專(zhuān)利名稱(chēng)：Aids抗病毒化合物與hiv抑制劑的協(xié)同組合的制作方法
本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?3117660.3，申請(qǐng)日為1993年8月6日，發(fā)明名稱(chēng)為“作為HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的苯并噁嗪酮”的發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
本案涉及Merck申請(qǐng)18429、18429IA和18727。本案是1992年8月7日申請(qǐng)的Merck Case 18793,U.S.S.N.07/926,607的部分連續(xù)申請(qǐng)。
稱(chēng)為人類(lèi)免疫缺乏病毒(HIV)的逆病毒(retovirus)是復(fù)雜疾病的病因?qū)W試劑，它包括免疫系統(tǒng)的逐步破壞(獲得性免疫缺乏綜合癥；AIDS)以及中樞神經(jīng)和神經(jīng)末梢系統(tǒng)的退變。此病毒以前已知為L(zhǎng)AV,HTLV-Ⅲ或ARV。逆病毒復(fù)制通常的特征是通過(guò)病毒編碼的逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA染色體組逆轉(zhuǎn)錄生成HIV序列的DNA復(fù)制物，它是病毒復(fù)制中所需要的步驟。已知一些化合物是逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，在治療AIDS和類(lèi)似疾病方面是有效試劑，例如，疊氮胸苷(azidothymidine)或AZT。
HIV核苷酸序列顯示在一個(gè)開(kāi)放的閱讀框架中存在著pol基因[Ratner,L.等，Nature,313,277(1985)]。氨基酸序列的同系現(xiàn)象證明pol序列可以將逆轉(zhuǎn)錄酶、核酸內(nèi)切酶以及HIV蛋白酶編碼[Toh,H.等，EMBO J.4,1267(1985)；Power,M.D.等，Science,231,1567(1986)；Pearl,L.H.等，Nature 329,351(1987)]。
本申請(qǐng)人驗(yàn)證了本發(fā)明化合物是HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。本發(fā)明化合物特別的優(yōu)點(diǎn)是它們對(duì)阻礙HIV逆轉(zhuǎn)錄酶方面的抑制作用。
公開(kāi)了如下定義的式Ⅰ化合物。這些化合物用作抑制HIV逆轉(zhuǎn)錄酶(和其抗變性(its resistant varieties))，預(yù)防HIV感染，治療HIV感染以及治療AIDS和/或ARC，可用化臺(tái)物，藥學(xué)上可接受的鹽(如適宜)，藥物組合物成分，或者與其它抗病毒劑，抗感染劑，免疫調(diào)節(jié)劑，抗菌劑或疫苗結(jié)合使用。治療AIDS的方法，預(yù)防HIV感染的方法，以及治療HIV感染的方法也在此公開(kāi)。
本發(fā)明涉及式Ⅰ化合物，其結(jié)合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，HIV逆轉(zhuǎn)錄酶和其抗變性的抑制，預(yù)防或治療HIV感染以及治療由此引起的獲得性免疫缺乏綜合癥(AIDS)。式Ⅰ化合物定義如下
其中X是鹵素；X1是三鹵代甲基，或五鹵代乙基；Z是O；R為(a)未取代的或被A取代的C1-8烷基，A為鹵素，C3-6環(huán)烷基，CN，羥基，C1-4烷氧基，C2-4炔基-C1-4烷氧基，芳氧基，C1-4烷基羰基，硝基，二(C1-2烷基)氨基，C1-4烷氨基-C1-2烷基，雜環(huán)，或芳硫基；(b)C2-4鏈烯基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代；(c)C2-5炔基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代；或(d)C3-4環(huán)烷基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ )未取代或被A取代的芳基所取代；或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明亦包括用于抑制HIV逆轉(zhuǎn)錄的藥物組合物，包括有效量的式Ⅱ化合物，
和藥學(xué)上可接受的載體，其中X為鹵素；X1為三鹵代甲基，五鹵代乙基；C2-5烷基；C2-5炔基；C3-5環(huán)烷基；或芳基；Z為O或S；R為(a)C1-8烷基，未取代或被A取代，A為鹵素，C3-6環(huán)烷基，CN，羥基，C1-4烷氧基，C2-4炔基-C1-4烷氧基，芳氧基，C1-4烷基羰基，硝基，二(C1-2烷基)氨基，C1-4烷基氨基-C1-2烷基，雜環(huán)，或芳硫基；(b)C2-4鏈烯基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代；(c)C2-5炔基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代；或(d)C3-4環(huán)烷基，未取代或被(ⅰ)A，或(ⅱ)未取代或被A取代的芳基所取代；
或其藥學(xué)上可接受的鹽。
優(yōu)選的化合物包括下面表Ⅰ中化合物37.2,4,2,5和24，其次序以?xún)?yōu)選下降排列。這些化合物具有下列結(jié)構(gòu)化合物37.2
(-)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮，它是最優(yōu)選的；化合物4
(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮；化合物2
(+/-)6-氯-4-(2-氰基苯基)乙炔基-4-(1,1,1-三氟甲基)-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮；化合物5
(+/-)4-(1-氯-1,1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮；化合物24
(+/-)4-(2-[二甲氨基甲基]乙炔基)-4-三氟甲基-6-氯-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮；或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明化合物與具體說(shuō)明于下面表Ⅰ和Ⅱ表Ⅰ
表Ⅰ(續(xù))
+在nM(毫微摩爾/升)下測(cè)定表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
表Ⅰ(續(xù))
+從化合物38起其它數(shù)據(jù)由實(shí)施例部分提供表Ⅱ
表Ⅱ(續(xù))
表Ⅱ(續(xù))
本發(fā)明化合物可具有不對(duì)稱(chēng)中心，除有特別說(shuō)明，否則為外消旋體，外消旋混合物或?yàn)閱我坏姆菍?duì)映異構(gòu)體，或?qū)τ丑w，所有的異構(gòu)體形式都包括在本發(fā)明中，符號(hào)(+/-)包括(+)的光學(xué)異構(gòu)體或(-)光學(xué)異構(gòu)體或其混合物。
當(dāng)在任何結(jié)構(gòu)或在式Ⅰ中的任何可變數(shù)(如R)的存在超過(guò)一次時(shí)，每種情況下它的定義獨(dú)立于每個(gè)其它情況。此外，只有當(dāng)取代基和/或可變數(shù)(量)的組合構(gòu)成的穩(wěn)定化合物時(shí)，這種組合才是允許的。
除有說(shuō)明，這里使用的“烷基”包括具有特定數(shù)目碳原子的支鏈和直鏈和脂肪烴基；“烯基”包括至少含一個(gè)碳-碳雙鍵的直鏈和支鏈烷基；“炔基”包括至少含一個(gè)碳-碳三鍵的支鏈和直鏈烷基?！胞u素”或“鹵”用在這里意指氟、氯、溴和碘。
除有說(shuō)明，這里的“芳基”意指苯基、萘基、四氫萘基、聯(lián)苯基、菲基、蒽基或苊基(acenaphthyl)。
除有說(shuō)明，這里使用的術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)”或“雜環(huán)基”代表穩(wěn)定的5-至7-元單環(huán)或穩(wěn)定的8-到11-元雙環(huán)雜環(huán)，它們可以是飽和的，或部分不飽和或不飽和，由碳原子和一到四個(gè)選自N,O和S的雜原子組成，其中氮和硫雜原子可任意被氧化，以及上述定義的任何雜環(huán)稠合到苯環(huán)上形成任何雙環(huán)基。雜環(huán)可以接在任何雜原子或碳原子上以形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。這樣的雜環(huán)單元的例子包括哌啶基、哌嗪基、2-氧哌嗪基、2-氧哌啶基、2-氧吡咯烷基、2-氧吖庚因基、吖庚因基，吡咯基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、吡唑基，吡唑烷基，咪唑基，咪唑啉基、咪唑烷基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基，噠嗪基、噁唑基、噁唑烷基、異噁唑基、異噁唑烷基、嗎啉基、噻唑基、噻唑烷基、異噻唑基、奎寧環(huán)基、異噻唑烷基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、噻二唑基、苯并吡喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、呋喃基、四氫呋喃基、苯并呋喃基、四氫吡喃基、噻吩基、苯并噻吩基、硫代嗎啉基、氧化硫代嗎啉基(硫代嗎啉基亞砜)、二氧硫代嗎啉基(硫代嗎啉基砜)，以及噁二唑基。
