專利名稱：協同作用的含金組合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物及其它們在治療皮膚疾病上的用途，所述的藥物組合物包括與皮質類固醇組合的金化合物。
背景技術：
自1960年代以來人們已經知道金化合物在治療類風濕性關節(jié)炎中的有效性。最近，金復合物已被用于治療類風濕性關節(jié)炎的治療劑，但它們的真正機制仍然是未知的。最常用的復合物是水溶的，非胃腸道給藥的硫羥酸金(Au(I))，如硫羥酸金鹽(Mycrisin)和金硫代葡萄糖(Solganol)。結果，當口服給予輔助的關節(jié)炎大鼠時，許多烷基膦金復合物顯示出抗關節(jié)炎活性。金諾芬(1-硫代-β-D-吡喃型葡萄糖2,3,4,6-四乙?；?S)-(三己膦)-Au(I))是其中最有效的試驗化合物，現被用于治療人體的風濕性關節(jié)炎。
金化合物也通過靜脈和口服途徑給藥以治療哮喘、肺結核、普通天皰瘡、各種關節(jié)炎、癌癥和炎癥。但是，用金化合物治療也通常有不可接受的情況，偶然有嚴重的副作用。
皮質類固醇也被發(fā)現有相似的治療用途。自皮質類固醇首次局部給藥以來，局部給予皮質類固醇在治療皮膚炎癥和增生疾病上的成功導致人們積極地開發(fā)新的皮質類固醇。通過化學修飾天然皮質類固醇、氫可的松能增強效果，但尚未準確地了解皮質類固醇的作用機理。開發(fā)更有效的皮質類固醇已擴展到它們在各個皮膚疾病里的應用，但是，特別是長期使用也帶來不利的作用。已知全身使用皮質類固醇具有諸如下丘腦腦垂體腎上腺軸抑制的全身作用。局部使用后僅在用更強力的合成的類固醇時才觀察到局部副作用。
局部使用皮質類固醇的最常見的嚴重副作用是皮膚變薄，出現條紋和毛細管擴張。長期用極有效的皮質類固醇治療期間，炎癥細胞受到影響，角質化細胞的繁殖和成纖維細胞的活性也受到抑制。
成纖維細胞合成了皮膚的重要結構和功能組分，即膠原質、彈力素和葡糖胺聚糖。抑制了角質化細胞繁殖導致表皮變薄。雖然對表皮的影響通常是可逆的，但真皮會被不可逆地損傷。
最近已發(fā)現在治療諸如牛皮癬的皮膚疾病中使用金有機復合物。這樣，澳大利亞專利616,755揭示了使用金諾芬和皮質類固醇組合的局部制劑治療諸如與牛皮癬有關的局部炎癥。特別是，用含金諾芬和倍他米松二丙酸酯的制劑治療與相同濃度的單個活性組分比較顯示了明顯的協同作用。金化合物對皮質類固醇有協同作用的發(fā)現使金化合物和皮質類固醇在制劑里能以較低水平使用，這樣能更有效，同時避免與單獨使用金化合物或皮質類固醇有關的公知副作用。
皮膚疾病除了發(fā)炎外還伴有明顯的表征。例如，牛皮癬也含細胞過度增殖(增生)的部分，其機理完全不同于發(fā)炎，因此不一定會被金/皮質類固醇制劑所影響。此外，不同皮膚病的發(fā)炎組成范圍從極溫和到極嚴重，這需要制劑改變，特別是改變皮質類固醇的選擇，所選擇的皮質類固醇不僅對治療發(fā)炎癥狀的有效合適，且對諸如細胞增殖的另外癥狀的皮膚疾病也有特異的作用。
其它免疫、自體免疫和感染疾病也有多種表征，其中有效治療可根據被治療的疾病和對病人的評定，依賴于針對疾病表征中的一個表征，或多個表征。
本發(fā)明基于皮質類固醇與金化合物結合使用時就作用的加強程度和加強作用的類型方面存在著重要不同的發(fā)現。就是說，不同的皮質類固醇與金化合物組合時不都對炎癥產生預期的相似的協同作用，對炎癥和增生也有不同的協同作用。在本發(fā)明組合物中，某些皮質類固醇與金化合物協同，對諸如牛皮癬的發(fā)炎疾病有更大的效果，而其它的皮質類固醇則優(yōu)選地提高組合物對細胞增殖的作用。預期本發(fā)明的組合物也可有效地用來治療各種全身性，組織特異或局部化的免疫、自體免疫和炎癥疾病。
發(fā)明綜述本發(fā)明的第一方面是治療有一種或多種表征的免疫介導疾病的方法，包括對需要這類治療的病人給予金化合物和至少一種皮質類固醇，其中至少一種皮質類固醇選自與金化合物相互協同，對所述疾病的表征之一有優(yōu)先作用，或對所述疾病的每個表征顯示相同作用。
