qǐng)日期1997年3月12日 優(yōu)先權(quán)日1996年4月30日
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