專利名稱：具有磷酸二酯酶iv抑制活性的嘌呤衍生物的制作方法
本申請(qǐng)是1996年4月8日提交的題為“具有PDE Ⅳ抑制活性的新化合物”的美國(guó)專利申請(qǐng)08/578，580(它是1994年6月21日提交的國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/GB94/01334的國(guó)家階段申請(qǐng))的部分繼續(xù)申請(qǐng)；本申請(qǐng)還是1996年6月6日提交的題為“具有PDE Ⅳ抑制活性的化合物的合成方法”的美國(guó)專利申請(qǐng)08/659，767的部分繼續(xù)申請(qǐng)；也是1997年12月12日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)60/069，371的部分繼續(xù)申請(qǐng)。
發(fā)明的背景哮喘是一種復(fù)雜的疾病，涉及多種炎性和免疫細(xì)胞、致痙原、炎性介質(zhì)、細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子的共同作用。目前主要使用4類化合物治療哮喘，即支氣管擴(kuò)張藥(如β-腎上腺素受體激動(dòng)劑)、消炎劑(如皮質(zhì)甾類)、預(yù)防性抗變應(yīng)劑(如色甘酸鈉)和同時(shí)具有支氣管擴(kuò)張和消炎活性的黃嘌呤類(如茶堿)。
茶堿是較好的治療哮喘首選藥物。盡管由于其直接的支氣管擴(kuò)張作用而受到關(guān)注，但是目前相信茶堿的治療價(jià)值還在于其消炎活性。其治療機(jī)理目前還不清楚。但是，相信其多種細(xì)胞活性對(duì)其抗哮喘活性(包括抑制環(huán)核苷酸磷酸二酯酶、腺苷受體拮抗作用、釋放兒茶酚胺的刺激作用和增加抑制性T-淋巴細(xì)胞的數(shù)量和活性的性能)是重要的。盡管所有這些均有利于其活性，可是僅抑制PDE能說(shuō)明其消炎和支氣管擴(kuò)張作用。但是，已知茶堿具有窄的治療指數(shù)和許多不良副作用，這是很大的問題。
在上述活性中，茶堿的抑制環(huán)核苷酸磷酸二酯酶活性近來(lái)受到極大的關(guān)注。作為抗哮喘劑的分子靶，環(huán)核苷酸磷酸二酯酶(PDE)受到了極大的關(guān)注。已知環(huán)3’，5’-腺苷單磷酸(cAMP)和環(huán)3’，5’-鳥苷單磷酸(cGMP)是調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)多種激素、神經(jīng)傳遞介質(zhì)和內(nèi)分泌物功能效應(yīng)的第二信使。抑制磷酸二酯酶，以及隨后升高哮喘病理生理學(xué)的關(guān)鍵細(xì)胞中3’，5’-腺苷單磷酸(cAMP)或3’，5’-鳥苷單磷酸(cGMP)，至少可獲得兩個(gè)重要的治療效果。它們是平滑肌松弛(導(dǎo)致支氣管擴(kuò)張)和消炎活性。
已知存在多種不同的PDE同功酶，它們具有不同的細(xì)胞分布。已經(jīng)合成了許多對(duì)一種或另一種同功酶具有顯著選擇活性的抑制劑。
同功酶選擇性抑制劑的結(jié)構(gòu)活性關(guān)系(SAR)詳細(xì)描述在Theodore J.Torphy等發(fā)表在Drug News&Prospectives，6(4)May 1993，p203-214中名為“用于治療哮喘的新的磷酸二酯酶抑制劑”的文章中。根據(jù)其cAMP或cGMP的水解特異性、對(duì)鈣，鈣調(diào)蛋白或cGMP調(diào)節(jié)的敏感性及其被各種化合物選擇性抑制的特性，可將PDE酶分成5組。PDE Ⅰ受Ca2+/鈣調(diào)蛋白刺激。PDE Ⅱ受cGMP刺激，并發(fā)現(xiàn)其存在于心臟和腎上腺中。PDE Ⅲ受cGMP抑制，這種酶的抑制作用產(chǎn)生正性變力活性。PDE Ⅳ對(duì)cAMP具特異性，其抑制作用導(dǎo)致氣道松弛、消炎和抗抑郁活性。PDE Ⅴ在調(diào)節(jié)血管平滑肌中cGMP的含量方面是重要的，因此PDE Ⅴ抑制劑可能具有心血管活性。
盡管許多結(jié)構(gòu)活性研究得到的化合物具有PDE Ⅲ抑制作用，但是PDE Ⅳ抑制劑結(jié)構(gòu)類型的數(shù)目相對(duì)有限。業(yè)已研究了咯利普蘭(rolipram)類似物，它具有下列結(jié)構(gòu)式(A) 以及RO-20-1724的類似物，它具有下列結(jié)構(gòu)式(B) 美國(guó)專利4，308，278公開了式(C)化合物 其中，R1是C3-C6環(huán)烷基或芐基；R2和R3各自是氫或C1-C4烷基；R4是R2或烷氧基羰基；R5是氫或烷氧基羰基。
化合物(D)公開在美國(guó)專利3，636，039中。這些化合物是用于治療高血壓的芐基咪唑烷酮。 式D中取代基R1-R4代表各種基團(tuán)，包括氫和低級(jí)烷基。
PCT WO87/06576公開了式E的抗抑郁劑 其中R1是具有7-11個(gè)碳原子的多環(huán)烷基；R2是甲基或乙基；X是O或NH；Y是可以帶有取代基的單環(huán)或雙環(huán)雜環(huán)基團(tuán)。
咯利普蘭最初由于其抗抑郁活性而得到研究，它對(duì)PDE Ⅳ酶具有選擇性抑制活性，因此這種化合物成為分類PDE酶亞型的一種標(biāo)準(zhǔn)藥物。顯然作為PDE Ⅳ抑制劑它具有巨大的治療潛力。早期的工作集中在作為CNS治療目標(biāo)的抑郁以及炎癥，隨后擴(kuò)大至相關(guān)疾病(例如癡呆)以及哮喘。在玻璃試管內(nèi)，咯利普蘭、R020-1724和其它PDE Ⅳ抑制劑顯示出能抑制(1)在肥大細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞、單核細(xì)胞和嗜曙紅細(xì)胞中介質(zhì)的合成/釋放，(2)在中性白細(xì)胞和嗜曙紅細(xì)胞中的呼吸爆發(fā)、化學(xué)趨化性和脫顆粒，和(3)淋巴細(xì)胞依賴致分裂原的生長(zhǎng)和分化(參見ThePDE Ⅳ Family of Calcium-Phosphodiesterases Enzymes，John A.Lowe，Ⅲ，et al.，Drugs of the Future 1992，17(9)799-807)。
PDE Ⅳ存在于哮喘的所有主要炎癥細(xì)胞中，包括嗜曙紅細(xì)胞、中性白細(xì)胞、T-淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞。該抑制作用向下調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞的活性，并松弛氣管和支氣管中的平滑肌細(xì)胞。另一方面，抑制存在于心肌中的PDE Ⅲ可同時(shí)提高心肌收縮力和速率。這些是消炎劑不合需求的副作用。茶堿是一種非選擇性PDE抑制劑，它抑制PDE Ⅲ和PDE Ⅳ，同時(shí)產(chǎn)生抗哮喘作用和不合需求的心血管刺激作用。對(duì)于PDE同功酶之間已知的區(qū)別，顯然茶堿具有消炎和支氣管擴(kuò)張的機(jī)會(huì)而不會(huì)產(chǎn)生太大的副作用。許多西方國(guó)家在最近十年哮喘的發(fā)病率和死亡率在上升，這些國(guó)家已經(jīng)將臨床重點(diǎn)集中在這種疾病的炎癥性質(zhì)和吸入類固醇的優(yōu)點(diǎn)。因此最好開發(fā)一種藥物，它同時(shí)具有支氣管擴(kuò)張性能和消炎性能。
顯然選擇性PDE Ⅳ抑制劑比茶堿更具效果并具有更少的副作用。臨床研究證明了這一點(diǎn)。另外，要求提供的PDE Ⅳ抑制劑比咯利普蘭更強(qiáng)和更有選擇性，從而具有較低的IC50，能減少進(jìn)行PDE Ⅳ抑制所需的藥物量。
近年來(lái)，提出數(shù)種不同的化合物作為可能的治療組合物，它們具有所需的PDE Ⅳ抑制作用但無(wú)上述副作用。但是，這些工作主要涉及開發(fā)具體化合物類型的非特異性衍生物，即咯利普蘭類似物、苯并噁唑類、腺嘌呤類、硫代黃嘌呤類等。并且這些工作導(dǎo)致無(wú)數(shù)具有寬PDE Ⅳ IC50范圍的化合物。所公開的通式通常包括數(shù)種PDE Ⅳ抑制水平差和/或缺乏足夠的特異性的化合物。結(jié)果，這些工作通常不能確保通式中的各種具體衍生物兼有所需的高PDE Ⅳ抑制活性和選擇性。
發(fā)明的目的和概述因此，本發(fā)明的主要目的是提供新的化合物，與現(xiàn)有的化合物相比它們是更有效的選擇性PDE Ⅳ抑制劑。
本發(fā)明另一個(gè)目的是提供新的化合物，作為有效的PDE Ⅳ抑制劑它們具有較小的PDE Ⅲ抑制性能。
本發(fā)明另一個(gè)目的是提供對(duì)需要PDE Ⅳ抑制的病人進(jìn)行治療的方法。
本發(fā)明另一個(gè)目的是提供新的化合物，用于治療與異常高生理水平的炎癥細(xì)胞因子(包括腫瘤壞死因子)有關(guān)的疾病。