本發(fā)明化合物可用下列方法合成。
路線Ⅰ
在本發(fā)明的苯并噁嗪合成中，典型的一般方法包括以在苯核上環(huán)化作為最后步驟。見(jiàn)路線Ⅰ。以新戊酰氯首先對(duì)對(duì)氯苯胺上的氨基進(jìn)行保護(hù)，得到2，其它較不優(yōu)選的氨基保護(hù)基包括叔丁氧基羰基，乙酸基或異戊酰(isovaleroyl)基。然后以大約2當(dāng)量的烷基鋰(優(yōu)選為正丁基鋰)與2反應(yīng)。在本金屬化步驟中，無(wú)其它金屬有機(jī)化合物是合適的。接著，與CF3COOEt的反應(yīng)驟冷停止得到3。
接著，通過(guò)向3的酮中加入格氏試劑合成叔甲醇4。此格氏試劑必須是二價(jià)陽(yáng)離子的鹽如Mg++或Zn++。單價(jià)陽(yáng)離子如Li+或Na+是不適宜的。適宜的溶劑包括(但不限制)THF或乙醚。約在0℃到約室溫寬的溫度范圍可以允許。
合環(huán)生成本發(fā)明化合物5在縮合劑存在下完成，這些縮合劑如1,1’-羰基二咪唑，光氣，碳酸二甲酯，碳酸二苯酯或碳酸二(對(duì)硝基苯酯)。環(huán)化可以用這些化合物中的任一種，也可以用許多其它試劑完成。
路線ⅠA中提供了路線Ⅰ的具體例子。它以圖表示L-741,211的合成，為化合物37.2的外消旋體，進(jìn)一步說(shuō)明于實(shí)施例6中。
路線ⅠA
路線Ⅱ
路線Ⅱ提供了一種衍生苯并噁嗪核4-位乙炔取代基的方法。作為說(shuō)明，化合物6金屬化，然后加入鋅鹽。在Heck反應(yīng)中，使用與CuⅠ復(fù)合的四(三苯基膦)鈀(O)作為催化劑，得到7。
路線Ⅲ
路線Ⅲ說(shuō)明了4-乙炔基被含氮雜環(huán)取代。Mannich反應(yīng)包括甲醛與雜環(huán)如吡咯烷的縮合反應(yīng)。接著在CuⅠ催化劑存在下，在端基碳上進(jìn)行取代。
路線Ⅳ
路線Ⅳ說(shuō)明了式Ⅰ或式Ⅱ化合物的光學(xué)異構(gòu)體的拆分。在此例子中，(-)莰烷酸作為拆分試劑。許多其它的拆分試劑也是適宜的，包括O-甲基扁桃酰氯或Mosher氏試劑。顯然，技術(shù)人員知道這些異構(gòu)體怎么分離。
路線ⅣA特別適用于L-743,726分離中L-741,211的拆分，見(jiàn)路線ⅣA，和實(shí)施例6。
路線ⅣA
路線Ⅴ
根據(jù)如C.E.Hudson等，J.Am.Chem.Soc.94,1158(1972)和W.Schoberth等，Synthesis,703(1972)公開(kāi)的方法，通過(guò)路線Ⅴ制備環(huán)丙基乙炔。
本發(fā)明化合物用于抗病毒化合物的制劑和進(jìn)行篩選評(píng)估。例如，本發(fā)明化合物用作分離酶突變種，對(duì)更有效的抗病毒化合物，它們是極好的篩選工具。此外，本發(fā)明化合物用來(lái)建立或確定其它抗病毒劑對(duì)HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的連接位點(diǎn)，例如通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，這樣本發(fā)明化合物為此目的可作為商售產(chǎn)品。
本發(fā)明化合物用作抑制HIV逆轉(zhuǎn)錄酶，預(yù)防或治療由人體免疫缺乏病毒(HIV)引起的感染以及治療由此產(chǎn)生的病理上的癥狀如AIDS。治療AIDS或預(yù)防或治療由HIV引起的感染的定義包括，但不限制，治療很寬范圍的HIV感染征兆AIDS,ARC(與復(fù)合體有關(guān)的AIDS)，征兆和無(wú)征兆，對(duì)HIV實(shí)際顯現(xiàn)或潛在顯現(xiàn)。例如，本發(fā)明化合物用于治療認(rèn)為是由過(guò)去對(duì)HIV暴露所致而由HIV引起的感染，例如通過(guò)輸血，體液交換，咬傷，意外針刺，或外科手術(shù)中患者血液暴露所致。
本發(fā)明化合物特殊的優(yōu)點(diǎn)是其對(duì)其它抗病毒劑產(chǎn)生抗性的HIV逆轉(zhuǎn)錄酶具有強(qiáng)有力的抑制作用，這些其它抗病毒劑例如L-697,661，它是3-([(4,7-二氯-1,3-苯并噁唑-2-基)甲基]-氨基)-5-乙基-6-甲基-2(1H)-酮；或L-696,229，它是3-[2-(1,3-苯并噁唑-2-基)乙基]-5-乙基-6-甲基-吡啶-2(1H)-酮；或AZT。
為了這些目的，本發(fā)明化合物可以用含通常的無(wú)毒的藥物上可接受的載體，輔助和賦形劑的劑量單位制劑形式口服，腸胃外(包括皮下注射、靜脈、肌肉、胸骨內(nèi)注射或灌輸技術(shù))，噴霧吸入，或直腸路途給藥。
因而，根據(jù)本發(fā)明，它進(jìn)而提供治療HIV感染和AIDS的方法和藥物組合物。治療包括給患者施以所需的含藥物學(xué)載體和治療有效量的本發(fā)明化合物的治療藥物組合物。
這些藥物組合物可以是口服給藥的懸浮劑或片劑；由鼻給藥的噴霧劑；無(wú)菌注射劑，如無(wú)菌注射水溶液或油性懸浮液或栓劑。
當(dāng)以懸浮劑口服給藥時(shí)，這些組合物可根據(jù)藥物制劑領(lǐng)域已知技術(shù)制得，它們可含有使其增量的微晶纖維素，作懸浮劑的藻酸或藻酸鈉，作增粘劑的甲基纖維素，以及本領(lǐng)域已知的增甜劑/調(diào)味劑。作為快速釋放的片劑，這些組合物中可含有微晶纖維素，磷酸二鈣，淀粉，硬脂酸鎂和乳糖和/或其它本領(lǐng)域已知的賦形劑，粘合劑，補(bǔ)充劑，崩解劑，稀釋劑和潤(rùn)滑劑。
如果通過(guò)鼻部氣溶膠或吸入給藥，這些組合物可根據(jù)藥物制劑領(lǐng)域已知的技術(shù)制得，其可被制成鹽水溶液，其中使用芐醇或本領(lǐng)域已知的其它適宜的保存劑，吸收促進(jìn)劑以提高其生物利用率，碳氟化合物，和/或其它的加溶劑或分散劑。
注射溶液或懸浮劑可根據(jù)本領(lǐng)域已知技術(shù)制備，其中使用了適宜的無(wú)毒性，腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑，如甘露糖醇，1,3-丁二醇，水，Ringer氏溶液或等滲的氯化鈉溶液，或適宜的分散劑或濕潤(rùn)劑和懸浮劑，如無(wú)菌的無(wú)刺激的，固定油類(lèi)，包括合成的甘油(單)酯或甘油二酯，以及脂肪酸，包括油酸。
當(dāng)以栓劑形式進(jìn)行直腸給藥時(shí)，這些組合物可通過(guò)將藥物用適宜的無(wú)刺激性賦形劑如可可脂，合成的甘油酯或聚乙二醇混合制備，它們?cè)诔叵率枪腆w，但在直腸空腔內(nèi)是液化和/或溶解釋放出藥物。
本發(fā)明化合物可分離的劑量范圍在1到100mg/千克體重的量對(duì)人體口服給藥。一個(gè)優(yōu)選的劑量范圍是口服可分離的劑量0.1到10mg/Kg體重。另一優(yōu)選的劑量是口服分劑量為0.1～20mg/Kg體重。如果和核苷類(lèi)似物結(jié)合治療，在口服給藥可分離的劑量中本發(fā)明化合物優(yōu)選的口服給藥劑量范圍在0.1到20mg/Kg體重，而在口服分劑量中核苷類(lèi)似物的劑量在50mg到5g/Kg體重。但是可以理解，對(duì)任一患者具體的劑量水平和用劑頻率是可以變化的，它依賴(lài)于許多因素，包括所使用具體化合物的活性，代謝穩(wěn)定和使用化合物的作用時(shí)間，年齡，體重，通常健康狀況，性別，飲食，給藥方式和時(shí)間，排泄速度，藥物結(jié)合，特定的病癥的程度，以及接受治療的主體。
本發(fā)明也指明HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制化合物與一種或多種用于治療AIDS試劑的結(jié)合。例如，本發(fā)明化合物不論在暴露前和/或暴露后與下表中的那些有效量的AIDS抗病毒劑，免疫調(diào)節(jié)劑，抗傳染劑，或疫苗結(jié)合給藥是很有效的。
表抗病毒劑藥物名稱(chēng) 制造廠家 備注AL-721 Ethigen ARC,PGL(Los Angeles,CA) HIV陽(yáng)性，AIDS重組人類(lèi)干擾素 Triton BiosciencesAIDS，卡波濟(jì)氏干擾素β (Almeda,CA) 肉瘤，ARCAcemannanCarrington Labs ARC(也見(jiàn)免疫調(diào)(Irving,TX) 節(jié)劑)藥物名稱(chēng) 制造廠家備注Cytovene Syntex 威脅視力CMVGanciclovir(Palo Alto,CA) 外圍CMV視網(wǎng)膜炎d4TBristol-Myers AIDS,ARC雙去氫去氧胸苷 (New York,NY)ddIBristol-Myers AIDS,ARC雙去氧肌苷 (New York,NY)EL10 Elan Corp,PLC HIV感染(也見(jiàn)免(Gainesville,GA)疫調(diào)節(jié)劑)膦酰甲酸三鈉 Astra Pharm.CMV視網(wǎng)膜炎，HIV感Products,Inc. 染，其它CMV感染(Westborough,MA)雙去氧胞苷 Hoffman-La RocheAIDS,ARCddC(Nutley,NJ)Novapren Novaferon Labs,Inc HIV抑制劑(Akron,OH)Diapren,Inc.
