專利名稱：殺菌的/增強通透性的蛋白質(zhì)產(chǎn)物用于人腦膜炎球菌血癥的治療用途的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明一般地涉及通過施用殺菌的/增強通透性的(BPI)蛋白質(zhì)產(chǎn)物以治療腦膜炎球菌血癥病的病人的方法和材料。
腦膜炎球菌血癥是由腦膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)(也被稱為腦膜炎球菌)引起的一種傳染性疾病，在患者全身循環(huán)中發(fā)現(xiàn)有此細(xì)菌及其產(chǎn)物。它的臨床病程可表現(xiàn)為相對輕的過程，也可表現(xiàn)為嚴(yán)重的、起病突然的暴發(fā)性傳染和極其迅速的進程，其病程從一開始出現(xiàn)發(fā)熱到死亡的時間可短至12小時。后一種情況，即這一疾病的劇烈形式占感染腦膜炎奈瑟氏球菌病人的約10％。這些病人可有正常精神狀態(tài)，僅有發(fā)熱和瘀斑癥狀，但是可迅速發(fā)展到血液動力衰竭、呼吸道功能喪失及昏迷，并伴有嚴(yán)重的凝血病、血管內(nèi)血栓形成以及器官衰竭。另外，在此疾病的晚期，病人還可能表現(xiàn)為意識喪失和無反應(yīng)。
盡管在抗生素和重癥監(jiān)護設(shè)備上有技術(shù)進步，急性腦膜炎球菌疾病的死亡率在過去幾十年來沒有明顯改變。一項回顧性研究發(fā)現(xiàn)，即使在調(diào)整疾病的嚴(yán)重性之后[Havens等，Pediatr.Infect.Dis.J.8:8-11(1989)]，腦膜炎球菌感染的死亡率在過去30年以來沒有顯著改變。另外一份關(guān)于腦膜炎球菌感染的預(yù)期性研究[Powars等，臨床感染性疾病(Clin.Znfect.Dis.)17:251-261(1993)]觀察了1986-1991年報導(dǎo)的113例經(jīng)細(xì)菌學(xué)證實感染了腦膜炎奈瑟氏球菌的病人，其中15人(13％)死亡。這種13％的死亡率與50年前在智利流行病中所報導(dǎo)的16％的死亡率沒有明顯改變。
“流行病”是指由于一種單一的細(xì)菌克隆在人群中播散而引起發(fā)生率增加的疾病。盡管腦膜炎球菌血癥流行病在發(fā)展中國家很普遍，自1940年以來，在美國沒有發(fā)生全國性流行。但是，九十年代中期，腦膜炎球菌血癥地方性流行病發(fā)生率明顯增高，并伴有地區(qū)內(nèi)流行。這一疾病還呈季節(jié)性，在冬末春初發(fā)病率最高。界于60％-90％的病例發(fā)生于兒童，兩歲以下的兒童中發(fā)病率最高。
腦膜炎奈瑟氏球菌是一種有莢膜包圍的革蘭氏陰性球菌，典型地是成對出現(xiàn)(雙球菌)，其可引起一系列嚴(yán)重的疾病，包括腦膜炎球菌血癥。根據(jù)其莢膜多糖，腦膜炎球菌被分為9個血清群，其中引起大多數(shù)臨床疾病的血清群是A、B、C、Y和W135。這些血清群又可根據(jù)菌體外膜蛋白的表達進一步按抗原性分為諸多血清型。每一血清群中特異性克隆可根據(jù)蛋白電泳類型進一步描述。腦膜炎球菌的外膜還含有一種形式的脂多糖(LPS)，即“脂寡糖”(LOS)，這是革蘭氏陰性菌外膜的一種常見成份。
已知腦膜炎球菌集聚于5-15％的人的鼻咽部；然而，這些集聚菌中只有一小部分引起侵入性疾病。從集聚到侵入性疾病的轉(zhuǎn)變是由多種因素引起的，且還無充分認(rèn)識。同樣在冬末春初高發(fā)的上呼吸道病毒性感染，可能損傷鼻咽部上皮從而使細(xì)菌可以通過改變了的屏障而易位。在2歲以下的兒童中，認(rèn)為直接針對腦膜炎球菌脂多糖莢膜的抗體未充分發(fā)育是這些人群中高發(fā)病率的原因。
由腦膜炎球菌引起的一系列疾病包括腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、心包炎、心內(nèi)膜炎、結(jié)膜炎、眼內(nèi)炎、呼吸道感染、腹部和盆腔感染、尿道炎和慢性菌血綜合征。需要進入兒科重癥監(jiān)護治療病房(PICU)的主要臨床綜合征是腦膜炎和腦膜炎球菌血癥(有或無腦膜炎)。這些臨床表現(xiàn)取決于感染和其炎癥后遺癥所主要位于的體腔。
和腦膜炎球菌血癥相反，腦膜炎是一種細(xì)菌位于腦脊膜腔伴有腦膜刺激癥的疾病。臨床上，腦膜炎球菌腦膜炎和腦膜炎球菌血癥明顯不同，然而，腦膜炎球菌腦膜炎與其它類型腦膜炎不易區(qū)分，只能通過細(xì)菌培養(yǎng)和免疫學(xué)鑒定來區(qū)分。腦膜炎球菌腦膜炎明顯缺乏血液動力學(xué)體征、嚴(yán)重的凝血病和血管內(nèi)血栓形成。如果得到合理的治療，極少死亡并且罕見神經(jīng)后遺癥，包括感覺神經(jīng)聽力喪失。腦膜炎球菌腦膜炎的診斷和治療方法與其它類型的細(xì)菌性腦膜炎相同。
如果病人是在其疾病早期僅有明顯的瘀斑和輕的全身性癥狀時就診，腦膜炎球菌血癥的診斷將與其它許多兒童中表現(xiàn)有發(fā)熱和瘀斑的疾病難以區(qū)分，這些疾病包括例如腸道病毒、輪狀病毒、呼吸道合胞體病毒、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)或肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)感染；鏈球菌咽炎；落磯山斑疹熱，亨諾赫-舍恩萊因(Henoch-Schoen lein)紫癜；或惡性腫瘤。然而，由于腦膜炎球菌疾病的后果在很大程度上取決于快速的診斷和抗生素的應(yīng)用，所以對于可疑的腦膜炎球菌血癥病人必須進行積極的診斷和治療，尤其是在美國流感嗜血桿菌腦膜炎已由于細(xì)菌疫苗的使用而顯著下降之后。
與其它革蘭氏陰性菌感染相似，嚴(yán)重的腦膜炎球菌血癥的發(fā)病機制是由與細(xì)菌相關(guān)的以及細(xì)菌釋放的內(nèi)毒素引起的。細(xì)菌內(nèi)毒素激活炎癥原細(xì)胞因子的級聯(lián)反應(yīng)。嚴(yán)重的腦膜炎球菌血癥中，用LAL測定的循環(huán)中細(xì)菌內(nèi)毒素的水平高達50-100倍于其它革蘭氏陰性菌感染中的水平。全身循環(huán)中的細(xì)菌及其內(nèi)毒素還激活補體的級聯(lián)反應(yīng)，產(chǎn)生可以介導(dǎo)早期的低血壓和毛細(xì)血管滲漏的過敏毒素。
目前研究發(fā)現(xiàn)，腦膜炎球菌血癥病人血漿中內(nèi)毒素[Brandtzaeg等，傳染病雜志(J.Infec.Dis),159:195-204(1989)],TNF[Van Deuren等，傳染病雜志，172:433-439(1995)],IL-6[Van Deuren等，出處同前]和纖維蛋白原的水平以及凝血酶原時間(PTT)[McManus等，Critical Care Med.,21:706-711(1993)]與疾病的嚴(yán)重性和后果相關(guān)，盡管這種相關(guān)關(guān)系并不確切。已經(jīng)表明，綜合血中內(nèi)毒素、TNF、IL-1和IL-6的分級值可得到一個準(zhǔn)確反映病人預(yù)后的評分。[Bone,Critical Care Med.,22:S8-S11(1994)]。
嚴(yán)重的凝血病和血管內(nèi)血栓形成可能迅速發(fā)展并導(dǎo)致腦膜炎球菌血病人肢端和重要器官的缺血性損傷?？赡苄纬珊粑ソ摺⒛I衰竭、腎上腺衰竭及昏迷。瘀斑和紫癜呈廣泛性并發(fā)生融合，這種情況被稱為“暴發(fā)紫癜”。嚴(yán)重的腦膜炎球菌血癥病人中，據(jù)記載凝血抑制因子如抗凝血酶Ⅲ、活化的蛋白C和蛋白S明顯減少。這些減少反映出抗凝血因子與凝血因子原的相對失衡，同時也反映了各級因子的廣泛消耗。這些因子數(shù)量上的不足也反映出血液稀釋和蛋白質(zhì)自毛細(xì)血管滲漏。
入院時經(jīng)?？梢妵?yán)重的心功能障礙，或其可在頭24小時內(nèi)形成。常見的射血分?jǐn)?shù)≤20％。心功能障礙可繼發(fā)于許多因素，包括1)心肌炎，其在大量活檢標(biāo)本中表現(xiàn)為不同程度；2)心肌抑制物質(zhì)；3)血管內(nèi)血栓形成和隨后的心肌缺血；4)心肌間質(zhì)水腫，導(dǎo)致心室非順應(yīng)性異常；5)缺氧性心肌損傷；和6)代謝異常。
低血壓和循環(huán)功能不全是多因素性的，主要是由于血管內(nèi)血量耗竭、毛細(xì)血管滲漏、嚴(yán)重的血管擴張(繼發(fā)于過敏毒素、一氧化氮、組織胺及其它介質(zhì))以及心肌性能減退。且明顯表現(xiàn)出繼發(fā)于低血壓、血管內(nèi)血栓形成和直接炎癥損傷的器官衰竭。
暴發(fā)性疾病可伴有腎上腺出血、腎上腺皮質(zhì)壞死和迅速死亡(即出血性腎上腺綜合征)。但即使有廣泛的腎上腺出血，也并不一定代表腎上腺功能不足，因為據(jù)記載這種病人中全身皮質(zhì)醇水平可正常甚至升高。一小部分疾病快速進展的病人中，腎上腺出血伴有血清皮質(zhì)醇水平正常或亞正常(一種預(yù)期發(fā)生水平升高的情況)。還常見其它代謝紊亂如代謝性酸中毒、低血糖癥、低鈣血癥及低鎂血癥等。
病情嚴(yán)重的這類病人死亡率很高。如果他們能夠存活，往往會經(jīng)歷嚴(yán)重的病態(tài)階段，包括常常需要清創(chuàng)術(shù)和/或截肢術(shù)以及隨后的皮膚移植的廣泛的組織和骨的破壞。在一項研究中[Powers等，出處同前]，帶有嚴(yán)重的腦膜炎球菌血癥標(biāo)志-暴發(fā)紫癜的28例病人中，有14例(50％)死亡。在14例出現(xiàn)暴發(fā)紫癜而存活的病人中有10例出現(xiàn)導(dǎo)致變形自脫離的軟組織壞疽。另一項報導(dǎo)中[Genoff等，PlasticReconstructive Surg.,89:878-881(1992)]，6例有暴發(fā)紫癜的腦膜炎球菌血癥病人中，4人需要較大的截肢術(shù)(腕或上至上肢，或者踝或甚至下肢)。Genoff等注意到即使在有生命危險的疾病急性期過后，并發(fā)癥仍持續(xù)并需較高位的截肢術(shù)以及多次植皮手術(shù)。Sheridan等，Burns,22:53-56(1996)，證實有暴發(fā)性紫癜的腦膜炎球菌血癥病人的報告死亡率為50％，幸存者需較大的截肢術(shù)的比例很高。這些幸存病人往往遺留波及皮膚、皮下組織及下面的肌肉、骨骼的廣泛的部位深的創(chuàng)傷；半數(shù)存活的病人需較大的截肢術(shù)。
