專利名稱：：選擇性調節(jié)細胞內信號發(fā)出的短肽的制作方法相關申請本申請是1997年5月21日提交的美國專利序列號No.08/861,153的部分繼續(xù)申請，其全部內容通過在此引述而合并于本文。本發(fā)明的技術背景蛋白質酪氨酸激酶是真核蛋白質激酶大家族中的成員。這一類的酶特異磷酸化細胞內蛋白質的酪氨酸殘基，對于調節(jié)多細胞有機體中的信號傳導是很重要的。蛋白質酪氨酸激酶是以膜結合受體存在的，參與細胞內的信號傳導，包括向核子的信號傳導。這樣，酪氨酸激酶對酪氨酸的磷酸化作用，對于隨環(huán)境變化而調節(jié)細胞內事件方面是一項重要的機理。許多細胞事件是由酪氨酸激酶調節(jié)的，包括細胞因子反應，抗原相關免疫反應，RNA病毒引起的細胞變異，瘤形成，細胞周期的調節(jié)，細胞形態(tài)和顯型的改性。加強蛋白質酪氨酸激酶活性可導致分泌生長因子的持久刺激作用，這樣可導致擴增性疾病如癌癥，非惡性擴增性疾病如動脈硬化，牛皮癬，和炎癥反應如膿毒性休克。減弱功能也可導致疾病，如，減弱胰島素受體酪氨酸激酶活性是多種類型糖尿病的病因，嚴重減少B細胞的祖細胞激酶會導致人類X-連鎖血中丙球蛋白貧乏。這樣，就需要可調節(jié)蛋白質酪氨酸激酶表達的化合物。這樣的化合物可應用在治療由于蛋白質酪氨酸激酶過度活性和活性不足引起的疾病中。這樣的化合物也可應用在對蛋白質酪氨酸激酶的活動模式，以及這些蛋白質如何調節(jié)細胞功能和活性的研究中。本發(fā)明的概述目前已發(fā)現從多種不同的蛋白質酪氨酸激酶的HJ環(huán)衍生的短肽，可顯著地影響表達蛋白質酪氨酸激酶細胞的活性(“HJ環(huán)”本文下面定義)。一些實例如下列出c-Src，Csk，c-Abl和c-Met的HJ環(huán)的肽衍生物已發(fā)現可抑制多種不同內皮細胞類型的擴增(實例2和4)。其他c-Src，Lck，內皮細胞酪氨酸激酶受體(Endoth)的HJ環(huán)的肽衍生物已發(fā)現可刺激牛毛細血管內皮細胞的體外擴增(實例2)。Lyn/Hck的HJ環(huán)的肽衍生物已發(fā)現可引起血管平滑肌細胞體外形態(tài)的改變(實例5)。具體地，與Ac-IVTYGKI-NH2(SEQIDNO.1)和Ac-IVTYGRI-NH2(SEQIDNO.2)，即分別為HJ24和HJ32，一起溫育的細胞，變長并呈現紡錘形結構。c-Src的HJ環(huán)的肽衍生物已發(fā)現可保護神經元細胞在體外不受血清剝奪的影響(實例3)。依據前面提及的發(fā)現，本文公開的新的肽是蛋白質酪氨酸激酶的HJ環(huán)的肽衍生物。同時公開的還有，確定調節(jié)所說的蛋白質酪氨酸激酶活性的蛋白質酪氨酸激酶HJ環(huán)的肽衍生物的方法。在受試者中調節(jié)蛋白質酪氨酸激酶活性的方法也公開了。本發(fā)明的一個具體實施是一種新的肽，是蛋白質酪氨酸激酶HJ環(huán)的肽衍生物。這種肽包括約五個到約二十個之間的氨基酸殘基或氨基酸殘基類似物，并調節(jié)蛋白質酪氨酸激酶的活性。肽的N-端和/或C-端可以是取代或未取代的。肽可以是線性的或環(huán)狀的。本發(fā)明的另一個具體實施是在受試者中調節(jié)蛋白質酪氨酸激酶活性的方法。方法包括服用治療上有效量的肽，肽是一種所說的蛋白質酪氨酸激酶HJ環(huán)的衍生物，如上所述。本發(fā)明的另一個具體實施是確定調節(jié)蛋白質酪氨酸激酶活性的肽的方法。該方法包括提供一種“測試肽”，其含有約五個到二十個氨基酸或氨基酸類似物，是一種從所說的蛋白質酪氨酸激酶衍生的肽。在所說的蛋白質酪氨酸激酶的控制下，在適合測定蛋白質酪氨酸激酶活性的條件下，將測試肽與有細胞活性或功能的細胞一起溫育。測定蛋白質酪氨酸激酶活性，并與在相同條件但沒有測試肽存在的情況下生長的相同細胞類型的細胞比較。與在沒有測試肽存在的情況下生長的細胞相比，大些或小些的活性表明測試肽調節(jié)蛋白質酪氨酸激酶的活性。本發(fā)明的肽可用在治療多種由蛋白質酪氨酸激酶活性過度及活性不足引起的疾病。實例包括但不限于，癌癥，平滑肌擴增引起的疾病(restinosis和動脈硬化)，牛皮癬，炎癥病變，糖尿病，免疫病變及骨質疏松癥。本發(fā)明的肽也可在體外應用，例如，產生抗體，而該抗體特異性地結合蛋白質酪氨酸激酶，而該酪氨酸激酶的HJ環(huán)具有與肽相應的序列或亞序列。這些抗體可用來確定表達蛋白質酪氨酸激酶的細胞，以研究蛋白質酪氨酸激酶的細胞內分布。此外，本發(fā)明的肽可用來確定和定量與衍生肽的蛋白質酪氨酸激酶HJ環(huán)結合的配體。附圖的簡要說明圖1給出了在蛋白質酪氨酸激酶家族中發(fā)現的HJ環(huán)的共有序列。圖2的列表給出了下列蛋白質酪氨酸激酶的HJ環(huán)的氨基酸序列c-Src(SEQIDNO.3)，Lck(SEQIDNO.4)，Csk(SEQIDNO.5)，c-Abl(SEQIDNO.6)，c-Met(SEQIDNO.7)，FAK(SEQIDNO.8)，Lyn/Hck(SEQIDNO.9)，Endoth(SEQIDNO.10)，Trk-神經生長因子(Trk-NGFR)(SEQIDNO.11)和EGFR(SEQIDNO.12)。也給出了在這些氨基酸序列中的保守取代基的實例?！?”表示氨基酸側鏈上的羧基酸基團被保護為脂族、取代的脂族、芐基、取代的芐基、芳族或取代的芳族酯。圖3的列表給出了肽HJ4(SEQIDNO.13)，HJ4.2(SEQIDNO.14)，HJ4Nitro(SEQIDNO.15)，HJ6(SEQIDNO.16)，HJ7(SEQIDNO.17)，HJ7.1(SEQIDNO.18)，HJ8(SEQIDNO.19)，HJ9(SEQIDNO.20)，HJ10(SEQIDNO.21)，HJ11(SEQIDNO.22)，HJ11.1(SEQIDNO.23)，HJ11Met(SEQIDNO.24)，HJ12(SEQIDNO.25)，HJ13(SEQIDNO.26)，HJ14(SEQIDNO.27)，HJ15(SEQIDNO.28)，HJ18(SEQIDNO.29)，HJ20(SEQIDNO.30)，HJ20.1(SEQIDNO.31)，HJ21.1(SEQIDNO.32)，HJ22(SEQIDNO.33)，HJ23.1(SEQIDNO.34)，HJ24(SEQIDNO.1)，HJ25(SEQIDNO.35)，HJ27(SEQIDNO.36)，HJ28(SEQIDNO.37)，HJ30(SEQIDNO.38)，HJ31(SEQIDNO.39)，HJ32(SEQIDNO.2)，HJ33(SEQIDNO.40)，HJ34(SEQIDNO.41)，Lena1(SEQIDNO.42)，Lena2(SEQIDNO.43)，J49(SEQIDNO.44)的序列。圖3還給出了衍生每種肽的蛋白質酪氨酸激酶和與每種肽的序列對應的HJ環(huán)部分。圖4給出了在增加K105H101(SEQIDNO.53)濃度(μm)的情況下，與對照物細胞相比，牛大動脈內皮細胞A19擴增的抑制百分比。K105H101是酪氨酸激酶DDR2的HJ環(huán)的肽衍生物。圖5給出了在增加K055H101(SEQIDNO.72)濃度(μm)的情況下，與對照物細胞相比，前列腺癌細胞DU145擴增的抑制百分比。K055H101是酪氨酸激酶Lyn的HJ環(huán)的肽衍生物。圖6給出了在增加K055H101(SEQIDNO.72)濃度(μm)的情況下，與對照物細胞相比，前列腺癌細胞PC3擴增的抑制百分比。K055H101是酪氨酸激酶Lyn的HJ環(huán)的肽衍生物。圖7給出了本發(fā)明的示例肽衍生物的序列，和從它們的HJ環(huán)衍生示例肽衍生物的酪氨酸激酶。圖7中所示的肽衍生物有K061H101(SEQIDNO.49)；K058H101(SEQIDNO.50)；K104H001(SEQIDNO.51)；K104H101(SEQIDNO.52)；K105H101(SEQIDNO.53)；K105H102(SEQIDNO.54)；K105H103(SEQIDNO.55)；K105H104(SEQIDNO.56)；K105H105(SEQIDNO.57)；K105H106(SEQIDNO.58)；K077H101(SEQIDNO.59)；K078H101(SEQIDNO.60)；K078H102(SEQIDNO.61)；K066H101(SEQIDNO.62)；K060H101(SEQIDNO.63)；K073H101(SEQIDNO.64)；K074H101(SEQIDNO.65)；K075H101(SEQIDNO.66)；K094H101(SEQIDNO.67)；K094H102(SEQIDNO.68)；K057H101(SEQIDNO.69)；K056H101(SEQIDNO.70)；K055H101(SEQIDNO.71)；K055H104(SEQIDNO.72)；K055H111(SEQIDNO.73)；K055H112(SEQIDNO.74)；K055H115(SEQIDNO.75)；K055H116(SEQIDNO.76)；K055H117(SEQIDNO.77)；K055H118(SEQIDNO.78)；K055H119(SEQIDNO.79)；K055H120(SEQIDNO.80)；K055H901(SEQIDNO.81)；K055H902(SEQIDNO.82)；K055H903(SEQIDNO.83)；K055H904(SEQIDNO.84)；K109H101(SEQIDNO.85)；K080H001(SEQIDNO.86)；K080H002(SEQIDNO.87)；K080H101(SEQIDNO.88)；K051H102(SEQIDNO.89)；K051H103(SEQIDNO.90)；K082H001(SEQIDNO.91)；K083H101(SEQIDNO.92)；K083H102(SEQIDNO.93)；K081H101(SEQIDNO.94)；K081H102(SEQIDNO.95)；K084H101(SEQIDNO.96)；K084H102(SEQIDNO.97)；K085H101(SEQIDNO.98)；K086H101(SEQIDNO.99)；K086H102(SEQIDNO.100)；K108H101(SEQIDNO.101)。本發(fā)明的詳細描述蛋白質酪氨酸激酶(本文后面稱“PTK”)是一種細胞內或膜結合蛋白質，它使用ATP或GTP的γ-磷酸鹽，在酪氨酸殘基的酚基基團上生成磷酸單酯。PTK含有同源的實施磷酸化作用的“激酶域”或“催化域”。根據對大量蛋白質激酶比較，目前已了解蛋白質激酶的激酶域，包括PTK，可被分成十二個亞域，這些區(qū)域通常不被大型氨基酸插入打斷，并且含有保守殘基的特性模式，參見Hanks和Hunter所著“真核性蛋白質激酶超級家族”一文，Hardie及Hanks編輯，蛋白質激酶實事手冊，卷I，學院出版社，第二章，1995年(HanksandHunter，“TheEukaryoticProteinKinaseSuperfamily”，inHardieandHanks(ed.)，TheProteinKinaseFactsBook，VolumeI，AcademicPress，Chapter2，1995)。這些亞域指亞域I到亞域XII。本文所指的“HJ環(huán)”是在PTK的激酶域內的亞域IX中間至亞域X中間之間的區(qū)域發(fā)現的。