專利名稱：嘌呤核苷用于調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的軸突突出生長的制作方法
背景技術(shù)：
早逝的童年，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的損傷導(dǎo)致大多不可逆的功能損害。在腦或脊髓中，由中風(fēng)、外傷或其它原因?qū)е碌膿p傷可導(dǎo)致終身喪失識別、感覺和運動功能，甚至喪失對生命功能的維持。失去的神經(jīng)細胞不能被取代，剩余的那些通常不能使斷開的連接再生，盡管有限的局部突觸再生可使損傷的部位閉合。喪失的功能一般不能治療。
CNS再生能力的喪失歸因于多種因素，包括神經(jīng)膠質(zhì)細胞表面上存在的抑制分子抑制軸突生長；缺乏促進生長的合適的底物分子如層粘連蛋白并缺乏所需的合適的營養(yǎng)因子來活化細胞生存和分化所需的基因表達程序。
相對地，外周神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)中，損傷的神經(jīng)纖維可長距離再生，甚至極好地恢復(fù)功能。過去的15年中，神經(jīng)學(xué)家們逐漸認識到這并不是外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)細胞之間內(nèi)在區(qū)別的結(jié)果；引人注目的是，如果給予CNS神經(jīng)元通過PNS(如坐骨神經(jīng))移植片段生長的機會，它會在長距離間延伸其軸突。所以，如果細胞外環(huán)境給予正確的信號，CNS神經(jīng)元會保留生長的能力。使CNS和PNS產(chǎn)生不同生長能力的因素包括位于少突神經(jīng)膠質(zhì)細胞表面的部分表征的生長抑制分子，它們包圍在CNS的神經(jīng)纖維上，但在PNS的類似細胞群(許旺細胞)中就很不豐富；促進PNS中生長的基底層和其它表面的分子，這些分子在CNS中缺乏(如，層粘連蛋白)；以及活化細胞生長和分化所需的基因表達程序營養(yǎng)因子、可溶性多肽的。盡管這些營養(yǎng)因子被認為是維持神經(jīng)細胞活力和分化所必需的，但CNS中起誘導(dǎo)軸突再生作用的具體因素仍然不確定。其結(jié)果是，到目前為止，CNS損傷的有效治療未得到發(fā)展。
因此，仍需要調(diào)節(jié)CNS神經(jīng)元突出生長的方法和組合物。
因此，本發(fā)明的方法通常包括將中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元與嘌呤核苷或其類似物接觸。一方面，本發(fā)明提供刺激突出生長的方法，優(yōu)選使用肌苷或鳥苷或其類似物。另一方面，本發(fā)明提供抑制突出生長的方法，優(yōu)選使用6-硫鳥嘌呤。在特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的方法調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的軸突突出生長。
本發(fā)明刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元軸突突出生長的方法可在CNS神經(jīng)元損傷或其它傷害(如，中風(fēng)、腦外傷、大腦的動脈瘤、脊髓損傷等)之后使用。本發(fā)明抑制CNS神經(jīng)元軸突突出生長的方法可在產(chǎn)生異常軸突突出生長的神經(jīng)增生疾病中使用，如在癲癇(如，外傷后癲癇)和神經(jīng)病性疼痛綜合征中使用。
一方面，嘌呤核苷或其類似物通過引入受治療者的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，例如引入受治療者的腦脊液中來給予本發(fā)明的受治療者。在本發(fā)明的某些方面中，嘌呤核苷或其類似物經(jīng)鞘內(nèi)給藥，例如引入腦室、腰區(qū)或者小腦延髓池中。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的刺激方法促進損傷視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的突出生長。在這種情況下，嘌呤核苷或其類似物可局部給予視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞來刺激軸突突出生長。
在本發(fā)明的另一方面中，嘌呤核苷或其類似物以可藥用制劑的形式給藥。可藥用制劑可以是分散系統(tǒng)，例如基于類脂的制劑、脂質(zhì)體制劑或多泡脂質(zhì)體制劑?？伤幱弥苿┮部珊芯酆衔锘?，例如選自合成的聚合物如聚酯(PLA、PLGA)、聚乙二醇、泊咯沙姆(poloxomer)、聚酐和pluronics(環(huán)氧丙烷與環(huán)氧乙烷嵌段共聚物)或選自天然衍生的聚合物，如白蛋白、藻酸鹽、纖維素衍生物、膠原、纖維蛋白、明膠和多糖。
在優(yōu)選的實施方案中，在將可藥用制劑給予受治療者以后，可藥用制劑使嘌呤核苷持續(xù)釋放，如“緩慢釋放”給受治療者達至少一周，更優(yōu)選達至少一個月。使本發(fā)明制劑實現(xiàn)持續(xù)釋放的優(yōu)選方法包括使用緩慢釋放聚合物膠囊或包括該制劑的輸入泵。
本發(fā)明還包括嘌呤核苷或其類似物用于制備調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元，優(yōu)選哺乳動物CNS神經(jīng)元軸突突出生長的藥物。在優(yōu)選的實施方案中，該藥物不包括除嘌呤核苷或其類似物之外的其它神經(jīng)元生長調(diào)節(jié)劑。例如，在一個實施方案中，藥物不包括神經(jīng)生長因子。
本發(fā)明也提供含有本發(fā)明嘌呤核苷或其類似物和可藥用載體的藥物組合物和包裝的制劑。
本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點通過下列詳細的說明書和權(quán)利要求書的描述將變得顯而易見。