腦膜炎球菌血癥的病人也可能發(fā)展形成神經(jīng)后遺癥，包括腦電圖(EEG)異常，電子計算機X線體層掃描(CT)異常，聽力損害和神經(jīng)心理測試缺陷。一項研究中跟蹤隨訪了99名有急性經(jīng)細(xì)菌學(xué)確認(rèn)為腦膜炎球菌疾病的兒童和成人，在他們病后1年檢查了神經(jīng)后遺癥。[Naess等，Acta Neurol.Scand.,89:139-142(1994)]。在伴隨低血壓和/或瘀斑而沒有腦膜炎體征的12名患腦膜炎球菌血癥病人中，有5名患神經(jīng)后遺癥。在有低血壓和/或瘀斑并有腦膜炎體征的13名病人中，有7例患神經(jīng)后遺癥。
臨床后果可根據(jù)來源于已經(jīng)確認(rèn)為腦膜炎球菌血癥的大量病人的風(fēng)險因子評分來合理預(yù)測。1966年，Stiehm和Damrosh，兒科學(xué)雜志(J.Pediatrics)，68:457-467(1966)綜述了63例腦膜炎球菌感染的疾病并確定了與不良預(yù)后相關(guān)的臨床特征。不良預(yù)后因素包括入院前12小時內(nèi)出現(xiàn)瘀斑，無腦膜炎(腦脊液(CSF)白細(xì)胞WBC＜20)，休克(收縮期血壓＜70)，正?；虻桶准?xì)胞計數(shù)(WBC＜10,000)，正?；虻图t細(xì)胞沉降率(＜10mm/hr)。出現(xiàn)上述標(biāo)準(zhǔn)中的3個或3個以上，則病人預(yù)后不良。1971年，Niklasson等，Scand.J.Infect.Dis.,3:17-25(1971)，證實了這些風(fēng)險因子并增加體溫＞40℃和血小板減少癥也作為不良預(yù)后的體征之一。1993年，Stiehm和Damrosh標(biāo)準(zhǔn)和Niklasson標(biāo)準(zhǔn)的特異性預(yù)測能力受到了來自McManus的一系列挑戰(zhàn)[McManus等，出處同前]。在此系列論述中，死亡率明顯低于早期標(biāo)準(zhǔn)所預(yù)期的值而更可能與有無凝血癥相關(guān)。
最廣泛采用的腦膜炎球菌膿毒癥的評分系統(tǒng)是1987年由Sinclair等，(Lancet)2:38(1987)發(fā)表的，這就是現(xiàn)在所知的格拉斯哥腦膜炎球菌敗血癥預(yù)后評分(Glasgow評分)。它的實用性來源于其依賴床邊臨床指征，這些指征可便利于在野外或運輸過程中分類運送傷員。Glasgow評分是根據(jù)如下7個參數(shù)的不同等級標(biāo)準(zhǔn)而打分1)BP:4歲以下收縮壓＜75mmHg或4歲以上收縮壓＜85mmHg(3分)；2)皮膚/直腸溫度差＞3℃(3分)；3)改良的昏迷等級＜8，或1小時內(nèi)惡化3個或3個以上等級(3分)；4)在評分前1小時內(nèi)惡化(2分)；5)無假性腦膜炎(2分)；6)廣泛的紫癜或瘀斑；(1分)；7)堿(base)缺失(毛細(xì)血管或動脈)＞8(1分)。因此，Glasgow評分的最大值是15分。
由于腦膜炎球菌血癥往往以快速的暴發(fā)性惡化為特征，因此，必須警惕地觀察病情。大多數(shù)病人應(yīng)直接收治入重癥監(jiān)護病房，在此可進行侵入性監(jiān)測以及提供支持性治療。特異性的監(jiān)測和實驗室評估包括從CSF、血液培養(yǎng)、皮膚損傷和咽拭子標(biāo)本采集樣本。然而，只有在病人病情足夠穩(wěn)定能承受手術(shù)操作的情況下才能收集CSF。血液培養(yǎng)檢查應(yīng)做但只有50％的未治療病人會出現(xiàn)陽性。革蘭氏染色及抽吸(或活檢)出血性皮膚壞死組織的培養(yǎng)可查出高達70％的病例細(xì)菌呈陽性。皮膚損傷的檢查對于那些在獲取血液培養(yǎng)標(biāo)本之前用了抗生素的病人非常重要。咽拭子標(biāo)本如能小心獲取并快速接種，也可獲得腦膜炎球菌從而支持腦膜炎球菌血癥的診斷。另外，可獲得用于檢查腦膜炎球菌抗原的CSF。如果得到一種生物，應(yīng)進行血清分型并送到相關(guān)實驗室進行進一步亞型測定。只有在明確特定的致病生物之后才能通過免疫控制流行病。在不能獲得血液培養(yǎng)的特殊情況下，應(yīng)毫不遲疑地應(yīng)用抗生素；微生物學(xué)檢查可稍后用替代方法進行。
對腦膜炎球菌血癥兒童的照管依賴于加強的、積極的監(jiān)護和治療。尤其是，早期的呼吸道保護、積極的血漿置換以及合理應(yīng)用血管活性物質(zhì)如去甲腎上腺素，多巴胺和多巴酚丁胺，以上這些對于恢復(fù)組織灌注量和氧的輸送都很關(guān)鍵。關(guān)于腦膜炎球菌血癥治療的幾個特殊觀點包括應(yīng)用抗生素、類固醇、新鮮冷凍血漿(FFP)置換、肝素和一些新藥物的應(yīng)用將在下文簡短地強調(diào)。
關(guān)于抗生素是在懷疑是腦膜炎球菌血癥之后馬上應(yīng)用還是經(jīng)過一段時間病情穩(wěn)定之后再用，至今仍有爭議。雖然隨機性試驗沒有解決這一爭議，但大部分證據(jù)表明，抗生素應(yīng)在懷疑腦膜炎球菌血癥之后馬上應(yīng)用，同時給予支持治療。關(guān)于腦膜炎球菌血癥在應(yīng)用抗生素后會有細(xì)菌內(nèi)毒素釋放的猜測至今未被人類資料所證實。腦膜炎球菌血癥病人血漿標(biāo)本細(xì)菌內(nèi)毒素水平的連續(xù)定量沒能證實血漿中內(nèi)毒素水平在抗生素施用后突然增高。
在其它引起嚴(yán)重的伴有休克的傳染性紫癜的因素排除之前(流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌及其它革蘭氏陰性菌)，對于可疑的病例的早期治療目前一般是推薦應(yīng)用第三代先鋒霉素(如頭孢三嗪)。然后，治療可改為非腸道施用青霉素或氨芐青霉素。
到目前為止，沒有隨機的、安慰劑對照的資料支持在腦膜炎球菌血癥病人中常規(guī)給予皮質(zhì)類固醇。然而，資料表明一小部分病情嚴(yán)重并有腎上腺出血的病人顯示血漿皮質(zhì)醇水平正?；騺喺?一種在此過程中預(yù)期升高的情況)。盡管缺乏能排除一種肯定或否定性建議的資料，內(nèi)科醫(yī)生在對體液和收縮力無反應(yīng)的、有快速進展型休克的臨床情況中應(yīng)考慮施用腎上腺取代的類固醇(氫化可的松1-2mg/kg，靜脈注射)。
至今沒有隨機的、安慰劑對照的資料以決定是否可用新鮮冷凍血漿(FFP)治療生化型凝血癥或者可用到何種程度FFP治療凝血癥。盡管用FFP校正生化異常似乎是合理的。但已有許多人認(rèn)為，施用FFP對于凝血癥是“火上澆油”。挪威的一項病例-對照試驗中，觀察了336例病人應(yīng)用血漿或血制品(相對于白蛋白和血漿替代物)治療，發(fā)現(xiàn)這種治療方法與更差的臨床后果相關(guān)。在治療腦膜炎球菌血癥過程中應(yīng)用FFP之后，發(fā)現(xiàn)C6缺乏的病人血漿中內(nèi)毒素水平急劇升高。這些資料表明FFP的應(yīng)用在某些情況下有害，因此應(yīng)謹(jǐn)慎使用且僅在有不得不使用的臨床指征的情況下應(yīng)用。
盡管小量回顧性報告提倡應(yīng)用肝素治療暴發(fā)性紫癜，但大部分這些資料(包括小量隨機性試驗和大的病例-對照研究)都沒有指示肝素治療的有益效果?，F(xiàn)行沒有證據(jù)支持治療腦膜炎球菌血癥中常規(guī)應(yīng)用肝素。一項關(guān)于應(yīng)用單克隆抗脂質(zhì)A(HA-1A)抗體治療腦膜炎球菌血癥的大規(guī)模、雙盲、安慰劑-對照的三期試驗已在歐洲開始進行。目前還沒有結(jié)果報導(dǎo)。
另外，其它一些生物因子可做為嚴(yán)重的凝血癥和血管內(nèi)血栓形成的治療的候選藥。這些因子包括抗凝血酶Ⅲ，蛋白C，和組織因子途徑抑制物。已發(fā)表了在特定試驗中關(guān)于蛋白C和抗凝血酶Ⅲ的一般性經(jīng)驗。已報道了其它一些未經(jīng)系統(tǒng)檢測的臨床治療方法，包括血漿和全血置換、血漿白細(xì)胞去除(leukaplasmapheresis)、連續(xù)的尾部阻斷以解除下肢缺血和體表使用硝酸甘油以擴張外周血管床。
BPI是一種從抵抗入侵微生物的重要血細(xì)胞哺乳動物多形核白細(xì)胞(PMN或中性粒細(xì)胞)的顆粒中分離出來的一種蛋白質(zhì)。人BPI蛋白已用酸抽提結(jié)合離子交換層析[Elsbach，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.),11000(1979)]或大腸桿菌(E.coli)親和層析法[Weiss，等血液，(Blood),69:652(1987)]從PMN中分離。通過這種方法獲得的BPI稱為天然BPI，已證明其具有對廣譜的革蘭氏陰性菌的殺菌活性。人BPI的分子量約為55,000道爾頓(55KD)。完整的人的BPI的氨基酸序列和DNA編碼該蛋白的核酸序列已有報導(dǎo)，見

圖1,Gray等，生物化學(xué)雜志(J.Biol.Chem.)264:9505(1989)，在此引入做為參考。Gray等測定的氨基酸序列此處列于SEQ ID NO:1。美國專利No.5,198,541公開了編碼BPI蛋白的重組基因及BPI蛋白的表達方法，包括BPI全蛋白質(zhì)和BPI的片段。
BPI是一種帶強正電的蛋白質(zhì)。BPI的N-端半側(cè)帶大量凈正電；C-端另一半帶-3的凈負(fù)電荷。[Elsbach和Weiss(1981)，出處同前]。一個大約有25KD分子量的蛋白水解BPI N-端片段基本上具有天然來源的55KD的人BPI全蛋白質(zhì)所有的殺菌功能。[Ooi等，生物化學(xué)雜志(J.Bio.Chem.),262:14891-14894(1987)]。與N-端部分相反，分離的人BPI蛋白的C末端區(qū)域僅略顯示可檢測到的對革蘭氏陰性菌的抗菌活性。[Ooi等，實驗醫(yī)學(xué)雜志(J.Exp.Med.),174:649(1991)]。一個分子量大約是23KD的N-端BPI片段，稱為rBPI23，已通過重組方法產(chǎn)生并保留了其對革蘭氏陰性菌的抗菌活性。Gazzano-Santoro等，Infect.Immun.60:4754-4761(1992)。