因為在不同的蛋白質激酶的亞域中發(fā)現高度的同源性，包括PTK，所以不同PTK的域的氨基酸序列可以對比。這樣，PTK的HJ環(huán)可通過參考標準型蛋白質激酶的氨基酸序列確定，如PKA-Cα，可以說是與在PKA-Cα的約氨基酸229-248之間發(fā)現的約二十個氨基酸殘基的鄰接序列相對應。對PTK的HJ環(huán)的第二個定義，是對在前面段落中提供的定義的補充，可通過參考PTK的激酶域的三維結構得出。PTK的激酶域已發(fā)現含有至少九個α-螺旋，被稱為螺旋A到螺旋I，參見Tabor等人，《研究學報》[Phil.Trans.R.Soc.Lond.B340315(1993)]，Mohammadi等人，《細胞》[Cell，86577(1996)]；Hubbard等人，《自然》[Nature，372746(1994)])。HJ環(huán)是約二十個氨基酸的鄰接序列，開始于F螺旋內從F螺旋N-端的約五個氨基酸，延伸約五個氨基酸殘到G螺旋中。本發(fā)明的肽的C-端或N-端，或它們兩者，可分別地被羧酸保護基或胺保護基取代或不取代。適合的保護基在Green和Wuts的“有機合成中的保護基團”中，JohnWiley和Sons，第五和第七章，1991年[＂ProtectingGroupsinOrganicSynthesis＂，JohnWileyandSons，Chapters5and7，1991]公開了，其內容通過在此引述而全部合并于本篇。較好的保護基是那些了促使肽運送入細胞的基團，如，通過減小肽的親水性并增加親油性。N-端保護基的實例包括?；鶊F(-CO-R1)和烷氧基羰基或芳氧基羰基(-CO-O-R1)，其中R1是脂族、取代的脂族、芐基、取代的芐基、芳族或取代的芳族的基團。?；鶊F的具體實例包括乙酰基，(乙基)-CO-，n-丙基-CO-，異-丙基-CO-，n-丁基-CO-，仲-丁基-CO-，叔-丁基-CO-，苯基-CO-，取代的苯基-CO-，芐基-CO-，(取代的芐基)-CO-。烷氧基羰基和芳氧基羰基的實例包括CH3-O-CO-，(乙基)-O-CO-，n-丙基-O-CO-，異-丙基-O-CO-，n-丁基-O-CO-，仲-丁基-O-CO-，叔-丁基-O-CO-，苯基-O-CO-，取代的苯基-O-CO-，芐基-O-CO-，(取代的芐基)-O-CO-。在C-端的羰基基團可被保護起來，為酰胺(如，在C-端的羥基基團被-NH2-、-NHR2或-NR2R3取代)或酯(在C-端的羥基基團被-OR2取代)。R2和R3可分別獨立地是脂族、取代的脂族、芐基、取代的芐基、?；蛉〈；然鶊F。此外，與氮原子一起，R2和R3可形成帶有約0-2個雜原子如氮、氧或硫的C4到C8的雜環(huán)。適合的雜環(huán)實例包括哌啶烷基，吡咯烷基，嗎啉代，硫嗎啉代，哌嗪烷基。C-端保護基實例包括-NH2，-NHCH3，-NH(CH3)2，-N(乙基)，-N(乙基)2，-N(甲基)(乙基)，-NH(芐基)，-N(C1-C4烷基)(芐基)，-NH(苯基)，-N(C1-C4烷基)(苯基)，-OCH3，-O-(乙基)，-O-(n-丙基)，-O-(n-丁基)，-O-(異-丙基)，-O-(仲-丁基)，-O-(叔-丁基)，-O-芐基，-O-苯基?！癏J環(huán)的肽衍生物”包括含有HJ環(huán)的氨基酸序列的肽?！癏J環(huán)的肽衍生物”還包括如，PTK的HJ環(huán)的亞序列。亞序列是在較大序列內發(fā)現的從約五個到約二十個氨基酸或氨基酸殘基的鄰接序列。這樣，HJ環(huán)的亞序列是在HJ環(huán)內發(fā)現的從約五個到二十個氨基酸或氨基酸殘基的鄰接序列。HJ環(huán)的亞序列也可指HJ環(huán)的“片段”。“肽衍生物”也包括含有“改性序列”的肽，其中在原始序列或亞序列中的一個或多個氨基酸已被天然產生的氨基酸或氨基酸類似物取代(也稱為“改性氨基酸”)。在本發(fā)明的一個方面，肽衍生物含有與PTK的HJ環(huán)的亞序列相對應的序列，附帶條件是在肽衍生物中的任何一個氨基酸殘基可與亞序列中的相對應的氨基酸殘基不同。如，如果亞序列是[AA1]-[AA2]-[AA3]-[AA4]-[AA5]-，那么肽衍生物可以是[AA1’]-[AA2]-[AA3]-[AA4]-[AA5]-，[AA1]-[AA2’]-[AA3]-[AA4]-[AA5]-，[AA1]-[AA2]-[AA3’]-[AA4]-[AA5]-，[AA1]-[AA2]-[AA3]-[AA4’]-[AA5]-，或[AA1]-[AA2]-[AA3]-[AA4]-[AA5’]-，其中[AA’]是與[AA]不同的天然產生的或改性的氨基酸。在本發(fā)明的另一方面，肽衍生物含有與PTK的HJ環(huán)的亞序列相對應的序列，附帶條件是在肽衍生物中任何兩個氨基酸殘基可與亞序列中相對應的氨基酸殘基不同?！鞍被釟埢笔窃陔膬劝l(fā)現的組成，由-NH-CHR-CO-表示，其中R是天然產生的氨基酸的側鏈。當指在肽內發(fā)現的組成時，在本申請中“氨基酸殘基”和“氨基酸”可互換使用。“氨基酸殘基類似物”包括含有下列式子的D或L殘基-NH-CHR-CO-，其中R是脂族基團、取代的脂族基團、芐基基團、取代的芐基基團、芳族基團或取代的芳族基團，其中R不與天然產生的氨基酸的側鏈相對應。當指在肽內發(fā)現的組成時，在本申請中“氨基酸殘基類似物”和“氨基酸類似物”可互換使用。用在本文中，脂族基團包括直鏈、支鏈或環(huán)狀的C1-C6完全飽和的烴，其含有一個或兩個雜原子如氮、氧或硫和/或含有一個或多個不飽和單元。芳族基團包括碳環(huán)芳族基團如苯基和萘基，和雜環(huán)芳組基團如咪唑基、吲哚基、噻嗯基、呋喃基、吡啶基、吡喃基、呃唑基、苯噻嗯基、苯呋喃基、喹啉基、異喹啉基、吖啶基。脂族基團、芳族基團或芐基基團上適合的取代基包括，如-OH、鹵代基(-Br、-Cl、-I和-F)、-O(脂族基團、取代的脂族基團、芐基、取代的芐基、?；蛉〈孽；?，-CN、-NO2、-COOH、-NH2、-NH(脂族基團、取代的脂族基團、芐基、取代的芐基、?；蛉〈孽；?、-N(脂族基團、取代的脂族基團、芐基、取代的芐基、?；蛉〈孽；?2、-COO(脂族基團、取代的脂族基團、芐基、取代的芐基、?；蛉〈孽；?、-CONH2、-CONH(脂族基團、取代的脂族基團、芐基、取代的芐基、?；蛉〈孽；?、-SH、-S(脂族基團、取代的脂族基團、芐基、取代的芐基、芳族基團或取代的芳族基團)和-NH-C(＝NH)-NH2。取代的芐基或芳族基團也可含有脂族基團或取代的脂族基團作為取代基。取代的脂族基團也可含有芐基、取代的芐基、?；蛉〈孽；鳛槿〈?。取代的脂族基團、取代的芳族基團或取代的芐基可含有一個或多個取代基。在HJ環(huán)序列或HJ環(huán)亞序列中的氨基酸殘基的適合的取代基包括，產生調節(jié)PTK活性的肽衍生物的保守取代基?！氨Ｊ厝〈笔侵高@樣的取代，即其中的取代氨基酸(天然產生或改性的氨基酸)含有與被取代的氨基酸大約相同的尺寸和電子屬性。這樣，取代氨基酸在側鏈上就會有與原始氨基酸相同或相似的官能團?！氨Ｊ厝〈币仓甘褂贸嗽趥孺溨械墓倌軋F用適當的保護基功能化之外都與被取代的氨基酸相同的氨基酸進行的取代。適當的保護基在Green和Wuts的“有機合成中的保護基團”一文，JohnWiley和Sons，第5和第7章，1991年[“ProtectingGroupsinOrganicSynthesis”，JohnWileyandSons，Chapters5and7，1991]中公開了，其內容通過在此引述而合并于本文。對于N-端和C-端保護基，較好的保護基是那些促使肽運送到細胞內的基團，如，通過減小肽的親水性及增加肽的親油性，并可在細胞內通過水解或酶解裂開，參見Ditter等人在“藥物科學雜志”、King等人在“生化”、Lindberg等人在“藥物代謝和特性”、Tunek等人在“生化藥物”、Alderson等人在“生化和生物物理”、Singhal等人在FASEB上發(fā)表的文獻[Ditteretal.，J.Pharm，Sci.57783(1968)；Ditteretal.，J.Pharm，Sci.57828(1968)；Ditteretal.，J.Pharm，Sci.57557(1968)；Kingetal.，Biochemistry262294(1987)；Lindbergetal.，DrugMetabolismandDisposition17311(1989)；andTuneketal.，Biochem.Pharm.373867(1988)；Aldersonetal.，Arch.Biochem.，Biophys.，239538(1985)andSinghaletal.，FASEBJ.1220(1987)]。適當的羥基保護基包括酯、碳酸鹽和氨基甲酸鹽保護基。適當的胺保護基包括?；屯檠趸蚍佳趸缟纤龅膶-端的保護基。適當的羧酸保護基包括脂族、芐基和?；サ孽ィ缟纤龅膶-端的保護基。在一個具體實施中，在本發(fā)明的肽中的一個或多個谷氨酸或天冬氨酸殘基的側鏈上的羧酸基團被保護起來，較好的是用如甲基、乙基、芐基或取代的芐基酯，更好的是芐基酯保護起來。下面提供的天然產生和改性的氨基酸組，組中的每一種氨基酸具有相似的電子和空間屬性。這樣，保守取代可對一種氨基酸用同組的另一種氨基酸進行取代來完成。應該理解的是，這些組是沒有限制的，即在每一組中可以包含有其他的改性氨基酸。組I包括亮氨酸，異亮氨酸，纈氨酸，蛋氨酸，絲氨酸，半胱氨酸，蘇氨酸和含有下列側鏈的改性氨基酸乙基、n-丁基、-CH2CH2OH、-CH2CH2CH2OH、-CH2CHOHCH3和-CH2SCH3。較好地，組I包括亮氨酸，異亮氨酸，纈氨酸，蛋氨酸。組II包括甘氨酸，丙氨酸，纈氨酸，絲氨酸，半胱氨酸，蘇氨酸和含有乙基側鏈的改性氨基酸。較好地，組II包括甘氨酸，丙氨酸。組III包括苯基丙氨酸，苯基甘氨酸，酪氨酸，色氨酸，環(huán)己基甲基，和含有取代的芐基或苯基側鏈的改性氨基酸殘基。較好的取代基包括下列中的一個或多個鹵代基、甲基、乙基、硝基、甲氧基、乙氧基和-CN。較好地，組III包括苯基丙氨酸，酪氨酸和色氨酸。組IV包括谷氨酸，天冬氨酸，谷氨酸或天冬氨酸的取代或未取代的脂族、芳族或芐基的酯(如被甲基、乙基、n-丙基、異-丙基、環(huán)己基、芐基或取代的芐基所取代的酯)，谷氨酰胺，天冬酰胺，CO-NH-烷基化谷氨酰胺或天冬酰胺(如被甲基、乙基、n-丙基、異-丙基取代的)和含有側鏈-(CH2)3-COOH的改性氨基酸，它們的酯(取代或未取代所脂族、芳族或芐基的酯)，它們的酰胺，和它們的取代或未取代的N-烷基化酰胺。較好地，組IV包括谷氨酸，天冬氨酸，甲基天冬氨酸，乙基天冬氨酸，芐基天冬氨酸，甲基谷氨酸，乙基谷氨酸，和芐基谷氨酸。組V包括組氨酸，賴氨酸，精氨酸，N-硝基精氨酸，β-環(huán)精氨酸，γ-羥基精氨酸，N-脒基瓜氨酸和2-氨基-4-胍基丁酸，賴氨酸同系物，精氨酸同系物，鳥氨酸同系物。較好地，組V包括組氨酸，賴氨酸，精氨酸，鳥氨酸。氨基酸的同系物包括在側鏈上從1到約3個另外的亞甲基單元。組VI包括絲氨酸，蘇氨酸，半胱氨酸和含有被-OH或-SH取代的C1-C5直鏈或支鏈烷基側鏈的改性氨基酸。較好地，組VI包括絲氨酸，半胱氨酸或蘇氨酸。在另一方面，在HJ環(huán)序列或HJ環(huán)亞序列中的氨基酸殘基的適合的取代還包括“重度”取代，其產生調節(jié)PTK活性的肽衍生物。