圖1A描述在所示的1、10和100μM濃度下腺苷(A)、鳥苷(G)、胞苷(C)、尿苷(U)和胸苷(T)對軸突生長作用。數(shù)據(jù)通過減去陰性對照的生長水平然后除以用20-30％AF-1處理的陽性對照的凈生長來標準化。
圖1B描述腺苷和鳥苷的量效曲線。由這些數(shù)據(jù)評估的EC50是腺苷為10-15μM并且鳥苷為20-30μM。
圖1C描述腺苷的作用。
圖1D描述環(huán)AMP(dBCAMP，二丁酰環(huán)AMP；Sp-8-Br-cAMPS，8-溴腺苷-3’，5’環(huán)單硫代磷酸)或環(huán)GMP(8-BrcGMP，8-溴環(huán)GMP；8-pcpt-cGMP，8-(4-氯苯基硫代)鳥苷-3’，5’環(huán)單磷酸)的可滲透膜類似物的作用。數(shù)據(jù)表示為平均值+平均值的標準誤差(SEM；如果＜0.02則不顯示)并且經(jīng)2-4次獨立的實驗來匯集。p值通過與陰性對照生長相比的雙側(cè)t檢驗來計算。*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001。
圖2顯示腺苷不通過細胞外受體刺激生長。由AF-1(a-b)、100μM腺苷(Ado)(c-d)或100μM鳥苷(Guo)(e-f)刺激的突出生長不受加入20pM 8-PST，一種A1和A2腺苷受體抑制劑(a，c和e與b，d和f的生長進行比較)的影響。不能水解的腺苷類似物2-氯腺苷(2-CA，100μM)減少生長使其低于基線水平(g)(在3次實驗中p＜0.001)。
圖3顯示腺苷必須水解才刺激突出生長。上圖描述脫氧柯福霉素(DCF)和外源性腺苷脫氨酶(ADA)對由AF-1(a-c)、腺苷(d-f)和鳥苷(g，h)誘導(dǎo)的突出生長的影響。下圖描述脫氧柯福霉素(DCF)和外源性腺苷脫氨酶(ADA)對由AF-1(a-c)、腺苷(d-f)和鳥苷(g，h)誘導(dǎo)的生存的影響。考慮到用外源性ADA水解擴增腺苷不改變腺苷的活性(f)，用DCF阻斷內(nèi)源性ADA活性引起腺苷抑制生長(e，上圖)和生存(e，下圖)。***p＜0.001圖4描述肌苷的量效曲線。在大于50μM的濃度下，肌苷刺激作用約為AF-1所產(chǎn)生的生長最高水平的60％。肌苷的EC50估計為10-15μM。次黃嘌呤不具有活性，而5’IMP似乎低于肌苷活性的1/10。由10μM以上的所有肌苷濃度刺激的突出生長顯著高于對照(p＜0.001)。
圖5描述肌苷和鳥苷經(jīng)細胞內(nèi)機制刺激生長。在20μM時，NBTI(一種抑制劑或嘌呤轉(zhuǎn)運劑)對AF-1的活性沒有影響，但阻斷大約90％的肌苷(50μM)或鳥苷(100μM)活性。***有或沒有藥物的生長差異是顯著的，p＜0.001。數(shù)據(jù)由4次獨立的實驗匯總。
圖6A顯示AF-1包含不明顯的肌苷活性。在G-10交聯(lián)葡聚糖柱上，AF-1洗脫具有7分鐘峰，在該時間峰(即，9-10分鐘)的肌苷洗脫液未檢測到活性。
圖6B顯示肌苷和鳥苷的作用不依賴于細胞密度。數(shù)據(jù)由多個獨立的實驗獲得，每個數(shù)據(jù)均由單點來表示，通過這些數(shù)據(jù)來分析涂布密度對細胞突出生長的影響。在所有情況下，肌苷或鳥苷的濃度保持100μM。通過最小-二乘-法(Cricket Graph)計算回歸線并在符號下標出。
圖7A-D顯示AF-1的作用被6-硫代鳥嘌呤抑制但可通過肌苷來恢復(fù)。
圖7A顯示在10μM時，嘌呤類似物6-TG抑制AF-1誘導(dǎo)的生長到基線之下(線2比1p＜0.001)，并且減少由25μM肌苷(Ino-25)誘導(dǎo)的生長大約50％(線4比3)；較高濃度的肌苷或鳥苷誘導(dǎo)的生長(Guo-100線8比7)不受影響。100μM的肌苷恢復(fù)所有10μM6-TG存在下的由AF-1誘導(dǎo)的生長(線10)，其顯著高于單獨或與10μM6-TG一起的100μM肌苷誘導(dǎo)的生長(p＜0.01)。
圖7B顯示在本文所使用的6-TG濃度下沒有對細胞生存產(chǎn)生影響。
圖7C顯示AF-1和肌苷有部分加合作用。各自在0、EC50或飽和濃度下評價AF-1和肌苷的生長情況。盡管各自最高濃度一半的效果是加合的(線5)，但在各自更高濃度時生長達到一個平臺水平(線6、8、9)。
圖7D進一步顯示了對6-硫代鳥嘌呤作用的研究。AF-1刺激的生長完全被6-TG(10μM)阻斷并且在NBTI(N，20μM)和/或潘生丁(D，10μM)(抑制肌苷活性的嘌呤轉(zhuǎn)運阻斷劑抑制劑)的存在下沒有恢復(fù)。6-TG的抑制作用與兩種還原劑α-生育酚(α-toc，30μM)或者谷胱甘肽α-甲基酯(MEG，100μM)不同。
圖8描述嘌呤對大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的影響(定量研究)。CNTF所刺激的生長被6-TG(10mM)抑制但通過加入25μM肌苷得到完全恢復(fù)。與對照相比具有顯著性差異*p=0.03；***p＜0.001。結(jié)果由3次獨立的研究匯總。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)神經(jīng)元，特別是哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的軸突突出生長的方法。本發(fā)明至少部分基于發(fā)現(xiàn)某些嘌呤核苷(如，肌苷和鳥苷)及其類似物誘導(dǎo)刺激金魚及哺乳動物視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的軸突突出生長(分別參見實施例Ⅰ和Ⅺ)。