已報道BPI的殺菌作用對革蘭氏陰性菌具有高度特異性，如Elsbach和Weiss，炎癥基本原理和臨床相關(guān)(Inflammation:BasicPrinciples and Clinical Correlates),Gallin等編，第三十章，Raven出版有限公司(1992)。BPI殺革蘭氏陰性菌的確切機制尚未被完全闡明，但已認(rèn)為，帶正電的BPI蛋白質(zhì)和帶負(fù)電的細(xì)菌脂多糖(LPS)上的位點通過靜電和疏水相互作用而首先使BPI結(jié)合在細(xì)菌表面。在這些敏感的革蘭氏陰性菌中，BPI的結(jié)合導(dǎo)致LPS結(jié)構(gòu)被破壞，從而使細(xì)菌內(nèi)降解磷脂和肽聚糖的酶被激活，改變這些細(xì)胞外膜的通透性，因此引發(fā)最終導(dǎo)致細(xì)菌死亡的事件[Elsbach和Weiss(1992)，出處同前]。LPS已被稱為內(nèi)毒素，是因為它刺激潛在的嚴(yán)重炎癥反應(yīng)，即宿主炎癥細(xì)胞介質(zhì)的釋放可最終導(dǎo)致不可逆的內(nèi)毒素性休克。BPI可結(jié)合據(jù)報導(dǎo)是LPS中毒性最強的、生物活性最高的一種成分的脂質(zhì)A。
BPI以前從未被用于治療腦膜炎奈瑟氏球菌感染的病人，包括患腦膜炎球菌血癥的病人。在1995年1月24日、1994年8月16日、1994年1月24日提交的共同擁有共同未決的美國申請08/378,228、08/291,112、08/188,221中描述了向循環(huán)中有內(nèi)毒素的患者施用BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物，在此引入作為參考[另可見于，von der Mohlen等，傳染病雜志172:144-151(1995)；von der Mohlen等，血液85:3437-3443(1995)；de Winter等，J.Inflam.45:193-206(1995)]。Thornton等，F(xiàn)ASEB J.,8(4)；A137,1994報導(dǎo)了體外實驗中，BPI抑制人炎癥細(xì)胞應(yīng)答來源于兩種奈瑟氏球菌屬細(xì)菌即腦膜炎奈瑟氏球菌和淋病奈瑟氏球菌的LOS的TNF的釋放；1994年11月10日公開的國際申請公開文本W(wǎng)O94/25476中報導(dǎo)了治療內(nèi)毒素相關(guān)疾病包括革蘭氏陰性菌腦膜炎的方法。
盡管有抗生素治療和目前的重癥監(jiān)護治療，與人腦膜炎球菌血癥相關(guān)的死亡率和發(fā)病率仍很高，這一難題尚未被現(xiàn)行的治療方法解決。這就需要能降低或改善人腦膜炎球菌血癥的不良后果從而改善此病的臨床后果的新的治療方法，包括例如降低死亡率，減少截肢術(shù)、移植術(shù)以及永久性神經(jīng)損害的發(fā)生以及完善兒科臨床后果評分。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了治療人腦膜炎球菌血癥的新方法，包括施用BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物以減輕臨床上可證實的這種人類疾病的不良后果，包括死亡率和病況，或者減少與這種人類疾病相關(guān)的并發(fā)癥。
根據(jù)本發(fā)明，施用BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物如rBPI21來治療患腦膜炎球菌血癥的病人。施用劑量應(yīng)足夠防止死亡和/或降低發(fā)病率或病況的嚴(yán)重性，這里包括但不局限于截肢術(shù)、移植術(shù)和/或永久性的神經(jīng)損害。而且，在制備用于治療人腦膜炎球菌血癥的藥物時應(yīng)仔細(xì)考慮BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物的用途。
通過考慮下面的描述本發(fā)明優(yōu)選的實施方案的發(fā)明詳述，本領(lǐng)域里的技術(shù)人員可清楚地了解到關(guān)于本發(fā)明的很多其它方面和優(yōu)點。
附圖簡述圖1、3和5分別描述了開始進行BPI研究的十個病人血漿中內(nèi)毒素、TNF和IL-6水平。
圖2、4和6分別描述了圖1、3和5中顯示的血漿中內(nèi)毒素、TNF和IL-6的水平，并補充每個病人從開始使用抗生素治療到開始使用BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物治療之間的時間。
發(fā)明詳述人腦膜炎球菌血癥是一種日益流行的、危及生命的消耗性疾病，對此傳統(tǒng)的抗生素治療及加強護理均顯不足。特別是，盡管目前有醫(yī)療加強護理，該病的死亡率還很高，而且病情非常嚴(yán)重。現(xiàn)已出乎意料地發(fā)現(xiàn)，向患人腦膜炎球菌血癥的病人施用BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物可有效地降低死亡率及發(fā)病的數(shù)量和嚴(yán)重程度，包括截肢術(shù)、壞死組織清除術(shù)以及隨后廣泛移植術(shù)和/或?qū)е旅黠@的、長期的神經(jīng)功能損害的永久性神經(jīng)損害(如腦血管意外、大腦萎縮或需藥物治療的癲癇發(fā)作)。BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物對這些與腦膜炎球菌血癥相關(guān)和由腦膜炎球菌血癥造成的死亡率和發(fā)病率的出人意料的效果說明，BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物能有效干擾或阻斷導(dǎo)致此種人類疾病不良后果多種因素的、原因尚未清楚的病理生理過程。
BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物可望給腦膜炎球菌血癥病人提供額外的有益治療效果，例如偶發(fā)性低血壓或心律失?；蛐奶E停數(shù)量的降低，縮短通氣支持治療和影響心肌收縮(血管作用)治療的時間，縮短伴發(fā)凝血癥的持續(xù)時間并減輕嚴(yán)重性，縮短留在ICU中的時間，并且減少并發(fā)癥比如呼吸衰竭、腎功能衰竭、昏迷、腎上皮質(zhì)壞死、心包炎、心內(nèi)膜炎、心肌病、眼內(nèi)炎和關(guān)節(jié)炎的發(fā)生率。
體外實驗證明BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物對血清群為A,B,C和W135的革蘭氏陰性菌腦膜炎奈瑟氏球菌(引起腦膜炎球菌血癥)有殺菌作用。BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物可通過這種直接殺菌作用或通過增強抗生素治療的功效在人腦膜炎球菌血癥中發(fā)揮治療作用。后一種方式描述于美國專利No.5,523,288中，在此引入作為參考。BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物還可通過中和細(xì)菌釋放的或留在相關(guān)細(xì)菌或其碎片中的LOS內(nèi)毒素而發(fā)揮其對人腦膜炎球菌血癥的治療作用。1995年1月24日提交的，共同擁有的、共同未決的美國申請No.08/378,228，其是1994年8月16日提交的美國No.08/291,112的部分延續(xù)申請，后者是1994年1月24日提交的美國No.08/188,221的部分延續(xù)申請，所有這些在此引入作為參考。以上這些申請文件中描述了BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物對循環(huán)中有內(nèi)毒素的病人包括對TNF、IL-6和內(nèi)毒素的作用。BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物顯示出既有抗凝血作用又有纖維蛋白分解作用，如在同時提交的共同擁有的、共同未決的美國申請No.08/644,290中所描述。此處引入作為參考。BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物可能在腦膜炎球菌血癥伴隨的其它病理過程包括例如凝血癥中發(fā)揮作用。
含有BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物的治療組合物可全身給藥或體表給藥。全身用藥途徑包括口服、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下注射(包括在體內(nèi)貯存以長期釋放)、眼內(nèi)的和眼球后的、鞘內(nèi)的、腹膜內(nèi)(如腹膜內(nèi)灌洗)給藥，用氣霧劑或噴霧肺內(nèi)給藥，或經(jīng)皮給藥。優(yōu)選的給藥途徑是靜脈給藥。非腸道給藥時，BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物組合物通常的注射劑量范圍是每天1μg/kg～100mg/kg，優(yōu)選的劑量范圍是每天0.1mg/kg～20mg/kg，更優(yōu)選的劑量范圍是每天1-20mg/kg，最優(yōu)選的劑量范圍是每天2-10mg/kg。治療可通過連續(xù)輸入或間斷注射或輸入而持續(xù)給藥，并應(yīng)每天減少或增加劑量，例如治療1～3天，這由負(fù)責(zé)醫(yī)生來決定。BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物優(yōu)選的靜脈給藥方式是一次注射隨后連續(xù)輸注。優(yōu)選的劑量方案是靜脈首次注射1-20mg/kgBPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物，隨后以1-20mg/kg/日的劑量靜脈輸入，持續(xù)長至1周。最優(yōu)選的劑量方案是首次靜脈注射2-10mg/kg，隨后2-10mg/kg/日的劑量靜脈輸入，持續(xù)長至72小時。體表給藥途徑包括以軟膏、滴眼液、滴耳液、灌洗液(如為灌洗傷口)或加入藥物的洗發(fā)液等形式施用。例如以滴液形式的體表給藥由負(fù)責(zé)醫(yī)生決定可每天一次或多次施用大約10-200μl的BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物組合物。如良好的醫(yī)療實踐和個別病人的臨床狀況所確定，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可容易地優(yōu)化含BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物的治療組合物的有效劑量和給藥方案。
