專利名稱：協(xié)同組合物和治療贅瘤或癌的生長(zhǎng)及恢復(fù)或提高血細(xì)胞生成的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及此項(xiàng)發(fā)明涉及用于治療人和動(dòng)物贅瘤或癌生長(zhǎng)及治療此類患者以使造血功能恢復(fù)或提高的一種組合物和方法。該發(fā)明所述組合物包括一種細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)組合物和一種能中和或減量調(diào)節(jié)腫瘤分泌免疫抑制因子活性的制劑的組合。
2．相關(guān)技術(shù)描述細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTLs)被認(rèn)為是對(duì)多種病毒性感染和贅瘤或癌生長(zhǎng)反應(yīng)的主要宿主機(jī)制(Greenberg等，Adv．Immunol．，49281-355(1991)；Baxevanis等，Crit．Rev．Oncol．-Hematol．，16157-79(1994)；Ward等，Biological Approaches to CancerTreatment，Biomodulation，pp．72-97，edited by M．S．Mitchel，New YorkMcGraw Hill，Inc．(1993))。這些細(xì)胞通過識(shí)別與被感染或被轉(zhuǎn)化細(xì)胞上多種分子(命名為I類MHC(大組織相容性復(fù)合物)分子)相結(jié)合的抗原片段來消除這些被感染或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞(Baxevanis等，Crit．Rev．Oncol．-Hematol．，16157-79(1994)；Matsumura等，Science，257927-34(1992)；Long等，Immunol．Today，10232-34(1989))。
在亞單位疫苗中使用可溶形式的腫瘤相關(guān)抗原(TAA)來刺激腫瘤特異性T細(xì)胞免疫是開發(fā)安全并且有效的癌免疫療法的一種理想策略。使用完整蛋白的優(yōu)點(diǎn)在于，在特定抗原呈遞細(xì)胞(APC)內(nèi)的抗原加工完成之后，即包含了肽潛在抗原決定部位的所有信息。但是由完整可溶性抗原所產(chǎn)生的免疫通常并不激活CTLs。因此，為了刺激CTL對(duì)特定蛋白抗原產(chǎn)生反應(yīng)，人們嘗試了多種旨在改善細(xì)胞內(nèi)抗原向APC傳送的方法。其中包括活病毒載體(Moss，B．，Science，2521662-67(1991)；Takahashi等，PNAS USA，853105-09(1988))和細(xì)菌載體(Aldovini等，Nature(London)，351479-482(1991)；Sadoff等，Science，240336-38(1988))、非復(fù)制型質(zhì)粒DNA接種(Ulmer等，Science，2591745-49(1993))、將蛋白和肽結(jié)合到親脂性復(fù)合物(Deres等，Nature(London)，342561-64(1989))或ISCOM(Takahashi等，Nature(London)，344873-75(1990))。使用病毒載體或DNA注射方法產(chǎn)生疫苗所擔(dān)心的主要是可能的DNA整合到與具備轉(zhuǎn)化潛力的癌基因顯著相關(guān)的宿主細(xì)胞基因組中以及誘導(dǎo)體內(nèi)產(chǎn)生抗載體反應(yīng)相關(guān)的安全性。此外，對(duì)免疫妥協(xié)的個(gè)體而言，使用與具有誘導(dǎo)免疫反應(yīng)最低毒性的適當(dāng)?shù)姆歉腥拘赃\(yùn)載系統(tǒng)結(jié)合的純化抗原是安全的。
Raychaudhuri等人發(fā)現(xiàn)一種通過它可在人類及馴養(yǎng)動(dòng)物或?qū)r(nóng)業(yè)有重要作用的牲畜體內(nèi)誘導(dǎo)CTL應(yīng)答并且在非感染性運(yùn)載系統(tǒng)中包括完整的可溶性蛋白的安全而又有益的組合物(美國(guó)專利號(hào)5，585，103)，其全文在此引作參考CTL誘導(dǎo)組合物涉及使用一種對(duì)動(dòng)物幾乎無毒或無毒，且不含其存在可降低預(yù)期應(yīng)答的免疫刺激性肽(如胞壁酰二肽)的抗原制劑。更明確而言，CTL誘導(dǎo)組合物(PROVAXTM)包含可使CTL產(chǎn)生預(yù)期應(yīng)答的抗原以及一種無毒抗原制劑，該抗原制劑包括、由或基本由一種穩(wěn)定化去污劑、一種微膠粒形成劑和一種可生物降解及生物相容性油脂組成。
但文獻(xiàn)顯示，腫瘤可通過分泌因子或細(xì)胞因子而逃避免疫監(jiān)視，這些因子或細(xì)胞因子對(duì)局部或全身存在的活化免疫細(xì)胞和前體免疫細(xì)胞兩者的功能均具有免疫抑制作用。因此，僅接受目的在于增強(qiáng)腫瘤免疫力的治療疫苗的癌癥患者或許將不能從這種疫苗中充分受益。
此外，由于維持健康骨髓所必需的干細(xì)胞和／或祖細(xì)胞的抑制，使癌癥患者的造血活性受到抑制，處于癌癥晚期的患者尤其如此。這種抑制由多種因素共同造成，其中包括用于癌癥治療的放療、化療以及可能由癌癥治療而被增量調(diào)節(jié)的諸如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGFβ)的免疫抑制因子，該因子屬于宿主正常腫瘤及生長(zhǎng)腫瘤均分泌的穩(wěn)定多肽生長(zhǎng)因子家族。
因此，鑒于此前已知的癌癥疫苗以及腫瘤治療方法所具有的上述缺陷，該領(lǐng)域顯然有必要尋找更有效的免疫治療方法和組合物。
發(fā)明概述該項(xiàng)申請(qǐng)的發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)CTL誘導(dǎo)疫苗與一種或多種能夠中和、拮抗、減量調(diào)節(jié)或阻斷TGFβ和IL-10等腫瘤分泌免疫抑制因子的制劑共同使用時(shí)，可通過誘導(dǎo)CTL反應(yīng)使旨在增強(qiáng)腫瘤免疫力的該疫苗的治療效果提高。