(Roseville,MN,marketer)肽TPeninsula Labs AIDS辛肽系列 (Belmont,CA)藥物名稱(chēng) 制造廠家 備注Zidovudine； Burroughs Wellcome AIDS,adv,ARCAZT (Rsch.Triangle Park小兒AIDS，NC)卡波濟(jì)氏肉瘤，無(wú)征兆HIV感染，不嚴(yán)重HIV疾病，有關(guān)神經(jīng)病，結(jié)合精神治療，安莎霉素 Adria Laboratories ARCLM427 (Dublin.OH)Erbamont(Stamford,CT)糖肝酯Ueno Fine Chem AIDS,ARC,HIVInd.Ltd. 陽(yáng)性無(wú)征兆(Osaka,Japan)三唑核苷 Viratek/ICN無(wú)征兆HIV陽(yáng)性Ribavirin (Costa Mesa,CA)LAS,ARCα干擾素誘導(dǎo) Burronghs Wellcome 卡波濟(jì)氏肉瘤，劑(Rsch.Triangle HIV結(jié)合Park,NC) w/Retrovir無(wú)環(huán)鳥(niǎo)苷 Burroughs Wellcome AIDS,ARC，無(wú)征兆的HIV陽(yáng)性，與AZT結(jié)合藥物名稱(chēng) 制造廠家 備注中和免疫-吸收 Advanced Biotherapy AIDS,ARC柱中pH不穩(wěn)定 Conceptsα誤差干擾素 Rockville,MD)誘導(dǎo)劑的抗體L-697,661 Merck(Rahway,NJ) AIDS,ARC，無(wú)征兆HIV陽(yáng)性，也與AZT結(jié)合L-696,229 MerckAIDS,ARC，無(wú)征兆HIV(Rahway,NJ) 陽(yáng)性，也與AZT結(jié)合L-735,524 Merck(Rahway,NJ) AIDS,ARC，無(wú)征兆HIV陽(yáng)性，也與AZT結(jié)合免疫調(diào)節(jié)劑藥物名稱(chēng) 制造廠家 備注AS-101 Wyeth-Ayerst LabsAIDS(Philadelphia,PA)BropirimineUpjohn 早期AIDS(Kalamazoo,MI)Acemannan Carrington Labs,Inc AIDS,ARC(Irving TX) (也見(jiàn)抗病毒劑)CL246,738 American CyanamidAIDS，卡波濟(jì)氏肉瘤(Pearl River,NY)Lederle Labs(Wayne,NJ)藥物名稱(chēng) 制造廠家 備注EL10 Elan Corp,PLC HIV感染(Gainesville,GA)(也見(jiàn)抗病毒劑)γ-干擾素誘導(dǎo)劑 Genentech ARC，與w/TNF結(jié)合(S,San Francisco,CA)(腫瘤壞死因子)粒細(xì)胞的巨噬細(xì)Genetics Institute AIDS胞菌落促進(jìn)因子(Cambridge,MA)Sandoz(East Hanover,NJ)粒細(xì)胞的巨噬細(xì)Hoeschst-RousselAIDS胞菌落促進(jìn)因子(Somerville,NJ)Immunex(Seattle,WA)粒細(xì)胞的巨噬細(xì)Schering-Plough AIDS胞菌落促進(jìn)因子(Madison,NJ)AIDS與w/AZT結(jié)合HIV Core Rorer 血清反應(yīng)陽(yáng)性HIVParticle (Ft.Washington,PA)免疫刺激劑IL-2 Hoffman-La RocheAIDS,ARC,HIV,白細(xì)胞介素-2 (Nutley,NJ) 與w/AZT結(jié)合Immunex免疫球蛋白Cutter Biological 兒科AIDS，與靜脈內(nèi)(人)(Berkeley,CA) w/AZT結(jié)合IMREG-1 Imreg AIDS，卡波濟(jì)氏肉瘤(New Orleans,LA)ARC,PGL藥物名稱(chēng) 制造廠家備注IMREG-2 ImregAIDS，卡波濟(jì)氏肉瘤(New Orleans,LA) ARC,PGLImuthiol Diethyl Merieux InstituteAIDS,ARCDithio Carbamate (Miami,FL)(二硫代氨基甲酸酯)α-2 Schering Plough 卡波濟(jì)氏肉瘤干擾素 (Madison,NJ) W/AZT:AIDS蛋氨酸腦 TNI Pharmaceutical AIDS,ARC菲肽 (Chicago,IL)MTP-PE Ciba-Geigy Corp 卡波濟(jì)氏肉瘤胞壁酰-三肽 (Summit,NJ)粒細(xì)胞 AmgenAIDS，與w/AZT菌落刺激因子 (Thousand Oaks,CA) 結(jié)合rCD4 GenentechAIDS,ARC重組可溶人體CD4 (S,San Francisco,CA)重組 Biogen AIDS,ARC可溶人體CD4 (Cambridge,MA)干擾素 Hoffman-La Roche 卡波濟(jì)氏肉瘤α-2a(Nutley,NJ) AIDS,ARC，與w/AZT結(jié)合SK&F106528 Smith,Kline & French HIV感染可溶T4 Laboratories(Philadelphia,PA)藥物名稱(chēng)制造廠家 備注胸腺五肽Immunobiology HIV感染(Thymopentin) Research Institute(Annandale,NJ)腫瘤壞死因子； Genentech ARC與w/γ干擾素結(jié)TNF (S.San Francisco,CA) 合抗感染劑藥物名稱(chēng)制造廠家 備注氯林可霉素與伯 Upjohn PCP氨喹(Kalamazoo,MI)FluconazolecPfizer 隱球菌病(New York NY) 腦膜炎，念珠菌病錠劑Squibb Corp預(yù)防口腔念珠菌病制霉菌素錠劑(Princeton,NJ)Ornidyl Merrell DowPCPEflornithine(Cincinnati,OH)戊烷脒 Lypho Med PCP治療羥乙基磺酸鹽(Rosemont,IL)(IM & IV)Piritrexim Burroughs Wellcome PCP治療(Rsch.TrianglePark,NC)藥物名稱(chēng) 制造廠家 備注戊烷脒 Fisons CorporationPCP預(yù)防羥乙基磺酸鹽 (Bedford,MA)(吸入)螺旋霉素 Rhone-Poulenc 隱球菌腹瀉Pharmaceuticals(Princeton,NJ)Intraconazole- Janssen Pharm.組織胞漿菌病R51211 (Piscataway,NJ) 隱球菌腦膜炎Trimetrexate Warner-LambertPCP其它藥物名稱(chēng) 制造廠家 備注重組人體 Ortho Pharm.Corp. 與AZT治療有關(guān)的紅細(xì)胞生成素 (Raritan,NJ) 嚴(yán)重貧血乙酸甲地孕酮酯 Bristol-Myers 治療與w/AIDS有關(guān)(New York,NY) 的厭食總的腸內(nèi) Norwich Eaton 與AIDS有關(guān)的腹瀉和營(yíng)養(yǎng)物 Pharmaceuticals 吸收障礙(Norwich,NY)當(dāng)然，本發(fā)明化合物與AIDS抗病毒素，免疫調(diào)制劑，抗感染或疫苗的結(jié)合范圍不限于上表中所列，而原則上包括與用于治療AIDS的任何藥物組合物結(jié)合。例如，式Ⅰ或式Ⅱ化合物可以與具有已知抗HIV逆轉(zhuǎn)錄酶生物活性的核苷類(lèi)似物適合地結(jié)合給藥。適合的核苷類(lèi)似物通常是鏈終止劑并包括AZT,ddC,ddI,D4T,HEPT和3’-氟-2’,3’-二脫氧胸苷。
