專利名稱：含有包裹了極難溶于水的活性組分的凍干脂質(zhì)體的藥物制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有包裹了極難溶于水的生物活性組分的凍干脂質(zhì)體的藥物制劑，及所述制劑的制備方法。
更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及含有包裹了極難溶于水并且在一段時(shí)間內(nèi)保持穩(wěn)定的生物活性組分的凍干脂質(zhì)體的藥物制劑。
在本說(shuō)明書和權(quán)利要求書中，將術(shù)語(yǔ)“極難溶于水”用于描述在水中溶解度≤0.01％(w/v)的所有化合物。
人們知道，脂質(zhì)體在醫(yī)療中用于獲得凍干及儲(chǔ)存期間內(nèi)充分穩(wěn)定的藥物制劑的應(yīng)用受到一些困難的阻撓?？傮w說(shuō)來(lái)，所述困難在于如何制備既不發(fā)生崩解也不發(fā)生相互黏結(jié)的脂質(zhì)體。換句話說(shuō)，脂質(zhì)體應(yīng)保持完整并彼此分離。
在活性組分極難溶于水的情況下，脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)完整性也特別重要。實(shí)際上，在患者服用前通過(guò)添加生理溶液使水性脂質(zhì)體溶液再溶解時(shí)，凍干和/或儲(chǔ)存期間脂質(zhì)體發(fā)生崩解不會(huì)阻止水溶性活性組分進(jìn)入溶液。另一方面，若含有極難溶于水的活性組分的脂質(zhì)體發(fā)生崩解，則凍干物再溶解后得到的溶液含有的活性組分將比需要的低。發(fā)生崩解的脂質(zhì)體量越多，溶液中活性組分的理論量和實(shí)際量之間的差異就越大。
US-A-4857319描述了含有水溶性生物活性組分的脂質(zhì)體的一種凍干方法。該文獻(xiàn)描述了優(yōu)選平均大小約為50-100nm的脂質(zhì)體與作為防腐劑僅添加在內(nèi)側(cè)(與包裹的脂質(zhì)體內(nèi)含物一起)、或僅添加在外側(cè)或添加在內(nèi)外兩側(cè)的二糖的凍干過(guò)程。二糖/脂類的重量比為0.1∶1-4∶1。優(yōu)選二糖是海藻糖。冷凍步驟在液氮的溫度下(-195.8℃)進(jìn)行。
在上面提到的專利中，通過(guò)再水化使凍干物再溶解后測(cè)定脂質(zhì)體中包裹的活性組分的保留量來(lái)評(píng)估凍干過(guò)程中的穩(wěn)定性特征。
上述專利的表2顯示，僅當(dāng)海藻糖/脂類比值大于1.76且海藻糖存在于脂質(zhì)體的內(nèi)側(cè)和外側(cè)上時(shí)，活性組分的保留量才比較高(99-100％)。當(dāng)所述比值等于0.11和0.19時(shí)，即使海藻糖存在于脂質(zhì)體的內(nèi)外兩側(cè)上，活性組分的保留量也僅分別等于22％和49％。相比之下，當(dāng)海藻糖僅存在于外側(cè)上時(shí)，活性組分的保留量急劇下降，甚至使用大量的海藻糖也是如此。實(shí)際上，海藻糖/脂類比值為3.9時(shí)，保留量?jī)H為26％。
然而，當(dāng)生物活性組分極難溶于水時(shí)，上述結(jié)果并不能再現(xiàn)。實(shí)際上，當(dāng)在制備脂質(zhì)體過(guò)程中添加海藻糖以便將其包裹在脂類小囊泡中時(shí)，獲得的是不均一的不可擠壓的懸浮液(對(duì)比1和2的制劑)。
令人意外的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當(dāng)僅在凍干前將小量海藻糖添加到脂質(zhì)體中時(shí)，且所述的凍干過(guò)程是在-5℃--70℃溫度下的冷凍步驟進(jìn)行的，則含有極難溶于水的生物活性組分的脂質(zhì)體在凍干過(guò)程中基本上完整地保留下來(lái)。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供了含有海藻糖和其中摻入了生物活性組分的脂類脂質(zhì)體的凍干組合物，其特征在于所述生物活性組分極難溶于水、海藻糖/脂類的重量比為≤1.5，且全部海藻糖均添加到凍干前已經(jīng)形成的脂質(zhì)體的外側(cè)。