產生調節(jié)PTK活性的肽衍生物的重度取代，與高度保守的位置相比，更可能處于整個蛋白質酪氨酸激酶家族中不是高度保守性的位置上。圖1顯示了HJ環(huán)的約二十個氨基酸的共有序列。在PTK家族中的高度保守位置，和在那些位置上通常可發(fā)現的保守氨基酸已作指示。在蛋白質PTK家族中不是高度保守的位置已留出空格。“重度取代”是這樣的一種取代，其中取代氨基酸(天然產生或改性的)與被取代的氨基酸相比，尺寸和/或電子屬性顯著不同。這樣，取代氨基酸的側鏈可以比被取代的氨基酸的側鏈顯著地大(或小)，和/或可以含有與被取代的氨基酸電子屬性顯著不同的官能團。這種類型的重度取代實例包括，用苯基丙氨酸或環(huán)己基甲基甘氨酸取代丙氨酸，異亮氨酸取代甘氨酸，D氨基酸取代相應的L氨基酸，或-NH-CH[(-CH2)3-COOH]-CO-取代天冬氨酸。另外，官能團也可加在側鏈上，從側鏈上刪除或與其他官能團交換。這種類型的重度取代的實例包括，在纈氨酸、亮氨酸或異亮氨酸的脂族側鏈上加上胺或羥基、羧酸，在天冬氨酸或谷氨酸的側鏈上用胺替換羧酸，或在賴氨酸或鳥氨酸的側鏈上刪除胺。在另一個可選擇的方式中，取代氨基酸的側鏈可以具有與被取代的氨基酸的官能團顯著不同的空間和電子屬性。這樣的改性實例包括色氨酸取代甘氨酸，賴氨酸取代天冬氨酸，和-CH(-CH2)4-COOH取代絲氨酸的側鏈。這些實例不意味有限制性。適當的重度取代的另一個實例是用D-構型氨基酸或其類似物，其在與甘氨酸氫側鏈相同的位置上含有氫原子，替代保守甘氨酸殘基(如在圖1中位置7和位置13)。J49是帶有這樣的重度取代的肽實例(D-賴氨酸替代保守甘氨酸)。其活性可被肽及肽衍生物調節(jié)的PTK實例，如本文所述，包括但不限于，屬于下列PTK家族的PTKSrc、EGF-R、FGF-R、VEGF-R、HGF-R、PDGF-R、胰島素受體家族和神經營養(yǎng)蛋白受體家族。適合的Src家族組成包括但不限于，c-Src、c-Yes、FYN、FGR、HCK、LYN、LCK和BLK。適合的EGF-R家族成員包括但不限于，EGFR、ErbB2、ErbB3、和ErbB4。適合的FGF-R家族成員包括但不限于，FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4。適合的VEGF-R家族成員包括但不限于，Flt1、Flt4和Flk1。適合的胰島素受體家族包括但不限于，INS-R、IRR和IGF1-R。其他適合的PTK包括但不限于，RET、CSK、c-Met、c-Abl和FAK。本發(fā)明包括含有與在PTK的HJ環(huán)中發(fā)現的序列、其亞序列或其改性亞序列相對應的氨基酸序列的肽。適合的亞序列包括但不限于，與PTK的JH環(huán)的[AA]1到[AA]20，[AA]3到[AA]10，[AA]7到[AA]14，[AA]11到[AA]18，[AA]3到[AA]14，[AA]7到[AA]18，和[AA]3到[AA]18或其亞序列相對應的序列。圖2顯示了下列PTK的HJ環(huán)的序列c-Src、Lck、Csk、c-Met、FAK、Lyn/Hck、Endoth和Trk-NGFR。圖2也提供了HJ環(huán)中氨基酸序列的號碼圖表。HJ環(huán)N-端的氨基酸在位置1上，可稱為“[AA]1”。序列中的下一個氨基酸稱為“[AA]2”，在位置2上，接著氨基酸[AA]3到[AA]20，在位置3-20上。這樣，帶有氨基酸序列[AA]1到[AA]20的肽20-mer包括在HJ環(huán)中的二十個氨基酸。帶有氨基酸序列[AA]3到[AA]10的HJ環(huán)的肽衍生物，如在前面段落中所述的，在所說的HJ環(huán)中包括第三個氨基酸到第十個氨基酸。本發(fā)明還包括含有與調節(jié)PTK的活性的PTK的HJ環(huán)的改性序列或亞序列相對應的氨基酸序列的肽。一方面，序列或亞序列中的一個、兩個或多個氨基酸用保守取代改性；取代可在共有位置上，也可在非共有位置上，或在兩種位置上都有。圖2中提供了c-Src、Lyn/Hck、Lck、Csk、c-Abl、c-Met、FAK、Endoth和神經生長因子(Trk-NGFR)的HJ環(huán)的適當的氨基酸保守取代的實例。另一方面，序列或亞序列中的一個、兩個或多個氨基酸用重度取代改性；較好的取代是在非共有位置上。本發(fā)明肽衍生物的具體實例包括在圖3中所示的肽。如上所述的這些肽的N-端和/或C-端可被改性。如圖3中所示，這些肽的N-端被乙?；?，C-端被酰胺化了。如上所述，酰胺和羧酸的其他保護基也可使用。一個或兩個保護基可被省去或不省去。肽可以是線性的或環(huán)狀的。還包括如圖3中所示的肽，附帶條件是在肽中的任何一個氨基殘基可以變化，為任何天然產生氨基酸或其類似物。本發(fā)明也包括如圖3中所示的肽，附帶條件是在肽中的任何兩個氨基殘基可以變化，為任何天然產生氨基酸或其類似物的序列的肽。包括在本發(fā)明內的其他具體實例為含有序列Leu-Val-Thr-Xaa-Gly-Arg-Val(SEQIDNO.45)或Gly-Arg-Val-Pro-Yaa-Pro-Zaa(SEQIDNO.46)的肽。N-端和/或C-端可被或不被保護，例如，可發(fā)生或不發(fā)生N-端乙酰化和/或C-端酰胺化。Xaa是從包括L-賴氨酸、D-賴氨酸、組氨酸、酪氨酸、苯基丙氨酸和精氨酸的組中選?。籝aa是從包括酪氨酸、苯基丙氨酸和色氨酸的組中選?。籞aa是從包括甘氨酸、丙氨酸和精氨酸的組中選取。本發(fā)明還包括環(huán)狀肽，其含有與調節(jié)PTK活性的PTK的HJ環(huán)的改性序列或亞序列相對應的氨基酸序列?！碍h(huán)狀肽”指如肽或肽衍生物，在其內通過N-端的氮原子和C-端的羰基碳的肽鍵形成環(huán)?！碍h(huán)化”也是指，通過化合物的N-端的氮和肽中的適當氨基酸的側鏈之間的共價鍵形成環(huán)，較好地是C-端的氨基酸。如，可在N-端的氮原子和天冬氨酸或谷氨酸的側鏈的羰基碳之間形成酰胺。另外，肽或肽衍生物可通過在化合物C-端羰基和肽中適當氨基酸的側鏈之間形成共價鍵進行環(huán)化，較好地是N-端氨基酸。如，在C-端羰基碳和賴氨酸或鳥氨酸的側鏈上的氨基氮原子之間形成酰胺；在C-端羰基碳和絲氨酸或蘇氨酸的側鏈上的羥基氧原子之間形成酯?！碍h(huán)化”也指，通過肽中適當的兩個氨基酸的側鏈之間的共價鍵形成環(huán)，較好地是終端氨基酸。如，在兩個半胱氨酸的側鏈上的硫原子之間可形成二硫化物?；蛘?，可在如谷氨酸或天冬氨酸的側鏈上的羰基碳，和如絲氨酸或蘇氨酸側鏈上的氧原子之間形成酯。在如谷氨酸或天冬氨酸的側鏈上的羰基碳，和如賴氨酸或鳥氨酸的側鏈上的氨基氮之間形成酰胺。此外，肽和肽衍生物可通過在兩個端點之間，在一個端點和肽或肽衍生物中氨基酸側鏈之間，或在肽或肽衍生物中兩個氨基酸的側鏈之間的連接基團進行環(huán)化。適當的連接基團在Lobl等人的WO92/00995和Chiang等人的WO94/15958中已經公開，其內容通過在此引述而合并于本文。在原始氨基酸序列或亞序列中適當的取代是，那些如上所述可產生調節(jié)PTK活性的肽衍生物的取代。當PTK的活性被增加了或被降低了，即PTK的活性是“被調節(jié)了”。PTK活性的增加或降低可通過PTK控制的細胞活性或功能的相應調節(jié)(增加或降低)來測定。這些細胞功能的實例包括細胞擴增、細胞分化、細胞形態(tài)、基因表達等。通過獲取含有一種或多種細胞活性受PTK控制的細胞，可容易地確定是否肽或肽衍生物調節(jié)PTK活性。在適合測試蛋白質酪氨酸激酶活性的條件下，用肽或肽衍生物溫育細胞制備測試混合物。測定PTK活性并與適當的對照物相比，如與在相同的條件下，沒有肽或肽衍生物存在下溫育的相同的細胞活性相比。與對照物相比，在測試混合物中PTK活性的大些或小些，表示測試肽或肽衍生物調節(jié)所說的PTK活性。適用測試的細胞包括表達膜結合或細胞內PTK的正常細胞，轉化細胞、或已被遺傳重組以表達PTK的細胞。其他適用的細胞包括癌細胞，可用來測定擴增和分化；如Src、Csk和Fak涉及惡性細胞的整個譜系。此外，帶有相應有關PTK的具體腫瘤可以使用，包括乳腺和卵巢癌細胞(EGFR)、前列腺癌細胞(FGF)、白血病細胞(Abl)、肝腫瘤細胞(Met)。血管平滑肌細胞可用來測定擴增和移動(FGFR和PDGFR)。免疫系統(tǒng)細胞可用來測定細胞因子的產生，如IL-2、TNF和INF(Lyn、Hck、Blk和Lck)。破骨細胞可用來測定骨的再吸收(Src和Csk)。神經元細胞可用來測定分化(Trks)。上皮組織如表皮，腸上皮細胞和乳房可用來測定擴增、分化和再生(EGFR)。肝細胞可用來測定擴增分化和再生(c-Met)。內皮細胞可用來測定擴增和移動(VEGFR、FGFR和c-Met)。測定PTK活性的適當條件包括適合測試受PTK控制的細胞活性或功能的條件。通常，當細胞暴露在適合細胞生長的條件下時，包括適合的溫度(如在約30℃到42℃之間)和介質中適當濃度的營養(yǎng)物的(如氨基酸，維生素，生長因子)存在，可測定細胞的活性。當測試細胞活性或功能如，細胞擴增，分化，細胞形態(tài)，基因表達，細胞存活，細胞對外界刺激的反應和細胞顯型時，使用適合細胞生長的條件。另一方面，通過在剝奪血清的情況下生長細胞，可估定某些PTK的活性。細胞通常在存在血清的培養(yǎng)物中生長，如牛血清，馬血清或牛胎血清。許多細胞，如神經細胞如PC-12細胞，在血清不充分時通常不能存活。使用不充分血清培養(yǎng)細胞即是指“剝奪血清的情況”，包括如含約0％到4％的血清。通過肽或肽衍生物在血清剝奪的狀況中對細胞，如神經元細胞的保護程度確定PTK的活性。具體條件在實例3中提供。一般，通過定量測定PTK控制的細胞活性，來測定測試混合物中PTK的活性。如，如果所用細胞其中由PTK控制細胞擴增(如在基礎纖維原細胞生長因子中的牛內皮毛細血管細胞)，那么通過測量細胞擴增，如通過比較給定一段時間后的細胞存在數目和細胞原始存在數目，可測定PTK活性。如果使用的細胞其中PTK控制細胞的分化[如用c-Src轉染的PC-12細胞-參閱Alema等人在《(自然》上發(fā)表的文章，[Alemaetal.，Nature316557(1985)]，那么通過測量分化程度可測定活性(如，神經突的延伸程度和神經元分化的標記在用c-Src轉染的PC-12細胞中的表達程度，參閱Alema等人的文獻，和在發(fā)育Xwnopus胚胎細胞中的中胚層形成誘導程度，參閱Burgess等人在“生化年報”[BurgessandMaciag，Ann.Rev.Biochem.，58575(1989)]的文獻和Dionne等人的WO92/00999。活性也可通過基因表達，細胞形態(tài)或細胞顯型的改變程度來測定，如通過測定細胞形狀改變程度，細胞呈現紡錘形結構的程度，基因表達的改變程度，或對外界刺激發(fā)應的改變程度(參閱實例5適合測定細胞形狀改變的條件)。如果使用血清剝奪條件，則活性可通過細胞存活的程度來測定。與對照物相比，在測試混合物中較多細胞的存活說明肽或肽衍生物可預防凋亡(編程性細胞死亡)。通過測定細胞擴增確定PTK活性的適當條件的具體實例在實例2和4中提供。通過測定細胞存活確定PTK活性的適當血清剝奪條件的具體實例在實例3中提供。