AZT用下述方法合成J.P.Horwitz等，J.Org.Chem.29,2076(1964)；R.P.Glinski等，J.Org.Chem.38,4299(1973)；C.K.Chu等，Tetrahedron Letters29,5349(1988)。在US4724232中描述了AZT用作治療AIDS的治療藥物。
化合物ddC用下述合成J.P.Horwitz等，J.Org.Chem.32,817(1967)；R.Marumoto,Chem.Pharm.Bull.22,128(1974)；和T.-S.Lin等，J Med.Chem.30,440(1987)。
D4T用Herdewijn,P.等的方法合成(J.Med.Chem.30,1270(1987))。
HEPT用下述方法合成Miyasaka,T.等J.Med.Chem.32,2507(1989)；和A.Rosowsky,J.Med.Chem.24,1177(1981)。在EPO484071中也描述了ddC,ddI和AZT的合成。
用Herdewijn,P.等的方法(J.Med.Chem.30,1270(1987))合成化合物3’-氟-2’,3’-二脫氧胸苷?；衔風(fēng)-735,524是N-(2(R)-羥基-1(S)-2,3-二氫化茚基)-2(R)-苯甲基-4-(S)-羥基-5-(1-(4-(3-吡啶甲基)-2(S)-N’-(叔丁基甲酰胺基)-哌嗪基)-戊酰胺，或其藥學(xué)上可接受的鹽。L-697,661或‘661’是3-([4,7-二氯-1,3-苯并噁唑-2-基)甲基]氨基)-5-乙基-乙基-6-甲基-吡啶-2(1H)-酮；L-696,229是3-[2-(1,3-苯并噁唑-2-基)-乙基]-5-乙基-6-甲基-吡啶-2(1H)-酮。在EP0484071和EP0462800中描述了L-697,661和L-696,229的合成，在此兩者均列為參考文獻(xiàn)。
優(yōu)選的結(jié)合是L-743,726與或不與HIV蛋白酶抑制劑同時(shí)，間歇，或交替處理。在結(jié)合中的任何任意的第三個(gè)組分是HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的核苷抑制劑，例如AZT,ddC或ddI。HIV蛋白酶的優(yōu)選的抑制劑是L-735,524。其他優(yōu)選的HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制劑包括L-697,661。這些結(jié)合在限制HIV的傳布上可有協(xié)同效果。優(yōu)選的結(jié)合包括下述(1)L-743,726與L-735,524和任意地任-L-697,661,AZT,ddI或ddC；(2)L-743,726和任一L-697,661,AZT,ddI或ddC。也包括這些結(jié)合的藥學(xué)上可接受的鹽。
實(shí)施例1(+/-)4-(1,1,1-三氟甲基)-4-(1-丁烯-4-基)-6-氯-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(化合物15)步驟AN-(4-氯苯基)-2,2-二甲基丙酰胺向裝有頂部攪拌器的5升三頸圓底燒瓶中加入4-氯苯胺(127.57g,1mole),1200ml CHCl3和1200ml飽和Na2CO3水溶液。將加液漏斗裝在燒瓶上并注入2,2-二甲基丙酰氯(129ml,1.05mole)。1小時(shí)期間將此酰基氯滴加到劇烈攪拌的混合物中，將所得混合物于室溫下再攪拌23小時(shí)。從混合物中分離出一些白色晶狀產(chǎn)物。過(guò)濾收集這些晶體。將濾液倒入分液漏斗并分層。用水和鹽水洗滌氯仿層。干燥(MgSO4)，過(guò)濾并真空除去溶劑，得到附加的產(chǎn)物，合并此兩份產(chǎn)物并從沸騰的乙酸乙酯-己烷中重結(jié)晶，得到185.6g白色晶狀固體N-(4-氯苯基)-2,2-二甲基丙酰胺。步驟B1-(2-氨基-5-氯苯基)-2,2,2-三氟乙酮向裝有頂部攪拌器，氬氣入口管和500ml烘干的加液漏斗的干燥的3升三頸圓底燒瓶中加入N-(4-氯苯基)-2,2-二甲基丙酰胺(100g,472mmol)和干燥的THF(1l)。將此溶液在冰浴中冷至0℃并向加液漏斗中注入正丁基鋰(387ml,2.5M己烷溶液，968mmol)。1小時(shí)期間將正丁基鋰溶液緩慢滴加到酰胺溶液中，保持溫度低于+5℃。將所得溶液于0℃冷1小時(shí)，在所述時(shí)間內(nèi)形成橙色沉淀，向此混合物中1小時(shí)期間滴加入1,1,1-三氟乙酸乙酯(115ml,968mmol)。將所得清液再置30分鐘。將反應(yīng)混合物用5％HCl水溶液中止。將混合物用1l乙酸乙酯稀釋并分層。用鹽水洗滌有機(jī)相，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并真空濃縮，得到160黃色油。將此物質(zhì)懸浮于1l 3N鹽酸水溶液中并將此溶液加熱回流24小時(shí)，用1l乙酸乙酯稀釋冷卻了的上述溶液并用濃NH4OH使混合物呈堿性。分離出兩層，有機(jī)相用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾，真空濃縮，在1.5Kg硅膠上進(jìn)行色譜分離，用15％在己烷中的乙酸乙酯作洗脫液。使經(jīng)色譜分離的物質(zhì)從沸騰的己烷中重結(jié)晶，得到57g(54％)純1-(2-氨基-5-氯苯基)-2,2,2-三氟乙酮，為淺黃色結(jié)晶，
mp:91-92℃.1H NMR(CDCl3):δ6.46(brs,2H),6.69(d,1H,J=9.2Hz),7.32(dd,1H,J=2.4,9.2Hz),7.70(d,1H,J=2.4Hz)．步驟C(+/-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-1,1,1-三氯-5-己-2-醇向裝有攪拌棒，氬氣入口管，加液漏斗和回流冷凝器的300ml干燥三頸圓底燒瓶中加入鎂(車(chē)屑，3.03g,125mmol)和干THF(75ml)。向良好攪拌的混合物中，于保持緩慢回流的速率下，加入4-溴-1-丁烯(12.0ml,118.21mmol)。加入完成后，將混合物放置30分鐘，然后于冰浴中冷至0℃。在30分鐘期間，向良好攪拌的溶液中滴加1-(2-氨基-5-氯苯基)-2,2,2-三氟乙酮(5.00g,22.36mmol)的THF(35ml)溶液。將冷浴放置至終了。然后將混合物于室溫?cái)嚢?0小時(shí)，將反應(yīng)物用乙酸乙酯和10％檸檬酸水溶液稀釋。將混合物攪拌4小時(shí)。分離各層并用NaHCO3水溶液和鹽水洗滌有機(jī)相。干燥(MgSO4)，過(guò)濾，真空除去溶劑，在300g硅膠上進(jìn)行色譜分離，用15％在己烷中的乙酸乙酯作洗脫液，得到4.80g黃色固體狀的(+/-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-1,1,1-三氟-5-己-2-醇。步驟D(+/)4-(1,1,1-三氟甲基-4-(1-丁烯-4-基)-6-氯-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮向裝有攪拌棒，氬氣入口管和回流冷凝器的200ml圓底燒瓶中加入(+/-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-1,1,1-三氟-5-己-2-醇(4.80g,17.16mmol),1,1’-羰基二咪唑(13.91g,85.81mmol)和干燥的THF(75ml)。將混合物于60℃加熱18小時(shí)。用乙酸乙酯稀釋冷卻了的反應(yīng)混合物并用水(3×200ml)和鹽水(250ml)洗滌。干燥(MgSO4)，過(guò)濾，真空除去溶劑，接著從沸騰的乙酸乙酯-己烷重結(jié)晶，得到3.22g(+/-)4-(1,1,1-三氟甲基)-4-(1-丁烯-4-基)-6-氯-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮，為白色晶狀固體，m.p.165-166℃.