在這里所用的“BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物”包含天然和重組生產(chǎn)的BPI蛋白質(zhì)；天然的、合成的和重組生產(chǎn)的BPI蛋白質(zhì)的活性多肽片段；BPI蛋白質(zhì)或其片段的生物活性多肽變異體，包括雜交融合蛋白質(zhì)和二聚體；BPI蛋白質(zhì)或其片段或其變異體的生物活性多肽類似物，包括半胱氨酸取代的類似物；以及BPI衍生的肽。根據(jù)本發(fā)明，用于治療的BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物可根據(jù)本領(lǐng)域里已知的方法來產(chǎn)生和/或分離。美國專利No.5,198,541公開了重組BPI蛋白包括重組的BPI全蛋白，即rBPI50(或rBPI)和BPI的重組片段的重組基因編碼和表達方法。這些公開內(nèi)容在此引入作為參考。共同擁有的、共同未決的美國專利申請No.07/885,501和其部分延續(xù)申請，即1993年5月19日提交的美國專利申請No.08/072,063和相應(yīng)的1993年5月19日提交的PCT申請No.93/04752中公開了培養(yǎng)的基因轉(zhuǎn)化哺乳動物宿主細(xì)胞中表達和分泌的重組BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物的新的純化方法，并且公開了如何生產(chǎn)大量的適合于摻入穩(wěn)定均一的藥物制劑的重組BPI產(chǎn)物的方法，此處引入這些文獻作為參考。
BPI生物活性片段(BPI片段)包括與人天然BPI全蛋白質(zhì)具有相同或相似氨基酸序列的生物活性分子，除了這一片段分子缺少全蛋白的氨基端氨基酸、內(nèi)部氨基酸和/或羧基端氨基酸之外。Ooi等在實驗醫(yī)學(xué)雜志，174:649(1991)中描述了大量此類片段，包括一個天然人BPI分子量大約是25KD的N-端片段。Gazzano-Santoro等在Infect.Immun.60:4754-4761(1992)中描述了編碼人天然BPI N-端從1到大約193或大約193或大約199個氨基酸的DNA的重組表達產(chǎn)物，稱為rBPI23。在那個公開文本中，一個表達載體被用以作為編碼重組表達產(chǎn)物(rBPI23)的DNA來源，rBPI23有31個殘基的信號序列和成熟的人類BPI N-端的前199個氨基酸，如Cray等(出處同前)于圖1中所示，除了151位纈氨酸由GTG決定而不是GTC決定及殘基185是谷氨酸(由GAG決定)而不是賴氨酸(由AAG決定)。也產(chǎn)生具有圖1所示序列(SEQ ID NO:1和2)(Gray等，出處同前)的重組全蛋白，除了已知rBPI23的例外和殘基417是丙氨酸(由GCT決定)而不是纈氨酸(由GTT決定)之外。其它的例子包括BPI片段的二聚體形式，描述于1994年3月11日提交的，共同擁有的，共同未決的美國專利申請No.08/212,132，和相應(yīng)的PCT申請No.PCT/US95/03125，這些公開內(nèi)容在此引入作為參考。優(yōu)選的二聚體產(chǎn)物包括二聚體BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物，其中單體是有BPI全蛋白從大約1到175或大約1到199的N端殘基的氨基端BPI片段。一個特別優(yōu)選的二聚體產(chǎn)物是有從1到193的N-端殘基BPI片段的二聚體形式，被稱為rBPI42二聚體。
BPI的生物活性變異體(BPI變異體)包括但不局限于重組的雜交融合蛋白質(zhì)，包括BPI全蛋白或其生物活性片段以及至少一種其它多肽的至少一部分，還包括二聚體形式的BPI變異體。這種雜交融合蛋白質(zhì)和二聚體形式的實例描述于Theofan等共同擁有的、共同未決的美國專利申請No.07/885,911和1993年5月19日提交的其延續(xù)部分申請，美國專利申請No.08/064,693和1993年5月19日提交的相應(yīng)的PCT申請No.US93/04754，所有這些在此引入作為參考，還包括含有在氨基端是一種BPI蛋白或其生物活性片段，且在其羧基端至少是一種免疫球蛋白的重鏈不變區(qū)或其等位基因變異體的雜交融合蛋白。相似構(gòu)象的雜交融合蛋白質(zhì)包括部分或全部的脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)，也同樣仔細(xì)考慮用于本發(fā)明中。
BPI的生物活性類似物(BPI類似物)包括但不局限于其中1個或多個氨基酸殘基被不同的氨基酸所取代的BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物。例如，共同擁有的、共同未決的美國專利申請No.08/013,801,1993年2月2日提交和相應(yīng)的1994年2月2日提交的PCT申請No.US94/01235公開了BPI的多肽類似物和BPI片段，其中半胱氨酸殘基被另一不同的氨基酸殘基取代。這些公開內(nèi)容在此引入作為參考。本申請描述的一個優(yōu)選的BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物是DNA編碼的BPI全蛋白N-端從第一個氨基酸到約第193或199個氨基酸的表達產(chǎn)物，但其中132位殘基半胱氨酸被丙氨酸所取代，這一產(chǎn)物被命名為rBPI21Δcys或rBPI21。其他的例子包括BPI類似物的二聚體形式；例如共同擁有、共同未決的1994年3月11日提交的美國專利申請No.08/212,132和相應(yīng)的PCT申請PCT/US95/03125中所描述，這些公開內(nèi)容在此引入作為參考。
另外一種依本發(fā)明方法有用的BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物是來自或建立在重組或合成方法上生產(chǎn)的BPI的肽(即BPI衍生肽)，這些在共同擁有的、共同未決的1995年7月20日提交的美國專利申請No.08/504,841和共同擁有的、共同未決的1994年9月15日提交的PCT申請PCT/US94/10427(相應(yīng)于1994年9月15日提交的美國專利申請No.08/306,473和1994年3月11日提交的PCT申請No.US94/02465(其又相應(yīng)于1994年3月11日提交的美國專利申請No.08/209,762))中有所描述。1994年3月11日提交的No.08/209,762又是1994年1月14日提交的美國專利申請No.08/183,222的部分延續(xù)申請，這一部分延續(xù)申請又是1993年7月15日提交的美國專利申請No.08/093,202的部分延續(xù)申請(與之相應(yīng)的國際申請是1994年3月11日提交的PCT申請No.US94/02401)，這又是1993年3月12日提交的美國專利申請No.08/030,644的部分延續(xù)申請，所有這些公開內(nèi)容在此引入做為參考。
目前優(yōu)選的BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物包括重組生產(chǎn)的BPI的N端片段，尤其是那些分子量大約在21～25KD之間的如rBPI23或rBPI21或這些N端片段的二聚體形式(如rBPI42二聚體)。另外，優(yōu)選的BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物包括rBPI50和BPI衍生肽。
BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物的給藥優(yōu)選地用含有BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物和藥學(xué)可接受的稀釋劑、佐劑或載體的藥物組合物來完成。BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物可單獨施用或與已知的表面活性劑或其它化學(xué)治療藥物或其它已知的抗微生物藥物一起施用。一種含BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物(如rBPI50,rBPI23)的藥物組合物包含檸檬酸緩沖鹽水(5或20mM檸檬酸，150mMNaCl,pH5.0)中濃度為1mg/ml的BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物，此緩沖液中含0.1％(重量百分比)的聚羥亞烴188(Pluronic F-68,BASF Wyandotle,Parippany,NJ)和0.002％(重量百分比)的聚山梨醇酯80(Tween80,ICI Americas Inc.,Wilmington,DE)。另外一種含BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物(如rBPI21)的藥物組合物包含有5mM檸檬酸、150mMNaCl、0.2％聚羥亞烴188、0.002％的聚山梨醇酯80之中的濃度為2mg/mL的BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物。這種組合物描述于共同擁有、共同未決的1994年2月2日提交的PCT申請US94/01239，這一申請相應(yīng)于1994年2月2日提交的美國專利申請No.08/190,869和1993年2月2日提交的美國專利申請No.08/012,360，所有這些公開內(nèi)容在此引入作為參考。