本發(fā)明至少部分也基于發(fā)現(xiàn)其它嘌呤核苷如腺苷及其類似物誘導(dǎo)抑制視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的軸突突出生長(參見實施例Ⅹ)。如實施例Ⅱ所示，嘌呤核苷比相應(yīng)核苷酸更具活性，并且他們通過細胞內(nèi)途徑發(fā)揮其作用(參見實施例Ⅵ)。而且，腺苷通過脫氨作用(如通過內(nèi)源性腺苷脫氨酶)轉(zhuǎn)化為肌苷導(dǎo)致刺激軸突生長，而腺苷脫氨作用的阻斷導(dǎo)致抑制軸突突出生長(參見實施例Ⅳ)。再者，嘌呤核苷或其類似物對軸突突出生長的這種作用不需要其它神經(jīng)生長調(diào)節(jié)劑(如神經(jīng)生長因子)的存在。
因此，本發(fā)明調(diào)節(jié)CNS神經(jīng)元軸突突出生長的方法通常包括將中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元與嘌呤核苷或其類似物接觸以便調(diào)節(jié)軸突突出生長。
在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的方法用于刺激(如，使用肌苷或鳥苷)損傷如，中風(fēng)、腦外傷、大腦動脈瘤或脊髓損傷后中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的軸突突出生長。
在其它優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的方法用于抑制(如，使用6-硫代鳥嘌呤)神經(jīng)增殖疾病如產(chǎn)生異常的或過度的軸突突出生長的疾病，如癲癇或神經(jīng)病性疼痛疾病中CNS神經(jīng)元的軸突突出生長。觀察到在癲癇病人，如外傷后的癲癇病人中，錐體神經(jīng)元損傷的軸突的長芽導(dǎo)致形成過度再生的刺激性突觸和興奮過度的神經(jīng)網(wǎng)狀物(參見Prince D.A.等人(1997)Nature Medicine 3957-958；和MckinneyR.A.等人(1997)Nature Medicine 3990-996)。而且，神經(jīng)病性疼痛綜合征與不理想的神經(jīng)末端長芽有關(guān)(例如，描述在Woolf C.J.等人(1983)Nature 306686-688)。
本文所使用的語言“調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的軸突突出生長”打算包括刺激或抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的軸突生長到各種水平(如允許靶向CNS損傷治療的水平)的能力。
本文所使用的術(shù)語“突出生長”(即，軸突突出生長)是指軸突長出CNS神經(jīng)元的過程。突出生長可導(dǎo)致完全新的軸突或修復(fù)部分損傷的軸突。突出生長通常由長度上延伸至少5個細胞直徑的軸突生長過程來表明。而且，軸突突出生長可由GAP-43的表達來表明(例如可通過免疫染色來檢測)。
本文所使用的術(shù)語“CNS神經(jīng)元”打算包括不對神經(jīng)生長因子(NGF)產(chǎn)生反應(yīng)的腦和脊髓的神經(jīng)元。該術(shù)語不打算包括支持或保護細胞如星形細胞、少突神經(jīng)膠質(zhì)細胞(oligodentrocytes)、小神經(jīng)膠質(zhì)細胞、室管膜等，也不打算包括外周神經(jīng)系統(tǒng)(如，軀體的、自律的、交感的或副交感的神經(jīng)系統(tǒng))的神經(jīng)元。優(yōu)選的CNS神經(jīng)元是哺乳動物神經(jīng)元，更優(yōu)選的是人的神經(jīng)元。
本文所使用的語言“接觸”打算包括將嘌呤核苷或其類似物引入CNS神經(jīng)元的近端使得嘌呤核苷或其類似物可調(diào)節(jié)所述CNS神經(jīng)元的軸突突出生長過程的體內(nèi)或體外方法。
本文所使用的語言“嘌呤核苷”在本領(lǐng)域是已知的并且打算包括任何連接糖的嘌呤堿或其類似物。例如，嘌呤核苷包括鳥苷、肌苷或腺苷和類似物包括6-硫代鳥嘌呤(6-TG)等。本文所使用的嘌呤核苷“類似物”指保留有功能活性所需的嘌呤核苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)如連接糖的嘌呤環(huán)，但也含有某些在天然產(chǎn)生的嘌呤核苷中未發(fā)現(xiàn)的化學(xué)結(jié)構(gòu)如修飾的側(cè)基(如，硫-或氯-基)的化合物。
在一個具體實施方案中，優(yōu)選使用肌苷或鳥苷或其類似物來刺激CNS神經(jīng)元的軸突突出生長。在另一具體實施方案中，優(yōu)選使用6-硫代鳥嘌呤來抑制CNS神經(jīng)元的軸突突出生長。腺苷起抑制性嘌呤核苷的作用，但通過腺苷脫氨酶被轉(zhuǎn)化為肌苷，肌苷是刺激性嘌呤核苷。因此，腺苷在脫氨轉(zhuǎn)化為肌苷(如，在內(nèi)源性腺苷脫氨酶活性存在下)后可用作刺激性嘌呤核苷。另外，腺苷脫氨酶活性被阻斷時，腺苷可用作刺激性嘌呤核苷。腺苷類似物，2-氯腺苷也可用作抑制性核苷，盡管它的其它作用如A1、A2和/或A3受體可使它很少優(yōu)選在體內(nèi)使用。
本發(fā)明也提供刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元損傷后突出生長的方法。該方法包括給予受治療者嘌呤核苷(如，肌苷或鳥苷)或其類似物。
本文所使用的術(shù)語“受治療者”打算包括易于CNS損傷的動物，優(yōu)選哺乳動物，最優(yōu)選人。在優(yōu)選的具體實施方案中，受治療者是靈長目動物。在更優(yōu)選的具體實施方案中，靈長目動物是人。受治療者的其它實例包括狗、貓、山羊和牛。
本文所使用的術(shù)語“損傷”打算包括直接或間接影響CNS正常功能的損害。例如，損傷可以是對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的損害；腦外傷；與中風(fēng)有關(guān)的損傷；與大腦動脈瘤相關(guān)的損傷；脊髓損傷，包括單癱、雙癱、截癱、偏癱和四肢癱；神經(jīng)增殖疾??；癲癇，如外傷后腦損傷；或神經(jīng)病性疼痛綜合征。