1H NMR(CDCl3):δ1.99(m,1H),2.09-2.40(m,3H),5.00(d,1H,J=1.4Hz),5.03(dd,1H,J=1.4,7.9),5.78(m,1H),6.85(d,1H,J=8.6Hz),7.21(brs,1H),7.35(dd,1H,J=2.2,8.6Hz),9.63(brs,1H).
實(shí)施例2(+/-)6-氯-4-乙炔基-4-(1,1,1-三氟甲基)-1,4-二氫-2 H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(化合物26)步驟A2-(2-氨基-5-氯苯基)-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇向裝有加液漏斗，氬氣入口管，攪拌棒和數(shù)字溫度計(jì)的500ml三頸圓底燒瓶?jī)?nèi)裝入乙炔基溴化鎂(0.5M在己烷中，268ml,134mmol)，然后冷卻至-78℃。保持溫度≤-55℃15分鐘后，完成滴加在50ml THF中的1-(2-氨基-5-氯苯基)-2,2,2-三氟乙酮(6.0g,26.8mmol)溶液。在緩慢溫?zé)嶂潦覝睾螅瑢⒎磻?yīng)混合物攪拌16小時(shí)。通過(guò)滴加飽和的氯化銨水溶液(60ml)于-5℃中止此暗紅色溶液，接著用10％檸檬酸，飽和碳酸氫鈉，水和鹽水洗滌乙酸乙酯萃取液，以硫酸鈉干燥，過(guò)濾和蒸去溶劑后得到8.5g粗產(chǎn)物，用快速色譜純化，使用15-20％乙酸乙酯∶己烷作洗脫液，得到純2-(2-氨基-5-氯苯基)-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇(5g淺褐色油，產(chǎn)率75％)。步驟B(+/-)6-氯-4-乙炔基-4-(1,1,1-三氟甲基)-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮用1,1’-羰基二咪唑(13.0g,80.0mmol)處理2-(2-氨基-5-氯苯基)-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇的THF溶液(5.0g,20.0mmol在225ml THF中)并在油浴中于60℃加熱17小時(shí)，真空除去THF，將殘留物溶于乙酸乙酯，然后用10％檸檬酸，碳酸氫鈉，水和鹽水洗滌，接著用硫酸鈉干燥。過(guò)濾并真空蒸發(fā)后分離出粗產(chǎn)物(3.6g)并從乙酸乙酯∶己烷中重結(jié)晶。分離出產(chǎn)物(+/-)6-氯-4-乙炔基-4-(1,1,1-三氟甲基)-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮為白色針狀固體(3.22g，產(chǎn)率58.4％)，m.p.226-227℃。1H-NMR(CDCl3+痕量DMSO)63.16(s,1H),6.98(d,J=3.3Hz,1H),7.35(m,1H),7.51(s,1H),10.66(s,1H)。
實(shí)施例3(+/-)6-氯-4-(1,1,1-三氟甲基)-4-[(3-(1-吡咯烷基)-1-丙炔基]-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(化合物7)
將(+/-)6-氯-4-乙炔基-4-(1,1,1-三氟甲基)-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(150mg,0.544mmol)，吡咯烷(52.2μl,0.626mmol)，仲甲醛(20.5mg,0.681mmol)，乙酸(31.1μl,0.544mmol)和氯化銅(Ⅰ)(20.5mg,0.207mmol在3.5ml二噁烷中)的二噁烷溶液在油浴中于50℃加熱約2小時(shí)。將反應(yīng)混合物入2N HCl中止，并用乙酸乙酯萃取，用固體碳酸鉀中和水層并用乙酸乙酯萃取三次。用水和鹽水洗滌全并的萃取液，用硫酸鈉干燥，得到140ml粗產(chǎn)物。在硅膠上進(jìn)行色譜法純化并從乙酸乙酯∶己烷中重結(jié)晶，得到晶狀(+/-)6-氯-4-(1,1,1-三氟甲基)-4-[(3-(1-吡咯烷基)-1-丙炔基]-1,4-二氫-2H-苯并噁嗪-2-酮(89mg,46％產(chǎn)率)m.p.160-161℃(分解)。
1H-NMR(CDCl3):δ1.85-1.89(m,4H),2.68-2.71(m,4H),3.67(s,1H),6.88(d,J=8.55Hz,1H),7.40(dd,J=2.19,8.54Hz,1H),7.55(s,1H),9.45(s,1H).(+/-)6-氯-4-(2-氰基苯基)乙炔基-4-(1,1,1-三氟甲基)-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(化合物2)將6-氯-4-乙炔基-4-(1,1,1-三氟甲基)-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(138mg,0.5mmol)的3ml干燥THF溶液于-78℃下攪拌。向此溶液中加入0.4ml(1.0mmol)正丁基鋰(2.5M在己烷中)。于-78℃將陰離子冷10分鐘，然后加入1ml ZnCl2(1M在乙醚中)。于-78℃將反應(yīng)混合物攪拌15分鐘，移去冰浴，于30分鐘期間混合物緩慢溫?zé)嶂?℃。將反應(yīng)混合物加入2-碘芐腈(149mg,0.65mmol)的2ml THF溶液中，接著加入四(三苯基膦)鈀(O)(56mg,0.05mmol)，將反應(yīng)物溫?zé)嶂潦覝夭⒗^續(xù)攪拌15小時(shí)。將反應(yīng)混合物用10ml 2N HCl中止，用2×200ml乙酸乙酯萃取，將合并的萃取液用水，鹽水洗滌并用MgSO4干燥。除去溶劑，得到195mg油，在硅膠上進(jìn)行快速色譜純化(20％乙酸乙酯在己烷中)，得到60mg未反應(yīng)的起始原料和35mg偶合產(chǎn)物。后者用乙醚研制，得到25mg(+/-)6-氯-4-(2-氰基苯基)乙炔基-4-(1,1,1-三氟甲基)-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮。m.p.245-246℃。FAB.MS M+1=377m/e。1H NMR(CDCl3):δ6.82-6.85(d,J=8.5Hz,1H)；7.40-7.44(dd,J=2.1,8.5Hz,1H)；7.56-7.79(m,5H)；8.00(s,1H)．實(shí)施例4(+/-)4-(1-氯-1,1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(化合物5)步驟A1-(2-氨基-5-氯苯基)-2-氯-2,2-二氟乙酮向裝有磁攪拌棒，氬氣入口管和100ml烘干的加液漏斗的烘干的300ml三頸圓底燒瓶中加入N-(4-氯苯基)-2,2-二甲基丙酰胺(10g,47.2mmol)和干燥的THF(100ml)。將此溶液在冰浴中冷至0℃并向加液漏斗中注入正丁基鋰(38.7ml2.5M在己烷中的溶液，96.8mmol)。1小時(shí)期間將正丁基鋰溶液緩慢加到酰胺溶液中，保持溫度低于+5℃。將所得溶液于0℃冷卻1小時(shí)，在此時(shí)間形成橙色沉淀。在15分鐘期間向此混合物中滴加1-氯-1,1-二氟乙酸乙酯(10.2ml,96.8mmol)，將所得清液再放30分鐘，用5％HCl水溶液中止反應(yīng)。用1l乙酸乙酯稀釋混臺(tái)物并分離各層。用鹽水洗滌有機(jī)相，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并真空濃縮，得到160g黃色油。將此物質(zhì)懸浮于200ml 3N HCl水溶液并將此溶液加熱回流24小時(shí)。用500ml乙酸乙酯稀釋劑冷卻的溶液并用濃NH4OH使混合物呈堿性。分離各層并用鹽水洗滌有機(jī)相，干燥(MgSO4)，過(guò)濾，真空濃縮，在350硅膠上進(jìn)行色譜分離，用在15％己烷中的乙酸乙酯作洗脫液。色譜分離物從沸騰的己烷中重結(jié)晶，得到5.5g純1-(2-氨基-5-氯苯基)-2-氯-2,2-二氟乙酮，為亮黃色結(jié)晶，m.p.55-56℃。
