專利名稱：抗齲齒口腔用組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
齲齒是一種當口腔生齲細菌將單糖和復(fù)合糖代謝為導(dǎo)致牙釉質(zhì)溶解的酸而造成齲斑或空腔時發(fā)生的多因性疾病。本發(fā)明提供一種包含介于口腔用載體內(nèi)的抗齲劑的口腔組合物。具體地說，本發(fā)明公開了在口腔用載體內(nèi)含有鈣、精氨酸和止齲陰離子的組合物。本發(fā)明還描述了制備含抗齲劑的口腔組合物的方法。同時也公開了包括將有效治療量的含鈣、精氨酸和止齲陰離子釋放到口腔內(nèi)以減少齲齒的方法。
背景技術(shù)：
自Miller于1890年首先揭示口腔細菌在碳水化合物發(fā)酵過程中所產(chǎn)酸是造成牙齒脫礦質(zhì)和引起牙齒齲化過程的主要誘因的事實后，已有大量針對延緩和預(yù)防牙齒脫礦質(zhì)作用的研究。Miller.W.D(1890)的“人體口腔微生物”由Karger,Basel再版于1973年，Miller將齲齒的形成描述成一個兩步進程。在第一步中，口腔細菌，主要為革蘭氏陽性菌，將口腔內(nèi)存在的發(fā)酵性碳水化合物代謝為酸。第二步，口腔細菌所產(chǎn)酸將牙釉質(zhì)、牙質(zhì)和/或牙骨質(zhì)脫礦質(zhì)，因而造成牙冠或牙根的齲斑或空腔。
Miller所述過程第一步中被口腔細菌代謝的可發(fā)酵碳水化合物主要來自食物。葡萄糖是從食物碳水化合物中獲得的主要糖。它是蔗糖、麥芽糖、乳糖和淀粉的單糖組分。對口腔細菌純培養(yǎng)物的研究揭示了發(fā)酵過程中革蘭氏陽性菌比革蘭氏陰性菌更易將葡萄糖發(fā)酵。該發(fā)酵作用可被人為地分成主產(chǎn)物為乳酸的同型發(fā)酵或除乳酸外生成大量包括甲酸、乙酸、丙酸和琥珀酸以及乙醇和二氧化碳在內(nèi)的產(chǎn)物的異型發(fā)酵。Plarr和Foster(1958)，細菌雜志，75:453-459。
研究人員已在減少齒斑微生物產(chǎn)酸的嘗試中取得不同程度的成功。如Jenkins G.N.(1978)口腔生理學(xué)和生物化學(xué)，第4版，牛津，英國，Blackwell,414-500頁。這些方法包括試圖(ⅰ)減小對飲食來源的可發(fā)酵碳水化合物的利用率；(ⅱ)減少齒斑量以及齒斑內(nèi)產(chǎn)酸菌數(shù)目；(ⅲ)用特定細菌進行干擾；(ⅳ)利用細菌糖酵解來干擾齒斑菌從碳水化合物產(chǎn)酸的代謝過程；(ⅴ)中和糖酵解過程中形成的酸；以及(ⅵ)利用齒斑菌來刺激堿的形成，主要來源于脲和精氨酸，以拮抗齲化過程中的特征性產(chǎn)酸作用。Kleinberg等人(1979)的“口腔混合菌的氮代謝”，刊于唾液和牙齒齲化(由Kleinberg等編輯)，第357-377頁，Information Retrieval,Washington D.C。然而上述方法在減少齲齒中卻有著局限性。
科研人員在通過對抗Miller齲齒形成過程的第二步以減少或預(yù)防齲齒中取得很顯著的進展，換言之，利用氟化物降低牙釉質(zhì)溶解性從而減少牙釉質(zhì)礦物質(zhì)的溶解。許多研究都提出了已被驗證能夠抑制齒斑菌所產(chǎn)酸導(dǎo)致的牙釉質(zhì)溶解的治療劑，并證明氟化物為最有效的治療劑。Newburn(1986)氟化物和齲齒，第3版，Springfield,Illinois,CharlesThomas。氟化物被認為能夠通過降低溶解速率、增強再礦化以及改變作為牙釉質(zhì)、牙骨質(zhì)和牙質(zhì)最主要組分-磷酸鈣的溶解性產(chǎn)物來抑制齒斑酸所致的牙釉質(zhì)溶解。退一步而言，氟化物也能夠作用于細菌的糖轉(zhuǎn)運和糖酵解過程。Hamilton(1969)加拿大微生物雜志，15:1021-1027。
雖然許多治療劑的防齲齒功效已被確認，但齲齒發(fā)生率仍保持在無法接受的高水平，尤其是在第三世界國家以及患有唾液缺失癥的個體特別是成年唾液抑制癥患者。常規(guī)治療劑無法充分延緩牙齒齲化的失敗原因之一在于這些牙齒治療劑基本集中作用于Miller牙齒齲化過程的第二步，而無法提供能夠滿足牙齒齲化為多因性疾病并需要綜合方式治療這種客觀事實要求的治療劑。所以，使用氟化物來降低牙釉質(zhì)溶解性僅能對牙齒齲化產(chǎn)生約20-40％的有限抑制率并不令人感到奇怪。迄今還未嘗試開發(fā)可以同時影響酸生成和牙釉質(zhì)脫礦質(zhì)過程的藥劑。
本發(fā)明緩解了現(xiàn)有防齲齒治療劑所存在的許多問題。特別是，本發(fā)明提供的口腔用組合物競爭Miller所述兩個階段的牙齒齲化過程。具體而言，本文所述止齲口腔組合物含有治療量的鈣、精氨酸和止齲陰離子。這些化合物可以相互作用并成為抗齲復(fù)合物。
精氨酸能促進齒斑菌生成堿以及在齒斑內(nèi)生成堿的微生物系統(tǒng)的繁殖。Kanapka和Kleinberg(1983)Archs.oral Biol.28,1007-1015。產(chǎn)自精氨酸的堿性化合物中和了多種齒斑菌所生成的酸，而不論氨基酸是游離的還是來自肽或蛋白，尤其是唾液。Kleinberg等(1979)的“口腔混合菌的氮代謝”，刊于唾液和牙齒齲化(由Kleinberg等編輯)，第357-377頁，Information Retrieval,WashingtonD.C。因此，本發(fā)明口腔用組合物中的精氨酸組分拮抗Miller氏過程的第一階段。