應該理解的是，本文上述的確定肽或肽衍生物是否調節(jié)由PTK控制的細胞活性或功能的試驗，可用本文所具體描述的細胞以外的細胞實施。對于尚未發(fā)現的PTK或其功能尚未了解的PTK，一旦確定了其所控制的細胞功能或活性，也可采用這種試驗。這些PTK也在本發(fā)明的范圍內。本發(fā)明也涉及在受試者中調節(jié)蛋白質酪氨酸激酶活性的方法。“受試者”較好的是人，但也可是需治療的動物，如獸醫(yī)動物(如狗、貓，等等)，畜牧動物(如牛、豬、馬等等)和實驗室動物(如大鼠、小鼠、豚鼠等等)。為治療某些疾病，如擴增疾病如癌癥，非惡性擴增疾病如動脈硬化，牛皮癬和炎癥反應如膿毒性休克，可調節(jié)受試者中的PTK活性。如癌癥可通過抗-血管產生治療法治療。對纖維原細胞生長因子(FGF)，或血管內皮生長因子(VEGF)反應的c-Met或酪氨酸激酶受體的抑制作用減少了血管產生。這樣，可服用治療上有效量的，產生減小的對FGF或VEGF反應的，c-Met或酪氨酸激酶受體活性的肽或肽衍生物治療癌癥。此外，RET涉及某些甲狀腺癌；調節(jié)RET活性的治療上有效量的肽或肽衍生物，可用來治療這些甲狀腺癌。由氣囊導管插入造成的血管損傷而產生的血管平滑肌擴增引起再狹窄。血管平滑肌擴增也是動脈硬化的病因。血管平滑肌擴增是由于如Csk的抑制作用和/或對FGF或血小板衍生生長因子(PDGF)反應的酪氨酸激酶受體的刺激作用。這樣，狹窄和動脈硬化可通過服用抑制對FGF或PDGF反應的酪氨酸激酶受體的或激活Csk的治療上有效量的肽或肽衍生物來治療。FGF也與牛皮癬、關節(jié)炎、良性前列腺肥大有關，參見Dionne等人的WO92/00999。這些病況可用對FGF反應的PTK的HJ肽治療。Src活性至少部分地與骨吸收有關。這樣，骨質疏松癥可用治療上有效量的抑制Src活性的或激活Csk的肽或肽衍生物來治療。在作為過敏反應的結果而患有關節(jié)炎的個體中的非特異免疫反應期間，Lyn和Hck是活性的。在患有膿毒性休克的個體中Lyn也是活性的。這樣，這些病況可用抑制這些PTK活性的治療上有效量的肽或肽衍生物治療。Lck在T細胞中表達，在T細胞免疫反應期間是活性的。同樣地，Lyn在B細胞中表達，在B細胞免疫反應期間是活性的。這樣，由T細胞或B細胞活性過度引起的病況可通過服用治療上有效量的分別抑制Lck或Lyn的肽或肽衍生物來治療。由T細胞或B細胞活性不足引起的病況可通過服用治療上有效量的分別刺激Lck或Lyn的肽或肽衍生物來治療。此外，嚴重缺少B細胞的祖細胞激酶導致的人類X-連鎖血中丙球蛋白缺乏，可通過服用治療上有效量的刺激B細胞的祖細胞激酶的肽或肽衍生物治療。其他PTK的功能減弱也會導致疾病。如胰島素受體酪氨酸激酶(RTK)的活性減弱導致多種類型的糖尿病。這些類型的糖尿病可通過服用治療上有效量的增加胰島素RTK活性的肽或肽衍生物來治療。依據本文所公開的方法，肽和肽衍生物可設計用來調節(jié)HJ環(huán)已排序和細胞功能已知的PTK的活性。這樣，肽和肽衍生物可設計用來影響(增加或減少)那些細胞功能。進一步的研究可能會揭示出，目前不了解病因的某些疾病狀況是由PTK控制細胞功能的過度活性或活性不足引起的。這些疾病可通過服用活性過度的或活性不足的PTKs的HJ環(huán)的肽衍生物來治療。適當的肽和肽衍生物可用本文所公開的方法確定。這些治療方法、肽和肽衍生物等都包括在本發(fā)明的范圍內。“治療上有效量”是指這樣的化合物量，即與在沒有治療的情況下典型臨床結果相比產生了改善的臨床結果的量?！案纳频呐R床結果”是指，作為治療結果延長了生命期望，減少了并發(fā)癥，減輕了癥狀，減少了身體的不舒適和/或減少住院治療等。對于癌癥，“改善的臨床結果”包括延長生命期望。還可能包括減緩或制止腫瘤生長的速度，致使腫瘤尺寸縮小，降低轉移速度和/或改善生命質量(如減少身體不舒適或增加靈活性等)。對于再狹窄和動脈硬化，“改善的臨床結果”是指延長生命期望或減小動脈阻塞速度。它還包括改善生命質量(如減少身體不舒適，增加靈活性或減少住院治療頻率和時間等)。對于骨質疏松癥，“改善的臨床結果”包括如，減小骨壞死的速度，增加骨形成的速度和/或改善生命質量(如減少身體不舒適，增加靈活性或減少住院治療頻率和時間等)。對于調節(jié)免疫系統(tǒng)，如果個體有與免疫抑制有關的疾病，那么“改善的臨床結果”是指在個體中增加免疫反應的量。如個體患有X-連鎖血中丙球蛋白缺乏，改善的臨床結果包括增加免疫球蛋白的量。對患有免疫系統(tǒng)抑制的個體，“改善的臨床結果”也可指減小傳染疾病的易感染性。對于與免疫系統(tǒng)活性過度有關的疾病，“改善的臨床結果”是指減小免疫反應的量。對于這兩種病況，“改善的臨床結果”也包括改善生命質量，如上所述。對于糖尿病，改善的臨床結果是指延長生命期望，減少疾病的并發(fā)癥(如神經病，視網膜病，腎病和血管衰退)和改善生命質量等，如上所述。給個體服用的肽或肽衍生物的量取決于疾病的種類和嚴重性，及個體的特征，如通常的健康狀況，年齡，性別，體重和對藥物的容忍量。本領域的技術人員可依據這些和其他因素確定適當的劑量，一般地，對于成人而言，肽或肽衍生物的治療有效量的范圍是從每天約1mg到每天約1000mg。較好的劑量范圍是從每天約1mg到每天約100mg。非腸道用藥可包括，如系統(tǒng)用藥，如通過肌肉注射，靜脈注射，皮下注射，腹腔注射?？沟鞍姿庾饔玫碾幕螂难苌锟煽诜盟帲缬媚z囊，栓劑，懸浮劑或片劑的形式。肽或肽衍生物可與藥用可接受的作為治療癌癥、動脈硬化、骨質疏松癥或其他上述疾病的藥用組合物一部分的載體一起給個體服用。適合的藥用載體可含有不與肽或肽衍生物作用的惰性成分?？蓪嵤┑臉藴仕幱门浞郊夹g如在Remington的“藥物科學”，Mack出版公司[Remington’sPharmaceuticalSciences，MackPublishingCompany，Easton，PA]中所述的那些技術。非腸道用藥適合的藥用載體包括如，無菌水，生理鹽水，細菌抑制鹽水(鹽水含有約0.9％mg/ml芐基乙醇)，磷酸緩沖鹽水，Hank’s溶液，Ringer’s-乳酸鹽等等。制備膠囊組合物(如包裹著硬凝膠或環(huán)糊精)的方法在此領域是已知的，參見Baker等人的“生物活性劑的控制釋放”，1986年(Baker，etal.，ControlledReleaseofBiologicalActiveAgents，JohnWileyandSons，1986)。本發(fā)明的HJ環(huán)肽是從在天然蛋白質中線性的排列中衍生而來的。因此，它們可用來制備PTK的特異抗體。并且，因為對于每個PTK的亞家族，HJ-環(huán)序列是獨特的，所以抗HJ-環(huán)抗體可特別地用來分離PTK不同的亞家族。通過與適當的載體共軛結合，如與匙孔戚血藍蛋白或血清蛋白的共軛結合，可制備抗HJ環(huán)肽的適當抗體；多克隆和單克隆抗體的制備可采用適當的技術實施。Kohler等人在“自然”雜志、Milstein等人在“自然”雜志、Koprowski等人的美國專利第4,172,124號、Harlow等人的《抗體實驗室手冊》，寒春碼頭實驗室，“分子生物學通用方案”，卷2，增補27，1994年夏，和《當前分子生物學指導》，第11章[Kohleretal.，Nature，256495-497(1975)；Eur.J.Immunol.6511-519(1976)；Milsteinetal.，Nature266550-552(1977)；Koprowskietal.，U.S.PatentNo.4,172,124；Harlow，E.AndD.Lane，1988，AntibodiesALaboratoryManual，(ColdSpringHarborLaboratoryColdSpringHarbor，NY)；CurrentProtocolsInMolecularBiology，Vol.2(Supplement27，Summer1994)，Ausubel，F.M.etal.，Eds.，(JohnWiley&amp;SonsNewYork，NY)，Chapter11，(1991)]中已描述多種方法。通常，細胞雜交可通過融合適當的不死細胞系(如骨髓瘤細胞系如SP2/0)和抗體產生細胞來制備?？贵w產生細胞，較好的是脾或淋巴節(jié)產生的細胞，可用從有關抗原免疫的動物中獲取。融合的細胞(雜交細胞)可采用選擇性培養(yǎng)條件分離，并用限制稀釋液克隆。產生有所需特異性的抗體的細胞可用適當的試驗方法選取(如ELISA)。抗HJ環(huán)肽的抗體，包括單克隆抗體有很多用途。如，那些抗從HJ環(huán)肽衍生來的蛋白質的抗體，或與從HJ環(huán)肽衍生來的蛋白質反應的抗體，較好的是與所說的蛋白質特異結合的抗體，可用來確定和/或分類在細胞表面上表現那種蛋白質的細胞(如通過熒光活性細胞分類或組織學分析的方式)。對蛋白質特異的單克隆抗體也可用來檢測和/或定量在細胞表面表達的或在樣品中存在的蛋白質(如在ELISA中)。另外，抗體也可用來確定在細胞的細胞質中是否存在細胞內PTK。生成澄清的細胞溶胞體[如用氫氧化鈉(0.2N)和十二烷基硫酸鈉(1％)處理細胞，離心并將沉淀與上層清液分離)，并用對PTK為特異的抗-HJ環(huán)抗體處理。然后，分析澄清溶胞體，如通過對PTK和抗體之間的Western印跡分析或免疫沉淀分析。接受刺激后，一些PTK變成膜結合的或細胞骨架締合的。抗-HJ環(huán)抗體也可用來在多種生理條件下，通過采用傳統(tǒng)免疫細胞化學技術如免疫熒光技術，免疫過氧化酶技術，和免疫電子顯微鏡法，連同特異抗-HJ-環(huán)抗體，來研究PTK多種亞家族的細胞內分布(區(qū)室化)。與免疫原作用的抗體也很有用。如它們可用來檢測和/或定量樣品中的免疫原，或提純免疫原(如免疫親和提純法)。PTK內的HJ環(huán)在調節(jié)PTK活性中起重要的作用，如本發(fā)明的肽和肽衍生物在PTK活性方面具有顯著影響的事實所證實的。本發(fā)明的HJ環(huán)肽也可用來確定與特定PTK的HJ環(huán)相互作用并調節(jié)PTK活性的配體。如可制備直接地或通過連接物與特定HJ環(huán)共價結合的親和柱。這種柱接著可用來分離和確定結合HJ肽的特異配體，并也可能結合衍生出HJ環(huán)肽的PTK的特異配體。然后配體可從柱中洗脫，鑒定并測試其調節(jié)PTK活性和PTK控制的細胞功能的能力。絲氨酸/蘇氨酸激酶是另一種蛋白質激酶。它們作為細胞內蛋白質，如G-蛋白質偶聯受體激酶，或膜激活蛋白質出現參與細胞信號傳導。絲氨酸/蘇氨酸激酶結合配體產生向細胞內的信號傳導，通過激酶對細胞內絲氨酸或蘇氨酸殘基的磷酸化作用啟動。如同PTK，絲氨酸/蘇氨酸激酶也用這種磷酸化作用機制控制細胞功能，參見Hardie的“蛋白質激酶的細胞功能”，Hardie和Hanks編輯，《蛋白質激酶實事手冊》，學院出版社，1995[Hardie，“CellularFunctionsofProteinKinases”，inHardieandHanks(ed.)TheProteinKinasesFactsBook，AcademicPress1995]。絲氨酸/蘇氨酸激酶與PTK具有高度的同源性，包括HJ環(huán)。這樣，絲氨酸/蘇氨酸激酶活性和它們控制的細胞功能可用肽(它們HJ環(huán)的肽衍生物)調節(jié)，如同上面對PTK的描述一樣。