經(jīng)再水化再溶解后，所述組合物在溶液中保留了大于95％的極難溶于水的生物活性組分(實(shí)施例1、2和3)。
極難溶于水的生物活性組分的典型實(shí)例是氯尼達(dá)明、褪黑激素、環(huán)孢菌素A和bindarit。
經(jīng)過(guò)本發(fā)明凍干過(guò)程的脂質(zhì)體組合物中的脂類優(yōu)選選自磷酸甘油酯類、甘油酯類、甘油二酯類、甘油三酯類、磷脂類、半乳糖和葡糖脂類、膽固醇及其衍生物、鞘脂類以及它們的混合物。優(yōu)選脂類是磷脂類。并且，海藻糖/脂類的重量比優(yōu)選在1∶2-1∶1的范圍。
脂質(zhì)體的平均大小可以是50-250nm。優(yōu)選50-100nm。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種凍干方法，其特征在于1)對(duì)于含水脂質(zhì)體組合物中的每重量份脂類來(lái)說(shuō)加入0.2-1.5重量份的海藻糖，其中脂質(zhì)體的平均大小為50-250nm，且所述的脂質(zhì)體含有極難溶于水的一種生物活性組分；2)以0.5℃-2℃/分鐘的冷凍速度通過(guò)凍干機(jī)的冷凍平板將所述組合物冷卻至-5℃--70℃；3)一旦達(dá)到預(yù)定的冷凍溫度，將所述組合物在所述溫度下保持2-5小時(shí)；4)使用5×10-1-8×10-2毫巴的真空，使冷凍平板的溫度保持在步驟2)中確定的冷凍溫度下2-5小時(shí)；5)使冷凍平板的溫度達(dá)到-15℃，并維持在此溫度下直至水完全被除去為止。
優(yōu)選的操作條件如下步驟2冷凍溫度-20℃--30℃冷凍速度0.77℃/分鐘步驟3時(shí)間3小時(shí)步驟4真空6×10-2毫巴步驟5a)當(dāng)冷凍溫度(步驟2)低于-15℃時(shí)，將冷凍平板的溫度以0.5℃-2℃的速度提高至-15℃，凍干過(guò)程進(jìn)行20小時(shí)；然后使冷凍平板的溫度達(dá)到-10℃，1小時(shí)后達(dá)到+5℃，凍干過(guò)程進(jìn)行16小時(shí)。
b)當(dāng)冷凍溫度(步驟2)高于或等于-15℃時(shí)，凍干過(guò)程持續(xù)20小時(shí)，此后使冷凍平板的溫度達(dá)到+5℃，凍干過(guò)程進(jìn)行16小時(shí)。
本發(fā)明特別優(yōu)選的脂質(zhì)體組合物含有成分 ％(w/w)磷脂酰膽堿 94溶血磷脂酰膽堿 3N-?；掖及?磷脂酰乙醇胺0.1甘油三酯1游離脂肪酸 0.75DL-α-維生素E 0.15一般來(lái)說(shuō)，本發(fā)明的含水脂質(zhì)體藥物組合物可通過(guò)下列步驟來(lái)制備a)在20-30℃的溫度下，將極難溶于水的生物活性組分分散于脂類中；b)將所述分散體懸浮于水相中；c)使所述懸浮液在環(huán)境溫度下維持0-48小時(shí)；d)將其加熱至30-75℃、持續(xù)10-40分鐘；e)將其冷凍至-150℃--200℃；f)將步驟d)和e)至少重復(fù)兩次并不得超過(guò)8次；g)使其通過(guò)孔徑為500-1000nm的濾膜過(guò)濾；h)使其擠壓通過(guò)孔徑為50-400nm的膜，且同時(shí)i)除去未被封閉的活性組分。
步驟c)的持續(xù)時(shí)間取決于希望封閉于脂質(zhì)體中的極難溶于水的活性組分的量。因此，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通過(guò)幾個(gè)簡(jiǎn)單的常規(guī)實(shí)驗(yàn)即可很容易地確定對(duì)于每類活性組分和脂質(zhì)體組合物的合適時(shí)間。
優(yōu)選水相由0.05％-0.9％(w/v)氯化鈉水溶液組成。一般來(lái)說(shuō)，對(duì)于每重量份水溶液，使用0.01-0.4重量份的脂類。一般地，對(duì)于每重量份脂類，使用0.01-0.3重量份的活性組分。
一般來(lái)說(shuō)，使用壓縮空氣或選自氮?dú)狻⒑夂蜌鍤膺@樣的惰性氣體作為擠壓氣體進(jìn)行擠壓。優(yōu)選的惰性氣體是氦氣。擠壓步驟中的壓力優(yōu)選在500-5500kPa，溫度優(yōu)選在20℃-75℃，甚至更優(yōu)選在40℃-65℃。合適擠壓機(jī)的典型實(shí)例是Lipex BiomembranesThermobarrel型擠壓機(jī)或具有孔徑為50-600nm的CostarTM聚碳酸酯膜的Emulsiflex CC Avestin。