1H NMR(CDCl3):δ6.43(brs,2H),6.69(d,1H,J=9.0Hz),7.31(dd,1H,J=2.4,9.0Hz),7.80(d,1H,J=2.4Hz).步驟B(+/-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1-氯-1,1-二氟-3-丁炔-2-醇向裝有攪拌棒，氬氣入口管，回流冷凝器和隔膜的100ml烘干圓底三頸燒瓶中加入乙炔基苯(2.13g,20.83mmol)，干燥THF(50ml)和乙基溴化鎂(6.94ml,3.0M乙醚溶液)。于室溫下將此混合物放置2小時(shí)，然后用注射器加入1-(2-氨基-5-氯苯基)-2-氯-2,2-二氟乙酮的THF(6ml)溶液(1.00g,4.17mmol)。于室溫下將所得橙紅色溶液攪拌21.5小時(shí)。通過(guò)加入1N HCl(50ml)中止反應(yīng)，然后用乙酸乙酯稀釋。用濃NH4OH使溶液呈堿性并分離各層。用水和鹽水洗滌有機(jī)相。干燥(MgSO4)，過(guò)濾，真空除去溶劑，在硅膠上進(jìn)行色譜分離，用20％在己烷中的乙酸乙酯作洗脫液，得到1.02g(+/-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1-氯-1,1-二氟-3-丁炔-2-醇，為灰白色固體。
1H NMR(CDCl3):δ4.42(brs,2H),5.10(brs,1H).6.65(d,1H,J=8.5Hz),7.15(dd,1H,J=2.4,8.5Hz),7.38(m.3H),7.55(m,2H),7.70(d,J=2.4Hz).步驟C(+/-)4-(1-氯-1,1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮向裝有攪拌棒，回流冷凝器和氬氣入口管的100ml圓底燒瓶中加入(+/-)2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1-氯-1,1-二氟-3-丁炔-2-醇(0.81g,2.37mmol)，干燥THF(25ml),1,1’-羰基二咪唑(1.919g,11.84mmol)。將此溶液于60℃加熱20小時(shí)。用乙酸乙酯稀釋冷卻的反應(yīng)混合物并用0.5N HCl，水和鹽水洗滌。干燥(MgSO4)，過(guò)濾并真空除去溶劑，得到890mg油。將此物質(zhì)在80g硅膠上進(jìn)行色譜分離，用20％在己烷中的乙酸乙酯作洗脫液。從沸騰的乙酸乙酯-己烷中重結(jié)晶色譜分離物，得到507mg,(58％)(+/-)4-(1-氯-1,1-二氟甲基)-4-(2-苯基乙炔基)-6-氯-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮，為白色針狀，m.p.154-155℃。
1H NMR(CDCl3):δ6.89(d,1H,J=8.4Hz),7.35-7.48(m,4H),7.56(m,2H),7.64(brs,1H),9.19(brs,1H).
實(shí)施例5(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(化臺(tái)物4)步驟A2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇從4.83ml苯基乙炔(0.04ml)和17.2ml 2.5N正丁基鋰的己烷溶液(0.043mol)，于50ml THF中，于-78℃，制備苯基乙炔鋰溶液，然后于5分鐘期間用11.4g溴化鎂醚合物(0.044mol)處理，將混合物溫?zé)嶂?20℃并于氬氣下繼續(xù)攪拌30分鐘，然后將混合物冷至-60℃，并加入預(yù)先與等當(dāng)量(2.8g,0.011mol)在25ml THF中的溴化鎂醚合物絡(luò)合的2.5g(0.011mol)1-(2-氨基-5-氯)-2,2,2-三氟甲基乙酮的溶液，將反應(yīng)混合物于15℃攪拌1小時(shí)，然后冷至0℃并通過(guò)滴加30ml飽和氯化銨水溶液和30ml水的混合物進(jìn)行處理。將混合物用2×100ml乙醚萃取，用鹽水洗滌合并的有機(jī)相并用MgSO4干燥。除去干燥劑和溶劑，余下6g油，在硅膠上進(jìn)行快速色譜分離，用20％在己烷中的乙酸乙酯洗脫，得到2.5g 2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇。1H-NMR(CDCl3):δ4.63(brs,3H),6.69(d,J=8.5Hz,1H),7.15(d,J=2Hz,1H),7.17(d,J=2Hz,1H),7.35-7.44(m,3H),7.53-7.56(m,2H),7.66(d,J=2Hz,1H).FABMSM+H=326m/e.步驟B(±)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(化合物12)將2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-苯基-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇(2.0g,6.1mmol)和11.0g(12.0mmol)1,1’-羰基二咪唑在300ml干燥THF中的溶液在氬氣氛下于55℃攪拌24小時(shí)，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上除去溶劑，將殘余物在200ml乙醚和400ml水之間進(jìn)行分配。分離開(kāi)兩層，再次用乙醚萃取水層，用2×200ml 10％檸檬酸洗滌合并的乙醚萃取物，然后用鹽水洗滌，在MgSO4上干燥。除去干燥劑和溶劑，得到油狀粗標(biāo)題化合物1.5g(70％)。用乙醚-己烷研制，得到875mg(±)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮為白色固體，于137℃部分熔化，147℃全部熔化。
1H-NMR(CDCl3):δ6.92(d,J=8Hz,1H),7.30-7.49(m,4H),7.58-7.65(m,3H),8.99(s,1H)．步驟C6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮攪拌下，于氬氣氛下，冰浴中向含有(±)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(2.24g,6.37mmol),4-二甲基氨基吡啶(0.10g,0.8mmol)，和(-)莰烷酰氯(2.07g,9.55mmol)的60ml干燥二氯甲烷溶液中加入三乙胺(2.22ml,15.9mmol)。移去冷浴，使反應(yīng)物于室溫下繼續(xù)進(jìn)行。當(dāng)反應(yīng)通過(guò)薄層色譜(SiO2,4％在CHCl3中的乙酸乙酯)檢測(cè)完成時(shí)，用200ml CHCl3稀釋溶液并兩次用10％檸檬酸然后用鹽水洗滌。在干燥(MgSO4)下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上除去溶劑，將泡沫狀殘余物進(jìn)行快速色譜分離，用CHCl3洗脫。得到575mg油狀6-氯-(1S)-莰烷酰-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮非對(duì)映體1,1H-NMR(CDCl3)；δ0.85(s,3H),1.08(s,3H),1.22(s,3H),1.73-1.85(m,1H),1.92-2.08(m,1H),2.50-2.67(m,2H),7.30-7.79(m,8H)。接著得到1.52g混合物餾分(非對(duì)映體Ⅰ和Ⅱ)。繼續(xù)洗脫得到680mg較慢移動(dòng)的標(biāo)題化合物非對(duì)映體(Ⅱ)，用乙醚/己烷混合物研制下得到白色針狀塊，mp 177-178.5℃；1H-NMR(CDCl3):δ0.83(s,3H),1.12(s,3H),1.23(s,3H),1.73-1.86(m,1H),1.93-2.06(m,1H),2.50-2.63(m,2H),7.38-7.51(m,4H),7.49-7.62(m,2H),7.72(d,J=9Hz,1H),7.76(d,J=2Hz,1H).