本文所使用的術(shù)語“中風(fēng)”在本領(lǐng)域中是已知的并且打算包括因興奮或腦動脈梗阻(如，血栓引起的)導(dǎo)致突然減低或喪失意識、感覺和遂意運動。
本文使用的術(shù)語“腦外傷”在本領(lǐng)域中是已知的并且打算包括外部毆打頭引起的腦或相連脊髓損害，但常常沒有滲透到腦外殼的疾病。一般來說，起初的外傷可導(dǎo)致擴張的血腫、蛛網(wǎng)膜下出血、大腦水腫、升高的顱內(nèi)壓(ICP)和大腦低氧癥，這又可因低大腦血流(CBF)而導(dǎo)致嚴重的繼發(fā)事件。可藥用制劑在本發(fā)明的方法中，嘌呤核苷或其類似物可以可藥用制劑的形式給藥。這種可藥用制劑通常包括嘌呤核苷或其類似物以及可藥用載體和/或賦形劑。本文使用的“可藥用載體”包括生理相容的任何和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣材料、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。例如，載體適于注射到腦脊液中。賦形劑包括可藥用穩(wěn)定劑和崩解劑。本發(fā)明涉及任何可藥用制劑，包括大分子復(fù)合物、毫微膠囊、微球或珠粒形式的合成或天然聚合物，和基于類脂的制劑包括水包油型乳劑、微膠粒、混合的微膠粒、合成的膜泡和再密封的紅細胞。
在一個具體的實施方案中，可藥用制劑包含聚合物基料。
術(shù)語“聚合物”或“聚合的”在本領(lǐng)域中是已知的并且包括由重復(fù)的單體單位構(gòu)成的結(jié)構(gòu)骨架，它能夠釋放嘌呤核苷或其類似物以便治療靶向疾病，如CNS損傷。該術(shù)語也包括共聚物和均聚物如合成或天然產(chǎn)生的。也包括線性聚合物、分枝聚合物和交聯(lián)聚合物。
例如，適于形成本發(fā)明中使用的可藥用制劑的聚合物材料包括天然衍生的聚合物如白蛋白、藻酸鹽、纖維素衍生物、膠原、纖維蛋白、明膠和多糖，以及合成的聚合物如聚酯(PLA、PLGA)、聚乙二醇、泊咯沙姆、聚酐和pluronics。這些聚合物與神經(jīng)系統(tǒng)包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)是生物相容的，它們在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中可生物降解而沒有因降解產(chǎn)生任何毒性副產(chǎn)物，并且它們具有通過控制聚合物的動力學(xué)特性改善嘌呤核苷釋放的方式和持續(xù)時間的能力。本文所使用的術(shù)語“可生物降解”意指聚合物將隨時間而通過酶的作用，通過水解作用和/或通過其它類似機理在受治療者的體內(nèi)降解。本文所使用的術(shù)語“生物相容的”意指聚合物與活組織或活器官相容，不具有毒性或產(chǎn)生損傷并且不引起免疫排斥。
聚合物可使用本領(lǐng)域已知的方法來制備(Sandler，S.R.；Karo，W.Polymer Syntheses；Harcourt BraceBoston，1994；Shalaby，W.；Ikada，Y.；Langer，R.；Williams，J.Polymers of Biologicaland Biomedical Significance(ACS Symposium Series 540；American Chemical SocietyWashington，DC，1994))。聚合物可設(shè)計為可塑性的；可控制生物活性側(cè)鏈之間的距離和聚合物骨架和基團之間的接頭長度。其它合適的聚合物及其制備方法描述在美國專利5455044和5576018中，其內(nèi)容引入本文供參考。
聚合物制劑可按照美國專利4883666中描述的方法通過在液化的聚合物中分散嘌呤核苷來制備，該文獻的教導(dǎo)內(nèi)容引入本文供參考，或者按照Odian G.，Principles of Polymerization and ringopening polymerization，第二版，John Wiley & Sons，NewYork，1981所述方法來批量聚合、界面聚合、溶液聚合和環(huán)聚合，其內(nèi)容引入本文供參考。制劑的性質(zhì)和特點通過改變反應(yīng)溫度、聚合物和嘌呤核苷的濃度、所使用的溶劑的類型和反應(yīng)時間等參數(shù)來控制。
嘌呤核苷或其類似物可包囊在一種或多種可藥用聚合物中來形成微囊、微球或微粒，這些術(shù)語在本文中可以互換。微囊、微球和微粒通常是自由流動的粉末，由2毫米或更小直徑，通常為500微米或更小直徑的球狀顆粒構(gòu)成。小于1微米的顆粒通常稱作毫微膠囊、毫微顆?；蚝廖⑶颉Ｎ⒛液秃廖⒛z囊、微球和毫微球或者微粒和毫微顆粒之間的最主要的區(qū)別是大小；通常兩類產(chǎn)品的內(nèi)部結(jié)構(gòu)之間的區(qū)別如果有的話也很小。在本發(fā)明中，平均直徑約小于45μm，優(yōu)選小于20μm，更優(yōu)選在約0.1到10μm之間。
在另一實施方案中，可藥用制劑包含基于類脂的制劑。任何已知的基于類脂的藥物釋放系統(tǒng)均可用于本發(fā)明的實施。例如，多泡脂質(zhì)體(MVL)、多層脂質(zhì)體(也稱作多層泡或“MLV”)、單層脂質(zhì)體，包括小的單層脂質(zhì)體(也稱作單層泡或“SUV”)和大的單層脂質(zhì)體(也稱作大的單層泡或“LUV”)均可使用，只要其能夠產(chǎn)生持續(xù)釋放速度的包囊的嘌呤核苷或其類似物。在一個實施方案中，基于類脂的制劑是多泡脂質(zhì)體系統(tǒng)。在PCT申請?zhí)朥S96/11642，US94/12957和US94/04490中描述了制備控制釋放的多泡脂質(zhì)體藥物釋放系統(tǒng)的方法，這些內(nèi)容引入本文供參考。
合成膜泡組合物通常為磷脂與甾類，特別是膽固醇的組合物。其它磷脂或其它類脂都可以使用。