考慮下面說明性實施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員可了解本發(fā)明的其它方面和優(yōu)點。實施例1指出施用BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物對與腦膜炎球菌血癥相關(guān)的死亡率的影響。實施例2指出施用BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物對與腦膜炎球菌血癥相關(guān)的病況的影響。實施例3和實施例4描述了對2個具體的病人施用BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物之后對腦膜炎球菌血癥病程的影響。
實施例1臨床研究方案-BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物對死亡率的影響為驗證一具有代表性的BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物rBPI21對患嚴(yán)重全身性腦膜炎球菌感染的疾病的兒科病人臨床后果的影響，進行一項臨床研究。臨床后果(包括死亡率、需截肢術(shù)、需移植術(shù)、永久性神經(jīng)損害)在研究日第28天或者出院時(以先到日為準(zhǔn))進行評估。另外，也評估了BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物的安全性、藥物動力學(xué)和其血液動力學(xué)作用。
因此，開展了一項Ⅰ期的、公開標(biāo)記的、多中心研究。該研究是關(guān)于BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物對患嚴(yán)重的腦膜炎球菌血癥并受到標(biāo)準(zhǔn)的監(jiān)護治療的兒科病人的治療效果。符合合適標(biāo)準(zhǔn)的病人在獲其父或母或法定監(jiān)護人的同意后做為研究對象。這些合適的標(biāo)準(zhǔn)是列入研究的病人有90％的嚴(yán)重臨床不良后果的預(yù)測率，即死亡、中風(fēng)、需截肢術(shù)或皮膚移植術(shù)。所有這些病人得到了與常規(guī)監(jiān)護治療相一致的全面的兒科重癥監(jiān)護，并且所有病人開始應(yīng)用BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物前8個小時內(nèi)接受首次抗生素。
起初4個病人在30分鐘內(nèi)接受0.5mg/kg的rBPI21注入，隨后馬上連續(xù)注入rBPI2124小時，劑量為0.5mg/kg/日。另有6個病人在30分鐘內(nèi)接受1.0mg/kg的rBPI21注入，隨后持續(xù)注入24小時的rBPI21，劑量為1.0mg/kg/日。其余病人在30分鐘內(nèi)接受rBPI212.0mg/kg的注入，隨即24小時內(nèi)持續(xù)注入rBPI21，劑量為2.0mg/kg/日。所有研究中心同時增加高一級的劑量水平。
BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物的藥物動力學(xué)和循環(huán)血中內(nèi)毒素水平可分別通過連續(xù)監(jiān)測血漿rBPI21濃度及用鱟變形細(xì)胞裂解物(LAL)試驗來測定。任何與施用rBPI21相關(guān)的急性血液動力學(xué)反應(yīng)可通過記錄標(biāo)準(zhǔn)血液動力學(xué)參數(shù)來描述，這些參數(shù)包括心率、侵入性全身性動脈血壓、心電圖、氧飽和以及經(jīng)肺動脈導(dǎo)管獲得的侵入性血液動力學(xué)測定。沒有放置用于本研究的新侵入性設(shè)備；醫(yī)療器械的放置應(yīng)由負(fù)責(zé)的內(nèi)科醫(yī)生和他/她的醫(yī)護人員獨立判斷決定，而且目的僅是為與常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)一致地監(jiān)測病人。
藥物安全性可通過連續(xù)地測定病人的生命體征、血液動力學(xué)指征、體格檢查以及治療前、后安全性實驗室評估來監(jiān)測。應(yīng)一直監(jiān)測病人的藥物安全性直至死亡、出院或到研究日第28天，以這三個時間最先到的為準(zhǔn)。
如果滿足以下的符合和排除標(biāo)準(zhǔn)，有嚴(yán)重的腦膜炎球菌血癥的病人可被選做研究的對象。符合標(biāo)準(zhǔn)是(1)年齡在1～18歲之間；(2)有腦膜炎球菌血癥的預(yù)測性診斷，其根據(jù)下面的全部或任一條(a)瘀斑或紫癜、發(fā)熱、且有與腦膜炎球菌血癥診斷相一致的臨床過程中的血液動力不穩(wěn)定，(b)與腦膜炎球菌血癥診斷相一致的臨床過程中顯示血中、腦脊液或皮膚損傷部位有革蘭氏陰性雙球菌，和/或(c)與腦膜炎球菌血癥診斷相一致的臨床過程中免疫學(xué)測定顯示有腦膜炎球菌抗原；(3)Glasgow腦膜炎球菌膿毒癥預(yù)后評分達8分或8分以上[Sinclair等，出處同前]；(4)病人在開始BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物治療前8小時內(nèi)有用過抗生素的歷史；(5)青春期或后青春期女性妊娠實驗陰性；(6)獲自父親或母親或法定監(jiān)護人的書面同意報告；和(7)可靠病人的隨訪資料的收集。排除標(biāo)準(zhǔn)是(1)除非妨礙常規(guī)的重癥監(jiān)護治療，否則沒有足夠的血管來施用BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物；(2)開始研究前30天內(nèi)給予了其他研究性藥物；和(3)有相關(guān)負(fù)責(zé)醫(yī)生判斷病人不適宜參與此研究的任何病況，包括瀕臨死亡。
進行此研究前24小時之內(nèi)進行如下工作(1)病史，(2)徹底體格檢查，(3)胸部X線檢查，(4)實驗室檢查血液學(xué)CBC、分類；血液凝固檢查PT、PTT、纖維蛋白原、D-二聚體；微生物學(xué)檢查細(xì)菌培養(yǎng)、革蘭氏染色、指定的血清學(xué)檢查；化學(xué)檢查鈉、鉀、氯、碳酸氫鹽、葡萄糖。BUN、肌酸、鈣離子、磷、鎂、膽紅素、AST、ALT、CPK(包括同工酶)、LDH；動脈血氣；尿分析化學(xué)和顯微鏡檢查；和(5)獲得書面同意和可靠的隨訪資料搜集。
rBPI21以一種澄清、無色、無菌、無致熱原的溶液裝于10ml一次性玻璃小瓶中，以2mg/ml濃度存在于5mM檸檬酸鈉/0.15M氯化鈉pH5.0且含有0.2％聚羥亞烴188和0.002％聚山梨醇酯、無防腐劑的緩沖液中。施用前裝有rBPI21的小瓶置冰箱內(nèi)2-8℃冷藏。在輸入之前先將產(chǎn)物置室溫中，通過主要的靜脈或其它合適的靜脈給藥。合適的靜脈給藥部位在從該部很容易抽到回血并且容易在靜脈內(nèi)輸入液體而不浸潤的部位。rBPI21是在所選給藥部位輸液過程中所施用的唯一藥物。靜脈的輸藥部位不用肝素化，但需要時可用生理鹽水沖洗。
在開始輸入BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物之后，醫(yī)生應(yīng)觀察病人可能出現(xiàn)的不良后果。收集用于測定rBPI21水平的血漿樣品，先在即將開始注射rBPI21之前(0時)取血一次，隨后分別在開始輸藥后30分鐘、90分鐘、240分鐘、720分鐘、即將結(jié)束輸藥之前即24小時30分鐘、24小時37分鐘、24小時45分鐘、25小時、25小時30分鐘、26小時30分鐘、27小時30分鐘和48小時取血測定。用于測定血漿中內(nèi)毒素水平的血漿樣品，在即將開始給藥前(0時)和給藥后30分鐘、90分鐘、240分鐘、720分鐘和48小時時分別獲取。血清鈣離子濃度測定在即將開始注射之前(0時)及注射后30分鐘、2小時、6小時、12小時和24小時時分別測定。監(jiān)測鈣離子濃度是對腦膜炎球菌血癥病人的常規(guī)監(jiān)護，通常每4小時測一次。所有樣本都應(yīng)取自沒有用來注入BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物的靜脈。
在開始注藥前每5分鐘記錄下列生命體征一次，記錄30分鐘，在30分鐘負(fù)荷劑量注入期間，每5分鐘記錄一次。然后每30分鐘記錄一次，共記錄24小時。需記錄的生命體征包括(a)心率；(b)全身動脈血壓收縮壓、舒張壓和平均值；和(c)呼吸頻率(如果病人是自主呼吸的話)。除了上述的手工收集資料之外，病人在ICU停留期間，還應(yīng)用床邊監(jiān)測器每分鐘數(shù)字記錄并貯存資料。病人離開ICU之后，應(yīng)每天記錄生命體征直到出院。
下列侵入性血液動力學(xué)參數(shù)應(yīng)在注藥前30分鐘記錄，每10分鐘一次。在30分鐘給予負(fù)荷劑量期間，應(yīng)每10分鐘記錄一次。然后每2小時記錄一次記錄24小時，這些參數(shù)有(a)混合靜脈血氧飽和度(僅用血氧定量導(dǎo)管)；(b)肺動脈楔壓；(c)肺動脈壓收縮壓、舒張壓、平均值；(d)心臟指數(shù)(CI)；(e)全身血管阻力指數(shù)(SVRI)；(f)肺動脈血管阻力指數(shù)(PVRI)；和(g)心搏出量指數(shù)(SVI)。一個完整的給藥和作用于血管的輸液情況在出院前均有記錄。早期監(jiān)護治療的內(nèi)科醫(yī)生應(yīng)決定進行按照嚴(yán)重的腦膜炎球菌感染的疾病的標(biāo)準(zhǔn)處理的下列指標(biāo)記錄的次數(shù)，這些指標(biāo)是(a)動脈血氣，(b)靜脈血氣，(c)氧輸送量(DO2)，(d)耗氧量(VO2)，(e)血液學(xué)檢查，(f)血液凝固檢查和(g)血液化學(xué)檢查。在入院第一天末應(yīng)計算并記錄PRISM評分(兒科死亡率風(fēng)險評分)。下面的表1給出了用于計算PRISM評分的相關(guān)分?jǐn)?shù)。(Pollack等，“The pediatric risk of mortality(PRISM)score,”Critical Care Medicin 16:1110,1988)。<