本發(fā)明另一個(gè)目的是提供一種本發(fā)明新化合物的合成方法。
本發(fā)明再一個(gè)目的是提供一種治療疾病(例如哮喘，變態(tài)反應(yīng)，炎癥，抑郁癥，癡呆，包括血管性癡呆、多梗塞性癡呆和Alzheimer氏病，由人類免疫缺陷病毒引起的疾病和與異常高生理水平的炎癥細(xì)胞因子有關(guān)的疾病)的方法。
由下面的詳細(xì)描寫可理解本發(fā)明的其它目的和優(yōu)點(diǎn)。
考慮上述和其它目的，本發(fā)明包括具有下列通式Ⅰ的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽 其中R3選自C1-10烷基、C1-10烯基、C3-10環(huán)烷基、C4-10環(huán)烷基烷基或C3-10環(huán)烯基，其中在所述烷基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基或環(huán)烯基的一個(gè)位置上可以取代有羥基；或者芐基，其中所述芐基的一個(gè)或兩個(gè)位置上可以取代有鹵素、烷氧基、環(huán)烷氧基或多環(huán)烷基，所述烷氧取代基或環(huán)烷氧取代基的烷基部分的一個(gè)位置上可以取代有羥基；R8選自氫、C1-10烷基、C1-10烯基、C3-10環(huán)烷基、C4-10環(huán)烷基烷基或C3-10環(huán)烯基，其中在所述烷基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基或環(huán)烯基的一個(gè)位置上可以取代有羥基；或者芐基，其中所述芐基的一個(gè)或兩個(gè)位置上可以取代有鹵素、烷氧基、環(huán)烷氧基或多環(huán)烷基，所述烷氧取代基或環(huán)烷氧取代基的烷基部分的一個(gè)位置上可以取代有羥基；R6a和R6b分別選自氫、C1-10烷基、C1-10烯基、C3-10環(huán)烷基、C4-10環(huán)烷基烷基或C3-10環(huán)烯基，其中在所述烷基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基或環(huán)烯基的一個(gè)位置上可以取代有羥基。
在本發(fā)明具體實(shí)例中，當(dāng)R6a和R6b均為氫，或者當(dāng)R8是氫時(shí)，R3是兩個(gè)位置上取代有烷氧基、環(huán)烷氧基或多環(huán)烷基的芐基，其中所述烷氧取代基或環(huán)烷氧取代基的烷基部分的一個(gè)位置上可以取代有羥基。
在式Ⅰ化合物的某些實(shí)例中，R8不是氫。
在某些實(shí)例中，R6a和R6b均為氫，或者R6a為氫、R6b為可以取代有一個(gè)羥基的C1-10烷基。在另一個(gè)實(shí)例中，R6a為氫、R6b為可以取代有一個(gè)羥基的乙基。
在某些實(shí)例中，R3是取代有烷氧基和環(huán)烷氧基的芐基，其中環(huán)烷氧取代基可以被一個(gè)羥基所取代。在另一個(gè)實(shí)例中，R3取代有甲氧基和環(huán)戊氧基，其中所述環(huán)戊氧取代基可以被一個(gè)羥基所取代。在另一個(gè)實(shí)例中，R3是3-環(huán)戊氧基-4-甲氧基芐基，其中所述環(huán)戊氧基的環(huán)戊基部分可以被一個(gè)羥基所取代。
在某些實(shí)例中，R8是可以被一個(gè)羥基所取代的C1-10烷基或C3-10環(huán)烷基。在另一些實(shí)例中，R8是可以被一個(gè)羥基所取代的C1-10烷基。在再一個(gè)實(shí)例中，R3是可以被一個(gè)羥基所取代的異丙基。
本發(fā)明的詳細(xì)描述在本文中，下列術(shù)語(yǔ)的含義是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的，它們具體包括下列含義本文中，術(shù)語(yǔ)“烷基”是指具有單一游離鍵的直鏈或支鏈的飽和脂族烴基。烷基的例子包括甲基、丙基、異丙基、丁基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基和戊基。支鏈烷基是指在直鏈烷基鏈的-CH2-基團(tuán)上的一個(gè)或兩個(gè)氫原子被一個(gè)或多個(gè)烷基(如甲基、乙基或丙基)取代產(chǎn)生的烷基。
術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”是指具有單一游離鍵的非芳族單環(huán)烴體系。單環(huán)烷基的例子包括環(huán)丙基、環(huán)戊基和環(huán)己基。
術(shù)語(yǔ)“多環(huán)烷基”是指具有單一游離鍵的非芳族多環(huán)烴體系。多環(huán)烷基的例子包括金剛烷基、冰片基和降冰片基。
術(shù)語(yǔ)“烯基”是指具有單一游離鍵并具有碳-碳雙鍵的直鏈或支鏈脂族烴基?！爸ф湣毕┗侵?CH2-或-CH=直鏈烯基中的一個(gè)或兩個(gè)氫被一個(gè)或多個(gè)烷基(如甲基、乙基或丙基)所取代后形成的基團(tuán)。烯基的例子包括乙烯基、1-丙烯基和2-丙烯基、1-丁烯基，2-丁烯基和3-丁烯基、3-甲基-2-丁烯基、2-丙烯基、庚烯基、辛烯基和癸烯基。
術(shù)語(yǔ)“環(huán)烯基”是指具有單一游離鍵并具有碳-碳雙鍵的非芳族單環(huán)或多環(huán)烴環(huán)體系。單環(huán)環(huán)烯基的例子包括環(huán)丙烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基或環(huán)庚烯基。多環(huán)環(huán)烯基的例子有降冰片烯基。
術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基烷基”或“環(huán)烷基-烷基”是指非芳族單環(huán)或多環(huán)體系，其中所述環(huán)被烷基所取代，該烷基如上所述包括具有一根游離鍵的直鏈或支鏈脂族烴基。
術(shù)語(yǔ)“芳烷基”或“芳基烷基”或者“芳基-烷基”是指如上所述包括具有一根游離鍵的直鏈或支鏈飽和脂族烴基的烷基，其中該烷基被一個(gè)芳基所取代，該芳基如上所述包括含有一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)環(huán)以側(cè)接的方式或稠合的方式連接在一起的芳族碳環(huán)體系，它含有一根游離鍵。
“烷氧基”是指烷氧基團(tuán)，其中的烷基如前面所述，包括具有一根游離鍵的直鏈或支鏈飽和脂族烴基。烷氧基的例子包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基和正丁氧基。
術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷氧基”是指環(huán)烷氧基基團(tuán)，其中環(huán)烷基如前面所述，包括具有一根游離鍵的非芳族單環(huán)或多環(huán)烴環(huán)體系。環(huán)烷氧基的例子包括環(huán)戊氧基。
在本文中，術(shù)語(yǔ)“病人”是指人類和其它哺乳動(dòng)物。
本發(fā)明還包括式Ⅰ化合物的有機(jī)和無(wú)機(jī)鹽、水合物、酯、前體藥物和代謝產(chǎn)物。
本發(fā)明化合物可施用于需要PDE Ⅳ抑制的任何人。所述施用可以是口服、局部、栓劑給藥、吸入或吹入，或者胃腸外給藥。
本發(fā)明還包括上述化合物的所有藥學(xué)上可接受的鹽。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可知本申請(qǐng)要求保護(hù)的化合物的酸加成鹽是用已知方法使合適的酸與所述化合物反應(yīng)制得的。
可使用各種口服劑型，包括固體劑型，如片劑、gelcaps、膠囊劑、caplets、顆粒劑、錠劑和松散粉末，以及液體劑型，如乳劑、溶液和懸浮液。本發(fā)明化合物可單獨(dú)給藥，或者與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的各種藥學(xué)上可接受的載體和賦形劑(包括，但不限于稀釋劑、懸浮劑、增溶劑、粘合劑、崩解劑、防腐劑、著色劑、潤(rùn)滑劑等)一起給藥。
當(dāng)將本發(fā)明化合物混入口服片劑中時(shí)，這種片劑可以是壓制的、研制的、包腸溶衣的、包糖衣的、膜包衣的、多次壓制或多層的。液體口服劑型包括含有合適溶劑、防腐劑、乳化劑、懸浮劑、稀釋劑、甜味劑、著色劑和芳香劑的水性或非水性溶液、乳劑、懸浮液、由非泡騰顆粒重新構(gòu)成的溶液和/或懸浮液。當(dāng)將本發(fā)明化合物用于胃腸外注射時(shí)，它們可以是例如等滲滅菌溶液。另外，當(dāng)將本發(fā)明化合物用于吸入時(shí)，可將其配制成干氣溶膠或配制成水溶液或部分是水溶液。