如上所述繼續(xù)進(jìn)行程序，獲得的含水脂質(zhì)體組合物中含有約8mg/ml的褪黑激素、3.8mg/ml的氯尼達(dá)明、1mg/ml的環(huán)孢菌素A和4mg/ml的bindarit，相對(duì)應(yīng)的水溶解度為3×10-3mg/ml(氯尼達(dá)明)、1×10-1mg/ml(bindarit)，而事實(shí)上褪黑激素(G.S.Shida等《松果體研究雜志》(J.Pineal Res.)1994，16，198-201)和環(huán)孢菌素A[“不溶于水”-《藥物分析曲線》中的環(huán)孢菌素A專集，16，163，(1987)]是絕對(duì)不溶性的。
下列實(shí)施例用來(lái)解釋本發(fā)明而不用來(lái)限定本發(fā)明。制劑I如下所述制備含有極難溶于水的生物活性組分的脂質(zhì)體組合物。
在30℃下，用UltraturraxTM型勻漿器使100mg褪黑激素分散在1g磷脂中。此后，用所述勻漿器將所述分散體懸浮于10ml 0.9％(w/v)的氯化鈉水溶液中，然后在55℃的水浴中加熱20分鐘。
使如此獲得的懸浮液進(jìn)行下列冷凍和加熱循環(huán)-在液氮中冷凍1分鐘，-在55℃下加熱直到磷脂完全流化為止。
將所述循環(huán)重復(fù)6次。
使用Lipex Biomembranes裝置使該懸浮液兩次通過(guò)0.6μm的濾膜。
由此獲得“多薄層大囊”(Multilamellar Large Vesicle，MLV)懸浮液，在55℃下使用帶有0.1μm CostarTM聚碳酸酯濾膜的10ml Lipex Biomembranes Thermobarrel型擠壓機(jī)對(duì)其進(jìn)行6個(gè)連續(xù)的擠壓循環(huán)，其中使用氦氣作為擠壓氣體、壓力為1000-4800kPa。制劑II我們按照制劑I中所述程序進(jìn)行，其中使用2g磷脂和50mg氯尼達(dá)明代替1g磷脂和100mg褪黑激素。制劑III我們按照制劑I中所述程序進(jìn)行，其中使用2g磷脂和200mg褪黑激素代替1g磷脂和100mg褪黑激素。制劑IV除用0.2μm聚碳酸酯膜代替0.1μm聚碳酸酯膜進(jìn)行擠壓外，我們均按照制劑II中所述程序進(jìn)行。制劑V在30℃下，用UltraturraxTM型勻漿器使30mg環(huán)孢菌素A分散在2g磷脂中。此后，使用所述勻漿器將所述分散體懸浮于0.9％(w/v)的氯化鈉水溶液中，在環(huán)境溫度下使其靜置24小時(shí)。此后，將所得懸浮液在65℃的水浴中加熱20分鐘。
對(duì)如此獲得的懸浮液進(jìn)行下列冷凍和加熱循環(huán)-在液氮中冷凍1分鐘，-在65℃下加熱直到磷脂完全流化為止。
將所述循環(huán)重復(fù)6次。
使用Lipex Biomembranes裝置使懸浮液兩次通過(guò)0.6μm的濾膜。
由此獲得“多薄層大囊”(MLV)懸浮液，在65℃下使用帶有0.1μm CostarTM聚碳酸酯濾膜的10ml-Lipex BiomembranesThermobarrel型擠壓機(jī)對(duì)其進(jìn)行6個(gè)連續(xù)的擠壓循環(huán)，其中使用氦氣作為擠壓氣體、壓力為1000-4800kPa。制劑VI我們按照制劑I中所述程序進(jìn)行，其中使用2g磷脂和50mgbindarit代替1g磷脂和100mg褪黑激素。對(duì)比1的制備制劑1A在30℃下，用UltraturraxTM型勻漿器使100mg褪黑激素和1g海藻糖分散在1g磷脂中、持續(xù)10分鐘。此后，使用所述勻漿器將所述分散體懸浮于10ml 0.9％(w/v)的氯化鈉水溶液中，然后在55℃的水浴中加熱20分鐘。
對(duì)如此獲得的懸浮液進(jìn)行下列冷凍和加熱循環(huán)-在液氮中冷凍1分鐘，-在55℃下加熱直到磷脂完全流化為止。
將所述循環(huán)重復(fù)6次。
使用Lipex Biomembranes裝置使懸浮液兩次通過(guò)0.6μm的濾膜。