絲氨酸/蘇氨酸激酶HJ環(huán)的肽和肽衍生物，和使用它們的方法，在題目為“選擇性調節(jié)絲氨酸/蘇氨酸激酶活性的短肽”的共懸未決的申請(1997年5月21日提交，律師案卷號，No.CMCC-547)中公開，其內容通過在此引述而合并于本文。本發(fā)明化合物中的肽序列的合成可采用固相肽合成法(如，BOC或FMOC)，溶液相合成法，或其他適合的技術包括前述方法的綜合。BOC和FMOC法已被建立并被廣泛應用，Merrifield的，美國化學學報(J.Am.Chem.Soc.882149(1963))；Meienhofer的，激素性蛋白質和肽(HormonalProteinsandPeptides)，C.H.Li，編輯，學院出版社[HormonalProteinsandPeptides，C.H.Li，Ed.，AcademicPress，1983，pp.48-267]；Barany和Merrifield，在《肽類》雜志[ThePeptides)，E.Gross和J.Meienhofer，編輯，學院出版社，紐約，1980[AcademicPress，NewYork，1980，pp，3-285]中作了有關描述。固相肽合成法則由Merrifield在《科學》、Carpino等人在《有機化學雜志》、以及Gauspohl等人在《合成》[Merrifield，R.B.，Science，232341(1986)]；Carpino，L.A.AndHan，G.Y，J.Org.Chem.，373404(1972)；及Gauspohl，H.etal.，Synthesis，5315(1992)]中作了描述。這些文獻的內容通過在此引述而合并于本文。含有肽序列的化合物的環(huán)化方法在如Lobl等人的WO92/00995中作了描述，其內容通過在此引述而合并于本文。環(huán)化的化合物可通過，用當其他側鏈保護基保持完整時可選擇性移去的基團，保護要用在環(huán)閉合的兩個氨基酸的側鏈來制備。選擇性去保護作用，通過使用直交側鏈保護基如烯丙基(OAI)(如對谷氨酸或天冬氨酸側鏈的羰基基團)，烯丙氧基羰基(Aloc)(如對賴氨酸或鳥氨酸側鏈的氮)或乙酰氨基甲基(Acm)(如對半胱氨酸的巰基)的保護基，可很好地實施。OAI和Aloc可用Pd°容易地移去，Acm可用碘處理容易地移去。本發(fā)明用下面的實施例給予說明，這些實施例不在任何方面對本發(fā)明有所限制。實施例1-HJ肽的制備本發(fā)明的新化合物可采用AppliedBiosystems的430A肽合成器，使用F-Moc技術依據制造商方案合成。制備肽的其他適用方法對本領域的技術人員是已知的。參閱如Merrifield在《科學》雜志、Carpino等人在《有機化學雜志》、Gauspohl等人在《合成》中的描述[Merrifield，P.B.，Science，232341(1986)；Carpino，L.A.，Han，G.Y.，J.Org.Chem.，373404(1972)；Gauspohl，H.，etal.，Synthesis，5315(1992)]，這些文獻的內容通過在此引述而合并于本文。使用Rink酰胺樹脂[4(2’，4’二甲氧基苯基-FMOC氨基甲基)苯氧基樹脂]合成C-酰胺化的肽。用FMOC基團保護氨基酸的α-氨基基團，用弱堿，N-甲基吡咯烷酮的20％哌啶(NMP)在每個環(huán)的開始處移去FMOC基團。去除保護基后，將樹脂用NMP沖洗移去哌啶。使用溶解在HOBt(1-羥基苯并三唑)和DMF(二甲基甲酰胺)中的HBTU(2(1-苯并三唑基-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲陽離子)，用“FASTMOC化學法”(FASTMOCChemistry)實施氨基酸衍生物的原位激活。加入NMP將氨基酸溶解在這種溶液中。加入DIEA(二異丙基乙基胺)啟動激活作用。另外，采用DCC(二環(huán)己基碳化二亞胺)和HOBt的激活法以形成HOBt活性酯。在NMP中實施偶聯。接著使用0.75g晶體苯酚；0.25mlEDT(1，2-乙二硫醇)；0.5ml(苯硫基甲烷)；0.5ml的去離子水；10mlTFA，進行N-端(選擇地)乙酰基化作用，肽從樹脂中的TFA(三氟乙酸)解離過程，和加側鏈保護基。實施例2-HJ肽影響牛毛細血管內皮細胞體外擴增將96孔平底組織培養(yǎng)微滴盤，在平鋪細胞之前，很快預鋪上凝膠(Difco)，在玻片雙蒸餾水(DDW)中加入0.100ml/孔新鮮過濾的1％凝膠。在37℃將孔溫育約1小時，然后用吸氣移去多余的溶液。培養(yǎng)介質由DMEM，青霉素-100U/ml；鏈霉素-100μg/ml；谷酰胺-2mM和10％不含內毒素的牛胎血清和1ng/ml基礎纖維原細胞(任何商業(yè)來源)制備。牛毛細血管內皮細胞(BCE)25×103個細胞/ml的懸浮液，在上述培養(yǎng)介質中制備，并以0.160ml/孔分布(約4000個內皮細胞/孔)。BCE細胞是用Folkman等人在美國“國家科學院年報”[Folkmanetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA765217(1979)]中公開的工藝獲取的。用含有0.1％BSA的磷酸緩沖鹽水(PBS)，在100％DMSO中稀釋10mM的HJ肽溶液制備一組HJ肽原種溶液。將每個原種溶液中HJ肽的濃度調節(jié)到測試混合物中所需的HJ肽濃度的九倍。BCE平鋪約2小時后，在將0.020ml的每種HJ肽原種溶液加入到相應的孔中，每種濃度六個重復。此外，沒有加入HJ肽的BSA溶液用作對照物。在10％CO2濕潤溫育箱內37℃溫育72-80小時。將板標記，棄除介質。然后每塊板用PBS(0.200ml/孔)沖洗一次。將孔用100％乙醇沖洗(0.200ml/孔5分鐘)進行固定。將乙醇移去，完全干燥培養(yǎng)皿。另外，各孔用4％甲醛PBS(來自費舍爾學報[FisherScientific；CatalogNo.HC200-1]的PBS緩沖的10％福爾馬林液)(0.12ml/孔)處理至少30分鐘。甲醛固定增強了與乙醇相比的O.D.。用硼酸鹽緩沖液(0.1M，pH8.5)沖洗各孔。在各孔中加入新鮮過濾的1％亞甲基藍溶液(0.600ml/孔)，并在室溫溫育10分鐘。將各孔用自來水沖洗五次，之后將各孔徹底干燥。加入0.1N的HCl(0.200ml/孔)析去顏色。析去處理過夜后，在630nm讀取O.D.值，確定每孔的細胞數量。計數細胞的方法在Oliver等人于《細胞科學》[Oliveretal.，J.ofCellSci.，(1989)]發(fā)表的文獻中非常詳細的描述了，其內容通過在此引述而合并于本文。一些不同種HJ肽的結果在表1中列出。在表1中還列出了測試的每種HJ肽的序列，和衍生每種肽的HJ環(huán)的亞序列[Src(SEQIDNO.3)，Endos(SEQIDNO.47)和NGF-R(SEQIDNO.48)的HJ環(huán)的亞序列]。HJ4(SEQIDNO.13)，HJ12(SEQIDNO.25)，和HJ13(SEQIDNO.26)是Src的HJ環(huán)相同亞序列的各種肽衍生物。HJ4抑制BCE細胞擴增；HJ12和HJ13刺激BCE細胞擴增。這種結果說明PTK控制下的細胞活性可被刺激或抑制，取決于所用肽衍生物的序列。HJ11(SEQIDNO.22)也抑制BCE細胞擴增。HJ11是Src的HJ環(huán)的與HJ4，HJ12和HJ13不同的部分的亞序列。這個結果說明HJ環(huán)的不同部分的肽衍生物可用來刺激或抑制細胞活性。HJ7(SEQIDNO.17)是Endos的HJ環(huán)的肽衍生物。這種HJ肽也抑制BCE細胞擴增。這個結果說明細胞活性可被多種不同的PTK控制，用控制細胞活性的一種PTK的HJ環(huán)的肽衍生物影響細胞活性是可能的。表1對于HJ肽的BCE反應的歸納</tables>*K＝D-Lys；所有肽的N-端乙酰化了，C-端酰胺化了。實施例3-c-Src的HJ肽衍生物保護PC-12細胞不受血清剝奪的影響依據實施例2中所述的方法在HJ4和HJ8中測試細胞擴增，除了1〕培養(yǎng)介質含2％或4％的馬血清；2〕不加纖維原細胞生長因子；3〕細胞溫育11天。依據實施例2中的方法計數細胞。特別地，將細胞固定并用甲基藍染色，之后確定結合甲基藍的量。在600nM的吸光度測量結合甲基藍的量表示在各孔中細胞存在的數量。結果在表2中列出表2600nm的O.D.(表示相對的細胞數量)可以看出，HJ4和HJ8都加強了神經元細胞的存活。實施例4-蛋白質酪氨酸激酶的HJ肽衍生物調節(jié)體外內皮細胞擴增用Gospodorowicz等人在“美國國家科學院年報”[Gospodorowiczetal.，Proc.Narl.Acad.Sci.734120(1976)]中公開的工藝獲取牛動脈內皮細胞(本文稱為“A19細胞”)。用Arbiser等人在“美國國家科學院年報”[Arbiseretal.，Proc.Narl.Acad.Sci.94861(1997)]中公開的工藝獲取鼠MS1和SVR細胞。這些文獻的內容通過在此引述而合并于本文。依據實施例2中所述的方法測試HJ肽對細胞擴增的影響，除了不加纖維原細胞生長因子。依據實施例2中的方法計數細胞。特別地，將細胞固定并用甲基藍染色，之后確定結合甲基藍的量。在600nM的吸光度測量結合甲基藍的量表示在各孔中細胞存在的數量。結果在表3中列出表3</tables>*觀察到的顯著抑制細胞擴增的濃度。c-SRC、Lyn/Hck、c-Abl、Csk、c-Met和FAK的HJ肽衍生物，在濃度低為10μM時，對抑制內皮細胞擴增是有效的。實施例5-Lyn/Hck的HJ肽衍生物使血管平滑肌細胞形狀發(fā)生改變用Castellot等人在《細胞生物學雜志》[Castellotetal.，J.Cell.Biol.1021979(1986)]中公開的方法獲取的牛血管平滑肌細胞(VSMC)，在培養(yǎng)物中生長，與HJ24和HJ32一起溫育，如實施例4中所述。48小時后，這些肽衍生物表現出顯著的誘導VSMC細胞形狀改變的能力。細胞變長并呈現紡錘型結構。對于產生這些形態(tài)改變，HJ32在10和40μM是有效的，HJ24在40μM是有效的。實施例6-K105H101(SEQIDNO.53)，DDR2的HJ肽衍生物抑制內皮細胞體外擴增依據實施例4中公開的方法測試K105H101(SEQIDNO.53)對牛內皮細胞(本文的“A19細胞”)的抑制作用?？梢钥闯觯鄬φ瘴锛毎?，K105H101(SEQIDNO.53)在濃度大于約2.0μM抑制A19細胞的擴增。實施例7-K055H101(SEQIDNO.72)，Lyn的HJ肽衍生物抑制前列腺癌細胞體外擴增K055H101抑制從前列腺癌細胞組PC3和DU145中獲取的細胞擴增的能力，可用實施例4中所述方法實施，除了測試細胞是人類前列腺癌細胞組PC3和DU145，及DU145細胞在RPMI1640介質中生長。兩組細胞都從美國典型物培養(yǎng)中心[AmericanTypeCultureCollection(ATCCNo.1435-CRL和81-HTB)中獲取]。并且，板不用預先涂抹凝膠。結果在圖5和圖6中列出?？梢钥闯觯鄬φ瘴锛毎?，K055H101在濃度大于約0.3μM時抑制DU145細胞的擴增，在濃度大于約0.16μM抑制PC3細胞的擴增。等同物本此領域的技術人員采用不超過常規(guī)的試驗，可以確定出，本文所述發(fā)明的具體實施的等同物。