本發(fā)明的第二方面是一種藥物組合物，包含金化合物和一種或多種皮質類固醇，它們與藥學上可接受的載體、賦形劑、佐劑或溶劑組合，所述的皮質類固醇選自與金化合物相互協同，對免疫介導疾病的特定表征有特異作用。
本發(fā)明的另一個方面是治療有一個或多個表征的免疫介導的疾病，包括對需要這類治療的病人給予一種或多種組合物的步驟，所述的組合物包含一種金化合物和一種或多種皮質類固醇，其中所選擇的皮質類固醇提供了一種對所述疾病的表征之一有優(yōu)先作用的協同組合物。
本發(fā)明的另一個方面是治療有多個表征的免疫介導的疾病的方法，所述的方法包括對需要這類治療的病人給予一種或多種組合物的步驟，所述的組合物包含一種金化合物和一種或多種皮質類固醇，其中所選擇的皮質類固醇提供了一種對所述疾病的表征之一有優(yōu)先作用的協同組合物。
本發(fā)明的另一個方面是治療有多個表征的免疫介導的疾病的方法，所述的方法包括對需要這類治療的病人給予一種或多種組合物的步驟，所述的組合物包含一種金化合物和一種或多種皮質類固醇，其中所選擇的皮質類固醇提供了一種對所述疾病的每個表征有相等作用的協同組合物。
本發(fā)明的另一個方面是治療有一個或多個表征的免疫介導的疾病的方法，所述的方法包括對需要這類治療的病人給予一種或多種包含一種或多種皮質類固醇的組合物的步驟，其中所選擇的皮質類固醇提供了一種對所述疾病的表征之一有優(yōu)先作用的協同組合物，其中含金化合物的組合物被口服給藥，含一種或多種的皮質類固醇的一種或多種組合物被局部給藥，其用量是有效地提供金和皮質類固醇對所述表征有優(yōu)先作用的協同組合物的量。
優(yōu)選的是，免疫介導疾病的表征包括炎癥和細胞增殖，組合物包括至少兩種皮質類固醇，選擇其中一種以提供對炎癥有優(yōu)先作用的協同組合物，選擇第二種皮質類固醇以提供對所述疾病的細胞增殖有優(yōu)先作用的協同組合物。
優(yōu)選的是，被治療的疾病是免疫介導的皮膚疾病，它有一種以上的表征。免疫介導的皮膚疾病包括牛皮癬或皮炎，如接觸性皮炎、特異反應性皮炎或皮脂溢性皮炎。其它疾病包括類風濕性關節(jié)炎。典型的表征包括發(fā)炎和/或細胞增殖。細胞增殖表征由細胞增生所表現?？蛇x擇皮質類固醇，以提供其活性對細胞增殖優(yōu)先于炎癥的協同組合物，反之亦然。這類皮質類固醇可選自，如倍他米松二丙酸鹽和氟輕松。對于對炎癥作用優(yōu)先于對細胞繁殖作用的情況，皮質類固醇優(yōu)選地選自莫米松糠酸鹽和倍他米松二丙酸鹽。
組合物適合配制成局部給藥的制劑。
當免疫介導的疾病的特征在于許多不同表征時，優(yōu)選的治療方法是使用一種或多種組合物，所述的組合物包含金化合物和一種或多種皮質類固醇，其中皮質類固醇被選擇來提供僅對所述疾病的一個表征有優(yōu)先活性的組合物。這樣，每個單個表征通過使用含一種或多種選定的皮質類固醇的組合物來治療，它們可以兩種或多種分開的組合物形式或含兩種或多種皮質類固醇的單組合物形式施加。
優(yōu)選的是，用于本發(fā)明的金化合物是脂溶性的。更優(yōu)選的是，使用的金化合物被配制成局部外用給予的制劑。但是，應當明白，全身或局部給予的組合物，包括通過注射，優(yōu)選的是關節(jié)內注射的組合物也在本發(fā)明的范圍里。就此而言，皮質類固醇可配制成供口服、局部外用、全身或局部給藥的制劑。
本發(fā)明的另一個方面是包含金化合物和一種或多種皮質類固醇，并結合了藥學上可接受的載體、賦形劑、佐劑或溶劑的藥物組合物，選擇皮質類固醇以提供對免疫介導的疾病的特定表征有特異作用的協同組合物。
優(yōu)選的是，金化合物是金諾芬，皮質類固醇選自氫可的松乙酸酯、氫可的松、倍他米松、地塞米松、氟可龍21-新戊酸酯、曲安奈德、倍他米松戊酸酯、阿氯米松二丙酸鹽、哈西奈德、倍他米松二丙酸鹽、莫米松糠酸鹽或氟輕松。更好的皮質類固醇選自氫可的松、倍他米松二丙酸鹽、莫米松糠酸鹽或氟輕松。
附圖簡述

