專利名稱：：開發(fā)、測(cè)試和使用用于改進(jìn)的有效負(fù)載和可控制性解締/締合速度的大分子和復(fù)合聚集體...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及當(dāng)與液體介質(zhì)接觸時(shí)表現(xiàn)出兩親性性質(zhì)并且能形成擴(kuò)展表面、尤其是膜類表面的物質(zhì)的復(fù)合體。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及分子水平上的其它兩親性物質(zhì)與這類表面的締合作用，從而這類其它兩親性表面締合的物質(zhì)典型地是具有重復(fù)亞單元的較大分子，例如寡聚物和聚合物，并且經(jīng)常是源于生物活性劑類。本發(fā)明進(jìn)一步涉及制備這類表面的方法和在這類較大分子和表面之間產(chǎn)生締合物的方法以及這類表面和締合物的各種用途。兩親性鏈分子和相關(guān)的大分子，例如蛋白質(zhì)吸附到任何類型的表面上，但是以不同的量相吸附，并且大多數(shù)情況下，以不同的構(gòu)象吸附。本發(fā)明描述了現(xiàn)有技術(shù)并且提供了一種新的優(yōu)化和控制大分子與軟的復(fù)合體表面締合的理論基礎(chǔ)。這對(duì)于將來(lái)的生物學(xué)、生物技術(shù)、藥學(xué)、治療和診斷應(yīng)用應(yīng)該是有價(jià)值的。(大)分子吸附／結(jié)合到一種吸附劑表面(吸附劑／吸附物締合作用)是多步驟過(guò)程ⅰ)第一步包括吸附物在吸附劑／溶液界面處的重分配，優(yōu)選累積。該步驟一般快而且擴(kuò)散速度可控制。ⅱ)在第二步驟中，吸附物分子與軟(膜)表面疏水性締合。該過(guò)程包括幾個(gè)階段，例如部分分子結(jié)合和順序重排，它們中至少一些經(jīng)常是慢的。有人提出(Cevc，G．，Strohmaier，L．，Berkholz，J．，Blume，G．生物物理研究(Stud．Biophys．)1990，13857ff)通過(guò)鄰近界面減小大分子特異性結(jié)合到包埋在“軟”脂質(zhì)膜中的連接表面的配體上的可能性。這似乎是由于相同的非庫(kù)侖水合作用-依賴性力，其還防止相鄰脂質(zhì)膜彼此膠體破裂?？偟漠a(chǎn)生的力隨著脂質(zhì)-溶液界面的親水性和勁度的降低而降低(Cevc，G．，Hauser，M．，Kornyshev，A．A．Langmuir1995，113103-3110)。以前還推測(cè)蛋白質(zhì)非特異性吸附到脂質(zhì)雙層上的程度(Cevc，等．，在所引的書中，1990)與對(duì)膜中蛋白質(zhì)的疏水性結(jié)合位點(diǎn)的可得性成正比。發(fā)現(xiàn)在脂雙層機(jī)械(例如通過(guò)超聲)產(chǎn)生缺陷或者通過(guò)誘導(dǎo)脂質(zhì)相過(guò)渡會(huì)增加膜結(jié)合蛋白質(zhì)的量。一般認(rèn)為，表面疏水程度越大，兩親性大分子吸附程度就越大。例如，K．Prime和G．M．Whitesides，(科學(xué)(Science)，1991，2521164-1167)證明了該“規(guī)則”或“原理”，其使用自己設(shè)計(jì)的帶有不同疏水性端基的單層的長(zhǎng)鏈烷烴通過(guò)疏水性氨基酸結(jié)合來(lái)系統(tǒng)性改變蛋白質(zhì)的吸附。迄今，“疏水性引力”因此被認(rèn)為是蛋白質(zhì)吸附中的主要力。另一方面，普遍接受浸在中性pH水溶液中的親水性大分子例如蛋白質(zhì)和親水性表面，例如玻璃或蒙脫石粘土之間的凈宏觀相互作用被強(qiáng)的斥力控制。因此，在可應(yīng)用范德瓦耳斯、路易斯酸-堿和電子雙層相互作用的宏觀規(guī)模規(guī)則條件下，親水性蛋白質(zhì)吸附到親水性礦物表面上的作用通常是弱的(H．Quiquampoix等，蛋白質(zhì)吸附到土壤礦物表面上的機(jī)理和結(jié)果，界面蛋白質(zhì)(PAI)，第23章，T．A．Horbett和J．L．Brash編著，ACS論文系列602，1995，紐約321-333)。即使比它們吸附到疏水性表面更稀少，但是一些親水性蛋白質(zhì)確實(shí)吸附到溶液中的玻璃上；這樣的蛋白質(zhì)還可吸附到蒙脫石粘土表面上。為了解釋這種重要的現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)提示和支持通過(guò)結(jié)合到帶(負(fù))電荷親水性蛋白質(zhì)的多價(jià)抗衡離子(例如鈣)，蛋白質(zhì)能夠結(jié)合浸在含水介質(zhì)中的相等(例如負(fù)的)帶電荷的親水性礦物表面上。其它難以理解的電荷作用涉及氫鍵的形成，蛋白質(zhì)成鹽，和抗衡離子的結(jié)合。例如，有人提出“蛋白質(zhì)分子中的結(jié)構(gòu)重排，吸著劑表面的脫水，帶電荷基團(tuán)的重分配和蛋白質(zhì)表面極性”都可能影響蛋白質(zhì)吸附(Haynes，C．A．等，膠體表面B生物界面，2，1994517-566)。與此相一致，庫(kù)侖相互作用盡管重要，但是其一般不控制蛋白質(zhì)對(duì)固體表面的吸附，正如在蛋白質(zhì)載有大量?jī)糌?fù)電荷條件下α-LA(α-乳清蛋白)對(duì)PS(聚苯乙烯)強(qiáng)吸附的情況。另一項(xiàng)近期研究承認(rèn)“迄今為止關(guān)于電荷對(duì)蛋白質(zhì)吸附的作用的程度沒有明確的一致意見”(蛋白質(zhì)吸附的可逆性和機(jī)理，W．Norde和C．Haynes，第2章(PAI)，在所引的書中26-40)。對(duì)于軟表面，例如膜，目前流行的觀點(diǎn)是至少蛋白質(zhì)吸附中的第一步是靜電驅(qū)動(dòng)和／或電荷控制的(參見例如Deber，C．M．；Hughes，D．W．；Frasez，P．E．；Pawagi，A．B．；Moscarello，M．A．，Arch．Biochem．Biophys．1986，245455-463；Zimmerman，R．M．，Schmidt，C．F．，Gaub，N．H．E．J．ColloidInt．Sci．1990，139268-280；Hernandez-Casedis，T．；Villalaain，J．；Gomez-Fernandez，J．C．Mol．Cell．Biochem．1993，120119-126)。先導(dǎo)的專家還得出結(jié)論靜電力對(duì)于分泌型磷脂酶對(duì)各種脂質(zhì)聚集體的結(jié)合是關(guān)鍵的(Scott，D．L．；Mandel，A．M．；Sigler，P．B．；Honig，B．Biophys．J．1994，67493-504)。至今，技術(shù)人員相信最終蛋白質(zhì)吸附的主決定因素是疏水性引力，而與在其吸附期間蛋白質(zhì)構(gòu)象變化引起的熵的增加結(jié)合的離子相互作用也起一些作用。蛋白質(zhì)一般強(qiáng)吸附到帶相反電荷的表面上，而不吸附到具有相同電荷的表面上。蛋白質(zhì)吸附的pH依賴性反映該事實(shí)。電荷作用有時(shí)能被“潛伏”因子所混淆，例如小多價(jià)抗衡離子，其能通過(guò)一般預(yù)期相互排斥的相同電荷橋接蛋白質(zhì)和表面位點(diǎn)。被吸附的蛋白質(zhì)的最后構(gòu)象很少與起始構(gòu)象相同。這就是為什么蛋白質(zhì)吸附的大多數(shù)模型引起可逆吸附狀態(tài)向更緊密保持狀態(tài)過(guò)渡，其是表面上蛋白質(zhì)的分子重構(gòu)或松弛的結(jié)果所引起的。在吸附時(shí)大分子的重排經(jīng)常是災(zāi)難性的并以蛋白質(zhì)變性而終結(jié)。從酶和抗體在吸附狀態(tài)保持至少一些其生物活性和生物活性強(qiáng)烈依賴于天然結(jié)構(gòu)的保持的事實(shí)，能夠得出結(jié)論被吸附的蛋白質(zhì)構(gòu)象的變化經(jīng)常受時(shí)間和范圍的限制。蛋白質(zhì)折疊最強(qiáng)烈地受到疏水性相互作用的影響。兩種現(xiàn)象，即蛋白質(zhì)結(jié)合和構(gòu)象變化，對(duì)某些兩親性物質(zhì)例如表面活性劑和磷脂的存在敏感。相信蛋白質(zhì)吸附通過(guò)加入這樣的分子而減弱或逆反。因此，為了減少非特異性蛋白質(zhì)吸附和損失，蛋白質(zhì)往往在蛋白質(zhì)分離期間與表面活性劑混合。在一項(xiàng)特殊研究中，蛋白質(zhì)的吸附隨著接枝的Pluronic表面活性劑的表面濃度增加而降低至可忽略水平。表面活性劑的單體側(cè)鏈中亞乙基-二醇(EG)單元的數(shù)目是4，9和24，帶有最小數(shù)目EG單元(4)的單體對(duì)血液成分最具“惰性”(AnalysisofthePreventionofProteinAdsorptionbyStericRepulsionTheory，T．B．McPherson等，28章，PAI，在所引的書中395-404)。增大界面厚度和親水性，從而降低下面的疏水位點(diǎn)的可得性的共價(jià)連接到表面上的短聚合物表現(xiàn)出降低蛋白質(zhì)結(jié)合改性的表面和在改性的表面變性的可能性。在一個(gè)末端通常也包含一短的聚合物片段的表面活性劑趨向于對(duì)立或者甚至部分反轉(zhuǎn)蛋白質(zhì)對(duì)于各種表面的結(jié)合的事實(shí)與上述發(fā)現(xiàn)相一致。該現(xiàn)象可能涉及蛋白質(zhì)的增溶作用或置換，這取決于表面活性劑-表面的相互作用和表面活性劑-蛋白質(zhì)結(jié)合的相對(duì)強(qiáng)度；通常這兩種因素都起一些作用。在另一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，向pH7．0水相以大約10-4wt％范圍的濃度加入Brij型非離子表面活性劑(烷基聚氧乙烯醚)誘導(dǎo)蛋白質(zhì)自空氣／水界面的大量置換(T．Arnebrant等，在所引的書中)。曾充分研究過(guò)通過(guò)表面活性劑去除預(yù)吸附的蛋白質(zhì)(固體表面處的蛋白質(zhì)-表面活性劑相互作用，T．Arnebrant等，17章，PAI，在所引的書中240-254)。鑒別出三種類型的相互作用ⅰ)表面活性劑通過(guò)靜電或疏水性相互作用與蛋白質(zhì)中的特異性位點(diǎn)的結(jié)合，所述蛋白質(zhì)是例如α-乳球蛋白或血清白蛋白；ⅱ)表面活性劑對(duì)蛋白質(zhì)的協(xié)同性吸附，沒有總體構(gòu)象變化；ⅲ)對(duì)蛋白質(zhì)的協(xié)同性表面活性劑結(jié)合后的構(gòu)象變化；例如，蛋白質(zhì)自甲基化(疏水性)二氧化硅表面去除對(duì)于不同的表面活性劑是相似的，表明蛋白質(zhì)通過(guò)由于表面活性劑的較高表面活性的置換而被去除。可以得出結(jié)論，即表面活性劑的首基作用在親水性表面處最顯著而在疏水性表面處則相對(duì)不重要(固體表面處的蛋白質(zhì)-表面活性劑相互作用，T．Arnabrant等，17章，PAI，上文240-254)。對(duì)于其它脂質(zhì)得出相同的結(jié)論。用DPPC脂質(zhì)體懸浮液預(yù)處理則降低吸附在塑料表面上的血漿蛋白質(zhì)的量；導(dǎo)管表面上胰島素吸附有相同的趨勢(shì)。現(xiàn)在我們出人意料地發(fā)現(xiàn)兩親性物質(zhì)，特別是大分子對(duì)包括脂質(zhì)和表面活性劑的混合物的軟表面的吸附比對(duì)不包含表面活性分子的脂質(zhì)聚集體的吸附更有效。更具體地說(shuō)，以磷脂和表面活性劑的混合物作為例子的形成穩(wěn)定膜的分子-典型地但是不是必須的，呈脂質(zhì)小泡形式(脂質(zhì)體)-和至少一種強(qiáng)兩親性物質(zhì)，即相對(duì)水溶性的雙層失穩(wěn)定成分(經(jīng)常是表面活性劑)的摻合物，比純的磷脂表面，特別是只是由磷脂組成或者還包括至少一雙層穩(wěn)定脂質(zhì)類物質(zhì)例如膽固醇的小泡或脂質(zhì)體更趨向于結(jié)合兩親性物質(zhì)例如蛋白質(zhì)。我們還發(fā)現(xiàn)結(jié)合的兩親性大分子(蛋白質(zhì))的相對(duì)數(shù)量出人意料地對(duì)于具有與吸附實(shí)體的凈電荷有相同符號(hào)的凈電荷的表面更高。這明顯與公開的出版物相矛盾，所述出版物說(shuō)明靜電結(jié)合需要在相互作用實(shí)體上具有相反電荷以便是強(qiáng)烈的結(jié)合。我們提出對(duì)于上述改進(jìn)超分子(例如藥物-載體)締合的要求之一是吸附劑表面的一般適用性。這種吸附促進(jìn)能力允許吸附大分子(ⅰ)首先，由于局部吸引的電荷-電荷和其它相互作用而富集在吸附劑表面附近；(ⅱ)其次，使對(duì)吸附劑表面的非靜電相互作用／結(jié)合最優(yōu)化。(后一過(guò)程典型地需要存在疏水性和H-鍵結(jié)合位點(diǎn)，其通過(guò)表面柔性和／或適用性容易產(chǎn)生或制備)。滿足這些要求-并且允許它們的控制-的(大分子)藥物-載體復(fù)合體最適合實(shí)際應(yīng)用。我們進(jìn)一步提出蛋白質(zhì)吸附到軟(膜)表面中涉及的每一步在不同程度上取決于膜／溶液界面里／處的疏水結(jié)合位點(diǎn)的鄰近和數(shù)目眾多。大分子和結(jié)合表面之間的疏水締合的動(dòng)力學(xué)因此應(yīng)該對(duì)可以接近的結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)目敏感，而結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)目又通過(guò)膜中表面活性成分的存在和膜的柔軟度而增加。吸附(大)分子的速度能針對(duì)多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)構(gòu)象調(diào)節(jié)也是重要的。例如，在不帶電荷的柔韌(Transfersome)膜的情況下，疏水相互作用是胰島素-表面締合的主要原因。根本的多步結(jié)合通常需要大量的系統(tǒng)重排，因此需要長(zhǎng)吸附時(shí)間來(lái)完成。因此，形成Transfersome-胰島素-復(fù)合物的最佳溫育時(shí)間可以相對(duì)更長(zhǎng)。前面段落中提出的吸附方案與專業(yè)文獻(xiàn)中描述的基本吸附情況相一致。雖然有一些不同甚至矛盾，但是這將我們的發(fā)現(xiàn)與迄今為止公開的公知知識(shí)明顯區(qū)分開來(lái)。出人意料地，根據(jù)本發(fā)明向表面加入帶電荷的表面活性劑加速蛋白質(zhì)結(jié)合到所述表面的過(guò)程并且提供控制大分子-膜締合的程度和速度的方法。這與上述的被廣泛接受的表面活性劑抑制蛋白質(zhì)結(jié)合的教導(dǎo)相矛盾。另一方面，從這類表面至少部分消除表面活性劑加速大分子解吸并釋放一些大分子的過(guò)程。這也與公知知識(shí)直接相背。出人意料地，我們發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的大分子對(duì)于軟可變形表面特別是相應(yīng)膜的吸附比較小可變形的表面的吸附更強(qiáng)。因?yàn)橄嚓P(guān)文獻(xiàn)提出軟膜比其適用性更小的類型更加親水和相互排斥，所以本發(fā)現(xiàn)與預(yù)期的直接相反。因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是具體確定大的，經(jīng)常是大分子的兩親性分子，例如蛋白質(zhì)，或者任何其它類型的合適的鏈分子，和復(fù)合體吸附劑表面之間的締合最大化的條件。本發(fā)明的另一個(gè)目的是確定控制大分子吸附到復(fù)合體表面的速度，或者從復(fù)合體表面解吸的相應(yīng)速度的有利因素。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供制備適合(生物)技術(shù)和藥物應(yīng)用的制劑的方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是描述特別適用于所得到的制劑的實(shí)際應(yīng)用的方式；包括但不限于得到的吸附物在診斷、分離技術(shù)和(生物)加工、生物工程、基因操作、試劑穩(wěn)定化、濃縮或送遞，例如在藥學(xué)或獸藥中的應(yīng)用。根據(jù)本發(fā)明的解決這些問(wèn)題的技術(shù)方案定義在所附的獨(dú)立權(quán)利要求中。在從屬權(quán)利要求中定義了提供具體優(yōu)點(diǎn)的方便的技術(shù)方案。定義在本申請(qǐng)中使用的定義“締合物”是兩種或多種不同的分子的復(fù)合體，其中至少一種與一種或幾種完全確定的表面形成聚集體，而不管復(fù)合體形成的原因但排除共價(jià)鍵合。