鈣是本發(fā)明口腔用組合物的另一組分。它通過濃度作用來抑制牙釉質(zhì)的溶解并減少因被酸侵襲而從牙釉質(zhì)釋放出的鈣量。在酸溶解過程中，鈣先于磷酸根從牙釉質(zhì)、牙質(zhì)和其它含磷酸鈣組織內(nèi)釋放出來。因此，本發(fā)明組合物的鈣組分拮抗Miller氏齲化過程的第二階段。
本發(fā)明口腔用組合物的止齲陰離子可影響齲化過程的兩個階段。止齲陰離子可以(ⅰ)提供能促進精氨酸的酸中和活性以及中和酸本身的緩沖性能，(ⅱ)提供一種有機磷酸根源作為表面覆被或“抑制劑”或用于通過齒斑菌水解而釋放有機正磷酸根(其抑制牙齒溶解并促進牙齒再礦質(zhì)化)，或者(ⅲ)以上兩種作用。與常規(guī)口腔用組合物不同的是，本發(fā)明的口腔用組合物含有通過在Miller齲齒形成過程的兩個階段影響齲斑形成從而明顯降低牙齒齲化的組分。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及含有分布于口腔用載體內(nèi)的治療量的鈣、精氨酸和止齲陰離子的口腔組合物。在一個優(yōu)選實施方案中，該口腔組合物附加有氟化物。
本發(fā)明進一步涉及制備含有抗齲化劑的口腔組合物的方法。
本發(fā)明的另一方面涉及抑制牙齒齲化的方法，該方法包括將有效治療量的含鈣、精氨酸和止齲陰離子的口腔用組合物傳遞至口腔內(nèi)。在一個優(yōu)選實施方案中，上述方法所用的口腔組合物中還含有氟化物。
附圖簡述附

圖1．表示用含有一系列肌醇六磷酸精氨酸鈣(CAP)復(fù)合物的5.6mM葡萄糖培養(yǎng)的唾液沉淀物的pH響應(yīng)值。止齲陰離子為肌醇六磷酸根并且鈣和精氨酸是相對應(yīng)變化的。肌醇六磷酸精氨酸被認為是鈣濃度為零的CAP復(fù)合物。空白對照包括單獨使用肌醇六磷酸和單獨使用精氨酸的培養(yǎng)混合物。在此糖濃度下，觀測到體內(nèi)齒斑pH響應(yīng)值的一種情況。
附圖2．表示用含有一系列CAP復(fù)合物的28.0mM葡萄糖培養(yǎng)的唾液沉淀物的pH響應(yīng)值。止齲陰離子為肌醇六磷酸根并且鈣和精氨酸相對應(yīng)地改變。肌醇六磷酸精氨酸被認為是零鈣濃度的CAP復(fù)合物?？瞻讓φ瞻ǚ謩e單獨使用肌醇六磷酸和精氨酸的培養(yǎng)混合物。在此糖濃度下，觀測到體內(nèi)齒斑pH響應(yīng)值的第二種情況。
附圖3．表示在鈣、精氨酸和止齲陰離子加入培養(yǎng)混合物之前3小時和之后3小時時用11.2mM葡萄糖培養(yǎng)的唾液沉淀物的pH響應(yīng)值。所加止齲陰離子是碳酸鹽/碳酸氫鹽?？瞻讓φ瞻ㄌ妓徕}、碳酸氫精氨酸和兩者皆無。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及包含分布在口腔用載體內(nèi)的抗齲劑的口腔組合物。特別是，本發(fā)明公開了含有分布于口腔用載體內(nèi)并達到治療量的鈣、精氨酸和止齲陰離子的口腔組合物。術(shù)語“止齲”是指能夠延緩或預(yù)防包括齲斑脫礦質(zhì)作用在內(nèi)的牙齒齲化的試劑。正如本文所述，止齲陰離子是能夠增強鈣和精氨酸抗齲活性的生物適用性陰離子。能夠提高抗齲活性的陰離子實例包括例如，那些加至含鈣和精氨酸組合物中、能夠產(chǎn)生比不含有止齲陰離子在內(nèi)的相同口腔組合物更良好的齲化延緩功效和預(yù)防作用的陰離子。生物適用性陰離子為口服給予哺乳動物并不產(chǎn)生副作用的陰離子。止齲陰離子的具體實例包括例如，碳酸氫鹽、碳酸鹽、甘油磷酸鹽、肌醇六磷酸鹽及其肌醇磷酸鹽衍生物，等等。
可接受的口腔用載體包括，例如，任何常規(guī)口腔用釋放體系，如護齒產(chǎn)品、食品和口香糖。護齒產(chǎn)品的例子包括諸如牙粉、潔齒液或牙膏，液體、粉末、凝膠或片劑形式的漱口劑，以及牙線。含有本發(fā)明口腔組合物的食品的實例包括，如錠劑和糖果。
本發(fā)明所定義的鈣、精氨酸和止齲陰離子的治療量是指這些抗齲劑足以中和齒斑代謝碳水化合物所產(chǎn)酸并同時減少牙釉質(zhì)脫礦質(zhì)或增強再礦化的用量。例如，潔齒劑中可含有0.5-4％(V/V)并優(yōu)選1-3％(V/V)的抗齲劑量；漱口劑可含有0.5-3.5％(V/V)并優(yōu)選1-3％的抗齲劑。
在一個優(yōu)選實施方案中，口腔組合物含有5μg/mg-200μg/mg的鈣、5μg/mg-700μg/mg的精氨酸和5μg/mg-600μg/mg的肌醇六磷酸或5μg/mg-200μg/mg的碳酸氫鹽或5μg/mg-200μg/mg的碳酸鹽。在一個更優(yōu)選的實施方案中，口腔組合物進一步含有200-1500ppm的氟化物。
