專利名稱：使用經(jīng)過(guò)化學(xué)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液用于抑制抗原特異性的免疫反應(yīng)的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是使用經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽(chlorite)溶液用于抑制抗原特異性的免疫反應(yīng)的用途。經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液通過(guò)阻止抗原呈遞細(xì)胞對(duì)抗原的呈遞來(lái)抑制抗原特異性的免疫反應(yīng)。因此，經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液在治療由不需要的或不適當(dāng)?shù)目乖禺愋悦庖叻磻?yīng)造成或與其相關(guān)聯(lián)的疾病包括例如，自身免疫疾病，乙肝，丙肝，慢性肝炎，慢性阻塞性肺疾病，系統(tǒng)性紅斑狼瘡的治療，以及對(duì)防止器官移植患者的排斥反應(yīng)(移植與宿主疾病)的過(guò)程中是有用的。穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液還可用于治療淋巴瘤、特別是濾泡非霍金奇淋巴瘤。
背景技術(shù)：
免疫反應(yīng)的一個(gè)普通特征是對(duì)抗原(外來(lái)或自身的，但被認(rèn)為是外來(lái)的)的識(shí)別，以及免疫系統(tǒng)隨后對(duì)抗原的處理。典型地，抗原在細(xì)胞(通常是巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞及其它的抗原呈遞細(xì)胞(APC)的細(xì)胞質(zhì)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)以及溶酶體中，或在血清中被酶降解。降解后的抗原由MHCⅠ類或Ⅱ類分子呈遞到APC的表面上?？乖瓫Q定部位由MHC分子呈遞并隨后結(jié)合到T細(xì)胞的T細(xì)胞受體(TCR)上的過(guò)程稱為抗原呈遞。參照，例如，Rodgers等人，CLINICAL IMMUNOLOGY,PRINCIPLES AND PRACTICE(RICH):“Antigen and antigenpresentation，”第7章，第114-131頁(yè)，Mosby,St.Louis,MO(1996)；Roitt,ESSENTIAL IMMUNOLOGY,Blackwell Science,Oxford,England(1997)。
在體內(nèi)循環(huán)的T細(xì)胞通過(guò)其表面上的TCR識(shí)別并結(jié)合由MHC(Ⅰ或Ⅱ類)分子呈遞的抗原決定部位(抗原)。TCR成功結(jié)合到所呈遞的抗原決定部位之后即發(fā)生一系列事件。例如，當(dāng)T細(xì)胞遇到位于APC表面的結(jié)合著MHC分子的抗原時(shí)，它們即產(chǎn)生深刻的表形變化，其特征是基因表達(dá)、效應(yīng)器功能、淋巴因子分泌、以及，在適當(dāng)環(huán)境下，細(xì)胞的增殖都發(fā)生變化。然而，不適當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)也以類似的方式發(fā)生，并可導(dǎo)致不需要的T細(xì)胞增殖、不需要的淋巴因子分泌、以及導(dǎo)致自身免疫狀態(tài)。
在正常的免疫反應(yīng)的過(guò)程中，TCR必須首先能夠識(shí)別并結(jié)合所呈遞的抗原。然而，據(jù)信，需要有更多的過(guò)程，而不僅僅是抗原的簡(jiǎn)單結(jié)合，來(lái)導(dǎo)致上述一系列事件的發(fā)生。因此，認(rèn)為存在于APC上的配體必需與T細(xì)胞上的共刺激受體反應(yīng)以引發(fā)淋巴細(xì)胞的激活。具體地，位于APC表面的B7分子與其位于T細(xì)胞上的反受體CD28分子(該分子形成TCR的一部分)相互作用。Siegel等人，CLINICAL IMMUNOLOGY,PRINCIPLES AND PRACTICE(RICH):“Signal Transduction and Tlymphocyte activation，”第12章，第192至216頁(yè)，Mosby,St.Louis,MO(1996)。同時(shí)參照Roitt，文獻(xiàn)同上，第169-170頁(yè)。
最強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)中有一種稱為“異源反應(yīng)”，它涉及的是免疫系統(tǒng)對(duì)非自身的MHC同種抗原產(chǎn)生反應(yīng)。這種類型的反應(yīng)見(jiàn)于例如非自身移植物例如移植的器官的排斥，此時(shí)這明顯是不合需要的。然而，已報(bào)導(dǎo)的通過(guò)干擾同種識(shí)別(即通過(guò)移植物抗原的損耗，APC功能的抑制，表面受體/共受體分子的阻塞，等等)來(lái)產(chǎn)生作用的抑制免疫反應(yīng)機(jī)制對(duì)于防止或減輕異源反應(yīng)的嚴(yán)重程度是無(wú)效的，這是因?yàn)樗鼈兙叨靖弊饔茫一钚灾芷诙?。RICH文獻(xiàn)同上，于“Concepts and challengesin solid organ transplantation，”第104章，第1593-1607頁(yè)。另外，還未見(jiàn)有能夠有效阻斷B7/CD28共刺激相互作用的治療方法的報(bào)導(dǎo)。
大部分哺乳動(dòng)物的免疫系統(tǒng)能夠適當(dāng)?shù)刈R(shí)別自身及外來(lái)抗原并對(duì)其產(chǎn)生應(yīng)答。免疫系統(tǒng)對(duì)自身抗原不產(chǎn)生應(yīng)答的這種現(xiàn)象被稱為免疫耐受力。Triptett,J.Immunol.86:505-510(1962)。然而，對(duì)自身抗原的耐受力有時(shí)候失靈了，從而造成自身免疫，此時(shí)T或B細(xì)胞(或兩者)，以及哺乳動(dòng)物中多種不同的細(xì)胞因子，對(duì)哺乳動(dòng)物自身組織中的抗原產(chǎn)生反應(yīng)并把其破壞。另外，哺乳動(dòng)物經(jīng)常對(duì)外來(lái)抗原產(chǎn)生不適當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)，從而導(dǎo)致免疫系統(tǒng)的過(guò)度刺激或過(guò)度激活，最終導(dǎo)致對(duì)正常、健康的組織產(chǎn)生損害。
這些自身免疫反應(yīng)及不適當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)導(dǎo)致了一系列全身性免疫疾病的發(fā)生，這些疾病包括重癥肌無(wú)力、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、血清疾病、I型糖尿病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、青少年風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕熱、斯耶格倫綜合癥、全身性硬化、脊椎關(guān)節(jié)病、萊姆病、結(jié)節(jié)病、自身免疫溶血、自身免疫肝炎、自身免疫中性白血球減少、自身免疫多腺疾病、自身免疫甲狀腺疾病、多發(fā)性硬化、炎癥性腸病、結(jié)腸炎、局限性回腸炎、慢性疲勞綜合癥，等等。
自身免疫疾病的一個(gè)重要因素是T細(xì)胞被呈遞給自身組織或器官。當(dāng)抗原(或自身抗原)由APC呈遞時(shí)，含有這些抗自身受體的T細(xì)胞結(jié)合到被呈遞的抗原決定部位上并開(kāi)始分化和增殖，從而導(dǎo)致把抗原(或自身抗原)破壞。Davis,Annu.Rev.Biochem.,59:475(1990)。已經(jīng)提議了幾種防止抗自身T細(xì)胞分化的機(jī)制。一種機(jī)制是克隆的無(wú)反應(yīng)性，這是對(duì)T細(xì)胞進(jìn)行功能性滅活。Schwartz，于Rich，文獻(xiàn)同上，“Mechanisms of Autoimmunity，”第69章，第1053-61頁(yè)。無(wú)反應(yīng)性的T細(xì)胞無(wú)法表達(dá)IL-2，后者是T細(xì)胞增殖必需的一種細(xì)胞因子。這樣，T細(xì)胞無(wú)法增殖，從而無(wú)法導(dǎo)致自身免疫疾病癥狀的發(fā)生。
