專利名稱:傷口治療的制作方法
本申請是Antoniades等人于1986年11月14日在美國提交的序號為930，762、題目為“治療外部傷口”申請案的部分后繼申請，該申請案通過引用被結(jié)合到本申請中。
本發(fā)明涉及傷口治療生長因子是刺激一種確定的靶細(xì)胞群體的多肽激素。生長因子的例子有血小板衍生的生長因子(PDGF)，類胰島素生長因子(IGF-I)，轉(zhuǎn)化生長因子培帶(TGF-β)，表皮生長因子(EGF)和成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)。PDGF是一種在循環(huán)血小板顆粒中發(fā)現(xiàn)的陽離子的、熱穩(wěn)定蛋白質(zhì)，已知它有刺激體外蛋白質(zhì)合成和通過成纖維細(xì)胞刺激膠原蛋白生成的作用。它還對成纖維細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞起體外促細(xì)胞分裂劑和趨化性劑的作用。
已有人提出過利用PDGF來促進(jìn)活體傷口愈合，例如，Grotendorst 1984年在“Trauma”雜志24期549-552頁描述了把PDGF加在一種用膠原蛋白的凝膠浸漬過、并植入鼠背的亨特-希林(Hunt-Schilling)金屬絲篩盒中，發(fā)現(xiàn)PDGF提高了新膠原蛋白的合成量。然而，Leitzel等人1985年在Dermatol.Surg.Oncol.雜志11期617-622頁上認(rèn)為單獨(dú)使用PDGF或與FGF和EGF結(jié)合使用都不能加速倉鼠正常傷口的愈合。
Michaeli等人1984年在紐約Praeger出版社出版的“Soft and Hard Tissue Repair”(軟組織和硬組織的修復(fù))一書(Hunt，T.K.等人編輯)的380-394頁中報導(dǎo)了應(yīng)用一種從富血小板血漿中提取的PDGF的部分提純制品，植入家兔角膜時，刺激血管的生成。因為PDGF不是一種生成血管的生長因子，所以研究者認(rèn)為在他們的部分提純的PDGF制品中，有一種未知的因子導(dǎo)致了生成血管的效果。
一般來說，本發(fā)明的特點(diǎn)一個方面是，通過將有效量的包括有提純PDGF和提純IGF-I的一種組合物施加于傷口上，治愈哺乳動物，例如一個病人的外部傷口。該組合物通過促進(jìn)上皮和結(jié)締組織的生長及促進(jìn)全部蛋白質(zhì)和膠原的合成，幫助愈合或者至少部分愈合傷口。采用本發(fā)明的組合物治療傷口比未經(jīng)處理(即沒有施加外源劑)或只是提純的PDGF，或只用提純的IGF-I處理能達(dá)到更好的效果。
本發(fā)明的特點(diǎn)另一方面是，通過對病人施加藥物，最好向受傷的區(qū)域或缺失骨頭的區(qū)域施加有效量的包括了提純PDGF和提純IGF-I的一種組合物，使哺乳動物、例如一個病人的骨頭再生。組合物通過促進(jìn)結(jié)締組織、骨頭和牙骨質(zhì)的生長及刺激蛋白質(zhì)和膠原的合成，幫助骨頭再生或至少部分再生。采用本發(fā)明的組合物促進(jìn)再生要比未經(jīng)處理(即不用外源劑)或僅是提純的PDGF或僅用提純的IGF-I處理達(dá)到更好的效果。
在發(fā)明這兩方面的優(yōu)選的實施方案中，組合物是通過在一種藥物學(xué)上可接受的載體物質(zhì)，例如商業(yè)上可買到的惰性凝膠或液體中(例如，加有清蛋白或甲基纖維素的鹽水)將提純的PDGF和IGF-I(兩者都是商業(yè)上可買到的)相結(jié)合來制取的。提純的PDGF和ICF-1的組合，最好按重量比在1∶4到25∶1之間。優(yōu)選的范圍為1∶2到10∶1，更好的范圍是1∶1或2∶1。提純的PDGF和IGF-I可從人的血小板中獲得?；蚪柚亟M體DNA技術(shù)獲得。