這樣獲得了非常致密的團(tuán)塊。在55℃下使用帶有0.1-μmCostarTM聚碳酸酯濾膜的10ml-Lipex BiomembranesThermobarrel型擠壓機(jī)對(duì)其進(jìn)行擠壓的嘗試沒(méi)有成功(其中使用氦氣作為擠壓氣體，壓力為1000-4800kPa)。制劑1B除不使用褪黑激素外，我們?nèi)缟鲜鲋苿?A中所述程序進(jìn)行。獲得了“多薄層大囊”(MLV)懸浮液，這種懸浮液在55℃下通過(guò)使用帶有0.1μm CostarTM聚碳酸酯濾膜的10ml-Lipex BiomembranesThermobarrel型擠壓機(jī)可以很好地?cái)D壓出(其中使用氦氣作為擠壓氣體，壓力為1000-4800kPa)。對(duì)比2的制備制劑2A除用2g而不是1g磷脂外，我們按照上述就對(duì)比1A制備所述的程序進(jìn)行。
在這種情況下也獲得了非常致密、不可擠壓的團(tuán)塊。制劑2B除用2g而不是1g磷脂外，我們?nèi)缟鲜鼍蛯?duì)比1B制備所述的程序進(jìn)行。
在這種情況下也獲得了能夠很好地?cái)D壓出的MLV懸浮液。實(shí)施例1將制劑II分成1ml的等分試樣，按照表1/1中給出的海藻糖/脂類重量比向每一等分試樣中添加海藻糖。
在板式凍干機(jī)中如下進(jìn)行凍干過(guò)程1)以0.77℃/分鐘的速度冷卻至-25℃；2)維持所述溫度(-25℃)3小時(shí)；3)使用真空(6×10-2毫巴)并在所述溫度下(-25℃)維持2小時(shí)；4)在6×10-2毫巴的真空中加熱至-15℃、持續(xù)20小時(shí)；5)在6×10-2毫巴的真空中加熱至-10℃、持續(xù)2小時(shí)；6)在6×10-2毫巴的真空中加熱至+5℃、持續(xù)20小時(shí)；7)關(guān)閉真空；8)導(dǎo)入空氣。
用1ml蒸餾水將凍干物(1ml)再水化，在環(huán)境溫度下保持30分鐘以便使脂質(zhì)體有效再溶解。
用10ml生理溶液進(jìn)一步稀釋0.5ml的所述溶液以便用NICOMP370裝置測(cè)定脂質(zhì)體的平均大小。
表1/1列出了所得結(jié)果。表1/1凍干前和凍干后的脂質(zhì)體平均大小
從表1/1中我們可以看出，缺乏海藻糖伴有某種程度的脂質(zhì)體融合，這一點(diǎn)由脂質(zhì)體平均大小的增加可以證明。令人意外的是，海藻糖用量的增加(海藻糖/脂類2∶1)也可導(dǎo)致某種程度的融合，因此脂質(zhì)體平均大小增加。
用制劑IV也獲得了類似的結(jié)果。
由如上所述新近制備的一定數(shù)量樣品來(lái)測(cè)定脂質(zhì)體的平均大小和氯尼達(dá)明的量。隨后，將樣品重新放入5℃的冷藏箱中，在給定的時(shí)間間隔取樣并再水化以測(cè)定活性組分的量和脂質(zhì)體的平均大小。由此獲得的結(jié)果列在表1/2中。表1/2海藻糖/脂類比(w/w)1∶2
實(shí)施例2如上述實(shí)施例1中所述凍干制劑III，并且如上述實(shí)施例中所述測(cè)定凍干前和凍干后脂質(zhì)體的平均大小(表2/1)以及新鮮制劑及保存于5℃的制劑中脂質(zhì)體的平均大小和褪黑激素的量(表2/2)。表2/1凍干前和凍干后脂質(zhì)體的平均大小
用制劑1也獲得了類似的結(jié)果。表2/2海藻糖/脂類比(w/w)
實(shí)施例3如上述實(shí)施例1中所述凍干制劑VI，并且如上述實(shí)施例中所述測(cè)定凍干前和凍干后脂質(zhì)體的平均大小(表3/1)以及新鮮制劑及保存于5℃的制劑中的脂質(zhì)體平均大小和bindarit的量(表3/2)。表3/1凍干前和凍干后脂質(zhì)體的平均大小
表3/2海藻糖/脂類比(w/w)1∶1
對(duì)比1實(shí)施例將制劑II分成1ml的等分試樣，按照對(duì)比表1中給出的海藻糖/脂類重量比向每一等分試樣中添加海藻糖。
然后將該制劑在液氮的溫度下(-195.8℃)冷凍并凍干20小時(shí)，不再另外控制溫度。
用1ml蒸餾水使凍干物(1ml)再水化并在環(huán)境溫度下保持2小時(shí)。
用10ml生理溶液進(jìn)一步稀釋0.5ml的所述溶液，以便用NICOMP 370裝置測(cè)定脂質(zhì)體的平均大小。
所得結(jié)果列于下列對(duì)比表1中。對(duì)比表1凍干前、后的脂質(zhì)體平均大小<