本發(fā)明進一步描述了含抗齲劑的口腔組合物的制備方法。具體地說，本發(fā)明描述了制備在口腔用載體內(nèi)含有治療量的鈣、精氨酸和止齲陰離子的口腔組合物的方法?？谇唤M合物的制備方法取決于所用口腔用載體和對抗齲劑溶解性的要求。在一個實施方案中，可首先用精氨酸游離堿(例如氫氧化精氨酸)滴定止齲陰離子的酸形式并隨后再用氫氧化鈣滴定。在另一實施方案中用氫氧化精氨酸以及一種或多種含鈣化合物(例如碳酸鈣)將止齲陰離子的酸形式滴定至口腔組合物所需pH值。也可通過將抗齲陰離子滴定至口腔組合物所需pH來制備抗齲劑。將所得組合物干燥并加入粉末形式的鈣并與組合物充分混合。當抗齲陰離子與鈣形成可溶性鹽，則繼加入鈣之后可再加入精氨酸。當抗齲陰離子為碳酸氫根或碳酸根時，抗齲組合物的制備需首先使用精氨酸而非鈣來滴定碳酸氫根或碳酸根而這是由于碳酸鈣的溶解度低而碳酸氫精氨酸鹽的溶解度高。
可首先從氫氧化精氨酸并通過二氧化碳氣泡的通入或通過向精氨酸游離堿溶液加入過量干冰來制備碳酸氫精氨酸?？杉尤脞}作為口腔組合物的鈣組分。用于形成本發(fā)明口腔組合物的含鈣化合物的優(yōu)選實例包括，例如，可溶性有機磷酸鈣、低溶解性的有機磷酸鈣或碳酸鈣。碳酸鈣是口腔用載體為牙粉時的優(yōu)選方案。而碳酸鈣是已知的磨光劑。
本發(fā)明口腔組合物中的抗齲劑可相互作用從而生成復(fù)合化合物。例如，當止齲陰離子為肌醇六磷酸根時，鈣和精氨酸可與肌醇六磷酸根結(jié)合并生成肌醇六磷酸精氨酸鈣復(fù)合物(CAP復(fù)合物)。
除抗齲劑之外，本發(fā)明所述口腔組合物可含有特定口腔用載體的任何常規(guī)組分。例如，液體漱口劑可包含溶劑，如蒸餾水或去離子水、醇等；甜味劑，例如糖精、天冬甜精等；矯味劑，例如薄荷油、留蘭香油等。牙膏或牙用凝膠可含有例如，水、甘油或山梨糖醇；標準含量為20-60％(重量)的常規(guī)磨料，如焦磷酸鈣、氫氧化鋁、樹脂、不溶性偏磷酸堿金屬鹽以及類似物；標準含量為0.5-5.0％(重量)的粘合劑，例如羥乙基纖維素、黃原膠、羧甲基纖維素鈉；標準含量為0.5-3.0％(重量)的發(fā)泡劑，例如十二烷基硫酸鈉、椰油基單甘油酯磺酸鈉、N-甲基-N-棕櫚?；；撬?tauride)鈉等；矯味劑；甜味劑；防腐劑和特定制劑所需的任何其它組分。除抗齲劑外，牙粉可含有常規(guī)磨料和矯味劑。片劑和粉末可含有，例如，載體，如乳糖、麥芽糖等；粘合劑，如玉米淀粉、羧甲基纖維素等；以及崩解劑。
本發(fā)明所述口腔組合物可用于口腔而不造成脫鈣，否則會損傷牙釉質(zhì)?？谇唤M合物的pH通常介于約6.0-約9.0。在一個實施方案中，口腔組合物的pH介于約7.0-約8.0。此處所述口腔組合物的pH可用例如鹽酸的酸和例如氫氧化鈉的堿來調(diào)控。
本發(fā)明還公開了包括將本發(fā)明的有效治療量口腔組合物釋放到口腔內(nèi)的減少齲齒的方法。本發(fā)明所定義的口腔組合物有效治療量是指能夠通過減少或中和齒斑因代謝碳水化合物而產(chǎn)生的酸并同時通過提供鈣經(jīng)濃度作用來抑制牙齒溶解或增加再礦質(zhì)作用以使牙釉質(zhì)、牙骨質(zhì)和牙質(zhì)脫礦化作用減少從而達到延緩和預(yù)防牙齒齲化的口腔組合物用量。例如，按照本發(fā)明方法釋放的潔齒劑可含有0.5-4％并優(yōu)選1-3％的抗齲劑。漱口劑可含有0.5-3.5％并優(yōu)選1.0-3.0％的抗齲劑。
在不受任何理論約束下，據(jù)信在止齲陰離子為有機磷酸根時，止齲陰離子可通過在牙釉質(zhì)上提供表面抑制劑并水解生成以濃度作用方式抑制牙釉質(zhì)溶解的正磷酸根來減輕牙齒脫礦質(zhì)作用。在止齲陰離子為碳酸氫根或碳酸根的情況中，碳酸氫根或碳酸根陰離子被確信為能夠以三種方式減輕脫礦質(zhì)作用。第一種是通過提供緩沖作用來減少齒斑和牙齒表面中造成牙礦物質(zhì)溶解的酸量。第二種是通過將pH保持在接近齒斑菌的最佳精氨酸降解pH值(在7.0和8.0之間)來增強精氨酸的酸中和能力。第三種是通過降低中和酸時的二氧化碳濃度并生成氫氧化鈣來使牙釉質(zhì)再礦化。
本發(fā)明還提供了包括包裝材料和置于所述包裝材料中的本發(fā)明口腔組合物的產(chǎn)品，其中該口腔組合物能有效延緩或預(yù)防牙齒齲化并且其中包裝材料帶有說明該口腔組合物可有效延緩或預(yù)防牙齒齲化的標簽。口腔組合物所用的包裝材料可以包括玻璃、塑料、金屬或其它適當?shù)亩栊圆牧?。例如，含本發(fā)明口腔組合物的潔齒劑可被包裝在牙膏管內(nèi)，典型的有鋁，內(nèi)襯鉛，或塑料或擠壓泵或加壓分配器，可將內(nèi)容物定量給出，或在可撕開小袋內(nèi)。
為進一步說明本發(fā)明，我們完成了下列實施例中的試驗。應(yīng)當理解的是本發(fā)明不受到具體實施例或本文所說細節(jié)的限制。實施例中的試驗結(jié)果在附圖和附表中列出。
實施例1本實施例描述一種制備適宜本發(fā)明的含肌醇六磷酸精氨酸和肌醇六磷酸精氨酸鈣的抗齲劑的方法。這些抗齲劑還是指肌醇六磷酸精氨酸鈣(CAP)鹽。在第一步中，從肌醇六磷酸鈉、利用經(jīng)Kaufman和Kleinberg(1971)在Archs Oral Biol.16:445-460中改進的Harrison和Mellanby方法(1939)來制備肌醇六磷酸。這些文獻中的方法在此引入作為參考。
將約100g的肌醇六磷酸鈉或鈣(購自NutritionalBiochemicals,Cleveland,Ohio)溶解于200ml蒸餾水中并用濃鹽酸將pH調(diào)至1.0。隨后加入氯化鐵(0.26M)，生成了肌醇六磷酸鐵的白色沉淀。通過離心分離出液相中的沉淀并隨后棄去上清液。用約1.5L/次的蒸餾水洗滌沉淀物3次。將沉淀懸浮在蒸餾水中并用NaOH將溶液pH調(diào)至11.0和12.0的范圍內(nèi)。生成氫氧化鐵的絮凝沉淀物。在1600g下離心20分鐘以沉積出沉淀物。傾出上清液并用0.1NNaOH洗滌沉淀物1次。將洗滌液和上清液合并，再重復(fù)兩次上述沉淀過程。