將從快速色譜法得到的1.52g異構(gòu)體混合物溶于75ml乙醚，用50ml己烷稀釋該溶液，然后用異構(gòu)體Ⅱ的結(jié)晶接種。緩慢結(jié)晶得到另外385mg異構(gòu)體Ⅱ，將其從乙醚/己烷中重結(jié)晶，通過(guò)HPLC分析證實(shí)得到＞96％非對(duì)映純物質(zhì)。步驟D(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮于45℃，氬氣氛下，將晶狀6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,2-二氫-4(H)-3,1-苯并噁嗪-2-酮(53mg,0.10mmol)的非對(duì)映異構(gòu)體(Ⅱ)溶于8ml 2-丙醇中。向此溶液中加入0.27ml 10％K2CO3水溶液。繼續(xù)攪拌10分鐘，在此期間全部原料耗盡(TLC,SiO2,4％在CHCl3中的乙酸乙酯)。真空濃縮該溶液，將殘余物溶于乙醚中。用0.1N HCl和鹽水洗滌后，干燥(MgSO4)乙醚溶液，過(guò)濾并真空蒸發(fā)得到油狀固體，將其用SiO2色譜法純化，用5％在己烷中的2-丙醇洗脫。從乙醚/己烷中得到白色針狀晶體(-)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮，m.p.178-179℃；[α]D20=-92.5℃(CHCl3,C=0.0012g ml-1)；1H-NMR(CDCl3):δ6.87(d,J=8.5Hz,1H),7.37-7.50(m,4H),7.56-7.63(m,3H),8.60(s,1H)。步驟E(+)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(化合物3)按照步驟D的方法，從步驟C的非晶狀產(chǎn)物，非對(duì)映異構(gòu)體Ⅰ制備(+)6-氯-4-苯基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮m.p.178-179℃；[α]D20=+87.6°(CHCl3,C=0.0050g ml-1)；1H-NMR(CDCl3):δ6.87(d,J=8.5Hz,1H),7.37-7.50(m,4H),7.56-7.63(m,3H),8.60(s,1H)。
實(shí)施例6(-)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(L-743726，化合物37.2)和(+)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(L-743725)步驟A2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-環(huán)丙基-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇于1小時(shí)期間，向250ml THF中的23g環(huán)丙基乙炔(0.348mol)滴加116ml 3.0M的溴化乙基鎂乙醚溶液(0.348mol)制備環(huán)丙基乙炔溴化鎂溶液。于0℃將此溶液保持1小時(shí)，然后于40℃3小時(shí)。向再冷至0℃的此溶液于5分鐘期間分批添加15.56g固體1-(2-氨基-5-氯苯基)-2,2,2-三氟甲基乙酮(0.0696mol)。將反應(yīng)混合物于0℃攪拌1.5小時(shí)。于0℃通過(guò)滴加700ml飽和氯化銨水溶液中止該反應(yīng)。用2×400ml乙酸乙酯萃取混合物，用鹽水洗滌合并的有機(jī)相并用MgSO4干燥。除去干燥劑和溶劑得到黃色固體。從沸騰的己烷(100ml最終體積)中重結(jié)晶此物質(zhì)，得到14.67g 2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-環(huán)丙基-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇。通過(guò)濃縮母液得到第二批產(chǎn)物(2.1g)。m.p.153-154℃。
1H-NMR(CDCl3):δ0.84(m,2H),0.90(m,2H),1.38(m,1H),4.50(brs,3H),6.69(d,J=8.5Hz,1H),7.13(dd,J=2.5,8.5Hz,1H),7.55(d,J=2.5Hz,1H)．步驟B(±)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2 H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(L-741,211)氬氣氛下，于55℃，將2-(2-氨基-5-氯苯基)-4-環(huán)丙基-1,1,1-三氟-3-丁炔-2-醇(15.00g,0.0518mol)和41.98g(0.259mol)1,1’-羰基二咪唑的250ml干燥THF溶液攪拌24小時(shí)，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上除去溶劑，殘余物在500ml乙酸乙酯和400ml水間進(jìn)行分配。分離兩層，用乙酸乙酯再洗滌水相一次。用2×200ml 2％HCl水溶液，飽和NaHCO3水溶液和鹽水洗滌合并的乙酸乙酯萃取液。用MgSO4干燥，過(guò)濾，真空除去溶劑，得到16.42g固體標(biāo)題化合物，從乙酸乙酯-己烷中重結(jié)晶，得到12.97g分析純(±)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮白色結(jié)晶。m.p.178-180℃。1H-NMR(CDCl3):0.85(m,2H),0.94(m,2H),1.40(m,1H),6.81(d,J=8.5Hz,1H),7.37(dd,J=2.5,8.5Hz,1H),7.49(d,J=2.5Hz,1H),8.87(brs,1H)．步驟C6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮?dú)鍤夥障?，于冰浴中，攪拌下向?±)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(12.97g,0.041mol),4-二甲基氨基吡啶(1.02g,0.0083mol)，和(-)莰烷酰氯(14.22g,0.06556mol)的350ml干燥二氯甲烷溶液中加入三乙胺(22.84ml,0.164mol)。移去冷浴，使反應(yīng)于室溫下進(jìn)行。75分鐘后，用薄層色譜法(SiO2,4％乙酸乙酯在CHCl3中)鑒定反應(yīng)終點(diǎn)，將該溶液用500ml CHCl3稀釋?zhuān)缓笥?0％檸檬酸(2X)，水(1X)和鹽水(1X)洗滌。用MgSO4干燥，過(guò)濾，真空除去溶劑，留下無(wú)色泡沫。將此物質(zhì)用200ml沸騰己烷研制。冷至室溫，沉淀出期望的非對(duì)映異構(gòu)體莰烷酰亞胺。在多孔玻璃濾器上收集此固體，用很小量的冷己烷洗滌并真空干燥，得到7.79g 6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮白色結(jié)晶。m.p.164-165℃,HPLC純度99.2％。@254nm。1H-NMR(CDCl3)δ0.77(s,3H),0.86-0.96(m,4H),1.08(s,3H),1.19(s,3H),1.44(m.1H),1.76(m,1H),1.95(m,1H),2.51(m,2H),7.42(dd,J=2.4,9.0Hz,1H),7.63(m,2H).步驟D(-)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(L-743,726,化合物37.2)于60℃，氬氣氛下，將6-氯-1-(1S)-莰烷酰-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,2-二氫-4(H)-3,1-苯并噁嗪-2-酮(7.50g,0.01512mol)溶于150ml正丁醇中，向此溶液中加入10ml 1H HCl。于60℃將此溶液保持72小時(shí)，用NaHCO3水溶液中和混合物，真空除去正丁醇。將殘余物溶于150ml THF并于室溫下用50ml 2N LiOH處理3小時(shí)。用乙酸乙酯稀釋此混合物并用二份水和一份鹽水洗滌。干燥(MgSO4)，過(guò)濾并真空除去溶劑，得到白色固體。將此物質(zhì)于熱己烷中重結(jié)晶，得到3.43g(-)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-3,1-苯并噁嗪-2-酮白色結(jié)晶。
m.p.131-132℃；[α]D20=-84.7°(CHCl3,c=0.005g mL-1)；1H-NMR(CDCl3):δ0.85(m,2H),0.94(m,2H),1.40(m,1H),6.81(d,J=8.5Hz,1H),7.37(dd,J=2.5,8.5Hz,1H),7.49(d,J=2.5Hz,1H),8.87(brs,1H).步驟E(+)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮(L-743,725)將上述步驟C所得母液用柱色譜法在硅膠上純化，用10％在己烷中的乙酸乙酯作洗脫液。純的，不期望的非對(duì)映異構(gòu)體(無(wú)色泡沫)按步驟D水解。得到白色晶體對(duì)映體苯并噁嗪酮，(+)6-氯-4-環(huán)丙基乙炔基-4-三氟甲基-1,4-二氫-2H-3,1-苯并噁嗪-2-酮。m.p.131-132℃；[α]D20=+84.4°(CHCl3,c=0.005gmL-1)；1H-NMR(CDCl3):δ0.85(m,2H),0.94(m,2H),1.40(m,1H),6.81(d,J=8.5Hz,1H),7.37(dd,J=2.5,8.5Hz,1H),7.49(d,J=2.5Hz,1H),8.87(brs,1H).