圖1顯示金諾芬和糖皮質激素單獨使用或組合使用對TPA-誘導的上皮增生的作用的柱狀圖。BMD倍他米松二丙酸鹽；HYD氫可的松；FA氟輕松；MMF莫米松糠酸鹽；AF金諾芬?？v線表示平均標準差(SEM)。
圖2顯示金諾芬和糖皮質激素單獨使用或組合使用對TPA-誘導的炎癥細胞滲透作用的柱狀圖。BMD倍他米松二丙酸鹽；HYD氫可的松；FA氟輕松；MMF莫米松糠酸鹽；AF金諾芬?？v線表示平均標準差(SEM)。
優(yōu)選技術方案的揭示常規(guī)來說，TPA(12-O-四癸基佛波醇13-乙酸酯)，牛皮癬的模式，作為有炎癥和細胞增殖的免疫介導疾病的例子，可用來顯示不同皮質類固醇的特異作用及金化合物和皮質類固醇不同制劑的特異作用。
雖然除人體外的動物不發(fā)生牛皮癬，但研究顯示，使用TPA產生了許多方面類似于牛皮癬的具有上皮增厚的炎癥反應。它產生了上皮增生，發(fā)炎細胞滲入真皮。兩者特征都是牛皮癬的特征。
TPA增加了磷酸酯酶C/肌醇三磷酸酯/二?；视拖到y(tǒng)的活性。該系統(tǒng)活化了蛋白質激酶C和花生四烯酸途徑。這些系統(tǒng)都隱含了牛皮癬致病病理。以TPA處理的小鼠被認為是牛皮癬的適宜的模型。該動物模式可被用來顯示不同皮質類固醇的不同作用和含金化合物和皮質類固醇組合物的協同效果。
測量三種參數皮膚交迭厚度、上皮增生和發(fā)炎細胞滲入真皮。這些特征，特別是最后兩個特征是牛皮癬的證明。但是，值得注目的是，目前的發(fā)現已清楚地涉及到超出僅對皮膚治療的范圍。用本發(fā)明組合物治療對全身或組織發(fā)炎和增生病情也是有利。
局部外用的皮質類固醇根據它們的強度可將局部外用的皮質類固醇分組弱，中等，強和極強。血管收縮分析被認為是評價各種制劑強度的最好方法。尚未知測量血管收縮是否能預報抗炎活性?？傻玫降钠渌治龇椒òㄅR床試驗、真皮厚度放射線照片、上皮厚度的解剖評估和有絲分裂抑制分析。
表1顯示了對局部外用皮質類固醇制劑相對效力的有用的臨床指南，對于軟膏劑和霜劑有相同的等級劃分。每組制劑大致等效。
表1局部外用皮質類固醇臨床效果指南

<p>本發(fā)明將參照特定的技術方案通過非限定性實施例作更特定的揭示。
實施例1動物處理和測量方法材料金諾芬由Smith Kline和Beecham Pharmaceuticals(美國費城)捐獻。
阿氯米松二丙酸酯、倍他米松二丙酸酯、倍他米松戊酸酯、倍他米松(游離醇)和莫米松糠酸酯由Schering-Plough Pty.Ltd.(澳大利亞，NSW)捐獻。
哈西奈德、氫可的松和曲安奈德由Bristol-Myers Squibb Pharmaceuticals Pty.Ltd.捐獻。
地塞米松由Roussel Uclaf(法國巴黎)捐獻。
氟可龍21-新戊酸鹽由Schering AG.(德國柏林)捐獻。
從Sigma Chemical Company(澳大利亞NSW)得到12-O-四癸基佛波醇13-乙酸酯、氟輕松、硫酸鉀鋁、碳酸氫鈉、碘酸鈉、硫酸鎂、曙紅Y、焰紅染料、碳酸鈣、甲醛乙酸(17M)、百里酚、二甲苯、蘇木精和“Paraplast”組織埋入介質。
從Wille實驗室(澳大利亞昆士蘭)得到Sorbolene霜A.P.F。
金諾芬0.2％溶液的制備將金諾芬(20毫克)溶于10毫升丙酮，得到濃度為0.2％。每個實驗新鮮制備金諾芬溶液。
金諾芬軟膏的制備根據下列配方制備各種濃度的金諾芬軟膏濃度(％重量/重量)金諾芬丙二醇(10％) 白色軟石蠟0.20 40mg 2克加到20克0.50 100mg 2克加到20克動物的處理方法從悉尼大學得到6-8周齡的雌性BALB/c小鼠，根據悉尼大學動物照料和道德規(guī)范委員會許可的方案進行處理。