隨后使肌醇六磷酸鈉溶液通過Dowex陽離子交換樹脂(BioRad50W-x8,100-200目，H+型，購自Calbiochem,Los Angels,California)，使肌醇六磷酸鹽轉(zhuǎn)化為肌醇六磷酸。從對無機磷和總磷的分析得出肌醇六磷酸濃度為0.011M，同時無機正磷酸(P1)濃度為0.002M并且該濃度約占總磷濃度的3％。
利用下述方法可將P1所示的以總磷計的百分率從總量的百分之3降低至百分之0.1。使一等份，通常為20ml的0.011M肌醇六磷酸儲備液，流經(jīng)裝有Dowex陰離子交換樹脂(BioRad AG1-×8,200-400目，Cl-型，購自Calbiochem,Los Angeles)的玻璃柱(1.0×30cm)。首先是用50ml的0.25M LiCl將P1洗脫下來；隨后用40ml的1.0M LiCl洗脫出肌醇六磷酸根。
凍干肌醇六磷酸級分并用5ml無水甲醇洗滌殘余物6次以除去級分中的LiCl。在通氣蒸發(fā)下除去剩余甲醇。殘余肌醇六磷酸根以肌醇六磷酸鋰鹽存在，隨后將該鹽溶解在蒸餾水中。
使肌醇六磷酸鋰經(jīng)過內(nèi)含Dowex陽離子交換樹脂(50-x8,H+型)的玻璃柱(1.0×30cm)并用20ml蒸餾水洗脫，使肌醇六磷酸鋰轉(zhuǎn)化為肌醇六磷酸。凍干洗脫物以得到濃縮肌醇六磷酸并除去殘余HCl。將殘余物溶解并凍干6次以確保HCl的完全除去。
對所得肌醇六磷酸水溶液中無機磷和有機磷的分析表明肌醇六磷酸的摩爾濃度為59.3mM。無機磷的摩爾濃度為3.8mM。在此濃度時，以無機磷形式存在的僅為總磷的1.05％。
進一步將10ml肌醇六磷酸用氫氧化精氨酸(0.5M)滴定至pH為7.0。逐步加入氫氧化精氨酸以反復(fù)進行滴定，從而分離出等摩爾分步量的肌醇六磷酸等份。這是由于精氨酸在準備試驗中表現(xiàn)出令人驚奇的類似于一價的特性。
為制備肌醇六磷酸精氨酸鈣鹽，首先利用上述分步量的精氨酸來制備肌醇六磷酸精氨酸鹽。然后用濃度為0.02M的新制飽和Ca(OH)2滴定肌醇六磷酸至pH為7.0。被滴定液的pH在各滴定試驗中都用玻璃-甘汞混合電極進行測定。
制備肌醇六磷酸精氨酸和肌醇六磷酸精氨酸鈣后，將化合物冷凍干燥36小時至干燥(Virtis凍干器，Virtis,Gardiner,紐約)。分析所有化合物的無機磷及有機磷和總氮量并分析肌醇六磷酸精氨酸鈣的鈣。
各化合物中的精氨酸含量是在經(jīng)硫酸-過氧化物消化(如Singer和Kleinberg(1983),Archs.oral Biol.28:873-878所述)后根據(jù)Nessler氏方法測得的氮濃度來確定的。該文獻在此引入作為參考。
肌醇六硫酸精氨酸鈣化合物中的含鈣量是用Perkin-Elmer 330原子吸收分光光度計和用于原子吸收分光光度計分析方法的Perkin-Elmer手冊進行分析測定的。
無機磷和有機磷的含量按照Chen等人(1956)在分析化學(xué)，28:1756-1758(在此引入作為參考)中所述方法進行測定，簡單而言，各化合物中的無機磷是通過向化合物水溶液中加入鉬酸銨水溶液再加入硫酸后用分光光度計在600nm下測定顯色來確定的。有機磷的含量是在將化合物用高氯酸和硫酸水解后以相同的方式進行測定。
為分析鈣、磷和氮，將0.2mg的每種化合物溶解在蒸餾水中。當溶解完全后，在分析前，在Beckman152 Mirofuge中于9,000g下離心5分鐘以沉淀懸浮液。將沉淀溶于pH為4.0的乙酸中并進行同樣的分析。雖然所有組合物皆易溶于酸，但仍需對各組合物中性制劑的溶解組分/不溶組分進行兩步分析。
由于肌醇六磷酸為多價化合物，所以能以多種比例攜帶作為陽離子的精氨酸和鈣。復(fù)合物中結(jié)合的鈣越多，復(fù)合物將更不易溶，而復(fù)合物結(jié)合的精氨酸越多，復(fù)合物將更易溶(參見表1-4)。
表1．不同摩爾比例鈣/精氨酸/肌醇六磷酸的CAP鹽沉淀出現(xiàn)時的pH值和高于此值的pH化合物 沉淀pHCAP0***CAP1***CAP26.80CAP36.09CAP45.62CAP55.00***至少在高達pH 7.0時無沉淀。該類滴定試驗中導(dǎo)致沉淀的pH越低，鹽的溶解度越小。
表2．制得的肌醇六磷酸精氨酸和5種不同CAP鹽的鈣含量。
結(jié)果是3個分析值±SEM的平均值鈣(μg/mg CAP組合物的干重)化合物 上清液 沉淀物總和+ppteCAP00.0 ***0.0CAP111.1±0.3 *** 11.1CAP213.2±1.311.6±1.9 24.8CAP317.4±1.329.5±2.2 47.0CAP414.9±1.338.6±2.2 53.5CAP510.3±0.7144.7±0.0 155.0***無沉淀表3．制得的肌醇六磷酸精氨酸和5種不同CAP鹽的精氨酸含量。