另外，當(dāng)將本發(fā)明化合物加入口服劑型時(shí)，可以預(yù)料在腸胃道這些劑型會(huì)立即釋放所述化合物，或者會(huì)在腸胃道進(jìn)行受控和/或緩慢釋放。各種受控和/或緩釋制劑是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員眾所周知的，并能用于本發(fā)明制劑中?？赏ㄟ^例如口服劑型的包衣或者將本發(fā)明化合物加入受控和/或緩釋基質(zhì)中實(shí)現(xiàn)受控和/或緩慢釋放。
適用于口服制劑的藥學(xué)上可接受的載體和賦形劑的具體例子可參見藥用賦形劑手冊(cè)，American Pharmaceutical Association(1986)(在此引為參考)。用于制造固體口服劑型的技術(shù)和組分可參見藥物劑型片劑(Lieberman，Lachman andSchwartz編)第二版，Marcel Dekker，Inc出版(在此引為參考)。制備片劑(壓制的和模制的)、膠囊(硬或軟明膠)和丸劑的技術(shù)和組分還可參見Remington的藥物科學(xué)(Arthur Osol編)1553-1593(1980)(在此引為參考)。制備液體口服劑型的技術(shù)和組分可參見藥物劑型分散體系(Lieberman，Rieger and Banker編)，Marcel Dekker，Inc.出版(在此引為參考)。
當(dāng)通過注射將本發(fā)明化合物胃腸外給藥(如連續(xù)輸注或推注)時(shí)，該胃腸外給藥制劑可以是懸浮液、溶液、在油性或水性基質(zhì)中的乳劑，這類制劑還可包括藥學(xué)上所需的添加劑，如穩(wěn)定劑、懸浮劑、分散劑等。本發(fā)明化合物還可以是粉末狀的，可重配成可注射的制劑。
本發(fā)明化合物的劑量取決于要治療的疾病、病情嚴(yán)重程度、給藥方法、給藥頻率、是否存在毒副作用以及具體使用的化合物等。
在本發(fā)明通式(Ⅰ)PDE Ⅳ抑制劑范圍內(nèi)的一種化合物是3-(3-環(huán)戊基氧基-4-甲氧基芐基)-6-乙基氨基-8-異丙基-3H-嘌呤?；衔?-(3-環(huán)戊基氧基-4-甲氧基芐基)-6-乙基氨基-8-異丙基-3H-嘌呤描述在題為“具有PDE Ⅳ抑制活性的新化合物”的優(yōu)先申請(qǐng)08/578，580中并在該申請(qǐng)中要求專利保護(hù)，該申請(qǐng)?jiān)诖艘秊閰⒖肌?br> 在通式(Ⅰ)PDE Ⅳ抑制劑范圍內(nèi)的其它本發(fā)明化合物包括6-氨基-3-(3-環(huán)戊基氧基-4-甲氧基-芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤；3-(3-環(huán)戊基氧基-4-甲氧基芐基)-6-乙基氨基-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤；6-氨基-3-(3-環(huán)戊基氧基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤；6-乙基氨基-3-(3-((1RS，3RS)-3-羥基環(huán)戊基氧基)-4-甲氧基-芐基)-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤；6-氨基-3-(3-((1RS，3RS)-3-羥基環(huán)戊基氧基)-4-甲氧基-芐基)-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤；6-乙基氨基-3-(3-((1RS，3RS)-3-羥基環(huán)戊基氧基)-4-甲氧基-芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤；6-氨基-3-(3-((1RS，3RS)-3-羥基環(huán)戊基氧基)-4-甲氧基-芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤；及其藥學(xué)上可接受的鹽。
當(dāng)部分上述化合物存在幾何或立體異構(gòu)體時(shí)，則本發(fā)明包括所有的這些化合物。
較好實(shí)例的詳細(xì)描述下列實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明的各個(gè)方面。
實(shí)施例16-氨基-3-(3-環(huán)戊基氧基-4-甲氧基-芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤將3-(3-環(huán)戊基氧基-4-甲氧基-芐基)-8-異丙基次黃嘌呤(hypoxanthine)(5.74g，15mmol)和氧氯化磷(60ml)在65℃加熱30分鐘。在真空中將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干，在殘余物中兩次加入甲苯進(jìn)行蒸發(fā)。將氯嘌呤粗產(chǎn)物(15mmol)溶解在THF(80ml)和32％氨水溶液(36.2ml)中，將其與液氨(50g)一起在450ml壓力反應(yīng)器中在60℃(340psi)加熱4小時(shí)。在真空中蒸去溶劑，將殘余物懸浮在乙醚和1M NaOH的混合物中。收集固體并在乙酸乙酯中結(jié)晶，得到3.92g(68.5％)標(biāo)題化合物，m.p.190-193℃。
元素分析為C21H27N5O2/381.48計(jì)算％C-66.12 H-7.13 N-18.36 O-8.39實(shí)測(cè)％C-65.96 H-6.95 N-18.31 O-8.61實(shí)施例2鹽酸3-(3-環(huán)戊基氧基-4-甲氧基-芐基)-6-乙基氨基-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤用10％鈀-炭(0.17g)對(duì)鹽酸8-(1-芐氧基-1-甲基-乙基)-3-(3-環(huán)戊基氧基-4-甲氧基芐基)-6-乙基氨基-3H-嘌呤(1.65g，3mmol)的甲醇(25ml)溶液進(jìn)行氫化，加入25ml THF和10％鈀-炭(0.17g)后在室溫氫化12小時(shí)。濾去催化劑，真空除去溶劑，將殘余物懸浮在熱丙酮中，在0-5℃收集固體，得到羥基嘌呤粗產(chǎn)物(1.10g)。將該產(chǎn)物溶解在氯仿中并用4.4g的硅膠柱過濾之。將純化的產(chǎn)物(0.84g)懸浮在乙醚中并在0-5℃收集固體，得到0.78g(56.1％)標(biāo)題化合物，m.p.209-212℃。
元素分析為C23H32ClN5O3/461.99計(jì)算％C-59.80 H-6.98 N-15.16 O-10.39實(shí)測(cè)％C-59.89 H-7.10 N-15.16 O-10.60實(shí)施例3鹽酸6-氨基-3-(3-環(huán)戊基氧基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤將鹽酸6-氨基-8-(1-芐氧基-1-甲基-乙基)-3-(3-環(huán)戊基氧基-4-甲氧基-芐基)--3H-嘌呤(2.13g，4.06mmol)在1∶1的THF∶甲醇(60ml)中的溶液在室溫和壓力下用10％鈀-炭(0.26g)氫化12小時(shí)。濾去催化劑，真空除去溶劑，將殘余物懸浮在熱丙酮中，在0-5℃收集固體(1.23g)并在甲醇-丙酮中對(duì)其進(jìn)行重結(jié)晶，得到0.76g(43.2％)標(biāo)題化合物，m.p.231-232℃。
元素分析為C21H28ClN5O3.0.5H2O計(jì)算％C-56.69 H-7.02 N-15.74 O-12.58實(shí)測(cè)％C-56.87 H-6.86 N-15.56 O-12.75實(shí)施例4鹽酸6-乙基氨基-3-(3-(3-羥基環(huán)戊基氧基)-4-甲氧基-芐基)-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤A.1-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-2-硫脲對(duì)3-羥基-4-甲氧基苯甲醇(61.67g，400mmol)在1-丙醇(600ml)中的溶液在60℃用97％叔丁醇鉀(55.52g，480mmol)進(jìn)行處理，并在90℃用芐基氯(66.57ml，560mmol)進(jìn)行處理，將形成的混合物加熱回流2小時(shí)。隨后在90℃加入第二批叔丁醇鉀(9.25g，80mmol)?；亓饕恍r(shí)后加入第三批叔丁醇鉀(9.25g，80mmol)并在90℃加入第二批芐基氯(9.51ml，80mmol)。回流2.5小時(shí)后將混合物冷卻至室溫并濾去固體。在真空中除去溶劑，用水(300ml)處理殘余物并在真空中除去1/3溶劑。向殘余物中加入水(100ml)，在真空中餾出并重復(fù)該步驟。過濾形成的懸浮液，收集固體、干燥并用石油醚(2×600ml)研制，得到3-芐氧基-4-甲氧基苯甲醇(86.21g，88.2％)，m.p.62-65℃。