在研究結(jié)束時(即研究日第28天或出院時，以先到者為準(zhǔn))，對病人進行包括生命體征在內(nèi)的體檢和所有不良后果的評價。對下列所列的臨床后果也進行了評估(a)死亡率；(b)截肢術(shù)；(c)移植術(shù)；(d)永久性神經(jīng)損害包括但不局限于腦血管意外、大腦萎縮、表明神經(jīng)功能損害的需藥物治療的癲癇發(fā)作；和(e)兒科后果評分(根據(jù)兒科大腦表現(xiàn)分級和/或兒科全身表現(xiàn)分級，描述于Fiser，兒科重癥監(jiān)護治療后果評估(Assessing the outcome of pediatric intensive care)，兒科學(xué)雜志(J.Pediatric)121:168-74,1992)。
在開始進行BPI研究之前的兩年中，有人對收治入一個醫(yī)療臨床中心，即研究中心1的病人的醫(yī)療記錄進行了綜述。在這些記錄中，選14名兒童進行比較分析，因為他們滿足上面提到的符合標(biāo)準(zhǔn)中的3個即年齡、腦膜炎球菌血癥患者預(yù)測性診斷和Glasgow評分。14名“歷史的對照”兒童中有6名死亡。如果考慮到上面提到的符合標(biāo)準(zhǔn)有一個是Glasgow評分≥8，這樣高的死亡率是可預(yù)期的。Glasgow評分≥8往往提示疾病嚴(yán)重。
與之形成鮮明對比的是，在研究中心1進行BPI治療研究的10名病人中無1人死亡。由此可見，施用BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物可顯著降低研究中心1的嚴(yán)重的兒科腦膜炎球菌血癥病人的死亡率，死亡率從43％下降到0％。如果綜合所有醫(yī)療臨床中心的結(jié)果，到目前為止參與BPI研究的總共14個病人，只有一人死亡，死亡率為7％。如果再考慮在對這14名病人開始進行研究時，14人中有12人的Glasgow評分是≥10的話，這樣低的死亡率是非常令人注目的。計算BPI研究中的14名病人預(yù)期的死亡率的多因素分析是建立在許多研究中已證明與疾病的嚴(yán)重性和后果相關(guān)的一些指標(biāo)的基礎(chǔ)上的(即內(nèi)毒素水平、TNF、IL-6水平和纖維蛋白原含量以及PTT),[Brandtzaeg等，出處同前，Van Deuren等，出處同前，McManus等，出處同前和Bone，出處同前]。這些研究預(yù)見這些人群的死亡率從約20％至約50％。圖1-6表明了BPI研究中開始的十個病人的內(nèi)毒素、TNF和IL-6的水平。
實施例2BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物對病況的影響表2總結(jié)了實施例1描述的研究方案中用BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物治療的病人的臨床后果，并且與研究中心1的14名“歷史的對照”兒童的臨床后果相比較，這14名兒童是在BPI研究開始前2年中滿足研究的符合標(biāo)準(zhǔn)的兒童。腦膜炎球菌血癥的臨床過程的自然發(fā)展過程可能非常相似；原先健康的兒童經(jīng)歷12-24小時的類似流行性感冒的前驅(qū)癥狀之后發(fā)展成紫癜，然后在4～6小時內(nèi)或者死亡或者出現(xiàn)瀕死狀態(tài)。典型地，這樣的腦膜炎球菌血癥病人至少在起初的12小時內(nèi)在PICU內(nèi)病情加重，并且常常死于不可逆性快速進展型休克。除了用與不同BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物之外，研究中心1的這些進行BPI研究的病人和另外14個“歷史的對照”兒童之間沒有監(jiān)護標(biāo)準(zhǔn)的差異。
*既有嚴(yán)重的截肢術(shù)又有永久性神經(jīng)損害的病人表2總結(jié)的結(jié)果表明，研究中心1中BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物的施用不僅大大降低死亡率，還使嚴(yán)重病況的發(fā)生率從50％降低到10％。如果包括是所有醫(yī)療臨床中心的結(jié)果，總的嚴(yán)重病況的發(fā)生率仍很低，為8％。對這一研究的病況資料的解釋有些復(fù)雜，因為BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物能明顯降低與腦膜炎球菌血癥相關(guān)的疾病的死亡率，即許多不用BPI就會死亡的嚴(yán)重病人獲救。沒有進行過預(yù)期病人如不死亡會出現(xiàn)何種病況的分析。為分析病況的后果，把腕及腕以上、或踝或踝以上的截肢都視為嚴(yán)重的截肢。那些能導(dǎo)致明顯的和永久性的運動、認(rèn)識、感覺功能損傷的神經(jīng)功能異常都視為永久性神經(jīng)損害。另外4名附加的BPI研究病人(均在研究中心1)經(jīng)歷了腳趾和手指的小截肢(一個病人是部分足截肢)。研究中心1的4名附加的“歷史的對照”的病人經(jīng)歷了其它神經(jīng)功能障礙，包括腦血管意外、癲癇發(fā)作、CT掃描或EEG異常和腦神經(jīng)麻痹。一個進行BPI研究的病人(在研究中心1)經(jīng)歷了神經(jīng)功能異常(見實施例4)。
實施例3BPI研究中一位病人的臨床過程病人(BPI研究中2號病人)是一個7歲的白人男孩，既往健康。在被收治入兒科重癥監(jiān)護病房(PICU)的前一天晚上，他被送到急診。就診時伴有發(fā)燒、嘔吐、頭痛等癥狀，其白細(xì)胞計數(shù)(WBC)為17,500，但當(dāng)時由于他的檢查沒有跡象表明有嚴(yán)重的疾病，因此被送回家。第二天上午，他又來就診，此時可見彌漫性斑疹。此時其WBC降至6,300，而且發(fā)燒、頭痛加劇。因此被懷疑為腦膜炎球菌血癥，在輸液和給予抗生素治療后，此病人被收治入研究中心1的兒科重癥監(jiān)護治療病房(PICU)。
醫(yī)務(wù)人員給這個病人進行了插管和機械通氣，液體復(fù)蘇，并開始輸入腎上腺素以加強心肌收縮力。抗生素治療選用頭孢三嗪。在進行BPI研究之前，其Glasgow評分是14/15,PRISM評分是17，體格檢查顯示體溫38.8℃，心率145，呼吸機的呼吸頻率是16次，血壓107/46,PTT值為25.2，纖維蛋白原含量為480。血液培養(yǎng)顯示有血清型C的腦膜炎奈瑟氏球菌。放置肺動脈導(dǎo)管以進行監(jiān)測，并獲取了按實施例1提到的進行BPI研究方案所需的書面同意。
rBPI21的注入開始于收入PICU的當(dāng)天(第一天)的14:35。其首先30分鐘內(nèi)接受0.5mg/kgrBPI21，隨后24小時內(nèi)輸入0.5mg/kg的rBPI21。該病人可很好地承受輸入藥物而沒有血液動力的改變及其它并發(fā)癥出現(xiàn)。其PICU過程相對平靜；影響心肌收縮的支持治療在第4天晚上停用，然后馬上停止呼吸機的應(yīng)用。第5天，撤走呼吸機，病人未出現(xiàn)任何問題。第6天下午，他被轉(zhuǎn)入普通兒科病房，第9天時出院而無任何并發(fā)癥。
實施例4BPI研究中另一位病人的臨床過程此病人(BPI研究的第6號病人)是一個18歲的白人男孩，既往身體極其健康。在入院前，他已有2天的喉嚨痛和嗜睡的病史。在就診的當(dāng)天晚上，他的室友發(fā)現(xiàn)他縮在宿舍的角落里，反應(yīng)喪失且全身出現(xiàn)青紫色斑疹。用救護車把他送到醫(yī)院，此時他的體溫是101°F并且呈暴發(fā)性休克狀態(tài)。醫(yī)護人員對他進行了輸液復(fù)蘇，施用頭孢三嗪抗生素以及輸入多巴胺以改善循環(huán)。用直升飛機把他送到研究中心1。
一到達研究中心，對其進行插管和機械通氣。在進行BPI研究之前，其Glasgow評分是12/15，PRISM評分是16。他處在瀕死狀態(tài)。體格檢查可見明顯的快速擴展的彌散性紫癜、毛細(xì)血管再灌達8秒以上以及微弱可察覺的脈搏。足和十指青紫、冰冷、且無脈搏。體溫37.7℃，心率150，呼吸機的呼吸頻率為20次，血壓133/66。實驗室檢查WBC7,500且?guī)в?3％片段和14％帶的差異。PT為26,PTT＞114，纖維蛋白原水平121,D-二聚體＞8。腦脊液培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)血清型C的腦膜炎奈瑟氏球菌。到達時已出現(xiàn)多器官功能衰竭的生化跡象。持續(xù)輸液復(fù)蘇并開始注入腎上腺素。取得書面報告同意如實施例1中所述進行BPI研究。
于其收治入PICU的當(dāng)天(第一天)07∶15，開始在30分鐘內(nèi)給予該病人劑量為1mg/kg的rBPI21，隨后在24小時內(nèi)給予1ng/kg。病人可很好地承受rBPI21的輸入而未出現(xiàn)不良的血液動力反應(yīng)。該病人需給予多巴胺、多巴酚丁胺和腎上腺素的注入以獲得血液動力支持。在第三天早晨，停止了腎上腺素和多巴胺的輸入，隨后又馬上停止了多巴酚丁胺的輸入。通過SwanGanz導(dǎo)管而進行對血液動力狀態(tài)侵入性評估顯示未經(jīng)歷向肌力乏力轉(zhuǎn)換的肌力過度，這在有這種嚴(yán)重疾病的兒童治療的第二天非常常見。盡管此病人起初有嚴(yán)重的凝血癥，并且需要新鮮冷凍血漿、濃縮的血細(xì)胞和血小板的輸入，但在入院治療的第三天，凝血癥很快得以改善。同樣在第3天時，該病人起初冰冷的、無血流灌注的腳開始轉(zhuǎn)變?yōu)檎５姆奂t色，而且溫暖，表明血液循環(huán)已恢復(fù)。開始應(yīng)用另外的萬古霉素和妥布霉素進行抗生素治療。第4天時，他的臨床狀況繼續(xù)改善并去除呼吸機。因此第4天全天停止機械通氣，但在第5天時因出現(xiàn)一過性肺水腫，因此造成呼吸機停用一度中斷。肺水腫被認(rèn)為是第三間隙的體液重吸收和血管滲漏愈合而引起的。隨后第5天繼續(xù)停用呼吸機。病人低位肢端的血液循環(huán)改善明顯，第8天離開PICU時，只有左足跟組織損傷明顯，進行了清創(chuàng)術(shù)，還有左足第二趾最后進行了截斷術(shù)。在這個病人住院過程中，一次偶發(fā)的一過性高血壓出現(xiàn)后，隨即對他進行CT掃描檢查，發(fā)現(xiàn)左側(cè)短暫性的/頂部腦血管意外(CVA),CVA大約發(fā)生在收治入PICU的當(dāng)天。這次CVA對神經(jīng)功能影響不明顯，沒有損害任何的運動、認(rèn)識或感覺功能。在PICU之后，該病人進入兒科病房繼續(xù)治療。這些治療主要包括有物理療法、職業(yè)性治療和加強營養(yǎng)。在第14天該病人出院，出院后繼續(xù)進行一般恢復(fù)治療和用康復(fù)設(shè)備的加強康復(fù)治療。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員可能會對上述的發(fā)明進行許多改良和變化。因此，只有如在附加的權(quán)利要求中出現(xiàn)的限定應(yīng)被置于其上。