將小鼠喂養(yǎng)在不銹鋼的籠子里，在實驗前于正常的實驗條件(約22℃的室溫)下每個籠子放置6個小鼠達至少7天以順應環(huán)境。在實驗階段隨意給予食物和水。在每個處理前兩天，用電剪刀刮去小鼠背上的毛，只使用沒有鼠毛再生長的小鼠(即選擇處于毛發(fā)生長周期中的休息相的小鼠)。在處理期間，舉起小鼠尾巴，放在籠子的頂部使它們能拉住籠子，并在其上休息。通過用“Pipetman”將溶液施加到已刮去毛背部的面積約2cm×2cm上。若施加金諾芬軟膏或軟膏基，則通過使用一端卷曲的微量藥刀使用量標準化，然后將軟膏放入隆起部，通過另一個微量藥刀除去過量的物質，節(jié)制地每天施加兩次。在固定的時間后，在上午9點到11點之間通過頸部轉位來常規(guī)地殺死小鼠以避免由于晝夜節(jié)律改變引起的變化，用手術刀和剪刀從處理部位的中央割下(1厘米×1厘米)的區(qū)域。剩余的組織通過焚燒除去。然后使組織固定、嵌入、切片和染色。
皮膚切片的制備方法悉尼大學病理學系開發(fā)的方法適合于皮膚切片的制備，并得以成功。
固定、嵌入、切片和染色使用標準的制備方法。簡言之，將組織在10％緩沖的福爾馬林里固定24小時，用自來水沖洗10分鐘，然后在自動組織處理器(Tissue-Tek VIP 200)里處理。在自動組織處理器里。組織在梯度系列的醇和二甲苯里于室溫下脫水，然后在60℃下4次更換石蠟進行滲透(“Paraplast”組織標本介質)。最后嵌入了新鮮的石蠟里。
在American Optical Spencer“820”顯微鏡用薄片切片機上切割5微米厚的切片。然后用木膠水(“Selleys”等分物，用水1∶100稀釋)作為粘合劑將切片放置在潔凈的顯微鏡片上，在45℃的烘箱里干燥至少2小時(通常過夜)。
當切片在Scott藍色溶液里染藍后，在顯微鏡下檢查，以確定核被清楚地染色，細胞質未被染色。
皮膚交迭厚度的測量使刮毛小鼠的背部皮膚交迭并用“Etalon”微米螺旋計量器測量。每個小鼠進行一次測量。
測量上皮厚度通過成像分析來測定上皮厚度。該成像分析系統(tǒng)是一個與光顯微鏡(ZeissAxioplan)和攝像機-錄像機組合裝置(Sony DXC-3000P)連接的小型計算機(TracorNorthern TN8500)。從每個組織段上取出切片，每個切片以固定的間隔進行20次測量。得到20次測量的平均值作為每個小鼠的一個值。計算每個處理組里的6個小鼠的平均值和SEM。
測量炎癥細胞的滲透通過相同的成像分析系統(tǒng)，用埋入石蠟或Spurr樹脂的來自小鼠塊的切片，并依次用蘇木柴和曙紅或甲苯胺藍染色來測定炎癥細胞的滲透。對于每個切片，除非另外指出，任意選擇10個區(qū)域，并測定選定區(qū)域每mm2的細胞密度。得到10個區(qū)域的平均值，作為每個小鼠的一個值。計算每個處理組里6個小鼠的平均值和SEM值。
測定炎癥細胞的滲透包括在真皮里的其它材料以相同的方法染色的基底值。但是，增長值反映了炎癥細胞的遷移。
數據處理用下式計算出藥物對TPA-誘導的皮膚反應(即上皮增生、炎癥細胞滲透和皮膚交迭厚度)的抑制百分數

通常發(fā)現，劑量(或濃度)和反應之間的關系可用Michaelis Menton等式或其變體，如Hill等式來闡述。這使得人們能評估(a)效力，(b)效應或最大作用(E最大)和通過使用Hill系數(γ)評估對數濃度-反應曲線的斜率。Hill等式如下所示

其中IC50是產生最大反應的50％時藥物的濃度，E最大指由藥物產生的最大作用，也稱為效應。效應是測量藥物在其占據受體位點后引發(fā)反應的固有能力。在比較相似藥物的活性時測定E最大和IC50(效力)是很關鍵的。Hill系數(γ)測量了劑量-作用曲線的斜率，它明顯地被揭示藥物與受體結合的曲線的形狀所影響。對于許多藥物，γ在0.6和1.5之間。使用Hill系數不僅改進了數據的固定性，而且也指出了劑量或濃度對反應影響的改變例如當γ大于1時，斜率很陡，表示與藥物劑量或濃度有小的改變時藥物作用即有很明顯的改變。另一方面，當γ小于1，具有淺的雙曲線濃度效應關系時，在很寬的藥物水平范圍里有活性。因此，γ的不同值會戲劇性地影響藥物的臨床應用。
在本研究里，對于一系列的皮質類固醇觀察得到的濃度-反應曲線。在這些實驗中，用稱為“科學家”(MicroMath Scientific Software，美國尤他州，鹽湖城)的計算機程序制出曲線，其中通過使用非線性回歸和最小平方配合(least squarefits)對每個類固醇的參數、E最大、IC50和Hill系數(γ)進行評估。