因此，該發(fā)明的目的之一是提供一種組合物，該組合物包含與一種或多種能夠中和、阻斷、拮抗或減量調(diào)節(jié)腫瘤分泌因子活性的制劑共同使用時(shí)誘導(dǎo)CTL的任何佐劑制劑。特別優(yōu)選的CTL誘導(dǎo)佐劑包括授權(quán)于Raychaudhuri等人美國(guó)專利號(hào)5，585，103所公開的TL誘導(dǎo)佐劑，該佐劑包括一種對(duì)其可誘導(dǎo)抗原特異性CTL反應(yīng)的抗原激動(dòng)劑及一種微流體化抗原制劑，所述抗原制劑包括(ⅰ)一種穩(wěn)定化去污劑，(ⅱ)一種微膠粒形成劑，以及(ⅲ)一種可生物降解及生物相容性油脂，進(jìn)一步而言，其中該抗原制劑不含免疫刺激性肽成分，并且配制成穩(wěn)定的水包油型乳劑。能夠中和、阻斷、拮抗或減量調(diào)節(jié)腫瘤分泌免疫抑制因子的制劑優(yōu)選包括抗-TGFβ抗體、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β受體融合蛋白(TGFβR-融合蛋白)、TGFβ拮抗劑如凝血栓蛋白肽、TGFβ結(jié)合蛋白和TGFβR阻斷抗體。
該發(fā)明的另一目的是提供一種包括誘導(dǎo)CTL反應(yīng)在內(nèi)的治療方法，其中的改進(jìn)包括使用一種誘導(dǎo)CTL反應(yīng)的佐劑及一種免疫抑制因子拮抗劑，優(yōu)選TGFβ拮抗劑，所述佐劑與拮抗劑可依次或按任意順序同時(shí)給藥。
該發(fā)明的又一目的是提供一種贅瘤或癌生長(zhǎng)的治療方法用于需要該種治療的患者。
該發(fā)明的另一目的是提供一種恢復(fù)或提高患者血細(xì)胞生成的方法。
由于該發(fā)明具有上述及其它下文要表明的目的、優(yōu)點(diǎn)和特征，參考下列發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述及附加的權(quán)利要求可更明確地了解本發(fā)明的本質(zhì)。
附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示卵清蛋白／PROVAXTM和／或抗-TGFβ抗體對(duì)已確定的EG7腫瘤治療的抗腫瘤活性。
圖2A及2B顯示E7／PROVAXTM和／或抗-TGFβ抗體對(duì)HOPE2細(xì)胞治療的抗腫瘤活性。
圖3A及3B顯示在無血清培養(yǎng)液(CHO-S SFM II，GIBCO，目錄號(hào)#91-0456)中37℃體外連續(xù)培養(yǎng)2天(EL4，EG7細(xì)胞)或5天(3T3，KB及A431細(xì)胞)后的不同細(xì)胞系所分泌的活化形式或潛伏形式TGFβ-1的評(píng)價(jià)水平。
圖4顯示小鼠抗-TGF-β1、β2、β3單克隆抗體(Genzyme公司目錄號(hào)#80-1835-03)與條件培養(yǎng)液中取自人A431細(xì)胞或鼠BALB／c3t3細(xì)胞的人或小鼠TGFβ的結(jié)合。
發(fā)明詳述如上所述，該申請(qǐng)的發(fā)明人意外發(fā)現(xiàn)，當(dāng)與一種或多種能夠中和或減量調(diào)節(jié)腫瘤分泌免疫抑制因子的制劑連同使用時(shí)，諸如CTL誘導(dǎo)佐劑等旨在增強(qiáng)腫瘤免疫力的疫苗的治療效果被提高。發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，這種結(jié)合導(dǎo)致協(xié)同增強(qiáng)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的反應(yīng)，從而導(dǎo)致提高的對(duì)諸如腫瘤的表達(dá)抗原的靶細(xì)胞的治療性反應(yīng)。此外，該發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，將一種或多種中和或減量調(diào)節(jié)腫瘤分泌免疫抑制因子的制劑與疫苗或佐劑結(jié)合使用有助于血細(xì)胞生成的恢復(fù)或提高。
腫瘤細(xì)胞為避免免疫破壞而分泌的可溶性抑制或免疫抑制因子或細(xì)胞因子包括，例如，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGFβ)(Mukherj等，Curr．Opin．Oncol．，7175(1995))、白細(xì)胞介素10(IL-10)(Huber等，J．Immunol．，148277(1992))、前列腺素(PGE2)(Huang等，J．Immunol．，1575512-20(1996))、免疫抑制酸性蛋白(IAP)(Yamaguchi等，Oncology，521-6(1995))和脂皮質(zhì)素-1(LC1)(Koseki等，Surg．Today，2730-39(1997))。對(duì)成神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤的研究表明TGFβ是一種腫瘤相關(guān)免疫抑制分子(Brooks等，J．Exp．Medicine，1361631-47(1972))。有充分證據(jù)表明TGFβ可由多種人類癌細(xì)胞產(chǎn)生，其中包括乳腺癌(Knabbe等，Cell，48417-28(1987))、前列腺癌(Ikeda等，Biochemistry，162406-10(1987))、結(jié)腸直腸癌(Coffey等，Cancer Res．，461164-69(1986))、子宮內(nèi)膜癌(Boyd等，Cancer Res．，503394-99(1990))及卵巢癌(Wilson等，P．R．Br．J．Cancer，63102-08(1991))。
最初識(shí)別TGFβ是通過其能夠使正常成纖維細(xì)胞出現(xiàn)一種轉(zhuǎn)化表型的能力，并發(fā)現(xiàn)實(shí)際上所有細(xì)胞均可產(chǎn)生該因子(Wakefield等，J．Cell．Biol．，105965-75(1987))。人體內(nèi)共發(fā)現(xiàn)三種不同亞型，TGFβ1、2和3。TGFβ是一種多效性細(xì)胞因子，其影響多種生物活性，包括免疫抑制、炎癥、血細(xì)胞生成及傷口修復(fù)(Sporn等，Science，233532(1986)；Pallidino等，Ann．NY Acad．Sci．，593181(1990)；Roberts等，Adv．Cancer Res．，51107(1988))。