這樣，對于術(shù)語“PDGF”和“IGF-I”，我們指的是哺乳類的、特別是靈長類的血小板得到的和重組體材料兩者;靈長類中，人是最好的，但也可以是黑猩猩和其它靈長類。重組體PDGF可以是異種二聚體重組體，其形成可以是通過將編碼了原核生物或真核生物細(xì)胞兩者亞基的DNA序列插入到原核生物細(xì)胞或真核生物細(xì)胞中，然后讓該轉(zhuǎn)譯的亞基被細(xì)胞加工形成異種二聚體，或也可僅將編碼了一個亞基(最好是培帶(beta)或“2”鏈)的DNA插入細(xì)胞，然后將其培養(yǎng)產(chǎn)生同種二聚體的PDGF(PDGF-1或PDGF-2同種二聚體)。
此處所用的術(shù)語“提純的”指PDGF或IGF-I在彼此混合前，其重量占95%或更多，即大體是沒有其它蛋白質(zhì)、脂類和碳?xì)浠衔锏?，而這些物質(zhì)是天然與其相結(jié)合的。
一種提純的蛋白質(zhì)制品對PDGF或IGF-I的每種亞基一般在聚丙烯酰胺凝膠上產(chǎn)生一個單一的主帶。本發(fā)明的組合物中采用的提純的PDGF和IGF-I最好用氨基末端的氨基酸序列分析判斷是純的。
本發(fā)明的組合物為治愈哺乳類動物的外部傷口，例如褥瘡、裂傷、燒傷提供了一個快速有效的方法。本組合物同自然治療(即不加外源劑)或僅用純的PDGF或IGF-I相比增強(qiáng)了結(jié)締組織的形成。與僅用純的PDGF不同，本組合物促進(jìn)新的結(jié)締組織增長大約250%，促進(jìn)上皮組織生長增長95%，得到的上皮組織層比自然治療產(chǎn)生的要厚，并且還包含更多的將其同新的結(jié)締組織相連接的上皮突起，因此，它結(jié)合得更堅牢，更有保護(hù)性。此外，疤痕形成被減至最小。
本發(fā)明組合物還為有牙周疾病史的哺乳類動物，例如人的結(jié)締組織和骨頭的再生提供了一種快速有效的方法。同自然治療(即不用外源劑)或僅采用純的PDGF或IGF-I相比，組合物增強(qiáng)了結(jié)締組織和骨頭的形成。
本發(fā)明的其它特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)從下面優(yōu)選實施方案的說明和權(quán)利要求
中將明顯看到。
現(xiàn)在，我們對本發(fā)明的優(yōu)選實施方案進(jìn)行說明。
按照本發(fā)明，用純的PDGF和IGF-I結(jié)合制備的PDGF/IGF-I混合物來處理外部傷口，例如褥瘡和燒傷，使骨頭和結(jié)締組織再生。IGF-I是可以通過商業(yè)渠道從Amgen公司(Thousand Oaks，CA)和Kabi公司(瑞典)買到的。提純的重組體PDGF和從人的血小板中得到的提純的PDGF可以通過商業(yè)渠道從PDGF公司(馬薩諸塞卅，波士頓)，合作研究所(Waltham，MA)，和Amgen公司(Thousand Oaks，CA)買到的。提純的PDGF也可以按以下方法制備將500到1000單位洗凈的人血小板小丸懸浮在1M氯化鈉中，(每個血小板單位2毫升)在100℃的溫度下加熱15分鐘，然后借助離心方法將上清液分離，沉淀物用1M氯化鈉提取兩次。
將提取物合并，用0.08M氯化鈉-0.01M磷酸鈉緩沖液(PH7.4)進(jìn)行透析，在4℃溫度下同用所述緩沖液平衡的CM-Sephadex C-50(一類交聯(lián)葡萄糖)混合過夜。然后將混合物例入一個柱內(nèi)(5×100Cm)，用0.08M氯化鈉-0.01M磷酸鈉緩沖液(PH7.4)徹底清洗，并用1M氯化鈉洗脫，同時收集到10毫升餾分。
將活性餾分匯集起來，對0.3M氯化鈉-0.01磷酸鈉緩沖液(PH7.4)進(jìn)行透析，離心分離，并在4℃下通過一個2.5×25厘米的用0.3M氯化鈉-0.01M磷酸鈉的緩沖液(PH7.4)平衡過的藍(lán)Sepharose(一種瓊脂糖)層析柱。然后用該緩沖液清洗該柱，并用一種由1M氯化鈉和1，2-亞乙基二醇以1∶1組成的溶液洗脫部分提純的PDGF。