產(chǎn)生合成膜泡可使用的類脂的實例包括磷脂酰甘油、磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺、鞘脂、腦苷脂類和神經(jīng)節(jié)苷脂。優(yōu)選使用的磷脂包括卵磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰甘油和二油酰磷脂酰甘油。
在制備含有嘌呤核苷或其類似物的類脂泡時，應(yīng)當考慮下列因素嘌呤核苷包囊率、嘌呤核苷的易變性、所得微泡群體的均勻度和大小、嘌呤核苷與類脂的配比、滲透性、制劑的不穩(wěn)定性和制劑的可藥用性(參見Szoka等人，Annual Reviews of Biophysics andBioengineering，9∶467，1980；Deamer等人，in Liposomes，MarcelDekker，New York，1983，27；和Hope等人，Chem.Phys.Lipids，40∶89，1986，其內(nèi)容引入本文供參考)。可藥用制劑的給藥本發(fā)明可藥用制劑被給藥使得嘌呤核苷或其類似物與中樞神經(jīng)系統(tǒng)接觸并由此調(diào)節(jié)其軸突生長。本發(fā)明預(yù)計制劑可局部和系統(tǒng)給藥，盡管局部給藥是優(yōu)選的，可實現(xiàn)嘌呤核苷或其類似物的有效局部濃度并避免因系統(tǒng)給予藥物可能產(chǎn)生的副作用。在一個實施方案中，嘌呤核苷或其類似物通過引入受治療者的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，如引入受治療者的腦脊液中給藥。在本發(fā)明的某些方面，嘌呤核苷或其類似物可經(jīng)鞘內(nèi)引入到，如腦室、腰椎區(qū)、或小腦延髓池中。在另一方面，嘌呤核苷或其類似物經(jīng)眼內(nèi)引入，由此與視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞接觸。
可藥用制劑易于被懸浮在含水載體中并通過常規(guī)的皮下注射針或使用輸入泵來引入。引入之前，制劑可優(yōu)選用美國專利436742中描述的γ-射線或電子束滅菌法滅菌，文獻的內(nèi)容引入本文供參考。
在一個實施方案中，本文所述的嘌呤核苷制劑在損傷到損傷發(fā)生后大約100小時的時間內(nèi)給予受治療者，例如在損傷后的24、12或6小時給藥。
在本發(fā)明的另一實施方案中，嘌呤核苷制劑經(jīng)鞘內(nèi)給予受治療者。本文所使用的術(shù)語“鞘內(nèi)給藥”打算包括將嘌呤核苷制劑直接釋放到受治療者的腦脊液中，是通過包括經(jīng)鉆孔或小腦延髓池或腰穿刺等注射到后腦室的技術(shù)來進行的(在Lazorthes等人，Advances inDrug Delivery Systems and Applications inNeurosurgery，143-192和Omaya等人，Cancer Drug Delivery，1169-179，這些文獻的內(nèi)容引入本文供參考)。術(shù)語“腰區(qū)”打算包括第3和第4腰(下端背部)椎骨之間的區(qū)域。術(shù)語“小腦延髓池”打算包括腦后頭顱末端和脊髓開始之間的區(qū)域。術(shù)語“腦室”打算包括與脊髓中心腔連接的腦腔。通過直接注射嘌呤核苷制劑或通過使用輸入泵可實現(xiàn)將嘌呤核苷給予上述任何部位。為了注射，本發(fā)明的嘌呤核苷制劑可配制成液體溶液，優(yōu)選用生理相容的緩沖液如Hank’s溶液或林格溶液。另外，嘌呤核苷制劑可配制成固體形式并且在使用之前重新溶解或懸浮。也包括凍干形式。注射例如可以是嘌呤核苷制劑的快速濃注或連續(xù)輸注(例如，使用輸入泵)形式。
在本發(fā)明的一個實施方案中，嘌呤核苷制劑經(jīng)后腦室注射給予受治療者的腦中，優(yōu)選在損傷發(fā)生后的100小時之內(nèi)(例如，損傷的6、12或24小時之內(nèi))。例如，注射可通過受治療者的頭顱上的鉆孔來進行。在另一實施方案中，制劑通過外科插管在受治療者的腦室中來給藥，優(yōu)選在損傷發(fā)生后的100小時之內(nèi)(例如，損傷的6、12或24小時之內(nèi))給藥。例如，可注射到較大的后腦室中，甚至也可注射到第3和第4小室中。再一實施方案中，嘌呤核苷制劑通過注射到受治療者的小腦延髓池或腰區(qū)來給藥，優(yōu)選在損傷發(fā)生后的100小時之內(nèi)(例如，損傷的6、12或24小時之內(nèi))給藥。給藥持續(xù)時間和水平在本發(fā)明方法的優(yōu)選實施方案中，將嘌呤核苷或其類似物與CNS神經(jīng)元長時間接觸來產(chǎn)生調(diào)節(jié)軸突突出生長的作用。與嘌呤核苷或其類似物的持續(xù)接觸例如可通過在一段時間內(nèi)，如一周、幾周、一個月或更長時間反復(fù)給予嘌呤核苷或類似物來實現(xiàn)。更優(yōu)選地，用于給予嘌呤核苷或其類似物的可藥用制劑可使嘌呤核苷或其類似物持續(xù)釋放，如“緩慢釋放”給受治療者。例如，可藥用制劑給予受治療者后，制劑可釋放嘌呤核苷或其類似物至少一、二、三或四周。優(yōu)選地，本發(fā)明被治療者用嘌呤核苷或其類似物治療至少30天(或者通過反復(fù)給藥或者使用持續(xù)釋放系統(tǒng)，或者兩種方式同時使用)。
本文使用的術(shù)語“持續(xù)釋放”打算包括在給藥后的一段時間內(nèi)在體內(nèi)連續(xù)釋放嘌呤核苷或其類似物，優(yōu)選至少幾天、一周、幾周、一個月或更長時間。嘌呤核苷或其類似物的持續(xù)釋放例如可通過嘌呤核苷或其類似物在一段時間內(nèi)的持續(xù)治療作用來證明(如，嘌呤核苷或其類似物的持續(xù)釋放可通過CNS神經(jīng)元在一段時間內(nèi)持續(xù)突出生長或突出生長持續(xù)抑制來證明)。另外，嘌呤核苷或其類似物的持續(xù)釋放可通過檢測嘌呤核苷或其類似物在體內(nèi)存在一段時間來證明。