這樣的等同物都包含在下面的權利要求書的范圍內。權利要求1.一種肽，其含有蛋白質酪氨酸激酶HJ環(huán)的肽衍生物，其中(a)所說的肽有約五個到約二十個之間的氨基酸或氨基酸類似物；以及(b)所說的肽調節(jié)蛋白質酪氨酸激酶的活性。2.根據權利要求1所述的肽，其中所述的肽是環(huán)狀的。3.權利要求1所述的肽，其中所述的肽是線性的。4.根據權利要求3所述的肽，其中肽的N-端和C-端是未取代的。5.根據權利要求3所述的的肽，其中N-端或C-端中的至少一個是被取代的。6.根據權利要求5的肽，其中N-端是酰胺化的，C-端是?；?。7.根據權利要求1所述的肽，其中肽衍生物含有與所說的蛋白質酪氨酸激酶的所說的HJ環(huán)的氨基酸序列的任何亞序列相對應的氨基酸序列，附帶條件是肽衍生物序列中的任何一個氨基酸可變化，為任何氨基酸或其類似物。8.根據權利要求7所述的肽，其中蛋白質酪氨酸激酶是從下列家族組中選取的蛋白質酪氨酸激酶家族的成員Src，EGF-R、FGF-R、VEGF-R、HGF-R、胰島素受體家族、和神經營養(yǎng)蛋白受體家族。9.根據權利要求8所述的肽，其中蛋白質酪氨酸激酶是從下列蛋白質酪氨酸激酶Src家族基團中選取的c-Src、c-Yes、FYN、FGR、HCK、LYN、LCY和BLK。10.根據權利要求7所述的肽，其中蛋白質酪氨酸激酶是從含有下列蛋白質酪氨酸激酶的組中選取的RET、CSK、c-Met、c-Abl、和FAK。11.根據權利要求6所述的肽，其中肽是庚肽。12.根據權利要求11所述的肽，其中肽含有Leu-Val-Thr-Xaa-Gly-Arg-Val(SEQIDNO.45)，其中Xaa是從含有L-賴氨酸，D-賴氨酸，組氨酸，酪氨酸，苯基丙氨酸和精氨酸的組中選取的。13.根據權利要求11所述的肽，其中肽含有Gly-Arg-Pro-Yaa-Pro-Zaa(SEQIDNO.46)，其中(a)Yaa是從含有酪氨酸、苯基丙氨酸和色氨酸的組中選取的；(b)Zaa是從含有甘氨酸、丙氨酸和精氨酸的組中選取的。14.根據權利要求8所述的肽，其中蛋白質酪氨酸激酶是從下列蛋白質酪氨酸激酶EGF-R家族組中選取的EGFR、ErbB2、ErbB3和ErbB4。15.根據權利要求8所述的肽，其中蛋白質酪氨酸激酶是從下列蛋白質酪氨酸激酶FGF-R家族組中選取的FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4。16.根據權利要求8所述的肽，其中蛋白質酪氨酸激酶是從下列蛋白質酪氨酸激酶VEGF-R家族組中選取的:Flt1、Flt4和Flk1。17.根據權利要求8所述的肽，其中蛋白質酪氨酸激酶是從下列蛋白質酪氨酸激酶胰島素受體家族組中選取的INS-R，IRR和IGF1-R。18.根據權利要求8所述的肽，其中蛋白質酪氨酸激酶是從下列蛋白質酪氨酸激酶神經營養(yǎng)蛋白受體家族組中選取的TrkA、TrkB和TrkC19.根據權利要求1所述的肽，其中肽衍生物含有與所說的HJ環(huán)的氨基酸序列的任何亞序列相對應的氨基酸序列20.根據權利要求6所述的肽，其中所述的肽含有的氨基酸序列是肽HJ4(SEQIDNO.13)，HJ4.2(SEQIDNO.14)，HJ4Nitro(SEQIDNO.15)，HJ6(SEQIDNO.16)，HJ7(SEQIDNO.17)，HJ7.1(SEQIDNO.18)，HJ8(SEQIDNO.19)，HJ9(SEQIDNO.20)，HJ10(SEQIDNO.21)，HJ11(SEQIDNO.22)，HJ11.1(SEQIDNO.23)，HJ11Met(SEQIDNO.24)，HJ12(SEQIDNO.25)，HJ13(SEQIDNO.26)，HJ14(SEQIDNO.27)，HJ15(SEQIDNO.28)，HJ18(SEQIDNO.29)，HJ20(SEQIDNO.30)，HJ20.1(SEQIDNO.31)，HJ21.1(SEQIDNO.32)，HJ22(SEQIDNO.33)，HJ23.1(SEQIDNO.34)，HJ24(SEQIDNO.1)，HJ25(SEQIDNO.35)，HJ27(SEQIDNO.36)，HJ28(SEQIDNO.37)，HJ30(SEQIDNO.38)，HJ31(SEQIDNO.39)，HJ32(SEQIDNO.2)，HJ33(SEQIDNO.40)，HJ34(SEQIDNO.41)，Lena1(SEQIDNO.42)，Lena2(SEQIDNO.43)，或J29(SEQIDNO.44)的序列21.一種肽，其包括的序列是肽HJ4(SEQIDNO.13)，HJ4.2(SEQIDNO.14)，HJ4Nitro(SEQIDNO.15)，HJ6(SEQIDNO.16)，HJ7(SEQIDNO.17)，HJ7.1(SEQIDNO.18)，HJ8(SEQIDNO.19)，HJ9(SEQIDNO.20)，HJ10(SEQIDNO.21)，HJ11(SEQIDNO.22)，HJ11.1(SEQIDNO.23)，HJ11Met(SEQIDNO.24)，HJ12(SEQIDNO.25)，HJ13(SEQIDNO.26)，HJ14(SEQIDNO.27)，HJ15(SEQIDNO.28)，HJ18(SEQIDNO.29)，HJ20(SEQIDNO.30)，HJ20.1(SEQIDNO.31)，HJ21.1(SEQIDNO.32)，HJ22(SEQIDNO.33)，HJ23.1(SEQIDNO.34)，HJ24(SEQIDNO.35)，HJ27(SEQIDNO.36)，HJ28(SEQIDNO.37)，HJ30(SEQIDNO.38)，HJ31(SEQIDNO.39)，HJ32(SEQIDNO.2)，HJ33(SEQIDNO.40)，HJ34(SEQIDNO.41)，Lena1(SEQIDNO.42)，Lena2(SEQIDNO.43)，J29(SEQIDNO.44)的序列，附帶條件是肽中的任何一個氨基酸殘基可變化，為任何天然產生氨基酸或其類似物22.一種肽，其包括AA1到AA20的氨基酸序列，或含有至少五個氨基酸的其亞序列，其中AA1是蘇氨酸，或色氨酸；AA2是從含有谷氨酸，天冬氨酸，谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA3是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸的組中選取的；AA4是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸，絲氨酸，蘇氨酸的組中選取的；AA5是絲氨酸，蘇氨酸；AA6是從含有精氨酸，N-硝基精氨酸，β-環(huán)精氨酸，γ-羥基精氨酸，N-脒基瓜氨酸，2-氨基-4-胍基丁酸和賴氨酸的組中選取的；AA7是甘氨酸或丙氨酸；AA8是從含有精氨酸，N-硝基精氨酸，β-環(huán)精氨酸，γ-羥基精氨酸，N-脒基瓜氨酸，2-氨基-4-胍基丁酸和賴氨酸的基團中選取的；AA9是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸的組中選取的；AA10是脯氨酸；AA11是從含有酪氨酸，苯基丙氨酸，和色氨酸的組中選取的；AA12是脯氨酸；AA13是甘氨酸或丙氨酸；AA14是從含有蛋氨酸，精氨酸，N-硝基精氨酸，β-環(huán)精氨酸，γ-羥基精氨酸，N-脒基瓜氨酸和2-氨基-4-胍基丁酸的組中選取的；AA15是從含有纈氨酸，天冬酰胺，蘇氨酸，絲氨酸的組中選取的；AA16是天冬酰胺或賴氨酸；AA17是從含有精氨酸，N-硝基精氨酸，β-環(huán)精氨酸，γ-羥基精氨酸，N-脒基瓜氨酸和2-氨基-4-胍基丁酸，丙氨酸，脯氨酸的組中選取的；AA18是從含有谷氨酰胺，天冬酰胺，谷氨酸，天冬氨酸，和谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA19是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，和纈氨酸的組中選取的；AA20是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，和纈氨酸的組中選取的。23.根據權利要求22所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應c-SRC或Lck的HJ環(huán)的序列或其亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的兩個氨基酸可變化。24.根據權利要求22所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應c-SRC的HJ環(huán)的序列或亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的任何一個氨基酸可變化。25.根據權利要求23或24所述的肽，其中肽含有序列AA1到AA20的一個八個氨基酸的亞序列，其中亞序列從含有AA3到AA10，AA7到AA14，AA11到AA18的組中選取。26.一種肽，其包括AA1到AA20的氨基酸序列，或含有至少五個氨基酸的其亞序列，其中AA1是色氨酸；AA2是從含有谷氨酸，天冬氨酸，谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA3是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸的組中選取的；AA4是從含有酪氨酸，苯基丙氨酸或色氨酸的組中選取的；AA5是蘇氨酸或絲氨酸；AA6是酪氨酸，苯基丙氨酸和色氨酸；AA7是甘氨酸或丙氨酸；AA8是從含有精氨酸，N-硝基精氨酸，β-環(huán)精氨酸，γ-羥基精氨酸，N-脒基瓜氨酸和2-氨基-4-胍基丁酸，鳥氨酸，賴氨酸的組中選取的；AA9是纈氨酸或丙氨酸；AA10是脯氨酸；AA11是從含有酪氨酸，苯基丙氨酸，和色氨酸的基團中選取的；AA12是脯氨酸；AA13是從含有精氨酸，N-硝基精氨酸，β-環(huán)精氨酸，γ-羥基精氨酸，N-脒基瓜氨酸和2-氨基-4-胍基丁酸，賴氨酸，鳥氨酸的組中選取的；AA14是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸，的組中選取的；AA15是從含有脯氨酸，蘇氨酸，絲氨酸的組中選取的；AA16是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸，的組中選取的；AA17是從含有精氨酸，N-硝基精氨酸，β-環(huán)精氨酸，γ-羥基精氨酸，N-脒基瓜氨酸和2-氨基-4-胍基丁酸，鳥氨酸，賴氨酸的組中選取的；AA18是從含有谷氨酰胺，天冬酰胺，谷氨酸，天冬氨酸，和谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA19是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，和纈氨酸的組中選取的；AA20是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，和纈氨酸的組中選取的。27.