處理之間的總的不同處通過變體單向分析來測定，同時用Tukey HSD試驗來檢查特定差別的重要性水平。使用Windows程序的Systat(Systat Inc.，美國伊利諾斯)。
實施例2TPA對小鼠皮膚的作用進行該研究以測定對小鼠施加TPA產生作用的時間進程和在1、2、3、5和8天時的殺死率。測定上皮增生、真皮發(fā)炎和皮膚交迭厚度的峰值時間。該研究的目的是測定殺死TPA-處理過小鼠的最佳時間以得到對TPA最大的反應。文獻表明，TPA-誘導的上皮增生和真皮發(fā)炎的峰值發(fā)生在不同的時間。這樣預計可選擇折衷的時間。
將42只雌性BALB/c小鼠劃分成各處理組，用TPA(0.01％丙酮中)(100微升)單劑處理，在1、2、3、5和8天宰殺，按實施例1所述測量TPA對上皮增生、真皮發(fā)炎細胞滲透和皮膚交迭厚度的時間進程。
皮膚對TPA的反應綜述如下1天 2天 3天 5天 8天上皮厚度的增加326％382％393％270％130％真皮炎癥細胞密度的增加397％296％272％280％225％皮膚交迭厚度的增加193％142％124％116％107％該實驗顯示，單劑給予TPA導致的上皮增厚、真皮發(fā)炎和皮膚交迭增加持續(xù)至少8天。在72小時觀察到上皮增生的峰值效應，在24小時觀察到真皮發(fā)炎和皮膚交迭增厚的峰值作用。
基于這些結果，現決定了大多數實驗的折衷的時間是單劑給予TPA后的24小時殺死動物。這是由于對于發(fā)炎和皮膚交迭增厚達到了最大作用，對于上皮增生幾乎是最大作用(是峰值作用的80％)。除非另作闡述，在給予TPA后24小時殺死小鼠。
實施例3不同皮質類固醇的作用首先研究單獨的皮質類固醇對TPA損害的抑制。對下列皮質類固醇組進行實驗(對皮質類固醇效力的分類依據所用的濃度、賦形劑的組成和被研究的作用)(表1)。
低效力倍他米松、地塞米松、氫可的松、醋酸氫可的松中等效力阿氯米松二丙酸酯、氟可龍21-新戊酸酯、高效力倍他米松二丙酸酯、倍他米松戊酸酯、氟輕松、哈西奈德、莫米松糠酸酯、曲安奈德將小鼠劃分成各處理組。將TPA和皮質類固醇預先混合成所需的濃度，并立即施加到小鼠的背部。對于不易溶于丙酮的類固醇(即，倍他米松、地塞米松、氫可的松和氫可的松乙酸酯)，在用丙酮稀釋前溶于100微升的二甲基甲酰胺。如前所述來評定皮質類固醇對抑制上皮增生、發(fā)炎細胞滲透和皮膚交迭增厚的效應。在計算機固定數據后測定濃度-反應曲線。通過所謂的“科學家”計算機程序產生曲線固定技術，其中產生了Hill等式里的參數。這些包括每個類固醇的E最大、IC50和Hill系數(γ)。作出每個類固醇的濃度-反應曲線，從IC50值測定相對的效力。比較每個被試驗的皮質類固醇的IC50比率的變化。這些數據與文獻進行比較，它反映了類固醇的相對固有效力。
表2通過各種類固醇顯示的關于Hill等式里的E最大、IC50和γ來綜述抑制TPA-誘導的上皮增生的濃度-反應曲線

以平均值±SD表示結果。括弧里的數據是置信區(qū)間表3通過各種類固醇顯示的關于Hill等式里的E最大、IC50和γ來綜述抑制TPA-誘導的發(fā)炎細胞滲透的濃度-反應曲線<

以平均值±SD表示結果。括弧里的數據是置信區(qū)間。
表2和3對該研究中研究的12個皮質類固醇的效應(E最大)、效力(IC50)和濃度-反應曲線(γ)進行了評估。這些數值從來自改進Michaelis-Menton等式的Hill等式得到。
IC50值之間明顯優(yōu)良的相關性表明對炎癥和上皮增生的抑制由相同機制調節(jié)，或在產生兩種效應里的限制因子是甾族化合物滲透到皮膚里去的的能力。兩種效應的最大效應(E最大)和濃度-反應曲線的斜率(γ)相關性差的事實提示，在甾族化合物抑制炎癥和上皮增生時涉及不同的機理。另外，當某些局外藥物的作用除去時，不會給人留下IC50值之間有相關性的印象。除去局外物的作用如表4所示表4IC50值(炎癥對表皮增生)<