不同種類分子之間的締合作用可以以膠囊化(例如包裹到包括表面生成分子的小泡中)，插入(例如摻合到表面處和表面下的聚集體層中)或者吸附(到聚集體表面上)為基礎(chǔ)；或者有可能是這些原理中的多種或兩種的組合。本申請(qǐng)中的術(shù)語(yǔ)“吸附物”，“吸附(大)分子”，“結(jié)合(大)分子”，“締合(大)分子”等等可以互換使用來(lái)描述在選擇的條件下不形成擴(kuò)展表面的分子和上述含義“的吸附劑”或“結(jié)合表面”之間的締合?！拜d體”指聚集體，與其性質(zhì)和產(chǎn)生的來(lái)源無(wú)關(guān)，其能與一種或多種用于實(shí)際目的的大分子締合，例如對(duì)人或動(dòng)物體施用或者送遞。“脂質(zhì)”在本發(fā)明中的意義是具有與脂肪的特征類似的特征的任何物質(zhì)。作為一種規(guī)則，該類型分子具有擴(kuò)展的非極性區(qū)(鏈，X)和在大多數(shù)情況下，還具有一個(gè)水溶性極性親水性基團(tuán)，也稱之為首基(Y)。對(duì)于這樣的物質(zhì)有基本結(jié)構(gòu)式1X-Yn(1)其中n大于或等于0。n=0的脂質(zhì)稱之為非極性脂質(zhì)；n≥1的脂質(zhì)是極性脂質(zhì)。在本申請(qǐng)中，所有的兩親性物質(zhì)，例如甘油酯，甘油磷脂，甘油膦基脂質(zhì)，甘油膦?；|(zhì)，腦硫脂，鞘脂類，類異戊二烯脂質(zhì)，甾族化合物，甘油硬脂酸酯類或甾醇類等等，和所有的包含碳水化合物殘基的脂質(zhì)都簡(jiǎn)單稱之為脂質(zhì)。對(duì)于更明確的定義，我們參見PCT／EP91／01596。在本申請(qǐng)中“界面活性”物質(zhì)或“表面活性劑”指提高體系形成界面，凸面或者其它明顯曲面結(jié)構(gòu)和多缺陷區(qū)的傾向的任何物質(zhì)。除了普通的表面活性劑外，輔助表面活性劑和在更常規(guī)表面活性劑存在下促進(jìn)脂質(zhì)溶解性的其它分子全都落在該范疇內(nèi)；還有誘導(dǎo)或促進(jìn)吸附劑(雜)聚集體中(至少部分疏水性)缺陷的形成的分子。表面活性劑的直接作用或者(部分)分子分層的間接催化，或者還有表面活性劑誘導(dǎo)的相關(guān)分子上的構(gòu)象變化常常是該作用的原因。因此，除了常規(guī)表面活性劑外，很多溶劑和不對(duì)稱的并因此是兩親性的，分子和聚合物，例如很多低聚-和聚糖，寡-和多肽，寡-和多核苷酸和／或它們的衍生物屬于上述范疇。PCT／EP91／01596中公開了最普遍的標(biāo)準(zhǔn)表面活性劑、一些合適的溶劑(也稱之為輔助表面活性劑)和很多其它相關(guān)的界面活性物質(zhì)的相當(dāng)廣泛的目錄，在這里我們明確地引入該文獻(xiàn)。工業(yè)表面活性劑手冊(cè)；MichaelAsh，IreneAsh，編著．，Gower出版社，1993中公開了更完全的目錄?！版湻肿印被颉按蠓肿印笔前辽賰煞N類型或狀態(tài)的具有對(duì)于“吸附表面”不相同的親和力的基團(tuán)的任何直鏈或支鏈的分子。對(duì)于本發(fā)明相應(yīng)的改變(權(quán)利要求2)或組合(權(quán)利要求3)方面的其它具體要求是至少一種類型這樣的基團(tuán)必須在供體溶液中和／或在吸附表面處(部分地)帶電荷。對(duì)于各個(gè)基團(tuán)的表面親和性差異常常是由于它們不同的兩親性，即由于不同的親水性／疏水性。不同的基團(tuán)可以沿著鏈隨機(jī)分布，但是常常是幾種物理相關(guān)的(例如幾種親水性或者多于一個(gè)的疏水性)基團(tuán)位于一個(gè)鏈片段中。本申請(qǐng)中“大分子”含義包括基本分子式是Cx(H2O)y的糖類，例如在糖，淀粉，纖維素等中(更完全的糖類的定義，我們清楚地參見PCT／EP91／01596)，為了本發(fā)明的目的，常常需要衍生化來(lái)獲得對(duì)于結(jié)合表面的附加親和性。這可以例如通過(guò)使疏水基團(tuán)與目的是與(部分)疏水表面締合的碳水化合物連接，或者通過(guò)引入能夠參與與更親水性結(jié)合表面的其它非庫(kù)侖(例如氫鍵)相互作用的這樣的基團(tuán)來(lái)實(shí)現(xiàn)。寡或多核苷酸，例如脫氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)的同型-或雜型鏈，以及它們的化學(xué)，生物，或分子生物(遺傳)修飾體(更詳細(xì)的定義參見PCT／EP91／01596中給出的目錄)。包括3-250個(gè)，經(jīng)常是4-100個(gè)，更經(jīng)常10-50個(gè)相同或不同的氨基酸的寡肽或多肽，其通過(guò)酰胺鍵自然偶聯(lián)，但是在模擬蛋白情況下可能取決于不同的聚合作用方案并且甚至可能部分或全部環(huán)化；使用旋光純化合物或外消旋化合物是可能的(對(duì)于更清楚和完全定義參見PCT／EP91／01596)。長(zhǎng)多肽鏈，不管它們的詳細(xì)構(gòu)象或準(zhǔn)確的聚合度如何，通常稱之為蛋白質(zhì)。如果不是全部，則大多數(shù)情況下，蛋白質(zhì)十分有效地與表面締合，正如該項(xiàng)工作所提出的。因此我們避免引用這里的相關(guān)的物質(zhì)，且寧愿參照PCT／EP91／01596的部分目錄以及迄今為止公開的專業(yè)文獻(xiàn)。只是為了說(shuō)明的目的，下面簡(jiǎn)要地總結(jié)了幾個(gè)相關(guān)的類。酶包括氧化還原酶(包括各種脫氫酶，(過(guò))氧化物酶，(超氧化物)歧化酶等)，轉(zhuǎn)移酶(例如?；D(zhuǎn)移酶，磷酸化酶和其它激酶)，轉(zhuǎn)肽基酶(例如酯酶，脂肪酶等等)，裂解酶類(包括脫羧基酶，異構(gòu)化酶等等)，各種蛋白酶，輔酶等等。來(lái)自IgA，IgG，IgE，IgD，IgM類的免疫球蛋白及所有的亞型，它們的片段，例如Fab-或Fab2-片段，單鏈抗體或者其部分，例如可變區(qū)或高變區(qū)，天然形式或化學(xué)，生物化學(xué)或遺傳操作的，都可以得益于本發(fā)明。這包括但不限于IgG-γ鏈，IgG-F(ab’)2片段，IgG-F(ab)，IgG-Fc片段，Ig-κ鏈，Ig-s輕鏈(例如κ-和λ-鏈)，并且還包括更小的免疫球蛋白片段，例如任何這些物質(zhì)或片段的可變區(qū)或高變區(qū)或修飾物。除了抗體的免疫活性大分子(內(nèi)毒素，細(xì)胞因子，淋巴因子和其它大的免疫調(diào)節(jié)劑或生物學(xué)信使)也屬于異源鏈分子類。還有植物凝集素，凝集素，聚肌胞苷酸，多胞苷酸(poliIC)，紅細(xì)胞生成素，“粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子”(GM-CSF)，白細(xì)胞介素1-18，干擾素(α，β或γ，及其(生物)合成修飾物)，腫瘤壞死因子(TNF-s)；所有足夠大的和兩親性組織和植物提取物，它們的化學(xué)，生物化學(xué)或生物學(xué)衍生物或置換物，其部分等等。因此，所有這樣的分子可以與本申請(qǐng)中描述的復(fù)合體表面方便有效地締合。進(jìn)一步的生物相關(guān)的例子包括影響局部或全部生長(zhǎng)的物質(zhì)，例如堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(BFGF)，內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(ECGF)，表皮生長(zhǎng)因子(EGF)，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)，胰島素，胰島素樣生長(zhǎng)因子(例如LGFⅠ和LGFⅡ)，神經(jīng)生長(zhǎng)因子(例如β-NGF，NGF2，5s，NGF7s，等)，血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)等等。特別用于本發(fā)明目的的衍生化作用是(生物)化學(xué)，生物學(xué)或基因修飾或反應(yīng)，通過(guò)所述修飾，吸附物適當(dāng)時(shí)被幾種，經(jīng)常是多于3種的非極性(疏水)殘基取代，所述殘基例如具有1-24個(gè)碳原子的芳基，烷基-，鏈烯基-，烯?；?，羥基烷基-，鏈烯基羥基-或羥基酰基-鏈，通過(guò)所述反應(yīng)，提高吸附物和吸附劑之間產(chǎn)生的其它的非庫(kù)侖相互作用的傾向。當(dāng)大分子疏水化時(shí)，每條側(cè)鏈有相對(duì)小數(shù)目(1-8，或者甚至更好地1-4)碳原子是有利的。相關(guān)的科學(xué)文獻(xiàn)提供了關(guān)于鏈分子怎樣為了不同的目的而被疏水化的廣泛的信息。為了本發(fā)明目的，排除了其它公開物(參見例如Torchilin，V．P．；Goldmacher，V．S．；Smirnov，V．N．Biochem．Biophys．Res．Comm．1978，85983-990)中覆蓋的強(qiáng)締合吸附劑，這不僅是因?yàn)樗鼈兊默F(xiàn)有技術(shù)性質(zhì)，還因?yàn)樗鼈兛赡軐?dǎo)致可逆性較差的締合。本領(lǐng)域已知向由兩親性物質(zhì)構(gòu)成的膜中加入表面活性劑改善所述膜的適用性。此外，曾建議過(guò)該事實(shí)可以用來(lái)通過(guò)將試劑摻入到被相應(yīng)的膜包圍的微型小滴并且懸浮于合適的液體介質(zhì)中改進(jìn)試劑傳輸通過(guò)屏障中以其它方式封閉的孔。這更詳細(xì)描述于我們?cè)缙谏暾?qǐng)PCT／EP91／01596和PCT／EP96／04526中。選擇一種方案以最優(yōu)化所說(shuō)的具有為了屏障孔穿透目的的高適用性膜的小泡，并且其一般與實(shí)現(xiàn)或者控制一方面鏈分子，和另一方面這樣的膜之間的締合的程度和速度的步驟不同。此外，當(dāng)大分子與之締合的所述表面是固載的時(shí)，包圍所述小泡(從而小泡自身的不穩(wěn)定性)這樣的膜表面的三維適用性不必與例如締合過(guò)程相關(guān)，因此不具有非固載膜的三維適用性特征。為了實(shí)現(xiàn)和／或控制大分子與表面(這是本發(fā)明焦點(diǎn)所在)的締合過(guò)程，可以應(yīng)用兩種主要作用，這已經(jīng)在上文指明了。第一種重要的現(xiàn)象是兩親性分子，即已經(jīng)討論過(guò)的大分子或者鏈分子，與包括至少一種趨向于形成擴(kuò)展表面的兩親性物質(zhì)和至少一種在懸浮液體培養(yǎng)基中溶解度更大并且也趨向于比前者兩親性物質(zhì)形成較少擴(kuò)展表面的另一種物質(zhì)的擴(kuò)展表面更好地締合。換句話說(shuō)，在不存在前者溶解性更大、表面失穩(wěn)定的第二種物質(zhì)情況下，具有表面失穩(wěn)定傾向的物質(zhì)的存在使得表面-溶液界面對(duì)于吸附大分子與只是由溶解度較小的表面形成物質(zhì)形成的相應(yīng)表面相比相對(duì)更具有吸引力。在本說(shuō)明書中，如果表面可允許兩維協(xié)同表面刺激傳播和／或展開，則其被視為擴(kuò)展的。例如，小泡的表面通過(guò)支持表面波動(dòng)或振動(dòng)滿足該標(biāo)準(zhǔn)要求；取決于膜的柔韌性，平均小泡直徑在20nm和幾百納米之間是需要的。至少一個(gè)方向上沒有達(dá)到該尺寸的(混合的)脂質(zhì)膠束不滿足這些要求；如果是這樣，它們的表面不被認(rèn)為是本發(fā)明意義上的擴(kuò)展的。第二種溶解度更大和表面失穩(wěn)定物質(zhì)一般是一種界面活性物質(zhì)或表面活性劑。第二種最近公開的作用是，與預(yù)期的相反，當(dāng)表面是復(fù)合體并且包括至少兩者兩親性物質(zhì)，其中之一比另一種溶解度更大并且也趨向于去穩(wěn)定通過(guò)溶解性較小的物質(zhì)所形成的表面時(shí)，帶電荷大分子或鏈分子更容易更好地與所述帶相同電荷表面(即，兩者都是負(fù)的或者兩者都是正的)締合。換句話說(shuō)，盡管公知的是相同電荷相互排斥；但是當(dāng)締合物質(zhì)和底物表面是負(fù)的時(shí)，或者當(dāng)締合過(guò)程中兩個(gè)參與者具有凈正電荷時(shí)，帶電荷大分子或鏈分子可以與帶相同電荷的表面更好地締合，前提是表面復(fù)雜性允許必須的分子內(nèi)和分子間重排。在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上，人們預(yù)見到在帶負(fù)電荷大分子與帶正電荷表面締合情況下，即當(dāng)通過(guò)靜電吸引輔助下，締合作用更容易更強(qiáng)，反之亦然。前面段中所描述的兩種作用可以有利地組合，這一點(diǎn)具體定義在獨(dú)立權(quán)利要求3中。兩親性表面形成物質(zhì)的選擇可以通過(guò)一起形成大分子或鏈分子要結(jié)合的膜或表面并且最經(jīng)常以懸浮于液體介質(zhì)中的小泡形式存在的參與物質(zhì)的不同的溶解性來(lái)確定。一般情況下，當(dāng)參與分子之間的溶解性差異越大時(shí)，本發(fā)明作用越顯著，即結(jié)合大分子的表面吸引力越高。更可溶膜成分應(yīng)該比較小可溶性表面構(gòu)成成分更可溶至少10倍，優(yōu)選至少100倍。因此，當(dāng)一種兩親性表面形成物質(zhì)例如磷脂與第二種物質(zhì)例如表面活性劑在合適的液體介質(zhì)例如水中結(jié)合時(shí)，使用在水中更溶解的表面活性劑比磷脂(以準(zhǔn)確的量)作為第二種成分要有利得多。另一方面，也可以以得到的表面曲率來(lái)確定選擇。使用上述磷脂(作為基本表面形成物質(zhì))在水(用作液體介質(zhì))中與表面活性劑(作為表面失穩(wěn)定的溶解性更大的第二種成分)混合，得到的小泡獲得一些特征性表面曲率。(平均)曲率一般來(lái)說(shuō)定義為考慮的表面所封閉的區(qū)域的平均半徑的倒數(shù)。一般情況下，加入表面活性劑與不含有表面活性劑的磷脂質(zhì)小泡的曲率相比將提高混合脂質(zhì)小泡表面的曲率。如果存在表面活性劑的飽和濃度，其不破壞性平衡彎曲的表面穩(wěn)定性，一般選擇最佳表面活性劑濃度低于該飽和濃度的99％；更經(jīng)常地，在飽和濃度的1和80摩爾％之間，更優(yōu)選地在10和60摩爾％之間，最優(yōu)選在20和50摩爾％之間。另一方面，如果各體系中飽和濃度達(dá)不到，由于加入表面活性劑后達(dá)到飽和之前表面分解的事實(shí)，使用的表面活性劑的量一般小于溶解濃度的99％。同樣，體系中表面活性劑的最佳濃度經(jīng)常在限制吸附劑表面形成的濃度的1％和80％之間，更經(jīng)常在10％和60％之間，并且優(yōu)選在20％和50％之間，即高于擴(kuò)展表面被小得多的溶解的混合脂質(zhì)聚集體平均表面替代的濃度。一種方便的、實(shí)際有用的物質(zhì)的混合物可以以所述表面的平均曲率來(lái)確定。正如權(quán)利要求7所指出的，這些表面具有相應(yīng)于15nm和5000nm之間，經(jīng)常在30nm和1000nm之間，更經(jīng)常40nm和300nm之間，最優(yōu)選50nm和150nm之間的平均半徑的平均曲率(定義為表面所封閉的區(qū)域的平均半徑的倒數(shù))。但是應(yīng)該強(qiáng)調(diào)的是，吸附劑表面的曲率不必受吸附劑膜性能的控制。當(dāng)使用固載表面并且根據(jù)本發(fā)明從選擇的兩親性物質(zhì)的混合物構(gòu)建時(shí)，所述表面的平均曲率通常由支持固體表面曲率來(lái)確定。此外，至少當(dāng)使用相同電荷之間的締合時(shí)，可能以表面相關(guān)的帶電荷成分的相對(duì)濃度來(lái)表達(dá)本發(fā)明。這類表面相關(guān)的帶電荷成分的相對(duì)濃度是所有表面形成兩親性物質(zhì)一起形成的濃度的5和100摩爾％之間，更優(yōu)選地在10和80摩爾％之間，最優(yōu)選在20和60摩爾％之間。以凈表面電荷密度表示，表面特征在于0．05Cbm-2(每平方米庫(kù)侖)和0．5Cbm-2之間的值，更好0．075Cbm-2和0．4Cbm-2之間，最好0．10Cbm-2和0．35Cbm-2之間。優(yōu)選選擇背景電解質(zhì)的濃度和組成，所述電解質(zhì)優(yōu)選包括低價(jià)離子，以使電荷-電荷對(duì)期望的締合作用的正作用最大。一般情況下，人們將本體離子強(qiáng)度保持在I=0．001和I=1之間，優(yōu)選I=0．02和I=0．5之間，更優(yōu)選I=0．1和I=0．3之間。另一種本發(fā)明有用的定義集中在呈包圍液體細(xì)微小滴的膜形式的吸附劑表面。