根據權利要求26所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應Csk的HJ環(huán)的序列或其亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的兩個氨基酸可變化。28.根據權利要求26所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應CskHJ環(huán)的序列或亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的任何一個氨基酸可變化。29.根據權利要求27或28所述的肽，其中肽包括序列AA1到AA20的一個八個氨基酸的亞序列，其中亞序列從含有AA3到AA10，AA7到AA14，AA11到AA18的組中選取。30.一種肽，其包括AA1到AA20的氨基酸序列，或含有至少五個氨基酸的其亞序列，其中AA1是色氨酸；AA2是谷氨酸，或谷氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯；AA3是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸的組中選取的；AA4是從含有丙氨酸，甘氨酸，纈氨酸的組中選取的；AA5是蘇氨酸或絲氨酸；AA6是從含有酪氨酸，苯基丙氨酸或色氨酸的組中選取的；AA7是甘氨酸或丙氨酸；AA8是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸的組中選取的；AA9是蘇氨酸或絲氨酸；AA10是脯氨酸；AA11是從含有酪氨酸，苯基丙氨酸，和色氨酸的組中選取的；AA12是脯氨酸；AA13是甘氨酸或丙氨酸；AA14是從含有蛋氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，纈氨酸的基團中選取的；AA15是從含有谷氨酸，天冬氨酸，和谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA16是從含有精氨酸，N-硝基精氨酸，β-環(huán)精氨酸，γ-羥基精氨酸，N-脒基瓜氨酸和2-氨基-4-胍基丁酸，亮氨酸，異亮氨酸，脯氨酸，賴氨酸，鳥氨酸的組中選取的；AA17是絲氨酸或蘇氨酸；AA18是從含有谷氨酰胺，天冬酰胺，谷氨酸，天冬氨酸，和谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA19是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，和纈氨酸的組中選取的；AA20是從含有酪氨酸，苯基丙氨酸和色氨酸的組中選取的。31.根據權利要求30所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應c-Abl的HJ環(huán)的序列或其亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的兩個氨基酸可變化。32.根據權利要求30所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應c-Abl的HJ環(huán)的序列或亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的任何一個氨基酸可變化。33.根據權利要求31或32所述的肽，其中肽包括序列AA1到AA20的一個八個氨基酸的亞序列，其中亞序列從含有AA3到AA10，AA7到AA14，AA11到AA18的組中選取。34.一種肽，其包括含有AA1到AA20的氨基酸序列，或含有至少五個氨基酸的其亞序列，其中AA1是色氨酸；AA2是從含有谷氨酸，天冬氨酸，和谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA3是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸的組中選取的；AA4是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸的組中選取的；AA5是蘇氨酸或絲氨酸；AA6是從含有精氨酸，N-硝基精氨酸，β-環(huán)精氨酸，γ-羥基精氨酸，脒基瓜氨酸和2-氨基-4-胍基丁酸，酪氨酸，賴氨酸，鳥氨酸的組中選取的；AA7是甘氨酸或丙氨酸；AA8是甘氨酸或丙氨酸；AA9是從含有脯氨酸，絲氨酸和蘇氨酸的組中選取的；AA10是脯氨酸；AA11是從含有酪氨酸，苯基丙氨酸，和色氨酸的組中選取的；AA12是組氨酸；AA13是從含有谷氨酸，天冬氨酸，和谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA14是亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸的組中選取的；AA15是從含有谷氨酰胺，天冬酰胺，谷氨酸，天冬氨酸，和谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA16是蘇氨酸或脯氨酸；AA17是從含有苯基丙氨酸，酪氨酸和色氨酸的組中選取的；AA18是從含有谷氨酸，天冬氨酸，和谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA19是從含有纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸和蛋氨酸的組中選取的；AA20是從含有蘇氨酸，絲氨酸和它們的C-攪拌衍生物的組中選取的。35.根據權利要求34所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應c-Met的HJ環(huán)的序列或其亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的兩個氨基酸可變化。36.根據權利要求34所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應c-Met的HJ環(huán)的序列或亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的任何一個氨基酸可變化。37.根據權利要求35或36所述的肽，其中肽含有序列AA1到AA20的一個八個氨基酸的亞序列，其中亞序列從含有AA3到AA10，AA7到AA14，AA11到AA18的組中選取。38.一種肽，其含有AA1到AA20的氨基酸序列，或含有至少五個氨基酸的其亞序列，其中AA1是色氨酸；AA2是從含有谷氨酸，天冬氨酸，和谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA3是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸的組中選取的；AA4是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸的組中選取的；AA5是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸的組中選取的；AA6是從含有組氨酸，賴氨酸和鳥氨酸的組中選取的；AA7是甘氨酸或丙氨酸；AA8是從含有纈氨酸，丙氨酸，鳥氨酸的組中選取的；AA9是從含有精氨酸，N-硝基精氨酸，β-環(huán)精氨酸，γ-羥基精氨酸，N-脒基瓜氨酸和2-氨基-4-胍基丁酸，賴氨酸，鳥氨酸的組中選的；AA10是脯氨酸；AA11是從含有酪氨酸，苯基丙氨酸，和色氨酸的組中選取的；AA12是谷氨酰胺或脯氨酸；AA13是甘氨酸或丙氨酸；AA14是從含有纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸和丙氨酸的組中選取的；AA15是從含有精氨酸，N-硝基精氨酸，β-環(huán)精氨酸，γ-羥基精氨酸，N-脒基瓜氨酸和2-氨基-4-胍基丁酸，賴氨酸，鳥氨酸的組中選取的；AA16是從含有谷氨酰胺，天冬酰胺，谷氨酸，天冬氨酸，和谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA17是從含有谷氨酰胺，天冬酰胺，谷氨酸，天冬氨酸，和谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA18是從含有谷氨酸，天冬氨酸，和谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA19是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，和纈氨酸的組中選取的；AA20是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，和纈氨酸和它們所的C-攪拌衍生物的組中選取的。39.根據權利要求38所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應FAK的HJ環(huán)的序列或其亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的兩個氨基酸可變化。40.根據權利要求38所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應FAK的HJ環(huán)的序列或亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的任何一個氨基酸可變化。41.根據權利要求39或40所述的肽，其中肽含有序列AA1到AA20的一個八個氨基酸的亞序列，其中亞序列從含有AA3到AA10，AA7到AA14，AA11到AA18的組中選取。42.一種肽，其含有AA1到AA20的氨基酸序列，或含有至少五個氨基酸的其亞序列，其中AA1是色氨酸或蛋氨酸；AA2是從含有谷氨酸，天冬氨酸和谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA3是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸的組中選取的；AA4是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸的組中選取的；AA5是蘇氨酸或絲氨酸；AA6是從含有苯基丙氨酸，酪氨酸，色氨酸的組中選取的；AA7是甘氨酸或丙氨酸；AA8是從含有精氨酸，N-硝基精氨酸，β-環(huán)精氨酸，γ-羥基精氨酸，N-脒基瓜氨酸和2-氨基-4-胍基丁酸，賴氨酸和鳥氨酸的組中選取的；AA9是從含有纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸和蛋氨酸的組中選取的；AA10是脯氨酸；AA11是從含有酪氨酸，苯基丙氨酸，和色氨酸的組中選取的；AA12是脯氨酸；AA13是甘氨酸或丙氨酸；AA14是從含有精氨酸，N-硝基精氨酸，β-環(huán)精氨酸，γ-羥基精氨酸，N-脒基瓜氨酸和2-氨基-4-胍基丁酸和蛋氨酸的組中選取的；AA15是蘇氨酸或絲氨酸；AA16是天冬酰胺或谷氨酰胺；AA17是從含有丙氨酸，甘氨酸和鳥氨酸的組中選取的；AA18是從含有谷氨酸，天冬氨酸，和谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA19是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，和纈氨酸組中選取的；AA20是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，和纈氨酸的組中選取的。