這與TGFβ的強(qiáng)免疫抑制活性特異相關(guān)(Pallidino等，Ann．NYAcad．Sci．，593181(1990)；Roberts等，Adv．Cancer Res．，51107(1988)；Lucas等，J．Immunol．，1451415-22(1990))。TGFβ可通過抑制T細(xì)胞及B細(xì)胞增殖(Kehrl等，J．Exp．Med．，1631037(1986)；Kehrl等，J．Immunol．，1373855(1986)；Kehrl等，J．Immunol．，1431868(1989))、抑制LAK細(xì)胞／CTL產(chǎn)生(Mulé等，Cancer Immunol．Immunother．，269(1988)；Espevik等，J．Immunol．，1402312(1988)；Rook等，J．Immunol．，1363916(1986)；Ranges等，J．Exp．Med．，166991(1987)；Fontana等，J．Immunol．，143323(1989)；Susan等，J．Exp．Med．，1721777(1990)；Torre-Amione等，PNAS，871486(1990))及功能、抑制NK細(xì)胞活性(Rook等，J．Immunol．，1363916(1987)；Susan等，J．Exp．Med．，1721777(1990)；Torre-Amione等，PNAS，871486(1990))、抑制巨噬細(xì)胞氧代謝(Tsunawaki等，Nature，334260(1988))、抑制IgG與IgM分泌(Kehrl等，J．Immunol．，1373855(1986)；Kehrl等，J．Immunol．，1431868(1989))或通過減量調(diào)節(jié)人白細(xì)胞抗原(HLA-DR)(Czarniecki等，J．Immunol．，1404217(1988)；Zuber等，Eur．J．Immunol．，181623(1988))及減量調(diào)節(jié)IL-2R(Kehrl等，J．Exp．Med．，1631037(1986))而發(fā)揮免疫抑制功能。
這也與TGFβ對(duì)血細(xì)胞生成的影響特異相關(guān)。TGFβ顯示出對(duì)原始造血細(xì)胞生長(zhǎng)的負(fù)調(diào)節(jié)甚至抑制(Sitnicka等，Blood，88(1)82-88(1996)；Dybedal等，Blood，86(3)949-57(1995))。因此，TGFβ拮抗劑能夠在改善已確定的癌癥療法方面發(fā)揮重要的作用，所述療法以產(chǎn)生受劑量限制的骨髓抑制為特征。抑制是多種因素共同作用的結(jié)果，其中可能包括血細(xì)胞生成方面的癌癥治療所造成的直接影響，也包括免疫抑制因子增量調(diào)節(jié)所造成的間接影響。例如，Barcellos-Hoff等，J．Clin．Invest．，93892-99(1994)證明，對(duì)小鼠進(jìn)行電離輻射導(dǎo)致其乳腺組織中活性TGFβ水平的快速上升及潛在TGFβ的相應(yīng)降低。
活性形式的TGFβ為一種25KD的同型二聚體蛋白，該蛋白以潛在的前體形式合成和分泌，盡管還未能闡明其體內(nèi)激活的確切方式，但估計(jì)該前體形式通過酶剪切而激活(Massague等，Ann．Rev．Cell．Biol．，6597-641(1990))。TGFβ1、2和3這三種主要亞型各有70％相似性。據(jù)推測(cè)，活化TGFβ的作用可通過與多種細(xì)胞表面受體的結(jié)合來介導(dǎo)。目前至少已確定了三種不同的TGFβ受體，TGFβR-1、TGFβR-2及TGFβR-3(Barnard等，Biochim．Biophys．Acta，103279-87(1990))。三種受體均屬于Ⅰ型膜整合糖蛋白，而且除單核細(xì)胞中不含TGFβR-3外，實(shí)際上體內(nèi)所有細(xì)胞均可普遍表達(dá)這三種受體。目前TGFβ及其受體兩者均已被克隆并表達(dá)。TGFβ的其它膜結(jié)合組分在完全分化的細(xì)胞亞類中有所表現(xiàn)而并非被普遍表達(dá)。特別是最近的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，主要在內(nèi)皮細(xì)胞和前B細(xì)胞上表達(dá)的endoglin(CD105)與TGFβ-1及β3亞型相結(jié)合(Zhang等，J．Immunol．，156565-573(1996))。
人們已進(jìn)行了多種中和及／或減量調(diào)節(jié)TGFβ活性的實(shí)驗(yàn)。例如，實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示TGFβ特異抗體用于可產(chǎn)生TGFβ的腫瘤細(xì)胞的治療以消除TGFβ的免疫抑制作用(Segarini等，WO 94／09815)。人們還發(fā)現(xiàn)TGFβ特異抗體恢復(fù)或促進(jìn)例如由于TGFβ過量產(chǎn)生而被抑制的祖細(xì)胞和干細(xì)胞原始造血細(xì)胞的生長(zhǎng)(Dybedal等，Blood，86(3)949-57(1995)；Sitnicka等，Blood，88(1)82-88(1996))。
還有其它多種策略可用于活性形式TGFβ的中和或減量調(diào)節(jié)。例如，可在體內(nèi)施用TGFβ受體(TGFβR)Fc-融合蛋白，尤其是受體Ⅱ融合蛋白來中和或減量調(diào)節(jié)TGFβ。TGFβ受體的抗體可阻斷游離TGFβ與TGFβR的相互作用，并防止靶細(xì)胞內(nèi)下行信號(hào)事件的發(fā)生。同樣，TGFβ類似物或TGFβ結(jié)合蛋白，如凝血栓蛋白肽，可與游離TGFβ競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合受體，并使受體失活。此外，可利用基因治療法來達(dá)到以上目的。還有描述的其它策略可用于防止TGFβ從不參與信號(hào)事件的TGFβ潛在形式激活。例如，已描述并已合成的凝血栓蛋白肽序列可抑制潛在TGFβ的激活(Schultz-cherry等，J．Biol．Chem．，2707304-7310(1995))。