序列表(1)一般信息(ⅰ)申請人Xoma公司(ⅰa)發(fā)明人Giroir,Brett P.
Scannon,Patrick J.(ⅱ)發(fā)明名稱殺菌的/增強通透性的蛋白質(zhì)產(chǎn)物用于人腦膜炎球菌血癥的治療用途(ⅲ)序列數(shù)目2(ⅳ)聯(lián)系地址(A)姓名Marshall,O’Toole,Gerstein,Murray &amp; Borun(B)街道6300Sears Tower.233South Wacker Drive(C)城市Chicago(D)州 Illinois(E)國家美國(F)郵政編碼(ZIP):60606-6402(ⅴ)計算機可讀信息(A)介質(zhì)類質(zhì)軟盤(B)計算機IBM PC兼容機(C)操作系統(tǒng)PC-DOS/MS-DOS(D)軟件PatentIn Release#1.0,Version#1.25(ⅵ)當(dāng)前申請數(shù)據(jù)(A)申請?zhí)?B)遞交日(C)分類(ⅶ)在先申請數(shù)據(jù)(A)申請?zhí)?B)遞交日
(C)分類(ⅷ)代理人/代理機構(gòu)信息(A)姓名Sbarp,Jeffrey S.
(B)登記號31,879(C)文獻/卷號27129/33248PCT(ⅸ)通訊信息(A)電話312/474-6300(B)傳真312/474-0448(C)電傳25-3856(2)SEQ ID NO:1的信息(ⅰ)序列特征(A)長度1813個堿基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓?fù)漕愋途€性(ⅱ)分子類型cDNA(ⅸ)特征(A)名稱/關(guān)鍵詞CDS(B)位置31..1491(ⅸ)特征(A)名稱/關(guān)鍵詞mat_peptide(B)位置124..1491(ⅸ)特征(A)名稱/關(guān)鍵詞misc feature(B)其它信息rBPI(ⅹⅰ)SE Q ID NO:1的序列描述CAGGCCTTGA GGTTTTGGCA GCTCTGGAGG ATG AGA GAG AAC ATG GCC AGG GGC 54Met Arg Glu Asn Met Ala Arg Gly-31 -30 -25CCT TGC AAC GCG CCG AGA TGG GTG TCC CTG ATG GTG CTC GTC GCC ATA 102Pro Cys Asn Ala Pro Arg Trp Val Ser Leu Met Val Leu Val Ala Ile-20 -15 -10GGC ACC GCC GTG ACA GCG GCC GTC AAC CCT GGC GTC GTG GTC AGG ATC 150Gly Thr Ala Val Thr Ala Ala Val Asn Pro Gly Val Val Val Arg Ile-5 1 5TCC CAG AAG GGC CTG GAC TAC GCC AGC CAG CAG GGG ACG GCC GCT CTG 198Ser Gln Lys Gly Leu Asp Tyr Ala Ser Gln Gln Gly Thr Ala Ala Leu10 15 20 25CAG AAG GAG CTG AAG AGG ATC AAG ATT CCT GAC TAC TCA GAC AGC TTT 246Gln Lys Glu Leu Lys Arg Ile Lys Ile Pro Asp Tyr Ser Asp Ser Phe30 35 40AAG ATC AAG CAT CTT GGG AAG GGG CAT TAT AGC TTC TAC AGC ATG GAC 294Lys Ile Lys His Leu Gly Lys Gly His Tyr Ser Phe Tyr Ser Met Asp45 50 55ATC CGT GAA TTC CAG CTT CCC AGT TCC CAG ATA AGC ATG GTG CCC AAT 342Ile Arg Glu Phe Gln Leu Pro Ser Ser Gln Ile Ser Met Val Pro Asn60 65 70GTG GGC CTT AAG TTC TCC ATC AGC AAC GCC AAT ATC AAG ATC AGC GGG 390Val Gly Leu Lys Phe Ser Ile Ser Asn Ala Asn Ile Lys Ile Ser Gly75 80 85AAA TGG AAG GCA CAA AAG AGA TTC TTA AAA ATG AGC GGC AAT TTT GAC 438Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe Leu Lys Met Ser Gly Asn Phe Asp90 95 100 105CTG AGC ATA GAA GGC ATG TCC ATT TCG GCT GAT CTG AAG CTG GGC AGT 486Leu Ser Ile Glu Gly Met Ser Ile Ser Ala Asp Leu Lys Leu Gly Ser110 115 120AAC CCC ACG TCA GGC AAG CCC ACC ATC ACC TGC TCC AGC TGC AGC AGC 534Asn Pro Thr Ser Gly Lys Pro Thr Ile Thr Cys Ser Ser Cys Ser Ser125 130 135CAC ATC AAC AGT GTC CAC GTG CAC ATC TCA AAG AGC AAA GTC GGG TGG 582His Ile Asn Ser Val His Val His Ile Sar Lys Ser Lys Val Gly Trp140 145 150CTG ATC CAA CTC TTC CAC AAA AAA ATT GAG TCT GCG CTT CGA AAC AAG 630Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys Ile Glu Ser Ala Leu Arg Asn Lys155 160 165ATG AAC AGC CAG GTC TGC GAG AAA GTG ACC AAT TCT GTA TCC TCC AAG 678Met Asn Ser Gln Val Cys Glu Lys Val Thr Asn Ser Val Ser Ser Lys170 175 180 185CTG CAA CCT TAT TTC CAG ACT CTG CCA GTA ATG ACC AAA ATA GAT TCT 726Leu Gln Pro Tyr Phe Gln Thr Leu Pro Val Met Thr Lys Ile Asp Ser190 195 200GTG GCT GGA ATC AAC TAT GGT CTG GTG GCA CCT CCA GCA ACC ACG GCT 774Val Ala Gly Ile Asn Tyr Gly Leu Val Ala Pro Pro Ala Thr Thr Ala205 210 215GAG ACC CTG GAT GTA CAG ATG AAG GGG GAG TTT TAC AGT GAG AAC CAC 822Glu Thr Leu Asp Val Gln Met Lys Gly Glu Phe Tyr Ser Glu Asn His220 225 230CAC AAT CCA CCT CCC TTT GCT CCA CCA GTG ATG GAG TTT CCC GCT GCC 870His Asn Pro Pro Pro Phe Ala Pro Pro Val Met Glu Phe Pro Ala Ala235 240 245CAT GAC CGC ATG GTA TAC CTG GGC CTC TCA GAC TAC TTC TTC AAC ACA 918His Asp Arg Met Val Tyr Leu Gly Leu Ser Asp Tyr Phe Phe Asn Thr250 255 260 265GCC GGG CTT GTA TAC CAA GAG GCT GGG GTC TTG AAG ATG ACC CTT AGA 966Ala Gly Leu Val Tyr Gln Glu Ala Gly Val Leu Lys Met Thr Leu Arg270 275 280GAT GAC ATG ATT CCA AAG GAG TCC AAA TTT CGA CTG ACA ACC AAG TTC1014Asp Asp Met Ile Pro Lys Glu Ser Lys Phe Arg Leu Thr Thr Lys Phe285 290 295TTT GGA ACC TTC CTA CCT GAG GTG GCC AAG AAG TTT CCC AAC ATG AAG1062Phe Gly Thr Phe Leu Pro Glu Val Ala Lys Lys Phe Pro Asn Met Lys300 305 310ATA CAG ATC CAT GTC TCA GCC TCC ACC CCG CCA CAC CTG TCT GTG CAG1110Ile Gln Ile His Val Ser Ala Ser Thr Pro Pro His Leu Ser Val Gln315 320 325CCC ACC GGC CTT ACC TTC TAC CCT GCC GTG GAT GTC CAG GCC TTT GCC1158Pro Thr Gly Leu Thr Phe Tyr Pro Ala Val Asp Val Gln Ala Phe Ala330 335 340 345GTC CTC CCC AAC TCC TCC CTG GCT TCC CTC TTC CTG ATT GGC ATG CAC1206Val Leu Pro