這樣的膜經(jīng)常是雙層樣并且包括至少兩種類型或形式的在用來(lái)懸浮小滴的液體介質(zhì)(優(yōu)選含水的)中的不溶性至少10倍，優(yōu)選至少100倍差別的(自)聚集兩親性物質(zhì)。在這樣的情況下，對(duì)于形成膜的物質(zhì)的選擇可以通過(guò)要求溶解度較大物質(zhì)的同型聚集體的平均直徑或者包括兩種物質(zhì)的異型聚集體的直徑小于只包含溶解度較小的物質(zhì)的同型聚集體的平均直徑來(lái)確定。系統(tǒng)中能形成表面的所有兩親性物質(zhì)的總含量?jī)?yōu)選占總干質(zhì)量的0．01％至30重量％，特別是在0．1％至15重量％之間，最優(yōu)選在1％和10重量％之間，特別是在所述組合被用來(lái)產(chǎn)生主要為了藥物目的而施用到人體或動(dòng)物體中或體內(nèi)的制劑的情況下。表面構(gòu)建或表面支持物質(zhì)，即能形成擴(kuò)展表面的物質(zhì)可以有利地在生物相容極性或非極性脂質(zhì)中選擇，特別是當(dāng)吸附劑表面要具有雙層樣結(jié)構(gòu)時(shí)。具體地，主要表面形成物質(zhì)可以是從任何合適的生物源或相應(yīng)的合成脂質(zhì)中選出的脂質(zhì)或類脂，或者是這樣的脂質(zhì)的修飾物，優(yōu)選是甘油酯，甘油磷脂，類異戊二烯脂，神經(jīng)鞘脂類，甾族化合物，硬脂酸精或甾醇，含硫或含碳水化合物的脂質(zhì)，或者任何其它能形成雙層的脂質(zhì)，特別是半質(zhì)子化的液體脂肪酸，并且優(yōu)選地選自下面種類磷脂酰膽堿，磷脂酰乙醇胺，磷脂酰甘油，磷脂酰肌醇，磷脂酸，磷脂酰絲氨酸，神經(jīng)鞘磷脂或或鞘磷脂，糖神經(jīng)鞘脂類(例如腦苷酯類，脂?；拾贝技憾嗵擒?，硫脂類，神經(jīng)鞘縮醛磷脂)，神經(jīng)節(jié)甙脂或其它糖脂或合成脂質(zhì)，特別是二油?；?，二亞油?；?，二亞麻基-，二亞麻?；ㄉ；?，二月桂?；?，二肉豆蔻?；?，二棕櫚?；?，二硬脂酰基，或者相應(yīng)的鞘氨醇衍生物型，糖脂或二?；?，二烯酰基-，或二烷基脂質(zhì)。其它表面失穩(wěn)定和溶解度更大的物質(zhì)有利地是表面活性劑，并且可以有利地屬于非離子的，兩性離子的，陰離子或陽(yáng)離子去污劑；特別方便地使用長(zhǎng)鏈脂肪酸或醇，烷基-三／二／甲基-銨鹽，烷基硫酸鹽，膽酸的一價(jià)鹽，脫氧膽酸鹽，甘氨膽酸鹽，甘氨脫氧膽酸鹽，?；敲撗跄懰猁}或牛磺膽酸鹽，?；?或鏈烷?；?二甲基氨基氧化物，特別是十二烷基-二甲基-氨基氧化物，烷基-或鏈烷?；?N-甲基葡糖酰胺，N-烷基-N，N-二甲基甘氨酸，3-(?；谆@)-烷磺酸鹽，N-?；?磺基甜菜堿，聚乙二醇-辛基苯基醚，特別是九乙二醇-辛基苯基醚，聚乙烯-酰基醚，特別是九乙烯-十二烷酰基醚，聚乙二醇-異?；?，特別是八乙二醇-異十三烷?；?，聚乙烯-?；?，特別是八乙烯十二烷?；?，聚乙二醇-脫水山梨糖醇-?；?，例如聚乙二醇-20-脫水山梨糖醇-單月桂酸酯(Tween20)或聚乙二醇-20-脫水山梨糖醇-單油酸酯(Tween80)，聚羥基乙烯-?；?，特別是聚羥基乙烯-月桂?；?、-肉豆蔻?；?十六烷基硬脂?；?油酰基醚，例如聚羥基乙烯-4、6、8、10或12等-月桂?；?例如Brij系列)，或者相應(yīng)的酯，例如聚羥基乙烯-8-硬脂酸酯(Myrj45)、-月桂酸酯或-油酸酯類型，或者聚乙氧基化的蓖麻油40(CremophorEL)，脫水山梨糖醇-單烷基酸酯(例如Arlacel或Span)，特別是脫水山梨糖醇-單月桂酸酯(Arlacel20，Span20)，酰基-或鏈烷?；?N-甲基葡糖酰胺，特別是癸酰基-或十二烷?；?N-甲基葡糖酰胺，烷基硫酸鹽，例如月桂基-或油?；蛩猁}，脫氧膽酸鈉，甘氨脫氧膽酸鈉，油酸鈉，牛磺酸鈉，脂肪酸鹽，例如反油酸鈉，亞油酸鈉，月桂酸鈉，溶血磷脂，例如正-亞十八烷基(=油?；?-甘油磷脂酸，-磷?；视?，或-磷?；z氨酸，正-?；?，例如月桂?；蛴王；?甘油磷脂酸，-磷?；视?，或-磷酰基絲氨酸，正-十四烷基-甘油磷脂酸，-磷酰基甘油，或-磷酰基絲氨酸，相應(yīng)的棕櫚油酰基，反油酸?；?，11-十八碳烯酰基-溶血磷脂或者相應(yīng)的短鏈磷脂，還有表面活性多肽。帶電荷膜成分的濃度常常是以所有膜構(gòu)建成分的量為基礎(chǔ)的1-80摩爾％，優(yōu)選10-60摩爾％，最優(yōu)選30-50摩爾％的相對(duì)范圍。優(yōu)選選擇磷脂酰膽堿和／或磷脂酰甘油作為支持表面的物質(zhì)和溶血磷脂，例如溶血磷脂酸或甲基磷脂酸，溶血磷脂酰甘油，或者溶血磷脂酰膽堿，或者部分N-甲基化了的溶血磷脂酰乙醇胺，膽酸一價(jià)鹽，脫氧膽酸鹽，甘氨膽酸鹽，甘氨脫氧膽酸鹽-或任何其它極性充分的甾醇衍生物，月桂酸鹽，肉豆蔻酸鹽，棕櫚酸鹽，油酸鹽，棕櫚油酸鹽，反油酸鹽或者一些其它脂肪酸和／或Tween-、Myrj-或Brij-型，或者還有Triton，脂肪磺酸鹽或-磺基甜菜堿，N-葡糖酰胺或-脫水山梨糖醇(Arlacel或Span)表面活性劑被選作較不能形成擴(kuò)展表面的物質(zhì)。有利的是，所述擴(kuò)展表面所封閉的區(qū)域的平均半徑是15nm至5000nm之間，常常優(yōu)選30nm至1000nm之間，更經(jīng)常40nm至300nm之間，且最優(yōu)選50nm至150nm之間。一般情況下，與通過(guò)其它兩種物質(zhì)(以及根據(jù)需要，有第三，第四，第五物質(zhì)等等情況)的復(fù)合形成的擴(kuò)展表面締合的第三種物質(zhì)，可以包括具有重復(fù)亞單元的任何分子，特別是鏈分子形式。因此，這第三種物質(zhì)可以是低聚物或聚合物。特別是，其可以是具有平均分子量高于800道爾頓，優(yōu)選高于1000道爾頓，更經(jīng)常高于1500道爾頓的兩親性大分子物質(zhì)。一般情況下，這樣的物質(zhì)是生物源的，或者類似于生物物質(zhì)，有利地具有生物活性，即是生物試劑。第三種(類)物質(zhì)優(yōu)選特別是通過(guò)插入膜和液體介質(zhì)之間的界面(或者多個(gè)界面)而與本發(fā)明膜樣擴(kuò)展表面締合，所述這樣的界面(或者多個(gè)界面)是所述膜的組成部分。所述第三種物質(zhì)(分子)的含量或相應(yīng)的鏈分子的含量以吸附劑表面的質(zhì)量為基礎(chǔ)計(jì)，一般是在0．001和50重量％之間。經(jīng)常情況下，使用相似相對(duì)單位，該含量在0．1和35重量％之間，更優(yōu)選在0．5和25重量％之間，最優(yōu)選在1和20重量％之間，經(jīng)常發(fā)現(xiàn)該特定比例隨著所述吸附(鏈)分子的摩爾量的增加而減小。當(dāng)吸附大分子或鏈分子是蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)的一部分時(shí)，通常發(fā)現(xiàn)這樣的實(shí)體可以在本發(fā)明意義上與吸附表面締合，前提是其至少包括三個(gè)具有結(jié)合吸附劑表面傾向的片段或官能團(tuán)。根據(jù)本發(fā)明趨向于締合由所述兩親性物質(zhì)形成的擴(kuò)展表面的大分子或鏈分子可以屬于至少具有與表面相互作用的部分傾向的天然形式的或者進(jìn)行一些合適的化學(xué)，生物化學(xué)或基因修飾的多核苷酸類，例如DNA或RNA，或者多糖類。與擴(kuò)展表面締合的鏈分子可以具有各種各樣的生理功能和作用，例如作為腎上腺類皮質(zhì)激素抑制劑，β-抗腎上腺劑，雄激素或抗雄激素，抗寄生蟲劑，合成代謝劑，麻醉劑或止痛劑，興奮劑，抗變應(yīng)性劑，抗心律失常劑，抗動(dòng)脈硬化劑，抗哮喘劑和／或支氣管痙攣劑，抗菌劑，抗抑郁劑(antidepressivum)和／或抗精神病劑，抗糖尿病劑，解毒藥，止吐劑，抗癲癇劑，抗纖維蛋白溶解劑，抗驚厥劑，抗膽堿能劑，酶，輔酶或相應(yīng)的抑制劑，抗組胺休克劑，抗高滲劑，藥物活性生物抑制劑，抗低滲劑，抗凝劑，抗真菌劑，抗肌無(wú)力劑，抗帕金森病或老年性癡呆藥物，抗炎劑，抗發(fā)燒劑，抗風(fēng)濕劑，抗敗血病劑，呼吸回蘇劑或呼吸刺激劑，支氣管松馳劑(broncholyticum)，強(qiáng)心劑，化療劑，冠狀擴(kuò)展肌，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑，利尿劑，ganglium-阻斷劑，糖皮質(zhì)激素，抗-流感劑，止血?jiǎng)呙邉?，免疫球蛋白或其片段或者任何其它免疫活性物質(zhì)，生物活性碳?xì)浠衔?衍生物)，避孕藥，抗偏頭痛劑，鹽皮質(zhì)激素，嗎啡拮抗劑，肌肉松弛劑，麻醉劑，神經(jīng)治療劑，神經(jīng)安定劑，神經(jīng)傳遞素或者一些其拮抗劑，肽(衍生物)，眼科藥，(副)-交感神經(jīng)劑((para)-sympaticomimeticum)或(副)交感神經(jīng)阻滯藥，蛋白質(zhì)(衍生物)，牛皮癬／神經(jīng)性皮炎藥，擴(kuò)瞳藥，神經(jīng)刺激劑，鼻科藥，任何催眠劑或者其拮抗劑，鎮(zhèn)靜劑，解痙藥，結(jié)核菌抑制劑，泌尿科藥，血管收縮劑或血管舒張劑，病毒抑制劑或者任何愈合傷口的物質(zhì)或者這些藥劑的任何組合。當(dāng)?shù)谌N物質(zhì)是生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑時(shí)，也可以有利地應(yīng)用本發(fā)明。有利的實(shí)施方案的其它實(shí)施例包括選自下面的第三種物質(zhì)免疫調(diào)節(jié)劑類，包括抗體，細(xì)胞因子，淋巴因子，趨化因子和植物，細(xì)菌，病毒，病原體或者免疫原相應(yīng)的活性部分，或者這些中任一的部分或修飾物，酶，輔酶或一些其它類型的生物催化劑；識(shí)別分子，包括特別是粘附素，抗體，連環(huán)蛋白，選擇蛋白，陪伴蛋白，或者其部分；激素，特別是胰島素。在胰島素情況下，本發(fā)明復(fù)合體優(yōu)選包括作為活性物質(zhì)的1-500I．U．胰島素／毫升，特別是20-400I．U．胰島素／毫升，最優(yōu)選50-250I．U．胰島素／毫升。藥物的優(yōu)選形式是人重組胰島素或人源化胰島素。本發(fā)明其它有利的用途包括應(yīng)用各種細(xì)胞因子，例如白細(xì)胞介素或干擾素等等，所述白細(xì)胞介素適合在人體或動(dòng)物體內(nèi)使用，包括IL-2，IL-4，IL-8，IL-10，IL-12，所述干擾素適合在人體或動(dòng)物體內(nèi)使用，包括但不限于α-，β-，γ-干擾素。如果需要，最后稀釋達(dá)到實(shí)際期望的藥物濃度范圍后，所述復(fù)合體包括0．01毫克至20毫克白細(xì)胞介素／毫升，特別是0．1至15毫克白細(xì)胞介素／毫升，最優(yōu)選1至10毫克白細(xì)胞介素／毫升。如果需要，最后稀釋使藥物濃度達(dá)到實(shí)際優(yōu)選濃度范圍后，所述復(fù)合體包括最多20相對(duì)重量％干擾素，特別是0．1毫克至15毫克干擾素／毫升，最優(yōu)選1至10毫克干擾素／毫升。在本發(fā)明另一個(gè)實(shí)施方案中，描述了給藥與本發(fā)明表面締合的作為第三種活性物質(zhì)的神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)。這樣的藥劑的優(yōu)選形式是人重組NGF，施用的最佳濃度范圍含有至多25毫克神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)／毫升懸浮液或者至多25相對(duì)重量％的NGF作為藥劑，尤其是0．1-15相對(duì)重量％蛋白質(zhì)，最優(yōu)選1-10相對(duì)重量％NGF，并且如果需要，在使用前稀釋。可以使用用于免疫球蛋白(Ig)給藥目的，呈完整抗體形式、部分抗體或者其一些其它生物可接受和活性修飾物形式的這里所報(bào)道的本發(fā)明技術(shù)。如果懸浮液含有至多25毫克免疫球蛋白(Ig)／毫升懸浮液或者至多相對(duì)于總脂質(zhì)25重量％Ig，優(yōu)選含有0．1相對(duì)重量％至15相對(duì)重量％蛋白質(zhì)則是有利的，最優(yōu)選含有1相對(duì)重量％至10相對(duì)重量％免疫球蛋白。本發(fā)明公開了制備上述復(fù)合體，尤其是作為活性劑的制劑，特別是上面討論的生物，化妝和／或藥學(xué)活性試劑的制劑的方法，這樣的方法包括選擇至少兩種在合適的液體介質(zhì)中溶解度不同的兩親性物質(zhì)，至少當(dāng)與所述介質(zhì)接觸而復(fù)合時(shí)，所述物質(zhì)能形成擴(kuò)展表面，尤其是膜表面。對(duì)于這些方法的推薦的選擇標(biāo)準(zhǔn)是使用通過(guò)將能夠吸引活性劑并且支持與所述表面締合的物質(zhì)相組合所形成的一種擴(kuò)展表面，前提是上述表面比只是由兩種物質(zhì)中其自身比另一種物質(zhì)自身形成更加擴(kuò)展的表面的一種物質(zhì)形成的表面更吸引該活性劑，和／或選擇至少兩種其在合適的液體介質(zhì)中溶解度不同的兩親性物質(zhì)，前提是這樣的物質(zhì)至少在復(fù)合時(shí)與所述介質(zhì)接觸能夠形成擴(kuò)展表面，尤其是膜樣表面，另一個(gè)前提是包括兩種物質(zhì)復(fù)合體的所述表面比只是由兩種物質(zhì)中其比另一種物質(zhì)形成更加擴(kuò)展的表面的一種物質(zhì)形成的表面對(duì)于活性劑更具有引力且能夠更好地結(jié)合活性劑，最后，但不是至少，在表面和試劑多帶有凈電荷情況下，表面和試劑兩者平均都帶負(fù)電荷或者兩者都帶正電荷。制備本發(fā)明擴(kuò)展表面的優(yōu)選方法包括對(duì)于相應(yīng)的物質(zhì)混合物的機(jī)械操作，例如過(guò)濾，壓力變化或者機(jī)械勻化，振蕩，攪拌，混合，或者通過(guò)在要與該方法中形成的表面相締合的試劑分子存在下任何其它控制的的機(jī)械破碎方法。優(yōu)選的是，如果使表面形成物質(zhì)的選擇的復(fù)合體吸附到或者以一些其它的方式永久接觸合適的固體支持表面，然后通過(guò)一次加入物質(zhì)或同時(shí)加入幾種物質(zhì)而與液體介質(zhì)接觸，從而后面的表面形成步驟的至少一步是在接著與固體支持的表面締合的試劑存在下進(jìn)行的。不管是懸浮于液體介質(zhì)或固體支持的，如果吸附表面或其前體首先通過(guò)下面的步驟制備則是有利的，所述步驟可以包括依次混合表面形成分子，然后加入締合分子并允許與所述表面締合，如果需要，通過(guò)攪拌，混合或溫育協(xié)助進(jìn)行，前提是這樣的處理不破壞所進(jìn)行的表面。制備用于各種試劑的非入侵式施用的制劑是本發(fā)明優(yōu)選的方法，尤其是通過(guò)人或動(dòng)物或植物完整外皮產(chǎn)生能與包括至少一種兩親性物質(zhì)、至少一種親水性液體、至少一種界面活性或表面活性物質(zhì)和至少一種試劑的復(fù)合體中的試劑分子相締合的表面。這些成分一起形成適合非入侵式試劑施用的制劑，在合適和需要時(shí)，還可以加入其它常規(guī)的成分以實(shí)現(xiàn)最終制劑的所需性能和穩(wěn)定性。在操作該方法中，人們可以有利地分開混合選擇的成分，如果需要，將成分(共同)溶解于溶液中，然后復(fù)合得到的混合物或溶液，最終誘導(dǎo)結(jié)合試劑的實(shí)體或表面的產(chǎn)生，正如所解釋的，優(yōu)選通過(guò)機(jī)械能作用。適合本發(fā)明公開的目的的兩親性物質(zhì)可以直接使用，或者溶解于生理相容性極性液體例如水中，或者與這樣的溶劑混溶，或者與極性溶液一起溶解于溶合作用介導(dǎo)的試劑中，所述極性溶液優(yōu)選至少包括一種界面活性物質(zhì)或者一種表面活性劑。誘導(dǎo)吸引試劑表面形成的一種優(yōu)選的方法是通過(guò)向液相加入物質(zhì)?？商鎿Q方法包括從反相蒸發(fā)，注射或透析，或者施與機(jī)械力，例如通過(guò)振蕩，攪拌，振動(dòng)，勻化，超聲(即超聲波照射)，剪切，冷凍和熔化，或者在常規(guī)和適當(dāng)?shù)尿?qū)動(dòng)壓力下的過(guò)濾。當(dāng)使用過(guò)濾時(shí)，可以有利地選擇具有0．01μm和0．8μm之間，優(yōu)選0．02μm和0．3μm之間，最優(yōu)選0．05μm和0．15μm之間孔徑大小的過(guò)濾材料。如果合適，為了實(shí)現(xiàn)期望的表面形成作用和使操作的容易程度和速度最大化，可以串聯(lián)或平行使用幾種過(guò)濾器。如果使所述試劑和載體在吸附表面形成后至少部分締合是有利的。剛好在施用得到的實(shí)際目的的制劑之前形成試劑分子和結(jié)合表面之間的締合是可能的。人們可以用合適的濃縮物或凍干物開始。本發(fā)明公開了尤其為了藥物送遞，藥物貯存，或者任何其它類型藥物或生物應(yīng)用目的的試劑載體的制備。