持續(xù)釋放的優(yōu)選方法包括使用聚合物膠囊或小泵來釋放制劑。聚合物膠囊按上文所述方法來制備。在本領(lǐng)域可得到可植入的輸入泵系統(tǒng)(例如，Infusaid；如參見，Zierski，J.等人(1988)ActaNeurochem.增刊4394-99；Kanoff，R.B.(1994)J.Am.Osteopath.Assoc.94487-493)和滲透泵(由Alza Corporation出售)。另一種給藥模式是通過可植入的外部可操作的輸入泵來進行。合適的輸入泵系統(tǒng)和儲藥庫系統(tǒng)在Blomquist的美國專利5368562和Doan的美國專利4731058中也進行了描述，是由Pharmacia Deltec Inc.開發(fā)的。
本發(fā)明方法使用的藥物制劑含有治療有效量的嘌呤核苷或其類似物?！爸委熡行Я俊敝冈趧┝可虾退璧臅r間期限上來說實現(xiàn)所需結(jié)果有效的量。嘌呤核苷或其類似物的治療有效量可隨各種因素來變化，如受治療者疾病的狀態(tài)、年齡和體重，以及嘌呤核苷或其類似物(單獨或與一種或多種其它治療劑組合的)在受治療者中產(chǎn)生所需反應(yīng)的能力。劑量方案可被調(diào)節(jié)以產(chǎn)生最佳的治療效果。治療有效量也是有益的治療作用超過嘌呤核苷或其類似物的任何毒性或有害的作用時的劑量。非限定的劑量范圍為約5μM-1000μM，盡管具體最佳的劑量會根據(jù)其它因素，所使用的具體嘌呤核苷或其類似物進行改變。
通過肌苷實現(xiàn)刺激軸突突出生長作用時，治療有效濃度的非限定的范圍為5μM-1000μM，更優(yōu)選10μM-500μM。甚至更優(yōu)選地，與CNS神經(jīng)元接觸的肌苷的局部濃度約為25μM。
通過鳥苷實現(xiàn)刺激軸突突出生長時，治療有效濃度的非限定范圍為5μM-1000μM，更優(yōu)選10μM-500μM。甚至更優(yōu)選地，與CNS神經(jīng)元接觸的鳥苷的局部濃度均為100μM。
通過6-硫代鳥嘌呤實現(xiàn)對軸突突出生長的抑制作用時，與CNS神經(jīng)元接觸的6-硫代鳥嘌呤的局部濃度優(yōu)選為50μM或更低?？墒褂孟鄬^高劑量的腺苷來抑制軸突突出生長，如，高于5mM(以便抑制其轉(zhuǎn)化為肌苷)。然而，在此濃度下，腺苷可變得有毒。因此，優(yōu)選腺苷類似物如6-硫代鳥嘌呤給予哺乳動物受治療者來抑制軸突生長。
應(yīng)當注意劑量值可根據(jù)欲被減輕的疾病的嚴重性來改變。還知道對于任何特定受治療者來說，具體劑量方案應(yīng)當根據(jù)個體需要和專家對給予嘌呤核苷或其類似物的個體的判斷隨時間來調(diào)整并且本文所述的劑量范圍僅僅是例舉性的并且不打算限定本發(fā)明要求保護的范圍或操作。
在另一實施方案中，本發(fā)明提供一種藥物組合物，基本上由嘌呤核苷或其類似物(如，肌苷、鳥苷、6-硫代鳥嘌呤)和可藥用載體組成，也提供通過將組合物與CNS神經(jīng)元接觸來調(diào)節(jié)軸突突出生長的方法。術(shù)語“基本上由……組成”意指不含任何其它神經(jīng)元生長調(diào)節(jié)劑如神經(jīng)生長因子(NGF)的藥物組合物。在一個實施方案中，本發(fā)明藥物組合物可作為包裝制劑來提供。包裝的制劑可包括在容器中的本發(fā)明藥物組合物并且印有給予組合物治療患有與中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元損傷如視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞損傷、脊髓損傷或腦外傷有關(guān)的疾病的使用說明書。本發(fā)明也包括使用本發(fā)明的嘌呤核苷及其類似物制備調(diào)節(jié)CNS神經(jīng)元(如，哺乳動物CNS神經(jīng)元)突出生長的藥物。CNS神經(jīng)元的體外治療還可以將CNS神經(jīng)元與嘌呤核苷或其類似物在體外接觸來體外調(diào)節(jié)軸突的突出生長。因此，可以從受治療者中分離CNS神經(jīng)元細胞并使用本領(lǐng)域公知的技術(shù)使其在體外生長，然后按本發(fā)明方法進行處理以調(diào)節(jié)軸突突出生長。簡而言之，通過使神經(jīng)元細胞移出神經(jīng)組織片段粘合到合適的底物上(如，培養(yǎng)皿)或者通過使組織解聚如通過機械解聚或酶解產(chǎn)生CNS神經(jīng)元細胞懸浮液而沒到神經(jīng)元細胞培養(yǎng)物。例如，可以使用胰蛋白酶、膠原酶、彈性蛋白酶、透明質(zhì)酸酶、DNA酶、鏈霉蛋白酶、分散酶或其各種組合物。胰蛋白酶和鏈酶蛋白酶產(chǎn)生最完全的解聚但可破壞細胞。膠原酶和分散酶產(chǎn)生非常不完全的解聚但損傷很少。在Freshney R.I.，Cultrue of Animal Cells，A Manual of Basic Technique，第三版，1994中描述了分離組織(如，神經(jīng)組織)和解聚組織以獲得細胞(如，CNS神經(jīng)元細胞)的方法，該文獻的內(nèi)容引入本文供參考。
然后將這些細胞與一定量的嘌呤核苷或其類似物接觸上文所述的一段時間。一旦在CNS神經(jīng)元細胞中實現(xiàn)對軸突突出生長的調(diào)節(jié)，這些細胞如通過植入再給予受治療者。
通過下列實施例來進一步舉例說明本發(fā)明，這些實施例不對本發(fā)明構(gòu)成限定。在本申請中引用的所有參考文獻、專利和公開的專利申請的內(nèi)容均引入本文供參考。