將部分提純的PDGF餾分用1M氯化鈉稀釋，對1M醋酸進(jìn)行透析，并冷凍干燥。將冷凍干燥的樣品溶解在0.8M氯化鈉-0.01M磷酸鈉緩沖液(PH7.4)中，并通過一個用該緩沖液平衡的CM-Sephadex C-50的1.2×40厘米的層析柱。然后用氯化鈉梯度(0.08到1M)洗脫P(yáng)DGF。
合并活性餾分，對1M醋酸進(jìn)行透析，冷凍干燥并溶解在少量的1M醋酸中。將0.5毫升的蛋白質(zhì)加到1.2×100厘米的一個用1M醋酸平衡過的Biogel P-150(一種生物凝膠)(100到200目)層析柱中。然后用1M醋酸洗脫P(yáng)DGF，同時收集2毫升餾分。
將每一種包含100～200毫克蛋白質(zhì)的活性餾分冷凍干燥，溶解在100毫升0.4%的三氟醋酸中，并在一個苯基鍵合層析柱(Phenyl Bondapak Column)上進(jìn)行逆相高效液相層析。用線性的乙腈梯度(0到60%)洗脫，產(chǎn)生純的PDGF。
可按下述步驟制備用重組體DNA技術(shù)制造的PDGF從人血小板得到的血小板衍生的生長因子(PDGF)包括了兩個多肽序列(PDGF-1和PDGF-2多肽;Antoniades，H.N和Hunkapiller，M在1983年“Science”雜志220期963-965頁)。PDGF-1由位于第7條染色體的基因編碼(Betscholtz，C等人在“Nature”雜志320期695-699頁)，而PDGF-2由位于第22條染色體(Dalla-Favera，R1982年在“Science”218期686-688頁)的SiS癌基因(Doolittle，R等人1983年“Science”211期275-277頁)編碼。該SiS基因編碼了同PDGF-2多肽密切相關(guān)的猿猴肉瘤病毒(SSV)的轉(zhuǎn)化蛋白，人類細(xì)胞的C-SiS也編碼了PDGF-2鏈(Rao，C，D，等人1986年P(guān)roc.Natl.Acad.Sci.USA.83期2392-2396頁)。因為PDGF的兩條多肽鏈?zhǔn)怯晌挥诜珠_的染色體上的兩個不同的基因編碼的，所以存在這樣的可能性，人的PDGF是由PDGF-1和PDGF-2的一個二硫化物連接的異種二聚體組成、或由兩個同種二聚體(PDGF-1同種二聚體和PDGF-2同種二聚體)的混合物組成、或由異種二聚體和兩個同種二聚體的混合物組成。
在培養(yǎng)中感染了包含編碼了PDGF-2鏈的基因的猿猴肉瘤病毒的哺乳動物細(xì)胞已被證明能合成PDGF-2多肽并能將它加工成二硫化物連接的同種二聚體(Robbins，K.等人1983年“Nature”305期605-608頁)。此外，PDGF-2同種二聚體對反抗人類PDGF而產(chǎn)生的抗血清起反應(yīng)。而且，分泌的PDGF-2同種二聚體的功能特性與由血小板衍生的PDGF相似，因為它在培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞內(nèi)刺激DNA的合成，它在一個185Kd細(xì)胞膜蛋白質(zhì)的鉻氨酸殘基上誘發(fā)磷化作用，并且它在接合到特殊的細(xì)胞表面PDGF受體方面同人類(125I)-PDGF具有可比擬的能力(Owen，A等人1984年“Science”225期54-56頁)。由培養(yǎng)的通常的人細(xì)胞(例如人的動脈內(nèi)皮細(xì)胞)或者表達(dá)SiS/PDGF-2基因的人類惡性細(xì)胞中得到的SiS/PDGF-2基因產(chǎn)物也表現(xiàn)出類似的性質(zhì)(Antoniades，H等人1985年“Cancer Cells”3期145-151頁)。
重組體PDGF-2同種二聚體是通過利用一個表達(dá)載體將C-SiS/PDGF-2基因的cDNA克隆引入小鼠細(xì)胞而得到的。用于表達(dá)的C-SiS/PDGF-2克隆是由通常的人的培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞獲得的(Collins，T等人1985年“Nature”216期748-750頁)。