因此，在屏障孔穿透情況下也可以使用本發(fā)明；在這種情況下，如本領(lǐng)域所公知的那樣，人們將有利地提供通過(guò)包圍小滴的兩親性分子和與所述小滴表面相締合的試劑分子所形成的呈膜形式的締合表面，所述試劑分子由所述超變形小滴通過(guò)屏障物中的孔所攜帶，甚至當(dāng)屏障孔平均直徑比小滴或小泡的平均直徑更小，甚至小得多時(shí)也是如此。但是需要一方面平衡最佳締合性質(zhì)和最好的膜適用性，另一方面，正如上文所已經(jīng)解釋的，這兩者不必相同，并且更經(jīng)常而不是實(shí)際上與僅僅由小泡膜對(duì)于孔通道的適用性確定最佳組合物性質(zhì)不同。本發(fā)明締合物的其它用途包括生物工程應(yīng)用，基因操作，以及用于生物處理或者診斷目的的分離技術(shù)中的應(yīng)用。這里，正如本發(fā)明其它用途中一樣，包括酶方法和催化，使用根據(jù)本發(fā)明的固載的締合表面而不是膜小泡形式是有用的。這使得本發(fā)明表面固定到固體載體上，然后對(duì)其進(jìn)行方便的處理、接觸、分離、濃縮等，例如目的是將與該類型表面締合的催化活性大分子最大程度地固定到固體載體上?？赡芊€(wěn)定表面締合分子，尤其是鏈分子，其是至少部分兩親性的物質(zhì)，例如(衍生物化的)蛋白質(zhì)，多肽，多核苷酸或多糖和／或在涉及表面締合狀態(tài)的這樣的分子的催化方法中。因此，為了制備例如用催化活性高親和性或選擇性或者活性大分子裝填的柱子可以想到使用本發(fā)明的教導(dǎo)。這方面的一個(gè)實(shí)例是通過(guò)使合適的例如在溶液中的共同反應(yīng)物通過(guò)包括具有非共價(jià)鍵連接從而包圍固體載體的活性分子的固載表面的柱子而進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，當(dāng)溶液通過(guò)固定化大分子時(shí)，在固體載體處發(fā)生與所述活性大分子的反應(yīng)。在另一個(gè)詳細(xì)描述的實(shí)施例中，至少一些分子與溶液分離的分子溶液通過(guò)裝填有固載吸附劑表面的懸浮液的柱子或者與固載吸附劑表面的懸浮液，目的在于首先讓靶分子與底物表面締合，然后通過(guò)任何合適的方法分離液體和固體成分，包括但不限于離心，沉降，浮游(有或沒有離心)電或磁吸附劑顆粒分離等等。本發(fā)明的另一個(gè)用途涉及控制所述表面締合分子和根據(jù)本發(fā)明通過(guò)復(fù)合合適的兩親性物質(zhì)形成的復(fù)合的適用表面之間的締合和解締的動(dòng)力學(xué)和／或可逆性，從而可以使用較高表面電荷密度和／或較大表面柔軟性和／或較高表面缺陷密度來(lái)加速締合。然后，可以利用相應(yīng)的降低來(lái)減慢締合速度，或者還引起部分或完全解締。制劑和貯存溫度很少落在0℃至95℃范圍之外。由于很多感興趣的成分尤其是很多大分子的溫度敏感性，溫度優(yōu)選低于70℃，更好低于45℃。使用非水溶劑，可以使冷-或熱-穩(wěn)定劑在不同的溫度范圍內(nèi)工作。實(shí)際應(yīng)用一般在室溫或生理溫度下進(jìn)行，但是在不同溫度下使用是可能的并且可以對(duì)于具體制劑或應(yīng)用期望不同的溫度。在高溫下保持吸附表面的適用性(柔性，電荷符合和／或電荷密度)是為此的一個(gè)可能的原因；在低溫下保持試劑的活性形式提供另一個(gè)可能的實(shí)施例。制劑特征合理地適用最敏感系統(tǒng)成分。在低溫下貯存(例如在4℃)可以和使用惰性氣體(例如氮?dú)?一樣有利。公開的制劑可以在應(yīng)用的位點(diǎn)使用對(duì)于吸附劑或吸附物具有特異性的方法處理，這一點(diǎn)是更重要的(以磷脂為基礎(chǔ)的吸附劑的例子參見“脂質(zhì)體”(Gregoriadis，G．編輯，CRC出版社，BocaRaton，F(xiàn)l．，第1-3卷，1987)；“作為藥物載體的脂質(zhì)體”，Gregoriadis，G．編輯，JohnWiley&amp;Sons，NewYork，1988；“脂質(zhì)體，實(shí)際方法”，New，R．，Oxford-Press，1989)。制劑也能被稀釋或濃縮(例如通過(guò)超離心或超濾)。正當(dāng)制劑使用之時(shí)或者在制劑使用之前，可以加入添加劑以改善得到的制劑的化學(xué)或生物穩(wěn)定性，(大)分子締合或其逆轉(zhuǎn)，解締／締合動(dòng)力學(xué)，給藥方便，順應(yīng)性等等。感興趣的添加劑包括各種體系優(yōu)化的溶劑(其濃度應(yīng)該不超過(guò)保持或達(dá)到期望的體系特征定義的限制)，化學(xué)穩(wěn)定劑(例如抗氧化劑和其它清除劑)，緩沖液等等，吸附促進(jìn)劑，生物活性輔助分子(例如殺微生物劑，抗病毒劑)等等。適合上面提到的目的的溶劑包括但不限于未取代的或取代的，例如鹵化的，脂肪族的，脂環(huán)族的，芳香族的或芳香族-脂肪族的碳水化合物，例如苯，甲苯，亞甲基氯，二氯甲烷或氯仿，醇類，例如甲醇或乙醇，丙醇，乙二醇，丙二醇，甘油，erithritol，短鏈鏈烷酸酯(short-chainalkanecarbonacidesters)，例如乙酸烷基酯(aceticadicacidalkylesters)，例如二乙醚，二噁烷或四氫呋喃等等和它們的混合物。也可以在制備之后或使用之前方便地調(diào)節(jié)吸附劑／吸附物混合物的pH值。這應(yīng)該防止各個(gè)體系成分和／或締合物的變質(zhì)。還應(yīng)該提高得到的混合物的生物活性或生理相容性。為了中和混合物用于體內(nèi)或體外生物應(yīng)用，經(jīng)常使用生物相容酸或堿將pH值調(diào)至3-12之間，常常5-9，最經(jīng)常在6-8范圍內(nèi)，這取決于應(yīng)用目的和部位。生理可接受酸是例如無(wú)機(jī)酸，例如鹽酸，硫酸或磷酸，和有機(jī)酸例如羧基鏈烷酸例如乙酸的稀釋的水溶液。生理可接受堿是例如稀釋的氫氧化鈉，適當(dāng)離子化的磷酸等等。所有暗示或明確提到的脂質(zhì)和表面活性劑是已知的。形成適合與大分子締合的聚集體的脂質(zhì)和磷脂綜述在如“磷脂手冊(cè)”(Cevc，G．，編著，MarcelDekker，紐約，1993)，“脂肪酸及其甘油酯的化學(xué)和生物化學(xué)導(dǎo)論”(Gunstone，F(xiàn)．D．，編著)和其它參考書。商售表面活性劑綜述在年刊“McCutcheon’s，乳化劑和去污劑”(ManufacturingConfectionerPublishingCo．)和其它相關(guān)參考書中給出(例如工業(yè)表面活性劑手冊(cè)，M．Ash&amp;I．Ash編著，Gower，1993)。相關(guān)的活性物質(zhì)匯編是例如德意志藥典，英國(guó)藥物指南，歐洲藥典，日本藥典，美國(guó)藥典等等。相關(guān)的大分子描述于生產(chǎn)商目錄，相關(guān)的科學(xué)期刊和來(lái)自工業(yè)和科學(xué)的專業(yè)參考書。本申請(qǐng)描述了締合物的一些相關(guān)的性質(zhì)，用一些選擇的多肽／蛋白質(zhì)和磷脂／表面活性劑混合物來(lái)例證。一般結(jié)論的有效性不限于給出的選擇，而且得到的締合物也不是僅適用于人和獸藥領(lǐng)域。下面的實(shí)施例應(yīng)該是詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。所有的溫度是攝氏度，載體大小以毫微米計(jì)，比例和百分比以摩爾單位給出。另外，除非另有說(shuō)明，使用標(biāo)準(zhǔn)SI單位。實(shí)施例進(jìn)行下面的實(shí)驗(yàn)來(lái)測(cè)定復(fù)合體小泡上胰島素的結(jié)合能力。使用不同組成的小泡組合物。變量包括不同的將凈電荷帶到小泡上／中的表面活性劑和脂質(zhì)，不同的脂質(zhì)／去污劑比例，不同的總脂質(zhì)含量和各種胰島素類型和濃度。在第一系列實(shí)驗(yàn)中，包括磷脂／生物表面活性劑混合物的復(fù)合體脂質(zhì)小泡以不同蛋白質(zhì)／脂質(zhì)比例與胰島素結(jié)合以發(fā)現(xiàn)結(jié)合最大值。使用常規(guī)的單一成分小泡(脂質(zhì)體)作為對(duì)照。實(shí)施例1-27超形變和柔性小泡(TransfersomesTM)起始懸浮液總脂質(zhì)(TL)含量10重量％，包括874．4毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿125．6毫克膽酸鈉9毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．1最終懸浮液ATL含量5重量％，包括上述脂質(zhì)和每100毫克TL有0．1，0．5，1，2，3，4毫克胰島素。為了實(shí)現(xiàn)期望的稀釋度，胰島素貯存溶液(4毫克／毫升ActrapidTMNovo-Nordisk)與下面的緩沖液混合<tablesid="table1"num="001"><table>每100mg脂質(zhì)的胰島素毫克數(shù)緩沖液胰島素溶液(4mg／mlActrapid)4--3mL30．75mL2．25mL21．5mL1．5mL12．25mL0．75mL0．52．265mL0．375mL0．12，925mL0．075mL</table></tables>通過(guò)混合2．5毫升起始脂質(zhì)懸浮液(10％TL)和2．5毫升合適的胰島素稀釋液來(lái)制備最終懸浮液A。最終懸浮液BTL含量5-2．5重量％，包括上述脂質(zhì)和每100毫克TL有4，5，6．67，10，20，40和80毫克胰島素。為了實(shí)現(xiàn)不同的胰島素／脂質(zhì)比例，使用下面的移液方案<tablesid="table2"num="002"><table>每100mg脂質(zhì)的胰島素毫克數(shù)實(shí)現(xiàn)的最終TL(w-％)起始懸浮液(10％脂質(zhì))緩沖液</table></tables>通過(guò)混合2．5毫升ActrapidHM(4毫克／毫升胰島素)和2．5毫升合適稀釋的脂質(zhì)懸浮液來(lái)制備最終懸浮液B。最終懸浮液CTL含量2．5重量％至0．125重量％，包括上述脂質(zhì)和每100毫克TL有4，5，6，7，8，9，10，15，20，30，40，50，80和160毫克胰島素。為了得到引用的胰島素／脂質(zhì)比例，使用下面的移液方案對(duì)于實(shí)驗(yàn)系列C，通過(guò)用緩沖液1∶1體積／體積稀釋懸浮液并如下所述重復(fù)過(guò)濾和冷凍-熔化步驟而從10％貯備懸浮液來(lái)制備5％小泡懸浮液。吸附劑／吸附物混合物的制備通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法制備緩沖液并且通過(guò)0．2微米無(wú)菌過(guò)濾器過(guò)濾。(為了將來(lái)使用，溶液在玻璃容器中保存。)脂質(zhì)混合物懸浮于無(wú)菌玻璃容器中的緩沖液中，蓋緊，在室溫下在磁力攪拌器上攪拌2天。然后懸浮液順序通過(guò)標(biāo)定孔徑分別為400毫微米、100毫微米和50毫微米的蝕刻有軌跡的聚碳酸酯膜(Nucleopore型)。每次進(jìn)行3個(gè)通道，使用0．6MPa和0．8MPa之間的驅(qū)動(dòng)壓力。得到的小泡懸浮液分別在-70℃和+50℃下冷凍和熔化5次。為了得到期望的最終小泡大小，再將懸浮液在0．7MPa下通過(guò)100毫微米過(guò)濾器4次。作為最后步驟，通過(guò)具有200毫微米孔徑的滅菌針筒式過(guò)濾器過(guò)濾滅菌高度不穩(wěn)定的小泡。小泡在使用前在滅菌聚乙烯容器中在4℃下保存。每個(gè)胰島素分子在中性pH范圍中載有凈負(fù)電荷，由于pI=5．4以上帶負(fù)電荷氨基酸相對(duì)帶正電荷氨基酸過(guò)量。使用商售胰島素溶液(購(gòu)自Novo-NordiskActrapidTM)用于很多包括該試驗(yàn)的締合研究。因此，起始蛋白質(zhì)溶液含有4毫克胰島素／毫升和3毫克間甲酚／毫升。通過(guò)向吸附劑小泡的懸浮液加入適當(dāng)量的這樣的溶液，產(chǎn)生不同標(biāo)稱的胰島素／脂質(zhì)比例。將得到的載體-胰島素混合物小心充分地混合，并且根據(jù)實(shí)驗(yàn)，在室溫下孵育至少2小時(shí)。在實(shí)驗(yàn)系列A中，通過(guò)用Actrapid稀釋原小泡懸浮液以獲得最終脂質(zhì)濃度為50毫克TL／毫升和不同蛋白質(zhì)／脂質(zhì)比例來(lái)制備最終懸浮液。在實(shí)驗(yàn)系列B中，根據(jù)胰島素／TL比例，最終脂質(zhì)濃度在2．5毫克／毫升和40毫克／毫升之間變化。在實(shí)驗(yàn)系列C中，最終脂質(zhì)濃度在1．25毫克／毫升至25毫克／毫升變化。為了比較，通過(guò)使用緩沖液代替脂質(zhì)懸浮液來(lái)制備相同的稀釋系列。各用4毫升胰島素／小泡混合物進(jìn)行試驗(yàn)測(cè)試。2小時(shí)后從含水面下相分離脂質(zhì)小泡以測(cè)定有多少胰島素(以任何方式)締合了脂質(zhì)小泡，和還有多少?zèng)]有結(jié)合保留在水面下相中。為了該目的，使用了截留分子量是100000道爾頓的CENTRISARTⅠ-超離心試管。對(duì)于每一個(gè)用1毫升含有懸浮液的胰島素稀釋的稀釋液使用三個(gè)試管并且以2000g離心3小時(shí)(T=10℃)。測(cè)定所得的光學(xué)澄清的上清液(假設(shè)只含有緩沖液、胰島素和一些混合脂質(zhì)(磷脂酰膽堿／膽酸鹽)膠束)和溶解的去污劑的胰島素濃度。棄除光學(xué)不澄清的上清液，因?yàn)楸砻鬟@樣的上清液被通過(guò)CENTRISARTⅠ過(guò)濾器中的缺陷的脂質(zhì)小泡所污染。將標(biāo)準(zhǔn)HPLC方法用于這里所報(bào)道的胰島素測(cè)定。測(cè)定進(jìn)行兩次。原稀釋液作為陽(yáng)性對(duì)照。在陰性對(duì)照中，將非特異性的胰島素對(duì)試驗(yàn)裝置的吸附定量化。校正這樣的非特異性結(jié)合后，計(jì)算上清液中起始和最終胰島素濃度之間的差異。假設(shè)“丟失”的胰島素與小泡締合，并且以絕對(duì)值或相對(duì)值表示。圖1給出了上述實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。其提示低于6毫克／100毫克TL的胰島素／脂質(zhì)比例時(shí)，加入的蛋白質(zhì)的80-90％與小泡締合(結(jié)合)。在較高胰島素／脂質(zhì)比例時(shí)，蛋白質(zhì)-表面締合的相對(duì)效率減小到對(duì)于2／5(40毫克／100毫克)稀釋度只有5％結(jié)合。換句話說(shuō)，以高稀釋度和以高蛋白質(zhì)／脂質(zhì)比例加入的每40毫克胰島素中有2毫克趨向于(定量地)與100毫克高度不穩(wěn)定小泡形式的脂質(zhì)締合。延長(zhǎng)孵育時(shí)間，或者較小程度地，提高加入的懸浮液濃度會(huì)改進(jìn)這種情況(圖2和3)。實(shí)施例28-45標(biāo)準(zhǔn)小泡(脂質(zhì)體)，起始懸浮液1克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿9毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．1最終懸浮液ATL含量5重量％，包括上述脂質(zhì)和每100毫克TL有0．1，0．5，1，2，3，4毫克胰島素(0．1，0．5，1，2，3，4相對(duì)重量％)最終懸浮液BTL含量5重量％至0．25重量％，包括上面給出的脂質(zhì)和每100毫克TL有4，5，6．67，10，20，40和80毫克胰島素根據(jù)實(shí)施例1-27所述制備起始脂質(zhì)懸浮液。但是，為了獲得足夠小的脂質(zhì)體的充分單分散的制劑，必須另外通過(guò)100毫微米過(guò)濾器6次擠壓。發(fā)現(xiàn)與試驗(yàn)脂質(zhì)體結(jié)合的胰島素非常少，只有2％至5％加入的藥物與4毫克／毫升至100毫克／毫升稀釋范圍中的標(biāo)準(zhǔn)脂質(zhì)小泡復(fù)合(沒有圖示給出數(shù)據(jù))。為了核查并通過(guò)實(shí)驗(yàn)排除懸浮稀釋液對(duì)高度形變復(fù)合體小泡組成的影響，進(jìn)行下面的實(shí)驗(yàn)。實(shí)施例46-59起始懸浮液874．4毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿125．6毫克膽酸鈉(給定10V-％TL含量)9毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．1最終懸浮液最終懸浮液的組成與實(shí)施例1-27的B系列和C系列中的相同，包括遞減的最終脂質(zhì)濃度。