結(jié)果是3個分析值±SEM的平均值精氨酸(μg/mg CAP組合物的干重)化合物 上清液 沉淀物 總和+ppteCAP0681.8 *** 681.8CAP1681.8±12.4 *** 681.8CAP2524.8±3.40.0 524.8CAP3472.4±4.9 5.2±1.7 477.7CAP4372.8±4.6 8.8±1.3 381.5CAP5192.3±4.8 41.4±0.5233.7***無沉淀表4．制得的肌醇六磷酸精氨酸和5種不同CAP鹽的肌醇六磷酸含量。結(jié)果是3個分析值±SEM的平均值肌醇六磷酸(μg/mg CAP組合物的干重)化合物 上清液沉淀物總和+ppteCAP0307.6 *** 307.6CAP1307.6 *** 307.6CAP2292.9 0.0 292.9CAP3290.7 59.6350.3CAP4231.9 96.8328.7CAP5180.1 315.2 495.3***無沉淀實施例Ⅱ本實施例描述一種制備適宜本發(fā)明的碳酸氫精氨酸鈣/碳酸鈣口腔用組合物。在第一步中，碳酸氫精氨酸的制備是通過將15g精氨酸游離堿(氫氧化精氨酸)溶解在100ml蒸餾水中并且所得溶液的pH為10.5，然后加入氣體形式或固體形式(干冰)的二氧化碳直至pH降至8.5。在此pH值下，氫氧化精氨酸全部轉(zhuǎn)化為碳酸氫精氨酸。當加入干冰時，應(yīng)使其以連續(xù)片體形式插入氫氧化精氨酸溶液中直至使氫氧化精氨酸轉(zhuǎn)化為碳酸氫精氨酸。然后通過常規(guī)技術(shù)干燥碳酸氫精氨酸溶液。最后，將碳酸鈣粉末按照具體制劑所需要的配比與碳酸氫精氨酸粉末混合從而制成碳酸氫精氨酸鈣/碳酸鈣組合物，例如，一份碳酸鈣粉末和一份碳酸氫精氨酸粉末混合。
實施例Ⅲ本實施例證實了本發(fā)明所述肌醇六磷酸精氨酸鈣對體內(nèi)牙釉質(zhì)脫礦化的延緩能力。具體而言，本實施例表明肌醇六磷酸精氨酸鈣對用口腔細菌和糖源培養(yǎng)的分離的臼齒的脫礦化具有延緩作用。
將臼齒在Kleinberg等人(1973),Archs.oral Biol.,18:787-798中研制的刺激口腔內(nèi)混合微生物代謝模型中進行培養(yǎng)。該模型使用在唾液沉積物內(nèi)的口腔混合細菌。所用唾液沉積物模型被該領(lǐng)域技術(shù)人員看作是口腔常見pH變化類型的有效替代物并在齲齒形成中十分重要。
為收集唾液沉積物，將咀嚼石蠟刺激的唾液吐至用碎冰猝冷的試管中。在收集唾液前，唾液提供者至少禁食12小時并在24小時內(nèi)不刷牙。提供者被指示在至少12小時內(nèi)禁食為的是提供含有最低水平外源碳水化合物的刺激的全唾液。Kleinberg和Jenkins(1964),Archs.oralBiol.,9:493-516。在收集后，將唾液在1740g下離心15分鐘并進一步將上清液吸除。然后，用冰冷的蒸餾水將沉積物洗滌3次以除掉任何殘余唾液上清液。經(jīng)洗滌的唾液沉淀用碎冰速凍直至進行分析試驗。
試驗還需制備人臼齒的一些部分。首先將恒臼齒儲存在蒸餾水中而不使其產(chǎn)生顯微裂紋，將頜、頰或舌表面的腐蝕仔細地用旋轉(zhuǎn)橡皮套浮石磨凈。擦凈后，沿中末端方向、用帶有被1％氣溶膠TO溶液(FisherScientific,Springfield,NJ)冷卻的圓形金剛石鋸條的低速鋸(BuehlerIsomet,Buehler LTD.,Evanstan,IL)將各牙齒豎直剖開。得到介于300-500μm的切片。將根部切除，用漆將牙質(zhì)和任何脫礦區(qū)域覆蓋，僅暴露出完好的牙釉質(zhì)。
在制得唾液沉積物和牙釉質(zhì)部分后可進行脫礦化試驗。在樣品培養(yǎng)和試驗前，將經(jīng)洗滌的唾液沉積物再懸浮于蒸餾水中直至最終濃度達到50％(v/v)。為進行驗證pH應(yīng)答的初步試驗，在含有16.7％(v/v)沉積物、5.6或28.0mM葡萄糖和終濃度為3.0mM的肌醇六磷酸精氨酸或肌醇六磷酸精氨酸鈣的10×75mm試管內(nèi)培養(yǎng)混合物(600μl)?？瞻讓φ瞻ê?1)沉積物和葡萄糖，(2)沉積物、葡萄糖和肌醇六磷酸鈉(3.0mM)以及(3)某些試驗中，沉積物、葡萄糖和精氨酸的培養(yǎng)混合物。當齒斑受到發(fā)酵性碳水化合物侵蝕時，葡萄糖濃度的所選范圍可在體外產(chǎn)生兩種類型的pH曲線。Kleinberg等人(1973)Archs.oral Biol.,18:787-798和Kleinberg等(1977)CariesRes.,11(Suppl.):292-320。將混合物在37℃的水浴中培養(yǎng)6小時。使用5.6mM或其它低濃度的葡萄糖時，pH迅速降低并達到最低值，隨后緩慢向基線遞增地回升(參見附圖1)。使用28mM或其它高濃度的葡萄糖時，pH也會迅速降低，然而降至更低并在余下的試驗階段內(nèi)出現(xiàn)極小的或沒有出現(xiàn)相繼地回升(見圖2)，而這是由于葡萄糖仍存在并繼續(xù)形成酸并維持酸性pH。所有培養(yǎng)混合物制劑都用碎冰中猝冷的試管進行實驗直至它們被轉(zhuǎn)移到37℃的水浴中進行培養(yǎng)。
在各試驗中，采用不含牙齒切片的空白樣品。帶有牙齒切片的混合物用于評估肌醇六磷酸精氨酸和肌醇六磷酸精氨酸鈣(CAP)化合物對牙釉質(zhì)脫礦的作用功效。不含有切片的混合物用于評價從非牙釉質(zhì)源釋放出的鈣和磷酸鹽。這些來源可包括沉積物中的鈣離子和磷酸根離子，少量從肌醇六磷酸精氨酸或CAP復(fù)合物釋放的殘留磷酸根和從CAP復(fù)合物釋放的鈣。