為了確定PDGF/IGF-I混合物在促進(jìn)傷口愈合方面的有效性，進(jìn)行了以下實驗。
將10-15公斤的約克夏小白豬(Parson農(nóng)場·Hadley，MA)在外科手術(shù)前至少禁食6小時，然后麻醉。在無菌條件下將其胸及背部的毛剃去，用和緩的肥皂及水洗滌干凈。然后用70%的酒精，將要進(jìn)行創(chuàng)傷的區(qū)域消毒。
采用一種改進(jìn)的Castroviejo電角膜刀開出一些1厘米×2厘米、深為0.5毫米的傷口(Storz，St.Louis，MO，由Brownells公司改進(jìn)的電角膜刀)。這些傷口使上皮及埋在下面的真皮蛋白質(zhì)被完全除去(可與二度燒傷相比)。各個傷口至少有15毫米未損傷的皮膚隔開。接受同樣處理的傷口被劃為一組，并同其它組至少相隔3厘米。不接受生長因子處理的傷口同接受這種處理的傷口至少相隔10厘米。
在傷口上直接用單獨(dú)一種懸浮于生物相容凝膠中的生長因子處理，1)500毫微克純的人類PDGF(用高效液相層析法提純了的)或單獨(dú)使用重組體PDGF;2)將500毫微克純的PDGF與下述每一種的組合a)500毫微克EGF;b)500毫微克ECF加500毫微克IGF-I;c)500毫微克IGF-I。
在切出傷口后，從第3天到第10天采集活檢樣品。供組織結(jié)構(gòu)評價的活檢樣品呈楔形，約3毫米深，并被放置在10%的福爾馬林溶液中。用于生化分析和自動射線照相法的樣品是用電角膜刀切取的。樣品的最終尺寸是1.5毫米×10毫米×1.5毫米。每個傷口采集3個樣品用于生化分析，而每個傷口采集2個樣品用于自動射線照相法。樣品采集后，將其貯藏于冷的加有10%的牛胎血清的EMEM(Eagle′s Modified Essential Medium)介質(zhì)中。活檢樣品按下述方法分析。
自動射線照相法將活檢樣品放在0.3毫升的加入了10%的每毫升含15微居里3H-胸甙的牛胎血清的EMEM介質(zhì)中，培養(yǎng)1小時，然后用10%的福爾馬林溶液將樣品洗滌兩次。采用標(biāo)準(zhǔn)的石蠟浸漬和埋置技術(shù)將樣品制成4微米的切片。然后，脫去石蠟，浸入核示蹤感光乳膠NTB-2(柯達(dá)牌)中，并曝光兩星期。接著用蘇木精和四溴螢光素將其顯影和染色。
通過計算示蹤細(xì)胞總數(shù)對該區(qū)域內(nèi)細(xì)胞總數(shù)的關(guān)系，將染色樣品的自動射線照片記錄在相等分布的一些點(diǎn)上(每個細(xì)胞5個點(diǎn)或更多)。
組織結(jié)構(gòu)分析采用標(biāo)準(zhǔn)石蠟浸漬和埋置技術(shù)制備組織結(jié)構(gòu)分析樣品。將其制成4微米的切片并用過瀘的Harris蘇木精和酒精曙紅染色;然后在顯微鏡下觀察。由兩個試驗者對所有樣品在遍布該切片的等分布點(diǎn)上盲目地進(jìn)行記錄。上皮和結(jié)締組織層的寬度用放在顯微鏡目鏡內(nèi)的網(wǎng)格進(jìn)行計算;然后在相同觀察條件下，用測微器將測量值轉(zhuǎn)換成毫米數(shù)。
體外新陳代謝示蹤活檢樣品被移放到各個試管中，試管內(nèi)有0.3毫升加了10%牛胎血清、15微居里3H-胸甙和5微居里14C-亮氨酸的EMEM，在37℃溫度下培養(yǎng)1小時。在1小時末了時，去掉介質(zhì)，并加入0.5毫升冷的5%的高氯酸使組織的新陳代謝停止。然后將樣品細(xì)細(xì)切碎并洗滌三遍;將產(chǎn)生的沉淀物重新懸浮在0.5毫升14.8M氫氧化胺中并用超聲處理。超聲處理后，樣品在密封試管中在45℃溫度下培養(yǎng)16-24小時，兩次超聲處理，并用帶有交叉通道計數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)液體閃爍法測定其放射性。