向上述醇在二氯甲烷(500ml)中的攪拌著的溶液中在10分鐘內(nèi)加入亞硫酰氯(64ml)。20分鐘后將該混合物在真空中蒸發(fā)至干，加入甲苯(2×75ml)，并再次在真空中蒸發(fā)至干，得到3-芐氧基-4-甲氧基-芐基氯(97.85g，105.5％)。將該芐基氯(353mmol)溶解在丙酮(400ml)中，用硫氰酸鈉(57.22g，706mmol)處理，混勻并加熱回流1.5小時(shí)。在室溫濾去固體并在真空中蒸去溶劑。將殘余物懸浮在水(600ml)中，形成的pH為2的溶液用碳酸氫鈉進(jìn)行中和。收集結(jié)晶的固體，干燥并將其溶解在二氯甲烷(300ml)中，干燥(Na2SO4)，用活性炭處理之，過濾并蒸發(fā)至干。在石油醚(400ml)中結(jié)晶該殘余物，得硫氰酸3-芐氧基-4-甲氧基-芐酯(95.65g，95.0％)，m.p.70-74℃。在正戊腈(280ml)中將該硫氰酸酯(335mmol)加熱回流2小時(shí)，蒸發(fā)至干后得到98.4g粗產(chǎn)物。將該產(chǎn)物溶解在THF(200ml)中并在室溫用32％氨水溶液(101ml)進(jìn)行處理。3小時(shí)后在10℃收集該硫脲并用乙醚洗滌之，得到1-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-2-硫脲(63.08g，62.2％)，m.p.179-181℃。將濾液蒸發(fā)至干，殘余物在二氯甲烷中結(jié)晶后得到11.51g(11.3％)第二批產(chǎn)物。
B.6-氨基-1-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-2-硫尿嘧啶將1-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-2-硫脲(72.58g，240mmol)加入97％叔丁醇鉀(30.54g，264mmol)在異丙醇(300ml)中的溶液中，將混合物加熱回流至溶解完全，隨后加入氰基乙酸乙酯(26.1ml，245mmol)?；亓?小時(shí)后，稍微冷卻混合物，加入另一批叔丁醇鉀(2.78g，24mmol)和氰基乙酸乙酯(5.12ml，48mmol)，再將混合物加熱回流15小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，倒入水(1.2升)中，用5M HCl(43ml)邊冷卻邊中和至pH 8。攪拌1小時(shí)后，在10℃收集固體，依次用水(180ml)、碳酸氫鈉飽和水溶液(60ml)、異丙醇(60ml)和冷水(500ml)洗滌。將粗產(chǎn)物懸浮在0.5M NaOH(1.4升)和異丙醇(350ml)中。濾出不溶部分，用0.1M NaOH和水洗滌之，得到回收的硫脲(10.45g，14.4％)。用2M磷酸(175ml)將濾液中和至pH8，結(jié)晶過夜，收集固體并用上述三種組分水溶液和水洗滌之，得到硫尿嘧啶粗產(chǎn)物(73.33g)。將該產(chǎn)物懸浮在熱丙酮(600ml)中，濃縮至500ml并在0-5℃收集之，得到6-氨基-1-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-2-硫尿嘧啶(65.73g，74.1％)，m.p.239-240℃。
C.1-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-5，6-二氨基-2-硫尿嘧啶將6-氨基-1-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-2-硫尿嘧啶(36.94g，100mmol)溶解在DMSO(74ml)中，用THF(185ml)稀釋并用85％磷酸(7.46ml)處理之。在55-60℃，緩慢地加入4M亞硝酸鈉(30ml，120mmol)。30分鐘后，加入甲醇(10ml)，將反應(yīng)混合物冷卻至30℃，并緩慢地加入85％連二亞硫酸鈉(40.96g，200mmol)在水(80ml)中的懸浮液。加入水(200ml)以后，在真空中除去溶劑，用水將懸浮液稀釋至1升。在0-5℃收集固體，得到1-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-5，6-二氨基-2-硫尿嘧啶(40.58g)。
D.6-氨基-1-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-5-(2-芐氧基-2-甲基丙酰基氨基)-2-硫尿嘧啶在0-5℃在15分鐘內(nèi)將2-芐氧基-2-甲基丙酰氯(30.70g，144mmol)在THF(100ml)中的溶液加入1-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-5，6-二氨基-2-硫尿嘧啶(40.58g，100mmol)和三乙胺(31.4ml，225mmol)在THF(400ml)中攪拌的懸浮液中。1小時(shí)后濾去固體，在真空中將溶液蒸發(fā)至干。將殘余物懸浮在乙醚(400ml)、水(100ml)和碳酸氫鈉飽和水溶液(60ml)的混合物中。結(jié)晶60小時(shí)后，收集固體，用乙醚和水洗滌后得到6-氨基-1-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-5-(2-芐氧基-2-甲基丙?；被?-2-硫尿嘧啶(42.23g，75.3％)。在乙酸乙酯中結(jié)晶后得到m.p.123-125/184-187℃的產(chǎn)物。
E.3-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-8-(1-芐氧基-1-甲基-乙基)-2-硫代黃嘌呤在異丙醇(460ml)中將6-氨基-1-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-5-(2-芐氧基-2-甲基丙?；被?-2-硫尿嘧啶(46.54g，83mmol)和97％叔丁醇鉀(38.41g，332mmol)加熱回流50分鐘。在真空中除去溶劑，將殘余物溶解在水(300ml)中，用5g活性炭處理兩次，過濾，加入水至總體積為500ml，用5M HCl(60ml)和碳酸氫鈉水溶液的混合物將pH調(diào)節(jié)至中性，在10℃收集固體，得到41.62g粗產(chǎn)物，將該產(chǎn)物溶解在二氯甲烷(60ml)中，使用二氯甲烷作為洗脫液對(duì)其進(jìn)行硅膠(126g)色譜法純化。在甲醇中結(jié)晶后得到3-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-8-(1-芐氧基-1-甲基-乙基)-2-硫代黃嘌呤(31.5g，69.9％)，m.p.290-302℃(dec)。
F.3-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-芐氧基-1-甲基-乙基)-次黃嘌呤將3-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-8-(1-芐氧基-1-甲基-乙基)-2-硫代黃嘌呤(26.05g，48mmol)在1-丙醇(700ml)中與阮內(nèi)鎳(29g，經(jīng)0.1％乙酸水溶液處理)一起加熱回流1.5小時(shí)。濾去鎳并在真空中蒸去溶劑。將殘余物溶解在二氯甲烷(300ml)中，用碳酸鈉水溶液萃取并再次蒸發(fā)至干。將殘余物溶解在甲醇(150ml)中，用活性炭處理，過濾，濃縮并結(jié)晶，得到3-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-芐氧基-1-甲基-乙基)-次黃嘌呤(15.81g，64.5％)，m.p.78-86℃(含甲醇)。第二批產(chǎn)物為2.29g(9.3％)次黃嘌呤。
G.鹽酸3-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-芐氧基-1-甲基-乙基)-6-乙基氨基-3H-嘌呤將3-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-芐氧基-1-甲基-乙基)-次黃嘌呤(3.06g，6mmol)用甲苯處理兩次，蒸發(fā)至干以除去從上面步驟帶來(lái)的殘余甲醇，隨后與氧氯化磷(30ml)一起加熱至70℃。40分鐘后在真空中將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干，加入甲苯后在真空中蒸發(fā)至干并重復(fù)一次。將氯嘌呤粗產(chǎn)物溶解在THF(50ml)中，邊冷卻邊將其緩慢加入至70％乙胺水溶液(24ml)中。30分鐘后，在真空中將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干。將殘余物溶解在二氯甲烷(50ml)中，用1M NaOH萃取并再次蒸發(fā)。殘余物溶解在甲醇(25ml)中，用1M HCl甲醇溶液(6.1ml)處理并在真空中蒸發(fā)至干，得到鹽酸3-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-芐氧基-1-甲基-乙基)-6-乙基氨基-3H-嘌呤粗品(3.31g，96.2％)。