從上述結果可見，甾族化合物通過不同的機理，或是誘導不同的生化反應或在不同細胞系里產生相同的反應來抑制TPA的炎癥和增生作用。該結論與金諾芬可能的協同作用極為相關。
從Hill等式測定E最大值由于在濃度-反應曲線的頂部進行的測量有些不確定，故可能會發(fā)生錯誤。因此，通過兩種方法測定IC50值(a)用Hill等式產生的E最大值(表5和6),(b)直接來自濃度-反應曲線，讀取使TPA-誘發(fā)的增生和炎癥的抑制達50％的濃度的IC50值(表7和8)。由兩種方法測定的IC50，及相應的效力之間的差異不是很大。但是，直接從濃度-反應曲線上讀取更為可信，這些讀數可用來計算表9和10里的“協同因子”。
表5局部用的皮質類固醇抑制TPA-誘導的表皮增生的真正效力和相對效力[Hill等式產生的值，其中IC50是產生最大抑制作用(E最大)的50％時的濃度]

表6局部用的皮質類固醇抑制TPA-誘導的發(fā)炎細胞滲透到真皮的真正效力和相對效力[Hill等式產生的值，其中IC50是產生最大抑制作用(E最大)的50％時的濃度]

表7局部用的皮質類固醇抑制TPA-誘導的表皮增生的真正效力和相對效力[從濃度-反應曲線中讀取的值，其中IC50是抑制TPA作用50％時的濃度]

表8局部用的皮質類固醇抑制TPA-誘導的發(fā)炎細胞滲透到真皮的真正效力和相對效力[從濃度-反應曲線中讀取的值，其中IC50抑制TPA作用的50％時的濃度]

在本研究中，氫可的松、氫可的松乙酸酯、倍他米松和地塞米松對于抑制TPA-誘導的表皮增生和TPA-誘導的發(fā)炎細胞滲透具有低到中等的效力。這個級別與表1小時的臨床設定的相應效力是相符的。
哈西奈德、曲安奈德、阿氯米松二丙酸酯、倍他米松二丙酸酯、氟可龍21-新戊酸酯在抑制TPA-誘導的表皮增生和發(fā)炎系統(tǒng)滲透中具有中等到強大的效力，這些值與臨床效力相符。
最后，莫米松糠酸酯、倍他米松戊酸酯、倍他米松二丙酸酯和氟輕松對于TPA-誘導的表皮增生有強到極強的效力。在它們之中，倍他米松戊酸酯顯示出最強的效力。在研究抑制TPA-誘導的炎癥細胞滲透時，它們也顯示出強到極強的抗炎癥作用。氟輕松是最強效的藥物，相對效力為483(表6)或440(表8)。
當對該研究里試驗的甾族化合物的相對效力和它們各自的臨床效力進行比較時，效力的次序一般是相同的。
可以預期，特定的皮質類固醇會有相同的抗增生和抗炎作用。我們的結果顯示這些反應不一定很密切地相關。對于抑制甾族化合物的增生作用的相對效力對抑制炎癥的相對效力進行線性回歸在表5和6里的數據得到r=0.573(p=0.51)，對于表7和8的值為r=0.658(p＜0.02)。這樣，兩個作用之間約65％的差異似乎是由于一些普通的性質(可為脂溶性)引起的，但這些作用明顯的組成就抑制增生和炎癥來說是明顯不同的。這也可通過比較表7和8的效力級別來顯示。12個甾族化合物中只有6個具有同樣級別的作用，4個具有四個最小效力。
實施例2金諾芬和具有不同臨床效力的皮質類固醇的協同作用最初研究的結果表明，在某些條件下，金諾芬對TPA某些作用有抑制，但沒有特定的效力。
本研究測定了金諾芬和皮質類固醇的組合是否在抑制TPA損傷上有協同作用。
選擇4種具有不同臨床效力的、級別從弱到強的皮質類固醇，即氫可的松、氟輕松、倍他米松二丙酸酯和莫米松糠酸酯。使TPA與皮質類固醇在有固定濃度的金諾芬(0.2％)或沒有金諾芬的存在下進行預混合，以得到所需的濃度，并馬上施加到小鼠的背部。用最小平方適配通過非線性回歸測定濃度-反應曲線。通過從相應于TPA產生的50％作用處的圖上讀取數據來測定IC50(表9和10)。
術語“表觀IC50”是指甾族化合物和金諾芬的組合值。
表9計算機匹配圖上得到的有或沒有金諾芬(0.2％)存在下四種皮質類固醇對TPA-誘導的表皮增生作用的表觀IC50
<

結果表示為平均值±SD。
表10計算機匹配圖上得到的有或沒有金諾芬(0.2％)存在下四種皮質類固醇對TPA-誘導的真皮發(fā)炎細胞滲透作用的表觀IC50