與L-15治療的對照組相比，AF-1、肌苷和鳥苷均引起GAP-43水平的大幅增加。通過按0(無)、1(中等)或2(強)記錄GAP-43免疫反應(yīng)的水平和通過L-15、肌苷或AF-1處理的150-200細胞中染色強度與細胞軸突的長度之間的關(guān)系來進行半定量分析。與L-15相比，肌苷在強染色細胞的數(shù)目上增加5.5倍，而AF-1增加8倍。在所有3種情況下，GAP-43免疫染色的強度與軸突長度非常相關(guān)。實施例6-硫代鳥嘌呤(6-TG)對軸突突出生長的阻斷在金魚RGCs中，10μM的6-TG阻斷AF-1刺激的所有生長(參見圖7A，線2)，但對細胞存活沒有影響(參見圖7B)。相同濃度的6-TG對25μM肌苷刺激的生長僅僅減少50％(參見7A，線3和4)，并且對100μM肌苷或100μM鳥苷刺激的生長沒有影響(參見圖7A，線5-8)。在10μM6-TG存在下，100μM的肌苷完全使AF-1誘導(dǎo)的生長恢復(fù)到其原來的水平，明顯高于由肌苷單獨誘導(dǎo)的生長水平(參見圖7A，線10比6)。所以，肌苷和6-TG似乎在細胞內(nèi)信號水平以競爭方式起作用，這種信號也被AF-1利用來刺激突出生長。而且兩種物質(zhì)以其EC50水平組合時，他們顯示加合作用，然而在飽和濃度時，生長飽和在單獨高AF-1水平刺激的水平，這種觀察證明肌苷可激活A(yù)F-1信號所利用的相同途徑(參見圖7C，線9)。因為6-TG具有游離的巰基，它可用作還原劑而不是嘌呤類似物。但，其它兩種還原劑，30μM的α-生育酚或100μM谷胱甘肽α-甲基酯(MEG)對AF-1刺激的突出生長沒有影響(參見圖7D)。另一種可能性是肌苷可能通過干擾其轉(zhuǎn)運進入細胞來阻斷6-TG對突出生長的抑制作用。然而，兩種阻斷肌苷活性的轉(zhuǎn)運抑制劑，NBTI和潘生丁不能阻止6-TG阻斷AF-1刺激的突出生長(參見圖7D)。實施例Ⅺ哺乳動物視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞對肌苷產(chǎn)生延伸軸突的反應(yīng)按Barres等人在Neuron，1791-803，1988中描述的方法通過免疫淘選從8天齡大鼠中分離視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞，所述文獻的內(nèi)容引入本文供參考，并使其在特定培養(yǎng)基中生長。25或50μM的肌苷刺激細胞數(shù)目增加50％，使軸突長度延伸5個細胞直徑(參見圖8)。睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)在突出生長方面誘導(dǎo)多的多的增加(參見圖8)并且增加細胞存活。在10μM時，6-TG阻斷CNTF誘導(dǎo)的突出生長。加入50μM的肌苷使CNTF誘導(dǎo)的突出生長恢復(fù)到近似其原來水平(參見圖8)。等同替換本領(lǐng)域技術(shù)人員會意識到或者能夠利用至多是常規(guī)實驗確定許多等同替換物用于本文所描述的本發(fā)明的具體實施方案。這些等同替換打算包括在下列權(quán)利要求書所述的范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元軸突突出生長的方法，該方法包括將中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元與藥物組合物接觸，所述藥物組合物基本上由有效量的嘌呤核苷或其類似物組成，從而調(diào)節(jié)軸突的突出生長。
2.權(quán)利要求1的方法，其中刺激了突出生長。
3.權(quán)利要求2的方法，其中嘌呤核苷是肌苷。
4.權(quán)利要求2的方法，其中嘌呤核苷是鳥苷。
5.權(quán)利要求1的方法，其中抑制了突出生長。
6.權(quán)利要求5的方法，其中嘌呤核苷是6-硫代鳥嘌呤。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元是哺乳動物的。
8.一種刺激損傷后中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的軸突突出生長的方法，包括給予受治療者嘌呤核苷或其類似物，從而刺激軸突的突出生長。
9.權(quán)利要求8的方法，其中損傷是由于中風(fēng)發(fā)作。
10.權(quán)利要求8的方法，其中損傷是由于腦外傷(TBI)發(fā)生。
11.權(quán)利要求8的方法，其中損傷是由于腦動脈瘤。
12.權(quán)利要求8的方法，其中損傷是脊髓損傷。
13.權(quán)利要求12的方法，其中脊髓損傷選自單癱、雙癱、截癱、偏癱和四肢癱。
14.權(quán)利要求8的方法，其中嘌呤核苷是肌苷。
15.權(quán)利要求8的方法，其中嘌呤核苷是鳥苷。
16.權(quán)利要求14的方法，其中與中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元接觸的肌苷濃度大約為25μM。
17.權(quán)利要求14的方法，其中以5μM-1000μM的濃度給予肌苷。
18.權(quán)利要求14的方法，其中以10μM-500μM的濃度給予肌苷。
19.權(quán)利要求15的方法，其中與中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元接觸的鳥苷濃度大約為100μM。
20.權(quán)利要求15的方法，其中以5μM-1000μM的濃度給予鳥苷。
21.權(quán)利要求15的方法，其中以10μM-500μM的濃度給予鳥苷。
22.一種在遭受或者易于遭受以增加中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的軸突突出生長為特征的疾病的受治療者中抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元軸突突出生長的方法，包括給予所述受治療者嘌呤核苷或其類似物，從而抑制軸突突出生長。
23.權(quán)利要求22的方法，其中所述疾病是癲癇。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述的癲癇是腦外傷后的癲癇。
25.權(quán)利要求22的方法，其中所述疾病是神經(jīng)病性疼痛綜合征。
26.權(quán)利要求22的方法，其中嘌呤核苷或其類似物是6-硫代鳥嘌呤。
27.權(quán)利要求26的方法，其中與中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元接觸的6-硫代鳥嘌呤濃度約為50μM。
28.權(quán)利要求1、8、或22的方法，其中嘌呤核苷或其類似物通過引入受治療者的中樞神經(jīng)系統(tǒng)來給藥。