以治療有效量存在至少一種能夠中和或減量調(diào)節(jié)腫瘤或宿主分泌的免疫抑制因子生物活性的制劑。優(yōu)選實(shí)施方案中的劑量范圍約為5-1000mg／平方米。
CTL誘導(dǎo)組合物涉及使用一種對(duì)動(dòng)物基本無毒或無毒，且不含其存在可降低預(yù)期應(yīng)答的免疫刺激性肽(如胞壁酰二肽)的抗原制劑。更明確而言，CTL誘導(dǎo)組合物包含可使CTL對(duì)其產(chǎn)生預(yù)期應(yīng)答的抗原以及一種無毒抗原制劑，所述抗原制劑包含，由或基本上由一種穩(wěn)定化去污劑、一種微膠粒形成劑和一種可生物降解及生物相容性油脂組成。優(yōu)選的抗原制劑不包含任何免疫刺激性肽組分，或含有該組分的水平低到不足以減小細(xì)胞的預(yù)期反應(yīng)。該制劑優(yōu)選提供方式為一種穩(wěn)定的微流體化水包油型乳劑。也就是說，選擇各種不同組分，使乳劑在至少一個(gè)月期限內(nèi)，優(yōu)選在一年以上，保持乳劑狀態(tài)而不發(fā)生相分離。抗原與抗原制劑一起混合形成一種混合物，該混合物能夠以足夠誘導(dǎo)動(dòng)物體內(nèi)CTL反應(yīng)的劑量向動(dòng)物給藥。
就“無毒”而言，其含義是經(jīng)該抗原制劑處理的動(dòng)物或人體內(nèi)觀測(cè)到該抗原制劑的副作用幾乎沒有或沒有。那些醫(yī)藥或獸醫(yī)領(lǐng)域的技術(shù)人員都會(huì)承認(rèn)該術(shù)語(yǔ)具有廣泛含義。例如，對(duì)基本健康的動(dòng)物或人僅能夠容忍很輕微的毒性，而對(duì)忍受臨終疾病痛苦的人(預(yù)期壽命約不超過三年)則可忍受大得多的毒性。
就“穩(wěn)定化去污劑”而言，其含義是指一種使乳劑各組分保持穩(wěn)定乳劑狀態(tài)的去污劑。這類去污劑包括聚山梨酯80(吐溫80)(山梨糖醇酐-單-9-十八碳烯酸-聚(氧)-1，2-乙烷二基；ICI Americas，Wilmington，Del制造)、吐溫40、吐溫20、吐溫60、Zwittergent3-12、TEEPOL HB7以及SPAN 85。這些去污劑通常以大約0．05％-0．5％的量供應(yīng)，優(yōu)選以大約0．2％。
就“微膠粒形成劑”而言，其含義是指一種能夠穩(wěn)定與其它組分所形成的乳劑以至形成微膠粒狀結(jié)構(gòu)的制劑。該類制劑優(yōu)選在注射部位造成某些刺激以便吸引巨噬細(xì)胞來增強(qiáng)細(xì)胞反應(yīng)。該類制劑的實(shí)例如poloxamer 401，并且包括BASF Wyandotte出版物，如在此引作參考的Schmolka，J．Am．Oil．Chem．Soc．，54110(1977)和Hunter等，J．Immunol．，1291244(1981)中所描述的聚合物表面活性劑、PLURONIC L62LF、L101和L64、L121、PEG1000以及TETRONIC 1501、150R1、701、901、1301和130R1。此類制劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)在該領(lǐng)域中已眾所周知。根據(jù)Hunter和Bennett，Journal of Immunology，1333167(1984)中的規(guī)定，優(yōu)選選擇親水-親油平衡(HLB)為0-2的制劑。優(yōu)選提供的該制劑量為0．001-10％，最優(yōu)選的量則為0．001-5％。
選用油脂來提高抗原在水包油型乳劑中的保持力，即提供一種用于期望抗原的載體，且優(yōu)選具有低于65℃的熔解溫度，以便室溫(約20℃-25℃)時(shí)或一旦乳劑溫度下降到室溫以下時(shí)乳劑均能夠形成。此類油脂的實(shí)例包括角鯊烯、角鯊?fù)?、廿烷、四十四烷、甘油，以及花生油或其它植物油。?yōu)選提供的該油脂量為1-10％，最優(yōu)選的量則為2．5-5％。重要的是該油脂為可生物降解及生物相容型，以便身體可隨時(shí)間延續(xù)而將之分解，并且不會(huì)在使用此油脂時(shí)產(chǎn)生諸如肉芽瘤等明顯的負(fù)面影響。
以上制劑中重要的是不含肽組分，尤其是胞壁酰二肽(MDP)。如果以給人的每次正常制劑給藥大于約20微克的量提供，那么這樣一種肽將會(huì)干擾CTL反應(yīng)的誘導(dǎo)。盡管這些肽對(duì)體液免疫系統(tǒng)部分有明顯的刺激作用，但優(yōu)選方案為抗原制劑中完全不含此類肽。也就是說，盡管此類肽可以增強(qiáng)體液反應(yīng)，但當(dāng)期望產(chǎn)生細(xì)胞毒性T-淋巴細(xì)胞反應(yīng)時(shí)是不利的。
抗原制劑可僅由上述三種組分中的兩種配制而成，并且可與任意預(yù)定的抗原(其范圍包括蛋白質(zhì)、多肽及其免疫原性片段)一同使用以誘導(dǎo)上述動(dòng)物或人體內(nèi)的CTL反應(yīng)。
優(yōu)選實(shí)施方案中，所述的方法基本包括對(duì)人或動(dòng)物進(jìn)行合劑(抗原加抗原制劑)的單次給藥；人或動(dòng)物受癌或病毒感染并患有一種或多種由癌或病毒感染所導(dǎo)致的癥狀(如同相關(guān)領(lǐng)域的醫(yī)生通常所確定的)；以及抗原制劑對(duì)人或動(dòng)物不具有毒性。
其它優(yōu)選實(shí)施方案中，所述的抗原選自黑素細(xì)胞分化抗原，例如gp100(Kawakami等，J．Immunol．，1543961-3968(1995)；Cox等，Science，264716-719(1994))、MART-1／Melan A(Kawakami等，J．Exp．Med．，180347-352(1994)；Castelli等，J．Exp．Med．，181363-368(1995))、gp75(TRP-1)(Wang等，J．Exp．Med．，1861131-1140(1996))，以及酪氨酸酶(Wolfel等，Eur．J．Immunol．，24759-764(1994)；Topalian等，J．Exp．Med．，1831965-1971(1996))；黑色素瘤蛋白多糖(Hellstrom等，J．Immunol．，1301467-1472(1983)；Ross等，Arch．Biochem．Biophys．，225370-383(1983))；腫瘤特異性廣泛共享抗原，例如MAGE-1、2、3、4、6及12等MAGE家族抗原(Van der Bruggen等，Science，2541643-1647(1991)；Rogner等，Genomics，29729-73l(1995))、BAGE家族抗原(Boel等，Immunity，2167-175(1995))、例如GAGE-1、2等GAGE家族抗原(Van den Eynde等，J．Exp．Med．，182689-698(1995))、例如RAGE-1等RAGE家族抗原(Gaugler等，Imunogenetics，44323-330(1996))、N-乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶-V(Guilloux等，J．Exp．Med．，1831173-1183(1996))，和p15(Robbins等，J．Immunol．，1545944-5950(1995))；腫瘤特異性突變抗原；突變?chǔ)?連環(huán)蛋白(Robbins等，J．Exp．Med．，1831185-1192(1996))、突變MUM-1(Coulie等，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，927976-7980(1995))，以及突變細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶-4(CDK-4)(Wolfel等，Science，2691281-1284(1995))；突變癌基因產(chǎn)品p21 ras(Fossum等，Int．J．Cancer，5640-45(1994))、BCR-abl(Bocchia等，Blood，852680-2684(1995))、p53(Theobald等，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，9211993-11997(1995))，以及p185 HER2／neu(Fisk等，J．Exp．Med．，1812109-2117(1995)；Peoples等，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，92432-436(1995))；突變表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)(Fujimoto等，Eur．J．Gynecol．Oncol．，1640-47(1995)；Harris等，Breast Cancer Res．Treat，291-2(1994))；癌胚抗原(CEA)(Kwong等，J．Natl．Cancer Inst．，85982-990(1995))；癌相關(guān)性突變粘蛋白，例如，MUC-1基因產(chǎn)物(Jerome等，J．Immunol．，1511654-1662(1993)，Ioannides等，J．Immunol．，1513693-3703(1993)，Takahashi等，J．Immunol．，1532102-2109(1994))；EBV的EBNA基因產(chǎn)物，例如，EBNA-1基因產(chǎn)物(Rickinson等，Cancer Surveys，1353-80(1992))；人乳頭狀瘤病毒的E7、E6蛋白(Ressing等，J．Immunol．，1545934-5943(1995))；前列腺特異性抗原(PSA)(Xue等，TheProstate，3073-78(1997))；前列腺特異性膜抗原(PSMA)(Israeli，等，Cancer Res．，541807-1811(1994))；PCTA-1(Sue等，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，937252-7257(1996))；獨(dú)特型抗原決定簇或抗原，例如，免疫球蛋白獨(dú)特型或T細(xì)胞受體獨(dú)特型(Chen等，J．Immunol．，1534775-4787(1994)；Syrengelas等，Nat．Med．，21038-1040(1996))；HIV抗原gp160、gag、pol、nef、Tat及Rev；瘧疾抗原CS蛋白及孢子體表面蛋白2；乙型肝炎表面抗原Pre-S1、Pre-S2、HBc Ag及HBe Ag；流感病毒抗原HA、NP及NA；甲型肝炎表面抗原；丙型肝炎表面抗原；皰疹病毒抗原HSV gB、HSVgD、HSV gH、HSV早期蛋白產(chǎn)物、人乳頭狀瘤病毒抗原、巨細(xì)胞病毒gB、巨細(xì)胞病毒gH及IE蛋白gp72；呼吸道合胞體病毒抗原F蛋白、G蛋白及N蛋白。
CTL誘導(dǎo)佐劑可與能夠中和、阻斷、拮抗或減量調(diào)節(jié)腫瘤分泌免疫抑制因子活性的制劑結(jié)合使用，并可作為單一成分向患者給藥或兩種成分可分別給藥。給藥可通過多種眾所周知的技術(shù)加以實(shí)現(xiàn)。這些給藥方式包括，例如，皮內(nèi)注射、皮下注射、腹腔注射以及肌內(nèi)注射。此外，能夠中和或減量調(diào)節(jié)免疫抑制分子的制劑可不依賴于佐劑而獨(dú)立給藥，例如以靜脈注射或腹腔注射等方式。優(yōu)選實(shí)施方案是以皮內(nèi)注射、肌內(nèi)注射或皮下注射方式將包含CTL誘導(dǎo)佐劑的抗原給藥，而中和制劑以靜脈給藥方式全身給藥。
在任何諸如TGFβ等免疫抑制因子對(duì)宿主可誘導(dǎo)治療性CTL反應(yīng)的能力產(chǎn)生負(fù)面影響的任何疾病狀態(tài)下均會(huì)觀測(cè)到協(xié)同作用。舉例來說，此類疾病包括多種癌及贅瘤、病毒感染和寄生蟲感染。可利用受試者的協(xié)同結(jié)合加以治療的癌癥包括，例如，乳腺癌、腦癌、子宮頸癌、白血病、淋巴瘤、前列腺癌、皮膚癌、結(jié)腸癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、膀胱癌、腎癌、骨髓瘤、結(jié)腸直腸癌、鼻咽癌以及子宮內(nèi)膜癌?？梢勒沾税l(fā)明加以治療的病毒感染和寄生蟲感染包括，例如，乳頭狀瘤病毒、瘧疾、肝炎、皰疹巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞體病毒以及HIV。如上所述，該發(fā)明的另一重要方面包括血細(xì)胞生成的誘導(dǎo)。它在例如癌癥治療中具有特殊治療重要性。
關(guān)于這一方面，眾所周知的是癌癥患者，尤其是癌癥晚期患者表現(xiàn)出的由于干細(xì)胞或祖細(xì)胞抑制而被抑制的造血活性。這種抑制作用是例如用于癌癥治療中所使用的放療、化療以及腫瘤分泌的免疫抑制因子等因素的結(jié)果。利用發(fā)明的復(fù)方組合物進(jìn)行治療可使血細(xì)胞生成得以恢復(fù)或提高。此外，其還將進(jìn)一步改善放療或化療，因?yàn)槠鋺?yīng)該能使以治療劑量給藥時(shí)沒有不良影響。
給出以下實(shí)例是為了更詳盡地闡明該發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。但決不能認(rèn)為這些實(shí)例限制了本發(fā)明廣闊的范圍。
實(shí)施例實(shí)施例1用表達(dá)卵清蛋白的EG7細(xì)胞接種小鼠(2×106細(xì)胞／小鼠)。此前，Moore等，Cell，54777(1988)已對(duì)EG7的來源進(jìn)行了描述。接種后第7天，將長(zhǎng)有250-350mm3大小腫瘤的小鼠分為5組，并進(jìn)行如下處理A組，接受無抗原注射的對(duì)照組(■)，B組在PROVAX中加入30μg卵清蛋白進(jìn)行皮下注射(●)，C組在PROVAXTM中加入30μg卵清蛋白進(jìn)行皮下注射，并且每只小鼠腹腔內(nèi)注射50μg抗-TGFβ抗體(▲)，D組腹腔內(nèi)注射50μg抗-TGFβ抗體(△)。圖1所列數(shù)據(jù)表明，患有逐漸生長(zhǎng)的EG7腫瘤的小鼠經(jīng)抗-TGFβ抗體與PROVAXTM中卵清蛋白結(jié)合處理后，其抗腫瘤活性增強(qiáng)，而相同條件下以卵清蛋白-PROVAXTM處理則不產(chǎn)生此效果。
實(shí)施例2用表達(dá)HPV-E7的HOPE2細(xì)胞接種小鼠(4×106細(xì)胞／小鼠)(2．A．)。利用電穿孔將編碼E7的哺乳動(dòng)物表達(dá)質(zhì)粒引入K1735-X21細(xì)胞(Isaiah J．Fidler慷慨贈(zèng)送)而獲得表達(dá)E7的HOPE2轉(zhuǎn)染體。人乳頭狀瘤病毒16型E7表達(dá)載體INPEP4+LE7包含一段300bp的E7編碼片段(氨基酸殘基2-97；Seedorf等，Virology，145181-185(1985))，其下游融合了一段免疫球蛋白前導(dǎo)序列(L)。轉(zhuǎn)錄由巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子／增強(qiáng)子(CMV)啟動(dòng)，RNA加工的多腺苷酸化信號(hào)由牛生長(zhǎng)激素(BGH)3’側(cè)翼序列提供。由小鼠β-球蛋白主要啟動(dòng)子(BETA)啟動(dòng)的細(xì)菌新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶(N)和哺乳動(dòng)物二氫葉酸還原酶(DHFR)表達(dá)盒分別由G418和氨甲蝶呤進(jìn)行優(yōu)勢(shì)選擇。新霉素基因盒中包含用于RNA加工的SV40早期多腺苷酸化信號(hào)(SV40)。在電穿孔前先利用PACI限制性酶切質(zhì)粒DNA使之線性化。將K1735-X21細(xì)胞置于添加有10％(V／V)非必需氨基酸(IrvineSci．)、10％(V／V)L-谷氨酸(Irvine Sci．)、20％(V／V)MEM維生素溶液(Gibco BRL．)、1mM丙酮酸鈉(Biowhittaker)和5％FBS(Gibco BRL．)的MEMα培養(yǎng)液(Gibco BRL．)中生長(zhǎng)。利用BTX 600電穿孔儀(375伏特，13歐姆，25微法拉)將1μg由PacI線性化的INPEP4+LE7 DNA電穿孔引入4×106個(gè)K1735-X21細(xì)胞中。將細(xì)胞鋪在96孔平板底部。培養(yǎng)24小時(shí)后，對(duì)細(xì)胞加入含有0．4mg／ml活性G418的培養(yǎng)液。利用ELISA、蛋白質(zhì)印跡和RNA印跡分析法篩選出表達(dá)E7的G418抗性克隆，并選擇用來進(jìn)一步擴(kuò)大培養(yǎng)。HOPE2在所有上述分析方法中均為E7表達(dá)陽(yáng)性。
接種后第11天，將長(zhǎng)有75-150mm3大小腫瘤的小鼠分為4組，并進(jìn)行如下處理A組，接受無抗原注射的對(duì)照組(□)，B組在PROVAXTM中加入30μgE7進(jìn)行皮下注射(◇)，C組在PROVAXTM中加入30μg卵清蛋白進(jìn)行皮下注射，并且每只小鼠腹腔內(nèi)注射100μg抗-TGFβ抗體(△)，D組接受100μg抗-TGFβ抗體的單次腹腔內(nèi)注射(○)。圖2A所列數(shù)據(jù)表明，患有逐漸生長(zhǎng)的HOPE2腫瘤的小鼠經(jīng)抗-TGFβ抗體與E7-PROVAXTM結(jié)合處理，給出增強(qiáng)的抗腫瘤活性。
在另一實(shí)驗(yàn)中，HOPE2接種后第13天，將小鼠按上述方法分組。這些組的小鼠的處理方法與2．A．類似，不同的是C組(△)與D組(○)在15-29天內(nèi)，每4天注射一次抗-TGFβ抗體，共注射4次(2．B．)。結(jié)果列于圖2B。
盡管在此參照多種具體的材料、方法和實(shí)例來描述和闡明本項(xiàng)發(fā)明，但認(rèn)識(shí)到該發(fā)明當(dāng)然并不局限于具體材料、這些材料的組合以及由此而選定的方法。那些該領(lǐng)域技術(shù)人員理解并將正確評(píng)價(jià)這些細(xì)節(jié)中的多種變動(dòng)。此外，在此引用的所有出版物、專利和專利申請(qǐng)都將全文引作參考。
實(shí)施例3利用TGFβ1 ELISA試劑盒(Genzyme Corp．，目錄號(hào)#80-3108)檢測(cè)小鼠3T3細(xì)胞系(BALB／c源)、HOPE2(C3H源)EL4細(xì)胞系和EG7細(xì)胞系(C57BL／6)以及人KB細(xì)胞系(表皮樣癌ATCC#CCL-17)、A431細(xì)胞系(表皮樣癌，ATCC#CRL-1555)所分泌的TGFβ1的濃度。圖3A和3B顯示37℃體外連續(xù)培養(yǎng)3天(EL4和EG7細(xì)胞系)或5天(KB、A431和HOPE2)后利用GIBCO CHO-S SFM II(目錄號(hào)#91-0456)測(cè)量的無血清條件培養(yǎng)液(CM)中TGFβ1的濃度。檢測(cè)TGFβ濃度前，按照廠商說明將CM于400×g離心5分鐘。
圖3A顯示立即測(cè)量的CM活性(全活性TGFβ1)以及按照廠商說明在酸活化繼而中和之后測(cè)量的CM活性(總TGFβ1)。通過總TGFβ濃度減去TGFβ活性濃度來估計(jì)CM中的潛在TGFβ1部分。如圖3所示，體外培養(yǎng)的所有細(xì)胞系均分泌TGFβ1，而≥98％的分泌物以潛在形式存在。
圖3B顯示37℃培養(yǎng)2天或5天后所出現(xiàn)的總細(xì)胞數(shù)正?；?，條件培養(yǎng)液中各種細(xì)胞系分泌的TGFβ1的估計(jì)水平。
實(shí)施例4圖4證明抗-TGFβ中和抗體在按照廠商說明進(jìn)行酸活化并中和之后與小鼠或人TGFβ的結(jié)合活性。小鼠TGFβ由BALB／c 3T3條件培養(yǎng)液(見圖3)獲得，并用PBS稀釋至0．2ng／ml，人TGFβ由A431CM獲得，并用PBS稀釋至0．4ng／ml。將不同稀釋度的小鼠抗-TGFβ1、β2、β3單克隆抗體(Genzyme Corp目錄號(hào)#80-1835-03)加入條件培養(yǎng)液于4℃溫育3小時(shí)，并如圖3所述利用ELISA測(cè)定法測(cè)定非結(jié)合TGFβ。結(jié)果顯示抗TGFβ中和抗體與人和小鼠來源的TGFβ產(chǎn)生的結(jié)合具有可比性。
權(quán)利要求
1．一種組合物，包含(a)一種合劑，包含癌、病毒或寄生蟲抗原及一種微流體化抗原制劑，所述抗原由所述癌、病毒或寄生蟲感染的細(xì)胞表達(dá)，所述抗原制劑包含(ⅰ)一種穩(wěn)定化去污劑，(ⅱ)一種微膠粒形成劑，以及(ⅲ)一種可生物降解和生物相容性油脂，該抗原制劑被配制成穩(wěn)定的水包油乳劑；以及(b)至少一種能中和或減量調(diào)節(jié)免疫抑制因子活性的制劑。
2．權(quán)利要求1的組合物，其中所述抗原制劑基本由所述的穩(wěn)定化去污劑、微膠粒形成劑，以及生物相容性油脂組成。
3．權(quán)利要求1的組合物，其中去污劑選自吐溫80、吐溫20、吐溫40、吐溫60、Zwittergent 3-12、TEEPOL HB7以及SPAN 85。
4．權(quán)利要求1的組合物，其中所述去污劑提供的量的范圍大約為0．05-0．5％。
5．權(quán)利要求4的組合物，其中去污劑的量約為0．2％。
6．權(quán)利要求1的組合物，其中所述微膠粒形成劑的親水親油平衡為0-2。
7．權(quán)利要求6的組合物，其中所述微膠粒形成劑的量為1．25-5％范圍。
8．權(quán)利要求1的組合物，其中所述微膠粒形成劑選自poloxamer401、PLURONIC L62Lf、PLURONIC L101、PLURONIC L64、PEG1000、TETRONIC 1501、TETRONIC 150R1、TETRONIC 701、TETRONIC 901、TETRONIC 1301以及TETRONIC 130R1。
9．權(quán)利要求1的組合物，其中所述微膠粒形成劑的量為0．5-10％范圍。
10．權(quán)利要求1的組合物，其中油脂具有低于65℃的熔化溫度。
11．權(quán)利要求1的組合物，其中油脂選自角鯊?fù)椤⒍纪?、四十四烷、姥鮫烷，以及植物油。
12．權(quán)利要求1的組合物，其中油脂的量為1-10％范圍。
13．權(quán)利要求12的組合物，其中油脂的量為2．5-5％范圍。
14．權(quán)利要求1的組合物，其中去污劑為聚山梨酯80而微膠粒形成劑為poloxamer 401。
15．權(quán)利要求14的組合物，其中油脂為角鯊?fù)椤?br> 16．權(quán)利要求1的組合物，其中去污劑選自吐溫20、吐溫40，以及吐溫80，油脂選自角鯊?fù)椤⒍纪?、橄欖油以及姥鮫烷，微膠粒形成劑選自poloxamer 401，以及PLURONIC L62LF。
17．權(quán)利要求1的組合物，其中所述免疫抑制因子為TGFβ。
18．權(quán)利要求1的組合物，其中所述的能夠中和或減量調(diào)節(jié)腫瘤或宿主分泌的免疫抑制因子活性的制劑為抗-TGFβ抗體、TGFβR-融合蛋白、TGFβ類似物、TGFβ結(jié)合蛋白或TGFβR阻斷抗體。
19．權(quán)利要求1的組合物，其中所述的能夠中和或減量調(diào)節(jié)或抑制腫瘤和宿主分泌的免疫抑制因子活化的制劑為凝血栓蛋白肽或TGFβR Fc-融合蛋白。
20．權(quán)利要求1的組合物，其中所述抗原制劑包括角鯊?fù)?、吐?0和poloxamer 401。
21．權(quán)利要求1的組合物，其中所述抗原選自gp100、MART-1／Melan A、gp75、酪氨酸酶、黑色素瘤蛋白多糖、MAGE、BAGE、GAGE、RAGE、N-乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶-V、突變?chǔ)?catenin、突變MUM-1、突變細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶-4、p21 ras、BCR-abl、p53、p185HER2／neu、突變表皮生長(zhǎng)因子受體、癌胚抗原、癌相關(guān)性突變粘蛋白、EBNA基因產(chǎn)物、人乳頭狀瘤病毒E7蛋白、人乳頭狀瘤病毒E6蛋白、前列腺特異性抗原、前列腺特異性膜抗原、PCTA-1、免疫球蛋白獨(dú)特型以及T細(xì)胞受體獨(dú)特型。
22．權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物用于癌、病毒或寄生蟲性病癥的治療。
23．一種治療方法，包括細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)的誘導(dǎo)，其中的改進(jìn)包括(ⅰ)施用誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)的佐劑，以及(ⅱ)施用免疫抑制因子拮抗劑；其中佐劑與拮抗劑可按任意順序依次或同時(shí)給藥。