43.根據權利要求42所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應Lyn或Hck的HJ環(huán)的序列或其亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的兩個氨基酸可變化。44.根據權利要求42所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應Lyn或Hck的HJ環(huán)的序列或亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的任何一個氨基酸可變化。45.根據權利要求43或44所述的肽，其中肽含有序列AA1到AA20的一個八個氨基酸的亞序列，其中亞序列從含有AA3到AA10，AA7到AA14，AA11到AA18的組中選取。46.一種肽，其包括AA1到AA20的氨基酸序列，或至少五個氨基酸的其亞序列，其中AA1是色氨酸AA2是從含有谷氨酸，天冬氨酸，和谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA3是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸的組中選取的；AA4是從含有苯基丙氨酸，酪氨酸，色氨酸的組中選取的；AA5是蘇氨酸或絲氨酸；AA6是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，纈氨酸的組中選取的；AA7是谷氨酸或丙氨酸；AA8是谷氨酸或丙氨酸；AA9是蘇氨酸或絲氨酸；AA10是脯氨酸；AA11是從含有酪氨酸，苯基丙氨酸和色氨酸的組中選取的；AA12是從含有脯氨酸，半胱氨酸，絲氨酸和丙氨酸的組中選取的；AA13是甘氨酸或丙氨酸；AA14是從含有蛋氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸的組中選取的；AA15是從含有絲氨酸，蘇氨酸，蛋氨酸，脯氨酸，賴氨酸，鳥氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺的組中選取的；AA16是從含有半胱氨酸，絲氨酸，蛋氨酸，纈氨酸，亮氨酸和異亮氨酸的組中選取的；AA17是從含有丙氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，和天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA18是從蘇氨酸，絲氨酸，谷氨酸，天冬氨酸，和谷氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA19是從含有蘇氨酸，亮氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，谷氨酸，天冬氨酸，和谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA20是從含有酪氨酸，苯基丙氨酸和色氨酸的組中選取的。47.根據權利要求46所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應Endoth的HJ環(huán)的序列或其亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的兩個氨基酸可變化。48.根據權利要求46所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應Endoth的HJ環(huán)的序列或亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的任何一個氨基酸可變化。49.根據權利要求47或48所述的肽，其中肽含有序列AA1到AA20的一個八個氨基酸的亞序列，其中亞序列從含有AA3到AA10，AA7到AA14，AA11到AA18的組中選取。50.一種肽，其包括AA1到AA20的氨基酸序列，或含有至少五個氨基酸的其亞序列，其中AA1是色氨酸；AA2是從含有谷氨酸，天冬氨酸，或谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA3是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，或纈氨酸的組中選取的；AA4是從含有苯基丙氨酸，酪氨酸和色氨酸的組中選取的；AA5是蘇氨酸或絲氨酸；AA6是從含有苯基丙氨酸，酪氨酸和色氨酸的組中選取的；AA7是甘氨酸或丙氨酸；AA8是賴氨酸或鳥氨酸；AA9是谷氨酰胺或天冬酰胺；AA10是脯氨酸；AA11是從含有苯基丙氨酸，酪氨酸和色氨酸的組中選取的；AA12是從含有苯基丙氨酸，酪氨酸和色氨酸的組中選取的；AA13是谷氨酰胺酸或天冬酰胺；A14是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸和纈氨酸的組中選取的；AA15是絲氨酸或蘇氨酸；AA16是谷氨酰胺酸或天冬酰胺；AA17是蘇氨酸或天冬酰胺；AA18是從含有谷氨酸，天冬氨酸，或谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯的組中選取的；AA19是從含有甘氨酸，丙氨酸和纈氨酸的組中選取的；AA20是從含有亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，或纈氨酸的組中選取的。51.根據權利要求50所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應Trk-NGFR的HJ環(huán)的序列或其亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的兩個氨基酸可變化。52.根據權利要求50所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應Trk-NGFR的HJ環(huán)的序列或亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的任何一個氨基酸可變化。53.根據權利要求51或52所述的肽，其中肽含有序列AA1到AA20的一個八個氨基酸的亞序列，其中亞序列從含有AA3到AA10，AA7到AA14，AA11到AA18的組中選取。54.一種肽，其包括AA1到AA20的氨基酸序列，或含有至少五個氨基酸的其亞序列，其中AA1是谷氨酸，天冬氨酸，或谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯；AA2是亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，或纈氨酸；AA3是絲氨酸，蘇氨酸或脯氨酸；AA4是苯基丙氨酸，酪氨酸或色氨酸；AA5是谷氨酸，天冬氨酸，或谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯；AA6是亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，或纈氨酸；AA7是亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，或纈氨酸；AA8是蘇氨酸或絲氨酸；AA9是苯基丙氨酸，酪氨酸或色氨酸；AA10是谷氨酸或丙氨酸；AA11是絲氨酸，丙氨酸，蘇氨酸或甘氨酸；AA12是賴氨酸，鳥氨酸，精氨酸，N-硝基精氨酸，β-環(huán)精氨酸，γ-羥基精氨酸，N-脒基瓜氨酸和2-氨基-4-胍基丁酸的組中選取的；AA13是脯氨酸；A14是酪氨酸，苯基丙氨酸，色氨酸；AA15是谷氨酸，天冬氨酸，或谷氨酸或天冬氨酸的脂族，取代的脂族，芐基，取代的芐基，芳族或取代的芳族的酯；AA16是甘氨酸或丙氨酸；AA17是亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸或纈氨酸；AA18是脯氨酸；AA19是甘氨酸，丙氨酸，絲氨酸或蘇氨酸；AA20是絲氨酸，精氨酸，N-硝基精氨酸，β-環(huán)精氨酸，γ-羥基精氨酸，N-脒基瓜氨酸和2-氨基-4-胍基丁酸。55.根據權利要求54所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應EGFR的HJ環(huán)的序列或其亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的兩個氨基酸可變化。56.根據權利要求54所述的肽，其中序列AA1到AA20或其亞序列對應EGFR的HJ環(huán)的序列或亞序列，附帶條件是序列AA1到AA20或其亞序列中的任何一個氨基酸可變化57.根據權利要求55或56所述的肽，其中肽含有序列AA1到AA20的一個八個氨基酸的亞序列，其中亞序列從含有AA3到AA10，AA7到AA14，AA11到AA18的組中選取；58.一種確定調節(jié)蛋白質酪氨酸激酶活性的肽的方法，該方法包括步驟(a)提供肽，指“測試肽”，其包括所說的蛋白質酪氨酸激酶的HJ環(huán)的肽衍生物，并含有從約五個到約二十個氨基酸或其類似物；(b)在適合測試蛋白質酪氨酸激酶活性的條件下，將測試肽與具有由蛋白質酪氨酸激酶控制的一個或多個細胞活性的細胞一起溫育；(c)測定蛋白質酪氨酸激酶活性，其中和沒有與測試肽一起溫育的生長細胞相比，大些或小些的活性表示，肽調節(jié)蛋白質酪氨酸激酶的活性。59.根據權利要求58所述的方法，其中蛋白質酪氨酸激酶活性是通過測量組織培養(yǎng)物中所說的細胞的存活率或擴增狀況測定的。60.一種調節(jié)蛋白質酪氨酸激酶活性的肽，其中肽用權利要求58的方法確定。61.一種在受試者中調節(jié)蛋白質酪氨酸激酶活性的方法，包括服用治療上有效量的含有蛋白質酪氨酸激酶HJ環(huán)的肽衍生物的肽，其中(a)所說的肽有約五個到約二十個氨基酸或其類似物；(b)所說的肽調節(jié)蛋白質酪氨酸激酶活性；(c)所說的肽的N-端是未取代的或?；?；(d)所說的肽的C-酸是未取代的或酰胺化的。全文摘要公開的肽是蛋白質酪氨酸激酶HJ環(huán)的肽衍生物。這種肽可調節(jié)蛋白質酪氨酸激酶活性。還公開了通過服用本發(fā)明一種肽,調節(jié)受試者蛋白質酪氨酸激酶活性的方法。文檔編號A61P17/06GK1257539SQ98805329公開日2000年6月21日申請日期1998年5月20日優(yōu)先權日1997年5月21日發(fā)明者施姆爾·A·本－賽森申請人:兒童醫(yī)療中心有限公司