結果表示為平均值±SD。
“協同因子”值被定義為沒有金諾芬存在下測得的甾族化合物的IC50除以有金諾芬(0.2％)存在下相同甾族化合物的IC50。
協同作用指兩種藥物的組合產生的作用明顯大于每個藥物相同的劑量或濃度在相同的試驗系統(tǒng)里分別觀察到的作用的代數和的情況。協同導致一種藥物或兩種藥物的作用數倍地加強，或它可產生單獨使用時藥物產生的性質上不同的作用。
關于對表皮增生的作用，只有四種甾族化合物中只有兩種與金諾芬產生協同反應，即倍他米松二丙酸酯和氟輕松。從表9和10顯示的結果來看，對于倍他米松二丙酸酯和氟輕松，表觀效力的百分增長各自為5,600％和1,300％。但是，對于四種甾族化合物中最小效力的化合物，即氫可的松，表觀效力增長為100％。顯示真實的協同作用的更有效的方法是分開比較下列情況1)單獨使用金諾芬(0,2％)，2)單獨使用低濃度甾族化合物(足以抑制約20％的TPA作用-該值可從甾族化合物單獨研究時的濃度-反應曲線上讀取)，3)在(2)中的甾族化合物的相同濃度與金諾芬(0.2％)組合使用-該值可從在金諾芬存在下的甾族化合物的劑量-反應曲線里讀取，和4)在(2)中使用的相同甾族化合物，但其濃度是足以產生(3)相同作用的濃度。
若(3)的作用是(1)和(2)的總和，該結果沒有協同作用。若(3)的作用大大超過(1)和(2)算術上的和，根據我們的定義，該結果是有協同作用的。
圖1顯示了表皮增生的結果。在所有四個研究中，單獨使用的金諾芬抑制了約10％的TPA-誘導的表皮增生。單獨使用倍他米松二丙酸酯1×10-5M對TPA作用抑制達20％。倍他米松二丙酸酯(1×10-5M)和金諾芬(0.2％)對TPA作用產生了約65％的抑制。為了估計當金諾芬加到倍他米松二丙酸酯中時得到的增長作用的明顯性，應當比較沒有金諾芬時產生相同作用的倍他米松二丙酸酯濃度。該值是5×10-4M或產生有金諾芬存在下相同作用的濃度的50倍。
關于表皮增生，研究顯示(a)當金諾芬加到倍他米松二丙酸酯和氟輕松里時，有很大的協同結果；(b)氫可的松和金諾芬的組合得到輕微的協同作用；和(c)當金諾芬與莫米松糠酸酯共同給藥時沒有協同作用，甚至沒有加成作用。
對于發(fā)炎細胞滲入真皮，表10的結果表示，金諾芬(0.2％)和莫米松糠酸酯的組合作用是協同作用的結果，因為表觀IC50增加到約3,800％。在0.2％金諾芬存在下倍他米松二丙酸酯的抗炎作用也有較小程度的協同作用。這里表觀IC50的增長是400-500％級別(表10)。
圖2的結果顯示莫米松糠酸酯(5×10-6M)和金諾芬(0.2％)之間有很大的協同作用。該組合產生的作用相當于沒有金諾芬存在下由1×10-3M產生的作用。圖2也表示金諾芬與倍他米松二丙酸酯和氟輕松組合有協同作用，但與氫可的松組合沒有協同作用。
這些研究的結果表示，金諾芬與某些皮質類固醇，如與倍他米松二丙酸酯和氟輕松組合在減少表皮增生上，和與莫米松糠酸酯的組合對減少炎癥有很強的協同作用。在金諾芬與其它甾族化合物之間的協同作用較小。
在澳大利亞專利616 755已經詳細討論了適用于本發(fā)明的金化合物和皮質類固醇，及其它們的配方，該專利摻入本文供參考。
權利要求
1．一種治療有一種或多種表征的免疫-介導的疾病的方法，包括對需要這類治療的病人給予金化合物和至少一種皮質類固醇，其中至少一種皮質類固醇選自與金化合物協同作用，對所述疾病的表征之一顯示出優(yōu)選作用，或對所述疾病的每個表征顯示出相同的作用。
2．根據權利要求1所述的治療免疫-介導的疾病的方法，其中疾病具有多個表征。
3．根據權利要求1或2所述的治療免疫介導疾病的方法，其中金化合物和至少一種皮質類固醇同時給藥。
4．根據權利要求1-3之一所述的治療免疫-介導疾病的方法，其中金化合物和至少一種皮質類固醇按序給藥。
5．根據權利要求4所述的治療免疫-介導疾病的方法，其中至少一種皮質類固醇在金化合物后給藥。
6．根據權利要求1-5之一所述的治療免疫-介導疾病的方法，其中所述疾病的一種或多種表征包括炎癥和/或細胞過度增殖。