DNA和蛋白質(zhì)的測定確定DNA是采用Labara等人1980年在“Anal.Biochem.”120期344-352提出的方法的改進(jìn)方案進(jìn)行的。將50微升在濃氫氧化胺中的組織提取物的等分試樣加入到400微升含1M磷酸鈉和2M氯化鈉的緩沖液(PH7.0)中;用鹽酸將得到的溶液的PH值調(diào)節(jié)到7.4。之后，使最后溶液的體積達(dá)到500微升，同時使PH值保持在7.4。然后將該溶液加入到被緩沖過的Hoesht染料溶液(染料1.14毫克/毫升，緩沖液為0.05M磷酸鈉和2M氯化鈉，PH＝7.4)中。在352毫微米波長的激勵下誘發(fā)螢光并在454毫微米處測量輻射。通過相同處理制備的小牛胸腺DNA被用來形成標(biāo)準(zhǔn)曲線。
在濃氫氧化胺中的組織提取物的蛋白質(zhì)含量是以牛的血清清蛋白為標(biāo)準(zhǔn)用Bradford方法(Bradford 1976年“Anal.Biochem.”72期248-254頁)測定的。
結(jié)果組織結(jié)構(gòu)分析結(jié)果表明用提純的人類PDGF或重組體PDGF和IGF-I結(jié)合處理傷口與對傷口不作處理、或僅用純的IGF-I、純的PDGF、或PDGF與其它生長因子結(jié)合相比，具有較厚的結(jié)締組織和上皮層，并有更廣泛的上皮突起同上皮層相連。直至處理后的6個星期都沒有出現(xiàn)形成疤痕的跡象。自動射線照相術(shù)揭示，用PDGF/IGF-I處理傷口比對傷口不作處理或僅用PDGF，IGF-I處理的傷口，3H-胸甙-示蹤細(xì)胞的百分比有提高。新陳代謝示蹤的結(jié)果表明，用提純的PDGF/IGF-I制品處理的傷口，3H-胸甙和14C-亮氨酸的吸收比不作處理的傷口要大;類似地，PDGF/IGF-I處理的傷口具有更高的DNA和蛋白質(zhì)含量。
對用前面所述方法制備的重組體提純的PDGF-2同種二聚體，也在部分粗皮膚傷口上單獨(dú)地或與IGF-I結(jié)合地做過試驗。對六天時間的傷口進(jìn)行的組織結(jié)構(gòu)分析指出單獨(dú)應(yīng)用PDGF-2或IGF-I在控制結(jié)締組織或表皮形態(tài)結(jié)構(gòu)方面不產(chǎn)生實質(zhì)性區(qū)別。然而，當(dāng)PDGF-2和IGF-I結(jié)合時，在手術(shù)后第六天就使新的結(jié)締組織層的寬度增加2倍，表皮的厚度增加20%。手術(shù)后第九天，單獨(dú)使用PDGF-2使新的結(jié)締組織和表皮厚度都只增加22%，而PDGF-2與IGF-I的結(jié)合使新的結(jié)締組織和表皮層均增加75%。用PDGF-2/IGF-I處理過的傷口的結(jié)締組織具有明顯的光極化區(qū)域，表示這些傷口比只接受PDGF-2單獨(dú)處理或未作處理的傷口包含更多成熟的結(jié)締組織。
利用上面描述的動物模型將重組體PDGF-2應(yīng)用于傷口愈合上，產(chǎn)生的效果與提純的人類PDGF同重組體IGF-I結(jié)合時的情況是類似的。重組體PDGF-2和IGF-I的結(jié)合在新的成纖維細(xì)胞數(shù)量、膠原合成速率和相伴隨的真皮和表皮增生方面，同沒有處理或僅用重組體PDGF-2或IGF-I單獨(dú)處理的對照實驗動物相比都有引人注目的增長(有2.5倍的總增長)。
這些結(jié)果表明，重組體PDGF-2同種二聚體和天然的提純的人類PDGF在局部施加到傷口上時，都能同IGF-I協(xié)同地相互作用。
劑量為了確定提純的PDGF的合適劑量，除了用相當(dāng)于每平方毫米傷口2.5毫微克、5毫微克和10毫微克分散在30微升生物相容的凝膠中的PDGF對傷口進(jìn)行處理外，重復(fù)前述的實驗。結(jié)果表明最佳的效果在PDGF含量為每平方毫米5毫微克或更高時產(chǎn)生。