從對(duì)比表1中我們可以觀察到在液氮溫度下進(jìn)行凍干過(guò)程時(shí)，在沒(méi)有海藻糖或有上述表給出比例的海藻糖存在的情況下，脂質(zhì)體均發(fā)生了一定程度的融合，這可由脂質(zhì)體平均大小的增加證明。此外，上述數(shù)據(jù)表明當(dāng)在液氮溫度下進(jìn)行凍干過(guò)程時(shí)，凍干過(guò)程本身(相同組合物的制劑)并不總能再現(xiàn)同樣的結(jié)果。
權(quán)利要求
1.含有海藻糖和已經(jīng)摻入生物活性組分的脂類脂質(zhì)體的凍干組合物，其特征在于所述生物活性組分極難溶于水，海藻糖/脂類的重量比≤1.5，且全部海藻糖均添加在凍干前已經(jīng)形成的脂質(zhì)體的外側(cè)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的凍干組合物，其特征在于所述極難溶于水的生物活性組分選自氯尼達(dá)明、褪黑激素、環(huán)孢菌素A和bindarit。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的凍干組合物，其特征在于脂類選自磷酸甘油酯類、甘油酯類、甘油二酯類、甘油三酯類、磷脂類、半乳糖和葡糖脂類、膽固醇及其衍生物、鞘脂類以及它們的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的凍干組合物，其特征在于脂類是磷脂類。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)的凍干組合物，其特征在于海藻糖/脂類的重量比在1∶2至1∶1之間。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)的凍干組合物，其特征在于脂質(zhì)體的平均大小在50至250nm之間。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的凍干組合物，其特征在于脂質(zhì)體的平均大小在50至100nm之間。
8.含有海藻糖和其中摻入了生物活性組分的脂類脂質(zhì)體的組合物的凍干方法，其特征在于(a)對(duì)于含水脂質(zhì)體組合物中的每重量份脂類來(lái)說(shuō)加入0.2-1.5重量份的海藻糖，其中脂質(zhì)體的平均大小為50-250nm，所述脂質(zhì)體中含有極難溶于水的一種生物活性組分；(b)以0.5℃-2℃/分鐘的冷凍速度通過(guò)凍干機(jī)的冷凍平板將所述組合物冷卻至-5℃--70℃；(c)一旦達(dá)到預(yù)定的冷凍溫度，則將所述組合物在所述溫度下保持2-5小時(shí)；(d)使用5×10-1-8×10-2毫巴的真空，使冷凍平板維持在步驟b)中確定的冷凍溫度下2-5小時(shí)；(e)使冷凍平板的溫度達(dá)到-15℃，維持在此溫度下直至水完全被除去為止。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的凍干方法，其特征在于步驟b)中的冷凍溫度為-20℃--30℃。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9的凍干方法，其特征在于步驟b)中的冷凍速度為0.77℃/分鐘。
11.根據(jù)權(quán)利要求8-10中任意一項(xiàng)的凍干方法，其特征在于步驟c)中的時(shí)間為3小時(shí)。
12.根據(jù)權(quán)利要求8-11中任意一項(xiàng)的凍干方法，其特征在于步驟d)中真空為6×10-2毫巴。
全文摘要
含有海藻糖和其中摻入了生物活性組分的脂類脂質(zhì)體的凍干組合物,其特征在于所述生物活性組分極難溶于水、海藻糖/脂類的重量比為≤1.5,且全部海藻糖均添加在凍干前已經(jīng)形成的脂質(zhì)體的外側(cè)。
文檔編號(hào)A61K47/26GK1248163SQ98802737
公開(kāi)日2000年3月22日 申請(qǐng)日期1998年2月12日 優(yōu)先權(quán)日1997年2月20日
發(fā)明者G·卡瓦洛, L·瑪奇托 申請(qǐng)人:方濟(jì)各安吉利克化學(xué)聯(lián)合股份有限公司