在培養(yǎng)前，各混合物的pH用1.0M的HCl或NaOH調(diào)至pH為7.0。在一半的混合物中加入牙釉質(zhì)切片。加入牙釉質(zhì)切片后，立刻將所有混合物在37℃的水浴中培養(yǎng)6小時并應(yīng)時振搖。在培養(yǎng)開始和此后的1、2、4和6小時用與Radiometer pH計相連的玻璃-甘汞混合電極記錄pH值。在相同的時間間隔從各混合物取樣(60μl)并在微量離心機(152Microfuge,Beckman)中于7700g下離心3分鐘。仔細地吸除各樣品的上清液并儲藏在4℃下以備隨后進行的如上所述的鈣和無機磷分析試驗使用。在含有牙釉質(zhì)的培養(yǎng)混合物中，培養(yǎng)結(jié)束時在雙目顯微鏡下觀測牙釉質(zhì)的脫礦化(光澤暗淡度增加)。脫礦化按0-4的標準進行評分，其中0是指無脫礦化，4是指嚴重脫礦化。
為培養(yǎng)試驗制備的肌醇六磷酸精氨酸(指定為CAP0)和五種CAP復(fù)合物(定義為CAP1-CAP5)中鈣、磷和肌醇六磷酸的含量列在表2-4中。CAP0-CAP5復(fù)合物含有增量的鈣和減量的精氨酸。肌醇六磷酸含量近似于除復(fù)合物CAP3以外的所有復(fù)合物。鈣在0-155.0μg/mg復(fù)合物之間變化。精氨酸濃度在233.7-691.8μg/mg復(fù)合物之間變化。
肌醇六磷酸精氨酸(CAP0)和肌醇六磷酸精氨酸鈣(CAP1-CAP5)對分別用低濃度和高濃度(5.6和28.0mM)葡萄糖培養(yǎng)的培養(yǎng)混合物的pH的作用功效如附圖1和2所示。使用5.6mM葡萄糖(附圖1)，培養(yǎng)進行30分鐘至1小時后，pH迅速降低并達到一個最低值。僅含沉積物和葡萄糖的混合物(空白對照)的pH降低最顯著。含有精氨酸最多的CAP混合物的pH升高得最顯著。肌醇六磷酸精氨酸組合物pH的較大提高歸因于肌醇六磷酸緩沖作用能保證精氨酸在更適宜的口腔pH下形成堿。含有CAP5的培養(yǎng)混合物，該混合物在五種CAP組合物中含有的精氨酸量最少，幾乎沒有顯示出pH-升高(附圖1)。這些結(jié)果證實了本發(fā)明所述肌醇六磷酸精氨酸和肌醇六磷酸精氨酸鈣拮抗口腔細菌降解葡萄糖時所生成的酸。
表5和6列出牙釉質(zhì)在用于不同培養(yǎng)試驗的唾液和葡萄糖中進行培養(yǎng)時的脫礦化。表5和6給出從在唾液沉積物-葡萄糖混合物(5.6mM)中培養(yǎng)的牙釉質(zhì)中釋放出的鈣和磷酸鹽，其中上述混合物含有或不含有精氨酸、肌醇六磷酸鹽、肌醇六磷酸精氨酸和多種CAP復(fù)合物。
與不含有上述組分和僅加入肌醇六磷酸鹽以及僅含精氨酸的空白對照相比，含有5.6mM葡萄糖、肌醇六磷酸精氨酸和不同CAP復(fù)合物的混合物在培養(yǎng)進行6小時后顯示出對牙釉質(zhì)釋放鈣量和磷酸鹽量的降低作用(表5和6)。與沉積物-葡萄糖空白對照相比，使用不同CAP化合物對鈣和磷溶解作用的降低程度分別為91.2-100％(表5)和60.1-97.0％(表6)。肌醇六磷酸精氨酸則更低。單獨含有精氨酸的組合物也表現(xiàn)出一定的牙釉質(zhì)脫礦化抑制作用，但該作用比肌醇六磷酸精氨酸和CAP復(fù)合物要弱。僅含肌醇六磷酸的空白對照則無效。表5．在不同CAP鹽存在下經(jīng)5.6mM葡萄糖混合物培養(yǎng)的牙釉質(zhì)釋放的鈣鈣(μg/ml)試驗化合物平均值±SEM％抑制CAP223.2 85.8CAP16.3 96.1CAP22.4 98.5CAP30.0 100.0CAP414.3 91.2CAP513.4 91.8精氨酸 67.1 58.8肌醇六磷酸鹽 112.6 30.9空白對照 163.0 0.0表6.在不同CAP鹽存在下經(jīng)5.6mM葡萄糖混合物培養(yǎng)的牙釉質(zhì)釋放的磷磷(ug/ml)試驗化合物 平均值±SEM％抑制CAP225.2 35.8CAP115.6 60.1CAP210.1 74.3CAP39.7 75.2CAP41.3 97.0CAP53.6 91.0精氨酸 24.1 38.5肌醇六磷酸鹽 39.7 0.0空白對照39.2 0.0牙切片的直接檢測表明了空白對照和CAP鹽之間的差異。
上述結(jié)果明確地證實了肌醇六磷酸精氨酸和肌醇六磷酸精氨酸鈣復(fù)合物在碳水化合物代謝過程中延緩了牙釉質(zhì)脫礦化作用。
表7和8列出了嚴重和長期的酸性pH值對肌醇六磷酸精氨酸和CAP復(fù)合物延緩牙釉質(zhì)脫礦化作用的影響。當齒斑菌處于高濃度的可發(fā)酵碳水化合物之中并長時間如此時，口腔中接近牙列的位置會出現(xiàn)上述酸性條件(附圖2)。在各培養(yǎng)混合物的試驗期間用乙酸鹽緩沖液維持pH為5.0。如這些表所示，肌醇六磷酸精氨酸和CAP組合物可顯著抑制此酸性pH下鈣和磷酸鹽的明顯溶解。在如此低的pH條件下肌醇六磷酸鈉幾乎與上述化合物同樣有效，由此可認為它對溶解具有降低作用。單獨使用精氨酸沒有效果，這是由于不存在能夠由其生產(chǎn)堿性終產(chǎn)物的細菌。
在pH為4.0、5.0和6.0條件下，用雙目解剖顯微鏡進行的肉眼觀測結(jié)果一般性地證實了上述作用(表9)。
上述研究清楚地證明了肌醇六磷酸精氨酸和CAP復(fù)合物有效抑制了牙釉質(zhì)切片的脫礦化。在如采用5.6mM葡萄糖時出現(xiàn)的高水平pH下和將切片暴露于含中等濃度精氨酸和鈣的CAP復(fù)合物中時尤其可觀察到這種作用。表7．在肌醇六磷酸精氨酸和不同CAP鹽存在下經(jīng)pH為5.0的1M乙酸緩沖液培養(yǎng)的牙釉質(zhì)切片釋放的鈣鈣(μg/ml)試驗化合物 平均值±SEM％抑制CAP223.2±3.8 61.9CAP1313.3+14.2 48.6CAP2250.6±13.858.9CAP3235.2±2.8 61.4CAP4170.1±23.772.1CAP5115.9±15.581.0肌醇六磷酸鹽 318.9±30.347.7空白對照 609.3±49.5 0.0表8.在肌醇六磷酸精氨酸和不同CAP鹽的存在下經(jīng)pH為5.0的1M乙酸緩沖液培養(yǎng)的牙釉質(zhì)切片釋放的磷磷(μg/ml)試驗化合物 平均值±SEM％抑制CAP070.0±17.4 60.8CAP189.3±21.7 50.0CAP269.7±14.6 60.9CAP377.9±14.5 56.4CAP455.2±9.9 69.1CAP544.5±2.5 75.1肌醇六磷酸鹽109.1±35.9 43.9空白對照178.6±57.6 0.0表9．在肌醇六磷酸精氨酸和不同CAP鹽的存在下經(jīng)pH分別為4.0、5.0和6.0的1M酸緩沖液培養(yǎng)8小時后的牙釉質(zhì)脫礦化評分值評分值化合物乙酸乙酸乙酸總平均分 抑制％pH4.0 pH5.0 pH6.0CAP22.01.0 0.0 1.0 62.5％CAP12.00.0 1.0 1.0 62.5％CAP22.00.0 0.0 0.6775.0％CAP32.01.0 0.0 1.0 62.5％CAP41.00.0 0.0 0.3389.5％CAP51.01.0 0.0 0.6775.0％肌醇六磷 2.01.0 1.0 1.3350.0％酸鹽空白對照 3.03.0 2.0 2.67 0實施例Ⅳ本實施例證明了含有鈣、精氨酸和碳酸氫鹽/碳酸鹽(CABC)的口腔組合物對體外牙釉質(zhì)脫礦化的延緩作用。具體而言，該實施例描述了鈣、精氨酸和碳酸氫鹽/碳酸鹽組合物將極酸性的pH條件(由于體內(nèi)的口腔細菌在大量并長存的可發(fā)酵糖降解時生產(chǎn)的)升至使精氨酸形成堿的最佳pH。同時還證明了對用口腔細菌和糖源培養(yǎng)的粉狀牙釉質(zhì)和牙質(zhì)脫礦化的延緩作用。除使用從人齒牙冠得到的粉狀牙釉質(zhì)代替牙切片之外，本試驗中采用實施例Ⅲ中的唾液沉積物模型。
按照Manly和Hodge(1939)在J.dent.Res.18,133-141，中描述的浮選法制備粉狀牙釉質(zhì)，該文獻在此引入作為參考。首先，仔細地將恒齒洗凈并隨后在球磨中粉碎成細粉并經(jīng)60目篩篩分以除去大顆粒。然后將篩分的牙粉用含有91％溴仿和9％丙酮(v/v)的溴仿/丙酮混合液(密度為2.70)通過比重分離法進行分離。牙釉質(zhì)部分略重(密度為2.9-3.0)。離心轉(zhuǎn)移出牙釉質(zhì)部分，用溴仿/丙酮混合液洗滌并蒸發(fā)至干。
制備分別含有16.7％(v/v)唾液沉積物和11.2mM葡萄糖并且總體積為2.4ml的五種培養(yǎng)混合物。將各混合物在37℃培養(yǎng)3小時并在0、0.5、1、2和3小時檢測它們的pH。3小時結(jié)束時，將各培養(yǎng)混合物等分成四組培養(yǎng)混合物(每份600μl)。向四組中第一組的每份混合物內(nèi)類似地加入作為混合粉末的1mg碳酸氫精氨酸和1mg碳酸鈣。在第二組中，向每份混合物中類似地加入0.5mg碳酸氫精氨酸和0.5mg碳酸鈣。在第3組中，加入1mg碳酸氫精氨酸；在第4組中，加入1mg碳酸鈣。第5組中不加入任何物質(zhì)。所有混合物都在冰浴中制備并迅速轉(zhuǎn)移到37℃的水浴中以將它們分別培養(yǎng)0、0.5、1.5和3小時并時而振搖。
記錄各時間間隔時從各組取出的一個試管中的pH值，然后將取出的各管分成兩份。其中的一半儲存在4℃下以進行隨后的鈣、磷分析。為達到此目的需轉(zhuǎn)移出雙份樣品(60μl)。另外一半加至1mg牙粉中并在37℃下培養(yǎng)2小時以評估其溶解作用。2小時后，不溶的牙粉以沉淀相通過在微量離心機中(152Microfuge,Beckman)于7700g下離心3分鐘從水相中分離出來。仔細地將各樣品的上清液吸去并儲存在4℃下以備隨后進行上述鈣、磷分析。將牙粉沉淀溶解在鹽酸中并且取出雙份樣品(60μl)進行同樣的鈣磷分析。
培養(yǎng)整6小時內(nèi)的pH變化如附圖3所示。在第一個3小時內(nèi)，pH快速降低并達到4.65的最小值。在第二個3小時內(nèi)，沒有附加成分的空白對照的pH進一步降低至4.51。對于加入了碳酸氫精氨酸和/或碳酸鈣的，pH立刻回升。pH升高最顯著的是同時含有碳酸氫精氨酸和碳酸鈣(CABC)的混合物。碳酸氫精氨酸在開始時也同樣出現(xiàn)快速的pH升高，但卻沒有使pH充分升高至足以拮抗存在的重度和長時間的酸度，這種酸度是高度齲化牙列位置的特征。碳酸鈣亦使pH迅速升高但與其它組合物相比僅能達到較低的程度并且不出現(xiàn)后繼升高。