H.鹽酸6-乙基氨基-3-(3-羥基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤在室溫和壓力下，對(duì)上述鹽酸3-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-芐氧基-1-甲基-乙基)-6-乙基氨基-3H-嘌呤粗品(3.28g，5.7mmol)在1∶1的THF∶甲醇的混合液(60ml)中用10％鈀-炭(0.66g)進(jìn)行氫化。濾去催化劑，在真空中除去溶劑，殘余物在丙酮中結(jié)晶后得到鹽酸6-乙基氨基-3-(3-羥基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤(1.80g，80.0％)，m.p.184-185℃。
Ⅰ.鹽酸6-乙基氨基-3-(3-(3-羥基環(huán)戊基氧基)-4-甲氧基-芐基)-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤在室溫用順-反3-溴環(huán)戊醇(1.49g，9mmol)(用順-反1，3-環(huán)戊二醇和二溴化三苯膦反應(yīng)制得)處理鹽酸6-乙基氨基-3-(3-羥基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤(1.18g，3mmol)在DMF(12ml)中的溶液和碳酸鉀(2.49g，18mmol)。72小時(shí)后，加入第二批碳酸鉀(0.62g，4.5mmol)和順-反3-溴環(huán)戊醇(0.74g，4.5mmol)。6天后，濾去固體，在真空中蒸發(fā)溶液并加水重復(fù)蒸發(fā)4次。將殘余物溶解在二氯甲烷中，用1M NaOH提取并蒸發(fā)至干。將殘余物(1.71g)溶解在甲醇(20ml)中，用1M HCl的甲醇溶液(3.2ml)處理并在真空中蒸發(fā)至干。將殘余物從丙酮中結(jié)晶，在甲醇-丙酮中重結(jié)晶，得到粗產(chǎn)物(1.02g)。將不純的晶體溶解在THF(70ml)中并用2M NaOH萃取4次，用氯化鈉溶液萃取1次，蒸發(fā)至干后，溶解在二氯甲烷中，用硫酸鈉干燥、過濾并蒸發(fā)至干。將該游離的堿再次轉(zhuǎn)化成鹽酸鹽，用丙酮重結(jié)晶，得到0.78g(54.6％)標(biāo)題化合物，m.p.180-185℃。
元素分析為帶有1％HCl和1％H2O的C23H32ClN5O4計(jì)算％C-56.63 H-6.76 N-14.36 O-14.01 Cl-8.24實(shí)測(cè)％C-56.30 H-6.80 N-14.48 O-13.99 Cl-7.92
實(shí)施例5鹽酸6-氨基-3-(3-(3-羥基環(huán)戊基氧基)-4-甲氧基-芐基)-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤A.鹽酸6-氨基-3-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-芐氧基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤將3-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-芐氧基-1-甲基-乙基)-次黃嘌呤(實(shí)施例4F，3.06g，6mmol)用甲苯處理兩次，蒸發(fā)至干以除去從上面步驟帶來(lái)的殘余甲醇，隨后與氧氯化磷(30ml)一起加熱至70℃。35分鐘后在真空中將溶液蒸發(fā)至干，加入甲苯后重復(fù)二次。將含氯粗產(chǎn)物溶解在THF(40ml)中，邊冷卻邊將其加至在450ml壓力反應(yīng)器中的32％氨水(12ml)中。在-30℃加入液氨(50ml)后，將反應(yīng)混合物在60℃(340psi)加熱3小時(shí)。濾去固體并在真空中蒸發(fā)溶劑。將殘余物溶解在二氯甲烷(40ml)中，用1M NaOH(2×100ml)萃取并再次蒸發(fā)至干。殘余物溶解在甲醇中，用1M HCl甲醇溶液(6.2ml)處理并在真空中蒸發(fā)至干，得到稍微不純的鹽酸6-氨基-3-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-芐氧基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤(3.22g，98.2％)，m.p.189-190℃(丙酮中結(jié)晶后)。
B.鹽酸6-氨基-3-(3-羥基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤在室溫和壓力下用10％鈀-炭(0.64g)將上述鹽酸6-氨基-3-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-芐氧基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤(3.22g)在THF∶甲醇(1∶1)(60ml)中的溶液氫化2.5小時(shí)。濾去催化劑并在真空中將溶液蒸發(fā)至干。將殘余物在丙酮中結(jié)晶，得到鹽酸6-氨基-3-(3-羥基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤(1.67g，77.3％)，m.p.155-160℃。
C.鹽酸6-氨基-3-(3-(3-羥基環(huán)戊基氧基)-4-甲氧基-芐基)-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤在室溫用碳酸鉀(3.46g，25mmol)和順-反3-溴環(huán)戊醇(2.53g，15.31mmol)處理鹽酸6-氨基-3-(3-羥基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤(1.46g，4mmol)在DMF(15ml)中的攪拌的溶液。3天后，在室溫加入第二批碳酸鉀(1.1g，8mmol)和3-溴環(huán)戊醇(1.33g，8.1mmol)。10天后，濾去固體，在真空中蒸發(fā)溶液。將固體溶解在二氯甲烷(70ml)中并用1M NaOH(20ml)萃取兩次，在真空中蒸發(fā)至干。將殘余物溶解在甲醇(20ml)中，用1M HCl的甲醇溶液(4ml)處理并再次在真空中蒸發(fā)至干。將殘余物從丙酮中結(jié)晶，得到二羥基腺嘌呤(1.08g，60.0％)。將該產(chǎn)物溶解在水(30ml)中，用少量乙醚和10M NaOH(3ml)處理之。72小時(shí)后收集晶體，干燥并在含飽和的水的乙酸乙酯中進(jìn)行重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(0.66g，40.0％)，m.p.98-108℃，250MHz N.M.R.測(cè)得其反-順比約為4∶1。
元素分析為帶有10.2％H2O的C21H27N5O4計(jì)算％C-54.78 H-7.05 N-15.21 O-22.96實(shí)測(cè)％C-54.47 H-7.05 N-15.12 O-22.64實(shí)施例6鹽酸6-乙基氨基-3-(3-(3-羥基環(huán)戊基氧基)-4-甲氧基-芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤A.6-氨基-1-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-5-異丁?；被?2-硫尿嘧啶在55℃在5分鐘內(nèi)邊攪拌邊將4M亞硝酸鈉溶液(46.6ml，186mmol)加入6-氨基-1-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-2-硫尿嘧啶(53.00g，144mmol)和85％磷酸(12.09ml，179mmol)在DMF(550ml)中的溶液中。1.5小時(shí)后，將反應(yīng)混合物冷卻至35℃并用85％連二亞硫酸鈉(58.77g，287mmol)在水(138ml)中的懸浮液處理之。30分鐘后，加入異丁酸酐(72ml，215mmol)。1小時(shí)后用1M NaOH(790ml)和水(1950ml)緩慢地稀釋該懸浮液(pH 由3變至7)。攪拌過夜后，加入碳酸氫鈉(24.2g)使pH達(dá)到7.5。收集固體，依次用0.2M碳酸氫鈉溶液和水洗滌之，干燥后得到硫尿嘧啶粗產(chǎn)物(56.10g，86.0％)。用丙酮研制后得到6-氨基-1-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-5-異丁?；被?2-硫尿嘧啶，m.p.240-244℃。