測(cè)定的胰島素／脂質(zhì)比例是每100毫克TL有4，8，10，20，40，80，160毫克胰島素。小泡懸浮液的制備與實(shí)施例1-27對(duì)于所述胰島素／脂質(zhì)比例所描述的制備方法一致，除了用含有10mM膽酸鹽的Actrapid和／或含有5-20mM膽酸鹽的緩沖液(用于對(duì)照或?qū)嶒?yàn)樣品)進(jìn)行稀釋。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)使得所有樣品中最終膽酸鹽濃度是5mM，這接近于該去污劑的CMC，以防止膽酸鹽在稀釋后從小泡膜解締。為了防止膽酸鹽從小泡洗出，不僅要保持原實(shí)際小泡組成，而且還要保持小泡表面的平均電荷密度。這些改進(jìn)在結(jié)合中反映出來(lái)。在該試驗(yàn)系列的實(shí)施例中，我們?cè)谝埔哼^(guò)程中始終特別關(guān)心保持標(biāo)稱的膽酸鹽濃度低于5mM程度，以防止錯(cuò)誤的小泡溶解作用，這特別可能在低的總脂質(zhì)濃度的范圍內(nèi)發(fā)生。結(jié)果表明蛋白質(zhì)／脂質(zhì)重量比多達(dá)10％時(shí)，加入的胰島素的80％至90％結(jié)合到脂質(zhì)小泡表面(圖4)。這意味著吸附劑-吸附物締合作用幾乎是完美的而且蛋白質(zhì)結(jié)合效率非常高。脂質(zhì)締合蛋白質(zhì)的百分比隨著蛋白質(zhì)／脂質(zhì)比例的增加而緩慢減小并且在1．6毫克胰島素／1毫克脂質(zhì)時(shí)達(dá)到7％。載體締合胰島素的絕對(duì)量在大約0．4毫克胰島素／1毫克脂質(zhì)時(shí)達(dá)到最大，其中發(fā)現(xiàn)加入的40毫克胰島素中的15．6毫克已經(jīng)與100毫克高度不穩(wěn)定小泡形式的總脂質(zhì)締合。在每1毫克總脂質(zhì)0．2毫克胰島素相對(duì)比例時(shí)獲得最好的產(chǎn)率，其中測(cè)得加入的20毫克中的14毫克已經(jīng)與混合脂質(zhì)小泡締合。圖4詳細(xì)說(shuō)明了這些數(shù)據(jù)。如果向含有緩沖液或胰島素溶液的混合脂質(zhì)小泡懸浮液加入膽酸鹽分子則獲得相似結(jié)果。實(shí)施例60-71起始懸浮液(20％TL)1099．7毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿900．3毫克Tween808毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．4最終懸浮液，含有上面給出的脂質(zhì)混合物每100毫克TL有2，4，8，10，20和40毫克胰島素。基本上根據(jù)實(shí)施例1-27所描述制備小泡懸浮液，除了攪拌時(shí)間延長(zhǎng)至7天。ActrapidTM(Novo-Nordisk)是所有情況下吸附胰島素源。為了能使用4毫克／毫升的固定胰島素濃度，制備具有變化的最終總脂質(zhì)濃度在8毫克／毫升和100毫克／毫升之間的胰島素／脂質(zhì)比例。為了比較(關(guān)于可能的稀釋效果)，使用類似組成的小泡來(lái)制備不同胰島素／脂質(zhì)比例但是具有10毫克／毫升(1重量％)固定最終總脂質(zhì)濃度的小泡。選擇蛋白質(zhì)／小泡締合作用時(shí)間是3小時(shí)。用來(lái)從小泡結(jié)合蛋白質(zhì)分離沒有締合胰島素的離心時(shí)間是6小時(shí)(以1000g)。所有其它實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)和第一試驗(yàn)系列(實(shí)施例1-27)相同。結(jié)論．與結(jié)合到包含非離子表面活性劑(Tween-80)的膜的胰島素一般比結(jié)合帶電荷(含有膽酸鹽)的膜的量低的事實(shí)無(wú)關(guān)，兩種吸附劑體系的定性特征相同(參見實(shí)施例1-27)。以相對(duì)的胰島素／脂質(zhì)比例是0．04毫克胰島素／1毫克脂質(zhì)與膜的締合的胰島素大約是50％。相對(duì)濃度是0．2毫克胰島素／1毫克脂質(zhì)時(shí)，最大結(jié)合相當(dāng)于總的加入的20毫克胰島素中只有5．2毫克結(jié)合的蛋白。用0．04毫克胰島素／1毫克脂質(zhì)獲得該試驗(yàn)體系中的最佳結(jié)果，即絕對(duì)最佳值。實(shí)施例72-76起始懸浮液(10％TL)，包括874．4毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿125．6毫克膽酸鈉9毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．1(-7．4；使用這些懸浮液，使起始懸浮液的pH在7．3-7．6范圍。因?yàn)槠谕膒H是7．3-7．4，因此使用pH7．1的緩沖液進(jìn)行下面用膽酸鹽作為表面活性劑的試驗(yàn)系列)。胰島素溶液A4毫克／毫升，8毫克／毫升，10毫克／毫升，20毫克／毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．4每毫升溶解的干胰島素30微升鹽酸(1M)，接著每1毫升溶液30微升1M氫氧化鈉胰島素溶液B4毫克Actrapid／毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．4胰島素-小泡混合物5重量％總脂質(zhì)濃度每1毫克總脂質(zhì)0．04，0．08，0．1和0．2毫克干胰島素(4，8，10，20相對(duì)重量％)。根據(jù)實(shí)施例1-27所述，使用相似膜組成制備小泡懸浮液。但是，為了使用合理高的最終總脂質(zhì)濃度獲得高胰島素／脂質(zhì)比例，將干胰島素溶解至比在商售溶液中使用的濃度更高的濃度。凍干的人重組胰島素不容易溶解于pH7．4的磷酸鹽緩沖液中。為了制備胰島素溶液，首先將類似于ActrapidTM的干燥凍干的人重組胰島素“粉末”加入2毫升緩沖液中并且充分渦流。瞬時(shí)酸化作用后(通過(guò)加入60微升鹽酸來(lái)實(shí)現(xiàn))，酸化作用將胰島素的溶解度充分增加以得到透明的溶液，加入60微升氫氧化鈉將pH調(diào)節(jié)回7．4，此時(shí)胰島素是穩(wěn)定的(作為六聚體)并且對(duì)降解／脫酰胺作用有抗性。通過(guò)直接將8毫克胰島素溶解于2毫升pH7．4的緩沖液中制備另外的溶液。小泡懸浮液(2毫升)和胰島素溶液-A(2毫升)充分混合并且以上面給出的標(biāo)稱胰島素／脂質(zhì)比例孵育12小時(shí)。所有情況下最終總脂質(zhì)濃度是50毫克／毫升。使用溶液B作為參照。實(shí)驗(yàn)的其它部分根據(jù)實(shí)施例1-27所述進(jìn)行。結(jié)論．干蛋白質(zhì)粉末制備的溶液(至少暫時(shí)給出單體溶液)中的胰島素結(jié)合與用實(shí)施例1-27中Actrapid中的胰島素測(cè)定相當(dāng)(圖5)。這提示可能大量胰島素與50毫克／毫升濃度的脂質(zhì)小泡懸浮液締合。發(fā)現(xiàn)胰島素結(jié)合最大值在蛋白質(zhì)／脂質(zhì)重量比例1／5左右，其中大約16毫克加入的胰島素與混合脂質(zhì)膜締合。在相似的蛋白質(zhì)濃度下，用尤其是溶解的和商售胰島素溶液測(cè)得相同的結(jié)果。在下面的實(shí)驗(yàn)系列中，比較胰島素對(duì)不同帶電荷的和不帶電荷的，液體，混合脂質(zhì)膜的吸附。實(shí)施例77-92常規(guī)小泡，SPC脂質(zhì)體，中性(TL=10重量％)沒有凈電荷，只包括兩性離子磷脂1克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿9毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．4常規(guī)小泡，帶電荷SPC／SPG脂質(zhì)體(TL=10重量％)來(lái)自25摩爾％陰離子磷脂酰甘油的凈負(fù)電荷750毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿250毫克來(lái)自大豆的磷脂酰甘油9毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．4高度形變中性小泡(TL=10重量％)沒有凈電荷，包括兩性離子磷脂和非離子表面活性劑550毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿450毫克Tween809毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．4高形變帶電荷小泡A(TL=10重量％)凈負(fù)電荷，源自25摩爾％陰離子膽酸鹽874．4毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿125．6毫克膽酸鈉9毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．1高度形變帶電荷小泡B(TL=10重量％)凈負(fù)電荷，源自25摩爾％(相對(duì)于PC)陰離子磷脂酰甘油284．3毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿94．8毫克來(lái)自大豆的磷脂酰甘油620．9毫克Tween809毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．4胰島素-小泡混合物，分別包括每毫升最終懸浮液有50，25，10，5毫克總脂質(zhì)每1毫克總脂質(zhì)有0．04，0．08，0．1和0．2毫克胰島素(蛋白質(zhì)的4，8，10，20相對(duì)重量％)根據(jù)上述制備所有的小泡。將包含Tween的小泡攪拌7天。將包含膽酸鹽的小泡和脂質(zhì)體攪拌2天。Actrapid100HMTM(Novo-Nordisk)是胰島素源。這引起最終蛋白質(zhì)和得到的最終脂質(zhì)濃度不同(分別是50，25，10和5毫克TL／毫升)。但是使用SPC-脂質(zhì)體，只研究了4相對(duì)重量％樣品。實(shí)驗(yàn)方案與實(shí)施例1-27所述相同。為了方便比較，對(duì)于所有制劑孵育時(shí)間是3小時(shí)，離心時(shí)間是6小時(shí)(以500g)。測(cè)得結(jié)果在圖6中給出。結(jié)果清楚地表明，盡管其帶有凈負(fù)電荷，但是其對(duì)于帶負(fù)電荷表面結(jié)合最好。使得高小泡形變性的高膜柔性也是有利的。對(duì)于高柔性帶電荷膜的相對(duì)結(jié)合效率是80-90％。因此，對(duì)于所研究的兩種類型的磷脂-表面混合物在1／25胰島素／脂質(zhì)重量比時(shí)，觀察到非常高程度的蛋白質(zhì)膜締合作用。包括磷脂和非離子表面活性劑的不帶電荷膜在可比較的胰島素／脂質(zhì)比例時(shí)表現(xiàn)出50％相對(duì)結(jié)合。但是，計(jì)算出加入的胰島素中只有2．5％(參見實(shí)施例28-45)結(jié)合不帶電荷的磷脂酰膽堿脂質(zhì)體。通過(guò)蛋白質(zhì)結(jié)合帶電荷脂質(zhì)體，其以蛋白質(zhì)／脂質(zhì)重量比1／25與加入的胰島素的10-20％締合，超過(guò)最不好的結(jié)果。因此，帶電荷常規(guī)脂質(zhì)雙層介于不帶電荷脂質(zhì)體膜和更柔性但是中性(TransfersomeTM)膜之間。這些發(fā)現(xiàn)提示凈表面電荷(源自帶電荷脂質(zhì)或者其它帶電荷膜締合成分)應(yīng)該與膜柔軟度結(jié)合(其通過(guò)吸附劑中的去污劑和其它相關(guān)的分子的存在而促進(jìn))來(lái)使得表面-或載體-蛋白質(zhì)締合作用最大化。其原因是電荷將(部分)吸附分子“拉”向吸附劑，所述吸附劑當(dāng)“軟化”時(shí)，允許蛋白質(zhì)容易插入界面區(qū)。實(shí)施例93-95常規(guī)小泡，SPC脂質(zhì)體，中性(TL=10重量％)沒有凈電荷，只包括兩性離子磷脂1克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿9毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．4高度形變的帶電荷小泡A(TL=10重量％)凈負(fù)電荷，源自25摩爾％陰離子膽酸鹽874．4毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿125．6毫克膽酸鈉9毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．1高度形變分帶電荷小泡B(TL=10重量％)凈負(fù)電荷，源自25摩爾％(相對(duì)于PC)陰離子磷脂酰甘油284．3毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿94．8毫克來(lái)自大豆的磷脂酰甘油620．9毫克Tween809毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．4胰島素-小泡混合物，分別包括每毫升最終懸浮液有50，25，10，5毫克總脂質(zhì)每1毫克總脂質(zhì)有0．04，0．08，0．1和0．2毫克胰島素(蛋白質(zhì)的4，8，10，20相對(duì)重量％)制備．為了研究胰島素對(duì)磷脂酰膽堿Tween80混合膜的吸附作用的動(dòng)力學(xué)，我們進(jìn)行了時(shí)間依賴性測(cè)定。根據(jù)相應(yīng)的前面的實(shí)施例中所述，制備試驗(yàn)小泡。第一數(shù)據(jù)點(diǎn)在混合脂質(zhì)懸浮液和蛋白質(zhì)溶液后2小時(shí)采集。對(duì)于中性高不穩(wěn)定膜，選擇的下一個(gè)時(shí)間點(diǎn)是3小時(shí)。在孵育4或5天后和5或6天后對(duì)于所有懸浮液進(jìn)一步取樣。結(jié)論．對(duì)于胰島素對(duì)于不帶電荷SPC／Tween混合膜的吸附作用，發(fā)現(xiàn)清楚的時(shí)間依賴性(對(duì)于一些代表性數(shù)據(jù)參見圖9)。當(dāng)標(biāo)稱胰島素／脂質(zhì)重量比是1／25時(shí)，在締合過(guò)程的初期發(fā)現(xiàn)結(jié)合效率從2小時(shí)的30％增加到3小時(shí)的50％。t=4天時(shí)，結(jié)合增加到64％，但是該差別可以是不明顯的，因?yàn)?星期后結(jié)合只有58％。測(cè)得胰島素對(duì)于簡(jiǎn)單的磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的結(jié)合只是在一定程度上從3小時(shí)后的2．5％增加到6星期后的5％。如通過(guò)蛋白質(zhì)與這樣的膜的結(jié)合從2小時(shí)后的64％增加到6星期后的76％所表明的，胰島素對(duì)于帶電荷的SPC／SPG／Tween80混合物的吸附比對(duì)中性膜的情況快得多且強(qiáng)得多。與頭幾個(gè)小時(shí)締合的數(shù)值相比的第二階段增加的小程度表示更快的結(jié)合動(dòng)力學(xué)。對(duì)于帶電荷SPC／膽酸鹽混合膜來(lái)說(shuō)，胰島素結(jié)合的速度更大。用這樣的帶電荷小泡進(jìn)行實(shí)驗(yàn)揭示蛋白質(zhì)對(duì)于混合脂質(zhì)膜的吸附的沒有時(shí)間依賴性。在2小時(shí)時(shí)，在實(shí)驗(yàn)誤差內(nèi)結(jié)合已經(jīng)和孵育5星期后一樣完全。這提示胰島素對(duì)于帶電荷的，柔性膜的結(jié)合比對(duì)于沒有帶電荷的膜快得多。通過(guò)推理，我們提出非普通的靜電相互作用有可能影響蛋白質(zhì)分子的解吸。胰島素與磷脂酰膽堿膜的非常弱和／或非常慢的締合表明只是疏水性結(jié)合對(duì)于實(shí)現(xiàn)高有效載荷是不充分的。這可能是由于胰島素分子發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)雙層表面上合適的結(jié)合位置的有限能力。少的、不方便的吸附的蛋白質(zhì)分子和下面的推測(cè)的吸附物之間的排斥力也是重要的。實(shí)施例96-100具有不同電荷密度的超形變小泡的懸浮液(TL=10重量％)凈負(fù)電荷，由于25，33，50，67，75摩爾％磷脂酰甘油；137毫克，205毫克，274毫克，343毫克，411毫克來(lái)自大豆的磷脂酰甘油411毫克，343毫克，274毫克，205毫克，137毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿452毫克Tween809毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．