29.權(quán)利要求1、8、或22的方法，其中嘌呤核苷或其類似物被引入受治療者的腦脊液中。
30.權(quán)利要求1、8、或22的方法，其中嘌呤核苷或其類似物經(jīng)鞘內(nèi)引入。
31.權(quán)利要求1、8、或22的方法，其中嘌呤核苷或其類似物被引入腦室中。
32.權(quán)利要求1、8、或22的方法，其中嘌呤核苷或其類似物被引入腰區(qū)中。
33.權(quán)利要求1、8、或22的方法，其中嘌呤核苷或其類似物被引入小腦延髓池中。
34.權(quán)利要求1、8、或22的方法，其中嘌呤核苷或其類似物以可藥用制劑的形式給藥。
35.權(quán)利要求34的方法，其中可藥用制劑為分散系統(tǒng)。
36.權(quán)利要求34的方法，其中可藥用制劑包括基于類脂的制劑。
37.權(quán)利要求34的方法，其中可藥用制劑包括脂質(zhì)體制劑。
38.權(quán)利要求34的方法，其中可藥用制劑包括多泡脂質(zhì)體制劑。
39.權(quán)利要求34的方法，其中可藥用制劑包括聚合物基料。
40.權(quán)利要求34的方法，其中可藥用制劑被裝在小泵中。
41.權(quán)利要求34的方法，其中可藥用制劑使嘌呤核苷或其類似物持續(xù)釋放給受治療者，在將可藥用制劑給予受治療者之后，持續(xù)釋放至少一周。
42.權(quán)利要求34的方法，其中可藥用制劑使嘌呤核苷或其類似物持續(xù)釋放給受治療者，在將可藥用制劑給予受治療者之后，持續(xù)釋放至少一個月。
43.權(quán)利要求1、8、或22的方法，其中受治療者是哺乳動物。
44.權(quán)利要求43的方法，其中哺乳動物為人。
45.權(quán)利要求1、8、或22的方法，其中中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元是視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞。
46.嘌呤核苷或其類似物在制備用于調(diào)節(jié)哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的軸突突出生長的藥物中的應(yīng)用。
47.權(quán)利要求46的用途，其中嘌呤核苷是肌苷。
48.權(quán)利要求46的用途，其中嘌呤核苷是鳥苷。
49.權(quán)利要求46的用途，其中嘌呤核苷是6-硫代鳥嘌呤。
50.權(quán)利要求46-49的用途，其中藥物除含有嘌呤核苷或其類似物外不含有任何其它神經(jīng)生長調(diào)節(jié)劑。
51.權(quán)利要求46-49的用途，其中藥物適于給予選自受治療者中樞神經(jīng)系統(tǒng)、腦脊液、鞘內(nèi)、腦室、腰區(qū)和小腦延髓池的部位。
52.權(quán)利要求47的用途，其中肌苷約以25μM的濃度存在。
53.權(quán)利要求48的用途，其中鳥苷約以100μM的濃度存在。
54.權(quán)利要求49的用途，其中6-硫代鳥嘌呤約以50μM的濃度存在。
55.權(quán)利要求46-49的用途，其中藥物在受治療者中持續(xù)釋放嘌呤核苷或其類似物。
56.權(quán)利要求46的用途，其中藥物刺激軸突突出生長。
57.權(quán)利要求56的用途，其中藥物適于治療損傷，所述損傷選自中風(fēng)發(fā)作致?lián)p傷、腦外傷(TBI)致?lián)p傷、腦動脈瘤致?lián)p傷和脊髓損傷。
58.權(quán)利要求46的用途，其中藥物抑制軸突突出生長。
59.權(quán)利要求58的用途，其中藥物適于治療選自癲癇、外傷后癲癇和神經(jīng)病性疼痛綜合征的疾病。
60.一種包裝制劑，它包含含有肌苷和可藥用載體的藥物組合物并包裝有該藥物組合物用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的說明書。
61.一種包裝制劑，它包含含有鳥苷和可藥用載體的藥物組合物并包裝有該藥物組合物用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的說明書。
62.一種包裝制劑，它包含含有6-硫代鳥嘌呤和可藥用載體的藥物組合物并包裝有該藥物組合物用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的說明書。
全文摘要
提供了調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的軸突突出生長的方法和組合物。也提供了刺激損傷(如,中風(fēng)、腦外傷、腦動脈瘤、脊髓損傷等)后中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的軸突突出生長的方法和抑制疾病例如癲癇,如外傷后癲癇和神經(jīng)病性疼痛綜合征中中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的軸突突出生長的方法。這些方法通常包括使中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元與嘌呤核苷或其類似物接觸。優(yōu)選地,使用肌苷或鳥苷來刺激軸突突出生長并使用6－硫代鳥嘌呤來抑制軸突突出生長。本發(fā)明的方法和組合物對于調(diào)節(jié)哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元如哺乳動物視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的軸突突出生長是特別有用的。也提供了含有本發(fā)明嘌呤核苷及其類似物的藥物制劑和包裝制劑。
文檔編號A61K31/708GK1286632SQ9881080
公開日2001年3月7日 申請日期1998年2月20日 優(yōu)先權(quán)日1997年9月2日
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