B.3-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-8-異丙基-2-硫代黃嘌呤在1M NaOH(560ml)溶液中將6-氨基-1-(3-芐氧基-4-甲氧基-芐基)-5-異丁酰基氨基-2-硫尿嘧啶(56.10g，123mmol)加熱回流40分鐘。冷卻至室溫后，濾去固體，溶液用活性炭(2.7g)處理兩次，過濾并用5M HCl(95ml)將其中和至pH8。收集固體，用0.1M碳酸氫鈉溶液和水洗滌，干燥后得到粗產(chǎn)物(38.65g，71.7％)。從THF和甲醇中結(jié)晶后得到仍不純的產(chǎn)物(34.65g)。將該產(chǎn)物溶解在1MNaOH(340ml)中，用活性炭(3.4g)處理兩次，過濾，用甲醇(80ml)稀釋，并用85％磷酸(13ml)中和。收集固體并用水(1.5升)洗滌至中性pH，得到3-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-8-異丙基-2-硫代黃嘌呤(28.99g，53.8％)，m.p.280-281℃。
C.3-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-8-異丙基次黃嘌呤在1-丙醇(700ml)中將3-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-8-異丙基-2-硫代黃嘌呤(21.83g，50mmol)與阮內(nèi)鎳(30g)(用0.1％乙酸水溶液預(yù)處理)一起加熱回流。4小時(shí)后，濾去鎳并用熱的丙醇和氯仿進(jìn)行洗滌。在真空中將溶液蒸發(fā)至干。將殘余物溶解在氯仿中，用1M碳酸鈉溶液萃取，干燥(Na2SO4)，用活性碳(0.8g)處理兩次，過濾并在真空中蒸發(fā)至干。將殘余物懸浮在熱丙酮(250ml)中，濃縮并在0-5℃收集固體。得到3-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-8-異丙基次黃嘌呤(15.27g，75.5％)，mp233-235℃。
D.鹽酸3-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-6-乙基氨基-8-異丙基-3H-嘌呤將3-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-8-異丙基次黃嘌呤(2.02g，5mmol)和氧氯化磷(20ml)在70℃加熱35分鐘。將溶液蒸發(fā)至干并在加入甲苯(50ml)后重復(fù)蒸發(fā)兩次。將該粗氯嘌呤殘余物溶解在THF(20ml)并將其在0-5℃加至70％乙胺(20ml)水溶液中。在室溫1小時(shí)后，在真空中除去溶劑，將殘余物溶解在二氯甲烷(70ml)中并用1M NaOH洗滌之。用9g硅膠柱過濾有機(jī)相，在真空中蒸發(fā)至干。將殘余物溶解在甲醇(20ml)中，用1M HCl甲醇溶液(4.8ml)處理之并在真空中蒸發(fā)至干，得到鹽酸3-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-6-乙基氨基-8-異丙基-3H-嘌呤(2.20g，94.0％)，mp79-83℃(從水飽和的乙醚中結(jié)晶后)。
E.鹽酸6-乙基氨基-3-(3-羥基-4-甲氧基芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤用10％鈀-炭(0.44g)將上述鹽酸3-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-6-乙基氨基-8-異丙基-3H-嘌呤(2.20g，4.7mM)在THF-甲醇(1∶1)(140ml)中的溶液氫化1小時(shí)。濾去催化劑，在真空中將溶液蒸發(fā)至干。殘余物在乙酸乙酯中結(jié)晶后得到標(biāo)題化合物(1.64g，92.1％)，mp156-160℃。
F.鹽酸6-乙基氨基-3-(3-(3-羥基環(huán)戊基氧基)-4-甲氧基芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤在室溫用碳酸鉀(1.66g，12mmol)處理鹽酸3-(3-羥基-4-甲氧基芐基)-6-乙基氨基-8-異丙基-3H-嘌呤(0.76g，2mmol)在DMF(8ml)中的溶液，1小時(shí)后再用粗的順-反3-溴環(huán)戊醇(0.99g，6mmol)對(duì)其進(jìn)行處理。攪拌18小時(shí)后，加入另一批碳酸鉀(0.83g，6mmol)和3-溴環(huán)戊醇(0.99g，6mmol)。24小時(shí)后濾去固體，在真空中將溶液蒸發(fā)至干。加入水后重復(fù)蒸發(fā)4次。將殘余物溶解在氯仿(50ml)中并用1M NaOH溶液(2×20ml)萃取。在真空中將有機(jī)相蒸發(fā)至干。殘余物(1.35g)溶解在二氯甲烷∶甲醇(98∶2，5ml)中，并用30g硅膠的柱色譜法進(jìn)行純化。將粗產(chǎn)物(0.16g)溶解在甲醇(5ml)中，用1M HCl甲醇溶液(0.4ml)進(jìn)行處理，并在真空中蒸發(fā)至干。在乙酸乙酯中結(jié)晶殘余物后得到標(biāo)題化合物(0.15g，16.2％)，mp165-169℃。
元素分析為C23H32ClN5O3計(jì)算％C-59.80 H-6.98 N-15.16 O-10.39實(shí)測(cè)％C-59.60 H-6.99 N-15.02 O-10.58實(shí)施例7鹽酸6-氨基-3-(3-(3-羥基環(huán)戊基氧基)-4-甲氧基芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤A.鹽酸6-氧基-3-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤將3-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-8-異丙基-次黃嘌呤(實(shí)施例6C，4.04g，10mmol)和氧氯化磷(40ml)在70℃加熱35分鐘。在真空中將反應(yīng)混合物蒸發(fā)至干，在加入甲苯后蒸發(fā)重復(fù)兩次。將氯嘌呤粗產(chǎn)物溶解在THF(40ml)中，邊冷卻邊將其緩慢地加入在450ml壓力反應(yīng)器中的32％氨水(12ml，200mmol)中，在-30℃加入液氨(50g)后，將混合物在60℃(340psi)加熱3小時(shí)。濾去固體并將溶液在真空中蒸發(fā)至干。將殘余物懸浮在水(100ml)中，混合物過濾后得到結(jié)晶狀的粗產(chǎn)物固體(4.09g)。將該固體溶解在甲醇(60ml)中，用1M HCl甲醇溶液(10ml)處理，在真空中蒸發(fā)至干，將其懸浮在丙酮中。過濾后得到鹽酸6-氨基-3-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤(4.04g，91.8％)結(jié)晶狀固體，mp200℃(升華)/240-243℃。
B.鹽酸6-氨基-3-(3-羥基-4-甲氧基芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤水合物在室溫和壓力下將鹽酸6-氨基-3-(3-芐氧基-4-甲氧基芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤(4.04g，9.2mmol)在THF∶甲醇(1∶1)(600ml)中的溶液在10％鈀-炭(0.8g)上氫化10小時(shí)。濾去催化劑，在真空中除去溶劑，殘余物在丙酮中結(jié)晶后得到鹽酸6-氨基-3-(3-羥基-4-甲氧基芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤(2.53g，78.8％)，mp125-130/185-195℃。
元素分析為C16H20ClN5O2，帶1份H2O/367.84計(jì)算％C-52.25 H-6.03 N-19.04 O-13.05實(shí)測(cè)％C-52.55 H-5.96 N-19.05 O-12.55