42毫克胰島素／毫升最終懸浮液根據(jù)實(shí)施例93-95中的描述制備脂質(zhì)小泡。如從圖4中可以看到，提高膜中帶電荷脂質(zhì)的相對(duì)濃度增強(qiáng)小泡-胰島素締合，并且中等但是可接受地增大最終懸浮液的粘度。根據(jù)實(shí)施例93-95制備的較高SPG／SPC摩爾比的脂質(zhì)懸浮液更粘稠并且難以操作。然而，帶電荷脂質(zhì)成分的相對(duì)較高濃度的確提高小泡締合的胰島素的相對(duì)量。圖7詳細(xì)說(shuō)明了這一點(diǎn)。改變帶電荷脂質(zhì)含量影響非單調(diào)方式的蛋白質(zhì)(胰島素)的結(jié)合效率。首先，小泡締合胰島素的相對(duì)量增加。在SPC／SPG比例接近50時(shí)，觀察到最大相對(duì)結(jié)合。這提示非常高的SPG含量不利于胰島素的有效結(jié)合，可能是由于界面聚集作用和／或由于表面電荷對(duì)蛋白質(zhì)吸附動(dòng)力學(xué)的影響。(后者不應(yīng)該太快以致不能允許大分子在表面上重排，從而導(dǎo)致最大填充密度)。實(shí)施例101-104以1∶1與胰島素混合的高柔性帶電荷膜(TL=10重量％)874．4毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿125．6毫克膽酸鈉9毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．1起始溶液中4毫克胰島素／毫升使用不同的方法來(lái)制備小泡除了實(shí)施例1-27描述的擠出和冷凍-解凍循環(huán)外，還試驗(yàn)了簡(jiǎn)單得多的方案(其中懸浮液只是順序擠出)。發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)對(duì)于混合脂質(zhì)膜的吸附的效率沒有明顯區(qū)別(圖8)。但是，如“限制孔穿過(guò)測(cè)試”中評(píng)估的，脂質(zhì)小泡的形狀適應(yīng)性對(duì)于不同的批量不同發(fā)現(xiàn)根據(jù)實(shí)施例1-27制備的小泡的形變性最高。實(shí)施例105-106具有各種添加劑的超柔性帶電荷膜(最終組成)437毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿63毫克膽酸鈉1毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．1最終懸浮液中2毫克胰島素／毫升添加劑A間-甲酚1．5毫克／毫升(最終)添加劑B苯甲醇2．5毫克／毫升(最終)向含有膽酸鈉的TransfersomesTM中加入助溶劑影響最終膜締合的胰島素量。在間-甲酚存在下結(jié)合的相對(duì)效率是60％，在向試驗(yàn)懸浮液加入苯甲醇之后是90％。實(shí)施例103-104中使用的添加劑可以作為防腐劑。實(shí)施例107-110具有來(lái)自不同來(lái)源的不同胰島素的類似膜437毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿63毫克膽酸鈉1毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．12毫克胰島素／毫升來(lái)自Actrapid100HMTM(Novo-Nordisk)源自干的人重組體(Novo-Nordisk)源自干的豬的胰島素(SigmaChemicalIndustries)來(lái)自LisproTM，一種胰島素類似物(PfizerInc．)發(fā)現(xiàn)不同蛋白質(zhì)對(duì)于類似膜的吸附的效率沒有明顯差別。但是這不排除解吸／吸附的不同速度的可能性。特別是如果干胰島素溶解于酸性緩沖液中，并且使其回到中性pH范圍，則該干胰島素對(duì)于混合脂質(zhì)膜的吸附效率和來(lái)自即用型ActrapidTM(Novo-Nordisk)溶液的胰島素的效率是一樣的。實(shí)施例111-118軟的不帶電荷的膜起始懸浮液(10％TL)1099．7毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿900．3毫克Tween8019毫升磷酸鹽緩沖液，pH7最終懸浮液，包括與上面所述的脂質(zhì)混合物混合的8．4微克IF，如圖10給出的，使用1．84毫克TL／毫升至18．4微克TL／毫升來(lái)產(chǎn)生相對(duì)量增加的干擾素。制劑含有具有增加摩爾比的蛋白質(zhì)／脂質(zhì)混合物并且基本上根據(jù)實(shí)施例60-71所述制備。根據(jù)實(shí)施例1-27所述進(jìn)行試驗(yàn)，有兩點(diǎn)改變。第一涉及使用Centrisart分離試管(截留分子量100k道爾頓)，其在該試驗(yàn)系列中總是預(yù)先包被白蛋白(來(lái)自含有40毫克BSA／毫升緩沖液的溶液)以將非特異性蛋白質(zhì)吸附的量降低到低于15％。與BSA孵育后，試管用緩沖液洗滌兩次并且裝入合適濃度的干擾素溶液(通過(guò)在相同的緩沖液中稀釋貯存溶液來(lái)制備)。為了評(píng)估最終蛋白質(zhì)濃度，使用商售用于IF的ELISA免疫測(cè)試試劑盒。為了計(jì)算小泡締合的干擾素的量，使用和實(shí)施例1-18描述的相同的方法。兩次或三次測(cè)得蛋白質(zhì)結(jié)合的程度與來(lái)自上清液的“丟失的蛋白質(zhì)”相同。圖10中給出了結(jié)果，給出了與胰島素結(jié)合所述定性類似的圖。實(shí)施例119-134高柔性帶電荷膜起始懸浮液總脂質(zhì)(TL)含量10重量％，包括874．4毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿125．6毫克膽酸鈉9毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．1最終懸浮液圖10中給出的脂質(zhì)／蛋白質(zhì)混合物(其它數(shù)據(jù)相當(dāng)于實(shí)施例111-118中給出的那些)圖10中所詳述的兩組不同試驗(yàn)系列的結(jié)果(實(shí)心圓圈和方框)表明盡管蛋白質(zhì)分子上有凈負(fù)電荷，但是負(fù)的膜電荷對(duì)于干擾素結(jié)合到高度形變雙層上的效率有期望的作用。實(shí)施例135-145起始懸浮液(10％TL)軟的不帶電荷膜SPC／Tw80550毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿450毫克Tween809毫升磷酸鹽緩沖液，pH6．5軟的帶電荷膜SPC／膽酸鈉874．4毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿125．6毫克膽酸鈉9毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．1最終懸浮液包括上面給出比例的脂質(zhì)和10000IU的白細(xì)胞介素-2(IL-2)一起處理了給出的脂質(zhì)混合物和蛋白質(zhì)。然后測(cè)定締合程度?；旧细鶕?jù)對(duì)于實(shí)施例119-134所述進(jìn)行分離，而使用Renca-細(xì)胞生長(zhǎng)的蛋白質(zhì)依賴性刺激與標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較，體外測(cè)定IL-2的量。這得到了下面表中給出的數(shù)據(jù)(以IU給出絕對(duì)IL-2濃度和以％表示的相對(duì)蛋白質(zhì)含量)白細(xì)胞介素與超形變小泡締合作用的效率對(duì)時(shí)間的函數(shù)第一天第六天SPC／膽酸鈉SPC／Tw80SPC／膽酸鈉SPC／Tw80IU％IU％IU％IU％起始1000069100001901000015410000364結(jié)合80005510001957508875027游離65004542508175012200073回收14500100525010065001002750100起始值和最終值(總的回收蛋白)之間的偏差部分由于小泡／IL-2分離期間蛋白質(zhì)的損失和部分由于存在脂質(zhì)而改變蛋白質(zhì)活性。發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞介素和預(yù)先形成的具有不同表面電荷密度的高度形變脂質(zhì)小泡的短期締合對(duì)于電荷作用的敏感性比上面表中所建議的(沒有給出數(shù)據(jù))小。實(shí)施例146-148常規(guī)中性小泡(起始懸浮液)1克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿9mM磷酸鹽緩沖液，pH6．5高度形變中性小泡(起始)550毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿450毫克Tween809毫升磷酸鹽緩沖液，pH6．5高度形變的帶電荷小泡(起始)874．4毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿1％5．6毫克膽酸鈉9毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．1混合有降鈣素(例如鮭魚油)的小泡(最終懸浮液)每毫升最終懸浮液有100毫克總脂質(zhì)每100毫克總脂質(zhì)有1毫克蛋白質(zhì)。根據(jù)上述制備所有脂質(zhì)懸浮液。向預(yù)先形成的小泡中加入蛋白質(zhì)(摻雜少量125Ⅰ-標(biāo)記的蛋白質(zhì)標(biāo)記，在使用前不久純化)并且孵育至少24小時(shí)；或者向脂質(zhì)加入蛋白質(zhì)溶液并且在懸浮液制備期間通過(guò)微孔過(guò)濾器共擠出。為了測(cè)定多肽結(jié)合膜的相對(duì)效率，使用大小排阻凝膠色譜對(duì)蛋白質(zhì)／小泡混合物進(jìn)行層析，接著檢測(cè)放射性。這提供了含有分別與小泡締合的和溶液中的放射性標(biāo)記的蛋白質(zhì)的兩個(gè)峰。曲線下的面積分別是對(duì)于常規(guī)小泡是大約30％和70％，對(duì)于中性軟膜是60-70％和40-30％，對(duì)于帶電荷的高柔性膜是大于80％和小于20％。實(shí)施例149-152高度形變中性小泡(起始)550毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿450毫克Tween809毫升磷酸鹽緩沖液，pH6．5高度形變帶電荷小泡(起始)874．4毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿125．6毫克膽酸鈉9毫升磷酸鹽緩沖液，pH7．1混合有免疫球蛋白G的小泡(最終懸浮液)每毫升最終懸浮液有100毫克總脂質(zhì)每100毫克總脂質(zhì)有0．5毫克和1毫克蛋白質(zhì)。根據(jù)上述制備所有脂質(zhì)懸浮液。通過(guò)加入到預(yù)先形成的小泡懸浮液中將免疫球蛋白(定向抗熒光素的單克隆IgG)摻入到制劑中。將締合的小泡與游離量的免疫球蛋白分離后，通過(guò)使用分離的、原始的和對(duì)照溶液中熒光猝滅來(lái)測(cè)定來(lái)自前者的相對(duì)影響。這提供了各部分中最終IgG濃度。估計(jì)在帶電荷高度形變的小泡情況下，IgG載體膜締合效率至少是85％，而對(duì)于中性軟膜大約是低10％。觀察到的小的差別可能是由于Ig包含大的疏水性Fc區(qū)的事實(shí)，所述Fc區(qū)即使在不存在膜軟化的、產(chǎn)生缺陷成分的情況下也容易插入到脂質(zhì)膜中。實(shí)施例153-154高度形變帶電荷小泡，C型130．5毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿19．5毫克膽酸鈉鹽0．1毫升乙醇高度形變不帶電荷的小泡，T型75毫克來(lái)自大豆的磷脂酰膽堿75毫克Tween800．1毫升乙醇胰島素，人重組體1．35毫升ActrapidTM100(Novo-Nordisk)試驗(yàn)制劑．每種脂質(zhì)混合物溶解于乙醇中直到獲得均勻的磷脂溶液(注意膽酸鈉不能很好地溶解)。將混合物注入胰島素溶液中并且充分混合。老化大約12小時(shí)后，為了有利于進(jìn)行，得到的“粗小泡”懸浮液通過(guò)0．2毫微米過(guò)濾器(Sartorius，Gottingen)過(guò)濾幾次，得到好的樣品均一性。最終胰島素濃度是80IU／毫升。試驗(yàn)．男性健康志愿者(75公斤，42歲)在第一次葡萄糖濃度測(cè)定之前禁食17小時(shí)。暫時(shí)改變其血液中葡萄糖濃度后，通過(guò)置于其臂中的軟靜脈導(dǎo)管每10分鐘至20分鐘輸入2毫升至4毫升樣品。最初試驗(yàn)期是70分鐘，其間平均血液葡萄糖濃度是78．4，施用C型Transfersulin懸浮液(45IU)并且均勻涂抹在另一只前臂內(nèi)側(cè)完整皮膚表面(以幾種順序)使得覆蓋56cm2的面積。施用試驗(yàn)懸浮液后30分鐘，皮膚表面出現(xiàn)可見干燥；30分鐘后，只有懸浮液的稀薄痕跡可見。使用標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖脫氫酶測(cè)試(Merck，Gluc-DH)來(lái)測(cè)定血糖濃度。每個(gè)樣品含有三個(gè)獨(dú)立的試樣并且每一測(cè)試至少進(jìn)行三次。這保證平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差很少超過(guò)5毫克／dL，典型誤差是3毫克／dL級(jí)。結(jié)論．上皮(epicutaneous)給藥與Transfersomes(Transfersulin)締合的胰島素后，血糖量正常的志愿受試者體內(nèi)的血葡萄糖濃度的變化總是比通過(guò)皮下注射胰島素溶液實(shí)現(xiàn)的血葡萄糖濃度的變化慢。上表皮給藥Transfersulin后血液中葡萄糖濃度的最大減少一般超過(guò)相應(yīng)的皮下注射產(chǎn)生的血液中葡萄糖濃度的最大減少的10％，曲線下的面積至少是20％，使用公開的數(shù)據(jù)作為參考。對(duì)于t大于3小時(shí)懸浮液C情況下，血液中血葡萄糖濃度的平均抑制是大約18毫克／dL。懸浮液T的結(jié)果是大約比用懸浮液C測(cè)得的數(shù)據(jù)差35％。加入磷脂酰甘油(相對(duì)于磷脂酰膽堿的15重量％)將C-和T-型制劑之間的差異減小到25％(沒有給出數(shù)據(jù))。但是，即使使用迄今為止的最好的其它非入侵式胰島素送遞方法，例如使用電離子透入法(Meyer，B．R．，Katzeff，H．L．，Eschbach，J．Trimmer，J．，Zacharias，S．R．，Rosen，S．，Sibalis，D．Amer．J．Med．Sci．1989，2973211-325)或者通過(guò)鼻噴入，分別將少于5％和少于10％的胰島素分子帶入全身血液循環(huán)中。實(shí)施例155高度形變的帶電荷小泡和實(shí)施例72-76一樣的組合物胰島素，人重組體和實(shí)施例72-76一樣的ActrapidTM(凍干物)(Novo-Nordisk)。根據(jù)實(shí)施例61-65制備試驗(yàn)制劑?；旧细鶕?jù)上面實(shí)施例所述進(jìn)行給藥，但是禁食期持續(xù)更長(zhǎng)并且取血樣更早開始。因此，實(shí)驗(yàn)在沒有監(jiān)視禁食的12小時(shí)時(shí)開始，進(jìn)一步禁食12小時(shí)，在此期間不經(jīng)任何處理來(lái)監(jiān)測(cè)血液葡萄糖水平，監(jiān)測(cè)期是16小時(shí)，在此期間受試者被禁食并且用上皮給藥的Transfersulin處理。其它差別是施藥面積只有10cm2。在給藥胰島素之前不定期取樣。給藥Transfersulin后，在頭4小時(shí)中每20分鐘取一次血樣，此后每30分鐘取一次。所有的樣品用一種自身診斷裝置Accutrend(Boehringer-Mannheim，德國(guó))分析。在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)讀取3-5個(gè)讀數(shù)。在圖12中給出的結(jié)果相當(dāng)于血葡萄糖濃度變化的平均值。虛線給出95％置信限。在第二“未處理”期中，平均血葡萄糖濃度是83．2毫克／dL。清楚地看出利用高可適用混合脂質(zhì)小泡上皮給藥后，在頭幾個(gè)小時(shí)內(nèi)降低血葡萄糖濃度。