24．權(quán)利要求23的方法，其中所述分泌的免疫抑制因子為TGFβ。
25．權(quán)利要求24的方法，其中所述佐劑與拮抗劑為依次給藥。
26．權(quán)利要求25的方法，其中CTL誘導(dǎo)佐劑以皮內(nèi)、肌內(nèi)或皮下注射給藥，TGF拮抗劑以靜脈內(nèi)給藥。
27．權(quán)利要求23的方法，其中所述治療包括選自腫瘤或癌、寄生蟲感染和病毒感染的疾病的治療。
28．權(quán)利要求23的方法，其中所述治療包括恢復(fù)或提高血細(xì)胞生成。
29．權(quán)利要求27的方法，其中所述的癌包括乳腺癌、腦癌、子宮頸癌、白血病、淋巴瘤、前列腺癌、皮膚癌、結(jié)腸癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、膀胱癌、腎癌、骨髓瘤、結(jié)腸直腸癌或子宮內(nèi)膜癌。
30．權(quán)利要求27的方法，其中所述病毒感染包括乳頭狀瘤病毒、肝炎、皰疹、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞體病毒或HIV。
31．權(quán)利要求27的方法，其中所述寄生蟲感染包括瘧疾。
32．一種治療贅瘤或癌生長(zhǎng)的方法，包括向需要此種治療的患者給藥(a)一種合劑，其包含由癌細(xì)胞表達(dá)的該癌或腫瘤的抗原以及微流體化抗原制劑，所述抗原制劑包含(ⅰ)一種穩(wěn)定化去污劑，(ⅱ)一種微膠粒形成劑，以及(ⅲ)一種可生物降解和生物相容性油脂，該抗原制劑被配制成穩(wěn)定的水包油型乳劑；其中所述合劑以足夠誘導(dǎo)患者體內(nèi)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)的劑量向該患者給藥，此反應(yīng)對(duì)該合劑所包含的癌或腫瘤抗原是特異性的，以及(b)治療有效量的至少一種能夠中和或減量調(diào)節(jié)腫瘤或宿主分泌的免疫抑制因子活性的制劑。
33．權(quán)利要求32的方法，其中所述抗原選自gp100、MART-1／Melan A、gp75、酪氨酸酶、黑色素瘤蛋白多糖、MAGE、BAGE、GAGE、RAGE、N-乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶-V、突變?chǔ)?catenin、突變MUM-1、突變細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶-4、p21 ras、BCR-abl、p53、p185HER2／neu、突變表皮生長(zhǎng)因子受體、癌胚抗原、癌相關(guān)性突變粘蛋白、EBNA基因產(chǎn)物、人乳頭狀瘤病毒E7蛋白、人乳頭狀瘤病毒E6蛋白、前列腺特異性抗原、前列腺特異性膜抗原、PCTA-1、免疫球蛋白獨(dú)特型以及T細(xì)胞受體獨(dú)特型。
34．一種治療贅瘤或癌生長(zhǎng)的方法，包括以足以誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)的量向需要此種治療的患者給藥權(quán)利要求1的組合物。
35．一種恢復(fù)或提高血細(xì)胞生成的方法，包括向需要此種治療的患者給藥(a)一種合劑，其包含癌、病毒或寄生蟲抗原以及微流體化抗原制劑，所述抗原由該癌、病毒或寄生蟲感染的細(xì)胞表達(dá)，所述抗原制劑包含(ⅰ)一種穩(wěn)定化去污劑，(ⅱ)一種微膠粒形成劑，以及(ⅲ)一種可生物降解和生物相容性油脂，該抗原制劑被配制成穩(wěn)定的水包油型乳劑；其中所述混合物以足夠誘導(dǎo)患者體內(nèi)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)的劑量向該患者給藥，此反應(yīng)對(duì)該合劑所包含的病毒或癌抗原是特異性的，以及(b)治療有效量的至少一種能夠中和或減量調(diào)節(jié)腫瘤或宿主分泌的免疫抑制因子活性的制劑，其中所述合劑及制劑可按任意順序分別或協(xié)同給藥。
36．權(quán)利要求34的方法，其中所述抗原選自gp100、MART-1／Melan A、gp75、酪氨酸酶、黑色素瘤蛋白多糖、MAGE、BAGE、GAGE、RAGE、N-乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶-V、突變?chǔ)?catenin、突變MUM-1、突變細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶-4、p21 ras、BCR-ab1、p53、p185HER2／neu、突變表皮生長(zhǎng)因子受體、癌胚抗原、癌相關(guān)性突變粘蛋白、EBNA基因產(chǎn)物、人乳頭狀瘤病毒E7蛋白、人乳頭狀瘤病毒E6蛋白、前列腺特異性抗原、前列腺特異性膜抗原、PCTA-1、免疫球蛋白獨(dú)特型以及T細(xì)胞受體獨(dú)特型。
37．一種組合物，包括(a)一種合劑，其包含癌、病毒或寄生蟲抗原及微流體化抗原制劑，所述抗原由該癌、病毒或寄生蟲感染的細(xì)胞表達(dá)，所述抗原制劑包含(ⅰ)一種穩(wěn)定化去污劑，(ⅱ)一種微膠粒形成劑，以及(ⅲ)一種可生物降解和生物相容性油脂，該抗原制劑被配制成穩(wěn)定的水包油型乳劑；以及(b)一種或多種TGFβ拮抗劑。
全文摘要
本發(fā)明提供用于治療贅瘤或癌生長(zhǎng)及治療此類患者以使適血功能恢復(fù)或提高的一種協(xié)同組合物和方法。本發(fā)明包括分開地或組合地施用一種細(xì)胞毒性T－淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)組合物和至少一種能中和或減量調(diào)節(jié)腫瘤分泌的免疫抑制因子的活性的制劑的組合。
文檔編號(hào)A61P43/00GK1279616SQ98811280
公開日2001年1月10日 申請(qǐng)日期1998年9月17日 優(yōu)先權(quán)日1997年9月18日
發(fā)明者N·漢納, G·R·布拉斯勞斯基, K·哈里哈蘭 申請(qǐng)人:艾德藥品公司