C.鹽酸6-氨基-3-(3-(3-羥基環(huán)戊基氧基)-4-甲氧基芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤用碳酸鉀(5.80g，42mmol)處理鹽酸6-氨基-3-(3-羥基-4-甲氧基芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤(2.45g，7.0mmol)在DMF(25ml)中的溶液，在室溫將混合物攪拌1小時(shí)后加入粗順/反3-溴環(huán)戊醇(3.47g，21mmol)。21小時(shí)后，加入第二批碳酸鉀(2.90g，21mmol)和3-溴環(huán)戊醇(3.47g，21mmol)。攪拌6天后濾去固體，在真空中將溶液蒸發(fā)至干。將殘余物溶解在氯仿(50ml)中并用1M NaOH溶液萃取。在真空中蒸發(fā)。殘余物(5.84g)溶解在二氯甲烷∶甲醇(98∶2，50ml)中，并用硅膠柱色譜法進(jìn)行純化，用2～10％甲醇/二氯甲烷梯度洗脫。收集餾分(0.78g，28.0％)，轉(zhuǎn)化成鹽酸鹽并在丙酮中結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(0.55g，18.1％)，mp185-187℃。
元素分析為C21H28ClN5O3/433.94計(jì)算％C-58.13 H-6.50 N-16.14 O-11.06實(shí)測(cè)％C-57.84 H-6.60 N-16.10 O-11．39酶分離方法獲得PDE Ⅲ、PDE Ⅳ和PDE Ⅴ以及測(cè)定抑制活性的方法如下Ⅲ型磷酸二酯酶酶分離方法用Weishaar，R.E.、Burrows，S.D.、Kobylarg，D.C.、Quarde，N.M.、Evans，D.B.在生化藥理學(xué)，35787，1986中所述的相似方法從人體血小板中分離Ⅲ型PDE。簡(jiǎn)單地說(shuō)，將1-2單位的血小板懸浮在等體積的緩沖溶液(20mM Tris-HCl，pH 7.5，含2mM乙酸鎂、1mM二硫蘇糖醇和5mM Na2EDTA)中。該緩沖溶液中還含有最終濃度為200mM的蛋白酶抑制劑苯甲基磺酰氟(PMSF)。使用polytron使該懸浮液勻化，并將該勻漿在100，000×g離心60分鐘。所述步驟以及所有隨后的步驟均是在0-4℃下進(jìn)行的。上清液用四層紗布過濾，并加至DEAE-Trisacryl M柱(預(yù)先用緩沖液B(20mM Tris-HCl，pH 7.5，含1mM乙酸鎂、1mM二硫蘇糖醇和200mM PMSF)平衡)上。施加試樣后，用幾柱床體積的緩沖液B洗滌該柱。隨后用兩組連續(xù)的濃度呈線性梯度的NaCl溶液(0.05-0.15M，總共300ml；0.15-0.40M，總共200ml)洗脫，得到不同形態(tài)的PDE。收集流分每份5ml，分析對(duì)環(huán)AMP和環(huán)GMP的PDE活性。收集含PDE Ⅲ活性的流分并對(duì)4升緩沖液B透析過夜。隨后將經(jīng)透析的PDE Ⅲ濃縮至原來(lái)體積的10％，用乙二醇單乙醚稀釋至50％，并儲(chǔ)存在-20℃。PDE Ⅲ通?？杀３珠L(zhǎng)達(dá)4星期，活性很少或無(wú)下降。
測(cè)定Ⅲ型PDE活性如Thompson，W.J.、Teraski，W.L.、Epstein，P.N.、Strada，S.J.在Adv.Cyclic Nucleotide Res.1069，1979中所述，通過測(cè)定[3H]-環(huán)AMP的水解來(lái)測(cè)定酶活性。在本測(cè)定中環(huán)AMP的濃度為0.2mM，大致與Km值相當(dāng)。調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)濃度以確保在保溫過程中水解的底物不超過15％。
將所有試驗(yàn)化合物均溶解在二甲亞砜中(最終濃度為2.5％)。該二甲亞砜濃度對(duì)酶活性的抑制約為10％。
Ⅳ型磷酸二酯酶酶分離方法用Silver，P.J.等在Eur.J.Pharmacol.15085，1988(1)中所述的相似方法從牛氣管平滑肌分離Ⅳ型PDE。簡(jiǎn)單地說(shuō)，將來(lái)自牛氣管的平滑肌剁碎，將其加入10體積的萃取緩沖溶液(含10mM Tris-醋酸鹽，pH7.5，2mM氯化鎂、1mM二硫蘇糖醇和2000單位/ml抑肽酶)中并使用polytron使之勻化。所述步驟以及所有隨后的步驟均是在0-4℃下進(jìn)行的。對(duì)該勻漿進(jìn)行超聲波處理，隨后在48，000×g離心30分鐘。上清液加到DEAE-Trisacryl M柱(預(yù)先用乙酸鈉和二硫蘇糖醇平衡)上。施加試樣后，用乙酸鈉/二硫蘇糖醇洗滌該柱。隨后用濃度呈線性梯度的Tris-HCl／NaCl洗脫，得到不同形態(tài)的PDE。收集含Ⅳ型PDE的流分，透析并濃縮至原來(lái)體積的14％。用乙二醇將濃縮的流分稀釋至50％并儲(chǔ)存在-20℃。
測(cè)定Ⅳ型PDE活性如Thompson，W.J.等在Adv.Cycilc Nucleotide Res.1069，1979中所述，通過測(cè)定[3H]-環(huán)AMP的水解來(lái)測(cè)定酶活性。在本測(cè)定中環(huán)AMP的濃度為0.2mM，大致與Km值相當(dāng)。調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)濃度以確保在保溫過程中水解的底物不超過15％。
將所有試驗(yàn)化合物均溶解在二甲亞砜中(最終濃度為2.5％)。該二甲亞砜濃度對(duì)酶活性的抑制約為10％。
Ⅴ型磷酸二酯酶活性測(cè)定酶分離方法用Weishaar等在Hypertension 15528(1990)中所述的相似方法分離V型PDE。簡(jiǎn)單地說(shuō)，使用polytron將1-2單位的血小板懸浮在等體積的緩沖溶液A(20mM Tris-HCl，pH7.5，含2mM乙酸鎂、1mM二硫蘇糖醇和5mMNa2EDTA)中。該緩沖溶液中還含有最終濃度為200μM的蛋白酶抑制劑苯甲基磺酰氟(PMSF)。所述步驟以及所有隨后的步驟均是在0-4℃下進(jìn)行的。隨后將該勻漿在100，000rpm離心60分鐘。潷出上清液并用四層紗布過濾，加到DEAE-TrisacrylM柱上。該柱用幾柱床體積的緩沖液B(20mM Tris-HCl，pH7.5，含2mM乙酸鎂、1mM二硫蘇糖醇和200mM PMSF)洗滌。隨后用兩組連續(xù)的濃度呈線性梯度的NaCl溶液(0.05-0.15M，總共300ml；0.15-0.40M，總共200ml)洗脫。收集流分每5ml一份，分析環(huán)AMP和環(huán)GMP PDE活性。收集含PDE Ⅴ活性的流分并對(duì)4升緩沖液C(20mM Tris-HCl，pH7.5，含2mM乙酸鎂和蛋白酶抑制劑)透析過夜。隨后將透析的PDE Ⅴ濃縮至原來(lái)體積的10％，用乙二醇單乙醚稀釋至50％，并儲(chǔ)存在-20℃。PDE Ⅴ通?？杀３珠L(zhǎng)達(dá)4星期，活性很少或無(wú)下降。
測(cè)定Ⅴ型PDE活性如Thompson等(Thompson，W.J.、Teraski，W.L.、Epstein，P.N.、Strada，S.J.的Adv.Cyclic Nucleotide Res.1069，1979)所述，通過測(cè)量[3H]-環(huán)GMP的水解來(lái)測(cè)定酶活性。在本測(cè)定中環(huán)GMP的濃度為0.2μM，大致與Km值相當(dāng)。調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)濃度以確保在溫育過程中水解的底物不超過15％。
將所有試驗(yàn)化合物均溶解在二甲亞砜中(最終濃度為2.5％)。該二甲亞砜濃度對(duì)酶活性的抑制約為10％。在每次測(cè)定中，對(duì)參考的Ⅴ型PDE抑制劑扎普司特進(jìn)行評(píng)價(jià)。
對(duì)濃度范圍為0.1、1、10、100μM的化合物進(jìn)行試驗(yàn)(n=1)，使用5種適當(dāng)?shù)臐舛葴y(cè)定IC50(n=2)。
由前面可見，本發(fā)明組合物還是哺乳動(dòng)物的PDE Ⅴ強(qiáng)效抑制劑。這種活性適合在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中降低平滑肌細(xì)胞的增生并提高肺的血管舒張。在本發(fā)明的某些方面，這些化合物表現(xiàn)出綜合的PDE Ⅳ和PDE Ⅴ的選擇性抑制作用，可用于治療例如再狹窄和相關(guān)疾病。當(dāng)然，本發(fā)明的這些方面包括給予需要這種治療的哺乳動(dòng)物以有效量的具有所述綜合PDE Ⅳ和PDE Ⅴ抑制活性的本發(fā)明化合物。
根據(jù)上述方法，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例1-5的化合物的PDE Ⅲ、PDE Ⅳ和PDE Ⅴ抑制性進(jìn)行了試驗(yàn)和比較。結(jié)果列于下表1表1實(shí)施例 PDE Ⅲ IC50(μM) PDE Ⅳ IC50(μM) PDE Ⅴ IC50(μM)13810.82 37322570.19 30.53＞1000 0.25 8004＞1000 0.59 ＞10005＞1000 2.25 ＞1000盡管參照具體化合物的制造和使用對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了說(shuō)明，但是顯然在不偏離本發(fā)明精神和范圍的前提下可對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種變化和改進(jìn)。
權(quán)利要求
1．一種具有下列通式的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽 其中R3選自C1-10烷基、C1-10烯基、C3-10環(huán)烷基、C4-10環(huán)烷基烷基或C3-10環(huán)烯基，其中在所述烷基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基或環(huán)烯基的一個(gè)位置上可以取代有羥基；或者芐基，其中所述芐基的一個(gè)或兩個(gè)位置上可以取代有鹵素、烷氧基、環(huán)烷氧基或多環(huán)烷基，所述烷氧取代基或環(huán)烷氧取代基的烷基部分的一個(gè)位置上可以取代有羥基；R8選自C1-10烷基、C1-10烯基、C3-10環(huán)烷基、C4-10環(huán)烷基烷基或C3-10環(huán)烯基，其中在所述烷基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基或環(huán)烯基的一個(gè)位置上可以取代有羥基；或者芐基，其中所述芐基的一個(gè)或兩個(gè)位置上可以取代有鹵素、烷氧基、環(huán)烷氧基或多環(huán)烷基，所述烷氧取代基或環(huán)烷氧取代基的烷基部分的一個(gè)位置上可以取代有羥基；R6a和R6b分別選自氫、C1-10烷基、C3-10環(huán)烷基、C4-10環(huán)烷基烷基或C3-10環(huán)烯基，其中在所述烷基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基或環(huán)烯基的一個(gè)位置上可以取代有羥基。
2．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于R8選自C1-10烷基、C1-10烯基、C3-10環(huán)烷基、C4-10環(huán)烷基烷基或C3-10環(huán)烯基，其中在所述烷基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基或環(huán)烯基的一個(gè)位置上可以取代有羥基；或者芐基，其中所述芐基的一個(gè)或兩個(gè)位置上可以取代有鹵素、烷氧基、環(huán)烷氧基或多環(huán)烷基，所述烷氧取代基或環(huán)烷氧取代基的烷基部分的一個(gè)位置上可以取代有羥基。
3．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于R6a是氫，R6b是可以被羥基取代的C1-10烷基。
4．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于R3是芐基，其中所述芐基的一個(gè)或兩個(gè)位置上可以取代有鹵素、烷氧基、環(huán)烷氧基或多環(huán)烷基，所述烷氧取代基或環(huán)烷氧取代基的烷基部分的一個(gè)位置上可以取代有羥基。
5．如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于R3是3-環(huán)戊基氧基-4-甲氧基-芐基，其中所述環(huán)戊基氧基中的環(huán)戊基和所述甲氧基中的甲基可以被羥基所取代。
6．如權(quán)利要求1所述的化合物，它選自6-氨基-3-(3-環(huán)戊基氧基-4-甲氧基-芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤；3-(3-環(huán)戊基氧基-4-甲氧基-芐基)-6-乙基氨基-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤；6-氨基-3-(3-環(huán)戊基氧基-4-甲氧基-芐基)-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤；6-乙基氨基-3-(3-((1RS，3RS)-3-羥基環(huán)戊基氧基)-4-甲氧基-芐基)-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤；6-氨基-3-(3-((1RS，3RS)-3-羥基環(huán)戊基氧基)-4-甲氧基-芐基)-8-(1-羥基-1-甲基-乙基)-3H-嘌呤；6-乙基氨基-3-(3-((1RS，3RS)-3-羥基環(huán)戊基氧基)-4-甲氧基-芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤；6-氨基-3-(3-((1RS，3RS)-3-羥基環(huán)戊基氧基)-4-甲氧基-芐基)-8-異丙基-3H-嘌呤；及其藥學(xué)上可接受的鹽。
7．一種下列疾病的治療方法哮喘、變態(tài)反應(yīng)、炎癥、抑郁癥、Alzheimer氏病、血管性癡呆、多梗塞性癡呆，由人類免疫缺陷病毒引起的疾病和與異常高生理水平的炎癥細(xì)胞因子有關(guān)的疾病，所述方法包括給病人施用權(quán)利要求1所述的化合物。
8．一種具有下列通式的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽 其中R3選自C1-10烷基、C1-10烯基、C3-10環(huán)烷基、C4-10環(huán)烷基烷基或C3-10環(huán)烯基，其中在所述烷基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基或環(huán)烯基的一個(gè)位置上可以取代有羥基；或者芐基，其中所述芐基的一個(gè)或兩個(gè)位置上可以取代有鹵素、烷氧基、環(huán)烷氧基或多環(huán)烷基，所述烷氧取代基或環(huán)烷氧取代基的烷基部分的一個(gè)位置上可以取代有羥基；R8選自氫、C1-10烷基、C1-10烯基、C3-10環(huán)烷基、C4-10環(huán)烷基烷基或C3-10環(huán)烯基，其中在所述烷基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基或環(huán)烯基的一個(gè)位置上可以取代有羥基；或者芐基，其中所述芐基的一個(gè)或兩個(gè)位置上可以取代有鹵素、烷氧基、環(huán)烷氧基或多環(huán)烷基，所述烷氧取代基或環(huán)烷氧取代基的烷基部分的一個(gè)位置上可以取代有羥基；R6a和R6b分別選自氫、C1-10烷基、C1-10烯基、C3-10環(huán)烷基、C4-10環(huán)烷基烷基或C3-10環(huán)烯基，其中在所述烷基、烯基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基或環(huán)烯基的一個(gè)位置上可以取代有羥基；條件是當(dāng)R8是氫時(shí)，R3是兩個(gè)位置上取代有烷氧基或環(huán)烷氧基的芐基，其中所述烷氧取代基或環(huán)烷氧取代基的烷基部分的一個(gè)位置上可以取代有羥基。
9．如權(quán)利要求8所述的化合物，其特征在于R6a是氫，R6b是可以被羥基取代的C1-10烷基。
10．如權(quán)利要求8所述的化合物，其特征在于R3是芐基，其中所述芐基的一個(gè)或兩個(gè)位置上可以取代有鹵素、烷氧基、環(huán)烷氧基或多環(huán)烷基，所述烷氧取代基或環(huán)烷氧取代基的烷基部分的一個(gè)位置上可以取代有羥基。
11．一種下列疾病的治療方法哮喘、變態(tài)反應(yīng)、炎癥、抑郁癥、Alzheimer氏病、血管性癡呆、多梗塞性癡呆，由人類免疫缺陷病毒引起的疾病和與異常高生理水平的炎癥細(xì)胞因子有關(guān)的疾病，所述方法包括給病人施用權(quán)利要求8所述的化合物。
全文摘要
公開了式(Ⅰ)化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽。其中R
文檔編號(hào)A61P25/28GK1284077SQ9881336
公開日2001年2月14日 申請(qǐng)日期1998年12月11日 優(yōu)先權(quán)日1997年12月12日
發(fā)明者D·卡瓦拉, M·蔡辛, P·霍弗, A·格里克, P·溫特格斯特 申請(qǐng)人:歐羅賽鐵克股份有限公司