葡萄糖動(dòng)態(tài)曲線類似于前面試驗(yàn)系列中測(cè)得的結(jié)果，總的效果在一定程度上更強(qiáng)，可能是由于后者試驗(yàn)制劑中高得多的藥物濃度。實(shí)施例156-158高度形變的帶電荷小泡和實(shí)施例153一樣的組合物胰島素，人重組體ActrapidTM(Novo-Nordisk)，如圖12中給出的批量。在該試驗(yàn)系列中，通過(guò)使用相同批的Transfersome研究了胰島素的批間變化的影響。根據(jù)前面實(shí)施例所述進(jìn)行給藥。單位面積的劑量和前面實(shí)施例中使用的相同。在所有三個(gè)實(shí)驗(yàn)中平均血葡萄糖濃度大約相同。盡管如此，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果在胰島素批間非常不同。一批非常好而另一批根本沒有作用；第三批產(chǎn)生中間結(jié)果。胰島素的小的批-批變化(其是已知的，但是通常沒有報(bào)道，并且在非常大的吸附(載體)表面存在下特別顯著)，看起來(lái)影響胰島素-載體相互作用的效率和／或動(dòng)力學(xué)。相信藥物釋放的變化的速度對(duì)于該現(xiàn)象特別敏感。因此不僅在重要的生物試驗(yàn)前研究載體締合的脂質(zhì)的量是重要的，而且測(cè)定藥物釋放的速度也是重要的。測(cè)定作為注射后制劑特征的受試動(dòng)物例如小鼠或大鼠中葡萄糖動(dòng)力學(xué)對(duì)于該目的是有用的。施藥具有相同批的Transfersomes但是不同批的胰島素的三種不同批的Transfersulin后，血糖量正常的人志愿受試者體內(nèi)葡萄糖動(dòng)力學(xué)清楚地表明原藥物特征中即使小的變化也對(duì)最終制劑的生物活性有相當(dāng)強(qiáng)的影響(參見圖12)。參考文獻(xiàn)Cevc，G．，Strohmaier，L．，Berkholz，J．，Blume，G．生物物理研究(Stud．Biophys．)1990，13857ffCevc，G．，Hauser，M．，Kornyshev，A．A．Langmuir1995，113103-3110。Prime，K．和Whitesides，G．M．科學(xué)(Science)，1991，2521164-1167Deber，C．M．；Hughes，D．W．；Fraser，P．E．；Pawagi，A．B．；Moscarello，M．A．Arch生物化學(xué)生物物理(Biochem．Biophys．)1986，245455-463。Zimmerman，R．M．，Schmidt，C．F．，Gaub，N．H．E．J．ColloidInt．Sci．(膠體界面科學(xué)雜志)1990，139268-280。Hernandez-Caselles，T．；Villalaain，J．；Gomez-Fernandez，J．C．分子、細(xì)胞、生物化學(xué)(Mol．Cell．Biochem．)1993，120119-126。Scott，D．L．；Mandel，A．M．；Sigler，P．B．；Honig，B．生物物理雜志(Biophys．J．)1994，67493-504。Norde，W．，級(jí)膠體界面科學(xué)(Adv．ColloidInterfaceSci．)1986，25267-340。Lee，C．-S．；Belfort，G．美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院報(bào)(Proc．Natl．Acad．Sci．)1989，86，8392-8396。Haynes，C．A．；Norde，W．膠體和表面(ColloidsandSurgaces)B1994，2，517ff。Haynes，C．A．；Sliwinski，E．；Norde，W．膠體界面科學(xué)雜志(J．ColloidInterfaceSci．)1994，164，394ff。界面蛋白質(zhì)，T．A．Horbett和J．L．Brash，編輯，ACS會(huì)議集錦(ACSSymposiumSeries)602，1995，紐約。Torchilin，V．P．；Goldmacher，V．S．；Smirnov，V．N．生物化學(xué)生物物理研究通訊(Biochem．Biophys．Res．Comm．)1978，85983-990。Meyer，B．R．，Katzeff，H．L．，Eschbach，J．，Trimmer，J．，Zacharias，S．R．，Rosen，S．，Sibalis，D．美國(guó)藥物科學(xué)雜志(Amer．J．Med．Sci．)1989，297321-325。其它信息文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)Pauly，H．C．；Koulbanis，C．用于皮膚護(hù)理的含有氨基酸和肽和蛋白質(zhì)的脂質(zhì)體。FR／Patent#2627385／89。Louhgrey，H．C．；Cullis，P．R．；Bally，M．B．；Choi，L．S．L．；Wong，K．F．靶向脂質(zhì)體和使用衍生化脂質(zhì)用于脂質(zhì)體-蛋白質(zhì)偶聯(lián)的方法。PCT#9100289／91。Hostetler，K．Y．；Felgner，P．L．；Felgner，J．用于延長(zhǎng)治療用肽和蛋白質(zhì)的生物利用度和保質(zhì)期的脂質(zhì)體。PCT#9104019／91Matsuda，H．；Ueda，Y．；Yanmauchi，K．；Inui，J．緩釋蛋白質(zhì)-脂質(zhì)體復(fù)合體JP#0482839／92Kobayashi，N．；Ishida，S．；Kumazawa，E．定量測(cè)定脂質(zhì)體包被的生物活性蛋白質(zhì)的方法JP#05302925／93Tagawa，T．；Hosokawa，S；Nagaike，K．含有結(jié)合了蛋白質(zhì)的脂質(zhì)體的藥物。EPT#526700／93。蛋白質(zhì)-脂質(zhì)體的相互作用Ledoan，T．；Elhajji，Rebuffat，S．；Rajesvari，M．R．；Bodo，B．trichorianinea3c與膜模型的相互作用的熒光研究(Fluorescencestudiesoftheinteractionoftrichorianinea3cwithmodelmembranes．)Biochim．Biophys．Acta1986，858；1-5。Krishnaswamy，S．凝血酶原酶復(fù)合體對(duì)于趨向復(fù)合體形成的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)-胰相互作用的綜合作用。生物化學(xué)雜志(J．Biol．Chem．)1990，2653708-3718。Liu，D．；Huang，L．胰蛋白酶誘導(dǎo)的脂質(zhì)小泡的裂解表面電荷和脂質(zhì)成分的影響。生物化學(xué)年報(bào)(Anal．Biochem．)1992，2021-5。權(quán)利要求1．至少兩種當(dāng)與合適的液體介質(zhì)接觸時(shí)表現(xiàn)出兩親性性質(zhì)的物質(zhì)的復(fù)合體，所述兩種物質(zhì)差別在于在該介質(zhì)中它們的溶解度不同，并且所述復(fù)合體與所述介質(zhì)接觸時(shí)能形成擴(kuò)展表面，尤其是膜表面，使得兩親性第三種物質(zhì)的分子能與所述表面締合，其中選擇所述至少兩種物質(zhì)，使得-在所述液體介質(zhì)中比另一種物質(zhì)更可溶的物質(zhì)形成比復(fù)合體的所述另一種物質(zhì)較小擴(kuò)展表面，和-第三種物質(zhì)的分子比通過(guò)所述另一種溶解度較小的物質(zhì)單獨(dú)形成的擴(kuò)展表面更可能與通過(guò)復(fù)合的至少兩種物質(zhì)中的另一種形成的擴(kuò)展表面締合。2．至少兩種當(dāng)與合適的液體介質(zhì)接觸時(shí)表現(xiàn)出兩親性性質(zhì)的物質(zhì)的復(fù)合體，所述兩種物質(zhì)至少當(dāng)復(fù)合時(shí)在與所述介質(zhì)接觸中能形成擴(kuò)展表面，特別是膜表面，所述表面載有凈電荷，使得具有凈電荷的另一種兩親性物質(zhì)的分子能與所述表面締合，表面的凈電荷密度和與表面締合的兩親性分子的凈電荷具有相同的符號(hào)(兩者都是負(fù)的或者兩者都是正的)。3．至少兩種當(dāng)與合適的液體介質(zhì)接觸時(shí)表現(xiàn)出兩親性性質(zhì)的物質(zhì)的復(fù)合體，所述兩種物質(zhì)差別在于在該介質(zhì)中它們的溶解度不同，并且在與所述介質(zhì)接觸中，至少當(dāng)復(fù)合時(shí)，能形成擴(kuò)展表面，尤其是膜表面，使得兩親性第三種物質(zhì)的分子能與所述表面締合，其中選擇所述至少兩種物質(zhì)，使得-在所述液體介質(zhì)中比另一種物質(zhì)更可溶的物質(zhì)形成比復(fù)合體的所述另一種物質(zhì)較小擴(kuò)展表面，和-第三種物質(zhì)的分子比通過(guò)所述另一種溶解度較小的物質(zhì)單獨(dú)形成的擴(kuò)展表面更可能與通過(guò)兩種物質(zhì)的結(jié)合形成的擴(kuò)展表面締合，和-通過(guò)結(jié)合的物質(zhì)形成的表面以及可能與所述表面締合的第三種物質(zhì)的分子兩者都帶有負(fù)電荷或兩者都帶有正電荷。4．權(quán)利要求1，2或3的復(fù)合體，特征在于其包括至少一種能自身聚集形成擴(kuò)展表面的兩親性物質(zhì)，當(dāng)所述物質(zhì)與另一種復(fù)合成分、尤其是與一種在液體介質(zhì)中比所述自身聚集物質(zhì)更可溶的兩親性物質(zhì)混合時(shí)，擴(kuò)展表面成為柔性更大的，并且尤其是所述兩種物質(zhì)在該介質(zhì)中的溶解度差異至少10倍，優(yōu)選至少100倍。5．權(quán)利要求1，2或3的復(fù)合體，特征在于其包括至少一種能自身聚集形成擴(kuò)展表面的兩親性物質(zhì)和至少一種當(dāng)加入到所述表面中時(shí)支持所述表面的增加的曲率的兩親性物質(zhì)，所述增加曲率物質(zhì)的濃度低于飽和濃度的99％，或者低于高于該濃度就不能形成表面的濃度的99％，無(wú)論哪個(gè)比較高。6．權(quán)利要求4或5的復(fù)合體，特征在于所述溶解度更大或增加曲率物質(zhì)的量至少是如權(quán)利要求5定義的相對(duì)濃度的0．1％，常常是1-80％，更優(yōu)選10-60％，最優(yōu)選20-50％。7．權(quán)利要求5或6的復(fù)合體，特征在于表面具有相應(yīng)于15nm和5000nm之間，經(jīng)常在30nm和1000nm之間，更經(jīng)常40nm和300nm之間，最優(yōu)選50nm和150nm之間的平均半徑的平均曲率，該平均曲率定義為表面所封閉的區(qū)域的平均半徑的倒數(shù)。8．權(quán)利要求5-7任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于表面被固體支持，尤其是被合適的曲率或大小的表面支持。9．權(quán)利要求2-8任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于表面相關(guān)的帶電荷成分的相對(duì)濃度在所有形成表面的兩親性物質(zhì)合起來(lái)的濃度的5和100相對(duì)摩爾％之間，更優(yōu)選地在10和80相對(duì)摩爾％之間，最優(yōu)選在20和60相對(duì)摩爾％之間。10．權(quán)利要求2-9任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于表面上平均電荷密度在0．05Cbm-2(每平方米庫(kù)侖)和0．5Cbm-2之間，優(yōu)選在0．075Cbm-2和0．4Cbm-2之間，特別優(yōu)選0．10Cbm-2和0．35Cbm-2之間。11．權(quán)利要求2-10任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于選擇優(yōu)選包括一價(jià)或低價(jià)離子的背景電解質(zhì)的濃度和組成，以使電荷-電荷相互作用對(duì)期望的締合作用的正效應(yīng)最大，并相應(yīng)于在I=0．001和I=1之間，優(yōu)選I=0．02和I=0．5之間，更優(yōu)選I=0．1和I=0．3之間的離子強(qiáng)度。12．權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于在液體介質(zhì)中溶解度較低的并且優(yōu)選是體系中構(gòu)成表面的和／或帶電荷兩親性物質(zhì)的物質(zhì)是脂質(zhì)或類脂質(zhì)的物質(zhì)，而在液體介質(zhì)中溶解度更大的并且優(yōu)選是引起表面曲率、柔性或適用性增加的物質(zhì)和／或是帶電荷的物質(zhì)的該物質(zhì)是一種表面活性劑，或者與第三種締合物質(zhì)相同。13．權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于其包括分散或懸浮于液體介質(zhì)和被一層或幾層至少兩種類型或形式的自聚集兩親性物質(zhì)的類膜包衣包圍的液體細(xì)微小滴形式的分子的重排，所述至少兩種物質(zhì)在優(yōu)選含水的液體介質(zhì)中的溶解度的差異至少為10倍、優(yōu)選至少為100倍，使得溶解度更大的物質(zhì)的同型聚集體的平均直徑或者兩種物質(zhì)的異型聚集體的平均直徑小于溶解度較小的物質(zhì)的同型聚集體的平均直徑。14．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的復(fù)合體，其中能形成表面的所有兩親性物質(zhì)的總含量占聚集體總干質(zhì)量的0．01％至30重量％，特別是在0．1％至15重量％之間，最優(yōu)選在1％和10重量％之間，特別是如果復(fù)合體要被用來(lái)施用到人體或動(dòng)物體表或體內(nèi)時(shí)。15．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于其含有至少一種(生物)相容的極性或非極性表面支持的脂質(zhì)作為形成更擴(kuò)展表面的物質(zhì)，其中由復(fù)合體形成的該表面優(yōu)選具有雙層結(jié)構(gòu)。16．權(quán)利要求15的復(fù)合體，其中所述擴(kuò)展表面形成物質(zhì)是來(lái)自生物源或相應(yīng)的合成脂質(zhì)的脂質(zhì)或類脂類，或者是這樣的脂質(zhì)的修飾物，優(yōu)選是甘油酯，甘油磷脂，類異戊二烯脂，神經(jīng)鞘脂類，甾族化合物，硬脂酸精或甾醇，含硫或含碳水化合物的脂質(zhì)，或者任何其它能形成雙層的脂質(zhì)，特別是半質(zhì)子化的液體脂肪酸，并且優(yōu)選地選自下面種類磷脂酰膽堿，磷脂酰乙醇胺，磷脂酰甘油，磷脂酰肌醇，磷脂酸，磷脂酰絲氨酸，神經(jīng)鞘磷脂或或鞘磷脂，糖神經(jīng)鞘脂類(例如腦苷酯類，脂?；拾贝技憾嗵擒眨蛑?，神經(jīng)鞘縮醛磷脂)，神經(jīng)節(jié)甙脂或其它糖脂或合成脂質(zhì)，特別是二油?；?，二亞油酰基-，二亞麻基-，二亞麻?；?，二花生?；?，二月桂?；?，二肉豆蔻?；?，二棕櫚酰基-，二硬脂?；?，或者相應(yīng)的鞘氨醇衍生物，或任何其它的糖脂或二?；?，二烯?；?，或二烷基-的脂質(zhì)。17．權(quán)利要求12-16任一項(xiàng)的復(fù)合體，其中所述表面活性劑是非離子、兩性離子、陰離子或陽(yáng)離子表面活性劑，尤其是長(zhǎng)鏈脂肪酸或醇，烷基-三／二／甲基-銨鹽，烷基硫酸鹽，膽酸的一價(jià)鹽，脫氧膽酸鹽，甘氨膽酸鹽，甘氨脫氧膽酸鹽，?；敲撗跄懰猁}或?；悄懰猁}，?；?或鏈烷酰基-二甲基氨基氧化物，特別是十二烷基-二甲基-氨基氧化物，烷基-或鏈烷?；?N-甲基葡糖酰胺，N-烷基-N，N-二甲基甘氨酸，3-(酰基二甲基銨)-烷磺酸鹽，N-?；?磺基甜菜堿，聚乙二醇-辛基苯基醚，特別是九乙二醇-辛基苯基醚，聚乙烯-?；?，特別是九乙烯-十二烷?；?，聚乙二醇-異酰基醚，特別是八乙二醇-異十三烷酰基醚，聚乙烯-酰基醚，特別是八乙烯十二烷酰基醚，聚乙二醇-脫水山梨糖醇-酰基酯，例如聚乙二醇-20-脫水山梨糖醇-單月桂酸酯(Tween20)或聚乙二醇-20-脫水山梨糖醇-單油酸酯(Tween80)，聚羥基乙烯-酰基醚，特別是聚羥基乙烯-月桂酰基、-肉豆蔻酰基、-十六烷基硬脂酰基或-油?；眩缇哿u基乙烯-4、6、8、10或12等-月桂?；?例如Brij系列)，或者相應(yīng)的酯，例如聚羥基乙烯-8-硬脂酸酯(Myrj45)、-月桂酸酯或-油酸酯類型，或者聚乙氧基化的蓖麻油40(CremophorEL)，脫水山梨糖醇-單烷基酸酯(例如Arlacel或Span)，特別是脫水山梨糖醇-單月桂酸酯(Arlacel20，Span20)，?