牙粉分析試驗表明在培養(yǎng)的第一個3小時期間內(nèi)當pH從7.0降低至4.65時溶解作用達到20％，在培養(yǎng)的第二個3小時期間內(nèi)當pH降低至4.51時進一步溶解作用達到12％(共溶解32％)。加入碳酸鈣時，在第二階段時的進一步溶解達到9％。當加入碳酸氫精氨酸時，進一步溶解為16％。與此相反，碳酸氫鈣/碳酸氫精氨酸(1∶1)的結(jié)合使用不僅沒有出現(xiàn)再溶解，并且在培養(yǎng)的第一個3小時內(nèi)觀察到20％的損失被替代回收(共溶解0％)。其它碳酸鈣/碳酸氫精氨酸(0.5∶0.5)的結(jié)合使用表現(xiàn)出較弱的作用并在第二階段出現(xiàn)2％的進一步溶解。
pH結(jié)果證明CABC組合物對口腔內(nèi)由葡萄糖降解生成的酸導(dǎo)致的pH降低具有拮抗作用，并且該組合物能夠使pH升至足夠高以保證CBAC組合物中的精氨酸產(chǎn)生堿并使pH連續(xù)上升。本實施例進一步證實了本發(fā)明所述組合物能夠提供一種延緩或預(yù)防牙齒溶解并且減少或預(yù)防齲齒的方法。
權(quán)利要求
1．一種口腔組合物，其中包括分布在口腔用載體內(nèi)并以能夠減少齲齒的量存在的鈣、精氨酸和止齲陰離子。
2．權(quán)利要求1中的口腔組合物，其中止齲陰離子選自由碳酸氫鹽、碳酸鹽、甘油磷酸鹽、肌醇六磷酸鹽和肌醇磷酸鹽衍生物組成的一系列物質(zhì)。
3．權(quán)利要求1中的口腔組合物，其中以鹽形式提供的鈣選自由碳酸鈣、碳酸氫鈣和有機磷酸鈣組成的一系列物質(zhì)。
4．權(quán)利要求1中的口腔組合物，其中以鹽形式提供的精氨酸選自由碳酸氫精氨酸、碳酸精氨酸和有機磷酸精氨酸組成的一系列物質(zhì)。
5．權(quán)利要求1中的口腔組合物，其中該口腔組合物進一步含有有效治療量的氟化物。
6．權(quán)利要求1中的口腔組合物，其中該組合物含有5μg/mg-700μg/mg量的精氨酸。
7．權(quán)利要求1中的口腔組合物，其中該口腔組合物含有5μg/mg-200μg/mg量的鈣。
8．權(quán)利要求1中的口腔組合物，其中該口腔組合物含有一種或多種的5μg/mg-200μg/mg量的止齲陰離子。
9．權(quán)利要求1中的口腔組合物，其中該口腔組合物含有碳酸鈣、精氨酸和肌醇六磷酸鹽。
10．權(quán)利要求1中的口腔組合物，其中該口腔組合物含有碳酸鈣、精氨酸和碳酸氫鹽。
11．權(quán)利要求1中的口腔組合物，其中該口腔組合物為護齒產(chǎn)品。
12．權(quán)利要求1中的口腔組合物，其中該口腔組合物為食品。
13．權(quán)利要求1中的口腔組合物，其中該口腔組合物為口香糖。
14．一種制備權(quán)利要求1所述口腔組合物的方法，該方法包括下列連續(xù)步驟a)用充足量的氣態(tài)二氧化碳或干冰滴定氫氧化精氨酸溶液以形成碳酸氫精氨酸溶液；和b)用充足量的碳酸鈣滴定上述碳酸氫精氨酸溶液以形成碳酸氫/碳酸精氨酸鈣復(fù)合物。
15．一種制備權(quán)利要求1所述口腔組合物的方法，該方法包括下列連續(xù)步驟a)用氫氧化精氨酸溶液滴定有機正磷酸鹽溶液以生成有機正磷酸精氨酸復(fù)合物；和b)用足夠量的飽和氫氧化鈣滴定上述有機正磷酸精氨酸復(fù)合物以形成正磷酸精氨酸鈣復(fù)合物。
16．一種制備權(quán)利要求1所述口腔組合物的方法，該方法包括下列連續(xù)步驟a)用一定量的氫氧化精氨酸在適宜條件下滴定肌醇六磷酸溶液以生成肌醇六磷酸精氨酸復(fù)合物；和b)用足夠量的碳酸鈣滴定該肌醇六磷酸精氨酸復(fù)合物以形成碳酸肌醇六磷酸精氨酸鈣復(fù)合物。
17．一種制備權(quán)利要求1所述口腔組合物的方法，該方法包括下列連續(xù)步驟a)用一定量的氫氧化精氨酸在適宜條件下滴定肌醇六磷酸溶液以形成肌醇六磷酸精氨酸復(fù)合物；和b)用飽和氫氧化鈣滴定上述肌醇六磷酸精氨酸復(fù)合物以形成肌醇六磷酸精氨酸鈣復(fù)合物。
18．一種延緩齲齒的方法，其中包括將有效治療量的權(quán)利要求1所述口腔組合物釋放到口腔內(nèi)。
19．權(quán)利要求1中的口腔組合物，其中的pH介于5和9之間。
20．一種包括包裝材料和包在該包裝材料內(nèi)的所述口腔組合物的工業(yè)產(chǎn)品，其中該口腔組合物能夠有效延緩或預(yù)防牙齒齲化，并且該包裝材料裝有說明該口腔組合物能有效延緩或預(yù)防齲齒的標簽。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有分布在口腔載體內(nèi)的抗齲劑的口腔用組合物。特別是，本發(fā)明提供了含有分布于口腔用載體內(nèi)的鈣、精氨酸和止齲陰離子的口腔組合物。本發(fā)明還提供了一種制備含抗齲劑的口腔用組合物的方法。本發(fā)明還提供了一種包括將有效治療量的含鈣、精氨酸和止齲陰離子在內(nèi)的口腔組合物釋放到口腔內(nèi)的減少齲齒的方法。
文檔編號A61K31/6615GK1227483SQ97196996
公開日1999年9月1日 申請日期1997年3月4日 優(yōu)先權(quán)日1996年3月5日
發(fā)明者I·克萊伯格, A·M·阿克威多, R·查特杰 申請人:紐約州立大學(xué)研究基金會