為了確定純的PDGF加IGF-I的合適劑量，如上所述對PDGF與IGF-I的重量比在1∶10到25∶1范圍的組合進(jìn)行了評價。最佳結(jié)果是在兩者之比為1∶1與2∶1之間達(dá)到。
骨頭再生為了確定PDGF/IGF-I制品在促進(jìn)牙周組織和/或骨頭生長方面的效果，進(jìn)行了下述實驗。
在最初的射線照相檢查基礎(chǔ)上，選擇若干有自然發(fā)生牙周病的小獵兔犬。用超聲波儀器先估定出呈現(xiàn)30%到80%骨缺失的牙齒，然后進(jìn)行外科瓣和根整平術(shù)，用在藥物學(xué)上可接受的載體物質(zhì)中含有提純的PDGF和IGF-I的組合物處理實驗的牙齒，這種載體例如商業(yè)上可買到的惰性凝膠，如甲基纖維素。其余的在四分之一園弧內(nèi)的牙齒只單獨(dú)接受對照凝膠或純的PDGF或IGF-I的處理。手術(shù)后兩星期，采集骨頭和牙齒活檢塊，并用標(biāo)準(zhǔn)的去無機(jī)鹽和處理技術(shù)準(zhǔn)備進(jìn)行組織學(xué)分析。
結(jié)果對牙周組織和骨頭的組織學(xué)分析結(jié)果表明，鄰接實驗試樣(即用PDGF/IGF-I組合物處理的那些牙)的齒根表面存在著新骨形成的明顯區(qū)域，并在與新骨鄰接的齒根表面有一層類似牙骨質(zhì)的沉積物。新骨也存在于試樣的骨膜表面，在韌帶尖端的區(qū)域范圍內(nèi)存在關(guān)節(jié)強(qiáng)硬的區(qū)域。一層類成骨細(xì)胞的稠密層和結(jié)締組織把新形成的骨頭和新形成的插入新形成的牙骨質(zhì)中的膠原纖維連系起來。
在對照試樣中沒有新骨形成的跡象，也沒有新的類牙骨質(zhì)沉積物，并且結(jié)締組織與骨頭表面垂直取向，形成蓋在原有骨頭上的一個“帽子”。這樣的結(jié)果表明了本發(fā)明的PDGF/IGF-I組合物增強(qiáng)了成骨和結(jié)締組織的應(yīng)答。
其它實施方案包含在以下的權(quán)利要求
中。
權(quán)利要求
1.一種治療哺乳動物外部傷口的方法，包括向所述的傷口施加一份治愈傷口量的一種組合物，該組合物包含有提純的血小板衍生的生長因子和提純的類胰島素生長因子。
2.一種用來再生哺乳動物骨頭的方法，包括用一份治愈傷口量的一種組合物給所述動物治療，所述組合物包含有提純的血小板衍生的生長因子和類胰島素生長因子。
3.如權(quán)利要求
1或權(quán)利要求
2所述的方法，其中所述組合物中血小板衍生的生長因子同類胰島素生長因子的重量比在1∶4到25∶1之間。
4.如權(quán)利要求
3所述的方法，其中所述的重量比在1∶2到10∶1之間。
5.如權(quán)利要求
4所述的方法，其中所述的重量比大約是1∶1或2∶1。
6.一種治療傷口和使骨頭再生的組合物，包含提純的血小板衍生的生長因子和提純的類胰島素生長因子，其重量比為1∶4到25∶1。
7.如權(quán)利要求
6所述的組合物，其中所述的重量比是在1∶2到10∶1之間。
8.如權(quán)利要求
7所述的組合物，其中所述的重量比是1∶1或2∶1。
9.一種制備治療傷口的組合物的方法，包括將提純的血小板衍生的生長因子和提純的類胰島素生長因子以1∶4到25∶1的重量比混合。
專利摘要
通過用一種組合物給哺乳動物治療來愈合其外部傷口或使其骨頭再生，該組合物包含提純的血小板衍生的生長因子和提純的類胰島素生長因子。
文檔編號A61KGK87101250SQ87101250
公開日1988年6月8日 申請日期1987年11月14日
發(fā)明者哈里·N·安東尼亞迪斯, 雷·C·威廉斯, 塞繆爾·E·林奇 申請人:分子生物學(xué)研究有限公司, 哈佛大學(xué)校長及研究員協(xié)會導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan