專(zhuān)利名稱(chēng)：對(duì)治療青光眼無(wú)副作用的前列腺素衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及應(yīng)用前列腺素類(lèi)似物或衍生物治療青光眼和眼壓力過(guò)高的方法，所述類(lèi)似物或衍生物對(duì)眼沒(méi)有黑素生成效果或有降低的效果。本發(fā)明還涉及含前列腺素化合物的眼用組合物，所述化合物對(duì)眼沒(méi)有黑素生成效果或有降低的效果。
青光眼是一種眼病，其特征在于眼內(nèi)壓力的增大、視神經(jīng)乳頭的陷凹和視野的逐漸喪失。通常已知異常高的眼內(nèi)壓力對(duì)眼有害，并且有清晰的指征表明，青光眼中眼內(nèi)壓力是引起視網(wǎng)膜和視神經(jīng)乳頭變性性變化的最重要因素。然而，還不知道開(kāi)角青光眼的準(zhǔn)確病理生理機(jī)制。除非治療，否則青光眼會(huì)導(dǎo)致失明，該病的病程一般隨著視力的進(jìn)行性喪失而減慢。
眼內(nèi)壓力(IOP)可由下式(1)表示(1)IOP＝Pe+(Ft-Fu)×R其中Pe是鞏膜外靜脈壓力，F(xiàn)t是水狀液的形成，F(xiàn)u是沿著眼色素層鞏膜流出通道流出眼睛的水狀液部分，R則是小梁流出通道中的阻力。前眼房和后眼房中的水狀液是通過(guò)虹膜后的睫狀突產(chǎn)生的。然后該水狀液通過(guò)瞳孔流入前眼房，并且正常地穿過(guò)小梁網(wǎng)和鞏膜靜脈竇從眼睛流出而進(jìn)入眼球外的鞏膜外靜脈。但是，部分水狀液可能通過(guò)眼色素層鞏膜流出通道離開(kāi)眼睛。認(rèn)為該通道中的流動(dòng)只是最小程度地受眼內(nèi)壓力的影響(Bill，1975)。人眼內(nèi)壓力一般在12～22mmHg的范圍內(nèi)。在更高壓力(例如22mmHg以上)下，眼睛可能受損傷的危險(xiǎn)性就會(huì)增大。然而，在一種形式的青光眼(即正常壓力青光眼)的情況下，可能在正常生理范圍內(nèi)的眼內(nèi)壓力水平時(shí)出現(xiàn)損傷。也見(jiàn)到相反的情況，即某些個(gè)體可能表現(xiàn)出異常高的眼內(nèi)壓力而在視野或視神經(jīng)乳頭方面沒(méi)有任何明顯的缺陷。這些情況通常被稱(chēng)為眼壓力過(guò)高。
青光眼可通過(guò)藥物、激光或外科手術(shù)治療。在藥物治療中，目的是減少水狀液的形成(Ft)或減小水狀液的流出阻力(R)，按上式(1)這樣將導(dǎo)致眼內(nèi)壓力的降低；也可增大水狀液經(jīng)由眼色素層鞏膜途徑的流出量，這樣按式(1)也降低了眼內(nèi)壓力。
前列腺素(典型地是PGF2α，它的酯及類(lèi)似物)主要通過(guò)增大水狀液的眼色素層鞏膜的流出量而降低眼內(nèi)壓力(Crawford和Kaufman，1987；Nilsson等，1989；Toris等，1993；stjernschantz等，1995)。前列腺素及其衍生物的應(yīng)用被描述于數(shù)份專(zhuān)利和專(zhuān)利申請(qǐng)中，例如在US4,599,353(Bito)、US4,952,581(Bito)、WO89/03384(Resul和Stjernschantz)、EP170258(Cooper)、EP253094(Goh)和EP308135(Ueno)中。
前列腺素是脂肪酸，通常通過(guò)包括氧合作用的代謝步驟得自前體二十碳三烯酸、二十碳四烯酸和二十碳五烯酸。天然前列腺素通常具有

圖1中所示的總體結(jié)構(gòu)。
圖1所以，前列腺素具有一個(gè)環(huán)戊烷環(huán)，它上面連有兩條碳鏈，上方的鏈通常被稱(chēng)為α鏈，下方的鏈通常被稱(chēng)為ω鏈。根據(jù)該環(huán)戊烷環(huán)的結(jié)構(gòu)和取代基而將前列腺素分成A、B、C、D、E、F、G、H、I和J亞類(lèi)，如圖2中所示。
圖2α鏈?zhǔn)且粭l7個(gè)碳、羧基封端的脂族鏈，而ω鏈則是一條8個(gè)碳、甲基封端的脂族鏈。根據(jù)這些鏈中的雙鍵數(shù)而給出1～3的下標(biāo)。在具有下標(biāo)1的前列腺素(例如PGF1α)中，雙鍵位于ω鏈中的碳13和碳14之間，并且它在天然前列腺素中呈現(xiàn)反式構(gòu)型。在具有下標(biāo)2的前列腺素(例如PGF2α)中，呈順式構(gòu)型的另一雙鍵位于α鏈中的碳5和碳6之間，以及最后在具有下標(biāo)3的前列腺素中，第三個(gè)雙鍵位于ω鏈的碳17和碳18之間。該雙鍵也在天然前列腺素中呈現(xiàn)順式構(gòu)型。所有前列腺素都在碳15上具有一個(gè)羥基，它是生物活性所必需的。
天然前列腺素的受體系統(tǒng)只是近期才被闡述了。于是，大多數(shù)前列腺素受體已在藥理上被表征了，并且通過(guò)分子生物技術(shù)鑒定了它們的分子結(jié)構(gòu)(Coleman等，1994)。對(duì)于天然前列腺素來(lái)說(shuō)都有特定的受體。PGD、PGE、PGF、PGI2(前列腺環(huán)素)和TxA2(血栓烷)的受體分別是縮寫(xiě)的DP、EP、FP、IP和TP。此外，已證實(shí)EP受體可被再分成四種受體，即EP1、EP2、EP3和EP4受體。特定的組織或細(xì)胞可能只表達(dá)數(shù)種或表達(dá)多種這些受體，這取決于不同物種中該自體有效物質(zhì)體系的進(jìn)化發(fā)展。于是，例如已證實(shí)貓虹膜括約肌主要表達(dá)功能上偶聯(lián)的并且介導(dǎo)瞳孔的收縮的FP受體，而相應(yīng)的牛眼平滑肌則表達(dá)EP1和TP受體，它們?nèi)我环N的激活都將導(dǎo)致肌肉的收縮。與一種特定的受體結(jié)合并激活它的化合物被稱(chēng)為興奮劑，但只與受體結(jié)合而不激活它的化合物則被稱(chēng)為拮抗劑。
至于許多前列腺素以及它們的衍生物作為治療青光眼或眼壓力過(guò)高的合適藥物的實(shí)際應(yīng)用，一個(gè)限制因素可能是它們引起眼內(nèi)虹膜色素沉著的增多的性能(Stjernschantz和Alm，1996)。所以，在猴和人的長(zhǎng)期治療過(guò)程中，虹膜的顏色傾向于變得更深，轉(zhuǎn)變?yōu)樽厣?。盡管這樣顯然沒(méi)有消極的醫(yī)療結(jié)果，但從美容角度考慮它是一個(gè)明顯的缺點(diǎn)，尤其是在只治療一只眼的患者中。因而希望確定這樣的前列腺素它們能有效地降低眼內(nèi)壓力又不引起虹膜色素沉著的增多這一副作用。我們現(xiàn)已意外地發(fā)現(xiàn)了，作為前列腺素類(lèi)受體的EP1亞類(lèi)的選擇性興奮劑的前列腺素衍生物和類(lèi)似物符合前列腺素類(lèi)似物的這一準(zhǔn)則，即有效地降低眼內(nèi)壓力而不引起虹膜內(nèi)產(chǎn)生的色素(黑素生成)的增加。該發(fā)現(xiàn)的背景是，在鑒定人虹膜黑素細(xì)胞的前列腺素類(lèi)受體亞類(lèi)的研究中，我們發(fā)現(xiàn)了這些細(xì)胞在它們的細(xì)胞膜中表達(dá)FP、EP2和EP3受體，但不表達(dá)EP1和TP受體。此外，我們研究了數(shù)種相對(duì)選擇性的EP1興奮劑的眼內(nèi)壓力降低效果，并且發(fā)現(xiàn)了這些前列腺素類(lèi)似物有效而有力地降低了貓和猴的眼內(nèi)壓力。
因此，現(xiàn)已表明，通過(guò)應(yīng)用選擇性EP1受體興奮劑，可降低靈長(zhǎng)目動(dòng)物的眼內(nèi)壓力，于是也可降低人的眼內(nèi)壓力，而不會(huì)增大作為副作用的黑素生成作用，或者只有明顯降低的該作用，因?yàn)楫a(chǎn)生黑素的細(xì)胞(黑素細(xì)胞)缺乏跨膜信號(hào)發(fā)放入細(xì)胞所需的特異性受體。雖然我們目前沒(méi)有臨床證據(jù)表明這些選擇性EP1興奮劑不會(huì)引起虹膜色素沉著的增多，因?yàn)榘l(fā)生該現(xiàn)象的誘導(dǎo)時(shí)間通常是6～12個(gè)月，所以必需對(duì)靈長(zhǎng)目動(dòng)物進(jìn)行特別久的、費(fèi)用高的試驗(yàn)，但是我們可以從相關(guān)的體外研究中總結(jié)出，這種色素沉著的增多不會(huì)在黑素細(xì)胞的細(xì)胞膜中不存在特異性信號(hào)發(fā)放受體的情況下出現(xiàn)。
因此，與眼內(nèi)其它前列腺素受體相比，對(duì)EP1受體的高選擇性或特異性成為應(yīng)用于本發(fā)明的方法或組合物中的化合物的特征。不用說(shuō)，所述化合物對(duì)EP1受體的選擇性越高，則獲得的結(jié)果越好，不過(guò)當(dāng)然還在同其它受體的某些相互作用下獲得了一定的效果。在這方面，高選擇性表示對(duì)EP1受體的效果比對(duì)其它前列腺素受體的效果至少高5倍，尤其高10倍，特別是高100倍或1000倍。
我們?cè)诒景l(fā)明中用于舉例說(shuō)明和驗(yàn)證的具體前列腺素類(lèi)似物是PGF2β(1)、PGF2β異丙酯(2)、17-苯基-18，19，20-三去甲-PGE2(3)、17-苯基-18，19，20-三去甲-PGE2異丙酯(4)、15(R，S)-16，16-亞丙基-PGE2(5)、15(R，S)-16，16-亞丙基-PGE2甲酯(6)，以及13，14-二氫-17-(3-氟苯基)-18，19，20～三去甲-PGE2-異丙酯(7)。所有這些類(lèi)似物都是相對(duì)選擇性的EP1受體興奮劑。試驗(yàn)化合物的受體全貌給出于表I中。表I.試驗(yàn)的前列腺素類(lèi)似物的受體全貌(在功能受體分析中以mol/l表示的EC-50值)前列腺素 FP EP1EP2EP3DP/IP TP1 50×10-610-610-5＞10-4＞10-3＞10-33 10-72×10-8＞10-4＞10-4＞10-4＞10-45 2×10-56×10-92×10-73×10-8# ＞10-4＞10-47 6×10-74×10-85×10-510-6#＞10-4＞10-4#基于受體分析中豚鼠輸精管和雛雞回腸之間的差異估測(cè)的。
在一方面，本發(fā)明涉及無(wú)黑素生成效果的、選擇性前列腺素EP1受體興奮劑在青光眼或眼壓力過(guò)高的治療中的應(yīng)用。治療青光眼和眼壓力過(guò)高的方法包括使眼的表面接觸眼內(nèi)壓力降低有效量的組合物，所述組合物含前述EP1選擇性前列腺素，以降低眼內(nèi)壓力并將所述壓力保持在降低的水平。該組合物通常含有約0.1～100μg，尤其1～30μg每次應(yīng)用的活性物質(zhì)。該組合物被每天1～3次局部施用于眼上。
將前列腺素衍生物與本來(lái)已知的眼科藥物上相容的載體混合。可被用于制備本發(fā)明的組合物的載體包括水溶液例如生理鹽水，油溶液或軟膏。所述載體還可含眼科藥物上相容的防腐劑例如氯芐烷銨，表面活性劑例如多乙氧基醚，脂質(zhì)體或聚合物例如甲基纖維素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮和透明質(zhì)酸；這些物質(zhì)可被用于提高粘度。此外，它還可能應(yīng)用可溶性或不溶性的藥物嵌入物。
在另一方面，本發(fā)明涉及醫(yī)治青光眼或眼壓力過(guò)高的眼科藥物組合物，該組合物包括眼內(nèi)壓力降低有效量的前列腺素類(lèi)似物(它是前面定義的EP1受體的選擇性興奮劑)和眼科藥物上相容的載體。所述有效量通常包括于大約10～50μl組合物中的約0.1～100μg的劑量。本發(fā)明的組合物比現(xiàn)有技術(shù)前列腺素組合物有明顯的改善，這是由于所述活性化合物與對(duì)其它前列腺素受體相比對(duì)EP1受體的選擇性，消除了或者至少大為減小了色素沉著的危險(xiǎn)性。
在又一方面，本發(fā)明涉及前列腺素類(lèi)似物在制備用于治療青光眼和眼壓力過(guò)高的藥劑方面的應(yīng)用。
優(yōu)選地，所述前列腺素類(lèi)似物得自PGF或PGE類(lèi)前列腺素。具體地說(shuō)，該前列腺素類(lèi)似物是如下通式的化合物
其中波紋鍵表示α或β構(gòu)型，虛鍵表示單鍵、三鍵或順式或反式構(gòu)型中的雙鍵；R是氫，飽和的或不飽和的烷基，優(yōu)選是C1-10烷基，環(huán)烷基，優(yōu)選是C3-8環(huán)烷基，芳基，芳基烷基，優(yōu)選是芳基-C2-5烷基，或雜芳基；R1是具有2～5個(gè)碳原子、任選被選自氧、硫和氮的雜原子隔開(kāi)了的飽和或不飽和烷基，環(huán)烷基，優(yōu)選是C3-7環(huán)烷基，環(huán)烯基，優(yōu)選是C3-7環(huán)烯基，芳基或雜芳基；X是C-OH或C＝O；R2是氫、羥基、甲基、乙基、甲氧基或OCOR4，其中R4是直鏈或支鏈飽和的或不飽和的烷基，優(yōu)選是C1-10烷基，尤其是C1-6烷基，或者環(huán)烷基，優(yōu)選是C3-8環(huán)烷基，或者芳基；R3是優(yōu)選具有3～8個(gè)碳原子、尤其3～5個(gè)碳原子，任選被選自氧、硫和氮的一個(gè)或多個(gè)雜原子隔開(kāi)了的直鏈或支鏈飽和的或不飽和的烷基，每個(gè)碳原子任選被選自C1-5烷基、羥基和羰基的取代基取代了，羥基和羰基優(yōu)選被連接到前列腺素結(jié)構(gòu)的碳15上，并且所述烷基任選含有環(huán)烷基，優(yōu)選是C3-8環(huán)烷基，芳基或雜芳基，它可被C1-3烷基、C1-3烷氧基、羥基、硝基、三氟甲基或鹵素單取代或獨(dú)立地多取代；或者其藥物上可接受的鹽或酯。
芳基優(yōu)選是取代的或未取代的苯基。
雜芳基例如有噻吩、呋喃、噻唑、異噻唑、噁唑、異噁唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、噠嗪。
芳基、雜芳基和環(huán)烷基可被C1-3烷基、C1-3烷氧基、羥基、硝基、三氟甲基或鹵素單取代或者獨(dú)立地二取代或多取代。
不飽和烷基可以含一個(gè)或多個(gè)雙鍵和/或三鍵。
鹵素是氟、氯、溴或碘，尤其是氟、氯或溴。
所述前列腺素可以呈差向異構(gòu)體混合物形式以及呈單獨(dú)的差向異構(gòu)體形式。
通過(guò)如下非限制性的實(shí)施例闡述了本發(fā)明前列腺素受體的鑒定。前列腺素受體是應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)鑒定的。為FP、EP1、EP2、EP3和TP受體設(shè)計(jì)了特異性引物。用于該分析中的引物列于表II中。RT-PCR是在從培養(yǎng)的人虹膜黑素細(xì)胞分離的mRNA上進(jìn)行的。所述培養(yǎng)的細(xì)胞被用于制備mRNA。RT-PCR混合物是在瓊脂糖凝膠上分析的，并對(duì)所期望尺寸的條帶進(jìn)行克隆和測(cè)序。分析推測(cè)的序列與每個(gè)前列腺素受體序列的相似性。
方法。按Hu等(1993)的方法分離和培養(yǎng)人虹膜黑素細(xì)胞并用于早期傳代中。細(xì)胞生長(zhǎng)至鋪滿后收集供mRNA富集。
按生產(chǎn)商的指示應(yīng)用Dynals mRNA Direct System(Dynal A/S，Norway)分離mRNA。將100.000～200.000個(gè)人黑素細(xì)胞用于富集。將mRNA以共價(jià)鍵連接到寡脫氧胸苷酸標(biāo)記的Dynabead上。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄酶以寡脫氧胸苷酸為逆轉(zhuǎn)錄酶引物在所述Dynabeads上直接合成第一鏈cDNA。應(yīng)用得自各自的前列腺素受體的已知3’序列引物合成第二鏈cDNA，形成雙鏈cDNA。將同一組Dynabeads用于每種受體RT-PCR。按生產(chǎn)商的指示將受體特異性引物用于從Dynabead結(jié)合的cDNA開(kāi)始PCR擴(kuò)增DNA。至于FP和EP3受體反應(yīng)，PCR是在含5％DMSO、200μMdNTPs和20皮摩爾每種引物的50μl最終體積內(nèi)進(jìn)行的。至于其它受體，將含AmpliWax丸粒(Perkin Elmer，USA)的熱起始用于含5％DMSO、200μM dNTPs和20皮摩爾每種引物的75μl最終體積內(nèi)。表II.前列腺素受體特異性引物。
FP引物初級(jí)引物；CAC AAC CTG CCA GAC GGA AAA C和CCA GTC TTTGAT GTC TTC TGT G次級(jí)引物；CAG TAA TCT TCA TGA CAG TGG G和TTG TAG AAACAC CAG GTC CTG GEP1引物初級(jí)引物；TGT GGC ATG GCC GTG GAG和ACC AAC ACC AGC ATTGGG C次級(jí)引物；CTG CAG GGA GGT AGA GCT C和GGC ACG TGG TGCTTC ATC GEP2引物初級(jí)引物；CAA CCA TGC CTA TTT CTA CAG C和TCT CGC TCC AAACTT GGC TG次級(jí)引物；CTA CGT GGA CAA GCG ATT GGC和TGG TTG ACGAAC ACT CGC ACEP3引物初級(jí)引物；GGG ATC CAA GAT CTG GTT CAG和GCC TTC CCG ATCACC ATG CTG次級(jí)引物；CGC AAG AAG TCG TTC CTG CTG和CAC CAA GTCCCG GGC CAC TGTP引物初級(jí)引物；CTG GTG ACC GGT ACC ATC GTG GTG T和GTA GAT CTACTG CAG CCC GGA GCG C次級(jí)引物；TCG CTA CAC CGT GCA ATA CC和GGC TGG AGG GACAGC GAC這些反應(yīng)的PCR混合物是在1％LMP瓊脂糖凝膠(BioRadLaboratories，USA)上分析的。所期望尺寸的DNA片段是應(yīng)用TA-克隆盒按生產(chǎn)商的指示(Invitrogen Inc.，USA)進(jìn)行TA克隆的，并且按Applied Biosystems關(guān)于它們的Taq Dye Dioxy Terminator循環(huán)測(cè)序盒方案在Applied Biosystem 373A型DNA測(cè)序系統(tǒng)(AppliedBiosystems Inc.，USA)上測(cè)序的。應(yīng)用得自Genetics ComputerGroupInc.，Madison，USA[Devereux，J.等，核酸研究(Nucleic AcidResearch)12(1)387～395(1984)]的序列分析程序在VAX計(jì)算機(jī)上處理產(chǎn)生的原始數(shù)據(jù)。
結(jié)果在基于我們的RT-PCR的人虹膜黑素細(xì)胞中，我們能證實(shí)FP、EP2和EP3受體的表達(dá)。但是，我們不能證實(shí)EP1和TP受體的存在(表III)。作為陽(yáng)性對(duì)照，我們用得自人腎cDNA文庫(kù)的相同引物擴(kuò)增了所期望的EP1和TP片段。我們從在兩個(gè)不同時(shí)間分離的人虹膜黑素細(xì)胞富集了聚腺苷酸mRNA并進(jìn)行了數(shù)次PCR反應(yīng)，得到相同的結(jié)果。表III.應(yīng)用前列腺素受體特異性引物(見(jiàn)表II)進(jìn)行的人虹膜黑素細(xì)胞mRNA的RT-PCR(次級(jí)PCR引物)?；蛘_片段尺序列分析寸(bp)觀測(cè)的期望的FP + 489 與FP相同EP1- 397-EP2+ 501 與EP2相同EP3+ 372 與EP3相同TP - 484 -前列腺素衍生物的合成在本說(shuō)明書(shū)后面附上的示意圖1中示出了實(shí)施例中制備的目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)。
實(shí)施例1PGF2β(化合物1)該標(biāo)題化合物是從Cayman Chemicals Company，Ann ArborMichigan，USA購(gòu)買(mǎi)的。
實(shí)施例2PGF2β異丙酯(化合物2)在0℃和攪拌下，將DBU(163.5mg，1.01mmol)加到PGF2β(CaymanChemicals)(60mg，0.169mmol)于丙酮(20ml)的溶液中。讓該混合物暖至室溫，此時(shí)滴加2-碘丙烷(222.6mg，1.34mmol)。48h(TLC監(jiān)測(cè))后，用乙酸乙酯(40ml)稀釋該混合物，用鹽水(30ml)、3％檸檬酸(2×40ml)和5％碳酸氫鈉(2×30ml)洗滌，在無(wú)水硫酸鈉上干燥。在真空中除去溶劑，應(yīng)用3∶1的乙酸乙酯∶丙酮為洗脫液在硅膠上對(duì)殘余物進(jìn)行色譜處理。得無(wú)色油狀物，產(chǎn)量為46mg(68％)。1H NMR(CDCl3)d1.3(d，6H)，1,6-1,7(dm，4H)，2.0-2.2(dm，6H)，2.3(t，2H)，4.0-4.1(m，3H)，5.0(裂分峰，1H)，5.5(m，2H)，5.6(m，2H).13CNMR(CDCl3)d135.9，132.2，130.5，128.0，75.3，74.8，72.85，67.6，56.23，52.25，51.59，42.32，37.35，33.44，31.74，29.14，26.66，24.79，22.6，21.8，14.03.
實(shí)施例317-苯基-18，19，20-三去甲-PGE2(化合物3)該標(biāo)題化合物是從Cayman Chemicals Company，Ann ArborMichigan，USA購(gòu)買(mǎi)的。
實(shí)施例417-苯基-18，19，20-三去甲-PGE2異丙酯(化合物4)在0℃和攪拌下，將DBU(43.5mg，0.29mmol)于乙腈(1ml)中的溶液滴加到化合物3(22.1mg，0.057mmol)于乙腈(3ml)的溶液中。讓該混合物暖至室溫，然后滴加2-碘丙烷(78.0mg，0.46mmol)于乙腈(2ml)中的溶液。攪拌12h(TLC監(jiān)測(cè))后，用水(8ml)猝滅該反應(yīng)混合物，用乙酸乙酯(2×50ml)提取該混合物，用鹽水(10ml)、3％檸檬酸(10ml)和最后用5％碳酸氫鈉(10ml)洗滌提取液。在無(wú)水硫酸鈉上干燥后，在真空中除去溶劑，應(yīng)用乙酸乙酯為洗脫液在硅膠上對(duì)殘余油狀物進(jìn)行色譜處理。得230mg無(wú)色油狀標(biāo)題化合物的產(chǎn)物(69％)∶Rf＝0.516(乙酸乙酯∶丙酮∶HOAC＝1∶1∶0.02)；1H NMR(CDCl3)d0.89(m，3H)，1.3(d，6H)，2.6-2.8(m，2H)，4.1(m，2H)，5.0(m，1H)，5.3-5.7(dm，4H)，7.2(m，5H).13C NMR(CDCl3)d10.9，13.9，21.8，22.9，23.8，24.49，24.8，25.17，25.6，26.68，28.93，30.45，31.77，33.90，34.01，34.07，38.8，46.22，53.3，54.48，66.83，67.62，68.18，71.77，72.21，76.35，77.00，77.2，77.64，125.93，126.46，128.39，128.44，128.79，130.63，130.81，131.04，137.79，213.88.
實(shí)施例515RS-16，16-亞丙基-PGE2(化合物5)在攪拌下往15RS-16，16-亞丙基-PGE2甲酯(52mg，0.13mmol)于丙酮(0.4ml)和磷酸鹽緩沖劑(pH7，4ml)的溶液中添加脂肪酶VII(40mg)。在室溫下攪拌該混合物達(dá)24h(TLC監(jiān)測(cè))。用乙醇(3ml)猝滅該混合物并用乙酸乙酯(2×10ml)提取。用鹽水洗滌有機(jī)層，干燥(硫酸鈉)，真空濃縮，得46mg油狀產(chǎn)物。
實(shí)施例615RS-16，16-亞丙基-PGE2甲酯(化合物6)15RS-16，16-亞丙基前列腺素E2的合成(Skotnicki，S.等，1977)用圖解表示于示意圖2中。下文中的數(shù)字表示示意圖2中各自的結(jié)構(gòu)。
2，2-亞丙基己酸乙酯(9)在-78℃和攪拌下，往N-異丙基環(huán)己胺(56,2g，398mmol)于THF(400ml)中的溶液內(nèi)迅速添加n-BuLi(159ml，398mmol于己烷中2.5M)。往形成的溶液中滴加環(huán)丁烷羧酸乙酯(8)(50g，390mmol)并攪拌30分鐘，然后暖至0℃，將該溶液滴入正丁基碘(159ml，398mmol于己烷中，2.5mol)于DMSO(200ml)的溶液中。在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物達(dá)1h(TLC監(jiān)測(cè))。過(guò)濾除去鹽，真空濃縮濾液。將殘余物溶于己烷，用2％HCl、鹽水和水洗滌，然后在硫酸鈉上干燥，真空蒸發(fā)。蒸餾(49～56℃，1mm Hg)殘余的油狀物得26.5g(37％)產(chǎn)物。
1H NMR(CDCl3)d0.9(t，3H)，1.2(t，3H)，1.8-2.0(dm，5H)，2.2-2.5(m，3H)，4.2(m，2H).
2，2-亞丙基己-1-醇(10)在0℃和攪拌下，往2，2-亞丙基己酸乙酯(9)(26.5g，144mmol)于無(wú)水甲苯(100ml)的溶液內(nèi)滴加DIBAL-H(206ml，298mmol于甲苯中，1.4mol)。在室溫下攪拌形成的溶液達(dá)3h(TLC監(jiān)測(cè))，然后將該溶液傾入冰冷的5％HCl中。分離有機(jī)層，用5％HCl、鹽水洗滌，干燥，過(guò)濾，濃縮得30g油狀產(chǎn)物。1H NMR(CDCl3)d0.9(t，3H)，1.8～2.0(dm，5H)，2.5(m，1H)，3.0(m，1H)，3.6(m，2H)。
2，2-亞丙基己醛(11)往2，2-亞丙基己-1-醇(10)(30g，210mmol)于DME(400ml)的溶液中添加二環(huán)己烷碳化二亞胺(DCC)(130g，630mmol)、DMSO(120ml)和正磷酸(10.3g)。在室溫下攪拌該混合物達(dá)3h(TLC監(jiān)測(cè))，過(guò)濾。用二氯甲烷(300ml)稀釋濾液，再用水洗滌。分離有機(jī)層。過(guò)濾除去殘余物。用鹽水(100ml)洗滌濾液，干燥，真空濃縮。應(yīng)用己烷作為洗脫液在硅膠上通過(guò)柱色譜法純化殘余物，得油狀標(biāo)題產(chǎn)物(17.3g)。1HNMR(CDCl3)d0.9(t，3H)，1.2(t，3H)，1.8～2.0(dm，5H)，8.8(s，1H)。
4，4-亞丙基-1-辛炔-3-醇(12)在0℃和N2氣氛中往炔化鋰-乙二胺復(fù)合物(12.2g，132mmol)于DMSO(10ml)的溶液中添加2，2-亞丙基己醛(11)(17g，120mmol)于DMSO(20ml)中的溶液。在室溫下攪拌該混合物達(dá)24h(TLC監(jiān)測(cè))，然后將它傾入冰冷的2％HCl(50ml)和乙醚(50ml)中。分離有機(jī)層，用乙醚(50ml)提取水層，用鹽水洗滌合并的有機(jī)相，干燥，過(guò)濾，真空濃縮。應(yīng)用5∶1的己烷∶乙酸乙酯作為洗脫液在硅膠上用色譜法純化殘余物，得油狀物12(7.6g，38％)。
E-三丁基錫-4，4-亞丙基-1-辛烯-3-醇(13)
在130℃下將4，4-亞丙基-1-辛炔-3-醇(12)(5.0g，30mmol)、氫化三丁基錫(14.6ml，54.2mmol)和AIBN(30mg)的混合物攪拌24h(TLC監(jiān)測(cè))。分別應(yīng)用己烷和9∶1的己烷∶乙醚作為洗脫液在硅膠上用色譜法處理殘余物，得油狀標(biāo)題化合物(13)(12.54g，91.4％)。
E-三丁基錫-4，4-亞丙基-3-三甲基甲硅氧基-1-辛烯(14)往E-三丁基錫-4，4-亞丙基-1-辛烯-3-醇(13)(7g，15.3mmol)于DMF(100ml)的混合物中添加咪唑(2.1g，30.6mmol)和氯化三甲基硅烷(2.5g，23.0mmol)。在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物達(dá)1h(TLC監(jiān)測(cè))。使該混合物分配在水(200ml)和乙醚(200ml)之間。干燥有機(jī)相，真空蒸發(fā)。應(yīng)用己烷作為洗脫液在硅膠上用色譜法處理殘余物，得14(5.53g)。
11，15-雙(三甲基甲硅氧基)-16，16-亞丙基-5，6-二脫氫-PGE2甲酯(17)在一個(gè)干的100ml三頸瓶中裝入氰化銅(I)(928mg，10.4mmol)和一個(gè)磁性攪拌棒。用橡膠隔片覆蓋該燒瓶并真空加熱而除去痕量的水，再在N2中冷卻到0℃。通過(guò)注射器添加無(wú)水THF，接著添加甲基鋰(14ml，22.4mmol于乙醚中，1.6mol)。在0℃下攪拌該混合物達(dá)15分鐘，在攪拌過(guò)程中，該懸浮液變得清亮而均勻。在0℃下通過(guò)注射器添加E-三丁基錫-4，4-亞丙基-3-三甲基甲硅氧基-1-辛烯(14)(5.9g，11.2mmol)于THF(10ml)中的溶液，再在室溫下攪拌30分鐘。在-70℃下，往形成的溶液中相繼添加4-(叔丁基二甲基甲硅氧基)-環(huán)戊烯酮(15)(1.7g，8mmol)于THF(6ml)中的溶液、氯化三甲基硅烷(4.35g，40mmol)和三乙胺(8.1g，80mmol)，再在-70℃下攪拌15分鐘，然后在0℃下攪拌15分鐘。使該混合物分配在己烷(600ml)和水(300ml)之間。分離有機(jī)層，在硫酸鈉上干燥，過(guò)濾后真空濃縮，得清亮的油狀粗甲硅烷基烯醇醚。在攪拌下，在-30℃和N2中往該甲硅烷基烯醇醚于THF(50ml)的溶液中添加甲基鋰(7.7ml，12.3mmol于乙醚中，1.6mol)，攪拌30分鐘，接著添加新制備的1-三氟甲磺酸-2-己炔酸甲酯(16)(Erhardt，P.W.等1987；Caldwell A.G.等1979)，在-40℃攪拌5分鐘。用飽和氯化銨水溶液(30ml)猝滅形成的溶液，再用乙醚(3×100ml)提取，在硫酸鈉上干燥，過(guò)濾后真空濃縮。應(yīng)用己烷∶乙酸乙酯(1∶1)作為洗脫液在硅膠上用色譜法處理殘余物，得清亮的油狀15RS異構(gòu)體混合物(2.71g，57.3％)Rf＝0.36(SiO2，乙醚∶己烷＝1∶1)，1H NMR(CDCl3)d0.2(dm，12H)，0.8～0.9(ms，18H)，1.8(m，2H)，2.3(m，4H)，3.7(s，3H)，3.9～4.1(dm，2H)，5.5～5.6(2H)。還對(duì)脫甲硅基化類(lèi)似物(16，16-亞丙基-5，6-二脫氫-PGE2甲酯)進(jìn)行了1HNMR。1H NMR(CDCl3)d0.9(t，3H)，1.2～1.3(m，3H)，1.9～2.1(m，4H)，3.7(s，3H)，4.1(m，2H)，5.6～5.9(dm，2H)。
11，15-雙(三甲基甲硅氧基)-16，16-亞丙基-PGE2甲酯在攪拌下，往11，15-雙(三甲基甲硅氧基)-16，16-亞丙基-5，6-二脫氫-PGE2甲酯(17)(500mg，0.8mmol)于1∶1的苯∶環(huán)己烷(50ml)的溶液中添加Pd-BaSO4(250mg)和喹啉(250mg)，并在-40℃的H2氣氛中攪拌5h(TLC監(jiān)測(cè))。用乙醚稀釋該反應(yīng)混合物，通過(guò)C鹽過(guò)濾，真空濃縮。應(yīng)用9∶1的己烷∶乙酸乙酯在硅膠上用色譜法處理殘余物，得442mg相應(yīng)產(chǎn)物。
16，16-亞丙基-PGE2甲酯(6)在0℃下，往11，15-雙(三甲基甲硅氧基)-16，16-亞丙基-PGE2甲酯(374mg，0.589mmol)于THF(18ml)的溶液中添加40％HF(3.5ml)的THF(1ml)溶液。將該反應(yīng)混合物攪拌5h(TLC監(jiān)測(cè))后將它傾入5％碳酸氫鈉(30ml)和乙酸乙酯(50ml)的混合物中。分離有機(jī)層，用乙酸乙酯(2×30ml)洗滌水層。合并有機(jī)層，在硫酸鈉上干燥，真空濃縮。相繼應(yīng)用1∶1的己烷∶乙酸乙酯和乙酸乙酯在硅膠上用色譜法處理殘余物，得油狀物6(75mg，31％)。1H NMR(CDCl3)d0.9(t，3H)，1.3(t，6H)，2.0-2.6(mm，9H)，(dm，5H)，3.6(s，3H)，4.1(m，2H)，5.4(m，2H)，5.6-5.8(dm，2H)；13C NMR(CDCl3)d14.222，14.9，23.7，24.7，25.2，26.2，26.5，26.6，26.8，29.7，33.4，36.5，44.9，46.0，51.6，54.0，54.6，71.9，76.7，77.06，77.1，77.38，126.5，126.9，127.7，130.9，132.5，132.9，133.36，133.46，174.15，214.32.
實(shí)施例713，14-二氫-17-(3-氟苯基)-18，19，20，-三去甲PGE2異丙酯(化合物7)的合成該標(biāo)題化合物的合成用圖解表示于示意圖3中。下文中的數(shù)字表示示意圖3中各自的結(jié)構(gòu)。
2-氧代-4-(3-氟苯基丁基)膦酸二甲酯在室溫和攪拌下，往預(yù)先用正戊烷洗滌過(guò)的氫化鈉(4.17g，138mmol)于無(wú)水THF(250ml)的懸浮液中滴加2-氧代-丙基膦酸二甲酯(23.12g，132.3mmol)于THF(110ml)中的溶液。攪拌該反應(yīng)混合物達(dá)2h，然后在冰浴中冷卻，用n-BuLi(10.2g，158.7mmol)于己烷中的溶液處理，使變成深棕色溶液。在0℃下攪拌2h，接著滴加3-氟芐基溴(25g，132.3mmol)于THF(50ml)中的溶液。讓該反應(yīng)混合物逐漸暖至室溫，3h(TLC監(jiān)測(cè))后，用10％HCl(20ml)猝滅。將該混合物傾入冰水(200ml)中，用CHCl3(2×150ml)提取，收集有機(jī)層，用鹽水(150ml)洗滌，相繼應(yīng)用CH2Cl2和EtOAc作為洗脫液在硅膠上用色譜法處理，得19.5g淡黃色油狀物。Rf＝0.37(硅膠，1∶1的EtOAc∶丙酮)。
(1S，5R，6R，7R)-6-甲酰-7-(4-苯基苯甲酸基)-2-氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷-3-酮(19)往冷卻到18℃的醇18(19.0g，53.9mmol)于DME(100ml)的溶液中添加二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)(33.3，161.8mmol)、DMSO(38.2ml)和磷酸(1.43ml，21.28mmol)。將該反應(yīng)混合物的溫度保持低于25℃達(dá)30分鐘。再在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物達(dá)2小時(shí)(TLC監(jiān)測(cè))，濾除沉淀物，用乙醚(2×50ml)洗滌。用水(50ml)和鹽水(2×50ml)洗滌合并的有機(jī)層，用乙醚(100ml)提取水溶液，收集有機(jī)層并在硫酸鈉上干燥，過(guò)濾，直接用于下一步。TLC Rf＝0.37(硅膠，2∶1的EtOAc∶甲苯)。
(1S，5R，6R，7R)-6-{3-氧代-5-(3-氟苯基)-1-E-戊烯基}-7-(4-苯基苯甲酸基)-2-氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷-3-酮(20)在氮?dú)庵泻蛿嚢柘?，往預(yù)先用正戊烷洗滌過(guò)的NaH(1.9g，65.1mmol)于DME(130ml)的懸浮液中滴加2-氧代-4-(3-氟苯基)丁基膦酸二甲酯(Wadsworth，Jr.，W.S.，等1961)(19.3g，70.5mmol)于DME(100ml)中的溶液并在室溫下劇烈攪拌1h。然后將該混合物冷卻到-10℃，滴加粗醛19的溶液。在0℃30分鐘以及在室溫2h(TLC監(jiān)測(cè))后，用乙酸中和該反應(yīng)混合物，在真空中除去溶劑，將殘余物溶于EtOAc(200ml)，用水(50ml)和鹽水(50ml)洗滌。在無(wú)水硫酸鈉上干燥有機(jī)層，過(guò)濾，真空蒸發(fā)。將殘余物與乙醚(100ml)一起攪拌，濾出形成的白色沉淀，用冷乙醚洗滌，得白色晶體物質(zhì)，產(chǎn)量17g(58.5％)Rf＝0.56(硅膠，2∶1的乙酸乙酯∶甲苯)。
(1S，5R，6R，7R)-6-(3S-3-羥基-5-(3-氟苯基)-1-戊烯基)-7-(4-苯基苯甲酸基)-2-氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷-3-酮(21)往在氮?dú)庵欣鋮s到-20℃的烯酮20(17.1g，34.3mmol)于THF(20ml)中和氯化鈰(CeCl3·7H2O)(3.8g，10.3mmol)于1∶2的THF∶乙醚(60ml)中的攪拌溶液內(nèi)分成小部分地添加硼氫化鈉(0.8g，20.57mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌2h(TLC監(jiān)測(cè))。使溫度升高到±0℃，然后通過(guò)添加水(20ml)和10％HCl的水溶液至pH4猝滅，再用EtOAc(50ml)提取。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，在無(wú)水硫酸鈉上干燥，真空濃縮，相繼應(yīng)用2∶1和1∶1的甲苯∶EtOAc作為洗脫液在硅膠上用色譜法處理兩次，得白色晶體產(chǎn)物4(5g)，Rf＝0.32(硅膠，2∶1的EtOAc∶甲苯)。
(1S，5R，6R，7R)-6-{3R-3-羥基-5-(3-氟苯基)-1-戊基}-7-(4-苯基苯甲酸基)-2-氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷-3-酮(22)往10％Pd/C(0.1g)于亞硝酸鈉(3.6ml，1.8mmol)和乙醇(15ml)的懸浮液中添加21(3g，6.0mmol)于乙醇(6.0ml)中的溶液。在氫氣氛中攪拌該混合物達(dá)6h(TLC監(jiān)測(cè))，用1M HCl溶液猝滅。通過(guò)C鹽墊片過(guò)濾除去催化劑，用絕對(duì)乙醇(15ml)洗滌。在真空中除去溶劑。將形成的油狀物溶于EtOAc(100ml)，用15％鹽水(30ml)洗滌。用EtOAc(40ml)洗滌水相。在硫酸鈉上干燥合并的有機(jī)提取物，過(guò)濾。在真空中除去溶劑。應(yīng)用EtOAc作為洗脫液在硅膠上用色譜法處理殘余物，得5(2.94g)，Rf＝0.25(硅膠，EtOAc)。
(1S，5R，6R，7R)-6-{3R-3-羥基-5-(3-氟苯基)-1-戊基}-7-R-羥基-2-氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷-3-酮(23)往內(nèi)酯22(2.8g，5.65mmol)于甲醇(15ml)的溶液中添加碳酸鉀(0.47g，3.3mmol)，在室溫下攪拌該混合物達(dá)6h(TLC監(jiān)測(cè))。用10％HCl水溶液中和該混合物，再用EtOAc(2×30ml)提取。在無(wú)水硫酸鈉上干燥有機(jī)相，蒸發(fā)至于。應(yīng)用1∶1的EtOAc∶丙酮作為洗脫液在硅膠上用色譜法處理粗產(chǎn)物。得白色晶體產(chǎn)物形式的標(biāo)題化合物23；產(chǎn)量為1.6g，Rf＝0.17(硅膠，EtOAc)；1H NMR(CDCl3)d 1.2-1.4(m，1H)，1.54(m，3H)，1.8(m，3H)，2.1(m，1H)，2.2(m，1H)，2.3(m，1H)，2.6(m，2H)，2.67(m，1H)，2.8(m，2H)，3.60(m，CH2CHOHCH2)，4.0(m，CHOH)，4.92(m，CHOC＝O)，6.8-7.0(m，3H)，7.28(m，1H).
(1S，5R，6R，7R)-6-{3R-3-叔丁基二甲基甲硅氧基-5-(3-氟苯基)-1-戊基}-7-R-叔丁基二甲基甲硅氧基-2-氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷-3-酮(24)將叔丁基二甲基氯甲硅烷(2.3g，14.9mmol)一次性地加入二醇23、三乙胺(2.1ml，14.8mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.06g，0.1mmol)于二氯甲烷(20ml)中的溶液，在室溫下劇烈攪拌24h，真空濃縮該反應(yīng)混合物。將粗產(chǎn)物溶于乙酸乙酯(50ml)，用水(20ml)和5％碳酸氫鈉的水溶液(20ml)洗滌。在硫酸鈉上干燥有機(jī)相，過(guò)濾，真空濃縮。應(yīng)用二氯甲烷作為洗脫液在硅膠上用色譜法處理殘余物，得3g油狀產(chǎn)物。Rf＝0.68(硅膠，乙醚)。
(1S，5R，6R，7R)-6-{3R-3-叔丁基二甲基甲硅氧基-5-(3-氟苯基)-1-戊基}-7-R-叔丁基二甲基甲硅氧基-2-氧雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷-3-醇(25)在-72/-80℃和攪拌下，將二異丁基氫化鋁(DIBAL)(1.1g，7.43mmol)于無(wú)水甲苯(5.3ml)中的溶液滴加到內(nèi)酯24(2.7g，4.95mmol)于無(wú)水THF(30ml)的溶液中。1h(TLC監(jiān)測(cè))后，用甲醇(5ml)猝滅該反應(yīng)混合物并暖至室溫，添加水(50ml)，10％HCl水溶液(50ml)，用EtOAc(2×50ml)提取。用硫酸鈉干燥有機(jī)層，過(guò)濾，在真空中除去溶劑，分別應(yīng)用EtOAc和1∶1的EtOAc∶丙酮作為洗脫液在硅膠上用色譜法處理殘余物，得黃色油狀產(chǎn)物(2.7g)，Rf＝0.85(硅膠，1∶1的乙酸乙酯)。
13，14-二氫-11，15-二叔丁基二甲基甲硅氧基-17-(3-氟苯基)-18，19，20-三去甲-PGF2α(26)在0～5℃下、氮?dú)庵校?-羧基丁基三苯基溴化鏻(8.78g，19.82mmol)于THF(50ml)的攪拌懸浮液中添加叔丁醇鉀(3.89g，34.6mmol)，在室溫下攪拌該混合物達(dá)30分鐘。在-15/-10℃下往生成的桔紅色內(nèi)鎓鹽溶液中添加內(nèi)半縮醛25(2.7g，4.95mmol)于THF(10ml)中的溶液，攪拌該混合物達(dá)3～4h(TLC監(jiān)測(cè))。用水(30ml)稀釋該反應(yīng)混合物，用乙醚(4×40ml)洗滌。用5％檸檬酸水溶液酸化水層至pH4，用EtOAc(2×50ml)提取。用鹽水(30ml)洗滌有機(jī)相，在硫酸鈉上干燥，過(guò)濾。在真空中除去溶劑，未經(jīng)分離而將漿狀物26直接用于下一步。
13，14-二氫-11，15-二叔丁基二甲基甲硅氧基-17-(3-氟苯基)-18，19，20-三去甲PGF2α異丙酯(27)在0℃和攪拌下，將DBU(5.28g，34.7mmol)滴加到粗產(chǎn)品26(3.16g，4.96mmol)于丙酮(20ml)的溶液中。讓該混合物暖至室溫，滴加2-碘丙烷(5.05g，29.7mmol)。4h(TLC監(jiān)測(cè))后，用EtOAc(100ml)稀釋該混合物，用鹽水(30ml)、3％檸檬酸(2×25ml)和5％碳酸氫鈉(2×25ml)洗滌，在無(wú)水硫酸鈉上干燥。在真空中除去溶劑，應(yīng)用1∶2的乙醚∶石油醚作為洗脫液在硅膠上用色譜法處理殘余物。得無(wú)色油狀物，產(chǎn)量是1.7g，Rf＝0.43(硅膠，1∶2的乙醚∶石油醚)。1H NMR(CDCl3)d0.1(m，9H)，0.9(m，16H)，1.2(m，9H)，1.6-1.8(mm，10H)，2.12(m，2H)，2.22-2.33(m，2H)，2.6-2.9(dm，2H)，3.65(m，CH2CHOHCH2)，3.94(m，CH2CHOH)，4.16(m，CH2CHOH)，5.0(裂分峰1H)，5.38(m，db)，5.47(m，db)，6.8-7.0(dm，Ar，3H)，7.2(m，Ar，1H).
13，14-二氫-11，15-二叔丁基二甲基甲硅氧基-17-(3-氟苯基)-18，19，20-三去甲PGE2異丙酯(28)將負(fù)載于氧化鋁(20g)上的二氯鉻酸吡啶鎓分成小部分地添加到27(1.7g，2.5mmol)于二氯甲烷(30ml)的溶液中。在室溫下攪拌該混合物(TLC監(jiān)測(cè))，過(guò)濾，用2∶1的乙醚∶乙酸乙酯洗滌沉淀。在真空中除去溶劑。用乙醚(100ml)稀釋殘余物，用水(30ml)，5％NaHCO3水溶液(3×20ml)洗滌，分離有機(jī)相，在硫酸鈉上干燥，真空蒸發(fā)得油狀物28(1.3g)。Rf＝0.72(硅膠，乙酸乙酯)。
13，14-二氫-17-(3-氟苯基)-18，19，20-三去甲PGE2異丙酯(7)將15％氟化氫(12ml)添加到28(314mg)的乙腈溶液中。在室溫下攪拌該混合物達(dá)4h(TLC監(jiān)測(cè))。用乙酸乙酯(100ml)稀釋該反應(yīng)混合物，用水(3×20ml)洗滌，干燥和真空蒸發(fā)。應(yīng)用乙酸乙酯作為洗脫液在硅膠上用色譜法處理殘余物，得油狀物7(64mg)，Rf＝0.43(硅膠，乙酸乙酯)。1H NMR(CDCl3)d 1.2(d，6H)，1.6-1.8(m，6H)，1.8(m，2H)，2.12(m，2H)，2.2-2.3(m，2H)，2.6-2.8(dm，2H)，3.6(m，CH2CHOHCH2)，4.16(m，CH2CHOH)，5.0(裂分峰.1H)，5.38(m，db)，5.47(m，db)，6.8-7.0(dm，Ar，3H)，7.2(m，Ar，1H).
藥理學(xué)試驗(yàn)化合物對(duì)貓和猴的眼內(nèi)壓力降低效果。
測(cè)試了所述化合物對(duì)動(dòng)物模型的眼內(nèi)壓力降低效果。眼內(nèi)壓力是用校正的肺壓計(jì)(pneumotonometer)測(cè)定的。歐洲家貓和獼猴被用作試驗(yàn)動(dòng)物。測(cè)試前用丁氧普魯卡因麻醉角膜。用PGF2β異丙酯(2)、17-苯基-18，19，20-三去甲-PGE2異丙酯(4)、15RS-16，16-亞丙基甲酯(6)和13，14-二氫-17-(3-氟苯基)-18，19，20-三去甲-PGE2異丙酯(7)局部處理后的眼內(nèi)壓力降低作用被闡明于表IV和V中。
表IV. 1～10μg試驗(yàn)化合物(對(duì)EP1前列腺素類(lèi)受體具有效果)對(duì)貓的眼內(nèi)壓力降低效果。對(duì)比眼睛只接受載體。(n＝5～6；平均值±SEM)。
前列腺素/眼睛 基線壓力 處理后3h的壓力(mmHg)(mmHg)2試驗(yàn)眼睛 24.2±2.3 15.1±2.8*對(duì)比眼睛 24.5±2.7 22.5±3.44試驗(yàn)眼睛 22.0±1.7 14.2±1.7*對(duì)比眼睛 21.5±1.7 18.7±1.96試驗(yàn)眼睛 19.2±1.7 9.5±0.5*對(duì)比眼睛 19.3±1.7 17.0±1.37試驗(yàn)眼睛 20.4±-2.0 14.2±0.9*對(duì)比眼睛 20.6±-1.8 18.4±1.5*p＜0.01(眼睛之間配對(duì)的t檢驗(yàn))表V.試驗(yàn)化合物(對(duì)EP1受體具有效果)對(duì)猴的眼內(nèi)壓力降低效果。PGF2β異丙酯的劑量是30μg，而17-苯基-18，19，20-三去甲-PGE2異丙酯和15RS-16，16-亞丙基-PGE2異丙酯的劑量則是3μg。對(duì)比眼睛只接受載體(n＝6；平均值±SEM)。前列腺素/眼睛 基線壓力 處理后4h的壓力(mmHg) (mmHg)2試驗(yàn)眼睛17.8±1.414.1±1.8*對(duì)比眼睛16.9±1.217.5±2.04試驗(yàn)眼睛14.1±1.19.9±0.9*對(duì)比眼睛13.9±1.011.5±0.86試驗(yàn)眼睛20.9±1.615.3±2.4*對(duì)比眼睛21.3±1.519.0±1.5*p＜0.05(眼睛之間配對(duì)的t檢驗(yàn))可見(jiàn)，在貓和猴中，選擇EP1受體的所有的前列腺素類(lèi)似物都顯著降低了眼內(nèi)壓力。
因此，本發(fā)明公開(kāi)了對(duì)EP1受體有選擇性刺激效果的化合物可降低眼內(nèi)壓力，并且這些化合物在眼中不會(huì)具有任何黑素生成效果，或者至少具有大為減少的黑素生成效果，因?yàn)槿梭w內(nèi)產(chǎn)生色素的細(xì)胞(即黑素細(xì)胞)缺乏EP1受體。于是，在應(yīng)用對(duì)EP1受體具有選擇性的前列腺素的長(zhǎng)期治療中可避免常見(jiàn)的虹膜色素沉著增多的副作用。示意圖1
示意圖2
試劑a.N-異丙基環(huán)己胺/THF，n-BuLi，環(huán)丁烷羧酸乙酯/DMSOb.DIBAL-H/甲苯c.DCC/DME，DMSO，H3PO4，d.炔化鋰-乙二胺，DMSOe.三丁基氫化錫，AIBNf.三甲基氯甲硅烷(TMSCl)，咪唑/DMFg.Li2CuCN(CH3)2，TMSCl，三乙胺，4-叔丁基-二甲基甲硅氧基-2-環(huán)戊烯酮，1-三丁基錫-4，4-亞丙基-3-三甲基甲硅氧基-1-辛烯，2-炔-8-辛酸甲酯h.Pd-BaSO4，喹啉
i.HF/THF示意圖3
試劑a.DCC，DMSO，H2SO4，DME，H3PO4b.NaH，2-氧代-4-(3-氟苯基)-丁基膦酸二甲酯c.NaBH4，CeCl3·7H2O/THFd.Pd/C，NaNO2/THFe.K2CO3/甲醇f.TBDMS，TEA，4-二甲氨基吡啶/二氯甲烷
g.DIBAL-H/THFh.4-羧基丁基三苯基溴化鏻，叔丁醇鉀，THFi.DBU，2-碘丙烷/丙酮j.氯鉻酸吡啶鎓，氧化鋁/二氯甲烷k.HF/乙腈參考文獻(xiàn)Bill，A.(1975)。眼中的血循環(huán)和流體動(dòng)力學(xué)，生理學(xué)評(píng)論(Physiol.Rev.)，55；383～417。
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權(quán)利要求
1.治療青光眼和眼壓力過(guò)高的組合物，它包括治療活性的生理上可接受的量的前列腺素類(lèi)似物或者其藥物上可接受的鹽或酯，該類(lèi)似物是EP1前列腺素類(lèi)受體的選擇性興奮劑。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述前列腺素類(lèi)似物得自PGF類(lèi)或PGE類(lèi)前列腺素。
3.權(quán)利要求1或2的組合物，其中所述前列腺素類(lèi)似物是如下通式的化合物
其中波紋鍵表示α或β構(gòu)型，虛鍵表示單鍵、三鍵或順式或反式構(gòu)型中的雙鍵；R是氫，飽和的或不飽和的烷基，優(yōu)選是C1-10烷基，環(huán)烷基，優(yōu)選是C3-8環(huán)烷基，芳基，芳基烷基，優(yōu)選是芳基-C2-5烷基，或雜芳基；R1是具有2～5個(gè)碳原子、任選被選自氧、硫和氮的雜原子隔開(kāi)了的飽和或不飽和烷基，環(huán)烷基，優(yōu)選是C3-7環(huán)烷基，環(huán)烯基，優(yōu)選是C3-7環(huán)烯基，芳基或雜芳基；X是C-OH或C＝O；R2是氫、羥基、甲基、乙基、甲氧基或OCOR4，其中R4是直鏈或支鏈飽和的或不飽和的烷基，優(yōu)選是C1-10烷基，尤其是C1-6烷基，或者環(huán)烷基，優(yōu)選是C3-8環(huán)烷基，或者芳基；R3是優(yōu)選具有3～8個(gè)碳原子、尤其3～5個(gè)碳原子，任選被選自氧、硫和氮的一個(gè)或多個(gè)雜原子隔開(kāi)了的直鏈或支鏈飽和的或不飽和的烷基，每個(gè)碳原子任選被選自C1-5烷基、羥基和羰基的取代基取代了，羥基和羰基優(yōu)選被連接到前列腺素結(jié)構(gòu)的碳15上，并且所述烷基任選含有環(huán)烷基，優(yōu)選是C3-8環(huán)烷基，芳基或雜芳基，它可被C1-3烷基、C1-3烷氧基、羥基、硝基、三氟甲基或鹵素單取代或獨(dú)立地多取代；或者其藥物上可接受的鹽或酯。
4.權(quán)利要求1、2或3的組合物，其中所述前列腺素類(lèi)似物是15(R，S)-16，16-亞丙基-PGE2或其烷基酯。
5.權(quán)利要求1、2或3的組合物，其中所述前列腺素類(lèi)似物是13，14-二氫-17-(3-氟苯基)-18，19，20-三去甲-PGE2或其烷基酯。
6.一種治療青光眼或患者眼中眼壓力過(guò)高的方法，該方法包括使眼的表面接觸眼內(nèi)壓力降低有效量的治療活性和生理上可接受的前列腺素類(lèi)似物或者其藥物上可接受的鹽或酯，該類(lèi)似物是EP1前列腺素類(lèi)受體的選擇性興奮劑。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述前列腺素類(lèi)似物得自PGF或PGE前列腺素。
8.權(quán)利要求6或7的方法，其中所述前列腺素類(lèi)似物是如下通式的化合物
其中波紋鍵表示α或β構(gòu)型，虛鍵表示單鍵、三鍵或順式或反式構(gòu)型中的雙鍵；R是氫，飽和的或不飽和的烷基，優(yōu)選是C1-10烷基，環(huán)烷基，優(yōu)選是C3-8環(huán)烷基，芳基，芳基烷基，優(yōu)選是芳基-C2-5烷基，或雜芳基；R1是具有2～5個(gè)碳原子、任選被選自氧、硫和氮的雜原子隔開(kāi)了的飽和或不飽和烷基，環(huán)烷基，優(yōu)選是C3-7環(huán)烷基，環(huán)烯基，優(yōu)選是C3-7環(huán)烯基，芳基或雜芳基；X是C-OH或C＝O；R2是氫、羥基、甲基、乙基、甲氧基或OCOR4，其中R4是直鏈或支鏈飽和的或不飽和的烷基，優(yōu)選是C1-10烷基，尤其是C1-6烷基，或者環(huán)烷基，優(yōu)選是C3-8環(huán)烷基，或者芳基；R3是優(yōu)選具有3～8個(gè)碳原子、尤其3～5個(gè)碳原子，任選被選自氧、硫和氮的一個(gè)或多個(gè)雜原子隔開(kāi)了的直鏈或支鏈飽和的或不飽和的烷基，每個(gè)碳原子任選被選自C1-5烷基、羥基和羰基的取代基取代了，羥基和羰基優(yōu)選被連接到前列腺素結(jié)構(gòu)的碳15上，并且所述烷基任選含有環(huán)烷基，優(yōu)選是C3-8環(huán)烷基，芳基或雜芳基，它可被C1-3烷基、C1-3烷氧基、羥基、硝基、三氟甲基或鹵素單取代或獨(dú)立地多取代；或者其藥物上可接受的鹽或酯。
9.權(quán)利要求6、7或8的組合物，其中所述前列腺素類(lèi)似物是15(R，S)-16，16-亞丙基-PGE2或其烷基酯。
10.權(quán)利要求6、7或8的組合物，其中所述前列腺素類(lèi)似物是13，14-二氫-17-(3-氟苯基)-18，19，20-三去甲-PGE2或其烷基酯。
11.權(quán)利要求6～10任一項(xiàng)的方法，其中含所述前列腺素類(lèi)似物的治療活性和生理上可接受的組合物被每天1～3次局部施用于眼上。
12.權(quán)利要求1～4任一項(xiàng)定義的、作為EP1前列腺素類(lèi)受體的選擇性興奮劑的前列腺素類(lèi)似物在制備用于治療青光眼和眼壓力過(guò)高的藥劑方面的應(yīng)用。
全文摘要
公開(kāi)了用于治療青光眼和眼壓力過(guò)高的新方法和組合物。該方法基于EP
文檔編號(hào)A61K31/557GK1262623SQ9880704
公開(kāi)日2000年8月9日 申請(qǐng)日期1998年7月10日 優(yōu)先權(quán)日1997年7月11日
發(fā)明者J·斯特杰恩斯查茨, B·里蘇爾, S·萊克 申請(qǐng)人:法瑪西雅和厄普約翰公司