Asn Ser Ser Leu Ala Ser Leu Phe Leu Ile Gly Met His350 355 360ACA ACT GGT TCC ATG GAG GTC AGC GCC GAG TCC AAC AGG CTT GTT GGA1254Thr Thr Gly Ser Met Glu Val Ser Ala Glu Ser Ash Arg Leu Val Gly365 370 375GAG CTC AAG CTG GAT AGG CTG CTC CTG GAA CTG AAG CAC TCA AAT ATT1302Glu Leu Lys Leu Asp Arg Leu Leu Leu Glu Leu Lys His Sar Asn Ile380 385 390GGC CCC TTC CCG GTT GAA TTG CTG CAG GAT ATC ATG AAC TAC ATT GTA1350Gly Pro Phe Pro Val Glu Leu Leu Gln Asp Ile Met Asn Tyr Ile Val395 400 405CCC ATT CTT GTG CTG CCC AGG GTT AAC GAG AAA CTA CAG AAA GGC TTC1398Pro Ile Leu Val Leu Pro Arg Val Asn Glu Lys Leu Gln Lys Gly Phe410 415420 425CCT CTC CCG ACG CCG GCC AGA GTC CAG CTC TAC AAC GTA GTG CTT CAG1446Pro Leu Pro Thr Pro Ala Arg Val Gln Leu Tyr Asn Val Val Leu Gln430 435 440CCT CAC CAG AAC TTC CTG CTG TTC GGT GCA GAC GTT GTC TAT AAA1491Pro His Gln Asn Phe Leu Leu Phe Gly Ala Asp Val Val Tyr Lys445 450 455TGAAGGCACC AGGGGTGCCG GGGGCTGTCA GCCGCACCTG TTCCTGATGG GCTGTGGGGC 1551ACCGGCTGCC TTTCCCCAGG GAATCCTCTC CAGATCTTAA CCAAGAGCCC CTTGCAAACT 1611TCTTCGACTC AGATTCAGAA ATGATCTAAA CACGAGGAAA CATTATTCAT TGGAAAAGTG 1671CATGGTGTGT ATTTTAGGGA TTATGAGCTT CTTTCAAGGG CTAAGGCTGC AGAGATATTT 1731CCTCCAGGAA TCGTGTTTCA ATTGTAACCA AGAAATTTCC ATTTGTGCTT CATGAAAAAA 1791AACTTCTGGT TTTTTTCATG TG 1813(2)SEQ ID NO:2的信息(ⅰ)序列特征(A)長度487個氨基酸(B)類型氨基酸(D)拓?fù)漕愋途€性(ⅱ)分子類型蛋白質(zhì)(ⅹⅰ)SE Q ID NO:2的序列描述Met Arg Glu Asn Met Ala Arg Gly Pro Cys Asn Ala Pro Arg Trp Val-31 -30 -25 -20Ser Leu Met Val Leu Val Ala Ile Gly Thr Ala Val Thr Ala Ala Val-15 -10 -5 1Asn Pro Gly Val Val Val Arg Ile Ser Gln Lys Gly Leu Asp Tyr Ala5 10 15Ser Gln Gln Gly Thr Ala Ala Leu Gln Lys Glu Leu Lys Arg Ile Lys20 25 30Ile Pro Asp Tyr Ser Asp Ser Phe Lys Ile Lys His Leu Gly Lys Gly35 40 45His Tyr Ser Phe Tyr Ser Met Asp Ile Arg Glu Phe Gln Leu Pro Ser50 55 60 65Ser Gln Ile Ser Met Val Pro Asn Val Gly Leu Lys Phe Ser Ile Ser70 75 80Asn Ala Asn Ile Lys Ile Ser Gly Lys Trp Lys Ala Gln Lys Arg Phe85 90 95Leu Lys Met Ser Gly Asn Phe Asp Leu Ser Ile Glu Gly Met Ser Ile100 105 110Ser Ala Asp Leu Lys Leu Gly Ser Asn Pro Thr Ser Gly Lys Pro Thr115 120 125Ile Thr Cys Ser Ser Cys Ser Ser His Ile Asn Ser Val His Val His130 135 140 145Ile Ser Lys Ser Lys Val Gly Trp Leu Ile Gln Leu Phe His Lys Lys150 155 160Ile Glu Ser Ala Leu Arg Asn Lys Met Asn Ser Gln Val Cys Glu Lys165 170 175Val Thr Asn Ser Val Ser Ser Lys Leu Gln Pro Tyr Phe Gln Thr Leu180 185 190Pro Val Met Thr Lys Ile Asp Ser Val Ala Gly Ile Asn Tyr Gly Leu195 200 205Val Ala Pro Pro Ala Thr Thr Ala Glu Thr Leu Asp Val Gln Met Lys210 215 220 225Gly Glu Phe Tyr Ser Glu Asn His His Asn Pro Pro Pro Phe Ala Pro230 235 240Pro Val Met Glu Phe Pro Ala Ala His Asp Arg Met Val Tyr Leu Gly245 250 255Leu Ser Asp Tyr Phe Phe Asn Thr Ala Gly Leu Val Tyr Gln Glu Ala260 265 270Gly Val Leu Lys Met Thr Leu Arg Asp Asp Met Ile Pro Lys Glu Ser275 280 285Lys Phe Arg Leu Thr Thr Lys Phe Phe Gly Thr Phe Leu Pro Glu Val290 295 300 305Ala Lys Lys Phe Pro Asn Met Lys Ile Gln Ile His Val Ser Ala Ser310 315 320Thr Pro Pro His Leu Ser Val Gln Pro Thr Gly Leu Thr Phe Tyr Pro325 330 335Ala Val Asp Val Gln Ala Phe Ala Val Leu Pro Asn Ser Ser Leu Ala340 345 350Ser Leu Phe Leu Ile Gly Met His Thr Thr Gly Ser Met Glu Val Ser355 360 365Ala Glu Ser Asn Arg Leu Val Gly Glu Leu Lys Leu Asp Arg Leu Leu370 375 380 385Leu Glu Leu Lys His Ser Asn Ile Gly Pro Phe Pro Val Glu Leu Leu390 395 400Gln Asp Ile Met Asn Tyr Ile Val Pro Ile Leu Val Leu Pro Arg Val405 410 415Asn Glu Lys Leu Gln Lys Gly Phe Pro Leu Pro Thr Pro Ala Arg Val420 425 430Gln Leu Tyr Asn Val Val Leu Gln Pro His Gln Asn Phe Leu Leu Phe435 440 445Gly Ala Asp Val Val Tyr Lys450 45權(quán)利要求
1．一種治療腦膜炎球菌血癥的方法，其包括向患有腦膜炎球菌血癥的病人施用有效治療劑量的一種殺菌的/增強通透性的(BPI)蛋白質(zhì)產(chǎn)物的步驟。
2．權(quán)利要求1的方法，其中BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物是分子量大約為21KD-25KD的BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物的一種氨基端片段。
3．權(quán)利要求1的方法，其中BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物是rBPI23或其二聚體形式。
4．權(quán)利要求1的方法，其中BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物是rBPI21。
5．權(quán)利要求1的方法，其中BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物與其它治療劑同時施用。
6．治療人腦膜炎球菌血癥的藥物制備中BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物的用途。
7．根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物選自分子量大約為21KD-25KD的BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物的氨基端片段、rBPI23或其二聚體形式和rBPI21。
全文摘要
提供了施用有效治療劑量的BPI蛋白質(zhì)產(chǎn)物用于治療人腦膜炎球菌血癥的方法和材料。
文檔編號A61K31/00GK1236320SQ97195726
公開日1999年11月24日 申請日期1997年5月9日 優(yōu)先權(quán)日1996年5月10日
發(fā)明者B·P·杰羅爾, P·J·斯卡諾恩 申請人:愛克斯歐瑪公司