；?或鏈烷?；?N-甲基葡糖酰胺，特別是癸?；?或十二烷酰基-N-甲基葡糖酰胺，烷基硫酸鹽，例如月桂基-或油?；蛩猁}，脫氧膽酸鈉，甘氨脫氧膽酸鈉，油酸鈉，牛磺酸鈉，脂肪酸鹽，例如反油酸鈉，亞油酸鈉，月桂酸鈉，溶血磷脂，例如正-亞十八烷基(=油?；?-甘油磷脂酸，-磷酰基甘油，或-磷酰基絲氨酸，正-?；?，例如月桂酰基或油?；?甘油磷脂酸，-磷?；视停?磷?；z氨酸，正-十四烷基-甘油磷脂酸，-磷?；视停?磷?；z氨酸，相應(yīng)的棕櫚油酰基，反油酸酰基-，11-十八碳烯?；?溶血磷脂或者相應(yīng)的短鏈磷脂，還有表面活性多肽。18．權(quán)利要求12-17任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于從復(fù)合體形成的表面含有相對(duì)濃度范圍為1-80摩爾％，優(yōu)選10-60摩爾％，最優(yōu)選30-50摩爾％的帶電的膜成分。19．權(quán)利要求11-18任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于磷脂酰膽堿和／或磷脂酰甘油是支持表面的物質(zhì)和溶血磷脂，例如溶血磷脂酸或甲基磷脂酸，溶血磷脂酰甘油，或者溶血磷脂酰膽堿，或者部分N-甲基化了的溶血磷脂酰乙醇胺，膽酸一價(jià)鹽，脫氧膽酸鹽，甘氨膽酸鹽，甘氨脫氧膽酸鹽-或任何其它極性充分的甾醇衍生物，月桂酸鹽，肉豆蔻酸鹽，棕櫚酸鹽，油酸鹽，棕櫚油酸鹽，反油酸鹽或者一些其它脂肪酸和／或Tween-、Myrj-或Brij-型，或者還有Triton，脂肪磺酸鹽或-磺基甜菜堿，N-葡糖酰胺或-脫水山梨糖醇(Arlacel或Span)表面活性劑是較不能形成擴(kuò)展表面的物質(zhì)。20．權(quán)利要求11-19任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于所述擴(kuò)展表面所封閉的面積的平均半徑是在15nm至5000nm之間，常常在30nm至1000nm之間，更經(jīng)常在40nm至300nm之間，且最優(yōu)選50nm至150nm之間。21．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于與擴(kuò)展表面締合的第三種物質(zhì)包括特別是呈鏈分子形式的重復(fù)亞單元，例如低聚物或聚合物，特別是具有平均分子量高于800道爾頓，優(yōu)選高于1000道爾頓，更經(jīng)常高于1500道爾頓的物質(zhì)。22．權(quán)利要求21的復(fù)合體，特征在于第三種物質(zhì)是生物源的，優(yōu)選是生物活性的。23．權(quán)利要求1-22任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于尤其通過(guò)將其自身插入膜和與該膜接觸的液體介質(zhì)之間，而使第三種物質(zhì)與類膜擴(kuò)展表面締合。24．權(quán)利要求1-23任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于，其中相應(yīng)于第三種物質(zhì)的鏈分子含量與吸附劑表面的質(zhì)量相比在0．001和50相對(duì)百分?jǐn)?shù)之間，經(jīng)常在0．1和35相對(duì)百分?jǐn)?shù)之間，更優(yōu)選在0．5和25相對(duì)百分?jǐn)?shù)之間，最合適在1和20相對(duì)百分?jǐn)?shù)之間，該特定比值可能隨著所述鏈分子的摩爾質(zhì)量的增加而減小。25．權(quán)利要求21-24任一項(xiàng)的復(fù)合體，其中鏈分子是蛋白質(zhì)，并且所述分子的至少一部分與表面締合，前提是這樣的部分包括至少三個(gè)具有結(jié)合所述表面傾向的片段或官能團(tuán)。26．權(quán)利要求21-24任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于所述鏈分子屬于天然形式的或者經(jīng)過(guò)化學(xué)、生物化學(xué)或基因修飾后的多核苷酸類，例如DNA或RNA。27．權(quán)利要求2l-24任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于所述鏈分子屬于具有至少部分的與表面相互作用傾向的天然形式的或者一些化學(xué)，生物化學(xué)或基因修飾后形式的多糖類。28．權(quán)利要求21-27任一項(xiàng)的復(fù)合體，其中鏈分子可以用作如下的藥劑作為腎上腺類皮質(zhì)激素抑制劑，β-抗腎上腺劑，雄激素或抗雄激素，抗寄生蟲劑，合成代謝劑，麻醉劑或止痛劑，興奮劑，抗變應(yīng)性劑，抗心律失常劑，抗動(dòng)脈硬化劑，抗哮喘劑和／或支氣管痙攣劑，抗菌劑，抗抑郁劑和／或抗精神病劑，抗糖尿病劑，解毒藥，止吐劑，抗癲癇劑，抗纖維蛋白溶解劑，抗驚厥劑，抗膽堿能劑，酶，輔酶或相應(yīng)的抑制劑，抗組胺休克劑，抗高滲劑，藥物活性生物抑制劑，抗低滲劑，抗凝劑，抗真菌劑，抗肌無(wú)力劑，抗帕金森病或老年性癡呆藥物，抗炎劑，抗發(fā)燒劑，抗風(fēng)濕劑，抗敗血病劑，呼吸回蘇劑或呼吸刺激劑，支氣管松馳劑，強(qiáng)心劑，化療劑，冠狀擴(kuò)展肌，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑，利尿劑，ganglium-阻斷劑，糖皮質(zhì)激素，抗-流感劑，止血?jiǎng)?，催眠劑，免疫球蛋白或其片段或者任何其它免疫活性物質(zhì)，生物活性碳?xì)浠衔?衍生物)，避孕藥，抗偏頭痛劑，鹽皮質(zhì)激素，嗎啡拮抗劑，肌肉松弛劑，麻醉劑，神經(jīng)治療劑，神經(jīng)安定劑，神經(jīng)傳遞素或者其拮抗劑，肽(衍生物)，眼科藥，(副)-交感神經(jīng)劑或(副)交感神經(jīng)阻滯藥，蛋白質(zhì)(衍生物)，牛皮癬／神經(jīng)性皮炎藥，擴(kuò)瞳藥，神經(jīng)刺激劑，鼻科藥，任何催眠劑或者其拮抗劑，鎮(zhèn)靜劑，解痙藥，結(jié)核菌抑制劑，泌尿科藥，血管收縮劑或血管舒張劑，病毒抑制劑或者任何愈合傷口的物質(zhì)或者這些藥劑的任何組合。29．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的復(fù)合體，其中所述第三種物質(zhì)鏈分子或試劑是生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。30．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的復(fù)合體，其中所述第三種物質(zhì)試劑具有免疫調(diào)節(jié)性質(zhì)，包括抗體，細(xì)胞因子，淋巴因子，趨化因子和植物、細(xì)菌、病毒、病原體或者免疫原相應(yīng)的活性部分，或者其部分或修飾物。31．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的復(fù)合體，其中所述第三種物質(zhì)試劑是一種酶，輔酶或一些其它類型的生物催化劑。32．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的復(fù)合體，其中所述第三種物質(zhì)試劑是識(shí)別分子，包括特別是粘附素，抗體，連環(huán)蛋白，選擇蛋白，陪伴蛋白，或者其部分。33．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的復(fù)合體，其中所述試劑是激素，特別是胰島素。34．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于其含有1-500I．U．胰島素／毫升，特別是20-400I．U．胰島素／毫升，最優(yōu)選50-250I．U．胰島素／毫升，優(yōu)選是人重組體或人源化類型。35．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于其含有0．01毫克至20毫克白細(xì)胞介素／毫升，特別是0．1至15毫克白細(xì)胞介素／毫升，最優(yōu)選1至10毫克白細(xì)胞介素／毫升，所述白細(xì)胞介素適合在人體或動(dòng)物體內(nèi)使用，包括IL-2，IL-4，IL-8，IL-10，IL-12，如果需要，最后稀釋后達(dá)到實(shí)際期望的藥物濃度范圍。36．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于其含有多達(dá)20相對(duì)重量％干擾素，特別是0．1毫克至15毫克干擾素／毫升，最優(yōu)選1至10毫克干擾素／毫升，所述干擾素適合在人體或動(dòng)物體內(nèi)使用，包括但不限于α-，β-，γ-IF，如果需要，最后稀釋后使藥物濃度達(dá)到實(shí)際優(yōu)選濃度范圍。37．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于，其含有多達(dá)25毫克神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)／毫升懸浮液或者多達(dá)25相對(duì)重量％的NGF作為藥劑，尤其是0．1-15相對(duì)重量％蛋白質(zhì)，最優(yōu)選1-10相對(duì)重量％NGF，優(yōu)選是人重組NGF，并且如果需要，在使用前稀釋。38．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的復(fù)合體，特征在于，該懸浮液含有多達(dá)25毫克免疫球蛋白(Ig)／毫升懸浮液或者多達(dá)相對(duì)于總脂質(zhì)的25重量％Ig，優(yōu)選含有0．1相對(duì)重量％至15相對(duì)重量％蛋白質(zhì)，最優(yōu)選含有1相對(duì)重量％至10相對(duì)重量％免疫球蛋白，其中該試劑以完整抗體，其部分，或者其生物可接受的或活性修飾形式使用。39．制備活性劑，特別是生物、化妝和／或藥學(xué)活性試劑的制劑的方法，特征在于下面步驟-選擇至少兩種在合適的液體介質(zhì)中溶解度不同的兩親性物質(zhì)，至少當(dāng)與所述介質(zhì)接觸而復(fù)合時(shí)，所述物質(zhì)能形成擴(kuò)展表面，尤其是膜表面；-使得與只是由在液體介質(zhì)中溶解度較小并且比單獨(dú)其它物質(zhì)形成更加擴(kuò)展的表面的物質(zhì)所形成的表面相比，通過(guò)物質(zhì)的復(fù)合而形成的擴(kuò)展表面能夠吸引活性劑并且與活性劑締合至較大程度。40．權(quán)利要求39的方法，特征在于，表面形成物質(zhì)的復(fù)合體通過(guò)在試劑分子存在下的過(guò)濾，壓力變化或者機(jī)械勻化，振蕩，攪拌，混合，或者利用任何其它控制的機(jī)械破碎法來(lái)產(chǎn)生。41．權(quán)利要求39的方法，其中使表面形成物質(zhì)的選擇的復(fù)合體吸附到或者以一些其它的方式永久接觸合適的支持固體表面，然后通過(guò)一次加入物質(zhì)或同時(shí)加入幾種物質(zhì)而與液體介質(zhì)接觸，從而后面的表面形成步驟的至少一步是在接著與固體支持的表面締合的試劑存在下進(jìn)行的。42．權(quán)利要求38的方法，特征在于，不管是懸浮于液體介質(zhì)或固體支持的，吸附表面或其前體首先通過(guò)下面的步驟制備，所述步驟可以包括依次混合表面形成分子，然后加入締合分子并允許與所述表面締合，如果需要，通過(guò)攪拌，混合或溫育協(xié)助進(jìn)行，前提是這樣的處理不破壞所進(jìn)行的表面。43．權(quán)利要求39-42中任一的方法，特征在于試劑分子所締合的表面相應(yīng)于權(quán)利要求1-37任一項(xiàng)的表面。44．權(quán)利要求39-43中任一的方法，特征在于液體介質(zhì)懸浮液的特征相應(yīng)于權(quán)利要求1-37任一項(xiàng)。45．制備用于各種藥劑的非入侵式施用的制劑的方法，所述試劑例如是抗糖尿病試劑，生長(zhǎng)因子，免疫調(diào)節(jié)劑，酶，識(shí)別分子，等等，或者腎上腺皮質(zhì)抑制劑，腎上腺素抑制劑等等，其中能與所述試劑分子締合的表面由至少一種兩親性物質(zhì)，至少一種親水性液體，至少一種界面活性物質(zhì)或表面活性劑和至少一種藥劑形成，在一些情況下，還有其它常規(guī)成分，其一起形成所述的制劑。46．權(quán)利要求45的方法，特征在于，至少一種界面活性物質(zhì)或表面活性劑、至少一種兩親性物質(zhì)、至少一種親水性液體和試劑分開混合，如果需要，將其溶解以形成溶液，然后將所得到的混合物或溶液相組合以接著優(yōu)選通過(guò)機(jī)械能作用誘導(dǎo)與試劑分子締合的實(shí)體的形成。47．權(quán)利要求45或46的方法，特征在于所述兩親性物質(zhì)可以直接使用，或者溶解于生理相容性的極性液體中，該液體可以是水或者與水混溶，或者與極性溶液一起溶解于溶劑化介導(dǎo)的試劑中。48．權(quán)利要求47的方法，其中所述極性溶液包括至少一種界面活性物質(zhì)或者一種表面活性劑。49．權(quán)利要求45-48任一項(xiàng)的方法，特征在于通過(guò)向液相加入物質(zhì)，反相蒸發(fā)，注射或透析，如果需要，借助于機(jī)械壓力，例如振蕩，攪拌，振動(dòng)，勻化，超聲，剪切，冷凍和融化，或者使用常規(guī)驅(qū)動(dòng)壓力過(guò)濾而誘導(dǎo)所述表面的形成。50．權(quán)利要求49的方法，特征在于通過(guò)過(guò)濾誘導(dǎo)所述表面的形成，過(guò)濾材料具有0．01μm和0．8μm之間、優(yōu)選0．02μm和0．3μm之間、最優(yōu)選0．05μm和0．15μm之間的孔徑大小，借此可以串聯(lián)或平行使用幾種過(guò)濾器。51．權(quán)利要求45-50任一項(xiàng)的方法，特征在于制備所述試劑和載體，使在吸附表面形成后至少部分締合。52．權(quán)利要求45-51任一項(xiàng)的方法，特征在于僅在施用該制劑之前制備藥劑分子所締合的所述表面，如果方便，從合適的濃縮物或凍干物開始。53．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的物質(zhì)的復(fù)合體制備藥物載體，藥物貯庫(kù)或者用于任何其它類型的藥物或生物應(yīng)用的用途。54．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的物質(zhì)的復(fù)合體在生物工程或基因操作中的用途。55．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的物質(zhì)的復(fù)合體在用于生物處理或者診斷目的分離技術(shù)中的用途。56．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的物質(zhì)的復(fù)合體穩(wěn)定表面締合分子，尤其是鏈分子的用途，所述分子是至少部分兩親性的物質(zhì)，例如(衍生化的)蛋白質(zhì)，多肽，多核苷酸或多糖和／或在涉及表面締合狀態(tài)的這樣的分子的催化方法中的用途。57．前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的物質(zhì)的復(fù)合體影響所說(shuō)的表面締合分子和復(fù)合的可適用表面之間的締合和解締的動(dòng)力學(xué)和／或可逆性的用途，其中較高表面電荷密度和／或較大表面柔軟度和／或表面缺陷密度加速締合，或者相應(yīng)的降低減慢締合速度，或者還誘導(dǎo)部分分子解締。全文摘要本發(fā)明描述了適合開發(fā)、測(cè)試、制備和使用各種兩親性的、如果需要,修飾的大分子(例如多肽,蛋白質(zhì)等等)或者其它鏈分子(例如合適的,部分疏水性的多核苷酸或多糖)與聚集體的復(fù)合體的原理和方法。所述聚集體包括極性和/或帶電荷的兩親性物質(zhì)的混合物并且形成可以自由被懸浮或支持的擴(kuò)展表面。所描述的方法可以用來(lái)優(yōu)化聚集體,在與發(fā)揮一定活性或有用的功能的鏈分子締合后,該聚集體適合例如在藥物釋放、診斷或生物/催化領(lǐng)域體外或體內(nèi)應(yīng)用。作為具體實(shí)施例,描述了由負(fù)載(締合)有胰島素、干擾素、白細(xì)胞介素、神經(jīng)生長(zhǎng)因子、降鈣素和免疫球蛋白等的脂質(zhì)組成的小泡小滴的混合物。文檔編號(hào)A61K47/24GK1283107SQ98812660公開日2001年2月7日申請(qǐng)日期1998年10月23日優(yōu)先權(quán)日1998年10月23日發(fā)明者格雷戈?duì)枴と蚩松暾?qǐng)人:伊迪亞股份公司