逆轉(zhuǎn)錄酶測(cè)定本測(cè)定方法是通過(guò)于dGTP Km值和多r(c)，寡d(G)12-18下，使HIV逆轉(zhuǎn)錄酶(HIV RTR)(或其他RT)重組入酸可沉淀的cDNA來(lái)測(cè)量氘化了的脫氧鳥(niǎo)苷單磷酸酯的結(jié)合。本發(fā)明的抑制劑抑制此結(jié)合。
試驗(yàn)在下述試劑中進(jìn)行55mM Tris(pH8.2)-30mM KCl-30mM MgCl2-1mM二硫蘇糖醇-20μg rC:dG12-18(Pharmacia)/ml-8mM[3H]dGTP(New England Nuclear)-0.01％Triton X-100-50mM甘醇-雙(β-氨基-乙基醚)-N,N,N’,N’-四乙酸(EGTA)-1mg牛血清蛋白/ml。于37℃培養(yǎng)60分鐘后，使用半自動(dòng)細(xì)胞采集器將酸可沉淀物質(zhì)收集在玻璃纖維濾器上。稀釋含RT的細(xì)菌細(xì)胞提取液至測(cè)定的線性范圍內(nèi)，在抑制劑存在和不存在下測(cè)定活性。在E.Coli中產(chǎn)生的純化了的HIV-1RT雜二聚物(heterodimer)也用作對(duì)比。結(jié)果測(cè)定為給出50％抑制(IC50wt)的抑制劑濃度，nmole/l。
對(duì)double突變種試驗(yàn)(dm)，將A17RT用于試驗(yàn)。如Nunberg,J.H.等在J.Virol,65,4887(1991)中所述，A17RT對(duì)多種氨基吡啶酮是抗性的。結(jié)果被測(cè)定為IC50dm,nmole/l。
細(xì)胞傳布試驗(yàn)按照Nunberg,J.H.等在J.Virol.65,4887(1991)中所述測(cè)量在細(xì)胞培養(yǎng)物中HIV傳布的抑制。在此測(cè)定中，使用予先確定的接種物用HIV-1感染MT-4 T-淋巴細(xì)胞，(Wildtype，除非另有指示)將培養(yǎng)物培養(yǎng)24小時(shí)。此時(shí)，≤1％的這種細(xì)胞通過(guò)間接免疫熒光呈陽(yáng)性。然后將細(xì)胞徹底清洗并分配在96阱培養(yǎng)皿中，將抑制劑的序列的兩倍稀釋液加入阱中，再繼續(xù)培養(yǎng)3天。在感染后第四天在對(duì)照培養(yǎng)物中的細(xì)胞100％被感染。HIV-1p24累積與病毒擴(kuò)散直接有關(guān)。細(xì)胞培養(yǎng)抑制劑濃度定義為抑制劑濃度(nmole/l)，它降低感染擴(kuò)散至少95％，或CIC95。
化合物37.2結(jié)果摘要A．逆轉(zhuǎn)錄酶試驗(yàn)和細(xì)胞傳布試驗(yàn)WTK103N* Y181CDM RT-2IC50(μM) 0.002 0.0300.0080.085 80.8CIC95(μM) ＜0.006(N=2) 0.1 00 ＜0.025 0.400 N.D.
B．藥理學(xué)數(shù)據(jù)
蛋白質(zhì)結(jié)合98.0％正常人血漿(HPLC方法)*突變體K103N和Y181C是HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶的抗藥。
DM是兩次突變體，如在逆轉(zhuǎn)錄酶試驗(yàn)中所述。RT-2是HIV的逆轉(zhuǎn)錄酶。
協(xié)同效果A制備HIV感染的MT-4細(xì)胞懸浮液使MT細(xì)胞，于0日，濃度為250000/ml時(shí)，用Ⅲb種的HIV-1菌株的1∶1000的稀釋液感染(最終125pgp24/ml；足以產(chǎn)生于第1日≤1％的感染細(xì)胞，于第4日25-100％)。細(xì)胞被感染并于下述介質(zhì)中生長(zhǎng)RPMI 1640(Whittaker Bioproducts),10％減活牛胎兒血清，4mM谷氨酰胺(Gibco Labs)和1∶100青霉素-鏈霉素(Gibco Labs)。
于37℃,5％CO2氣氛中培養(yǎng)該混合物過(guò)夜。B．用抑制劑處理制備配對(duì)抑制劑結(jié)合(見(jiàn)表S)的毫微摩爾范圍濃度的基質(zhì)。于第1天，將125μl抑制劑的等分試樣加入在96阱微滴度細(xì)胞培養(yǎng)板中的等體積HIV-感染的MT-4細(xì)胞(每阱50000)中。于37℃在5％CO2氣氛中繼續(xù)培養(yǎng)3天。C．測(cè)量病毒傳布用多道移液管管理器重新懸浮沉淀了的細(xì)胞，采集125μl放入分離的微滴度板。對(duì)上清液進(jìn)行HIV p24抗原測(cè)定。
按下述，通過(guò)酶免疫試驗(yàn)測(cè)量HIV p24抗原濃度。將要測(cè)量p24抗原的等分試樣加到用對(duì)HIV核抗原的特異單克隆抗體涂復(fù)的微阱中。于此時(shí)，和于后續(xù)的其他合適的步驟洗滌微阱。然后加入生物素基化的HIV-的特異抗體，然后結(jié)合抗生蛋白鏈菌素-辣根過(guò)氧化酶。通過(guò)加入過(guò)氧化氫和四甲基聯(lián)苯胺被酶作用物產(chǎn)生顯色反應(yīng)。色的強(qiáng)度與HIV p24抗原的濃度成正比。協(xié)同度計(jì)算業(yè)已發(fā)現(xiàn)配對(duì)抑制劑結(jié)合(見(jiàn)表5)與各抑制劑單獨(dú)相比，或與每個(gè)抑制劑僅僅加和的抑制劑相比顯著提高了對(duì)病毒擴(kuò)散的抑制。這樣，例如，發(fā)現(xiàn)726和AZT的配對(duì)的結(jié)合，與726單獨(dú)或AZT單獨(dú)相比，或與726抑制和AZT抑制之和相比顯著提高了對(duì)病毒傳布的抑制。
數(shù)據(jù)整理如下按Elion等在Biol.CHem.,208,477(1954)中所述計(jì)算部分抑制劑濃度比率(FIC)。測(cè)定了各種配對(duì)抑制劑結(jié)合的最大協(xié)同的最小FICS之和。另一方面，計(jì)算了平均協(xié)同的FICS之平均和。見(jiàn)表S。這些結(jié)果表明病毒擴(kuò)散抑制中的實(shí)際的協(xié)同，數(shù)字愈小，協(xié)同愈大。
表S配對(duì)抑制劑結(jié)合 平均協(xié)同726+ddI0.81726+AZT0.62736+5240.65726+524+AZT524是L-735524。其他化合物也在上述C表中定義。
在上述說(shuō)明書(shū)闡述本發(fā)明的原則時(shí)，同時(shí)提供實(shí)例其目的是為了舉例說(shuō)明，當(dāng)然，當(dāng)進(jìn)入下述權(quán)利要求和其等同物范圍時(shí)，本發(fā)明的實(shí)際應(yīng)用包括所有一般變化，配合，或改進(jìn)。
權(quán)利要求
1．AIDS抗病毒化合物L(fēng)-743,726和L-725,524與任選的一種或多種選自L-697,661、AZT、ddI或ddC的HIV抑制劑的協(xié)同組合。
2．AIDS抗病毒化合物L(fēng)-743,726和一種或多種選自L-697,661、AZT、ddI或ddC的HIV抑制劑的協(xié)同組合。
全文摘要
某些苯并噁嗪酮可用于抑制HIV逆轉(zhuǎn)錄酶(包括其抗變性),預(yù)防或治療HIV感染以及治療AIDS,提及了化合物,藥學(xué)上可接受的鹽,藥物組合物成分,或與其它抗病毒劑,免疫調(diào)節(jié)劑,抗菌素或疫苗結(jié)合。其中也描述了治療AIDS的方法以及預(yù)防或治療被HIV感染的方法。
文檔編號(hào)A61K31/52GK1221608SQ98121309
公開(kāi)日1999年7月7日 申請(qǐng)日期1998年10月10日 優(yōu)先權(quán)日1992年8月7日
發(fā)明者S·D·楊格, L·S·佩恩, S·F·布力查, 小·W·C·盧馬, L·O·特蘭 申請(qǐng)人:麥克公司