對(duì)抗自身免疫反應(yīng)的傳統(tǒng)的方法通過(guò)在抗原呈遞之后防止或抑制T細(xì)胞的增殖來(lái)減弱免疫反應(yīng)。這些方法試圖在抗原呈遞及細(xì)胞因子(IL-I,IL-2,TNF，等)釋放之后抑制細(xì)胞毒素T細(xì)胞的形成和擴(kuò)張。例如，已知可以用環(huán)孢菌素來(lái)在抗原呈遞之后通過(guò)阻斷IL-2的生產(chǎn)來(lái)防止T細(xì)胞的增殖。在抗原呈遞之后，通過(guò)調(diào)控免疫反應(yīng)來(lái)試圖對(duì)經(jīng)過(guò)刺激的T細(xì)胞的生產(chǎn)進(jìn)行干擾的這一方法特征性地需要施用大量的治療劑，這會(huì)導(dǎo)致不合需要的毒副作用。
另外，雖然抗自身T細(xì)胞的擴(kuò)張是一些自身免疫疾病所必需的，但是僅有它們存在并不足以引起所有的自身免疫反應(yīng)。Schwart，文獻(xiàn)同上，第1055頁(yè)。例如，多克隆B細(xì)胞激活是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的一個(gè)普通特征。Klinman等人，J.Exp.Med.165:1755(1987)。另外，自身抗體的存在在器官特異性的自身免疫疾病中并不普遍。Bernard等人，Diabetes,41:40(1992)。因此，僅僅防止抗自身T細(xì)胞增殖可能并不能有效地對(duì)許多自身免疫疾病進(jìn)行治療。
有不同于自身免疫疾病的其它病例，其中并不需要免疫反應(yīng)，或者其中需要把免疫反應(yīng)抑制到一定程度。對(duì)抗原的過(guò)敏反應(yīng)以及過(guò)度炎癥就是免疫系統(tǒng)已經(jīng)起動(dòng)一不適當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)的例子。肝炎病毒如乙肝或丙肝病毒的慢性病毒感染是過(guò)度免疫反應(yīng)炎癥導(dǎo)致末期肝功能障礙以及如肝硬化及肝細(xì)胞瘤等疾病的例子。另外一個(gè)例子是對(duì)移植的器官或組織產(chǎn)生排斥。另外，移植的器官或其它移植物有時(shí)會(huì)引出移植物對(duì)抗宿主的反應(yīng)，此時(shí)移植物或器官就會(huì)介導(dǎo)一個(gè)對(duì)抗健康宿主細(xì)胞的免疫反應(yīng)。
當(dāng)進(jìn)行器官或組織移植時(shí)，對(duì)所移植器官的外來(lái)抗原產(chǎn)生免疫反應(yīng)是不利的。此時(shí)，免疫系統(tǒng)必須對(duì)外來(lái)抗原產(chǎn)生免疫耐受力。類似地，移植的器官或移植物的免疫系統(tǒng)也必須對(duì)宿主抗原產(chǎn)生耐受力。在器官移植領(lǐng)域，可以用可影響淋巴及造血系統(tǒng)的其它部分的細(xì)胞毒素劑來(lái)抑制器官接受者對(duì)外來(lái)移植物的細(xì)胞免疫反應(yīng)。對(duì)移植物的接受情況受到器官接受者對(duì)這些細(xì)胞毒素化學(xué)物質(zhì)(它們?cè)S多都與抗瘤(抗增殖)藥劑類似)的耐受力的局限。同樣，當(dāng)使用細(xì)胞毒素抗微生物藥劑，特別是抗病毒藥時(shí)，或使用細(xì)胞毒素藥用于自身免疫治療如系統(tǒng)性紅斑狼瘡的治療時(shí)，一個(gè)嚴(yán)重的局限是其對(duì)骨髓及身體造血細(xì)胞的毒性效應(yīng)。另外一個(gè)局限是細(xì)胞毒素劑無(wú)法誘導(dǎo)對(duì)外來(lái)抗原的免疫耐受力。
對(duì)正常組織及細(xì)胞的毒副作用也限制了許多類型的非外科手術(shù)瘤癥治療方法如外部放射或化學(xué)療法的效力，這是因?yàn)檫@些形式的治療對(duì)瘤細(xì)胞的特異性都是有限的。當(dāng)把抗瘤抗體用以為毒性劑，如同位素，藥物、毒素尋找癌癥位置時(shí)，這一局限也十分重要，因?yàn)榭贵w作為一種自身性的物質(zhì)，可以循環(huán)到敏感的細(xì)胞隔室如骨髓之中。在急性輻射損傷中，淋巴及造血隔室被破壞，這是發(fā)生敗血病及最終導(dǎo)致死亡的主要因素。
已有幾種不同的方法可以被用于保護(hù)生物體免受輻射或毒性化學(xué)試劑的副作用傷害。一種方法是在已經(jīng)產(chǎn)生毒性后把骨髓細(xì)胞替換掉。另外一種方法是注射一種可以競(jìng)爭(zhēng)毒性藥物作用位置的化學(xué)阻斷劑。
Neta等人(J.Immunol.136:2483-2485,1986)證實(shí)，用重組白細(xì)胞間介素-1(IL-1)進(jìn)行預(yù)處理可以以依賴于劑量的形式保護(hù)小鼠免受外部光束輻射對(duì)其的致死作用，其中IL-1是在輻射前20小時(shí)施用的。其它研究已顯示用其它的細(xì)胞因子來(lái)改善放射治療及化學(xué)治療的毒副作用。然而，還沒(méi)有報(bào)導(dǎo)指出防止細(xì)胞因子的分泌以及/或者抑制抗原呈遞細(xì)胞(巨噬細(xì)胞，樹突細(xì)胞等)中的抗原呈遞對(duì)于改善這些副作用是有用的。
傳統(tǒng)的免疫抑制反應(yīng)在治療器官移植的排斥作用上也是無(wú)效的。首先，大部分的免疫抑制劑如抗增殖劑和皮質(zhì)甾類的免疫抑制效力都較低。第二，過(guò)量的免疫抑制劑如單克隆抗體OKT3會(huì)對(duì)T及B細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，從而導(dǎo)致淋巴細(xì)胞中出現(xiàn)潛隱的病毒感染，或?qū)е铝馨图?xì)胞出現(xiàn)腫瘤疾病。第三，施用大劑量的免疫抑制劑，如環(huán)胞菌素，會(huì)導(dǎo)致對(duì)不屬于免疫系統(tǒng)的器官產(chǎn)生毒性作用。
抗原在APC上的呈遞還具有可以刺激輔助T細(xì)胞來(lái)“幫助”B細(xì)胞進(jìn)行增殖并隨后進(jìn)行分化的作用。在每次分裂之后，以更高的親和力結(jié)合抗原的B細(xì)胞可以再次分裂，而那些免疫球蛋白保持不被改變或親和力較低的B細(xì)胞則死亡。這樣，B細(xì)胞開(kāi)始增殖并隨后分化為漿細(xì)胞，漿細(xì)胞分泌諸如Ig亞族的免疫球蛋白。典型地，B細(xì)胞首先分泌IgM，然后分泌IgG,IgA及IgE。如果B細(xì)胞繼續(xù)增殖，但卻未能分化，那么它們將導(dǎo)致淋巴增生性疾病，如淋巴瘤。Gause，于Rich，文獻(xiàn)同上，第113章，第1745至1767頁(yè)。
非淋巴內(nèi)芽腫濾泡性淋巴瘤(non-HIV)是美國(guó)最普遍的淋巴瘤之一。每年診斷出大約四萬(wàn)個(gè)淋巴細(xì)胞淋巴瘤的新病例，且每年估計(jì)有19,000人死亡。Ries等人，Cancer Statistics Review 1973-1988,National Institutes of Health Publ 91-2789,Washington,DC,1991,National Cancer Institute.濾泡性淋巴瘤發(fā)展得相對(duì)較慢且?guī)缀醪恍柚委?，除非它使病人感到不適或?qū)е铝宋＜吧牟l(fā)癥。雖然濾泡性淋巴瘤屬于淋巴瘤中的低級(jí)類別，但在現(xiàn)有治療條件下卻無(wú)法治愈，而最終普遍都導(dǎo)致死亡。
在1981年首次用由患者自身的B細(xì)胞淋巴瘤制備的抗獨(dú)特型抗體對(duì)患者進(jìn)行治療。Miller等人，N.Engl.J.Med.306:517(1982)。在十多年前，研究者們把單克隆抗獨(dú)特型抗體來(lái)治療濾泡性淋巴瘤。這一研究發(fā)現(xiàn)，淋巴瘤對(duì)抗獨(dú)特型治療的反應(yīng)與在淋巴瘤中共存的T細(xì)胞的比例有直接的關(guān)系。這些發(fā)現(xiàn)提示，惡性B細(xì)胞不知何故與T細(xì)胞相互作用，而抗獨(dú)特型抗體則不知何故或者改變了淋巴細(xì)胞的生長(zhǎng)條件，或者改變了T細(xì)胞對(duì)B細(xì)胞的免疫反應(yīng)。然而，抗獨(dú)特型治療并沒(méi)有被采用，因?yàn)橛捎诳躬?dú)特型抗體是從患者自身的B細(xì)胞(此種細(xì)胞有改變它們自身結(jié)構(gòu)的固有的能力)制備的，所以B細(xì)胞腫瘤也能夠自主地變異它們的抗原結(jié)合部位(即獨(dú)特型)，從而使它們不受抗獨(dú)特型治療的影響。Gause，文獻(xiàn)同上，第113章，第1745至1767頁(yè)。
新近，與淋巴瘤獨(dú)特型(腫瘤特異性免疫球蛋白)一起保溫的樹突細(xì)胞已被用于對(duì)患者進(jìn)行免疫以對(duì)抗他們自身的濾泡性淋巴瘤。其中，從患者中取出血液樹突細(xì)胞并把其與患者自身的腫瘤特異性抗體一起保溫，然后再注射回患者內(nèi)。經(jīng)過(guò)上述注射之后的一些患者的腫瘤收縮了，從而顯示樹突細(xì)胞誘導(dǎo)了T細(xì)胞對(duì)抗惡性B細(xì)胞的應(yīng)答。這些觀察結(jié)果提示濾泡性淋巴瘤可以順從免疫操作。
濾泡性淋巴瘤處理過(guò)程中的一個(gè)病原性損害是巨噬細(xì)胞抗原處理及/或呈遞。雖然已經(jīng)有了許多針對(duì)濾泡性淋巴瘤的治療方法而且最近在癌癥的生物治療試驗(yàn)上有所進(jìn)展，但是對(duì)淋巴瘤的治療仍沒(méi)有顯著的進(jìn)展。文獻(xiàn)同前，第1763頁(yè)。另外，迄今仍不知道通過(guò)調(diào)控APC中的抗體呈遞來(lái)治療淋巴瘤。
抑制不適當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)以及抑制及/或防止抗原的呈遞雖然可以有利于改善自身免疫紊亂、過(guò)敏性反應(yīng)以及移植排斥等，但卻有減弱免疫系統(tǒng)抗感染能力的缺點(diǎn)。因此，已知的治療免疫抑制反應(yīng)的治療通常是與施用藥劑同時(shí)進(jìn)行的，這些藥劑刺激吞噬細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞以及多形核白細(xì)胞(PMNs)吞噬細(xì)胞活性，以便抵抗其它的感染。尚未知道有一種療法可以在抑制抗原特異性免疫反應(yīng)的同時(shí)能刺激吞噬細(xì)胞活性。
最近已有人假設(shè)身體在免疫反應(yīng)過(guò)程中能夠控制伴隨著巨噬細(xì)胞激活的炎癥反應(yīng)的持續(xù)時(shí)間和嚴(yán)重程度的一個(gè)重要原因是存在有被“可選地激活”的巨噬細(xì)胞。Stein等人，(J.Exp.Med.176:287(1992))。不同的是，“經(jīng)典”的巨噬細(xì)胞激活是由干擾素-γ,INF-α、IL-12或細(xì)胞脂多糖誘導(dǎo)的。可選的途徑是由IL-4,IL-10 ，或IL-13誘導(dǎo)的，其特征在于AMAC-1基因被表達(dá)，生產(chǎn)MIP-4蛋白(巨噬細(xì)胞炎性蛋白-4)并減少發(fā)炎前細(xì)胞因子的分泌。見(jiàn)Kodelja等人，J.Immunol.160:1411(1998)；Schebesch等人，Immunology 92:478(1997)。被可選地激活的巨噬細(xì)胞已表明可以活躍地抑制由分裂素介導(dǎo)的淋巴細(xì)胞的增殖。同樣地，巨噬細(xì)胞激活的可選途徑被認(rèn)為是充當(dāng)了發(fā)炎前巨噬細(xì)胞反應(yīng)的一個(gè)重要的調(diào)制過(guò)程。確實(shí)，已有人假設(shè)被可選地激活的巨噬細(xì)胞在減弱過(guò)敏及自身免疫疾病中的炎癥的過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。
可被用于靜脈給藥的經(jīng)過(guò)化學(xué)穩(wěn)定的亞氯酸鹽的水溶液是已知的。已知還有其它的含氯溶液具有所報(bào)告的醫(yī)藥用途。例如，美國(guó)專利第5,019,402號(hào)公開(kāi)了一種含有二氧化氯，或者一種能釋放二氧化氯的亞氯酸鹽混合物、一種微呈酸性的緩沖液以及一種熱激活的糖類的溶液，這一溶液可被用于對(duì)貯存的血液成分進(jìn)行體外殺菌。然而，這一方法特別地不能適用于含有紅血球，即含有白血球，血小板，凝血因子及球蛋白的血液制品。對(duì)全血?jiǎng)t不進(jìn)行如上的消毒處理，大概是因?yàn)槎趸裙艏t血球的速度比攻擊靶向微生物體還要快。
DE-OS3213389，美國(guó)專利第4,507,285號(hào)以及美國(guó)專利第4,296,103號(hào)描述了經(jīng)化學(xué)穩(wěn)定的適用于外用及口服治療的亞氯酸鹽基質(zhì)。以這種方式除了可以治療各種不同的細(xì)菌感染以外，還可以對(duì)病毒感染，如單純皰疹及帶狀皰疹進(jìn)行外部治療。然而，這些文獻(xiàn)并沒(méi)有報(bào)導(dǎo)通過(guò)靜脈給予亞氯酸鹽基質(zhì)來(lái)抑制抗原特異性的免疫反應(yīng)。
歐洲專利EP0200157及美國(guó)專利第4,725,437號(hào)進(jìn)一步描述了一種用于靜脈或手術(shù)前后給藥的經(jīng)過(guò)化學(xué)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液。這一藥劑已被證明在白色念珠菌感染的治療中有效。由EP0200157中可知，可以把上述的經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽基質(zhì)在由寄生蟲、真菌、細(xì)菌、病毒及/或支原體造成的感染中進(jìn)行靜脈及/或局部給藥。這一作用被認(rèn)為是通過(guò)吞噬細(xì)胞的刺激來(lái)產(chǎn)生的，其中在感染不久后單次施用有效劑量的亞氯酸鹽復(fù)合物即可完成對(duì)吞噬細(xì)胞的刺激。在這些文獻(xiàn)中并沒(méi)有描述把免疫反應(yīng)往下調(diào)控以及抑制抗原特異性免疫反應(yīng)的方法；反之，其中所假定的通過(guò)巨噬細(xì)胞的刺激來(lái)產(chǎn)生作用的這一原理將導(dǎo)致相反的預(yù)測(cè)。
因此，急切需要一種對(duì)免疫反應(yīng)進(jìn)行修改的新方法。具體地，急需確定一種新的方法用以治療與不適當(dāng)抗原呈遞相關(guān)聯(lián)的疾病，如自身免疫疾病，移植排斥，以及系統(tǒng)性紅斑狼瘡，以及用以治療因?yàn)椴贿m當(dāng)?shù)木奘杉?xì)胞激活而產(chǎn)生慢性炎癥癥狀的疾病，如乙肝及丙肝，慢性肝炎，以及慢性阻塞性肺病。同樣，顯而易見(jiàn)通過(guò)防止抗原呈遞來(lái)治療淋巴增生性疾病的方法也是合乎需求的。
本發(fā)明的概述需要開(kāi)發(fā)一種方法，使其在通過(guò)抑制或防止抗原呈遞來(lái)抑制抗原特異性免疫反應(yīng)的同時(shí)，還刺激吞噬細(xì)胞的活性。因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種通過(guò)部分或完全阻斷抗原在抗原呈遞細(xì)胞上的呈遞來(lái)抑制免疫反應(yīng)的方法。本發(fā)明的另外一個(gè)目的是通過(guò)部分或完全阻斷抗原在抗原呈遞細(xì)胞上的呈遞來(lái)抑制細(xì)胞因子的釋放和被刺激的T細(xì)胞的增殖。本發(fā)明的另外一個(gè)目的是提供一種方法，使其在抑制抗原特異性免疫反應(yīng)的同時(shí)，還刺激吞噬細(xì)胞的活性。
依照本發(fā)明以上及其它的目的，提供了一種抑制免疫反應(yīng)的方法，包括施用含有有效抑制劑量的經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液，上述溶液含有一ClO2-含量為5至100mMol/L的等滲溶液。這一方法可以部分地或完全地阻斷抗原在抗原呈遞細(xì)胞包括特別是樹突細(xì)胞及巨噬細(xì)胞上的呈遞。
依照本發(fā)明的另外一個(gè)目的，提供了一種抑制不適當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)的方法，包括施用含有有效抑制劑量的亞氯酸鹽溶液，上述溶液含有一ClO2-含量為5至100mMol/L的等滲溶液。另外再依據(jù)本發(fā)明的另外一個(gè)目的，提供了一種治療自身免疫疾病的方法，包括抑制抗原在抗原呈遞細(xì)胞中的呈遞。這一目的可以通過(guò)給有需要的哺乳動(dòng)物施用一含有有效抑制劑量的亞氯酸鹽的溶液來(lái)實(shí)現(xiàn)，上述溶液含有一ClO2-含量為5至100mMol/L的等滲溶液。
具體地，提供了治療以下一組疾病的其中之一的多種方法重癥肌無(wú)力、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、血清疾病、I型糖尿病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、青少年風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕熱、斯耶格倫綜合癥、全身性硬化、脊椎關(guān)節(jié)病、萊姆病、結(jié)節(jié)病、自身免疫溶血、自身免疫肝炎、自身免疫中性白血球減少、自身免疫多腺疾病、自身免疫甲狀腺疾病、多發(fā)性硬化、炎癥性腸病、結(jié)腸炎、局限性回腸炎、慢性疲勞綜合癥。
依照本發(fā)明的另外一個(gè)目的，提供了一種抑制哺乳動(dòng)物移植器官或移植物排斥作用的方法，包括抑制抗原在抗原呈遞細(xì)胞中的呈遞。這一目的可以通過(guò)給有需要的哺乳動(dòng)物施用一含有有效抑制劑量的亞氯酸鹽的溶液來(lái)實(shí)現(xiàn)，上述溶液含有一ClO2-含量為5至100mMol/L的等滲溶液。
依照本發(fā)明的另外一個(gè)目的，提供了一種通過(guò)給患者施用治療有效劑量的經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸水溶液來(lái)治療以下一組疾病的其中一種疾病淋巴增生性疾病、乙肝、丙肝、慢性肝炎、以及慢性阻塞性肺病。
從下面的詳細(xì)描述中可以顯而易見(jiàn)地發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的其它目的、特征及優(yōu)點(diǎn)。然而應(yīng)該理解的是，這些詳細(xì)的描述和具體的實(shí)施例只是解釋性的代表了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，本領(lǐng)域技術(shù)人員在閱讀完這些詳細(xì)描述之后都可以很容易地在本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍內(nèi)作各種不同的變化和修改。
附圖的簡(jiǎn)要描述

圖1所示的是抗原呈遞細(xì)胞呈遞抗原以激活T細(xì)胞并引起免疫反應(yīng)或者沒(méi)能呈遞抗原從而導(dǎo)致無(wú)反應(yīng)性反應(yīng)的機(jī)制。
圖2所示的是本發(fā)明的亞氯酸鹽溶液抑制T細(xì)胞從經(jīng)異源混合白血球反應(yīng)刺激的樹突細(xì)胞增殖的效果。
圖3所示的是本發(fā)明的亞氯酸鹽溶液抑制T細(xì)胞從經(jīng)異源混合白血球反應(yīng)刺激的單核細(xì)胞增殖的效果。
圖4所示的是本發(fā)明的亞氯酸鹽溶液抑制可溶性抗原誘導(dǎo)的T細(xì)胞從樹突細(xì)胞增殖的效果。
圖5所示的是本發(fā)明的亞氯酸鹽溶液抑制可溶性抗原誘導(dǎo)的T細(xì)胞從單核細(xì)胞增殖的效果。
圖6所示的是在施用WF-10的患者中，CD14+/CD69+細(xì)胞數(shù)目/μl之間隨著時(shí)間的相互關(guān)系。
圖7所示的是在施用WF-10的患者中，CD14+/TNF細(xì)胞數(shù)目/μl隨著時(shí)間的相互關(guān)系。
圖8所示的是在施用WF-10的患者中，CD3+/CD8+/CD28-細(xì)胞數(shù)目/μl之間隨著時(shí)間的相互關(guān)系。
圖9所示的是在施用WF-10的患者中，CD3+/CD8+細(xì)胞數(shù)目/μl隨著時(shí)間的相互關(guān)系。
圖10所示的是在施用WF-10的患者中，以細(xì)胞數(shù)目/μl表示的吞噬細(xì)胞指數(shù)隨著時(shí)間的相互關(guān)系。
圖11所示的是在施用WF-10的患者中，CD14+/DR+細(xì)胞數(shù)目/μl隨著時(shí)間的相互關(guān)系。
圖12所示的是在對(duì)患有系統(tǒng)性紅斑狼瘡的患者用WF-10進(jìn)行治療后，抗體對(duì)應(yīng)于雙鏈DNA的減少情況。
本發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明提供了抑制患有與不適當(dāng)或過(guò)度的抗體呈遞相關(guān)聯(lián)的臨床疾病的患者的抗原呈遞的方法。該方法涉及給患者施用有效治療劑量的經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液，這一溶液足以抑制抗原的呈遞并減輕與臨床狀態(tài)相關(guān)聯(lián)的癥狀。具體地，本發(fā)明的方法對(duì)于防止移植排斥；治療自身免疫疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、淋巴增生性疾病(例如淋巴瘤)、以及與慢性炎癥相關(guān)聯(lián)的疾病是有用的。與慢性炎癥相關(guān)聯(lián)的疾病包括慢性肝炎、乙肝及丙肝、慢性阻塞性肺疾病、以及所有粘膜疾病中的炎癥(如局限性回腸炎及結(jié)腸炎)。
施用給患者以實(shí)現(xiàn)想得到的治療結(jié)果的經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽制劑的劑量取決于各種不同的因素，包括患者的體重和性別。根據(jù)體重、性別、及其它的代謝因素來(lái)調(diào)節(jié)所服用的劑量的方法在本領(lǐng)域中是公知的。所實(shí)現(xiàn)的具體的治療終點(diǎn)將因待治療疾病的病理學(xué)及癥狀的不同而不同，但是這些治療終在本領(lǐng)域中都是公知的。例如，乙肝和慢性永久性肝炎都伴隨有通過(guò)實(shí)驗(yàn)室研究即可發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)氨酶活性水平的顯著提高。亞氯酸鹽制劑的治療效力可以通過(guò)在治療前后對(duì)轉(zhuǎn)氨酶水平進(jìn)行測(cè)量來(lái)評(píng)估。類似地，患有系統(tǒng)性紅斑狼瘡的患者對(duì)應(yīng)于雙鏈DNA的抗體滴定度高，因此，在治療之后這一滴定度降低即顯示了治療的效力。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易理解的是，通過(guò)觀察患者所報(bào)告的癥狀的整體改善，而不需對(duì)臨床反應(yīng)進(jìn)行定量的測(cè)量，即可容易地確定臨床上的效益。類似地，在特定的實(shí)驗(yàn)室研究中未能發(fā)現(xiàn)有可測(cè)量的反應(yīng)并不能自然而然地排除在臨床上存在著顯著的效益。
在本發(fā)明的上下文中，本領(lǐng)域技術(shù)人員將可理解術(shù)語(yǔ)“有效抑制量”表示的是當(dāng)把一定量的溶液施用到患者體內(nèi)時(shí)，它將抑制抗原的呈遞，從而抑制T細(xì)胞的增殖。溶液的有效治療量指的是能夠在治療上顯著地減少所治療疾病的一種或多種癥狀，或者可以在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著地改善該疾病公認(rèn)的臨床標(biāo)志的數(shù)量。典型地，亞氯酸鹽溶液的有效抑制量介于大約0.1ml/kg至大約1.5ml/kg之間，優(yōu)選地，大約為0.5ml/kg體重，其濃度分別為含有大約40至80mMol/L ClO2-，優(yōu)選地含有大約60mMol/L的ClO2-。不受理論的約束，本發(fā)明申請(qǐng)者相信在治療特定疾病的過(guò)程中，上述的對(duì)抗原呈遞的影響與臨床所獲得的結(jié)果之間的關(guān)系意味著有效治療量與有效抑制量是相似的或相同的。
優(yōu)選地，本發(fā)明的亞氯酸鹽溶液每天給藥一次，持續(xù)大約3至7天，優(yōu)選地持續(xù)5天，然后休息10至20天，優(yōu)選地休息14至18天，更優(yōu)選地，休息16天，以構(gòu)成一個(gè)治療周期。優(yōu)選地，對(duì)患者進(jìn)行一次以上的治療，更優(yōu)選地，至少治療三個(gè)周期，最優(yōu)選地，至少治療五個(gè)療程。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，其它的服法也是可能的，而且可能實(shí)際上是優(yōu)選的。實(shí)施這類服法的方法是本領(lǐng)域所公知的。
例如，一種替代的治療服法包括通過(guò)靜脈給予本發(fā)明的經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液，一天一次，給藥五天，然后休息兩天(如在周未休息)，然后再給藥五天，接著休息一至四周，以構(gòu)成一個(gè)周期。優(yōu)選地，給患者治療一個(gè)周期以上，更優(yōu)選地，治療三個(gè)周期以上。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)所治療的疾病以及患者身材的大小，使用以下的指導(dǎo)原則對(duì)本發(fā)明的經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液的給藥方法進(jìn)行修改。
用含有經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液的水溶液治療創(chuàng)傷和感染在本領(lǐng)域中是公知的。美國(guó)專利第4,507,285及4,725,437號(hào)(這兩項(xiàng)發(fā)明所公開(kāi)的全部?jī)?nèi)容于此作為參照)以及EP0200157(該發(fā)明所公開(kāi)的全部?jī)?nèi)容也于此作為參照)描述了使用經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液來(lái)刺激人傷口的愈合反應(yīng)，以及用其來(lái)治療由寄生蟲、真菌、細(xì)菌、病毒及/或支原體引起的感染。Kuhne等人的歐洲專利第200156號(hào)(該發(fā)明所公開(kāi)的全部?jī)?nèi)容于此作為參照)描述了在放射治療的同時(shí)使用經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液以幫助修復(fù)被輻射損傷的組織及減少副作用。
治療被損傷的及/或被感染的組織的作用模式被認(rèn)為是涉及在有生物激活物如血紅素化合物參與的情況下，擴(kuò)增吞噬細(xì)胞的“氧化爆發(fā)”反應(yīng)。傷口的愈合以及所報(bào)導(dǎo)的感染的治療被認(rèn)為是通過(guò)巨噬細(xì)胞的激活來(lái)實(shí)現(xiàn)的，巨噬細(xì)胞接著激活成纖維細(xì)胞，后者刺激創(chuàng)傷的愈合反應(yīng)。經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液被認(rèn)為是通過(guò)與位于巨噬細(xì)胞膜中的血紅素部分形成復(fù)合物來(lái)激活巨噬細(xì)胞的。一旦被激活，巨噬細(xì)胞刺激成纖維細(xì)胞，后者接著產(chǎn)生膠原蛋白及內(nèi)皮細(xì)胞，后兩者對(duì)由創(chuàng)傷或感染造成的損傷組織的修復(fù)是有用的。
不受任何理論的約束，本發(fā)明者相信巨噬細(xì)胞是由經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液通過(guò)下列事件順序來(lái)刺激的。在有血紅素化合物(如血紅蛋白，肌紅蛋白，過(guò)氧化物酶，細(xì)胞色素，等等，它們存在于血清中，同時(shí)也是吞噬細(xì)胞如巨噬細(xì)胞細(xì)胞膜的一部分)存在的情況下，經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液變成一次要氧化劑，其氧化特性不同于亞氯酸鹽及過(guò)氧化氫。確切地，當(dāng)把本發(fā)明的經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液與等摩爾數(shù)的亞氯酸鹽溶液進(jìn)行比較時(shí)，可以發(fā)現(xiàn)它們存在顯著的藥物學(xué)差異。
本發(fā)明者進(jìn)而相信已知的通過(guò)使用本發(fā)明的亞氯酸鹽溶液來(lái)激活巨噬細(xì)胞從而使傷口愈合的機(jī)制同時(shí)也可刺激并增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬活性。因此，被刺激的巨噬細(xì)胞做好了吞咽、消化及除掉外來(lái)抗原的準(zhǔn)備。使用經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液來(lái)實(shí)施巨噬細(xì)胞的吞噬活性的方法描述于EP0200157中。
然而，在本發(fā)明之前還不知道經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液還可以抑制抗原特異性免疫反應(yīng)，并可同時(shí)增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的活性。不受任何理論的約束，本發(fā)明者相信當(dāng)把經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液施用給對(duì)其有需要的哺乳動(dòng)物時(shí)，它可以通過(guò)激活可選的巨噬細(xì)胞激活途徑來(lái)部分或完全阻止抗原呈遞細(xì)胞(APC)對(duì)抗原的呈遞。貫通全文，用語(yǔ)“抗原呈遞細(xì)胞”指的是可以呈遞抗原并誘發(fā)免疫反應(yīng)的細(xì)胞。使用的抗原呈遞細(xì)胞包括巨噬細(xì)胞和樹突細(xì)胞。在實(shí)施例中，用體外實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)說(shuō)明了施用經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液對(duì)抗原呈遞的抑制作用。
一個(gè)典型的免疫反應(yīng)包括刺激一巨噬細(xì)胞，被刺激的巨噬細(xì)胞把結(jié)合MHCⅠ及Ⅱ類細(xì)胞的抗原呈遞到表面，當(dāng)該抗原與T細(xì)胞受體相偶合時(shí)，將刺激T細(xì)胞(典型地是T細(xì)胞亞群如CD4或CD8細(xì)胞等)進(jìn)行增殖并生成細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)，后者隨即殺死表達(dá)抗原的細(xì)胞。在抗原呈遞之后且當(dāng)與T細(xì)胞受體相偶合時(shí)，被刺激的APC(巨噬細(xì)胞及等等)也分泌各種不同的細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子可以輔助CTLs的增殖。細(xì)胞因子，或稱生長(zhǎng)因子，是由性質(zhì)不同的細(xì)胞生產(chǎn)的激素樣肽類，它們能夠調(diào)控特定細(xì)胞類型的增殖、成熟及功能性激活。在此，細(xì)胞因子指的是性質(zhì)不同的一系列生長(zhǎng)因子，如造血細(xì)胞生長(zhǎng)因子(如紅細(xì)胞生成素，集落刺激因子及白細(xì)胞介素)、神經(jīng)系統(tǒng)生長(zhǎng)因子(如神經(jīng)膠質(zhì)生長(zhǎng)因子及神經(jīng)生長(zhǎng)因子)、大部分的間充質(zhì)生長(zhǎng)因子(如表皮生長(zhǎng)因子)、源于血小板的生長(zhǎng)因子、以及成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ，包括干擾素。
應(yīng)該理解有好幾種細(xì)胞因子參與誘導(dǎo)細(xì)胞分化和成熟，而且細(xì)胞因子可以有其它的生物學(xué)功能。在IL-1的情形中，可以有多種形式，如IL-1α及IL-1β，但是它們都有類似的生物學(xué)活性特征。那些主要與誘導(dǎo)細(xì)胞的分化及骨髓以及可能其它造血細(xì)胞的成熟相關(guān)聯(lián)的細(xì)胞因子包括，特別是IL-1、G-CSF、M-CSF、GM-CSF、多-CSF(IL-3)、以及IL-2(T細(xì)胞生長(zhǎng)因子，TCGF)。IL-1主要影響骨髓細(xì)胞，IL-2主要影響T細(xì)胞，IL-3影響多種淋巴細(xì)胞前體，G-CSF主要影響粒性白細(xì)胞及骨髓細(xì)胞，M-CSF主要影響巨噬細(xì)胞，GM-CSF影響粒性白細(xì)胞及巨噬細(xì)胞。其它的生長(zhǎng)因子影響未成熟的血小板(凝血細(xì)胞)細(xì)胞、類紅細(xì)胞等。
如圖1中所示，當(dāng)抗原被呈遞給一個(gè)具有正常的，或強(qiáng)健的免疫系統(tǒng)的患者時(shí)，一般會(huì)發(fā)生以下一系列事件。這一機(jī)制可以參考圖1左手側(cè)標(biāo)有“免疫反應(yīng)”的地方?？乖?或異物)被包裹在巨噬細(xì)胞的囊泡中，并被其分解成較小的抗原性肽段。一個(gè)MHCⅡ類分子把其中的一個(gè)較小的抗原性肽段運(yùn)輸?shù)骄奘杉?xì)胞的表面，并于此把該肽段呈遞給T細(xì)胞受體(TCR)。與細(xì)胞受體的結(jié)合觸發(fā)了激活因子及細(xì)胞因子(如IL-1,TNF等)的釋放，后者恢復(fù)巨噬細(xì)胞的自我防衛(wèi)并增強(qiáng)在細(xì)胞內(nèi)對(duì)異物的殺滅力。如果沒(méi)有結(jié)合，激活因子沒(méi)被釋放，巨噬細(xì)胞無(wú)法把異物分解為較小的肽段。如本文描述中所使用的，用語(yǔ)“抗原呈遞”因而表示把一拷貝到MHCⅡ類分子上的外來(lái)抗原呈遞到一APC的表面，然后與TCR結(jié)合的過(guò)程。
如上所述，可選的巨噬細(xì)胞激活途徑被認(rèn)為充當(dāng)了發(fā)炎前巨噬細(xì)胞反應(yīng)一個(gè)非常重要的調(diào)節(jié)因素，而且被可選地激活的巨噬細(xì)胞被認(rèn)為在減輕過(guò)敏性及自身免疫疾病的炎癥的過(guò)程中發(fā)揮重要作用。不受任何理論的約束，本發(fā)明者相信通過(guò)施用經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液來(lái)防止及/或抑制抗原呈遞的機(jī)制之一是通過(guò)可選的巨噬細(xì)胞激活途徑的激活。確切地，值得一提的是經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液對(duì)抗原呈遞的抑制時(shí)間(大概持續(xù)幾周的時(shí)間而不用進(jìn)一步用藥)，與被可選地激活的巨噬細(xì)胞中MIP-4表達(dá)的持續(xù)時(shí)間接近平行，MIP-4在延長(zhǎng)的一段時(shí)間內(nèi)也保持提高的水平。MIP-4表達(dá)這一延長(zhǎng)的時(shí)間表明巨噬細(xì)胞也保持激活狀態(tài)并可以在整個(gè)激活期間發(fā)揮消炎的作用。
預(yù)先已知的防止T細(xì)胞增殖的治療方法典型地是在細(xì)胞因子刺激之后對(duì)細(xì)胞毒性T細(xì)胞進(jìn)行作用。例如，環(huán)孢菌素A被認(rèn)為是作用于細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞上(如圖1的左下部所示)以防止T細(xì)胞的增殖。然而此時(shí)APC已經(jīng)釋放了細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子可能會(huì)協(xié)助CTL的增殖。因此，必須施用大量的這些藥物以防止CTL的增殖。然而，尚沒(méi)有可以阻止免疫反應(yīng)的公知方法，其中對(duì)APC或TCR進(jìn)行某種形式的影響以使其部分或完全地中斷APC與T細(xì)胞之間抗原呈遞的相互關(guān)系。
因?yàn)槊庖叻磻?yīng)不恰當(dāng)而導(dǎo)致患者患上自身免疫疾病及由不恰當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)造成的疾病，如重癥肌無(wú)力、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、血清疾病、Ⅰ型糖尿病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、青少年風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕熱、斯耶格倫綜合癥、全身性硬化、脊椎關(guān)節(jié)病、萊姆病、結(jié)節(jié)病、自身免疫溶血、自身免疫肝炎、自身免疫中性白血球減少、自身免疫多腺疾病、自身免疫甲狀腺疾病、多發(fā)性硬化、炎癥性腸病、結(jié)腸炎、局限性回腸炎、慢性疲勞綜合癥，等等。慢性阻塞性肺病(COPD)也可能會(huì)有一些自身免疫的病因?qū)W，至少于一些患者中如此。當(dāng)發(fā)生自身免疫反應(yīng)時(shí)，患者的身體產(chǎn)生太多的CTL，或其它的細(xì)胞因子，后者反過(guò)來(lái)攻擊身體自己的健康細(xì)胞并把其毀壞。在移植后的患者中產(chǎn)生不恰當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)是因?yàn)槊庖呦到y(tǒng)把被移植的器官或移植物的抗原當(dāng)成外來(lái)的，從而把其毀壞。其結(jié)果就是移植物排斥作用。類似地，接受移植后的患者會(huì)發(fā)生一移植物對(duì)抗宿主的反應(yīng)，此時(shí)被移植的器官或移植物的免疫系統(tǒng)把宿主的抗原識(shí)別為外來(lái)的并把其毀壞。其結(jié)果是導(dǎo)致移植物對(duì)抗宿主的疾病。其它的不恰當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)見(jiàn)于過(guò)敏性哮喘，過(guò)敏性鼻炎及異位性皮炎中。
另外，出現(xiàn)慢性炎癥的疾病也涉及不恰當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)，其特征在于巨噬細(xì)胞的過(guò)度激活。例如，對(duì)組織損割(如物理創(chuàng)傷)或病原生物體(如細(xì)菌或病毒)感染的健康反應(yīng)包括巨噬細(xì)胞的激活(通過(guò)“常規(guī)的”發(fā)炎前途徑)并導(dǎo)致炎癥反應(yīng)。然而，這一反應(yīng)可能會(huì)不恰當(dāng)?shù)剡^(guò)度表現(xiàn)，從而導(dǎo)致慢性炎癥(如果發(fā)炎前免疫反應(yīng)未能被抑制的話)。諸如乙肝及丙肝、慢性肝炎、以及COPD表現(xiàn)(如阻塞性支氣管炎及肺氣腫，它們顯然是因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間暴露于非特異性支氣管及肺部刺激物中而導(dǎo)致的)這些疾病的特征是由巨噬細(xì)胞的過(guò)度激活所引起的慢性炎癥(在肝炎中是肝發(fā)炎，在COPD中是肺部組織發(fā)炎)。
自身免疫疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡，以及移植排斥的常規(guī)治療方法使用細(xì)胞毒性劑，特別是那些影響淋巴系統(tǒng)(特別是抑制T細(xì)胞增殖的)細(xì)胞毒性劑。這些細(xì)胞毒性藥物與那些經(jīng)常用于癌癥化學(xué)治療的是類似的，并且公知的對(duì)骨髓及其它的造血部位有副作用。除了這些藥物以外還有一些特定的抗淋巴細(xì)胞特別是T細(xì)胞的抗體，也已被用作免疫抑制劑。例如，Uchiyama等人(J.Immunol.126:1393至1398(1981))描述了一種抗Tac的單克隆抗體，它特異性地結(jié)合在被激活的T細(xì)胞的人IL-2受體上，并可與細(xì)胞毒性劑，如藥物、毒素、或放射性同位素相接合以便相對(duì)較有選擇性地殺滅那些與器官排斥有關(guān)的細(xì)胞。這種抗體可以與β-或α-放射性同位素相接合，并可以在器官移植之前，以及如果需要，在移植之后施用給患者?？梢杂煤薪?jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液的水溶液替代上述的藥劑?？蛇x地，也可以把經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液與常規(guī)的免疫抑制劑結(jié)合使用。
給哺乳動(dòng)物施用含有經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液的水溶液可以在抑制抗原特異性免疫反應(yīng)的同時(shí)完全不危害到免疫系統(tǒng)，因?yàn)檫@一溶液也可以有效地增強(qiáng)吞噬細(xì)胞活性。因此，本發(fā)明包括用以治療自身免疫疾??；防止移植器官或移植物的排斥以及由此造成的膿毒性休克；以及減少不恰當(dāng)免疫反應(yīng)，如過(guò)度炎癥或過(guò)敏反應(yīng)的方法。由于已有其它公知的治療這些失調(diào)癥的方法，所以本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠根據(jù)本文所提供的方針，通過(guò)施用一有效抑制量的含有經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液的水溶液來(lái)對(duì)已知的技術(shù)進(jìn)行修改。例如，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以設(shè)計(jì)用于治療任何一種上述失調(diào)癥的方法，通過(guò)使用本發(fā)明的經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液并改變劑量、給藥頻率、或給藥方式進(jìn)行治療。
本發(fā)明治療方法的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案需要給有需要的哺乳動(dòng)物施用一種稱為“四氯十氧陰離子復(fù)合物”(通常縮寫為“TCDO”)的產(chǎn)品的水溶液。這種物質(zhì)可以使用實(shí)施例1(美國(guó)專利第4,507,285號(hào)(“285”號(hào)專利))中所描述的步驟進(jìn)行制備，它是一種清澈的水溶液，易與醇類相混合，其熔點(diǎn)為-3℃。拉曼光譜顯示403,802的條帶(亞氯酸鹽)以及1562cm-1(被激活的氧)。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該認(rèn)識(shí)到任何一種經(jīng)過(guò)化學(xué)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液都可以被用于本發(fā)明的方法中，而且也應(yīng)認(rèn)識(shí)到本發(fā)明的范圍并不局限于使用“285”專利中所描述的產(chǎn)品。
經(jīng)過(guò)上面綜合的描述之后，通過(guò)參照下列的實(shí)施例可以更容易地理解本發(fā)明。下列實(shí)施例是示范性的，并不是本發(fā)明的局限。在實(shí)施例中，“WF10”指的是經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽水溶液。
WF10對(duì)由樹突細(xì)胞(DC)刺激的異源(allogeneic)MLR的影響樹突細(xì)胞、T細(xì)胞及單核細(xì)胞是用Fagnoni等人所描述的方法獲得的。為了評(píng)估WF10對(duì)DC依賴性T細(xì)胞激活的影響，在DC中有及沒(méi)有WF10存在的情形中用異源MLR激活新鮮分離的CD4+T細(xì)胞。在含有200μl完全培養(yǎng)基的U形底96孔板中把經(jīng)過(guò)純化的靜息CD4+T細(xì)胞(5-10×10+/孔)與經(jīng)過(guò)照射(25Gy)的外源DC一起培養(yǎng)。在37℃,8％CO2以及濕潤(rùn)的空氣中維持5天。在收獲前19小時(shí)，用1μCi脈沖輸送[3H]胸腺嘧啶脫氧核苷(6-7Ci/mm,New EnglandNuclear,Boston MA)。將增殖細(xì)胞所結(jié)合的[3H]胸腺嘧啶脫氧核苷用閃爍計(jì)數(shù)器進(jìn)行測(cè)量。把WF10加入到由DC刺激的異源MLR DC中并在4℃保溫約3分鐘，然后加入CD4+T細(xì)胞:在不使用WF10的樣品中增殖的T細(xì)胞的數(shù)目以及在使用WF10的樣品中增殖的T細(xì)胞的數(shù)目示于圖2中。圖2中所示的結(jié)果是一式四份的培養(yǎng)基的平均值±SEM，數(shù)據(jù)代表的是四次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
如圖2中所示，對(duì)由DC刺激的異源MLR產(chǎn)生反應(yīng)的CD4+T細(xì)胞以依賴于劑量的形式由WF10所抑制。在時(shí)間0把劑量為25μg/ml或50μg/ml的WF10加入到培養(yǎng)基中。如圖2中所示，顯然每個(gè)孔中樹突細(xì)胞(DC)的數(shù)目增加了，CPM+SE(每分鐘的計(jì)數(shù)+標(biāo)準(zhǔn)偏差)的數(shù)目大致保持不變，其中WF10/1600達(dá)到最大程度的抑制效果。用語(yǔ)WF10/數(shù)目代表的是WF10的稀釋倍數(shù)，同時(shí)表示每毫升溶液中所含的WF10的數(shù)量。例如，WF10/1600代表的是每1600毫升溶液含有1毫升WF10的WF10稀釋液。
因此，實(shí)施例1及2中的結(jié)果示明WF10可以有效地抑制從由外源MLR刺激的DC及單核細(xì)胞中增殖CD4+細(xì)胞。
在自體的DC中加入鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH)以及破傷風(fēng)毒素(TT)。在不加WF10，加入WF10/200以及WF10/800 (分別代表在時(shí)間0在培養(yǎng)基中加入0、1ml/200ml以及1ml/800ml的WF10溶液)以確定在DC沒(méi)有呈遞抗原、TT、KLH25(25μg/ml)以及KLH50(50μg/ml)時(shí)CD4+T細(xì)胞的增殖情況。在沒(méi)有使用WF10以及使用了WF10的樣品中所增殖的T細(xì)胞的數(shù)目示于圖4中。圖4中所示的結(jié)果代表的是一式四份的培養(yǎng)基的平均值±SEM，數(shù)據(jù)代表的是四次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
如圖4中所示，當(dāng)DC呈遞可溶性抗原KLH及TT時(shí)，CD4+T細(xì)胞有顯著的增殖。然而，WF10的給藥，在DC呈遞KLH或TT時(shí)，幾乎完全抑制了CD4+T細(xì)胞的增殖。
通過(guò)施用含有經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液的水溶液所獲得的結(jié)果揭示了它可以抑制抗原特異性免疫反應(yīng)。已有報(bào)導(dǎo)指出施用含有經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液的水溶液可以有效地增強(qiáng)吞噬活性。因此，現(xiàn)在可以通過(guò)僅施用一種藥物來(lái)在抑制一種類型免疫反應(yīng)(抗原呈遞及T細(xì)胞增殖)的同時(shí)增強(qiáng)另外一種類型的免疫反應(yīng)(吞噬作用)。
在18名患者中都沒(méi)有觀察到副作用。匯總了八名患者的數(shù)據(jù)并列于下表中，并在圖6-13中進(jìn)行解釋。用流式細(xì)胞儀(FACSCAN，如由Becton-Dickinson所推薦的)測(cè)得的下列與藥物施用有關(guān)的參數(shù)有急劇的增加，這些參數(shù)為CD-4,CD-8,CD14+/CD69+,CD14+/側(cè)散，CD20/DR+細(xì)胞，它們的變化通常在給藥后兩周內(nèi)返回到接近基線。有幾個(gè)數(shù)值貫穿整個(gè)研究過(guò)程一直在升高，在研究終點(diǎn)沒(méi)有顯示下降的趨勢(shì)，它們可能代表那些由WF-10誘導(dǎo)的長(zhǎng)期變化。這些變化包括巨噬細(xì)胞吞噬作用指數(shù)的升高以及T細(xì)胞CD3+/CD8+/CD28-亞群的增加。
在下列類別中有潛在的下降趨勢(shì)巨噬細(xì)胞胞內(nèi)TNF-α分泌，以及循環(huán)中CD14+/DR+細(xì)胞數(shù)目的減少。已有報(bào)導(dǎo)指出當(dāng)循環(huán)中的CD14+/DR+細(xì)胞下降到閾值時(shí)，將導(dǎo)致免疫癱瘓。T細(xì)胞PHA激活值或HIV負(fù)荷(由HIV bDNA化驗(yàn)測(cè)得)沒(méi)有明顯變化(大部分患者在整個(gè)研究過(guò)程中測(cè)不到HIV)。RBC存活研究的結(jié)果顯示并沒(méi)有因?yàn)閷?duì)治療產(chǎn)生反應(yīng)而導(dǎo)致溶血。
如圖6中所示，WF10的給藥導(dǎo)致CD14+/CD69+細(xì)胞的增加，在輸注后立即有戲劇性的增加。圖7顯示在施用WF10之后CD14+/TNF分泌減少，從而表明經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液可以有效地減少腫瘤壞死因子細(xì)胞因子的分泌。
圖8及9顯示給患者體內(nèi)施用WF10導(dǎo)致CD3+/CD8+數(shù)目的穩(wěn)定增加以及CD3+/CD8+/CD28-T細(xì)胞數(shù)目的穩(wěn)定增加。上述的體外實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示用CD4+T細(xì)胞來(lái)抑制抗原的呈遞，而圖8及9則顯示循環(huán)中CD28-T細(xì)胞(CD3+T細(xì)胞)數(shù)目的增加。圖10顯示在施用WF10之后吞噬作用指數(shù)的升高。圖11顯示在施用WF10之后，因?yàn)镃D4+/DR+細(xì)胞的減少而導(dǎo)致免疫功能的減少。這樣，本發(fā)明者相信本發(fā)明的經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液可以增強(qiáng)吞噬作用，而且同時(shí)可以減弱或抑制由細(xì)胞介導(dǎo)的及體液免疫反應(yīng)。
列于下表中的結(jié)果概括了15個(gè)患者的結(jié)果并顯示了所測(cè)量的各種不同參數(shù)在治療的第8天至第47天之間的變化。第8天代表施用WF10的第一天，因?yàn)橹委煹那?天致力于對(duì)患者進(jìn)行評(píng)估。
*單向p-值，從15個(gè)患者取樣，使用Wilcoxon秩統(tǒng)計(jì)量。
這些數(shù)據(jù)顯示在人體內(nèi)施用WF10可使CD8+T細(xì)胞的CD28-亞群的產(chǎn)量增加。數(shù)據(jù)同時(shí)還顯示巨噬細(xì)胞激活的增加導(dǎo)致吞噬作用。數(shù)據(jù)進(jìn)而顯示沒(méi)有RBC溶血的跡象。結(jié)合顯示抑制抗原呈遞給CD4+細(xì)胞的體外研究，可以相信在體內(nèi)施用WF-10可抑制及/或防止抗原在APC中的呈遞，并且可以刺激巨噬細(xì)胞的激活，從而增強(qiáng)吞噬作用。
從患有低級(jí)濾泡性淋巴瘤的成年患者中根據(jù)他們接受此種治療的情況進(jìn)行挑選。在治療前用CT掃描確定患者淋巴結(jié)的尺寸，選出15名淋巴結(jié)直徑大于1cm的患者進(jìn)行公開(kāi)標(biāo)記，單臂(Singlt arm)，單心(Single center)的研究?；颊咴诘?至5天(第一周)及第8至12天(第二周)定期輸注0.5ml/mgWR10。在篩選評(píng)估完成后(大約14天后)在第0周對(duì)符合條件的患者進(jìn)行研究前調(diào)查以獲得基線數(shù)據(jù)。
篩選標(biāo)準(zhǔn)包括十八歲以上的男女患者；已通過(guò)組織學(xué)方法確定為濾泡性淋巴瘤的；可測(cè)量的疾病，定義為通過(guò)CT測(cè)量，其淋巴結(jié)直徑大于1cm的；足夠的腎功能，由血清肌酸酐＜2倍制度上的ULN證明；足夠的肝功能，由血清肝血素≤1.5mg/gl及SGOT(AST)或SGPT(ALT)＜5倍制度上的正常上限(ULN)證明；參加這一研究并愿意遵從所有步驟及預(yù)訂調(diào)查的書面允諾；女性血紅蛋白＞9.0g/dl，男性血紅蛋白＞10.0g/dl；血小板計(jì)數(shù)＞75,000/mm2；以及嗜中性粒細(xì)胞絕對(duì)計(jì)算＞750/mm2。
按照0.5ml/kg體重的劑量把WF 10稀釋到250至500ml正常的生理鹽水中，然后靜脈輸注1小時(shí)。在第0周、第15、30及45天用CT測(cè)量以確定腫瘤的尺寸。隨后持續(xù)3個(gè)月，最后在第90天用CT進(jìn)行最終測(cè)量。
CT的測(cè)量結(jié)果揭示了施用WF 10可使淋巴結(jié)的尺寸減少?；颊叩腃D3+/CD8+/CD28-增加，CD14+/DR+以及CD40T細(xì)胞亞群也增加。
雖然已經(jīng)參照實(shí)施例及具體的優(yōu)選實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種不同的修改而不致脫離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍。所有上面提到的文獻(xiàn)都作為參照結(jié)合于本文中。于1997年10月6日提交的美國(guó)臨時(shí)專利60/060,953中說(shuō)明書的全部具體內(nèi)容特別地作為參照結(jié)合于本文中，上述臨時(shí)專利已經(jīng)根據(jù)USC§119提出利益要求。
權(quán)利要求
1．一種抑制哺乳動(dòng)物中抗原特異性免疫反應(yīng)的方法，包括給所述的哺乳動(dòng)物施用一有效抑制量的經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液的步驟，由此抗原呈遞細(xì)胞對(duì)抗原的呈遞被部分或完全阻斷。
2．如權(quán)利要求1中所述的方法，其中抗原呈遞細(xì)胞是樹突細(xì)胞。
3．如權(quán)利要求1中所述的方法，其中抗原呈遞細(xì)胞是巨噬細(xì)胞。
4．如權(quán)利要求1中所述的方法，其中抗原特異性免疫反應(yīng)是一抗原受體誘導(dǎo)的T細(xì)胞反應(yīng)。
5．一種治療自身免疫疾病的方法，包括給有此需要的哺乳動(dòng)物施用有效治療量的含有經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液的組合物。
6．如權(quán)利要求5中所述的方法，其中施用所述經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液導(dǎo)致部分或完全地阻斷了抗原呈遞細(xì)胞對(duì)抗原的呈遞。
7．如權(quán)利要求6中所述的方法，其中抗原呈遞細(xì)胞是樹突細(xì)胞。
8．如權(quán)利要求6中所述的方法，其中抗原呈遞細(xì)胞是巨噬細(xì)胞。
9．如權(quán)利要求6中所述的方法，其中施用經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液導(dǎo)致抗原特異性免疫反應(yīng)的抑制。
10．如權(quán)利要求9中所述的方法，其中抗原特異性免疫反應(yīng)是一抗原受體誘導(dǎo)的T細(xì)胞反應(yīng)。
11．如權(quán)利要求5中所述的方法，其中所述的疾病選自以疾病組成的組重癥肌無(wú)力、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、血清疾病、Ⅰ型糖尿病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、青少年風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕熱、斯耶格倫綜合癥、全身性硬化、脊椎關(guān)節(jié)病、萊姆病、結(jié)節(jié)病、自身免疫溶血、自身免疫肝炎、自身免疫中性白血球減少、自身免疫多腺疾病、自身免疫甲狀腺疾病、多發(fā)性硬化、炎癥性腸病、結(jié)腸炎、局限性回腸炎、慢性疲勞綜合癥。
12．如權(quán)利要求11中所述的方法，其中上述的疾病是系統(tǒng)性紅斑狼瘡。
13．一種抑制器官移植排斥反應(yīng)的方法，包括給有此需要的哺乳動(dòng)物施用一有效抑制量的含有經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液的組合物的步驟。
14．如權(quán)利要求13中所述的方法，其中施用所述經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液導(dǎo)致部分或完全地阻斷了抗原呈遞細(xì)胞對(duì)抗原的呈遞。
15．如權(quán)利要求14中所述的方法，其中抗原呈遞細(xì)胞是樹突細(xì)胞。
16．如權(quán)利要求14中所述的方法，其中抗原呈遞細(xì)胞是巨噬細(xì)胞。
17．如權(quán)利要求13中所述的方法，其中施用經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液導(dǎo)致抗原特異性免疫反應(yīng)的抑制。
18．如權(quán)利要求17中所述的方法，其中抗原特異性免疫反應(yīng)是一抗原受體誘導(dǎo)的T細(xì)胞反應(yīng)。
19．一種減輕伴隨著可誘導(dǎo)不恰當(dāng)免疫反應(yīng)的疾病的炎癥的方法，包括給有此需要的患者施用一有效治療量的含有經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液的組合物的步驟。
20．如權(quán)利要求19中所述的方法，其中所述的疾病選自以下疾病組成的組乙肝、丙肝、慢性肝炎、以及慢性阻塞性肺病。
21．如權(quán)利要求20中所述的方法，其中上述的疾病是乙肝。
22．如權(quán)利要求20中所述的方法，其中上述的疾病是丙肝。
23．如權(quán)利要求20中所述的方法，其中上述的疾病是慢性肝炎。
24．如權(quán)利要求20中所述的方法，其中上述疾病是慢性阻塞性肺病。
25．一種治療淋巴增生性疾病的方法，包括給患有所述疾病的患者施用一有效治療量的含有經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液的組合物的步驟。
26．如權(quán)利要求25中所述的方法，其中所述的淋巴增生性疾病是淋巴瘤。
全文摘要
本文公開(kāi)了一種使用經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸溶液來(lái)抑制抗原特異性免疫反應(yīng)的方法。當(dāng)把經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液施用給對(duì)其有需要的哺乳動(dòng)物時(shí),它可以防止抗原呈遞細(xì)胞對(duì)抗原的呈遞。因此,經(jīng)過(guò)穩(wěn)定的亞氯酸鹽溶液在治療,特別是,自身免疫疾病的過(guò)程中,在治療由不適當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)造成的疾病的過(guò)程中,在治療淋巴增生性疾病以及在抑制移植患者的排斥反應(yīng)的過(guò)程中,是有用的。
文檔編號(hào)A61P37/06GK1306433SQ98811885
公開(kāi)日2001年8月1日 申請(qǐng)日期1998年10月6日 優(yōu)先權(quán)日1997年10月6日
發(fā)明者F·W·庫(kù)尼, M·麥格拉斯, E·G·恩格萊曼 申請(qǐng)人:奧克索化學(xué)有限公司