7．根據權利要求6所述的治療免疫-介導疾病的方法，它包括給予至少兩種皮質類固醇，其中的至少一種選自與金化合物有相互的協同，對炎癥有優(yōu)選的作用，至少另一種與金化合物之間有相互的協同，對疾病的細胞過度增殖有優(yōu)選的作用。
8．根據權利要求1-7之一所述的方法，其中疾病是免疫-介導的皮膚疾病。
9．根據權利要求8所述的方法，其中疾病是牛皮癬。
10．根據權利要求8所述的方法，其中疾病是皮炎。
11．根據權利要求1-7之一所述的方法，其中疾病是類風濕性關節(jié)炎。
12．根據權利要求1-11之一所述的治療免疫-介導疾病的方法，其中金化合物是脂溶性的。
13．根據權利要求1-12之一所述的方法，其中至少一種皮質類固醇選自與金化合物相互協同作用對細胞過度增殖比炎癥有優(yōu)選的活性。
14．根據權利要求13所述的方法，其中至少一種皮質類固醇選自倍他米松二丙酸酯和氟輕松。
15．根據權利要求1-14之一所述的方法，其中至少一種皮質類固醇選自與金化合物相互協同作用，對炎癥比對細胞過度增殖有優(yōu)選的活性。
16．根據權利要求15所述的方法，其中至少一種皮質類固醇選自莫米松糠酸酯和倍他米松二丙酸酯。
17．根據權利要求11所述的方法，其中皮質類固醇選自氫可的松乙酸酯、氫可的松、倍他米松、地塞米松、氟可龍21-新戊酸酯、曲安奈德、倍他米松戊酸酯、阿氯米松二丙酸酯、哈西奈德、倍他米松二丙酸酯、莫米松糠酸酯或氟輕松。
18．根據權利要求17所述的方法，其中皮質類固醇選自氫可的松、倍他米松二丙酸酯、莫米松糠酸酯或氟輕松。
19．根據權利要求1-18之一所述的方法，其中金化合物是金諾芬。
20．根據權利要求1-19之一所述的方法，其中金化合物全身性給藥。
21．根據權利要求1-19之一所述的方法，其中金化合物經口服給藥。
22．根據權利要求1-19之一所述的方法，其中金化合物局部給藥。
23．根據權利要求1-19之一所述的方法，其中金化合物局部外用給藥。
24．根據權利要求1-19之一所述的方法，其中金化合物經關節(jié)內注射給藥。
25．根據權利要求1-24之一所述的方法，其中至少一種皮質類固醇全身給藥。
26．根據權利要求1-24之一所述的方法，其中至少一種皮質類固醇經口服給藥。
27．根據權利要求1-24之一所述的方法，其中至少一種皮質類固醇局部給藥。
28．根據權利要求1-24之一所述的方法，其中至少一種皮質類固醇局部外用給藥。
29．根據權利要求1-24之一所述的方法，其中至少一種皮質類固醇經關節(jié)內注射給藥。
30．一種藥物組合物，包括金化合物和一種或多種皮質類固醇和藥學上可接受的載體、賦形劑、佐劑或溶劑組合，皮質類固醇選自與金化合物有相互的協同作用，對免疫-介導的疾病的特定表征顯示出不同的作用。
31．根據權利要求30所述的藥物組合物，其中組合物被配制成全身給藥的制劑。
32．根據權利要求30所述的藥物組合物，其中組合物被配制成口服給藥的制劑。
33．根據權利要求30所述的藥物組合物，其中組合物被配制成局部給藥的制劑。
34．根據權利要求30所述的藥物組合物，其中組合物被配制成局部外用給藥的制劑。
35．根據權利要求30所述的藥物組合物，其中組合物被配制成關節(jié)內注射給藥的制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及治療有一種或多種表征的免疫一介導疾病的方法,該方法包括對需要這類治療的病人給予金化合物和至少一種皮質類固醇,其中至少一種皮質類固醇選自與金化合物有相互的協同作用,顯示對所述疾病的表征之一有優(yōu)選的作用,或對所述疾病的每個表征有相等的作用。本發(fā)明也涉及適用于本方法的藥物組合物。
文檔編號A61K31/573GK1235550SQ97199438
公開日1999年11月17日 申請日期1997年11月4日 優(yōu)先權日1996年11月4日
發(fā)明者R·E·托馬斯 申請人:醫(yī)學創(chuàng)新有限公司